專利名稱：：一種防治乳腺炎的微生物制劑及其應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種微生物制劑，特別涉及一種防治乳腺炎的微生物制劑及其應用。
背景技術：
：乳腺炎(也叫乳房炎)是一種常見的、復雜的、造成奶牛、羊、豬養(yǎng)殖業(yè)嚴重經(jīng)濟損失的疾病。我國北京、上海等地調査結果表明奶牛隱性乳腺炎發(fā)病率在60%左右。目前全世界約有2.2億頭奶牛，其中約有1/3的奶?；加懈鞣N類型的乳腺炎，每年因乳腺炎造成的損失高達350億美元。盡管對此病已進行100多年的研究，但至今未能提出一個徹底解決的辦法。病原體感染是引起乳腺炎的主要原因，有細菌、真菌、病毒、支原體等。其中主要的致病菌是細菌，常見的有金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、鏈球菌屬和支原體。葡萄球菌和鏈球菌是臨床型乳腺炎的主要病原菌，占50%以上，其次是大腸桿菌。這三種病原菌所致的乳腺炎常年發(fā)生，其它病原菌所致的乳腺炎多為散發(fā)或繼發(fā)。目前常規(guī)的防治乳腺炎的方法主要有干乳期在奶牛、羊、豬乳腺內(nèi)灌注抗生素，抗生素可根據(jù)當?shù)亓餍胁【x擇最佳藥物，直接將藥物注入乳內(nèi)，藥物濃度高，吸收快，療效好。但缺點是可能會對乳腺組織產(chǎn)生刺激性，會引發(fā)新的炎癥。如果長期大量使用抗生素會使致病菌耐藥菌株增加，一些乳腺炎病例變得難以用常規(guī)方法治愈。此外，牛奶中抗生素殘留會影響牛奶品質。因此市場不允許出售抗生素殘留過量的牛奶，同時也造成牛奶生產(chǎn)者的經(jīng)濟損失。中草藥防治乳腺炎具有無藥物殘留、經(jīng)濟效益高的優(yōu)點，但有見效慢的缺點?；蚬こ桃呙绮捎靡呙绶乐稳橄傺椎陌l(fā)生是較為安全、有效的方法。但是利用疫苗防治牛乳腺炎最常見的問題是細菌抗原的變異，造成疫苗在第一年效果很好，第二年卻失去作用。其它的一些療法包括，乳腺按摩、食物療法和同種療法等，它們的主要優(yōu)點是沒有副作用和不會造成牛奶中藥物的殘留問題，致病菌不會產(chǎn)生抗藥性。但是，這些療法中大部分都耗時、耗力、還需要把病牛單獨處理。它們不適應現(xiàn)代化的規(guī)模養(yǎng)殖，生產(chǎn)效率較低。蛭弧菌是寄生于其他細菌，并能導致宿主細菌裂解的一類細菌。比一般細菌小，能通過細菌濾器，有類似噬菌體的作用。單細胞，呈弧形或逗點狀，有時呈螺旋狀，大小(0.20.6)x(0.81.2)微米，端生鞭毛，多為一根。革蘭氏染色呈陰性，可以裂解革蘭氏陰性菌。我們的最新研究表明，有些蛭弧菌可以裂解包括大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、停乳鏈球菌等一些常見奶牛乳腺炎致病菌。蛭弧菌的生活史分兩個階段自由生活，能運動，不進行增殖的游泳體階段和在特定宿主細菌的周質空間內(nèi)進行生長繁殖的蛭質體階段。蛭弧菌游泳體是指蛭弧菌侵入宿主細菌前的生長形式。蛭弧菌在游泳體階段，識別并與宿主發(fā)生不可逆結合，然后侵入宿主，蛭弧菌游泳體侵入宿主細菌的過程非?？欤话銕酌腌妰?nèi)即可完成。蛭弧菌蛭質體是蛭弧菌在特定宿主細菌的周質空間內(nèi)進行生長繁殖的形式。蛭弧菌進入宿主菌細胞周質空間后，主要通過降解宿主細胞的大分子成為單體，然后攝入用于其生物大分子的合成。隨著細胞增殖和水解酶產(chǎn)生，使宿主細胞壁膜被破壞，從而裂解釋放出蛭弧菌。用蛭弧菌游泳體和蛭質體的混合體作為控制和消除乳腺炎致病菌的微生物制劑，兼具游泳體起效快，活力強和蛭質體制備、保存容易，殺菌作用時間更久和環(huán)境耐受力更強的優(yōu)點。使得蛭弧菌混合體適合作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中致病菌的生物凈化因子，從而克服了抗生素濫用帶來的副作用和常規(guī)消毒劑對奶牛和牛奶品質的不利影響。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術中尚未同時應用蛭弧菌蛭質體和游泳體制備防治乳腺炎的微生物制劑不足之處，提供一種防治乳腺炎的微生物制劑。本發(fā)明的另一目的在于提供所述微生物制劑的應用。本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)一種防治乳腺炎的微生物制劑，由蛭弧菌游泳體和蛭弧菌蛭質體構成；所述的蛭弧菌蛭質體為蛭弧菌存在于宿主菌內(nèi)的狀態(tài)；所述的蛭弧菌游泳體為蛭弧菌游離在宿主菌外部的狀態(tài)；所述蛭弧菌蛭質體優(yōu)選通過以下方法制備在含有宿主菌的DNB(dilutenutrientbroth)液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸餾水中，pH值為7.27.6)中接入蛭弧菌，于2535。C、150300rpm培養(yǎng)3648h，得到含蛭弧菌蛭質體和蛭弧菌游泳體的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液經(jīng)4°C60008000rpm離心1520min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，得到的沉淀即是蛭弧菌蛭質體；所述宿主菌為乳腺炎致病菌；所述乳腺炎致病菌更有選為奶牛乳腺炎致病菌；所述奶牛乳腺炎致病菌包括能引起奶牛乳腺炎的大腸桿菌(￡"/^nW》co/i')、金黃色葡萄球菌(S啤/2;v/occocMSawrews)、表皮葡萄球菌(iS鄉(xiāng)/^/ococcwe//cfermzVfo)、無孚L鏈球菌CSVreptococcwsaga/a"/")和停乳鏈球菌(5V^pfococctw所述蛭弧菌蛭質體優(yōu)選用DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸餾水中，pH值為7.27.6)、水、生理鹽水或0.2mol/LpH值為7.27.6的磷酸鹽緩沖液懸浮；所述蛭弧菌游泳體的制備方法為將蛭弧菌蛭質體制備方法中的含蛭弧菌游泳體的上清經(jīng)1600018000rpm離心1520min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳體；所述蛭弧菌游泳體優(yōu)選用DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0.8g,酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸餾水中，pH值為7.27.6)、水、生理鹽水或0.2mol/LpH值為7.27.6的磷酸鹽緩沖液懸??；所述蛭弧菌優(yōu)選為蛭弧菌(Bcfe//ovAn'osp.)BDS01或蛭弧菌(^/e//ov/&n'osp.)BDS02的一種或兩種；所述微生物制劑優(yōu)選蛭弧菌游泳體和蛭弧菌蛭質體按細菌數(shù)1:1混合；所述蛭弧菌(5^//cm7v7'osp.)BDS01于2009年8月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M209169;對所述蛭弧菌BDS01進行負染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察BDS01呈單細胞，弧形，大小為0.9x0.25^m，端生鞭毛，鞭毛長度為4pm;所述蛭弧菌BDSOl以雙層平板法于28'C培養(yǎng)四天可形成直徑l2mm的透明圓形噬菌斑；所述蛭弧菌(5&〃oW6n'osp.)BDS02于2009年8月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M209170;將所述蛭弧菌BDS02進行負染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察BDS02呈單細胞，弧形，大小為0.65x0.2|im，端生鞭毛，鞭毛長度至少1.8(om;所述蛭弧菌BDS02以雙層平板法于28。C培養(yǎng)四天可形成直徑12rnrn的透明圓形噬菌斑；所述微生物制劑應用于防治乳腺炎；所述乳腺炎優(yōu)選為奶牛乳腺炎、羊乳腺炎或豬乳腺炎；所述微生物制劑用于預防哺乳動物的乳腺炎時，哺乳動物為健康哺乳動物，是以浸泡沖洗、或噴灑的方法處理哺乳動物的乳腺，若浸泡沖洗，時間為lmin;若噴灑，將奶牛乳腺均勻噴灑兩遍，要做到不留死角；其中的蛭弧菌濃度至少達到103pfU/ml，其優(yōu)選范圍為105108pfU/ml;所述微生物制劑用于治療哺乳動物的乳腺炎時，乳腺為已經(jīng)感染乳腺炎的乳腺，每次浸泡lmin，若噴灑，每次均勻噴灑兩遍；每天2次，持續(xù)5天；所用蛭弧菌的濃度至少達到103pfli/ml，其優(yōu)選范圍為105108pfo/ml。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術，具有如下的優(yōu)點及效果1、本發(fā)明所述微生物制劑在防治哺乳動物的乳腺炎中的效果顯著。如表35所示，本發(fā)明中所述防治哺乳動物乳腺炎的微生物制劑在對哺乳動物乳腺炎的治療上有顯著效果，基本上跟常用抗生素的治療效果相當。微生物制劑對健康哺乳動物預防乳腺炎效果也非常顯著。2、本發(fā)明所述微生物制劑在防治哺乳動物乳腺炎應用中安全性好。微生物制劑中蛭弧菌通過裂解而消除可引起奶牛乳腺炎致病菌的方法是生物方法。蛭弧菌可侵染、裂解宿主細菌的特性使之適合作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中致病菌的生物凈化因子，且其在裂解完宿主細菌后，會因饑餓而自動消亡，從而克服了抗生素濫用帶來的副作用。3、含有本發(fā)明所述防治微生物制劑適合推廣應用于奶牛、羊、豬等哺乳動物養(yǎng)殖過程。蛭弧菌對人和奶牛、羊、豬等哺乳動物無毒副作用。適合于奶牛、羊、豬等大規(guī)模工廠化養(yǎng)殖，可以為肉制品和乳制品的綠色加工生產(chǎn)提供保障并且為防治哺乳動物乳腺炎提供了一種新方法。5、含有本發(fā)明所述防治奶牛乳腺炎的微生物制劑適用范圍廣，對人也可適用。具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。實施例1(1)防治乳腺炎的微生物制劑的制備使用的蛭弧菌菌株分別為蛭弧菌BDS01和蛭弧菌BDS02。蛭弧菌BDS01于2009年8月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M209169;對所述蛭弧菌BDSOl進行負染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察BDS01呈單細胞，弧形，大小為0.9x0.25pm，端生鞭毛，鞭毛長度為4pm，將其以雙層平板法于28'C培養(yǎng)四天可形成直徑12mm的透明圓形噬菌斑。所述蛭弧菌BDS02于2009年8月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M209170;將所述蛭弧菌BDS02進行負染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察BDS02呈單細胞，弧形，大小為0.65x0.2pm，端生鞭毛，鞭毛長度至少1.8pm，將其以雙層平板法于28'C培養(yǎng)四天可形成直徑12mm的透明圓形噬菌斑。蛭弧菌蛭質體的制備分別在2個裝有100mLLB(Luria-Bertani)液體培養(yǎng)基(蛋白胨10g，酵母膏5g,蒸餾水lOOOmL，pH7.2)的錐形瓶中接種大腸桿菌(購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM1.137)，200rpm、28°C搖床培養(yǎng)18小時，培養(yǎng)液分別于4。C、5000rpm離心15min，棄上清。分別將沉淀加入到2個裝有100mLDNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸餾水中，pH值為7.27.6)的錐形瓶中，再分別加入從雙層平板上挑取的蛭弧菌BDS01的噬菌斑和蛭弧菌BDS02的噬菌斑。恒溫搖床250rpm、28'C培養(yǎng)36h。培養(yǎng)液分別于4°C6000rpm離心20min，去除含蛭弧菌游泳體的上清，保留沉淀(即蛭弧菌蛭質體)，加入生理鹽水懸浮蛭弧菌蛭質體；蛭弧菌游泳體的制備將蛭弧菌蛭質體制備方法中的含蛭弧菌游泳體的上清經(jīng)16000rpm離心20min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳體，加入DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸餾水中，pH值為7.27.6)懸浮蛭弧菌游泳體。微生物制劑A由濃度為103pfb/ml的蛭弧菌BDSOl游泳體菌液和濃度為103pfU/ml的蛭弧菌BDS01蛭質體菌液按細菌數(shù)1:1混合組成；微生物制劑B由濃度為103pfu/ml的蛭弧菌BDS02游泳體菌液和濃度為103pfb/ml的蛭弧菌BDS02蛭質體菌液按細菌數(shù)1:1混合組成；將微生物制劑A和微生物制劑B按細菌數(shù)2:1混合，得到微生物制劑C;將微生物制劑A和微生物制劑B按細菌數(shù)1:1混合，得到微生物制劑D;將微生物制劑A和微生物制劑B按細菌數(shù)1:2混合，得到微生物制劑E。(2)微生物制劑治療感染乳腺炎的病奶牛A、試驗藥物實驗組步驟(1)制備的微生物制劑對照組乳酸環(huán)丙沙星(洛陽惠中獸藥有限公司生產(chǎn))；B、治療病例共治療臨床型乳腺炎138例，其中乳酸環(huán)丙沙星組和微生物制劑A、B、C、D、E組各23例；C、用藥劑量及方法用藥劑量如下乳酸環(huán)丙沙星1.5W20mL;蛭弧菌103pfb/mll000mL;用藥方法如下乳酸環(huán)丙沙星為乳區(qū)注射，用體積百分比75%酒精棉球消毒乳頭，注完藥液后用手按摩乳區(qū)35min使藥液充分均勻擴散，最后用1°/。碘酊藥浴乳頭lmin，每天1次，連用5天；蛭弧菌為浸泡乳腺lmin或均勻噴灑乳腺兩遍，每天2次，連用5天；D、療效判定標準分臨床痊愈、有效和無效三種；臨床痊愈乳房紅腫熱痛硬消失，乳汁肉眼觀察正常，奶產(chǎn)量回升，檢測牛乳體細胞數(shù)小于50萬個/mL;有效乳房紅腫熱痛硬明顯好轉，乳汁無凝塊或僅有少量奶塊，奶產(chǎn)量回升或痊愈停藥5天內(nèi)又復發(fā)者，檢測牛乳體細胞數(shù)介于100萬個/mL和200萬個/mL之間；無效乳房紅腫熱痛硬無明顯改善或更嚴重，乳汁異常，奶產(chǎn)量持續(xù)下降，檢測牛乳體細胞數(shù)大于200萬個/mL。牛乳體細胞數(shù)的檢測采用國際乳業(yè)聯(lián)合會(IDF)推薦采用的體細胞計數(shù)法。牛乳體細胞數(shù)推薦分級標準的具體規(guī)定見表l。具體測試過程首先用體積百分比75%酒精清洗每一個乳頭端，并棄去第l-2把乳汁，取每一個乳頭所擠的2-5mL乳放入相應的小平皿中。在每一個小平皿中加入定量檢測試劑，即可根據(jù)反應現(xiàn)象和美國加利福尼亞乳房測試法(CMT法)判定標準進行判斷。CMT法判定標準見表2。結果如表3所示，微生物制劑A組和微生物制劑B組的治療效果不及抗生素組，但是對奶牛乳腺炎也具有一定的治療效果。微生物制劑C、D、E組的治療效果已與抗生素治療組相當。并且微生物制劑D組治療效果最好。蛭弧菌在乳腺表面通過裂解而消除病原菌，不會對奶牛健康產(chǎn)生影響，長期治療致病菌不會產(chǎn)生抗藥性，也不會導致抗生素在牛奶中的殘留。如果加大蛭弧菌用量可能會取得更加顯著的效果。蛭弧菌治療奶牛乳腺炎工序簡單，操作簡便，成本也低。蛭弧菌在奶牛乳腺炎的治療上具有很大的利用價值和應用潛力。表l、牛乳體細胞數(shù)分級標準牛乳等級體細胞數(shù)(萬個/mL)乳房炎的判斷A級B級C級D級乳房衛(wèi)生優(yōu)良隱性乳房炎患乳房炎嚴重乳房表2、CMT法判定標準判定符號被檢乳乳汁反應細胞總數(shù)(萬個/mL)—陰性混合物呈液狀，傾斜檢驗盤時，液體流動流暢，皿底無凝塊02可疑混合物呈液狀，皿底可出現(xiàn)微量沉淀，稍加搖動，沉淀即刻消失1550+弱陽性皿底出現(xiàn)少量稀薄黏性沉淀，但不成膠狀，搖動時，沉淀物散布于皿底，并有一定的黏性皿底沉淀物較多，較黏稠，微呈膠狀，傾斜檢驗盤時沉淀物5080++陽性有明顯黏附于皿底而難以流動的現(xiàn)象，當檢驗盤作旋轉時，沉淀物有聚集于中心傾向80500+++皿內(nèi)混合物的大部分或全部參與形成明顯膠狀沉淀物，幾乎強陽性完全黏附于皿底，旋轉檢驗時，凝膠聚集中心呈團塊，難以散開>500y酸性乳乳汁呈黃色、酸敗，為乳房炎>500p堿性乳乳汁呈深紫色，同時伴有奶產(chǎn)量減少的現(xiàn)象，為乳房炎；乳中摻堿時，乳汁易呈深紫色>500注分娩后l周內(nèi)或泌乳后期的母牛都會出現(xiàn)強陽性反應，即初乳期和泌乳末期乳中體細胞數(shù)均出現(xiàn)生理性升高，故該法不適于檢査初乳期和泌乳末期的乳樣。表3微生物制劑治療感染奶牛乳腺炎病牛效果治療劑效果乳酸環(huán)丙微生物制微生物制微生物制微生物制微生物制沙星劑A劑B劑c劑D劑E例%例%例%例%例%例％痊愈1669.6939.11147.91252.21565.21356.5有效417.4834.8730.4626.1417.4626.1無效313.0626.121.721.7417.4417.4合計231002310023100231002310023100實施例2微生物制劑治療感染乳腺炎小尾寒羊病羊，具體過程如下:A、試驗藥物實驗組實施例l步驟(1)制備的微生物制劑對照組乳酸環(huán)丙沙星(洛陽惠中獸藥有限公司生產(chǎn))；B、治療病例共治療臨床型乳腺炎120例，其中乳酸環(huán)丙沙星組和微生物制劑A、B、C、D、E組各20例；C、用藥劑量及方法用藥劑量如下乳酸環(huán)丙沙星1.5%10mL;蛭弧菌103pfii/ml1000mL;用藥方法如下①先擠凈乳汁，用體積百分比75%酒精消毒乳頭，將乳導管插入乳腺，注入乳酸環(huán)丙沙星，然后抓住乳頭由下向上順次按摩乳房，使藥液擴散于整個乳腺，每日2次，連用5天。②50g/L碘酊100mL，涂擦乳房皮膚(注意不要涂于乳頭部)；蛭弧菌為浸泡乳腺lmin或均勻噴灑乳腺兩遍，每天2次，連用5天；D、療效判定標準分臨床痊愈、有效和無效三種；臨床痊愈乳房紅腫、發(fā)熱、疼痛消失，乳房無硬塊，乳汁肉眼觀察正常，奶產(chǎn)量回升；有效乳房紅腫、發(fā)熱、疼痛明顯好轉，乳汁無凝塊或僅有少量奶塊，奶產(chǎn)量回升或痊愈停藥5天內(nèi)又復發(fā)者；無效乳房紅腫、發(fā)熱、觸診表現(xiàn)疼痛，泌乳減少或停止，乳汁變性。結果如表4所示，微生物制劑A組和微生物制劑B組的治療效果稍差，微生物制劑C、E組的治療效果比較顯著，微生物制劑D已與抗生素治療組療效相當?？傮w來說，微生物制劑對奶羊的治療痊愈率低于奶牛，但是有效率高于奶牛。_表4微生物制劑治療感染乳腺炎病羊效果__治療劑_效果乳酸環(huán)丙微生物制微生物制微生物制微生物制微生物制沙星劑A劑B劑C劑D劑E例%例%例%例%例%例%痊愈12606302594511551050有效630945945630420630無效2102563052525420合計201002010020100201002010020100實施例3(1)防治母豬乳腺炎的微生物制劑的制備制備過程同實施例1步驟(1)，區(qū)別僅在于制備微生物制劑A、B、C、D、E時所用懸浮蛭質體和游泳體的溶液用PBS緩沖液(0.2mol/L，pH值為7.2)。(2)微生物制劑治療感染乳腺炎病豬A、試驗藥物實驗組步驟(1)制備的微生物制劑對照組0.5-1%鹽酸普魯卡因，青霉素(四川迪康科技藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))；B、治療病例共治療臨床型乳腺炎120例，其中乳酸環(huán)丙沙星組和微生物制劑A、B、C、D、E組各20例；C、用藥劑量及方法用藥劑量如下鹽酸普魯卡因0.5-1%15mL，青霉素40萬國際單位；蛭弧菌103pfli/ml1000mL;用藥方法如下先擠凈乳汁，局部涂上魚石脂軟膏，用0.5-1%鹽酸普魯卡因15毫升加入青霉素40萬國際單位作乳區(qū)封閉注射，每日1次，連用5天；蛭弧菌為浸泡乳腺lmin或均勻噴灑乳腺兩遍，每天2次，連用5天；D、療效判定標準分臨床痊愈、有效和無效三種；臨床痊愈乳房潮紅、腫脹、發(fā)熱、發(fā)硬、疼痛消失，乳汁肉眼觀察正常；有效乳房潮紅、腫脹、發(fā)熱、發(fā)硬、疼痛明顯好轉，乳汁無凝塊或僅有少量奶塊或痊愈停藥5天內(nèi)又復發(fā)者；無效乳房潮紅、腫脹、發(fā)熱、發(fā)硬、有痛感，不讓仔豬吃奶。初期乳汁稀薄，內(nèi)混絮狀小塊。后乳汁少而濃，混有白色絮狀物，有時帶血絲甚至有黃褐色膿液，有臭味。_表5微生物制劑治療感染乳腺炎病豬效果_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結果如表5所示，微生物制劑A組和微生物制劑B組的治療效果不如微生物制劑C、E組的治療效果顯著，微生物制劑D治療效果最好。治療效果雖不如抗生素，但是不會對母豬及仔豬的身體健康造成危害，長期使用也不會產(chǎn)生抗藥性，并且加大微生物制劑的濃度會有更加顯著的效果。上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。權利要求1、一種防治乳腺炎的微生物制劑，其特征在于所述微生物制劑由蛭弧菌游泳體和蛭弧菌蛭質體構成。2、根據(jù)權利要求1所述的微生物制劑，其特征在于所述蛭弧菌為保藏日期為2009年8月7日、保藏編號為CCTCCNO:M209169的蛭弧菌(B&〃ovAn'osp.)BDS01或保藏日期為2009年8月7日、保藏編號為CCTCCNO:M209170的蛭弧菌(^fe〃ovAn'osp.)BDS02的一種或兩種。3、根據(jù)權利要求1所述的微生物制劑，其特征在于所述的微生物制劑為蛭弧菌游泳體和蛭弧菌蛭質體按細菌數(shù)kl混合。4、根據(jù)權利要求13任一項所述的微生物制劑，其特征在于所述蛭弧菌蛭質體通過以下方法制備在含有宿主菌的DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000ml蒸餾水中，pH值為7.27.6)中接入蛭弧菌，于2535。C、150300rpm培養(yǎng)3648h，培養(yǎng)液經(jīng)4°C60008000rpm離心1520min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，得到的沉淀即是蛭弧菌蛭質體；將所述含蛭弧菌游泳體的上清經(jīng)1600018000rpm離心1520min后，得到的沉淀即是所述的蛭弧菌游泳體。5、權利要求13任一項所述微生物制劑的應用，其特征在于所述微生物制劑應用于防治乳腺炎。6、根據(jù)權利要求5所述的應用，其特征在于所述乳腺炎為奶牛乳腺炎、羊乳腺炎或豬乳腺炎。7、根據(jù)權利要求5所述的應用，其特征在于所述微生物制劑處理乳腺，所述微生物制劑中的蛭弧菌的濃度至少達到103pfli/ml。全文摘要本發(fā)明公開了一種防治乳腺炎的微生物制劑及其應用。本發(fā)明將蛭弧菌游泳體和蛭弧菌蛭質體制備成防治乳腺炎的微生物制劑。通過檢測，所述的微生物制劑對豬、羊和牛的乳腺炎具有良好的預防和治療作用。用蛭弧菌游泳體和蛭質體的混合體作為控制和消除乳腺炎致病菌的微生物制劑，兼具游泳體起效快，活力強和蛭質體制備、保存容易，殺菌作用時間更久和環(huán)境耐受力更強的優(yōu)點。并且蛭弧菌對奶牛無毒副作用，因此由蛭弧菌游泳體和蛭弧菌蛭質體制備得到的微生物制劑適合于豬、羊和牛大規(guī)模工廠化養(yǎng)殖，可以為肉制品和乳制品的綠色加工生產(chǎn)提供保障并且為防治乳腺炎致病菌提供了一種新方法。文檔編號A61K35/66GK101642475SQ20091004226公開日2010年2月10日申請日期2009年8月28日優(yōu)先權日2009年8月28日發(fā)明者孫麗瀅,蔡俊鵬,陳小紅申請人:華南理工大學