專利名稱：：一種治療糖尿病腎病的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥制藥領(lǐng)域，具體地說，涉及一種治療糖尿病腎病的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：糖尿病及其慢性并發(fā)癥已嚴(yán)重影響人類健康和生活質(zhì)量。近年來，糖尿病發(fā)病人數(shù)呈上升趨勢。全世界各年齡組的糖尿病發(fā)病率，在2000年約為2.8%，到2030年預(yù)計為4.4%?；继悄虿∪藬?shù)將從2000年的1.71億增加到2030年3.33億。中國每年糖尿病的發(fā)病率在不斷上升，患病人數(shù)僅次于印度，居世界第二位。糖尿病及其慢性并發(fā)癥的防治是當(dāng)今面臨的重要課題。糖尿病腎病(diabeticn印hropathy，DN)是糖尿病的重要并發(fā)癥之一，在西方國家已成為導(dǎo)致終末期腎衰竭的首位疾病。2003年世界衛(wèi)生組織資料顯示，如果不控制血糖，大約有30%的1型糖尿病患者和25%40%的2型糖尿病患者發(fā)展成為糖尿病腎病。糖尿病腎病發(fā)病隱匿，早期不易被發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)癥狀時腎臟的病變已經(jīng)不可逆轉(zhuǎn)。長年糖尿病導(dǎo)致腎臟的濾過功能被破壞，最初表現(xiàn)為微量白蛋白尿。隨著病程延長，尿蛋白增加，腎臟排除血中毒素的能力逐漸減退，最終發(fā)展為終末期腎病(ESRD)，只能依靠血液透析或腎移植來維持生命。因此迫切需要深入闡明糖尿病腎病的發(fā)病機制，豐富和完善DN的防治措施。桑白皮(CortexMori)為?？浦参锷orusalbaL.的干燥根皮，性甘、寒，具有瀉肺平喘、利水消腫的功能，主治肺熱喘咳、水腫脹滿尿少、面目肌膚浮腫，近年的藥理學(xué)研究表明桑白皮具有降血糖血壓、利尿、鎮(zhèn)咳平喘、抗HIV抗腫瘤等方面的活性。自20世紀(jì)70年代有學(xué)者從桑白皮中分離并證實了降血糖成分1-脫氧野尻霉素(l-deoxynojirimycin)和桑糖苷元(MoranA)以來，越來越多的學(xué)者投身于從桑白皮中尋找新的降血糖成分，從而開發(fā)出新的治療糖尿病藥物。桑白皮主要活性成分有黃酮、生物堿、多糖和香豆素(傘形花內(nèi)酯、東莨菪素)等，有研究證明桑白皮中的黃酮、生物堿和多糖都具有一定的降血糖作用，其中生物堿的作用最強，而桑白皮中的香豆素成分主要用作利尿鎮(zhèn)咳平喘，目前尚沒有將其用作糖尿病腎病的治療的文獻(xiàn)報道，而據(jù)國內(nèi)近年的研究報道表明香豆素具有抗HIV、抗癌、降壓、抗心律失常、抗骨質(zhì)疏松、鎮(zhèn)痛、平喘及抗菌等多方面生物學(xué)活性，將香豆素用于糖尿病腎病的治療是香豆素用于醫(yī)藥領(lǐng)域的新用途。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種治療糖尿病腎病的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物的活性成分是香豆素類物質(zhì)。解決上述問題的技術(shù)方案如下—種治療糖尿病腎病的藥物組合物，由作為活性成分的7-羥基香豆素和7_羥基-6_甲氧基香豆素中的至少一種，以及常規(guī)的藥物載體組成，所述活性成分的重量百分比含量為0.1-99.5%優(yōu)選地，所述活性成分的重量百分比含量為5-70%。優(yōu)選的，所述藥物組合物由作為活性成分的7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素，以及常規(guī)的藥物載體組成，7-羥基香豆素7-羥基-6_甲氧基香豆素的重量比為l:4-4:i。本發(fā)明藥物組合物所述常規(guī)的藥用載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如稀釋劑、賦形劑如水等，填充劑如淀粉、乳糖或蔗糖等；粘合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂粘土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、和聚乙二醇等。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。本發(fā)明藥物組合物可以通過常規(guī)制劑方法制備成常規(guī)的劑型，常規(guī)劑型主要為口服制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸、口服液等。本發(fā)明所述藥物組合物的使用劑量可隨特定的給藥方式、病癥的嚴(yán)重程度等而相應(yīng)調(diào)整。一般情況下，臨床口服使用的參考劑量是1070mg/d。本發(fā)明的另一目的的實現(xiàn)技術(shù)方案為—種制備治療糖尿病腎病的藥物組合物的方法，將作為活性成分的7-羥基香豆素或7-羥基-6-甲氧基香豆素中的至少一種與常規(guī)的藥物載體相互混合，即得。本發(fā)明藥物組合物可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如活性成分與多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。本發(fā)明還提供了7-羥基香豆素和/或7-羥基-6_甲氧基香豆素在制備治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明具有以下有益效果1.本發(fā)明首次證明了從桑白皮中提取的香豆素類物質(zhì)具有降血糖的功能，為糖尿病及其并發(fā)癥患者提供了新的治療候選藥物。2.本發(fā)明的藥物組合物對糖尿病腎病的治療效果明顯優(yōu)于桑白皮水提物，并且活性成分明確，質(zhì)量易于控制，克服了傳統(tǒng)中藥中有效成分不明確、質(zhì)量控制難、有一定的毒副作用等缺點。3.本發(fā)明的藥物組合物原料來源豐富，可加工成口服劑型如滴丸、沖劑、片劑等，使用方便。4.本發(fā)明的藥物組合物具有顯著治療和預(yù)防糖尿病時腎小球損害的作用，由于可顯著預(yù)防糖尿病時血肌酐的升高、顯著降低糖尿病大鼠的尿量和尿蛋白，降低腎指數(shù)，表明對糖尿病腎病有顯著的防治作用。圖1是7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素對高糖培養(yǎng)下的大鼠腎小球系膜細(xì)胞肥大性改變(HE，200X);其中A:正常對照組；B:葡萄糖(25mmol/L)組；C:桑白皮水提物(0.lg/L);D:7-羥基香豆素(1iimol/L);E:7-羥基香豆素(0.1iimol/L);F:7-羥基香豆素(0.01iimol/L);G:7-羥基-6-甲氧基香豆素(1Pmol/L);H:7-羥基-6-甲氧基香豆素(0.liimol/L);1:7-羥基-6-甲氧基香豆素(0.01iimol/L);J:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.06:0.03iimol/L);K:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.05:0.05iimol/L);L:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.03:0.06iimol/L);圖2是7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素對高糖培養(yǎng)下的大鼠腎小球系膜細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)增生(PAS，200X);其中A:正常對照組；B:葡萄糖(25mmol/L)組；C:桑白皮水提物(0.lg/L);D:7-羥基香豆素(1iimol/L);E:7-羥基香豆素(0.1iimol/L);F:7-羥基香豆素(0.01iimol/L);G:7-羥基-6-甲氧基香豆素(1Pmol/L);H:7-羥基-6-甲氧基香豆素(0.liimol/L);1:7-羥基-6-甲氧基香豆素(0.01iimol/L);J:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.06:0.03iimol/L);K:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.05:0.05iimol/L);L:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.03:0.06iimol/L);圖3是7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素對高糖培養(yǎng)下的大鼠腎小球系膜細(xì)胞CTGF表達(dá)的影響(CTGF，200X);其中A:正常對照組；B:葡萄糖(25mmol/L)組；C:陰性對照(未加CTGF抗體)；D:桑白皮水提物(0.1g/L);E:7-羥基香豆素(1iimol/L);F:7-羥基香豆素(0.1iimo1/L);G:7-羥基香豆素(0.01iimol/L);H:7-羥基-6-甲氧基香豆素(1ymol/L);1:7-羥基-6-甲氧基香豆素(0.1iimol/L);J:7-羥基-6-甲氧基香豆素(0.01ymol/L);K:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.06:0.03iimol/L);L:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.05:0.05iimol/L);M:7-羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素合用(0.03:0.06iimol/L)。具體實施例方式本發(fā)明提出的用于制備治療糖尿病腎病藥物的香豆素類化合物為7-羥基香豆素(A)和7-羥基-6-甲氧基香豆素(B)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下這兩種香豆素類成分廣泛分布在植物界許多植物中，也可以用化學(xué)合成方法獲得。以下通過具體實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實施例1:7-羥基香豆素的制備取桑白皮(CotexMori)10kg，切碎磨成粉，加100L水回流提取三次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至一定的體積，至D101大孔樹脂中，先用水洗脫，再用95%乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮得浸膏。浸膏以硅膠層析柱分離，分別以石油醚、石油醚-乙酸乙酯ioo:1，石油醚-乙酸乙酯50:l和石油醚-乙酸乙酯20:i洗脫，石油醚-乙5酸乙酯20:l洗脫部分有淡黃色粉末析出，經(jīng)丙酮多次重結(jié)晶得純品，經(jīng)紅外、紫外、核磁共振和質(zhì)譜等分析確定其結(jié)構(gòu)為7-羥基香豆素(7-Hydroxyco咖arin)，即傘形花內(nèi)酯(Umbel1iferone)，分子式0^603，分子量162，HPLC測定其含量>99%，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下實施例2:7-羥基-6-甲氧基香豆素的制備取桑白皮(CotexMori)10kg，切碎磨成粉，加100L水回流提取三次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至一定的體積，至D101大孔樹脂中，先用水洗脫，再用95%乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮得浸膏。分別以石油醚、石油醚_乙酸乙酯100:l和石油醚-乙酸乙酯50:l洗脫，石油醚-乙酸乙酯50:i洗脫部分有淡黃色粉末析出，經(jīng)丙酮、甲醇多次重結(jié)晶得純品，經(jīng)紅外、紫外、核磁共振和質(zhì)譜等分析確定其結(jié)構(gòu)為7-羥基_6_甲氧基香豆素(7_hydroxy_6_methoxycoumarin)，艮卩東荒營內(nèi)酉旨(scopoletin)，分子式A。HA，分子量192，HPLC測定其含量〉99%，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下實施例3:本發(fā)明藥物組合物膠囊的制備(活性成分為7-羥基-6-甲氧基香豆素)步驟如下A.取蜂蠟4.2g，加月見草油125g，8(TC水浴下熔融混勻，冷卻至室溫(25°C)后加入叔丁基對羥基茴香醚和枸椽酸適量，充分混勻；B.加入過IOO目篩的7-羥基-6-甲氧基香豆素0.25g、卵磷脂5g，加月見草油至250g，充分混勻，作為囊心液，壓制成1000粒膠囊。本實施例所得膠囊用于治療高血糖癥、糖尿病腎病等具有良好的效果。實施例4:本發(fā)明藥物組合物滴丸的制備(活性成分為7-羥基香豆素)取7-羥基香豆素15g，經(jīng)超微粉碎過200目篩后得細(xì)粉，加入至熔融的15g聚乙二醇6000基質(zhì)中，攪勻，以二甲苯硅油為冷卻劑，滴制法制丸，干燥，即制得7-羥基香豆素滴丸。該滴丸用于血肌酐增多尿肌酐排出減少癥、糖尿病腎病的治療有著良好的效果。實施例5:本發(fā)明藥物組合物片劑的制備(活性成分為7-羥基香豆素或7-羥基-6_甲氧基香豆素)每片含有下述成分7-羥基香豆素或7-羥基-6-甲氧基香豆素12mg乳糖175mg玉米淀粉50mg硬脂酸鎂3mg6制備方法將活性成分、乳糖和淀粉混合，用水均勻濕潤，把濕潤后的混合物過篩并干燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然后將混合物壓片，每片重240mg，活性成分含量為12mg。該片劑用于高尿蛋白癥、糖尿病腎病的治療，具有良好的效果。實施例6:本發(fā)明藥物組合物分散片的制備(活性成分為7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素)精密稱取處方量的7-羥基香豆素95g和7-羥基_6_甲氧基香豆素190g、乳糖40g、微晶纖維素70g、交聯(lián)聚維酮5.25g、阿斯巴甜2.5g、聚維酮6g、碳酸氫鈉4g，按等量遞加法將主藥混合物與各種輔料先手工混合均勻。過80目篩兩遍?；靹蚝蟮奈锪现眠m當(dāng)容器中，加入含15%(g/100ml)聚乙二醇6000的75%乙醇溶液適量，制軟材。20目擠壓過篩制濕顆粒。濕顆粒平攤于搪瓷盤中，置鼓風(fēng)恒溫干燥箱中，7(TC干燥2小時。精確稱量干燥顆粒的重量，加入2.25g剩余交聯(lián)聚維酮，按1%的量加入十二烷基硫酸鈉(SDS)，混勻后，7mm圓形沖模壓制成1000片。即得7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素分散片1000片。用于治療糖尿病腎病及并發(fā)病，具有良好的效果。實施例7:本發(fā)明藥物組合物片劑的制備(活性成分為7-羥基香豆素和7-羥基-6_甲氧基香豆素)活性成分70g微晶纖維素0.4g制成1000片制備方法活性成分中7-羥基香豆素為568，7-羥基-6_甲氧基香豆素為14g，將活性成分和微晶纖維素混合，用水均勻濕潤制成軟材，把濕潤后的混合物制粒，過20目篩，8(TC烘干，過篩，然后將混合物壓片，每片重70.4mg，活性成分含量為70mg。本品口服用于治療糖尿病腎病及并發(fā)病，具有良好的效果。實施例8:本發(fā)明藥物組合物片劑的制備(活性成分為7-羥基香豆素和7-羥基-6_甲氧基香豆素)活性成分70g微晶纖維素0.4g制成1000片制備方法活性成分中7-羥基香豆素為148，7-羥基-6_甲氧基香豆素為56g，將活性成分和微晶纖維素混合，用水均勻濕潤制成軟材，把濕潤后的混合物制粒，過20目篩，8(TC烘干，過篩，然后將混合物壓片，每片重70.4mg，活性成分含量為70mg。本品口服用于治療糖尿病腎病及并發(fā)病，具有良好的效果。本發(fā)明對7-羥基香豆素和/或7-羥基-6-甲氧基香豆素進(jìn)行了高糖培養(yǎng)大鼠腎臟系膜細(xì)胞的影響的評價實驗和對dbIdb糖尿病腎病小鼠的治療作用實驗。試驗例1:7-羥基香豆素和/或7-羥基-6-甲氧基香豆素對高糖培養(yǎng)下的腎小球系膜細(xì)胞肥大和細(xì)胞外基質(zhì)增生的影響糖尿病腎病的特定病征為系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)增多而引起腎小球系膜基質(zhì)硬化。系膜細(xì)胞是腎小球系膜的主要成分，具有收縮、內(nèi)分泌、分裂增殖、免疫及吞噬作用多種功能，對腎小球生理功能的調(diào)解起著重要作用。所以高濃度葡萄糖培養(yǎng)環(huán)境中的系膜細(xì)胞是研究7糖尿病性腎小球硬化癥發(fā)生基質(zhì)的具有使用價值的模型。1.材料和試劑大鼠腎小球系膜細(xì)胞株HBZY-1;DMEM培養(yǎng)基(GIBC0);新生牛血清(杭州四季青血清廠)；CTGF(CantaCruz產(chǎn)品)；二抗(晶美生物工程有限公司)；即用型SABC免疫組化染色試劑盒(博士德公司)；DAB顯色系統(tǒng)(GeneTechBiotechnologyCompanyLimited)。0)2培養(yǎng)箱(NAPC05410，PERCISIONSCIENTIFIC);XSZ_D2倒置顯微鏡(重慶光學(xué)儀器廠)；超凈工作臺(蘇州百神科技網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)有限公司，蘇州市潔凈技術(shù)研究所)；醫(yī)用離心機(LDZ5-2，北京醫(yī)用離心機廠)；免疫組化濕盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司)。2.實驗方法2.l桑白皮水提物的制備取桑白皮(CotexMori)適量，切碎磨成粉，加10倍量水回流提取三次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至一定的體積，備用。2.2模型建立及細(xì)胞培養(yǎng)取對數(shù)生長期大鼠腎小球系膜細(xì)胞，以含5%新生牛血清的匿EM培養(yǎng)基制成單細(xì)胞懸液(5X104細(xì)胞/ml)，1ml/孔接種于預(yù)先放有蓋玻片的24孔板，細(xì)胞數(shù)5X104/孑L。37°C，5%(A培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后，改用不含血清的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h(同步化)。棄細(xì)胞上清液，每孔均加入含5%新生牛血清的DMEM培養(yǎng)基900禾P100不同濃度的葡萄糖，每個濃度設(shè)置3個重復(fù)，分別于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h、48h、72h、96h，HE染色和PAS染色觀察造模情況。結(jié)果表明，25mM葡萄糖培養(yǎng)48h時效果最好，作為本實驗造模條件。取24孔板培養(yǎng)的同步化處理的大鼠腎小球系膜細(xì)胞，棄細(xì)胞上清液，各藥物組每孔均加入匿EM培養(yǎng)基800ill禾P100ill葡萄糖(終濃度為25mmol/L)，再分別向孔內(nèi)加入1001的桑白皮水提物(終濃度為0.lg/L)、各濃度的7-羥基香豆素(終濃度分別為1、0.1、0.01iimol/L)、7-羥基-6-甲氧基香豆素(終濃度分別為1、0.1、0.01ymol/L)和7_羥基香豆素與7-羥基-6-甲氧基香豆素混合物(終濃度分別為0.06:0.03，0.05:0.05，0.03:0.06iimol/L)溶液。正常對照組加lmlDEME培養(yǎng)基，高糖組加900y1DMEM培養(yǎng)基和100ii1葡萄糖(終濃度為25mmol/L)。各組均設(shè)置3個重復(fù)，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱中再孵育48h，細(xì)胞鋪滿玻片后，取出細(xì)胞爬片，固定，留作染色和細(xì)胞免疫組化染色。2.3染色常規(guī)HE染色，常規(guī)PAS染色，CTGF染色。CTGF染色流程如下4%多聚甲醛固定細(xì)胞爬片30min;新配含3%H202的甲醇溶液滅活內(nèi)源性辣根過氧化物酶10min，蒸餾水洗3次；5%BSA封閉非特異性抗原20分鐘；滴加CTGF—抗(1:500)，4t:過夜，PBS(pH7.4)洗3次，每次2min;滴加生物素化山羊抗小鼠抗體(二抗)，37。C放置30min，PBS(pH7.4)洗3次，每次2min;滴加試劑SABC，37。C放置30min，PBS(pH7.4)洗4次，每次5min;加50y1顯色劑(顯色劑A、B、C各1滴加入到lml蒸餾水中，混勻)，室溫顯色15min，蒸餾水充分洗滌；蘇木素輕度復(fù)染lmin，水洗；脫水、透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察染色陽性情況。3結(jié)果與分析分別于顯微鏡下觀測大鼠腎小球系膜細(xì)胞肥大性改變、細(xì)胞外基質(zhì)增生和CTGF表達(dá)情況。83.17-羥基香豆素和/或7-羥基-6_甲氧基香豆素對抗高糖培養(yǎng)下的大鼠腎小球系膜細(xì)胞肥大性改變由圖l可以看出，高糖(25mmol/L)培養(yǎng)下，大鼠腎小球系膜細(xì)胞明顯肥大；桑白皮水提物、單用及合用7-羥基香豆素和7-羥基-6_甲氧基香豆素能顯著抑制高糖培養(yǎng)引起的腎小球系膜細(xì)胞的肥大，單體化合物效果明顯優(yōu)于總水提物，且合用效果優(yōu)于單用或相當(dāng)。3.27-羥基香豆素和/或7-羥基-6_甲氧基香豆素對抗高糖培養(yǎng)下的大鼠腎小球系膜細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)增生由圖2可以看出，高糖(25mmol/L)培養(yǎng)48h，腎小球系膜細(xì)胞外基質(zhì)明顯增多(PAS染色區(qū)面積及色度增加)；桑白皮水提物，單用及合用7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素均能減少高糖引起的腎小球系膜細(xì)胞外基質(zhì)增加，而單體化合物比總水提物作用更為顯著，且合用效果優(yōu)于單用。3.37-羥基香豆素和/或7-羥基-6_甲氧基香豆素對高糖培養(yǎng)下的大鼠腎小球系膜細(xì)胞CTGF表達(dá)的影響由圖3可以看出，高糖(25mmol/L)培養(yǎng)48h，系膜細(xì)胞的CTGF表達(dá)增加；桑白皮水提物、單用及合用7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素均能降低高糖培養(yǎng)引起的腎小球系膜細(xì)胞CTGF表達(dá)的增加，單體化合物效果明顯優(yōu)于總水提物，合用效果略優(yōu)于單用。試驗例2:7-羥基香豆素和/或7-羥基-6-甲氧基香豆素對dbIdb糖尿病腎病小鼠的治療作用。1.材料和試劑dbIdb小鼠、B6小鼠(由南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)；Accu-ChekAdvantage血糖儀(美國羅氏診斷公司)；SPECTRAmaxl90(美國AD公司)；肌酐測定試劑盒，考馬斯亮蘭測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。2.實驗方法2.1桑白皮水提物的制備取桑白皮(CotexMori)適量，切碎磨成粉，加10倍量水回流提取三次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至一定的體積，備用。2.2實驗期間動物管理和給藥實驗期間，各組小鼠在層流柜中飼養(yǎng)，自由進(jìn)食、進(jìn)水，每日更換水，墊料，保持籠內(nèi)清潔干燥，并固定水、飼料、墊料重，12h交替照明。所有器具及食物均每日消毒。八周齡db|db小鼠110只，隨機分為11組，每組10只模型組、桑白皮水提物組(劑量為2000mg生藥/kg)、7-羥基香豆素組(劑量分別為0.5，1.0，2.0mg/kg)和7-羥基-6-甲氧基香豆素組(劑量分別為0.5，1.0，2.Omg/kg);7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素合用組(劑量分別為O.6:0.3,0.5:0.5,0.3:O.6mg/kg)。八周齡B6鼠10只為正常對照組。各組同體積不同濃度灌胃給予相應(yīng)藥物或生理鹽水0.4ml，連續(xù)5周。3.統(tǒng)計與分析各組每日測定進(jìn)食量、飲水量；每周稱體重1次；每周取血測定血糖值1次。給藥結(jié)束后，收集24小時尿液，計算尿量，測定尿總蛋白、肌酐含量。小鼠處死后，取雙腎稱重，計算腎臟指數(shù)RI:RI(%。)=腎重/體重X1000。所有測定結(jié)果用^±S表示，采用組間t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。4.實驗結(jié)果4.17-羥基香豆素和/或7-羥基-6_甲氧基香豆素對dbldb糖尿病腎病小鼠體重的影響從表1可以看出，桑白皮水提物、單用及合用7-羥基香豆素和7-羥基-6_甲氧基香豆素可抑制dbIdb糖尿病腎病小鼠的體重的增加(P<0.05)，單用及合用7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素效果優(yōu)于桑白皮水提物或相當(dāng)，合用效果略優(yōu)于單用。表17-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素對dbIdb糖尿病腎病小鼠體重的影響(；土S,『10)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>和模型組比較*P<0.05，**P<0.014.27-羥基香豆素和/或7-羥基-6_甲氧基香豆素對dbldb糖尿病腎病小鼠血糖的影響從表2可以看出，給藥末期單用及合用7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素均可明顯降低dbldb糖尿病腎病小鼠血糖(P<0.05)。效果明顯優(yōu)于桑白皮水提物，且合用效果優(yōu)于單用。動物劑量血糖值(mmol/L)數(shù)(只)(mg/kg)l周2周3周4周5周正常對照組10-7.0±1.5**6.9土1.1**6.6±0.7**7.1±0.9"4.4±1.2**模型組10-13.7土2.813.5±3.012.4±3.614.1±4.313.2±3.1桑白皮水提物10200013.9±3.414.0士3.112.8±2.510.9±2.8*11.3土3.8100.513.7±4.113.6±2.912.9±2.911.2±4.012.1土1.97-羥基香豆素101.013.4±4.613.4±2.613.9±4.311.2±4.410.3±2.0*102.013.0±3.613.1±5.113.7±5.110.1±2.4*10.6±3.0100.513.3±4.513.4±2.713.5±3.212.1±3.613.0±2.27-羥基-6-甲氧101.013.5±4.013.0±3.212.6±4.810.8±2.5*10.4±2.5*基香豆素102.013.8±4.713.3±2.713.1±4.710.4±3.9*11.3±4.47-羥基香豆素100.6:0.313.5士4.313.2±2.512.8±3.810.3±3.3*11.3±2.8和7-羥基-6-甲100.5:0.513.6±4.813.3±2.912.1±2.711.5土2.710.1±2.2*氧基香豆素100.3:0.613.2士4.113.0士2.411.5±4.510.2±3.3*9.9±3.7*和模型組比較*P<0.05，**P<0.014.37-羥基香豆素和/或7-羥基-6-甲氧基香豆素對db|db糖尿病腎病小鼠24h尿量，尿總蛋白，尿肌酐的影響從表3可以看出，桑白皮水提物、單用及合用7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素明顯降低db|db糖尿病腎病小鼠24小時尿量、尿總蛋白，提高尿液中尿肌酐含量(P<0.05，P<0.01)，肌酐排出增加，其中單用7-羥基-6-甲氧基香豆素效果優(yōu)于桑白皮水提物和單用7-羥基香豆素(P<0.05，P<0.01)，合用效果明顯優(yōu)于單用。表37-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素對db|db糖尿病腎病小鼠24h尿量，尿總蛋白，尿肌酐的影響G±S,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>和模型組比較*P<0.05，**P<0.0權(quán)利要求一種治療糖尿病腎病的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物由作為活性成分的7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素中的至少一種，以及常規(guī)的藥物載體組成，所述活性成分的重量百分比含量為0.1-99.5％。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療糖尿病腎病的藥物組合物，其特征在于所述活性成分的重量百分比含量為5-70%。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療糖尿病腎病的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物由作為活性成分的7-羥基香豆素和7-羥基-6-甲氧基香豆素，以及常規(guī)的藥物載體組成，7-羥基香豆素7-羥基-6-甲氧基香豆素的重量比為1:4-4:1。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的治療糖尿病腎病的藥物組合物，其特征在于所述常規(guī)的藥物載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體以及香味劑、甜味劑中的任意一種或一種以上，其中賦形劑為水，填充劑為淀粉、蔗糖或乳糖；粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種；濕潤劑為甘油；崩解劑為瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉中的任意一種；吸收促進(jìn)劑為季銨化合物；表面活性劑為十六烷醇；吸附載體為高嶺土或皂粘土；潤滑劑為滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療糖尿病腎病的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物可以制備臨床上可以接受的片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸或口服液。6.—種制備如權(quán)利要求1所述的治療糖尿病腎病的藥物組合物的方法，其特征在于將作為活性成分的7-羥基香豆素或7-羥基-6-甲氧基香豆素中的至少一種與常規(guī)的藥物載體相互混合，按照一定的制劑工藝制備，即得。7.7-羥基香豆素和/或7-羥基-6-甲氧基香豆素在制備治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療糖尿病腎病的藥物組合物及其制備方法，和在制備治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用，該藥物組合物由7-羥基香豆素或7-羥基-6-甲氧基香豆素的一種或兩種作為活性成分，和常規(guī)的藥物載體組成，所述活性成分的重量百分比含量為0.1-99.5％。該藥物組合物主要應(yīng)用于制備治療糖尿病腎病藥物。本發(fā)明的藥物組合物原料來源豐富，對糖尿病腎病有顯著的防治作用，使用方便，為患者提供了新的治療候選藥物。文檔編號A61P13/12GK101780070SQ20091003671公開日2010年7月21日申請日期2009年1月16日優(yōu)先權(quán)日2009年1月16日發(fā)明者何寶,朱荃,段婷婷,湯丹,王汝上,石興華,程慧荃,鄭兆廣,顧斐,黃曉玲,黃艷霞申請人:廣州康臣藥物研究有限公司