專利名稱：：一種銀杏花粉提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥及保健食品領(lǐng)域，涉及一種銀杏花粉提取物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：銀杏GinkgobilobaL.為銀杏目、銀杏科(Ginkgoaceae)、銀杏屬植物，俗稱白果樹、公孫樹、鴨腳樹。在植物分類上屬單屬種植物，種群較小，僅一科一屬一種，為我國原產(chǎn)，具有"活化石"之譽。銀杏原產(chǎn)中國，雌雄異株，屬裸子植物，沒有果實，只有種子，銀杏花粉富含人體所必需的氨基酸、多種不飽和脂肪酸、礦物元素及維生素E等，具有豐富的營養(yǎng)和廣泛的藥理作用，早在古代中國、希臘、埃及、波斯就把它作為健康和長壽食品。傳統(tǒng)的提取方法采用化學(xué)萃取法，該類方法要加入大量的化學(xué)試劑，其中包括大量的有機溶劑，即使加工成其它劑型，最終產(chǎn)品中仍難以避免某些化學(xué)試劑的殘留，影響產(chǎn)品質(zhì)量和保健醫(yī)療效果，另外，化學(xué)萃取法還會造成一定程度的環(huán)境污染，有損于實驗人員的健康。超臨界流體萃取技術(shù)(SuperiticalFluidExtraction,簡稱SFE)是20世紀(jì)興起的一種提取、分離技術(shù)。上世紀(jì)50年代，美國的Todd和Elain首先在理論上提出了其可行性，直到70時年代才用于提取和分離。超臨界流體兼有氣、液兩者的特點，密度接近于液體，粘度和擴散系數(shù)接近于氣體，不僅具有與液體溶劑相當(dāng)?shù)娜芙饽芰?，而且具有?yōu)良的傳質(zhì)性能。如超臨界C02的粘度是液態(tài)C02的百分之一，自擴散系數(shù)是液體的100倍。C02極性小，適于提取分子量小、親脂性的揮發(fā)油、內(nèi)酯、環(huán)氧化合物等物質(zhì)，并且C02安全無毒，容易獲得。超臨界流體萃取技術(shù)就是利用超臨界流體的這種特殊性質(zhì)，在高壓條件下將超臨界流體與待分離的固體或液體混合物接觸，調(diào)節(jié)系統(tǒng)的操作壓力和溫度，萃取出所需要的物質(zhì)，隨后通過降壓或升溫的方法，降低超臨界流體的密度，使萃取物得到分離，該技術(shù)具有低溫提取、保持有效成分的活性、沒有溶劑殘留和可進行選擇性分離等特點，是利用超臨界狀態(tài)下C02的較好的溶劑特性，對揮發(fā)性較強的成分、熱敏性物質(zhì)和脂溶性成分的提取分離具有較好的效果，正受到越來越多的重視，新的研究、應(yīng)用成果不斷問世。超臨界提取的影響因素有SFE的流體比、C02流量、壓力、時間、溫度、粉碎粉粒度等，壓力是SFE中最重要的參數(shù)。一定溫度下，隨著壓力的增大，流體密度顯著增加，溶質(zhì)的溶解度增大，萃取效率提高。但過高的壓力使生產(chǎn)成本明顯提高，其萃取率增加有限。在SFE過程中，溫度增加，加強了其擴散能力，使得被萃取物在超臨界C02中溶解度增加，有利于萃取。但隨著溫度的增加，雜質(zhì)的溶解度也增加，使精制過程復(fù)雜化，從而降低產(chǎn)品的收率。同時溫度增加，C02流體的密度降低，使得對溶質(zhì)的溶解力下降，降低產(chǎn)品收率。萃取時間增加，有利于超臨界流體與溶質(zhì)中有效成分的溶解平衡，增加萃取的時間就增加萃取得率。由于萃取一定時間后，隨著溶質(zhì)中有效成分的減少，再增加萃取時間，萃取得率增加緩慢，能耗增加。而且有些無效成分也更多地被萃取出來，直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量。目前市場上還沒有采用超臨界萃取技術(shù)提取的銀杏花粉提取物為主要成分用于改善記憶能力的產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對上述技術(shù)問題提供一種能改善記憶能力的銀杏花粉提取物。本發(fā)明另一個目的是提供上述銀杏花粉提取物的制備方法。本發(fā)明還有一個目的是提供上述銀杏花粉提取物在制備改善記憶能力的藥物或保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過下列技術(shù)措施實現(xiàn)的一種銀杏花粉提取物，該提取物是通過下列工藝提取得到的以銀杏花粉為原料，采用C02為超臨界介質(zhì)，對銀杏花粉進行超臨界萃取，收集萃取物，得銀杏花粉提取物。所述的銀杏花粉提取物，該提取物是通過下列工藝提取得到的銀杏花粉加入粘結(jié)劑粘結(jié)成型，粉碎過2040目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為1835Mpa，萃取溫度為35~65'C,C02的流速為10~30L/h,萃取0.5-25小時，收集萃取物，去除粘結(jié)劑得銀杏花粉提取物。所述的銀杏花粉提取物，其中粘結(jié)劑為食用添加劑，優(yōu)選為明膠和/或淀粉。所述銀杏花粉提取物的制備方法，包括下列步驟銀杏花粉加入粘結(jié)劑粘結(jié)成型，粉碎過20~40目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為1835Mpa，萃取溫度為35~65'C，(302的流速為10~30L/h，萃取0.5~25小時，收集萃取物，去除粘結(jié)劑得銀杏花粉提取物。所述銀杏花粉提取物的制備方法,其中粘結(jié)劑為食用添加劑，優(yōu)選為明膠和/或淀粉。所述的銀杏花粉提取物在制備改善記憶能力的保健食品或藥物中的應(yīng)用。人體推薦攝入量為本發(fā)明提取物1200mg/人/日(按實施例2制劑計算)。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供的提取物具有改善記憶能力的作用，可用于制備改善記憶能力的藥物或保健食品。本發(fā)明提供的方法采用食用添加劑作粘結(jié)劑，解決了銀杏花粉小而易造成系統(tǒng)堵塞的問題，并且由于采用C02超臨界萃取，不存在化學(xué)萃取法會造成有機溶劑殘留的弊端，食用安全無毒。本發(fā)明提取物的藥理效果以下實驗采用本發(fā)明提取物按實施例2制備。一、本發(fā)明提取物改善動物記憶作用的評價實驗1、材料與方法1.1、受試樣品本發(fā)明提取物，按實施例2制備。1.2、實驗動物昆明種小鼠，體重18~22g,由江蘇省實驗動物中心提供。合格證號蘇動(環(huán))97001號和蘇動(質(zhì))97001號。1.3、劑量分組根據(jù)本發(fā)明提取物的人體攝入量(1.2g/人/日，相當(dāng)于20mg/kg.bw/日)，分別按其5倍、10倍、30倍設(shè)計三個劑量組及陰性對照組，即100mg/kg.bw、200mg/kg.bw、600mg/kg.bw及蒸餾水對照組，每日灌胃一次，連續(xù)30閂。1.4、數(shù)據(jù)分析采用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，計數(shù)資料用^統(tǒng)計。1.5、試驗方法1.5.1、跳臺試驗昆明種雄性小鼠，體重1822g，隨機分為4組，每組10只。連續(xù)給樣30日，末次給樣后次日開始訓(xùn)練。將小鼠放入WJ型小鼠跳臺自動控制儀內(nèi)適應(yīng)環(huán)境3分鐘，然后立即通以36伏的交流電，訓(xùn)練8分鐘，記錄后5分鐘的錯誤次數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績。24小時后重作測驗，記錄受電擊的動物數(shù)、第一次跳下平臺的潛伏期以及3分鐘內(nèi)的錯誤總數(shù)，同時計算動物出現(xiàn)錯誤反應(yīng)的頻率。(每個劑量組小鼠訓(xùn)練與重測試均在先后兩天相同時間內(nèi)完成，測試環(huán)境為隔音、弱光的專用行為實驗室，溫度為25'C，濕度為54%)按上述步驟重復(fù)進行一次測試。1.5.2、避暗試驗昆明種雄性小鼠，體重1822g，隨機分為4組，每組10只。連續(xù)給樣30天，末次給樣后次日開始訓(xùn)練。將小鼠面部背向WX-5型小鼠條件反射電刺明暗儀的洞口放入明室，并在其上方約20cm處懸一40w鎢絲燈，同時啟動計時器。記錄小鼠從放入明室至進入暗室遭電擊所需要的時間。24小時后重作測驗，記錄每只小鼠進入暗室的潛伏期和5分鐘內(nèi)的電擊次數(shù)，同時記錄5分鐘內(nèi)進入暗室的小鼠數(shù)。(每個劑量組小鼠訓(xùn)練與重測試均在先后兩天相同時間內(nèi)完成，測試環(huán)境為隔音、弱光的專用行為實驗室，溫度為25°C，濕度為56%)按上述步驟重復(fù)進行一次測試。2、結(jié)果2.1、試驗中動物體重變化情況由表1可見，小鼠試驗30天，各組之間體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)表l試驗中動物的體重級別劑量動物數(shù)體重(g)(mg/kg.bw)(只)試驗前試驗中試驗后對照組01019.6±1.725.4±2.131.5±2.6低劑量組1001019.3±1.225.4±1.23U±2.0中劑量組2001019.4±1.425.9±1.732.1±2.6高劑量組6001019.2±1.324.6±1.830.9±1.82.2、跳臺試驗結(jié)果由表2、3結(jié)果可見，在跳臺試驗中，第一次試驗本發(fā)明提取物組小鼠24小時后重測驗時，中、高劑量組的潛伏期與對照組有顯著性差異(p<0.05或pO.Ol)，低、中、高劑量組的錯誤次數(shù)與對照組有顯著性差異(p<0.01);第二次試驗本發(fā)明提取物組24小時后重測驗時，低、中、高劑量組的潛伏期、錯誤次數(shù)、錯誤率與對照組有顯著性差異(pO.05或p0.01)，說明本發(fā)明提取物能改善小鼠的記憶能力。表2本發(fā)明提取物對小鼠記憶的影響(跳臺第一次)(;c土"n=10)級別劑量訓(xùn)練時測驗24小時后重測驗(mg/kg.bw)潛伏期(秒)錯誤次數(shù)(次/只/5分鐘)潛伏期(秒)錯誤次數(shù)(次/只/5分鐘)錯誤率(%)對照組0153±1303.0±3.4卯±792.7±3.260低劑量組100110±1042.3±1.6135±560.6±0.7**50中劑量組200129±1072.4±1.9164±35**0.4±0.8**20高劑量組600167±1362.2±2.9155±55*0.2±0.4**20注*與對照組比較,pO.05'"與對照組比較，pO.Ol。表3本發(fā)明提取物對小鼠記憶的影響(跳臺第二次)(S±5，n=10)級別劑量訓(xùn)練時測驗24小時后重測驗(mg/kg.bw)潛伏期(秒)錯誤次數(shù)(次/只/5分鐘)潛伏期(秒)錯誤次數(shù)(次/只/5分鐘)錯誤率(%)對照組0108±1162.5±1.924±153.1±2.4100低劑量組100126±1213.2±3.5123±65**0.7±0.8**50*中劑量組20097±822.5±1.8175±16"0.1±0.3**10**高劑量組600111±1022.2±1.9165±49**0.1±0.3**10**注*與對照組比較，p<0.05，**與對照組比較，p<0.01。2.3、避暗試驗結(jié)果由表4、5結(jié)果可見，在避暗試驗中，第一次試驗本發(fā)明提取物組小鼠訓(xùn)練時，低、中、高劑量組的錯誤次數(shù)與對照組有明顯差異(pO.05或pW.01)，24小時后重測驗時，低、中、高劑量組小鼠的潛伏期、中、高劑量組小鼠的錯誤次數(shù)、高劑量組小鼠的錯誤率與對照組有顯著性差異(p<0.05或pO.01);第二次試驗本發(fā)明提取物組小鼠訓(xùn)練時中、高劑量組的潛伏期、錯誤次數(shù)、錯誤率與對照組均有顯著性差異(p<0.05或pO.Ol)，說明本發(fā)明提取物能改善小鼠的記憶能力。表4本發(fā)明提取物對小鼠記憶的影響(避暗第一次)(x±s，n=10)級別劑量訓(xùn)練時測驗24小時后重測驗(mg/kg.bw)潛伏期衝錯誤次數(shù)(次/只/5分鐘)潛伏期(秒)錯誤次數(shù)(次/只/5分鐘)錯誤率(%)對照組022±224.1±2.5116±1111.4±1.180低劑量組10023士82.1±1.6*218±07*0.7±0.940中劑量組20016±81.9±0.9**269±62**0.3±0.5**30高劑量組60032±281.9±1.5**270±65**0,2士0.4**20*注*與對照組比較，p<0.05，"與對照組比較，p<0.01。表5本發(fā)明提取物對小鼠記憶的影響(避暗第二次)(;c土s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>3、結(jié)論本發(fā)明提取物以100mg/kg.bw、200mg/kg.bw、600mg/kg.bw的劑量進行了改善小鼠記憶作用的評價實驗，跳臺試驗及避暗試驗均表明具有改善小鼠記憶的效應(yīng)，重復(fù)進行一次試驗，其結(jié)果基本一致，因此認(rèn)為本發(fā)明提取物具有改善小鼠記憶的作用。二、本發(fā)明提取物改善記憶(人體試食)試驗報告1、材料和方法1.1、樣品本發(fā)明提取物，按實施例2制備。1.2、劑量選擇本品推薦服用量為每日3次，每次2粒，每粒含本發(fā)明提取物0.2g。1.3、試驗方法按照衛(wèi)生部1996年頒布的"保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法"中改善記憶作用的人體試食試驗規(guī)程進行，采用韋氏記憶量表按測試要求測定受試學(xué)生的記憶商數(shù)。1.4、測試量表采用湖南醫(yī)科大學(xué)心理學(xué)教研室1989年修訂的"韋氏記憶量表"修訂本。該量表除沿用了原有的經(jīng)歷、定向、數(shù)字順序、視覺再生、聯(lián)想學(xué)習(xí)、理解記憶、順背和倒背數(shù)字7個分測驗外，還增加了視覺再認(rèn)、圖片回憶、觸摸測驗3個分測驗。修訂本適用于7歲以上兒童、少年和成人。1.5、人體試食試驗本試驗與南京醫(yī)科大學(xué)協(xié)作，在南京市大廠區(qū)某小學(xué)進行。實驗期間不改變學(xué)生原來的膳食及活動。在取得學(xué)校、家長、學(xué)生同意和密切配合的前提下，以自愿原則，選擇四、五年級1012歲健康學(xué)生為試驗對象。選擇72名學(xué)生，其中男生35人，女生37人。按班級隨機分成實驗組和對照組，實驗組36人(男生20人，女生16人)，對照組36人(男生21人，女生15人)。完成全試驗過程的學(xué)生共62人(男生27人，女生35人)，其中實驗組31人(男生17人，女生14人)，對照組31人(男生18人，女生13人)。實驗依從率86.1%。實驗為期50天。前5天為試驗的適應(yīng)期，在此期間，實驗組與對照組學(xué)生均服用與本發(fā)明提取物送檢樣品外觀相似、不含功效成分的普通淀粉膠囊作為安慰劑。每曰上、下午各服用一次，每次3粒，溫開水送服，由專人負(fù)責(zé)分送并記錄。自第6日起，實驗組學(xué)生服用本發(fā)明提取物膠囊，對照組學(xué)生服用淀粉膠囊，服用方法與適應(yīng)期相同。在試驗開始前和結(jié)束時，采用韋氏記憶量表按測試要求測定受試學(xué)生的記憶商數(shù)。1.6、測試條件主試者受過訓(xùn)練，受試者自學(xué)自愿。測試環(huán)境安靜，光線充足，按照"修訂韋氏記憶量表"手冊順序逐項單獨進行測試。1.7、測試內(nèi)容依照"修訂韋氏記憶量表"，測試項目為經(jīng)歷+定、數(shù)字順序、圖片回憶、視覺再認(rèn)、視覺再生、聯(lián)想學(xué)習(xí)、觸摸測驗、理解記憶、順背和倒背數(shù)字。1.8、數(shù)據(jù)處理將測試的各項分量表記分(原始分)換算成量表分，用配對計量資料比較的t檢驗和兩樣本均數(shù)的t檢驗進行統(tǒng)計處理，比較實驗組和對照組之間各項分量表分和總量表分及記憶商數(shù)的差異性。2、結(jié)果2.1受試學(xué)生的健康檢査試食前，對所有志愿參加試驗的學(xué)生進行健康檢査，檢查項目為身高、體重和血紅蛋白；試食后，對完成試驗的學(xué)生進行血紅蛋白測定。表6為試食前受試者體檢結(jié)果。與對照組相比，實驗組學(xué)生的身高、體重和血紅蛋白無顯著性差異(p>0.05)。表6試食前受試者體檢結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>1:X±SD;&受試學(xué)生人數(shù)表7為試食前后受試者血紅蛋白測定結(jié)果。與對照組相比，實驗組學(xué)生試食前后血紅蛋白無顯著性差異(p>0.05)。表7試食前后受試者血紅蛋白(g/L)測定結(jié)果指標(biāo)實驗組1對照組1/試食前31128.03±7.7031128.57±7.270.2780.782試食后31130.39±5.3131131.45±5.870.7490.4571:;c±SD;&受試學(xué)生人數(shù)2.2、試食前后實驗組與對照組各項測驗量表分的比較2.2.1試食前實驗組與對照組各項測驗量表分比較表8為試食前實驗組與對照組各項測驗量表分結(jié)果。與對照組比較，試食前實驗組各項測驗量表分均無顯著性差異(p>0.05)。表8試食前各項測驗量表分結(jié)果分測驗項目實驗組量表分1對照組量表分'經(jīng)歷+定向319.39±2.56319.77±2.120.6470.520數(shù)字順序3130.36±7.113130.63±6.290扁l細圖片回憶3110.19±2.953110.65±2.240.6790.500視覺再認(rèn)319.13±2.633110.23±1.82.9090.061視覺再生318.61±3.23318.39±3.620.2590.796眹想學(xué)習(xí)3110.13±2.85319.81±3.250.4160.679觸摸測驗3112.23±2.913112.26±3.070.0430.966理解記憶317息3.23316.61±2.871.3720.175背數(shù)3110.06±2.67319.81±2.800.3720.7121:X±SD;w:受試學(xué)生人數(shù)2.2.2試食后實驗組與對照組各項測驗量表分比較表9為試食后實驗組與對照組各項測驗量表分比較。試食后，實驗組除經(jīng)歷+定向、圖片回憶外，其余各項測驗量表分均高于對照組。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，與對照組比較，視覺再認(rèn)、視覺再生、觸摸測驗三項量表分有顯著性差異(pO.05);其余均無顯著性差異(p>0.05)。表9試食后各項測驗量表分結(jié)果分測驗項目實驗組量表分1對照組量表分1P經(jīng)歷+定向3110,03±2.893110息2.960.0870.931<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>1:XiSD;&受試學(xué)生人數(shù)2.2.3實驗組試食前后各項測驗量表分比較表10為實驗組試食前后各項測驗量表分結(jié)果。與試食前比較，試食后受試學(xué)生的視覺再認(rèn)、視覺再生兩項測驗量表分有高度顯著性差異(pO.01);數(shù)字順序、觸摸測驗、背數(shù)三項測驗量表分有顯著性差異(pO.05);經(jīng)歷+定向、圖片回憶、聯(lián)想學(xué)習(xí)、理解記憶等四項測驗量表分無顯著性差異(p>0.05)。表10實驗組試食前后各項測驗量表分結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注'X士SD;受試學(xué)生人數(shù)2td為實驗組試食前后配對比較的t值。2.2.4對照組試食前后各項測驗量表分比較表11為對照組試食前后各項測驗量表分結(jié)果。與試驗前后比較，試食后對照組學(xué)生除圖片回憶、聯(lián)想學(xué)習(xí)外，其余各項測驗量表分均有所增加，但僅有數(shù)字順序(p<0.05)、理解記憶(p<0.01)測驗量表分有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異；其余各項測驗量表分均無顯著性差異(p>0.05)。表ll對照組試食前后各項測驗量表分結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注';c土SD;":受試學(xué)生人數(shù)；2td為實驗組試食前后配對比較的t值。2.3試食前后實驗組與對照組各項測驗量表分差值比較表12為試食前后實驗組與對照組各項測驗量表分差值結(jié)果。與對照組比較，試食后實驗組的視覺再認(rèn)測驗量表分差值有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(p<0.01);其余各項測驗量表分差值均無顯著性差異(p>0.05)。表12試食前后各項測驗量表分差值結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>背數(shù)311.29±2.84310.42±2.321.3220.191注'^tSD;":受試學(xué)生人數(shù)2.4試食前后實驗組與對照組總量表分比較表13為試食前后實驗組與對照組總量表分結(jié)果。與試食前比較，試食后實驗組記憶總量表分顯著增加，有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異。與對照組比較，試食前實驗組的記憶總量表分無顯著性差異(p>0.05);試食后實驗組的記憶總量表分有顯著性差異(pO.05);實驗組的試食前后差值有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(p<0.05)。表13試食前后記憶總量表分結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注'JC土SD;V土SD:3試食前后比較2.5本發(fā)明提取物對受試學(xué)生長時記憶、短時記憶的影響2.5.1對受試學(xué)生長時記憶的作用長時記憶測驗包括經(jīng)歷+定向和數(shù)字順序二項測驗。表14為本發(fā)明提取物對受試學(xué)生長時記憶的作用。與試食前比較，試食后實驗組的長時記憶量表分顯著增加(p〈0.05)。與對照組比較，試食前后實驗組的長時記憶均沒有顯著性差異(p>0.05)。表14本發(fā)明提取物對受試學(xué)生長時記憶的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>2.5.2本發(fā)明提取物對受試學(xué)生短時記憶的作用短時記憶包括視覺再認(rèn)、圖片回憶、視覺再生、聯(lián)想學(xué)習(xí)、觸摸測驗、理解記憶六項。表15為本發(fā)明提取物對受試學(xué)生短時記憶的作用。與試食前相比，試食后實驗組的短時記憶量表分有顯著性增加(p<0.01);對照組的量表分無顯著性差異(p>0.05)。與對照組比較，試食前后實驗組短時記憶量表分及其差值短時記憶量表分均沒有顯著性差異(p>0.05)。表明本發(fā)明提取物對受試學(xué)生短時記憶有一定的促進作用。表15本發(fā)明提取物對受試學(xué)生短時記憶的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2.6本發(fā)明提取物對受試學(xué)生改善記憶商的作用表16為本發(fā)明提取物對受試學(xué)生改善記憶商的作用。與試食前比較，實驗組試食后記憶商數(shù)顯著增加(p<0.01);與對照組比較，試食前實驗組的記憶商數(shù)沒有顯著性差異(p〉0.05);試食后實驗組的記憶商數(shù)及其差值有顯著性差異(p<0.05)。表明本發(fā)明提取物對受試學(xué)生改善記憶商數(shù)有促進作用。表16本發(fā)明提取物對受試學(xué)生改善記憶商的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>3、結(jié)論實驗結(jié)果表明，受試學(xué)生食品用本發(fā)明提取物45天后，與對照組比較，試食后實驗組各項測驗量表分均增加，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，實驗組的視覺再認(rèn)、視覺再生、觸摸測驗三項測驗量表分增加值有顯著性差異；試食后實驗組的總量表分及其試食前后的總量表分增加值有顯著性差異；試食后實驗組受試學(xué)生記憶商數(shù)改善程序顯著高于對照組。與試食前比較，試食后實驗組的視覺再認(rèn)、視覺再生、數(shù)字順序、觸摸測驗和背數(shù)的量表分及總量表分及其試食前后總量表分差值顯著性增加；試食后實驗組的長時記憶、短時記憶和記憶商數(shù)均有顯著提高。根據(jù)"保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法"判定標(biāo)準(zhǔn),本發(fā)明提取物對受試學(xué)生有改善記憶的作用。三、本發(fā)明提取物毒性試驗1、急性毒性試驗選用昆明種小鼠20只，雌雄各10只，體重2023g。按GB15193.3-94《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》中規(guī)定急性毒性試驗方法進行，劑量為15000mg/kg，試驗前動物禁食16小時后灌胃，連續(xù)觀察14天，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況。觀察期間，小鼠飲食和活動正常，生長良好，未見明顯異常，無死亡。故本發(fā)明提取物的急性經(jīng)口LD5o雌雄小鼠均"5000mg/kg,屬無毒類。2、遺傳毒性試驗按GB15193.3-94《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》中規(guī)定的方法進行Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗和小鼠精子畸變試驗結(jié)果均為陰性，說明本發(fā)明提取物無明顯誘變作用。3、30天喂養(yǎng)試驗SD大鼠設(shè)低、中、高劑量組(按本發(fā)明提取物分別為250、1000、4000mg/kg.bw)及空白對照組，連續(xù)飼養(yǎng)30d，試驗動物一般情況良好、體重、食物利用率、臟器重量、臟器系數(shù)均無異常改變。血常規(guī)及生化指標(biāo)結(jié)果顯示，各項指標(biāo)均在正常范圍，臟器病理組織學(xué)檢査均未見與樣品有關(guān)的病理改變。具體實施例方式以下通過實施例對本發(fā)明作進一步的闡述。實施例1銀杏花粉(破壁率>90%)加入明膠粘結(jié)成型，干燥，粉碎過30目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為20Mpa,萃取溫度為40'C，0)2的流速為15L/h，萃取8小時，收集萃取物，去除明膠得銀杏花粉提取物。實施例2銀杏花粉(破壁率>99%)加入明膠粘結(jié)成型，干燥，粉碎過40目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為30Mpa,萃取溫度為50°C，C02的流速為20L/h,萃取5小時，收集萃取物，去除明膠得銀杏花粉提取物。實施例3銀杏花粉(破壁率>95%)加入明膠粘結(jié)成型，干燥，粉碎過30目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為25Mpa，萃取溫度為35°C,C02的流速為30L/h，萃取IO小時，收集萃取物，去除明膠得銀杏花粉提取物。實施例4銀杏花粉(破壁率>98%)加入水和淀粉粘結(jié)成型，干燥，粉碎過40目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為18Mpa，萃取溫度為65'C，(302的流速為30L/h，萃取15小時，收集萃取物，去除淀粉得銀杏花粉提取物。實施例5銀杏花粉(破壁率>96%)加入水、明膠和淀粉粘結(jié)成型，干燥，粉碎過30目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為35Mpa，萃取溫度為45°C，C02的流速為10L/h，萃取20小時，收集萃取物，去除明膠和淀粉得銀杏花粉提取物。權(quán)利要求1、一種銀杏花粉提取物，其特征在于該提取物是通過下列工藝提取得到的以銀杏花粉為原料，采用CO2為超臨界介質(zhì)，對銀杏花粉進行超臨界萃取，收集萃取物，得銀杏花粉提取物。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏花粉提取物，其特征在于該提取物是通過下列工藝提取得到的銀杏花粉加入粘結(jié)劑粘結(jié)成型，粉碎過2040目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為1835Mpa，萃取溫度為3565匸，C02的流速為10~30L/h，萃取0.5-25小時，收集萃取物，去除粘結(jié)劑得銀杏花粉提取物。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的銀杏花粉提取物，其特征在于粘結(jié)劑為食用添加劑，優(yōu)選為明膠和/或淀粉。4、權(quán)利要求1或2所述銀杏花粉提取物的制備方法，其特征在于包括下列步驟銀杏花粉加入粘結(jié)劑粘結(jié)成型，粉碎過20~40目篩，裝入萃取器，通入C02進行超臨界萃取，萃取壓力為1835Mpa，萃取溫度為35~65'C，(302的流速為10~30L/h，萃取0.525小時，收集萃取物，去除粘結(jié)劑得銀杏花粉提取物。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述銀杏花粉提取物的制備方法，其特征在于粘結(jié)劑為食用添加劑，優(yōu)選為明膠和/或淀粉。6、權(quán)利要求1或2所述的銀杏花粉提取物在制備改善記憶能力的保健食品或藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明屬于中藥及保健食品領(lǐng)域，公開了一種銀杏花粉提取物及其制備方法和應(yīng)用。該銀杏花粉提取物是對銀杏花粉進行CO₂超臨界萃取得到的萃取物。該提取物能夠改善記憶能力，可用于制備改善記憶能力的保健食品或藥物。文檔編號A61P25/00GK101524381SQ200910030348公開日2009年9月9日申請日期2009年3月19日優(yōu)先權(quán)日2009年3月19日發(fā)明者敏馮,鵬馮,建沈,王連安,錢一帆申請人:南京中科集團股份有限公司