專利名稱：抗菌、抗病毒、抗氧化及抗色素沉積的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種組合物，特別是一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作 用的組合物，還涉及該組合物的制備方法以及其醫(yī)藥、食品、化妝品用途，屬于醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng) 域。
背景技術(shù)：
EGCG，即表沒食子兒茶素沒食子酸酯，是從綠茶中提取的一種主要的活性和水溶 性成份，也是綠茶茶多酚的主要組成成份。EGCG具有非常強(qiáng)的抗氧化、抗癌、抗突變等活性。 抗氧化活性至少是維生素C的100多倍，是維生素E的25倍，能夠保護(hù)細(xì)胞和DNA受損害， 這種損害相信與癌癥、心臟疾病和其他重大疾病有關(guān)，EGCG的這些功效歸結(jié)于他們對氧自 由基的清除能力，此外，它也用作腫瘤多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)劑，能夠改善癌細(xì)胞和化療的敏感 性并減輕對心臟的毒性。許多研究表明，EGCG能夠抗自由基DNA損害，抗輻射和紫外線，阻 止油脂過氧化，減少血清中低密度膽固醇、超低密度膽固醇和甘油三酯的含量，干擾癌細(xì)胞 生存所需的信號傳遞，抑制飲食中致癌物質(zhì)，與腸、肝和肺中的其他酶和抗氧化劑共同作用 阻止某些致癌物質(zhì)的活力，清除自由基，抵御污染，日曬和吸煙的影響，防止皮膚老化和起 皺。綠原酸(chlorogenic acid)是植物體在有氧呼吸過程中合成的一種苯丙素類物 質(zhì)。是許多中草藥如金銀花、杜仲、茵陳等的主要有效成分之一，也是眾多水果蔬菜中的重 要活性成分。綠原酸具有清除自由基、抗菌消炎、抗病毒、降糖、降脂、保肝利膽、抗癌、抗艾 滋病等多種功效。另外，作為一種良好的抗氧化劑，綠原酸在日用化工、食品等領(lǐng)域也有應(yīng) 用。積雪草皂苷是傳統(tǒng)中藥積雪草中主要的活性成分，因其藥理活性豐富，臨床作用 廣泛，應(yīng)用前景大，極具有開發(fā)價(jià)值。近年來，大量研究證實(shí)積雪草皂苷具有抗腫瘤、抗靜脈 機(jī)能不全、抗?jié)?、促?chuàng)傷愈合、抗抑郁以及恢復(fù)神經(jīng)功能等多種藥理活性，同時(shí)還顯現(xiàn)出 在心血管、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗病毒等方面的藥理作用。銀杏內(nèi)酯為銀杏葉提取物及其制劑中的主要藥效部位，為公認(rèn)的血小板激活因子 (PAF)受體拮抗劑。包括銀杏內(nèi)酯A、B、C、J和M(GKA、GKB、GKC、GKJ、GKM)等。銀杏內(nèi)酯中 抗PAF活性最高的是GKB，其次為GKA，再次為GKC，。隨著藥物開發(fā)“綠色浪潮”時(shí)代的到 來，來源于天然植物的銀杏內(nèi)酯受到越來越多的關(guān)注。銀杏內(nèi)酯的主要藥理作用有抗血小 板聚集和血栓形成、防治動(dòng)脈粥樣硬化、抗心腦血管缺血損傷、增強(qiáng)神經(jīng)元的抑制活性，抗 癲癇、焦慮不安、抗休克、抗過敏、抗炎癥等作用，銀杏內(nèi)酯對細(xì)胞的免疫反應(yīng)、眼睛病變、內(nèi) 毒素所致的循環(huán)改變也具有抑制作用，還用于移植排斥、中風(fēng)、早老性癡呆、敗血性休克、多 發(fā)性硬化、體外循環(huán)、腦溢血及燒傷等多個(gè)疾病領(lǐng)域。以上四種原料各有特點(diǎn)，在醫(yī)藥、食品、化妝品等方面應(yīng)用廣泛，但現(xiàn)有技術(shù)中還 設(shè)有其組合應(yīng)用報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種抗菌、抗病毒、抗氧 化、抗色素沉積的組合物。本發(fā)明還提供了上述組合物的用途。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種抗 菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積的組合物，其特點(diǎn)是，它是由表沒食子兒茶素沒食子酸酯以 及綠原酸、積雪草皂苷和銀杏內(nèi)酯3者中至少1種組成，其重量配比如下表沒食子兒茶素沒食子酸酯0. 1 10綠原酸0 10積雪草皂苷0 10銀杏內(nèi)酯0 10。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。以上所述 的抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積的組合物，其特點(diǎn)是，它是由表沒食子兒茶素沒食子酸 酯以及綠原酸、積雪草皂苷和銀杏內(nèi)酯3者中至少1種組成，其重量配比如下表沒食子兒茶素沒食子酸酯0.1--10
綠原酸 0.1 --10
積雪草皂苷 0.1 --10
銀杏內(nèi)酯 0.1--10。
以上所述的本發(fā)明的組合物配方中，表沒食子兒茶素沒食子酸酯為組方必備原
料；綠原酸、積雪草皂苷和銀杏內(nèi)酯3者是可選原料；3種可選原料中至少1種可以與表沒 食子兒茶素沒食子酸酯進(jìn)行組方，即可以是綠原酸、積雪草皂苷和銀杏內(nèi)酯中任意1種與 表沒食子兒茶素沒食子酸酯組方，形成2味原料組方的組合物；也可以是綠原酸、積雪草皂 苷和銀杏內(nèi)酯中任意2種與表沒食子兒茶素沒食子酸酯組方，形成3味原料組方的組合物； 還可以是綠原酸、積雪草皂苷和銀杏內(nèi)酯3種與表沒食子兒茶素沒食子酸酯組方，形成4味 原料組方的組合物，4味原料組方為優(yōu)選原料組方；當(dāng)可選原料中的重量配比選擇“0”時(shí)， 代表組方中不含有該原料。本發(fā)明所述的各原料中表沒食子兒茶素沒食子酸酯為從茶葉中提取、精制而來 的多酚成分，純度在50%以上，優(yōu)選90%以上；綠原酸為從金銀花、杜仲葉等富含綠原酸的 植物中提取、精制而來的酚酸成分，純度在50%以上，優(yōu)選90%以上；積雪草皂苷為從積雪 草中提取、精制而來的皂苷成分，總皂苷或者是積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B中至 少一種成分含量在50%以上，優(yōu)選70%以上；銀杏內(nèi)酯為從銀杏、銀杏葉中提取、精制而來 的內(nèi)酯成分，總內(nèi)酯或者是銀杏內(nèi)酯A、B、C、J、M、K、L及白果內(nèi)酯中至少一種成分含量在 50%以上，優(yōu)選90%以上。本發(fā)明所述的有效成份原料可以是市售的表沒食子兒茶素沒食子酸酯、綠原酸、 積雪草皂苷、銀杏內(nèi)酯，也可以是按常規(guī)提取方法從相關(guān)植物中提取所得的有效成份，也可 以是現(xiàn)有技術(shù)中公開的任何一種提取方法所提取的有效成份。本發(fā)明組合物的用途為在制備抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積藥物、保健食品、 化妝品中的應(yīng)用，其功能包括防治呼吸道感染、尖銳濕疣、生殖器皰疹、色素沉著等疾病，同 時(shí)具有抗氧化，保護(hù)細(xì)胞和DNA受損害、美白的功效，可防治癡呆、黃褐斑，也可用于癌癥的輔助治療。本發(fā)明提取物可制備成各種藥物、保健食品、化妝品，其所包括的口服劑型有膠 囊、軟膠囊、片、滴丸、顆粒、口服液、泡騰片等。外用劑型包括酊劑、膏劑、凝膠劑、貼劑、膜 劑、霜?jiǎng)?、巴布劑、洗劑、搽劑、糊劑、氣霧劑、噴霧劑、橡膠膏劑或者涂膜劑。制劑所需輔料可 以是現(xiàn)有技術(shù)中所公開的任何一種可適用的藥用、食用輔料，包括所需的適當(dāng)基質(zhì)或賦型 劑，制備方法可以根據(jù)其劑型采取現(xiàn)有技術(shù)中公開的任何一種可適用的方法。本發(fā)明組合物經(jīng)過大量基礎(chǔ)配比優(yōu)化、篩選研究，確定了較優(yōu)的部分組合及良好 的功能活性，各組方原料均具有一定的協(xié)同增效功能。以下是發(fā)明人所做的藥效作用實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)一、本組合物不同配方抗菌活性研究。精密定量稱取各配比組合物(EGCG單用；EGCG+綠原酸5 5 ；EGCG+綠原酸+積雪 草皂苷5 5 5 ;EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5 5 ；EGCG+積雪草皂 苷5 5;EGCG+銀杏內(nèi)酯5 5 ;EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5 ；)，用無菌水配 制成20mg/ml的溶液。然后將配制的溶液分別用適量無菌水進(jìn)行倍比稀釋，使各藥液成一 系列濃度梯度，依次是:20，10，5，2. 5，1. 25，0. 625,0. 312,0. 156,0. 078,0. 039 (mg/ml)。然 后取各梯度藥液2ml，分別加入到無菌平皿(平皿直徑9cm)中，再加入已滅菌融化的保溫于 55°C水浴中的MH培養(yǎng)基18ml，立即充分混勻，冷凝后待用。同時(shí)設(shè)空白對照，只加入20ml 的瓊脂培養(yǎng)基。將已預(yù)先活化的各試驗(yàn)菌株分別接種到2ml培養(yǎng)液中，37°C培養(yǎng)過夜，再用相應(yīng) 的培養(yǎng)液作適當(dāng)?shù)南♂?，使菌液濃度約為107 108(CFU/ml)(控制菌液濃度方法用分光 光度計(jì)測定培養(yǎng)液的光密度，然后作適當(dāng)?shù)南♂?。然后用多點(diǎn)接種儀點(diǎn)種各試驗(yàn)菌于各含 藥的MH培養(yǎng)基平板上，空白對照同時(shí)進(jìn)行。每點(diǎn)含菌量約為IO4 IO5(CFU)15 37°C，培養(yǎng) 24小時(shí)，觀察并記錄各菌的最低抑菌濃度MIC值，并計(jì)算MIC5tl和MIC9tlt5結(jié)果見表1 7。表IEGCG單用對致病性細(xì)菌的MIC值的測定(MIC :mg/ml)
表2EGCG+綠原酸組合物 對致病性細(xì)菌的MIC值的測定(MIC :mg/ml)
表3EGCG+綠原酸+積雪草皂苷組合物對致病性細(xì)菌的MIC值的測定(MIC :mg/ml)

表4EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯組合物對致病性細(xì)菌的MIC值的測定(MIC :mg/ml)
6
表5EGCG+積雪草皂苷
對致病性細(xì)菌的MIC值的測定(MIC:mg/ml)
表6EGCG+銀杏內(nèi)酯組合物對致病性細(xì)菌的MIC值的測定(MIC :mg/ml)
上述結(jié)果表明各組合樣品對各試驗(yàn)菌株如克氏肺炎桿菌、金黃色葡萄球菌、沙雷 氏菌、表皮葡萄球菌、沙門桿菌、大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌、枸櫞酸桿菌、變形桿菌、奇異變形桿 菌、綠膿桿菌、陰溝腸桿菌、志賀氏菌、溶血性鏈球菌、不動(dòng)桿菌、肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌 等均具有一定的抗菌活性。且各EGCG組方效果均優(yōu)于EGCG單方效果。實(shí)驗(yàn)二、本組合物不同配方對抗甲型流感病毒、乙型流感病毒研究。(1)病毒毒力測定 細(xì)胞按1 X IO5的濃度，接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，每孔0. 2ml，24h長成單層細(xì)胞， 棄去上清，將病毒不同稀釋比例(10°、10—1、10_2、10_3、10_4、10_5)，加入20 μ L病毒液，每個(gè)濃 度4個(gè)復(fù)孔，吸附lh，用Hank’s溶液洗去未吸附的病毒，加入細(xì)胞培養(yǎng)液lml，37°C 5% CO2 培養(yǎng)72h。根據(jù)出現(xiàn)細(xì)胞病變情況，用Reed-Mimch公式計(jì)算病毒的TCID5(1。
結(jié)果顯示甲型流感病毒的TCID5tl = 10_3 3，乙型流感病毒的TCID5tl = 10_4 6，腺病
毒的 TCID5tl = 10
(2)組合物對細(xì)胞的毒性作用
將MDCK細(xì)胞按1 X IO5的濃度，接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，每孔0. 2ml, 24h后長 成單層細(xì)胞，備用。棄去上清，將含不同配比組合物(EGCG單用；EGCG+綠原酸5 5 ；EGCG+ 綠原酸+積雪草皂苷5 5 5;EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5 5 ； EGCG+積雪草皂苷5 5;EGCG+銀杏內(nèi)酯5 5 ;EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5) 濃度的細(xì)胞培養(yǎng)液0. 2ml加入細(xì)胞，每個(gè)濃度4個(gè)復(fù)孔，370C 5% CO2培養(yǎng)3d ；利用MTT法 測定細(xì)胞活力，進(jìn)行抗病毒試驗(yàn)。結(jié)果顯示EGCG單用、EGCG+綠原酸、EGCG+綠原酸+積雪草皂苷、EGCG+綠原酸+ 積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯、EGCG+積雪草皂苷、EGCG+銀杏內(nèi)酯、EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯 組合物的細(xì)胞毒性最大無毒濃度分別為200、150、150、120、200、200、150mg/ml。(3)組合物抗病毒活性將MDCK細(xì)胞按1 X IO5的濃度，接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，每孔0. 2ml, 24h后長成 單層細(xì)胞，備用。實(shí)驗(yàn)設(shè)細(xì)胞空白對照；病毒對照；EGCG單用；EGCG+綠原酸5 5 ；EGCG+綠 原酸+積雪草皂苷5 5 5 ;EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5 5 ；EGCG+ 積雪草皂苷5 5;EGCG+銀杏內(nèi)酯5 5 ;EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5;共9個(gè) 組。取長成單層的細(xì)胞，棄去上清，加入IOOyL IOOTCID5ci病毒液，吸附lh，用Hank’ s液洗 去未吸附的病毒，加入含不同濃度藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液200 μ 1，每個(gè)濃度4個(gè)復(fù)孔，37°C 5% CO2培養(yǎng)72h。利用MTT法測定細(xì)胞活力。結(jié)果見表8、9。MTT法測定細(xì)胞活力于實(shí)驗(yàn)結(jié)束前4h加入終濃度為0. 5g/L的MTT，°C,5% CO2 下作用4h后棄去上清液，每孔加入DMS0150 μ L，置振蕩器上振蕩IOmin使結(jié)晶充分溶解，用 酶標(biāo)儀490nm測定OD值，觀察細(xì)胞活力。MTT法結(jié)果表明，各個(gè)組合物組對甲型流感病毒H1N1株均具有一定的抑制作用，在 一定的濃度范圍與病毒對照組相比較，有顯著性差異(P < 0. 01、P < 0. 05)。各組合物組對乙型流感病毒株均具有明顯的抑制作用，OD值和病毒對照組相比， 有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P < 0. 05)。表8組合物不同配方對甲型流感病毒的抑制作用 注和病毒對照組相比，**Ρ < 0·01，*Ρ < 0. 05表9組合物不同配方對乙型流感病毒的抑制作用(X±SD) 注和病毒對照組相比ZP < 0. 05,**P < 0.01。實(shí)驗(yàn)三、本組合物不同配方對抗單純性皰疹病毒II型活性研究單純皰疹病毒(HSV)是一種常見的傳染性病原體，HSV-II可引起外陰皰疹，是宮 頸癌的協(xié)同誘因。而目前臨床中常用的抗病毒藥物往往特異性不強(qiáng)，或因易產(chǎn)生耐藥毒株 以及副作用等因素限制了應(yīng)用。此實(shí)驗(yàn)旨在通過體外研究本組合物不同配方抗單純性皰疹 病毒II型的活性，探討其對病毒性生殖系統(tǒng)感染疾病的治療作用。(1)病毒滴度測定將病毒懸液作連續(xù)10倍稀釋，常規(guī)方法感染單層Vero細(xì)胞，37°C，5 % CO2培養(yǎng)3d， 觀察細(xì)胞病變情況，按Reed-Muench方法計(jì)算TCID5(1。(2)樣品的細(xì)胞毒性測定取對數(shù)生長期的細(xì)胞，離心(lOOOr/min，IOmin)后將細(xì)胞重懸，細(xì)胞濃度調(diào)至 2 X 106/ml。在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上將被檢樣品2倍倍比稀釋，共設(shè)6個(gè)梯度，每個(gè)梯度設(shè)3 個(gè)重復(fù)孔，另設(shè)陽性對照組及細(xì)胞對照組。分別加細(xì)胞懸液后，置37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中孵 育。于第4天用MTT法用酶標(biāo)儀測定各孔的OD值。按下列公式計(jì)算被檢樣品對細(xì)胞生長的抑制率，并計(jì)算 IC5tl (50% inhibition concentration 值)。細(xì)胞生長抑制率(％ ) = (1-實(shí)驗(yàn)孔OD值/對照孔OD值)X 100%(3)MTT法檢測化合物對皰疹病毒感染Vero細(xì)胞的保護(hù)作用在96孔平底培養(yǎng)板上，將待測組合物(EGCG單用；EGCG+綠原酸5 5 ；EGCG+綠原 酸+積雪草皂苷5 5 5 ;EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5 5 ；EGCG+ 積雪草皂苷5 5;EGCG+銀杏內(nèi)酯5 5;EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5)用 RPMI1640培養(yǎng)基進(jìn)行2倍系列稀釋。共6個(gè)稀釋度，每孔100 μ 1，設(shè)兩個(gè)重復(fù)孔。同時(shí)設(shè)置 不含組合物的未感染病毒的細(xì)胞對照組和感染病毒的病毒對照組；離心Vero細(xì)胞(IOOOr/ min，10min)，用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，每孔加入75μl 4X IO4細(xì)胞；感染HSV的每個(gè)稀釋度 中的兩孔加入25μ1病毒，對照組加入25μ1培養(yǎng)基。每孔終體積200μ1。置37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第3天補(bǔ)加100 μ 1新鮮培基；第6天將96孔細(xì)胞培養(yǎng)板低速離心后 (1000r/min, IOmin)，吸棄 250 μ 1 上清，再加 20 μ IMTT 溶液(5mg/ml) ,37°C,5% CO2 培養(yǎng)箱 中孵育4h左右，加入20% SDS-50% DMF(pH 4. 7)，孵育過夜；第7天用酶標(biāo)儀測定各孔的 OD值，根據(jù)下面公式計(jì)算出組合物對HSV-II感染細(xì)胞的保護(hù)率，并用插入法計(jì)算EC5tl(50% Effective concentration)值禾口治療指數(shù) TI (Therapeutic index)值 并進(jìn)一步計(jì)算出治療指數(shù)(Tl = IC50/EC50)。HSV-II接種在Vero細(xì)胞上的滴度為103. 0/ml。實(shí)驗(yàn)用病毒濃度為80TCID5(1。結(jié)果見表10。表10本組合物不同配方對II型單純皰疹病毒感染Vero細(xì)胞的保護(hù)作用 結(jié)果表明陽性對照AVC顯示出保護(hù)HSV-II感染Vero細(xì)胞的作用，其EC5tl為 5. 33 μ g/ml治療指數(shù)TI值為2814。本組合物各配方組的EC5tl值以及治療指數(shù)見表。與陽 性對照藥物ACV相比，本組合物各配方組的治療指數(shù)(Tl)雖然偏低，但對HSV-II感染Vero 細(xì)胞仍顯示出了較強(qiáng)的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)四、本組合物不同配方抗人乳頭瘤病毒的作用研究人乳頭瘤病毒(HPV)感染是引起尖銳濕疣(CA)的主要病因，為探討本組合物不 同配方抗人乳頭瘤病毒作用的效果，我們采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)技術(shù)，觀察EGCG對離體尖銳濕疣皮損的HPV-DN的影響，發(fā)現(xiàn)本組合物不同配方具有抗人乳頭瘤病毒 的作用。(I)CA混懸液的制備從南京中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚科采集來自于尖銳濕疣患者外陰部位的疣 體標(biāo)本(經(jīng)鑒定為HPV6/11型)，集中到一只離心管中，稱重30mg，用玻璃勻漿器勻漿，再加 入5ml生理鹽水，配成6mg/ml的離體CA混懸液，備用。(2)樣品處理疣體的方法用移液槍吸取25μ 1樣品液和25μ 1 CA混懸液至1. 5ml離心管中，振搖均勻，使本 組合物各配方組(EGCG單用；EGCG+綠原酸5 5 ；EGCG+綠原酸+積雪草皂苷5:5:5; EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5 5 ;EGCG+積雪草皂苷5 5 ；EGCG+銀 杏內(nèi)酯5 5 ;EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯5 5 5)(終濃度為100ug/ml)與疣體能充 分作用，置37°C水浴箱培養(yǎng)，另設(shè)生理鹽水組、陽性對照(阿昔洛韋)組、蒸餾水對照組。在 樣品處理疣體1、3、5、7天后，各取一組進(jìn)行以下試驗(yàn)。(3) HPV-DNA 的提取從溫浴箱中取出經(jīng)樣品處理的CA混懸液，按試劑盒步驟提取DNA 加入50 μ 1生 理鹽水，混勻后再加入100 μ 1 DNA提取液；振搖均勻，1200r/min離心lOmin，棄去上清液， 再加入25 μ 1 DNA提取液；充分混勻，100°C沸水煮lOmin，1200r/min離心lOmin，上清液即 為HPV-DNA模板。(4) DNA 擴(kuò)增取檢測試劑盒中的PCR反應(yīng)液37. 6 μ 1，Taq DNA聚合酶0. 4 μ 1，UNG 0. 03 μ 1于 PCR反應(yīng)管中，再加入HPV-DNA模板2 μ 1，扣嚴(yán)管蓋，置于定量PCR儀上循環(huán)擴(kuò)增。HPV-DNA 經(jīng)高溫變性、低溫退火及延伸進(jìn)行循環(huán)擴(kuò)增，循環(huán)程序設(shè)置為37°C，5min ；94Imin ； 950C，5sec ；60°C，30sec ；循環(huán) 40 次。(5)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線用熒光探針檢測定量，按照檢測試劑盒要求，設(shè)立4個(gè)系列濃度的HPV-DNA定量陽 性標(biāo)準(zhǔn)品，依次為5 X 107/ml，5 X 106/ml，5 X 105/ml，5 X 104/ml，經(jīng)PCR檢測(其檢測靈敏度 為lX103/ml，結(jié)果小于該濃度者判定為陰性)。以起始拷貝數(shù)的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)，循環(huán) 閾值為縱坐標(biāo)，得到的回歸直線為標(biāo)準(zhǔn)曲線，據(jù)此對樣品的擴(kuò)增倍數(shù)進(jìn)行定量。陽性結(jié)果以DNA擴(kuò)增的定量對數(shù)值表示(單位為拷貝/mL)，說明病毒沒受到破 壞，其DNA得以大量擴(kuò)增；陰性結(jié)果以“_”表示，表明病毒DNA受到殺滅破壞，擴(kuò)增被抑制。 按照以上步驟進(jìn)行3次試驗(yàn)，測定DNA的擴(kuò)增數(shù)量取平均值。結(jié)果見表11。表11本組合物不同配方對HPV-DNA作用結(jié)果(拷貝/ml，η = 3)
13 從上表可知生理鹽水和蒸餾水組結(jié)果為陽性，HPV-DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)后數(shù)量可 達(dá)107，可見病毒復(fù)制及生存能力極強(qiáng)；而經(jīng)本組合物各配方作用1天后，PCR結(jié)果即為陰 性，說明本組合物不同配方其對病毒有明顯破環(huán)作用，抑制其復(fù)制擴(kuò)增，且藥效時(shí)間較長； 溶劑并不干擾藥物的作用效果。實(shí)驗(yàn)五、本組合物不同配方對豚鼠生殖器皰疹的影響將90只豚鼠預(yù)先取陰道分泌物滴板檢測無HSV-2病毒感染后，隨即分為6組 生理鹽水對照組、EGCG單用組、EGCG+綠原酸組(5 5)、EGCG+綠原酸+積雪草皂苷 (5:5: 5)組、EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯組(5 5 5 5)、EGCG+積雪 草皂苷(5 5)、EGCG+銀杏內(nèi)酯(5 5)、EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯(5 5 5)、阿 昔洛韋(ACV)組，每組10只。生理鹽水清洗外陰，干棉簽?zāi)Σ陵幍罃?shù)次，然后用梅花針輕輕 叩刺豚鼠外陰使其外陰充血和少許滲血，干凈棉拭子擦凈外陰。用Iml注射器吸取0. 15ml HSV-2病毒株，配上灌胃針頭后將針頭伸入豚鼠陰道內(nèi)約3-4cm，將病毒注入陰道穹隆后緩 慢退出，用明膠海綿塞入陰道以維持毒液。針頭上少許毒液滴在外陰，用玻棒輕輕涂抹均 勻，使病毒深入皮膚。癥狀評分方法根據(jù)病變程度評分0為無癥狀；0. 5為僅紅腫無水皰；1. 5為單個(gè) 小水皰(彡2mm) ；2. 0為單個(gè)大水皰(> 2mm) ；2. 5個(gè)為多個(gè)小水皰或陰道潰瘍出血；3. 0 為多個(gè)大水皰；3. 5為嚴(yán)重外陰腫脹；4. 0為多個(gè)大小皰融合；4. 5為后肢癱瘓；5. 0為外陰潰瘍。給藥方法阿昔洛韋組組豚鼠分別與造模前給與0. 0775g/kg/d，灌胃5d后，按照 造模方法接種病毒0. 15ml，再次連續(xù)給藥IOd后，每天觀察豚鼠全身和外陰癥狀。本組合物 各配方組分別在造模4h后用小棉球蘸取濃度為0. lg/ml、0. 05g/ml的溶液0. 1ml，用注射器 吸取0. Iml各濃度受試品，配上灌胃針頭后將針頭伸入豚鼠陰道內(nèi)約3-4cm，將病毒注入陰 道穹隆后緩慢退出，針頭上少許溶液滴在外陰，用玻棒輕輕涂抹均勻，使病毒深入皮膚。在 接種病毒后第1、3、5、7、9天分別用0. Iml生理鹽水沖洗各組豚鼠外陰，取沖洗液滴板測定 病毒滴度。結(jié)果見表12、13。表12本組合物不同配方對豚鼠陰道內(nèi)病毒滴度的影響(I ±s，n=10) *表示 P < 0.05，**表示 P < 0.01由上表可見，生理鹽水組接種后第1天感染滴度最高，以后隨時(shí)間延長逐漸下降。 其他給藥組隨著給藥天數(shù)的增加，病毒滴度基本呈逐漸下降的趨勢，其中以阿昔洛韋組下 降趨勢最為明顯，并且在第3、7、9d與空白對照組比較有極顯著差異(P < 0. 01)，第5天有 顯著性差異(P <0.05)；同時(shí)本組合物不同配方各組在給藥第5、7、9d病毒滴度與空白組 比較有顯著性差異(P < 0. 05)，表現(xiàn)出了較好的抗病毒效果。表13EGCG對豚鼠生殖器皰疹模型外陰臨床癥狀的影響(χ ±s, n=10) * 表示 P < 0. 05，** 表示 P < 0. 01由上表可見，接種病毒后的豚鼠均出現(xiàn)類似于人類外陰生殖器皰疹的癥狀，主要 表現(xiàn)為外陰紅、腫、水皰、潰瘍、結(jié)痂。生理鹽水對照組大多2d出現(xiàn)水皰，5 7d病變最為明 顯，以后癥狀逐漸減輕。本組合物不同配方各組大多3 5d出現(xiàn)水皰，且癥狀評分均低于 生理鹽水對照組。外陰癥狀評分組間比較，有顯著差異(P < 0. 05，P < 0. 01)。
15
EGCG 組 EGCG+綠原酸 EGCG+綠原酸+積
雪草皂苷 EGCG+綠原酸+積 雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯 EGCG+積雪草皂苷 EGCG+銀杏內(nèi)酯 EGCG+積雪草皂苷 +銀杏內(nèi)酯 阿昔洛韋組 空白對照組
4.12±1.762.58±0.551.95±0.77*1.45±0.76*4.07±1.351.96±0.971.88±0.68*1.35±1.25*4.15±1.982.08±0.991.71±0.85*1.26±0.81*4.31±2.131.87±0.971.62±0.91*1.04±0.62*4.10±2.102.05±0.991.93±0.76*1.38±0.64*4.09±1.072.12±1.341.92±0.69*1.36±1.0244.08±1.461.96±0.971.89±0.87*1.30±1.34*4.31±2.060.47±0.32"1.02±0.63λ0.71±0.37*4.15±2.203.72±2.592.96±1.272.54±1.27
EGCG 組—0.73±0.41"1.87±0.68"1.17±0.45*EGCG+綠原酸—0.71±0.33"1.73±0.78"1.09±0.56*EGCG+綠原酸+積 雪草皂苷—0.68±0.55**1.65±0.88"1.23±0.44*EGCG+綠原酸+積 雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯—0.51±0.3 廣1.69±0.75"1.12 士 0.33"EGCG+積雪草皂苷—0.72±0.36"1.85士0.85""1.25±0.48*EGCG+銀杏內(nèi)酯—0.72±0.56“1.79士0.69"1.21 士 0.39*EGCG+積雪草皂苷 +銀杏內(nèi)酯—0.71±0.48"1.75±0.82"1.12±0·44*阿昔洛韋組—0.48±0.29"1.37±0.62"0.91±0.32*'空白對照組—1.49±0.582.99±0.873.46±1.38
實(shí)驗(yàn)六、用清除有機(jī)自由基DPPH法評價(jià)本組合物不同配方的抗氧化能力本實(shí)驗(yàn)從體外清除自由基能力方面進(jìn)行探討組合物配方的抗氧化能力，以便進(jìn)一 步驗(yàn)證其抗氧化能力。1、DPPH自由基樣品溶液的配制精密稱定一定量的DPPH，溶于95%乙醇中，后再用95%乙醇定溶致1000ml，使 DPPH的最終濃度為38. 60mg/L，避光保存。2、本組合物不同配方溶液樣品的配制減量法精確稱定400. OOmg本組合物不同配方受試品，用95%乙醇定溶致1000ml， 使終濃度為400mg/L。3、壞血酸溶液樣品的制備減量法精確稱定400. OOmg壞血酸，用95%乙醇定溶致1000ml，使其終濃度為 400mg/Lo4、本組合物不同配方清除自由基能力的測試步驟(1)取其中一玻璃試管加入5ml的DPPH自由基樣品溶液，再加入等量95%乙醇 溶液，混合均勻，37°C避光反應(yīng)lh，以95%乙醇為空白管調(diào)零，用紫外分光光度計(jì)測定其在 517nm的吸光度，同個(gè)樣品重復(fù)測定三次，取平均值記為AO。(2)另取容量為10ml的玻璃試管，按順序依次每管精密加入1ml、2ml、3ml、4ml、 5ml的本組合物不同配方溶液樣品，然后每管再加入5ml的DPPH自由基樣品溶液，不足 10ml的部分用95%乙醇補(bǔ)足。各試管均勻混合，37°C避光反應(yīng)lh后以，95%乙醇為空白管 調(diào)零，用紫外分光光度計(jì)測定其在517nm的吸光度，同個(gè)樣品重復(fù)測定三次，取平均值分別 記錄數(shù)值(3)重復(fù)上步驟，試管中加樣以壞血酸溶液替換掉受試品溶液樣品，加樣體積及順 序同上，結(jié)果紀(jì)錄。(4)另取容量為10ml的玻璃試管，按順序依次每管精密加入1ml、2ml、3ml、4ml、 5ml的本組合物不同配方溶液樣品，然后每管以95%乙醇溶液補(bǔ)足致10ml，各試管均勻混 合，37°C避光反應(yīng)lh后以，95%乙醇為空白管調(diào)零，用紫外分光光度計(jì)測定其在525nm的吸 光度，同個(gè)樣品重復(fù)測定三次，取平均值分別記錄數(shù)值。(5)重復(fù)上步驟，試管中加樣以壞血酸溶液替換掉受試溶液樣品，加樣體積及順序 同上，結(jié)果紀(jì)錄。(6)重復(fù)步驟(1) (5)兩次，每次結(jié)果分別記錄。5、數(shù)據(jù)處理與計(jì)算根據(jù)以上檢測結(jié)果計(jì)算樣品對DPPH自由基溶液的清除率，計(jì)算公式如下清除率 =[l-(An-Bn)/A0]X100%計(jì)算結(jié)果用SPSS 13. 0統(tǒng)計(jì)軟件處理，結(jié)果以了土s表示，結(jié)果見表14。表14DPPH法評價(jià)本組合物不同配方體外清除自由基能力結(jié)果(x ±S)
16 EGCG+積雪草皂苷+ 銀杏內(nèi)酯 由上表結(jié)果可知，本組合物不同配方具有很強(qiáng)的清除自由基能力，相同濃度下其 清除自由基能力強(qiáng)于壞血酸。實(shí)驗(yàn)七、本組合物不同配方體內(nèi)抗氧化活性研究購入動(dòng)物后實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下正常實(shí)驗(yàn)三天，后隨即分為9組空白對照組、模型對照 組、EGCG單用組、EGCG+綠原酸組(5 5)、EGCG+綠原酸+積雪草皂苷(5:5: 5)組、 EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯組(5 5 5 5)、EGCG+積雪草皂苷(5:5)、 EGCG+銀杏內(nèi)酯(5 5)、EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯(5:5: 5)，雌性各半，每組10只。 其中各配方組分別灌胃給予0. 5g/kg的受試品溶液，給藥體積為20ml/kg，空白、模型兩組 給于等容積的生理鹽水，每天給藥一次，共給藥30d。末次給藥當(dāng)天晚各組小鼠禁食不禁水 8h，后分別再灌胃給藥1次，給藥30分后，除空白組外，各組灌胃給予0. 4mg/kg溴代苯油， 灌胃量10ml/kg，18小時(shí)后處死動(dòng)物，取血清，按試劑盒說明測定其SOD和GSH-Px水平。實(shí) 驗(yàn)結(jié)果見表15。表15本組合物不同配方對溴代苯油致小鼠血清抗氧化能力降低模型 血清SOD和GSH-Px的影響(x ±s) AA表示與空白組比較P < 0. 01，〃表示與模型組比較P < 0. 01由上表可知造模后模型組小鼠血清中SOD和GSH-Px水平明顯減低(P < 0. 01)，說明造模成功。本組合物不同配方給藥組小鼠血清中SOD和GSH-Px水平與模型組相比升 高明顯(P < 0. 01)，說明本組合物不同配方具有較強(qiáng)的體內(nèi)抗氧化能力。實(shí)驗(yàn)八、本組合物不同配方抗實(shí)驗(yàn)性色素沉著研究1、皮膚色素沉著動(dòng)物造模、實(shí)驗(yàn)分組取豚鼠90只，雌性，體重230 250g，取10只作為正常組，其余隨機(jī)分為5組。 分組(1)正常組給予賦形劑；(2)模型組給予賦形劑；(3)EGCG單用組0. 25g/kg ； (4) EGCG+綠原酸(5 5)組0. 25g/kg ； (5) EGCG+綠原酸 + 積雪草皂苷(5 5 5)組0. 25g/ 1^;(6作6〔6+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯組(5 5 5 5) :0. 25g/kg ； (7) EGCG+積 雪草皂苷(5 5)0.25g/kg;(8)EGCG+銀杏內(nèi)酯(5 5) 0. 25g/kg ； (9) EGCG+積雪草皂苷 + 銀杏內(nèi)酯(5:5: 5)0.25g/kg。除正常組以外，其余各組豚鼠用波長約320nm的中波紫外 線(UVB)每日照射豚鼠一次，每次照射時(shí)間60min，連續(xù)30日。造模同時(shí)每日給藥。2、一般情況觀察每日觀察豚鼠的一般情況以及背部脫毛部位皮膚變化情況。3、皮膚黑色素細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)觀察、黑色素陽性目標(biāo)計(jì)算機(jī)圖像分析末次涂藥24h后，脫頸椎處死豚鼠，剝?nèi)‰嗍笥覀?cè)背部去毛皮膚一塊，以10%福爾 馬林固定。常規(guī)石蠟包埋切片，片厚4 5i!m，載玻片經(jīng)防脫片處理后撈片、烘片。再經(jīng)脫 蠟至水、抗原修復(fù)。用HMB45(melanoma黑素瘤)為第一抗體，以EliViSion pluS免疫組化 方法顯示表皮中的黑色素顆粒，以評價(jià)黑色素細(xì)胞在表皮中的分布及分泌功能情況。各組每只動(dòng)物去毛部位皮膚各制成1張病理切片，每片觀察5個(gè)不同視野，找到陽 性目標(biāo)后，用病理圖像分析儀對目標(biāo)圖像進(jìn)行定量分析得出每張切片5個(gè)視野的目標(biāo)面 積、目標(biāo)個(gè)數(shù)、平均灰度、平均光密度、積分光密度等。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果一般情況紫外線照射20日后觀察造模豚鼠脫毛部位皮膚變化情況，發(fā)現(xiàn)各造模組脫毛部 位皮膚色澤暗于正常組，部分動(dòng)物皮膚逐日出現(xiàn)黑色斑塊，以模型組最為嚴(yán)重，各給藥組情 況好于模型組。病理結(jié)果正常組表皮為復(fù)層鱗狀上皮，基底層細(xì)胞為立方形或柱狀，其內(nèi)可見個(gè)別黑色素 顆粒染色陽性的細(xì)胞。真皮可見毛囊、皮脂腺及毛發(fā)，上皮下為致密的纖維結(jié)締組織。未見 黑色素顆粒染色陽性的細(xì)胞。模型組表皮結(jié)構(gòu)正常，低倍鏡下基底層內(nèi)查見多量胞質(zhì)染深棕褐色的細(xì)胞，高倍 鏡下見細(xì)胞內(nèi)充滿免疫組化染色陽性的顆粒，因顆粒數(shù)量多，致使胞質(zhì)呈深棕褐色。細(xì)胞數(shù) 量多，常密集成行。EGCG單用組基底層內(nèi)查見較多的胞質(zhì)染深棕褐色的細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量較模型組減 少，染色強(qiáng)度減弱。EGCG+綠原酸組基底層內(nèi)胞質(zhì)染深棕褐色的黑色素細(xì)胞數(shù)量較模型組減少，多 數(shù)區(qū)域黑色素細(xì)胞散在分布。EGCG+綠原酸+積雪草皂苷組基底層內(nèi)胞質(zhì)染深棕褐色的黑色素細(xì)胞數(shù)量明顯 減少，黑色素細(xì)胞呈散在、稀疏分布，染色淺。
EGCG+綠原酸+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯組皮膚基底層黑色素細(xì)胞數(shù)量明顯減少， 黑色素細(xì)胞散在分布，很少密集排列。真皮及上皮下組織內(nèi)未查見黑色素細(xì)胞。EGCG+積雪草皂苷組黑色素細(xì)胞數(shù)量較模型組減少，大部分區(qū)域黑色素細(xì)胞散 在分布。EGCG+銀杏內(nèi)酯組基底層內(nèi)胞質(zhì)的黑色素細(xì)胞數(shù)量減少。EGCG+積雪草皂苷+銀杏內(nèi)酯組基底層內(nèi)胞質(zhì)染深棕褐色的黑色素細(xì)胞數(shù)量較 模型組減少，黑色素細(xì)胞稀疏分布，染色較淺。對造模豚鼠黑色素細(xì)胞面積、數(shù)量的影響造模后模型組豚鼠黑色素細(xì)胞目標(biāo)面積、目標(biāo)個(gè)數(shù)、明顯高于正常組(p <0.05， P < 0.01)；各給藥組豚鼠黑色素細(xì)胞指標(biāo)明顯低于模型組，提示本組合物各配方組對模型 黑色素面積、數(shù)量的增加具有一定的抑制作用。結(jié)果見表16。表16本組合物不同配方對造模豚鼠黑色素細(xì)胞面積、數(shù)量的影響(J±S) 注與正常組比較AAp < 0. 01 ；與模型組比較*p < 0. 05,**p < 0. 01。對造模豚鼠黑色素細(xì)胞染色深淺度的影響黑素細(xì)胞染色顏色越深，灰度值越小，光密度越大。積分光密度是平均光密度與面 積的乘積，顏色越深，面積越大，積分光密度越高。造模后豚鼠黑色素細(xì)胞平均灰度值明顯 降低，平均光密度值、積分光密度值明顯升高(p<0.01)；組合物各組平均灰度值升高，平 均光密度值、積分光密度值降低，與模型組比較有顯著性差異(p<0.05，p<0.01)，提示 各組合物配方組染色細(xì)胞顏色較模型組明顯變淡。結(jié)果見表17。表17本組合物不同配方對造模豚鼠黑色素細(xì)胞染色深淺度的影響(叉±S) 注與正常組比較AAp < 0. 01 ；與模型組比較* p < 0. 05，< 0. 01。上述結(jié)果提示本組合物各配方組對模型黑色素面積、數(shù)量、顏色的增加具有一定 的抑制作用。經(jīng)以上實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明組合物具有確切的抗菌、抗呼吸道感染病毒、抗尖銳濕 疣、生殖器皰疹等生殖器病毒、抗氧化、清除自由基、抗色素沉著等作用。
具體實(shí)施例方式以下進(jìn)一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步地理解 本發(fā)明，而不構(gòu)成對其權(quán)利的限制。實(shí)施例1。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯0. 1 ；綠原酸0. 1。加入常規(guī)輔料，制成膠 囊或軟膠囊，口服用于防治呼吸道感染。實(shí)施例2。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯0. 1 ；綠原酸0. 1 ；積雪草皂苷0. 1。加入 常規(guī)輔料，制成片劑，口服用于癌癥的輔助治療。實(shí)施例3。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯0. 1 ；綠原酸0. 1 ；積雪草皂苷0. 1 ；銀杏 內(nèi)酯0. 1。加入常規(guī)輔料，制成滴丸，口服用于防治早老性癡呆。實(shí)施例4。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯1 ；綠原酸1 ；銀杏內(nèi)酯0. 1。加入常規(guī)輔 料，制成霜?jiǎng)庥梅乐纹つw老化和色素沉著。實(shí)施例5。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯1 ；綠原酸1 ；積雪草皂苷0. 1。加入常規(guī) 輔料，制成凝膠劑，外用防治尖銳濕疣、生殖器皰疹等。實(shí)施例6。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯1 ；積雪草皂苷1 ；銀杏內(nèi)酯1。加入常規(guī) 輔料，制成滴丸，口服用于防治血管性癡呆。實(shí)施例7。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯2;銀杏內(nèi)酯1。加入常規(guī)輔料，制成膏 劑，外用防治黃褐斑。實(shí)施例8。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯0. 5 ；積雪草皂苷0. 5。加入常規(guī)輔料，制 成膜劑，外用防治皮膚老化。實(shí)施例9。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯5 ；綠原酸5 ；積雪草皂苷5 ；銀杏內(nèi)酯5。 加入常規(guī)輔料，制成洗劑，外用防治色素沉著。實(shí)施例10。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯5 ；綠原酸1 ；積雪草皂苷5 ；銀杏內(nèi)酯5。 加入常規(guī)輔料，制成泡騰片，口服用于防治衰老。實(shí)施例11。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯5 ；綠原酸1 ；積雪草皂苷5。加入常規(guī)輔 料，制成膠囊，口服用于防治病毒性感染，如流感。實(shí)施例12。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯1 ；綠原酸1 ；積雪草皂苷2 ；銀杏內(nèi)酯1。 加入常規(guī)輔料，制成雪花膏，外用達(dá)到養(yǎng)顏、美白的目的。實(shí)施例13。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯10 ；綠原酸10 ；積雪草皂苷10 ；銀杏內(nèi) 酯10。加入常規(guī)輔料，制成滴丸，口服用于防治早老性癡呆。實(shí)施例14。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯0.1 ；綠原酸10 ；積雪草皂苷0. 1 ；銀杏 內(nèi)酯10。加入常規(guī)輔料，制成片劑。實(shí)施例15。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯10 ；綠原酸0. 1 ；積雪草皂苷10 ；銀杏內(nèi) 酯0.1。加入常規(guī)輔料，制成顆粒劑。實(shí)施例16。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯1 ；綠原酸5 ；積雪草皂苷1 ；銀杏內(nèi)酯1。 加入常規(guī)輔料，制成丸劑。實(shí)施例17。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯2 ；綠原酸8 ；積雪草皂苷8 ；銀杏內(nèi)酯2。 加入常規(guī)輔料，制成滴丸。實(shí)施例18。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯3 ；綠原酸4 ；積雪草皂苷3 ；銀杏內(nèi)酯4。 加入常規(guī)輔料，制成膠囊。實(shí)施例19。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯5 ；綠原酸7 ；積雪草皂苷2 ；銀杏內(nèi)酯3。 加入常規(guī)輔料，制成霜?jiǎng)?shí)施例20。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯2 ；綠原酸4 ；積雪草皂苷8 ；銀杏內(nèi)酯7。 加入常規(guī)輔料，制成口服液。實(shí)施例21。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯0.1 ；綠原酸或積雪草皂苷或銀杏內(nèi)酯 10。加入常規(guī)輔料，制成膠囊或軟膠囊，口服用于防治呼吸道感染。實(shí)施例22。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以 下重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯10 ；綠原酸或積雪草皂苷或銀杏內(nèi)酯 0.1。加入常規(guī)輔料，制成膠囊或軟膠囊。實(shí)施例23。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯1 ；綠原酸或積雪草皂苷或銀杏內(nèi)酯5。 加入常規(guī)輔料，制成片劑。實(shí)施例24。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯5 ；綠原酸或積雪草皂苷或銀杏內(nèi)酯1。 加入常規(guī)輔料，制成口服液。實(shí)施例25。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯3;綠原酸或積雪草皂苷或銀杏內(nèi)酯6。 加入常規(guī)輔料，制成膠囊。實(shí)施例26。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯0.1 ；綠原酸0. 1 ；積雪草皂苷或銀杏內(nèi) 酯10。加入常規(guī)輔料，制成片劑，口服用于癌癥的輔助治療。實(shí)施例27。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯10 ；綠原酸10 ；積雪草皂苷或銀杏內(nèi)酯 0. 1。加入常規(guī)輔料，制成霜?jiǎng)?，外用防治皮膚老化和色素沉著。實(shí)施例28。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯2 ；綠原酸3 ；積雪草皂苷或銀杏內(nèi)酯5。 加入常規(guī)輔料，制成凝膠劑，外用防治尖銳濕疣、生殖器皰疹等。實(shí)施例29。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯1 ；積雪草皂苷1 ；積雪草皂苷或銀杏內(nèi) 酯1。加入常規(guī)輔料，制成滴丸，口服用于防治血管性癡呆。實(shí)施例30。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯2 ；積雪草皂苷0. 1 ；銀杏內(nèi)酯8。加入常 規(guī)輔料，制成膏劑，外用防治黃褐斑。實(shí)施例31。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯10 ；積雪草皂苷1 ；銀杏內(nèi)酯2。加入常 規(guī)輔料，制成膜劑，外用防治皮膚老化。實(shí)施例32。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯5 ；積雪草皂苷5 ；銀杏內(nèi)酯5。加入常規(guī) 輔料，制成洗劑，外用防治色素沉著。實(shí)施例33。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯8 ；積雪草皂苷6 ；銀杏內(nèi)酯4。加入常規(guī) 輔料，制成泡騰片，口服用于防治衰老。實(shí)施例34。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯0. 1 ；積雪草皂苷10 ；銀杏內(nèi)酯10。加入 常規(guī)輔料，制成膠囊，口服用于防治病毒性感染，如流感。實(shí)施例35。一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，它是由以下 重量配比的原料組成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯10 ；積雪草皂苷10 ；銀杏內(nèi)酯1。加入常 規(guī)輔料，制成雪花膏，外用達(dá)到養(yǎng)顏、美白的目的。
權(quán)利要求
一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗色素沉積作用的組合物，其特征在于，它由表沒食子兒茶素沒食子酸酯以及綠原酸、積雪草皂苷和銀杏內(nèi)酯3者中至少1種組成，其重量配比如下表沒食子兒茶素沒食子酸酯 0.1～10綠原酸0～10積雪草皂苷0～10銀杏內(nèi)酯 0～10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，它由表沒食子兒茶素沒食子酸酯以及 綠原酸、積雪草皂苷和銀杏內(nèi)酯3者中至少1種組成，其重量配比如下表沒食子兒茶素沒食子酸酯0.1 10綠原酸0. 1 10積雪草皂苷0. 1 10銀杏內(nèi)酯0.1 10。
3.權(quán)利要求1或2所述的組合物在制備藥品、保健食品、化妝品中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，該組合物用于制備藥品、保健食品、化妝 品時(shí)，該組合物中還添加可接受的輔料、基質(zhì)或添加劑。
5.權(quán)利要求1或2所述的組合物在制備抗菌、抗病毒、抗氧化及抗色素沉積的藥物、保 健食品、化妝品中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1或2所述的組合物在制備治療呼吸道感染、尖銳濕疣、生殖器皰疹或色素 沉著的藥物中的應(yīng)用，該藥物同時(shí)具有抗氧化，保護(hù)細(xì)胞和DNA受損害、美白的功能，該組 合物還具備作為防治癡呆、黃褐斑、癌癥的輔助治療的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有抗菌、抗病毒、抗氧化作用及抗色素沉積的組合物，其特征在于，它是由以下重量配比的原料制成，表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)0.1～10；綠原酸0～10；積雪草皂苷0～10；銀杏內(nèi)酯0～10。本發(fā)明還公開了上述組合物在制備抗菌、抗病毒、抗氧化及抗色素沉積藥物、保健食品、化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明具有良好的安全性，適用于治療呼吸道感染、尖銳濕疣、生殖器皰疹、色素沉著等疾病，同時(shí)具有抗氧化，保護(hù)細(xì)胞和DNA受損害、美白的功效，可防治癡呆、黃褐斑，也可用于癌癥的輔助治療。
文檔編號A61P31/00GK101890030SQ200910027678
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月18日
發(fā)明者丁崗, 孟兆青, 曹亮, 李明慧, 蕭偉 申請人:江蘇中康藥物科技有限公司