專利名稱：一種保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種對(duì)缺血引起腦損傷的保護(hù)作用的中藥白附子脂溶性成分提取物，屬于中 藥提取物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
腦缺血性疾病是臨床最常見(jiàn)的疾病之一，具有發(fā)病率、致殘率和病死率高的特點(diǎn)，嚴(yán)重 威脅著人類的健康。隨著全世界人口逐步老齡化，缺血性腦損傷的發(fā)病有逐年增加趨勢(shì)，但 是迄今在國(guó)內(nèi)外仍然缺乏有效的預(yù)防和治療措施。中樞神經(jīng)細(xì)胞對(duì)缺氧傷害的高敏感性和缺 乏再生能力的特征被認(rèn)為是導(dǎo)致腦缺血后遺癥的主要原因。因此，如何阻止或減輕腦缺血和 再灌流后的神經(jīng)細(xì)胞死亡一直是神經(jīng)科學(xué)研究的焦點(diǎn)。缺血性腦損傷包括局部腦血管閉塞(腦 梗塞)、心源性休克以及心肌梗塞等原因造成的全腦血流量的減少或中斷，它們都能引起神經(jīng) 細(xì)月包的死亡。
中藥白附子為收載入我國(guó)各版藥典的常用中藥，為天南星科犁頭尖屬植物獨(dú)角蓮 (:0^wWwwg/gaw/ewwEngl.)的干燥塊莖，自古以來(lái)就有用其治療"中風(fēng)痰壅、口眼n咼斜、痰厥 頭痛、破傷風(fēng)"的記載。我國(guó)有多個(gè)中藥組合物專利都把白附子作為其中的一味藥用于治療腦 中風(fēng)及其后遺癥，如治療缺血性中風(fēng)失語(yǔ)的參南癱速康膠囊、治療腦梗塞后失語(yǔ)的開(kāi)語(yǔ)湯、 治療急性腦血栓的中藥牽正散、治療急性腦出血的中風(fēng)醒腦口服液等。然而，由于白附子的 有效成分不明、缺乏有關(guān)白附子在治療缺血性腦損傷(腦卒中)中的作用及其機(jī)制的研究報(bào) 道，因此白附子的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用受到了阻礙。為此，中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)陳雪松的博 士論文通過(guò)各種色譜技術(shù)和現(xiàn)代波譜學(xué)分析，并輔以化學(xué)方法，對(duì)白附子進(jìn)行了化學(xué)成分研 究，并分離鑒定了 23種天然產(chǎn)物，但是這些成分的藥理學(xué)作用尚未明確，仍無(wú)法直接用于臨 床研究。
而理論上，由于中藥的成分相當(dāng)復(fù)雜，因此對(duì)中藥的提取方法不同，得到的提取物組合 也不盡相同。對(duì)白附子采用創(chuàng)新的提取方法、并對(duì)提取物進(jìn)行詳細(xì)的藥理學(xué)作用研究，將有 利于白附子的臨床使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)目的在于提供一種白附子脂溶性成分提取物，以及該提取物的相應(yīng)提取方法，使得該提取物對(duì)缺血性腦損傷有臨床治療作用。 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為
一種保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物，其特征在于該提取物是采用以下方 法提取得到的
(1)粉碎將白附子原料粉碎至100 ~ 10目；
(2 )溶劑浸提用基于藥材重量1 ~ 3倍的95。/。乙醇浸提24 ~ 48小時(shí)后，過(guò)濾并減壓蒸 餾濃縮干燥，回收乙醇，得到白附子粗提物；
(3)將粗提物溶解于水，加入到分液漏斗中，然后加入等體積萃取劑萃取三次，將三次 萃取的有機(jī)層合并后減壓蒸餾濃縮，干燥后即得到白附子脂溶性成分提取物。
本發(fā)明所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物的提取方法，包括
(1) 粉碎將白附子原料粉碎至100 ~ 10目；
(2) 溶劑浸提用基于藥材重量1 ~3倍的95%乙醇浸提24~48小時(shí)后，過(guò)濾并減壓蒸 餾濃縮干燥，回收乙醇，得到白附子粗提物；
(3) 將粗提物溶解于水，加入到分液漏斗中，然后加入等體積萃取劑萃取三次，將三次 萃取的有機(jī)層合并后減壓蒸餾濃縮，干燥后即得到白附子脂溶性成分提取物。
本發(fā)明所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物及其提取方法中所述的用 95%乙醇浸提方法包括震蕩法浸提或回流法浸提；
本發(fā)明所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物及其提取方法中所述的萃取 劑包括飽和正丁醇、乙酸乙酯或石油醚；
本發(fā)明所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物在制備治療缺血性腦中風(fēng)藥 物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果在于(1 )采用震蕩或回流浸提、溶劑萃取等方法，對(duì)中藥白附子進(jìn) 行了提取、純化，得到了白附子的脂溶性混合物，該提取、純化方法簡(jiǎn)單、快捷，無(wú)毒副作 用，該混合物的有效成分能快速通過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)，具有直接調(diào)節(jié)腦神經(jīng)系統(tǒng)功能的作 用；(2 )對(duì)白附子脂溶性混合物進(jìn)行了系列動(dòng)物藥理實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明本發(fā)明所述的白附 子脂溶性混合物能夠保護(hù)缺血性腦損傷，具體的說(shuō)，該混合物能透過(guò)血腦屏障調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng) 功能，能減小腦卒中的腦梗塞面積和減輕腦水腫，并減少神經(jīng)細(xì)胞死亡，同時(shí)促進(jìn)腦卒中后 運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知功能的恢復(fù)，降低腦卒中的死亡率和致殘率。


下面實(shí)施例將結(jié)合附圖和動(dòng)物藥理實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明；圖1白附子脂溶性成分對(duì)腦缺血引起神經(jīng)細(xì)胞死亡的作用；
注釋BF:白附子脂溶性成分提取物；4VO:四血管阻斷(全腦缺血)；
*表示PO.05; **表示PO.01 (與腦缺血模型的生理鹽水處理組相比)。圖2白附子脂溶性成分對(duì)腦缺血后記憶力損傷的作用；注釋BF:白附子脂溶性成分提取物；
*表示PO.05; **表示P<0.01 (與腦缺血模型的生理鹽水處理組相比)。圖3白附子脂溶性成分對(duì)缺血性腦梗死的作用；
注釋BF:白附子脂溶性成分提取物；MCAO:大腦中動(dòng)脈阻塞；承表示P0.05。圖4白附子脂溶性成分對(duì)缺血后腦水腫的作用；
注釋BF:白附子脂溶性成分提取物；傘表示P0.05。圖5白附子脂溶性成分對(duì)腦缺血后運(yùn)動(dòng)功能損傷的作用；
注釋BF:白附子脂溶性成分提取物；假手術(shù)不給藥組的運(yùn)動(dòng)速度作為100°/。； *表示P<0.05。
圖6白附子脂溶性成分對(duì)腦卒中死亡率的影響；
注釋BF:白附子脂溶性成分提取物；承表示P〈0.05。圖7白附子脂溶性成分能透過(guò)血腦屏障調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能的分析。注釋BF:白附子脂溶性成分提取物；承表示P〈0.05。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
本實(shí)施例說(shuō)明白附子脂溶性成分提取物的提取方法。
(1) 粉碎將中藥白附子原料50 g (天南星科犁頭尖屬植物獨(dú)角蓮(2^/ww'wwg/ga"tewmEngl.)的干燥塊莖，購(gòu)自河南禹縣)4分碎至100目；
(2) 溶劑浸提加入基于藥材重量1倍的95%乙醇密封，在轉(zhuǎn)速150 rpm的搖床上震蕩浸提48小時(shí)后，過(guò)濾并減壓蒸餾濃縮干燥，回收乙醇，得到粗提物；
(3) 將粗提物溶解于水，加入到分液漏斗中，然后加入等體積飽和正丁醇萃取三次，將三次萃取的有才幾層合并后減壓蒸餾濃縮，干燥后即得到白附子脂溶性成分提取物。
實(shí)施例2
本實(shí)施例說(shuō)明白附子脂溶性成分提取物的提取方法。(1 )粉碎將白附子原料20 g(天南星科犁頭尖屬植物獨(dú)角蓮(r^p/zom'"w g/g朋fewm Engl.)
的新鮮塊莖，購(gòu)自安徽毫州市)粉碎至50目，除去水分，填裝于層析柱中；
(2) 溶劑浸提用基于藥材重量3倍的95%乙醇以50 mL/min的流速通入層析片主底部循環(huán)回流浸提36小時(shí)后，過(guò)濾并減壓蒸餾濃縮干燥，回收乙醇，得到粗提物；
(3) 將粗提物溶解于水，加入到分液漏斗中，然后加入等體積乙酸乙酯萃取三次，將三次萃取的有機(jī)層合并后減壓蒸餾濃縮，干燥后即得到白附子脂溶性成分提取物。
實(shí)施例3
本實(shí)施例說(shuō)明白附子脂溶性成分提取物的提取方法。
(1 )粉碎將白附子原料100 g(天南星科犁頭尖屬植物獨(dú)角蓮(3)y/2om'wm gig朋fewm Engl.)的干燥塊莖，購(gòu)自河南禹縣)粉碎至10目；
5(2) 溶劑浸提加入基于藥材重量1.5倍的95%乙醇密封，在轉(zhuǎn)速150 rpm的搖床上震蕩浸提24小時(shí)后，過(guò)濾并減壓蒸餾濃縮干燥，回收乙醇，得到粗提物；
(3) 將粗提物溶解于水，加入到分液漏斗中，然后加入等體積石油醚萃取三次，將三次萃取的有機(jī)層合并后減壓蒸餾濃縮，干燥后即得到白附子脂溶性成分提取物。
實(shí)施例4
本實(shí)施例說(shuō)明采用本發(fā)明所述的提取方法得到的白附子脂溶性成分提取物的藥理實(shí)驗(yàn)。由于不同形式的腦缺血所造成的神經(jīng)損傷程度有所不同。大腦中動(dòng)脈閉塞主要的病理表現(xiàn)是紋狀體、大腦皮層和海馬等腦區(qū)組織的梗死和腦水腫，具有非常高的死亡率和致殘率。全腦缺血?jiǎng)t選擇性地?fù)p傷對(duì)缺氧敏感的中樞神經(jīng)細(xì)胞(如海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞)，出現(xiàn)記憶力減退。因此，本發(fā)明將分別用大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)手術(shù)來(lái)摸擬腦卒中模型，推動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈夾閉作為全腦缺血的動(dòng)物模型，來(lái)觀察腹腔注射白附子脂溶性成分提取物對(duì)腦損傷的保護(hù)作用。
由于本發(fā)明所述的白附子脂溶性成分提取物(圖中簡(jiǎn)稱BF)具有較難溶于水的特點(diǎn)，因此，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)需要先將白附子脂溶性成分提取物溶解于二甲亞砜(DMSO)或99.5%乙醇中，然后再用生理鹽水將白附子脂溶性成分提取物稀釋到治療所需濃度(以保持DMSO和乙醇的最終濃度在5°/。以下)。
Sprague-Dawley(SD)大鼠(體重200 g ~ 250 g,購(gòu)自江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)接受白附子脂溶性成分提取物(1 mg/kg、 5 mg/kg、 50 mg/kg)腹腔注射后，與注射生理鹽水的對(duì)照組((呼吸50~60次/分鐘，心率305 ~400次/分鐘，平均動(dòng)脈壓90 ~ 110 mmHg)相比均未出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)(昏睡、狂躁、呼吸/心率/血壓的改變)和副作用(運(yùn)動(dòng)行為異常等)。
實(shí)驗(yàn)l:白附子脂溶性成分對(duì)腦缺血引起神經(jīng)細(xì)胞死亡的作用(圖l)
實(shí)驗(yàn)主要材料Sprague-Dawley(SD)大鼠(雄性和雌性各50只)，體重200g 250g,購(gòu)自江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
實(shí)驗(yàn)操作10%水合氯醛腹腔麻醉，電凝雙側(cè)推動(dòng)脈，用微動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈20min (改良的Pulsinelli，s四血管阻斷法，圖中簡(jiǎn)稱4VO ),制備短暫性(20分鐘)全腦缺血大鼠模型(用電熱毯以保持實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肛門溫度在37±0.5度)。在缺血后的8小時(shí)開(kāi)始分別用不同濃度(1 mg/kg、 5 mg/kg、 50 mg/kg)白附子脂溶性成分提取物(圖中簡(jiǎn)稱BF)進(jìn)行腹腔注射，共給藥兩次(間隔8小時(shí))。另外，在缺血后的不同時(shí)間點(diǎn)(1小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí))開(kāi)始分別用5 mg/kg白附子脂溶性成分提取物進(jìn)行腹腔注射，共給藥兩次(間隔8小時(shí))。腦缺血后第8天，用4%多聚曱醛經(jīng)左心室灌注固定腦組織。石蠟包埋后，做海馬連續(xù)切片。1%曱苯胺藍(lán)染色后，測(cè)量海馬CA1區(qū)存活錐體嗜田胞的密度(錐體細(xì)胞層每毫米長(zhǎng)度中顆粒細(xì)胞數(shù))。實(shí)驗(yàn)A:腦缺血手術(shù)組共40只大鼠(其中不同給藥計(jì)量組分別是10只大鼠)；假手術(shù)組(對(duì)照組)10只大鼠。實(shí)驗(yàn)B:腦缺血手術(shù)組共40只大鼠(其中不同給藥時(shí)間每組分別是10只大鼠)；假手術(shù)組(對(duì)照組)10只大鼠。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1 A所示，20分鐘全腦缺血引起大約60%的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元死亡丟失。腦缺血后8小時(shí)，按每公斤體重5 ~ 50 mg量注射白附子脂溶性成分提取物給藥能濃度依賴地減少海馬CA1區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞死亡數(shù)。并且在腦缺血后1-24小時(shí)內(nèi)，按每公斤體重5mg量腹腔注射白附子脂溶性成分提取物都能保護(hù)腦缺血引起神經(jīng)細(xì)胞死亡(圖1 B所示)，提示白附子脂溶性成分能阻止缺血引起的神經(jīng)細(xì)胞死亡。
實(shí)驗(yàn)2:白附子脂溶性成分對(duì)腦缺血損傷記憶力損傷的作用(圖2)
實(shí)驗(yàn)主要材料同實(shí)驗(yàn)l。
實(shí)驗(yàn)操作全腦缺血大鼠模型制備和白附子脂溶性成分提取物用藥與實(shí)驗(yàn)1相同。在腦缺血后的第3-7天內(nèi)進(jìn)行水迷宮測(cè)試，檢查空間記憶功能。記錄大鼠的運(yùn)動(dòng)軌跡，計(jì)算登臺(tái)潛伏期。實(shí)驗(yàn)A:腦缺血手術(shù)組共40只大鼠(其中不同給藥計(jì)量組分別是10只大鼠)；假手術(shù)組(對(duì)照組)10只大鼠。實(shí)驗(yàn)B:腦缺血手術(shù)組共40只大鼠(其中不同給藥時(shí)間每組分別是10只大鼠)；假手術(shù)組(對(duì)照組)共10只大鼠。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果20分鐘全腦缺血引起逃避潛伏期延長(zhǎng)，提示空間認(rèn)知功能降低。在腦缺血后8小時(shí)，按每公斤體重5 mg~50 mg量注射白附子脂溶性成分提取物治療能明顯改善腦缺血造成的逃避潛伏期延長(zhǎng)(圖2 A)。同樣，在腦缺血后1 ~24小時(shí)按每公斤體重5 mg量注射白附子提取物都能夠改善腦缺血引起的記憶力的減退(圖2B),提示白附子脂溶性成分能改善腦缺血引起的空間認(rèn)知功能減退。
實(shí)驗(yàn)3:白附子脂溶性成分對(duì)缺血性腦梗死的作用(圖3 )
實(shí)驗(yàn)主要材料昆明小鼠(雄性和雌性各40只)，體重25 g ~ 30 g,購(gòu)自江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
實(shí)驗(yàn)^t乘作10 %7^合氯醛腹腔麻醉，結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈與頸外動(dòng)脈，用動(dòng)脈夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，將漁線插入頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)端，實(shí)施大腦中動(dòng)脈60分鐘阻塞(大腦中動(dòng)脈阻塞在圖中簡(jiǎn)稱MCAO),制備局灶性腦缺血小鼠模型(用電熱毯以保持實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肛門溫度在37±0.5度)。在腦缺血后8小時(shí)按每公斤體重lhig或5 mg量進(jìn)行白附子脂溶性成分提取物腹腔注射，
共給藥兩次(間隔8小時(shí))。腦缺血后24小時(shí)取出全腦，放置-20度冷凍10分鐘，做全腦1毫米厚冠狀連續(xù)切片。用2。/oTTC染色后，進(jìn)行image J軟件處理圖像分別測(cè)出每張腦片梗死區(qū)及非梗死區(qū)的面積。計(jì)算腦梗死體積的百分比(梗死區(qū)體積平均值/缺血側(cè)(MCAO)大腦半球體積平均值)x100。/。。腦缺血手術(shù)組共40只小鼠(其中腦缺血后給藥和不給藥組分別是20只小鼠)；假手術(shù)組(對(duì)照組)共40只小鼠(其中給藥和不給藥組分別是20只小鼠)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，60分鐘的大腦中動(dòng)脈阻塞引起缺血側(cè)腦出現(xiàn)大約40%梗死(點(diǎn)線指示部本)。腦缺血后8小時(shí)按每公斤體重5 mg量白附子脂溶性成分提取物進(jìn)行治療能明顯減少缺血性腦梗死的體積，提示白附子脂溶性成分能夠減輕腦缺血后的腦梗死。
實(shí)驗(yàn)4:白附子脂溶性成分對(duì)缺血后腦水腫的作用(圖4)
實(shí)驗(yàn)主要材料同實(shí)驗(yàn)3。
實(shí)驗(yàn)操作腦缺血大鼠模型制備和白附子脂溶性成分提取物用藥與實(shí)驗(yàn)3相同。腦缺血后24小時(shí)快速斷頭取出全腦，采用干濕相對(duì)密度法測(cè)定左右半腦含水量，并且按照Elliott公式[(WW-DW)/WW]xlOO。/。計(jì)算腦含水量，推出腦水腫的程度。腦缺血手術(shù)組共40只小鼠(其中腦缺血后給藥和不給藥組分別是20只小鼠)；假手術(shù)組(對(duì)照組)共40只小鼠(其中給藥和不給藥組分別是20只小鼠)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示，腦缺血引起腦含水量13.5%的增加，提示有腦水腫的發(fā)生。在腦缺血后8小時(shí)按每公斤體重5 mg劑量白附子脂溶性成分提取物進(jìn)行治療能減輕腦水腫，提示白附子脂溶性成分能夠減輕缺血后腦水腫。
實(shí)驗(yàn)5:白附子脂溶性成分對(duì)腦缺血后運(yùn)動(dòng)功能障礙的作用(圖5)
實(shí)驗(yàn)主要材料與實(shí)驗(yàn)3相同。
實(shí)驗(yàn)操作腦缺血小鼠模型制備和白附子脂溶性成分提取物用藥與實(shí)驗(yàn)3相同。腦缺血后7-8天，進(jìn)行開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)腦缺血后小鼠的運(yùn)動(dòng)功能(包括運(yùn)動(dòng)速度、站立次數(shù))。腦缺血手術(shù)組共40只小鼠(其中腦缺血后給藥和不給藥組分別是20只小鼠)；假手術(shù)組(對(duì)照組)共40只小鼠(其中給藥和不給藥組分別是20只小鼠)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果在腦缺血后8小時(shí)按每公斤體重5 mg劑量白附子脂溶性成分提取物治療能夠顯著地改善小鼠的運(yùn)動(dòng)功能，提高運(yùn)動(dòng)速度(厘米/秒)，提示白附子脂溶性成分減輕腦梗塞和腦水腫能改善腦缺血后運(yùn)動(dòng)功能障礙。
實(shí)驗(yàn)6:白附子脂溶性成分對(duì)腦卒中死亡率的影響(困6)實(shí)驗(yàn)主要材料與實(shí)驗(yàn)3相同。實(shí)驗(yàn)操作腦缺血小鼠模型制備和白附子脂溶性成分提取物用藥與實(shí)驗(yàn)3相同。腦缺血手術(shù)組共40只小鼠(其中腦缺血后給藥和不給藥組分別是20只小鼠)；假手術(shù)組(對(duì)照組)共40只小鼠(其中給藥和不給藥組分別是20只小鼠)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們的早期研究和其他研究室的報(bào)道同樣，60分鐘的大腦中動(dòng)脈阻塞能引起手術(shù)后小鼠的死亡率高達(dá)50%。我們發(fā)現(xiàn)在腦缺血后8小時(shí)給于按每公斤體重5mg量白附子脂溶性成分提取物的治療，能降低腦卒中小鼠的死亡率到10 ~ 15%。
實(shí)驗(yàn)7:白附子脂溶性成分能透過(guò)血腦屏障調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能的分析實(shí)驗(yàn)主要材料Sprague-Dawley(SD)大鼠(雄性和雌性各IO只)，體重200g 250g，購(gòu)自江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
實(shí)驗(yàn)操作通過(guò)記錄神經(jīng)細(xì)胞的去極化，分析海馬的神經(jīng)系統(tǒng)功能(Chen等J.Neurophysiol.94: 4131 ~ 4144 )。 ^研究室在5 mg/kg白附子脂溶性成分提取物(圖中簡(jiǎn)稱BF)腹腔注射后1小時(shí)，10%水合氯醛腹腔麻醉，取出全腦，制作海馬腦片。用膜電位感應(yīng)色素RH155對(duì)海馬腦片進(jìn)行染色(5分鐘)，然后電刺激Schaffer collateral側(cè)枝連續(xù)檢測(cè)海馬CA1區(qū)興奮性突觸后膜電位(EPSP )。根據(jù)熒光的強(qiáng)度、面積和持續(xù)時(shí)間能計(jì)算神經(jīng)細(xì)胞膜的去極化禾呈度(紅色〉綠色 > 藍(lán)色，圖7 A)。用熒光信號(hào)的幅度(圖7 B )來(lái)計(jì)算突觸傳遞強(qiáng)度和神經(jīng)細(xì)胞去極化程度。給藥組和溶劑組(對(duì)照組)各10只。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組相比(細(xì)胞膜電位作為100%),白附子脂溶性成分提取物(5mg/kg)腹腔注射后能明顯減小興奮性突觸后膜電位(EPSP)和錐體細(xì)胞的膜電位(紅色焚光減少，圖A)，并且熒光信號(hào)幅度也顯著降低(圖7B)，組間比較具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖7C)，提示白附子脂溶性成分提取物的活性成分能透過(guò)血腦屏障，調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能。
9
權(quán)利要求
1、一種保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物，其特征在于所述的提取物是采用以下方法提取得到的(1)粉碎將白附子原料粉碎至100～10目；(2)溶劑粗提用基于藥材重量1～3倍的95％乙醇浸提24～48小時(shí)后，過(guò)濾并減壓蒸餾濃縮干燥，回收乙醇，得到白附子粗提物；(3)萃取精提將粗提物溶解于水，加入到分液漏斗中，然后加入等體積萃取劑萃取三次，將三次萃取的有機(jī)層合并后減壓蒸餾濃縮，干燥后即得到白附子脂溶性成分提取物。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物，其特征 在于所述的用95%乙醇浸提方法包括震蕩法浸提或回流法浸提。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物，其特征 在于所述的所述的萃取劑包4舌々包和正丁醇、乙酸乙酯或石油醚。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物的提取方 法，其特征在于所述的步驟包括(1) 粉碎將白附子原料粉碎至100 10目；(2) 溶劑粗提用基于藥材重量1 3倍的95%乙醇浸提24 48小時(shí)后，過(guò)濾并 減壓蒸餾濃縮干燥，回收乙醇，得到白附子粗提物；(3) 萃取精提將粗提物溶解于水，加入到分液漏斗中，然后加入等體積萃取劑 萃取三次，將三次萃取的有機(jī)層合并后減壓蒸餾濃縮，干燥后即得到白附子脂溶性成分 提取物。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物，其特征 在于所述的用95%乙醇浸-提方法包括震蕩法浸提或回流法浸提。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物，其特征 在于所述的所述的萃取劑包括飽和正丁醇、乙酸乙酯或石油醚。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的保護(hù)缺血性腦損傷的白附子脂溶性成分提取物在制備治 療缺血性腦中風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥白附子脂溶性成分提取物，以及該提取物的相應(yīng)提取方法，更具體地，該提取物的提取方法包括粉碎、溶劑粗提、萃取精提的步驟，得到的脂溶性成分提取物中的活性成分能透過(guò)血腦屏障，通過(guò)抑制神經(jīng)細(xì)胞的谷氨酸釋放能減小腦卒中的腦梗塞面積和減輕腦水腫，并減少神經(jīng)細(xì)胞死亡，同時(shí)促進(jìn)腦缺血損傷運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知功能的恢復(fù)，降低腦卒中的死亡率和致殘率。
文檔編號(hào)A61P9/10GK101549056SQ20091002486
公開(kāi)日2009年10月7日 申請(qǐng)日期2009年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月27日
發(fā)明者卓 張, 智 戚, 蔡維艷, 玲 陳 申請(qǐng)人:南京醫(yī)科大學(xué);戚 智