專利名稱：一種育珠免疫增強(qiáng)劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種免疫增強(qiáng)劑的制備方法。
背景技術(shù)：
自古至今，珍珠一直被認(rèn)為是一種最珍貴和最有價(jià)值的物品，是富貴 和權(quán)利的象 征。她可以作為裝飾品，讓人佩帶起來顯得高貴、純潔和典雅；她具有神奇的藥用功效，據(jù)藥 典記載珍珠性寒無毒，有鎮(zhèn)心潤(rùn)顏、止渴墜痰、點(diǎn)目去膜、催下死胎，可治小兒驚風(fēng)、腹瀉、 創(chuàng)傷、抽搐和心悸等，在中藥上的應(yīng)用比較廣泛；此外，珍珠也是美容保健佳品，她含有十多 種人體必需氨基酸和二十多種微量元素，還含有特殊的抗衰老因子_卟啉類化合物，其美 容功效十分顯著。目前用于培育海水珍珠的珍珠母貝，主要是馬氏珠母貝(又名合浦珠母貝、馬氏 珍珠貝)、大珠母貝(又稱白蝶貝)、珠母貝(又稱黑蝶貝)以及企鵝珍珠貝)，我國(guó)海水珍 珠業(yè)經(jīng)過40多年的發(fā)展，已形成產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)，年產(chǎn)量已達(dá)30t，產(chǎn)量占據(jù)了世界的 95%以上，已超過日本的產(chǎn)量，在國(guó)際市場(chǎng)上占有重要地位，但在發(fā)展的過程中也暴露出一 些問題[3]。比如海水珍珠養(yǎng)殖缺乏全面科學(xué)規(guī)劃，造成休養(yǎng)貝死亡率高、吐核率高，育珠貝 存活率低、留核率低、商品珠比率低的現(xiàn)象，造成了母貝資源和入力資源的浪費(fèi)。目前，藥物處理細(xì)胞小片是一種比較常見的提高母貝留核率的方法，從傳統(tǒng)的紫 藥水、紅藥水處理小片；發(fā)展到采用金霉素、鏈霉素、四環(huán)素、呋喃類藥物處理；近幾年研究 的熱點(diǎn)集中在細(xì)胞小片的保養(yǎng)液，其中包括ATP、PVP、促珠泌素、細(xì)胞色素C、卵磷脂等保養(yǎng) 液。使用保養(yǎng)液的目的大致有五個(gè)方面一是維持細(xì)胞小片內(nèi)外環(huán)境滲透壓的平衡，保證細(xì) 胞小片離體后不被干死；二是殺菌滅毒，避免病菌感染；三是加速傷口愈合，促進(jìn)珍珠質(zhì)分 泌；四是維持細(xì)胞呼吸所需的中性環(huán)境；五是提高手術(shù)受體貝的成活率。上述的藥物處理 細(xì)胞小片的方法，在一定程度上提高了母貝的留核率和成活率，但是相對(duì)來說，作用時(shí)間不 是很持久，長(zhǎng)時(shí)間采用容易造成母貝的抗逆性反應(yīng)。珍珠的形成過程，通常是由軟體部(通常是外套膜)的上皮細(xì)胞分泌一種與珍珠 的化學(xué)組成很相近的粘液，經(jīng)酶的作用和自然脫水等過程，形成層覆一層的珍珠結(jié)構(gòu)，貝類 的外套膜與貝殼和珍珠的形成有非常直接的關(guān)系。研究表明細(xì)胞小片的外表皮細(xì)胞有強(qiáng)的 堿性磷酸酶活性，表明該酶與珍珠的形成有密切的關(guān)系，它不僅涉及蛋白質(zhì)的分泌，還參與 蛋白質(zhì)的合成以及貝殼與珍珠質(zhì)前身物質(zhì)的形成與礦化過程。此外，堿性磷酸酶是一種金 屬酶，其活性中心主要是Mg2+、Zn2+。而具有該金屬的螯合物，在一定程度上可以提高堿性磷 酸酶的活性，從而促進(jìn)珍珠的形成。生物組織液即母貝自身組織勻漿液，可以降低母貝對(duì)異 己的識(shí)別能力，從而降低母貝對(duì)珠核的排斥力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種育珠免疫增強(qiáng)劑的制備方法，研究一種新的細(xì)胞小片保 養(yǎng)液，來提高母貝的留核率和成活率。通過合成的Zn2+金屬螯合物作為主體物質(zhì)，添加適量的生物組織液作為調(diào)節(jié)劑，最后添加其他輔料，制備成為一種新型的珠母貝細(xì)胞小片保養(yǎng)液一免疫增強(qiáng)劑。其作用機(jī)理主要是通過化學(xué)和生物調(diào)控作用，降低母貝的分子識(shí)別能 力，減少排斥反應(yīng)，提高珠母貝的留核率，從而可以提高珍珠的產(chǎn)量和品質(zhì)，進(jìn)一步將帶動(dòng) 南珠產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，從而將繁榮我國(guó)海水珍珠產(chǎn)業(yè)。本發(fā)明的育珠免疫增強(qiáng)劑制備包括三個(gè)步驟(I)Zn2+金屬螯合物的誘導(dǎo)合成采用溶劑揮發(fā)法合成本發(fā)明化合物，其步驟為a.各取20mmol有機(jī)配體化合物(鄰啡羅啉和水楊酸)，充分?jǐn)嚢?，過濾；b.稱量20mmOlZnCl2，用5ml蒸餾水溶解，攪拌使完全溶解，過濾；c.將上述兩種溶液混合，水浴加熱，攪拌下滴加0. lmol/L的NaOH調(diào)節(jié)混合溶液 PH值；d.混合溶液冷卻至室溫，過濾，靜置；e.濾液放置一星期后得到本發(fā)明化合物。Zn2+金屬螯合物結(jié)構(gòu)式如下(見說明書附圖)本發(fā)明合成的螯合物是由一分子鄰啡羅啉和水楊酸與一分子Cu2+配位合成。鄰啡 羅啉和水楊酸可以從試劑公司購(gòu)買純品。(2)生物組織液的制備在育珠過程中吐核的珠母貝或者是不能在插核的珠母貝為原材料，將這些貝的外 套邊緣組織取出，勻漿，制備成10%的生物組織液，于-4°c保存。(3)育珠免疫增強(qiáng)劑的制備育珠免疫增強(qiáng)劑成分及配比如下Zn2+金屬螯合物0.1-1. Og生物組織液10_30mL卵磷脂0. 1-1. OgATPI-IOmL抗生素0. Ol-IgCaCl20. 1-1. OgKCl0. Olg-O. Ig0.4% 生理鹽水IOOOmL將上述各種固體成分按照適當(dāng)比例混合，用0.4%生理鹽水充分溶解，再加入 ATP、抗生素溶液及生物組織液，最后用0. 4%生理鹽水定容即可。本發(fā)明是通過化學(xué)和生物調(diào)控作用，降低母貝的分子識(shí)別能力，減少排斥反應(yīng)，提 高珠母貝的留核率，從而可以提高珍珠的產(chǎn)量和品質(zhì)，進(jìn)一步將帶動(dòng)南珠產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，從而 將繁榮我國(guó)海水珍珠產(chǎn)業(yè)。


圖1是本發(fā)明Zn2+金屬螯合物單晶分子結(jié)構(gòu)圖；圖2是本發(fā)明Zn2+金屬螯合物的空間螺旋鏈結(jié)構(gòu)圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1育珠免疫增強(qiáng)劑育珠免疫增強(qiáng)劑成分及配比如下Zn2+金屬螯合物0. 4g生物組織液15mL卵磷脂0. 3gATP6mL青霉素0. IgCaCl20. IgKCl0. 02g0· 4% 生理鹽水 IOOOmL將上述各種固體成分按照適當(dāng)比例混合，用0.4%生理鹽水充分溶解，再加入 ATP、抗生素溶液及生物組織液，最后用0. 4%生理鹽水定容即可。實(shí)施例2育珠免疫增強(qiáng)劑育珠免疫增強(qiáng)劑成分及配比如下Zn2+金屬螯合物0. 8g生物組織液30mL卵磷脂6gATP7mL硫酸鏈霉素0. 6gCaCl20. 4gKCl0. 08g0· 4% 生理鹽水IOOOmL實(shí)施例3在湛江徐聞?wù)渲橛閳?chǎng)，對(duì)馬氏珠母貝進(jìn)行人工插核，每個(gè)育珠貝插兩個(gè)核，插核過程中使用育珠免疫增強(qiáng)劑。從養(yǎng)殖了 2個(gè)月的育珠貝中取出珍珠，貝的留核率達(dá)到 72.6%，留核數(shù)為1.45個(gè)/貝，珠核表面已長(zhǎng)出約0. Imm左右的珍珠層。
權(quán)利要求
一種育珠免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征是包括三個(gè)步驟(1)Zn2+金屬螯合物的誘導(dǎo)合成步驟為a.各取20mmol有機(jī)配體化合物(鄰啡羅啉和水楊酸)，充分?jǐn)嚢?，過濾；b.稱量20mmolZnCl2，用5ml蒸餾水溶解，攪拌使完全溶解，過濾；c.將上述兩種溶液混合，水浴加熱，攪拌下滴加0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)混合溶液pH值；d.混合溶液冷卻至室溫，過濾，靜置；e.濾液放置一星期后得到本發(fā)明化合物。(2)生物組織液的制備在育珠過程中吐核的珠母貝或者是不能在插核的珠母貝為原材料，將這些貝的外套邊緣組織取出，勻漿，制備成10％的生物組織液，于-4℃保存。(3)育珠免疫增強(qiáng)劑的制備育珠免疫增強(qiáng)劑成分及配比如下Zn2+金屬螯合物0.1-1.0g生物組織液10-30mL卵磷脂0.1-1.0gATP 1-10mL抗生素0.01-1.0gCaCl2 0.1-1.0gKCl 0.01g-0.1g0.4％生理鹽水 1000mL將上述各種固體成分按照適當(dāng)比例混合，用0.4％生理鹽水充分溶解，再加入ATP、青霉素溶液及生物組織液，最后用0.4％生理鹽水定容即可。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種育珠免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征是有機(jī)配體化合物是 鄰啡羅啉和水楊酸。
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種育珠免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征是抗生素是青霉素、 鹽酸左氧氟沙星、乳酸環(huán)丙沙星、硫酸鏈霉素。
全文摘要
一種育珠免疫增強(qiáng)劑的制備方法，通過合成的Zn2+金屬螯合物作為主體物質(zhì)，添加適量的生物組織液作為調(diào)節(jié)劑，最后添加其他輔料，制備成為一種新型的珠母貝細(xì)胞小片保養(yǎng)液——免疫增強(qiáng)劑。其作用機(jī)理主要是通過化學(xué)和生物調(diào)控作用，降低母貝的分子識(shí)別能力，減少排斥反應(yīng)，提高珠母貝的留核率，從而可以提高珍珠的產(chǎn)量和品質(zhì)，進(jìn)一步將帶動(dòng)南珠產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，從而將繁榮我國(guó)海水珍珠產(chǎn)業(yè)。
文檔編號(hào)A61K31/7076GK101804073SQ20091004118
公開日2010年8月18日 申請(qǐng)日期2009年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月17日
發(fā)明者宋文東, 李世杰, 梁飛龍, 王浩, 秦培文, 符紹, 紀(jì)麗麗, 胡世偉, 范潤(rùn)珍, 陶震, 黃翔鵠 申請(qǐng)人:廣東海洋大學(xué)