專利名稱：：番荔枝內(nèi)酯衍生物、制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及番荔枝內(nèi)酯衍生物，特別涉及含有多肽的番荔枝內(nèi)酯衍生物。本發(fā)明還涉及所述含有多肽的番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備方法及其在治療癌癥中的應用。
背景技術(shù)：
：國內(nèi)外多篇文獻中都已公開番荔枝內(nèi)酯具有很強的抗腫瘤活性，并且由于其結(jié)構(gòu)獨特，作用機理不同于現(xiàn)有的抗腫瘤藥物，并且其作用于線粒體干擾能量代謝、無致突變型，對其的研究非常廣泛。中國專利ZL02115003.6公開了一種新型番荔枝內(nèi)酯衍生物及其制備方法和用途。該專利采用直接提純番荔枝種子的方法得到番荔枝雙酯素，并用于癌癥的治療。然而直接的番荔枝內(nèi)酯類物質(zhì)在治療癌癥方面具有一定的局限，對于特定種類癌癥的治療效果不佳。中國專利ZL99125750.2公開了手性番荔枝內(nèi)酯類化合物、合成方法及其用途。該專利采用有機合成的方法以手性鹵代烷和手性二羥基烷基羧酸酯為原料進行合成，得到多種番荔枝內(nèi)酯類衍生物，并用于癌癥的治療。然而上述有機合成過程較為復雜，并采用了多種化學物質(zhì)、催化劑等，從而使得合成所得產(chǎn)物中的雜質(zhì)較多、毒副作用較大，并且導致后期的提純等過程復雜。同時，中國專利97106368.0、01107594·5、03141633·0、200310108779·0、03111501.2，中國專利申請200610085443.0、200610085998.5、200610085741.X、200710170479.3,200710043520.0也公開了多種番荔枝內(nèi)酯類衍生物及其在治療癌癥中的應用。然而上述專利及專利申請多是采用過程復雜、使用大量催化劑和化學物質(zhì)的有機合成來制備番荔枝內(nèi)酯類衍生物的，其毒副作用會極大的干擾其作為藥物的使用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一在于提供能針對性治療前列腺癌以及恢復癌癥患者免疫功能的番荔枝內(nèi)酯衍生物，從而解決目前番荔枝內(nèi)酯衍生物類藥物無法進行針對性治療前列腺癌的缺點。本發(fā)明的目的之二在于提供一種制備番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備方法，從而避免單純的采用有機合成所帶來的毒副作用較大的缺陷，并且避免單純的采用原料提純多帶來的藥效較低、無法針對性治療某一特定癌癥的缺陷。本發(fā)明技術(shù)方案所提供的番荔枝內(nèi)酯衍生物，其分子結(jié)構(gòu)具有如下的通式其中，R1為-CGRRAGGSC或_0H，R2為-CGRRAGGSC或-0H，R3為C620的烷基。其中，m、η處為直鏈烷基，m=410，η=05。所述的禮、R2為R或S構(gòu)型。其中m、n處的直鏈烷基中，優(yōu)選m=7、n=3，即優(yōu)選的番荔枝內(nèi)酯衍生物的分子結(jié)構(gòu)具有如下的通式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，R1為-CGRRAGGSC或_0H，R2為-CGRRAGGSC或-0H，R3為C620的烷基。所述的禮、12為1或S構(gòu)型。進一步，R3優(yōu)選為C12的直鏈烷基，即優(yōu)選的番荔枝內(nèi)酯衍生物的分子結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，R1為-CGRRAGGSC，R2為-0H。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，R1為-0Η，R2為-CGRRAGGSC。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，R1為-CGRRAGGSC，R2為-CGRRAGGSC。本發(fā)明采用番荔枝科植物粗粉作為原料，進行提純、萃取等得到番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)，再和多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)進行進一步的酯化反應，得到產(chǎn)品。其具體制備方法如下步驟1在索氏提取器中加入150g番荔枝科植物粗粉、300500ml醇類物質(zhì)，回流1012小時，得到提取液，然后減壓回收溶劑至浸膏狀，得到提取物。所述醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇，優(yōu)選為無水乙醇(分析純)。步驟2將步驟1所得提取物加3050ml水，在6080°C加熱條件下溶解得到溶液，隨后進行步驟2.1、步驟2.2的萃取以及步驟2.3。步驟2.1采用一種或一種以上的極性溶劑，以體積比為10.811.5混合所得溶液和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到水層，合并該水層，并蒸去其中的殘留極性溶劑。所述極性溶劑為氯仿和/或丙酮，優(yōu)選為體積比為11.5的氯仿丙酮混合溶液(分析純)。步驟2.2采用一種或一種以上的極性溶劑，以體積比為10.811.5混合所得水層和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到有機層，合并該有機層。所述極性溶劑為石油醚或乙酸乙酯，優(yōu)選為60-90°C的乙酸乙酯(分析純)。步驟2.3以無水硫酸鈉將所得有機層脫水，減壓回收溶劑至干，得到殘留物。步驟3將步驟2.3所得殘留物溶于溫度為3040°C的溫熱醇類物質(zhì)，隨后濃縮，放置析晶，濾出析出的結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶。所述醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇，優(yōu)選為無水甲醇(分析純)。步驟4對步驟3所得的結(jié)晶，采用醇類物質(zhì)、水反復重結(jié)晶24次，得到番荔枝內(nèi)酉旨(Corossolone)。所述醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇，優(yōu)選為無水甲醇(分析純)。步驟5將步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)和多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)，以每817g番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)對應0.72.3g多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)和80150ml無水極性溶劑的比例混合，并在6080°C加熱條件下，攪拌冷凝回流8小時，隨后趁熱抽濾，分離出固體超強酸。所述極性溶劑為無水乙醇或無水甲醇，優(yōu)選為無水乙醇(分析純)。步驟6蒸餾步驟5所得固體超強酸，冷卻得到粉末狀晶體。經(jīng)高效液相色譜、LC-MS、NMR分析確認所得粉末狀晶體為含有多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物。本發(fā)明同時公開了前述本發(fā)明所公開的任一結(jié)構(gòu)的番荔枝內(nèi)酯衍生物在治療前列腺癌中的應用，以及在恢復癌癥患者的免疫功能中的應用。本發(fā)明所公開的前述任一結(jié)構(gòu)的番荔枝內(nèi)酯衍生物可以采用藥劑學上的常規(guī)藥物載體制成任何一種劑型，包括但不限于片劑、膠囊劑、軟膠劑、噴霧劑、凝膠劑、凝膠吸入齊U、口服劑、混懸劑、沖齊、貼齊、軟膏、丸齊、散齊、注射齊、輸液齊、凍干注射齊、脂質(zhì)體注射齊、靶向給藥注射劑、栓劑、緩釋制劑或控釋制劑。優(yōu)選為凍干粉針、水針等注射劑、直腸給藥的栓劑。圖1是本發(fā)明實施例七中所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物的分子結(jié)構(gòu)通式一。圖2是本發(fā)明實施例七中所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物的分子結(jié)構(gòu)通式二。圖3是本發(fā)明實施例八、實施例九和實施例十中所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物的分子結(jié)構(gòu)通式。具體實施例方式根據(jù)本發(fā)明的權(quán)利要求和
發(fā)明內(nèi)容所公開的內(nèi)容，本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下所述。實施例一番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備以下所制備過程中所采用的各化學試劑如無特別標注，則為分析純。采用番荔枝科植物粗粉作為原料，制備含有多肽IL-IlaBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物，具體制備方法如下步驟1在索氏提取器中加入150g番荔枝科植物粗粉、300500ml醇類物質(zhì)，回流1012小時，得到提取液，然后減壓回收溶劑至浸膏狀，得到提取物。所述醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇。步驟2將步驟1所得提取物加3050ml水，在6080°C加熱條件下溶解得到溶液，隨后進行步驟2.1、步驟2.2的萃取以及步驟2.3。步驟2.1:以體積比為10.811.5混合所得溶液和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到水層，合并該水層，并蒸去其中的殘留極性溶劑。所述極性溶劑為氯仿和/或丙酮。步驟2.2:以體積比為10.811.5混合所得水層和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到有機層，合并該有機層。所述極性溶劑為石油醚或60_90°C的乙酸乙酯。步驟2.3以無水硫酸鈉將所得有機層脫水，減壓回收溶劑至干，得到殘留物。步驟3將步驟2.3所得殘留物溶于溫度為3040°C的溫熱醇類物質(zhì)，隨后濃縮，放置析晶，濾出析出的結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶。所述醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇。步驟4對步驟3所得的結(jié)晶，采用醇類物質(zhì)、水反復重結(jié)晶24次，得到番荔枝內(nèi)酉旨(Corossolone)。所述醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇。步驟5將步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)和多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)，以每817g番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)對應0.72.3g多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)和80150ml無水極性溶劑的比例混合，并在6080°C加熱條件下，攪拌冷凝回流8小時，隨后趁熱抽濾，分離出固體超強酸。所述極性溶劑為無水乙醇或無水甲醇。步驟6蒸餾步驟5所得固體超強酸，冷卻得到粉末狀晶體。經(jīng)高效液相色譜、LC-MS、NMR分析確認所得粉末狀晶體為含有多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物。實施例二番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備采用以下技術(shù)參數(shù)改進實施例一的制備方法步驟1在索氏提取器中加入150g番荔枝科植物粗粉、300ml無水乙醇，回流12小時，得到提取液，然后減壓回收溶劑至浸膏狀，得到提取物。步驟2將步驟1所得提取物加30ml水，在80°C加熱條件下溶解得到溶液，隨后進行步驟2.1、步驟2.2的萃取以及步驟2.3。步驟2.1:以體積比為10.8混合所得溶液和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到水層，合并該水層，并蒸去其中的極性溶劑。所述極性溶劑為體積比為11.5的氯仿丙酮混合溶液。步驟2.2以體積比為10.8混合所得水層和60°C的乙酸乙酯，并進行14次萃取，分液得到有機層，合并該有機層。步驟2.3以無水硫酸鈉將所得有機層脫水，減壓回收溶劑至干，得到殘留物。步驟3將步驟2.3所得殘留物溶于溫度為30°C的溫熱無水甲醇，隨后濃縮，放置析晶，濾出析出的結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶。步驟4:對步驟3所得的結(jié)晶，采用無水甲醇、水反復重結(jié)晶2次，得到番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)。步驟5將步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)和多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)，以每8g番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)對應0.7g多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)和80ml無水乙醇的比例混合，并在60°C加熱條件下，攪拌冷凝回流8小時，隨后趁熱抽濾，分離出固體超強酸。步驟6蒸餾步驟5所得固體超強酸，冷卻得到粉末狀晶體。經(jīng)高效液相色譜、LC-MS、NMR分析確認所得粉末狀晶體為含有多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物。實施例三番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備采用以下技術(shù)參數(shù)改進實施例一的制備方法步驟1在索氏提取器中加入150g番荔枝科植物粗粉、350ml無水乙醇，回流11.5小時，得到提取液，然后減壓回收溶劑至浸膏狀，得到提取物。步驟2將步驟1所得提取物加35ml水，在75°C加熱條件下溶解得到溶液，隨后進行步驟2.1、步驟2.2的萃取以及步驟2.3。步驟2.1:以體積比為10.9混合所得溶液和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到水層，合并該水層，并蒸去其中的極性溶劑。所述極性溶劑為體積比為11.5的氯仿丙酮混合溶液。步驟2.2以體積比為10.9混合所得水層和70°C的乙酸乙酯，并進行14次萃取，分液得到有機層，合并該有機層。步驟2.3以無水硫酸鈉將所得有機層脫水，減壓回收溶劑至干，得到殘留物。步驟3將步驟2.3所得殘留物溶于溫度為30°C的溫熱無水甲醇，隨后濃縮，放置析晶，濾出析出的結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶。步驟4:對步驟3所得的結(jié)晶，采用無水甲醇、水反復重結(jié)晶2次，得到番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)。步驟5將步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)和多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)，以每IOg番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)對應0.71.Og多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)和IOOml無水乙醇的比例混合，并在65°C加熱條件下，攪拌冷凝回流8小時，隨后趁熱抽濾，分離出固體超強酸。步驟6蒸餾步驟5所得固體超強酸，冷卻得到粉末狀晶體。經(jīng)高效液相色譜、LC-MS、NMR分析確認所得粉末狀晶體為含有多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物。實施例四番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備(優(yōu)選實施例)采用以下技術(shù)參數(shù)改進實施例一的制備方法步驟1在索氏提取器中加入150g番荔枝科植物粗粉、400ml無水乙醇，回流11時，得到提取液，然后減壓回收溶劑至浸膏狀，得到提取物。步驟2將步驟1所得提取物加40ml水，在70°C加熱條件下溶解得到溶液，隨后進行步驟2.1、步驟2.2的萃取以及步驟2.3。步驟2.1:以體積比為11混合所得溶液和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到水層，合并該水層，并蒸去其中的極性溶劑。所述極性溶劑為體積比為11.5的氯仿丙酮混合溶液。步驟2.2:以體積比為11混合所得水層和75°C的乙酸乙酯，并進行14次萃取，分液得到有機層，合并該有機層。步驟2.3以無水硫酸鈉將所得有機層脫水，減壓回收溶劑至干，得到殘留物。步驟3將步驟2.3所得殘留物溶于溫度為35°C的溫熱無水甲醇，隨后濃縮，放置析晶，濾出析出的結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶。步驟4:對步驟3所得的結(jié)晶，采用無水甲醇、水反復重結(jié)晶3次，得到番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)。步驟5將步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)和多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC),以每12.5g番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)對應1.5g多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)和115ml無水乙醇的比例混合，并在70°C加熱條件下，攪拌冷凝回流8小時，隨后趁熱抽濾，分離出固體超強酸。步驟6蒸餾步驟5所得固體超強酸，冷卻得到粉末狀晶體。經(jīng)高效液相色譜、LC-MS、NMR分析確認所得粉末狀晶體為含有多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物。實施例五番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備采用以下技術(shù)參數(shù)改進實施例一的制備方法步驟1在索氏提取器中加入150g番荔枝科植物粗粉、450ml無水乙醇，回流10.5小時，得到提取液，然后減壓回收溶劑至浸膏狀，得到提取物。步驟2將步驟1所得提取物加45ml水，在65°C加熱條件下溶解得到溶液，隨后進行步驟2.1、步驟2.2的萃取以及步驟2.3。步驟2.1:以體積比為11.2混合所得溶液和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到水層，合并該水層，并蒸去其中的極性溶劑。所述極性溶劑為體積比為11.5的氯仿丙酮混合溶液。步驟2.2以體積比為1:1.2混合所得水層和80°C的乙酸乙酯，并進行14次萃取，分液得到有機層，合并該有機層。步驟2.3以無水硫酸鈉將所得有機層脫水，減壓回收溶劑至干，得到殘留物。步驟3將步驟2.3所得殘留物溶于溫度為40°C的溫熱無水甲醇，隨后濃縮，放置析晶，濾出析出的結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶。步驟4:對步驟3所得的結(jié)晶，采用無水甲醇、水反復重結(jié)晶4次，得到番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)。步驟5將步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)和多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)，以每15g番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)對應2.Og多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)和130ml無水乙醇的比例混合，并在75°C加熱條件下，攪拌冷凝回流8小時，隨后趁熱抽濾，分離出固體超強酸。步驟6蒸餾步驟5所得固體超強酸，冷卻得到粉末狀晶體。經(jīng)高效液相色譜、LC-MS、NMR分析確認所得粉末狀晶體為含有多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物。實施例六番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備采用以下技術(shù)參數(shù)改進實施例一的制備方法步驟1在索氏提取器中加入150g番荔枝科植物粗粉、500ml無水乙醇，回流10小時，得到提取液，然后減壓回收溶劑至浸膏狀，得到提取物。步驟2將步驟1所得提取物加50ml水，在60°C加熱條件下溶解得到溶液，隨后進行步驟2.1、步驟2.2的萃取以及步驟2.3。步驟2.1:以體積比為11.5混合所得溶液和極性溶劑，并進行14次萃取，分液得到水層，合并該水層，并蒸去其中的極性溶劑。所述極性溶劑為體積比為11.5的氯仿丙酮混合溶液。步驟2.2以體積比為1:1.5混合所得水層和90°C的乙酸乙酯，并進行14次萃取，分液得到有機層，合并該有機層。步驟2.3以無水硫酸鈉將所得有機層脫水，減壓回收溶劑至干，得到殘留物。步驟3將步驟2.3所得殘留物溶于溫度為40°C的溫熱無水甲醇，隨后濃縮，放置析晶，濾出析出的結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶。步驟4:對步驟3所得的結(jié)晶，采用無水甲醇、水反復重結(jié)晶4次，得到番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)。步驟5將步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)和多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)，以每17g番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)對應2.3g多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)和150ml無水乙醇的比例混合，并在80°C加熱條件下，攪拌冷凝回流8小時，隨后趁熱抽濾，分離出固體超強酸。步驟6蒸餾步驟5所得固體超強酸，冷卻得到粉末狀晶體。經(jīng)高效液相色譜、LC-MS、NMR分析確認所得粉末狀晶體為含有多肽IL-IlαBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物。實施例七采用優(yōu)選實施例四的制備方法制備的含有多肽IL-IlaBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物，其分子結(jié)構(gòu)的通式如下O其中，R1為-CGRRAGGSC或_0H，R2為-CGRRAGGSC或-0H，R3為C62(l的烷基。其中，m、η處為直鏈烷基，m=410，η=05。所述的禮、R2為R或S構(gòu)型。上述含有多肽IL-IlaBindingPeptideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物的主產(chǎn)物為具有如下分子結(jié)構(gòu)通式的物質(zhì)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中，R1為-CGRRAGGSC或_0H，R2為-CGRRAGGSC或-0H，R3為C620的烷基。所述的禮、12為1或S構(gòu)型。實施例八實施例七所述之含有多肽IL-IlaBindingP印tideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物的主產(chǎn)物的優(yōu)選藥物成分為具有如下分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中，R1為-CGRRAGGSC，R2為-OH。實施例九實施例七所述之含有多肽IL-IlaBindingP印tideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物的主產(chǎn)物的優(yōu)選藥物成分為具有如下分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中，R1為-0H，R2為-CGRRAGGSC。實施例十實施例七所述之含有多肽IL-IlaBindingP印tideII(CGRRAGGSC)的番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)衍生物的主產(chǎn)物的優(yōu)選藥物成分為具有如下分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)O其中，R1為-CGRRAGGSC，R2為-CGRRAGGSC。實施例十一番荔枝內(nèi)酯衍生物制劑的制備采用藥劑學上的常規(guī)藥物載體，并采用藥劑學上的常規(guī)制備方法，將采用優(yōu)選實施例四的制備方法制備的、具有實施例八、實施例九、實施例十的分子結(jié)構(gòu)的番荔枝內(nèi)酯衍生物中的一種或多種，制備成藥劑學上的常規(guī)劑型，包括但不限于片劑、膠囊劑、軟膠劑、噴霧劑、凝膠劑、凝膠吸入劑、口服劑、混懸劑、沖劑、貼劑、軟膏、丸劑、散劑、注射劑、輸液劑、凍干注射劑、脂質(zhì)體注射劑、靶向給藥注射劑、栓劑、緩釋制劑或控釋制劑。其中優(yōu)選制備劑型為凍干粉針、水針等注射劑、直腸給藥的栓劑。實施例十二番荔枝內(nèi)酯衍生物的應用根據(jù)實施例一至六中任意制備方法制備所得的番荔枝內(nèi)酯衍生物，用于癌癥的治療，特別具有在用于治療前列腺癌以及恢復癌癥患者的免疫功能中的應用。實施例十三番荔枝內(nèi)酯衍生物治療前列腺癌的動物模型試驗采用根據(jù)優(yōu)選實施例四的制備方法制備的、具有實施例八、實施例九、實施例十的分子結(jié)構(gòu)的番荔枝內(nèi)酯衍生物的混合物(以下簡稱GH-1)進行動物模型試驗，考察GH-I對激素非依賴型人前列腺癌細胞株P(guān)C-3裸鼠移植模型的抑瘤作用，包括對裸鼠移植瘤生長、瘤重、瘤細胞增殖周期及凋亡、血清PSA濃度以及前列腺指數(shù)的影響。1、對荷瘤鼠腫瘤的抑制作用激素非依賴型人前列腺癌細胞株P(guān)C-3傳代，消化生長良好的細胞配成5Χ106/ml,以0.2ml給BALB/c(nu/nu)裸鼠右腋窩皮下接種。待腫瘤直徑大于Icm時，無菌條件下剝離瘤塊，選生長良好的瘤組織切成直徑2mm的小塊，接種于BALB/cOm/nu)裸鼠右腋窩皮下，共接種30只裸鼠。接種次日按每組6只隨機分成5組并開始給藥，分組即荷瘤對照組、環(huán)磷酰胺(30mg/kg)、GH-I高劑量組(60mg/kg)、GH-I中劑量組(24mg/kg)、GH-I低劑量組(10mg/kg)。另設(shè)正常對照組，6只裸鼠。環(huán)磷酰胺腹腔注射，每周2次，連續(xù)6周[6]。GH-I灌胃給藥，正常和荷瘤對照組均灌胃給予等體積蒸餾水，每天1次，連續(xù)45天。待接種瘤塊2周后，開始用游標卡尺測量瘤體的長徑和短徑，按公式aXbX3.14/6計算瘤體積(a為長徑，b為短徑)，繪制生長曲線圖。末次給藥后0.5h，裸鼠眼眶采血，分離血清，放射免疫標記法檢測裸鼠血清前列腺特異性抗原(PSA)的濃度。脫頸處死裸鼠，完整剝離腫瘤，電子天平稱重，根據(jù)下列公式計算抑瘤率。摘取脾臟和前列腺，電子天平稱重，計算臟器指數(shù)(mg/10g)。結(jié)果見表1、表2、表3、表4。對照組平均瘤重-治療組平均瘤重抑瘤率(％)=-χ100%對照組平均瘤重2、對荷瘤鼠腫瘤細胞增殖周期及凋亡的影響將取出的瘤塊各取l_2mm3左右研磨制成細胞懸液，用PBS洗3次，70%，4%冷乙醇固定，PI染色，用流式細胞儀(FCM)分析細胞周期及各期分布情況及凋亡細胞所占的比例。結(jié)果見表5。3、統(tǒng)計方法數(shù)據(jù)用均值士標準差)表示，采用SPSS10.O統(tǒng)計軟件，方差分析進行統(tǒng)計分析。4、實驗結(jié)果表1對PC-3細胞裸鼠移植瘤生長的影響(±·，η=6)^劑量瘤體積(cm3)一_(mg/kg)接種2周接種3周接種4周接種5周接種6周荷瘤對照組0.2037±0.10130.4449±0.08090.7501±0.16641.1280±0.3337~1.7178±0.4678環(huán)磷酰胺3()0.0554±0.06420.1362±0.03520.0402±0.06260.0000±0.00000.0000±0.0000ΔΔΔΔΔΔΔΔΔΔGH-I高劑量組6。0.1664±0.03260.3161±0.12310.5103±0.17960.7550±0.37461.0678±0.4443▲▲▲AAA▲▲AAAGH-I中劑量組0.1504±0.03590.3588±0.06680.6188±0.23560.9580±0.40301.4235士0.590024▲▲▲▲▲▲▲GH-I低劑量組0.1684±0.03900.3524±0.08520.5658±0.20850.8856±0.38681.2179±0.5110_▲▲__▲▲__注*表示與正常對照組比較，P<0.05。#表示與正常對照組比較，P<0.01oΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.05。ΔΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.01?！硎九c環(huán)磷酰胺組比較，P<0.05?！硎九c環(huán)磷酰胺組比較，P<0.01。結(jié)果表明與荷瘤對照組比較，從接種2周至接種4周，環(huán)磷酰胺組瘤體積明顯減小，至接種5周時腫瘤已逐漸消失。GH-I高劑量組在接種4周和6周，瘤體積明顯減小。表2對PC-3裸鼠移植瘤瘤重及抑瘤率的影響(±、η=6)組別劑量(mg/kg)瘤重(g)抑瘤率(％)荷瘤對照組-2.0893±0.5924「環(huán)磷酰胺300.0000±0.0000100L0167」ΛΛΔΔGH-I髙劑量組601.4053±0.554332.74ΔΔΑΑGH-I中劑量組24_1.2331±0.459640.98_ΔΔΑΑGH-I低劑量組101.3052士0.36337.53_2ΔΔΑΑ_注*表示與正常對照組比較，P<0.05。#表示與正常對照組比較，P<0.01οΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.05。ΔΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.01。▲表示與環(huán)磷酰胺組比較，P<0.05?！硎九c環(huán)磷酰胺組比較，P<0.01。結(jié)果表明與荷瘤對照組比較，，GH-I各劑量組能明顯減小瘤重，說明其能顯著抑制激素非依賴型人前列腺癌細胞株P(guān)C-3裸鼠移植腫瘤的生長，但抑瘤率不如環(huán)磷酰胺強。環(huán)磷酰胺在接種次日開始用藥，有效地抑制了腫瘤的生長，抑瘤率達100%。表3對裸鼠血清PSA的影響([士s，η=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注*表示與正常對照組比較，P<0.05。#表示與正常對照組比較，P<0.01οΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.05。ΔΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.01?！硎九c環(huán)磷酰胺組比較，P<0.05。▲▲表示與環(huán)磷酰胺組比較，P<0.01。結(jié)果表明與正常對照組比較，荷瘤對照組PSA明顯升高。與荷瘤對照組比較GH-I中、低劑量組能使PSA明顯降低。PSA是前列腺特異性抗原，是前列腺癌的特異性標記物，其升高可較敏感的提示腫瘤的進展轉(zhuǎn)移等。說明GH-I通過降低PSA的濃度起到了對前列腺癌的生長抑制作用。表4對裸鼠前列腺指數(shù)的影響(5±、η=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>GH-I中劑量組2407.89土9.19**GH-I低劑量組_96_7.41士2.49"_注*表示與正常對照組比較，P<0.05。#表示與正常對照組比較，P<0.01οΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.05。ΔΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.01。▲表示與環(huán)磷酰胺組比較，P<0.05?！硎九c環(huán)磷酰胺組比較，P<0.01。結(jié)果表明與正常對照組比較，荷瘤對照組、環(huán)磷酰胺、GH-I各劑量組前列腺指數(shù)明顯減小。與環(huán)磷酰胺組比較，GH-I高劑量組前列腺指數(shù)明顯減小。表5對PC-3裸鼠移植瘤細胞周期及凋亡的影響(5±、η=6)iiij劑量細胞周期一~~Apoptosis~(mg/kG0-G1(oZo)G2-M(%)S(%)(%)_g)_荷瘤對照組-45.68士9.6326.33±13.5328.00士13.2216.13土6.14GH-I高劑量組6034.00士9.00*50.90±11.19**15.10士4.73*15.27士4.04GH-I中劑量組2430.90士5.43*54.35士10.06**14.76士7.20*16.92士5.19GH-I低劑量組1035.32土12.1948.78土15.50**15.90士6.63*18.36土5.95注*表示與正常對照組比較，P<0.05。#表示與正常對照組比較，P<0.01oΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.05。ΔΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.01?！硎九c環(huán)磷酰胺組比較，P<0.05。▲▲表示與環(huán)磷酰胺組比較，P<0.01。結(jié)果表明與荷瘤對照組比較，GH-I各劑量組能使G2-M期增加而使GO-Gl期及S期細胞明顯減少。對細胞凋亡無明顯影響。說明GH-I對細胞周期的影響是其抑制前列腺癌生長的作用機制之一。5、結(jié)論GH-I高劑量組在腫瘤接種4周后能使瘤體積明顯減小，GH-I各劑量組能明顯減小瘤重，說明其能顯著抑制激素非依賴型人前列腺癌細胞株P(guān)C-3裸鼠移植腫瘤的生長，其抑瘤作用在給藥4周后逐漸起效。GH-I的抑瘤率低于環(huán)磷酰胺。環(huán)磷酰胺在接種次日開始用藥，有效地抑制了腫瘤的生長，抑瘤率達100%。GH-I能抑制前列腺癌的生長，其機制是通過降低PSA的濃度以及對細胞周期的影響而起到抑瘤作用。實施例十四番荔枝內(nèi)酯衍生物對免疫功能影響的動物模型試驗采用根據(jù)優(yōu)選實施例四的制備方法制備的、具有實施例八、實施例九、實施例十的分子結(jié)構(gòu)的番荔枝內(nèi)酯衍生物的混合物(以下簡稱GH-1)進行動物模型試驗，考察GH-I對S180荷瘤小鼠細胞免疫功能的影響。1、實驗材料1.1藥品與試劑GH_1(GH-I)制劑。貞芪扶正膠囊，甘肅扶正藥業(yè)科技股份有限公司，批號:060303o1.2儀器AR-1140/c電子分析天平，奧豪斯國際貿(mào)易(上海)有限公司。1.3動物昆明種小鼠，雄性，1822g，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供。清潔級，實驗動物生產(chǎn)許可證SCXK(滬)2003-0003，實驗動物使用許可證SYXK(滬)2004-0005。飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心清潔級實驗室，環(huán)境溫度20-25°C。1.4瘤株肉瘤180實體型(S180)，移自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，本室傳代。2、實驗方法取腹腔接種S180瘤株8d的荷瘤小鼠，無菌操作下抽取腹腔瘤液，以滅菌生理鹽水稀釋成瘤細胞懸液(鏡檢含瘤細胞數(shù)1X107個/ml)，用此瘤細胞懸液于昆明種小鼠右前肢腋窩皮下注射0.2ml進行腫瘤接種，共接種50只小鼠。接種次日隨機分成5組并開始給藥，即荷瘤對照組、貞芪扶正膠囊組(6(^制劑/1^)、6!1-1高劑量組(60mg/kg)、GH-l中劑量組(24mg/kg)、GH-1低劑量組(10mg/kg)。另設(shè)正常對照組，10只小鼠。各組灌胃給予受試藥物或蒸餾水，連續(xù)10d。給藥第5d，以8%Na2S溶液在小鼠腹部進行脫毛處理，次日用2，4-二硝基氟苯(DNFB)(用11丙酮麻油配制)25μ1涂于脫毛處的皮膚致敏，24h后同法加強1次。致敏第4d后用相同濃度的DNFB20y1均勻涂抹于左耳進行攻擊，第2d處死小鼠，剪下左右耳，用打孔器在雙耳相應部位打耳片，稱重，根據(jù)公式腫脹度(g)=左耳重-右耳重，腫脹率(％)=[(治療組腫脹度/荷瘤對照組腫脹度)_1]X100%，計算腫脹度和腫脹率。摘取脾臟和胸腺，稱取其重量，計算臟器指數(shù)。結(jié)果見表6、表7。統(tǒng)計方法數(shù)據(jù)用均值士標準差)表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，方差分析進行統(tǒng)計分析。3、實驗結(jié)果表6對S180荷瘤小鼠遲發(fā)型超敏反應小鼠耳腫脹的影響(±、η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>貞芪扶正膠囊6000.0263±0.0022*Δ18.17GH-I高劑量組600.0264±0.0029Δ18.66GH-I中劑量組240.0293土0.0030ΔΔΑ31.83GH-I低劑量組_Ι_0.0272±0.0034ΔΔ_22.12_注*表示與正常對照組比較，P<0.05。#表示與正常對照組比較，P<0.01οΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.05。ΔΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.01?！硎九c貞芪扶正膠囊組比較，P<0.05。▲▲表示貞芪扶正膠囊組與比較，P<0.01。結(jié)果表明與正常對照組比較，荷瘤小鼠的耳腫脹度明顯減小，說明遲發(fā)型超敏反應下降。與荷瘤對照組比較，GH-I高、中、低各劑量組均能使耳腫脹度明顯增加，增強下降的遲發(fā)型超敏反應，說明GH-I可恢復荷瘤小鼠低下的細胞免疫功能。表20對S180荷瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響(x±s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注*表示與正常對照組比較，P<0.05。#表示與正常對照組比較，P<0.01oΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.05。ΔΔ表示與荷瘤對照組比較，P<0.01?！硎九c貞芪扶正膠囊組比較，P<0.05?！硎矩戃畏稣z囊組與比較，P<0.01。結(jié)果表明與正常對照組比較，荷瘤對照組及各給藥組的脾臟指數(shù)明顯增加，胸腺指數(shù)無明顯差異。4、結(jié)論與正常對照組比較，荷瘤小鼠的耳腫脹度明顯減小，說明遲發(fā)型超敏反應下降。與荷瘤對照組比較，GH-I高、中、低各劑量組均能使耳腫脹度明顯增加，增強下降的遲發(fā)型超敏反應，說明GH-I可恢復荷瘤小鼠低下的細胞免疫功能。實施例十三及十四中所采用的檢測方法及含量數(shù)據(jù)如下1、儀器儀器為安捷倫1200系列液相色譜儀，包括4元泵，DAD檢測器、自動進樣器、在線脫氣機，安捷倫化學工作站。甲醇為MERCK(HPLCGRADE)，水為雙重石英蒸餾水，其它試劑為分析純，標準對照品GH-I自制，經(jīng)中科院上海有機所鑒定2、最佳色譜條件色潛柱為XDBC-18-0DS(4.6mmX150mm)，帶前置保護柱，流動相為甲醇h水為9010;流速l.OMI/min;檢測波長210nm:室溫。在上述色譜條件下，標準對照品及樣品各峰均能達到基線分離.峰形良好。3、線性關(guān)系GH-I標準品溶液配制20μg/mL，40μg/mL60μg/mL，80μg/mL，100μg/mL，分別進樣5次測定，以不同濃度為縱坐標X，峰面積為橫坐標y，繪制標準曲線。其回歸方程為:y=5065.0465x_6902.702，r=0.9998。結(jié)果表明，對照品濃度在試驗范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。4、樣品測定共測定了5批樣品。每個樣品測定2次，取均值，樣品中各峰均達到基線分離。峰形良好，GH-I的平均含量分別為99.92%。上述內(nèi)容為本發(fā)明的具體實施例的例舉，對于其中未詳盡描述的試劑、設(shè)備、操作方法等，應當理解為采取本領(lǐng)域已有的普通及常規(guī)試劑、設(shè)備、操作方法等來予以實施。同時本發(fā)明上述實施例僅為說明本發(fā)明技術(shù)方案之用，僅為本發(fā)明技術(shù)方案的列舉，并不用于限制本發(fā)明的技術(shù)方案及其保護范圍。采用等同技術(shù)手段、等同試劑等對本發(fā)明權(quán)利要求書及說明書所公開的技術(shù)方案的改進應當認為是沒有超出本發(fā)明權(quán)利要求書及說明書所公開的范圍。權(quán)利要求一種番荔枝內(nèi)酯衍生物，其特征在于，是一種具有手性的長碳鏈活性化合物，包含1個反式四氫呋喃環(huán)、1個羰基、1個丁-內(nèi)酯環(huán)、IL-11α配體CGRRAGGSC和/或羥基，其分子結(jié)構(gòu)的通式如下其中，R1為-CGRRAGGSC或-OH，R2為-CGRRAGGSC或-OH，R3為C6～20的烷基；其中，m、n處為直鏈烷基，m＝4～10，n＝0～5；所述的R1、R2為R或S構(gòu)型。F2009100466284C0000011.tif2.如權(quán)利要求1所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物，其特征在于，分子結(jié)構(gòu)的通式進一步如下O<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，R1為-CGRRAGGSC或-0H，R2為-CGRRAGGSC或-0H，R3為C6^2tl的烷基；所述的RpR2SR或S構(gòu)型。3.如權(quán)利要求1所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物，其特征在于，分子結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，R1為-CGRRAGGSC，R2為-OH。4.如權(quán)利要求1所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物，其特征在于，分子結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，R1為-OH，R2為-CGRRAGGSC。5.如權(quán)利要求1所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物，其特征在于，分子結(jié)構(gòu)如下0其中，R1為-CGRRAGGSC，R2為-CGRRAGGSC。6.一種如權(quán)利要求25所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備方法，其特征在于，包含以下步驟步驟1在索氏提取器中加入番荔枝科植物粗粉、醇類物質(zhì)，回流，得到醇類物質(zhì)提取液，然后減壓回收溶劑至浸膏狀，得到提取物；步驟2將步驟1所得提取物加水加熱溶解得到溶液，隨后進行步驟2.1、步驟2.2的萃取以及步驟2.3；步驟2.1采用一種或一種以上的極性溶劑萃取所得溶液數(shù)次，分液得到水層，合并該極性溶劑萃取過的水層，并蒸去其中的殘留極性溶劑；步驟2.2采用一種或一種以上的極性溶劑萃取所得水層數(shù)次，分液得到有機層，合并有機層；步驟2.3以無水硫酸鈉將所得有機層脫水，減壓回收溶劑至干，得到殘留物；步驟3將步驟2.3所得殘留物溶于溫熱醇類物質(zhì)，隨后濃縮，放置析晶，濾出析出的結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶；步驟4:對步驟3所得的結(jié)晶，采用醇類物質(zhì)、水反復重結(jié)晶，得到番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)；步驟5將步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)、多肽IL-IlaBindingPeptideII(CGRRAGGSC)在無水極性溶劑中混合，在加熱條件下，攪拌冷凝回流，隨后趁熱抽濾，分離出固體超強酸；步驟6蒸餾步驟5所得固體超強酸，冷卻得到粉末狀晶體。7.如權(quán)利要求6所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備方法，其特征在于，所述步驟1中的醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇，優(yōu)選為無水乙醇；所述步驟3中的醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇，優(yōu)選為無水甲醇；所述步驟4中的醇類物質(zhì)為無水乙醇或無水甲醇，優(yōu)選為無水甲醇；所述步驟1中，以每150g番荔枝科植物粗粉對應300500ml乙醇的比例在索氏提取器進行回流，回流時間為1012小時；所述步驟3中，采用3040°C的甲醇溶解所述殘留物；所述步驟4中，采用甲醇和水對所得晶體重復結(jié)晶24次。8.如權(quán)利要求6所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備方法，其特征在于，所述步驟2.1中的極性溶劑為氯仿和/或丙酮，優(yōu)選為體積比為11.5的氯仿丙酮混合溶液；所述步驟2.2中的極性溶劑為石油醚或乙酸乙酯，優(yōu)選為60-90°C的乙酸乙酯；所述步驟2中，以3050ml水在6080°C加熱條件下溶解步驟1所得提取物；所述步驟2.1中，以體積比為10.811.5來混合所得溶液和氯仿并進行14次萃取；所述步驟2.2中，以體積比為10.811.5來混合所得水層和乙酸乙酯并進行14次萃取。9.如權(quán)利要求6所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物的制備方法，其特征在于，所述步驟5中的無水極性溶劑為無水乙醇或無水甲醇，優(yōu)選為無水乙醇；所述步驟5中，以每817g步驟4所得番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)對應0.72.3g多肽IL-IlaBindingPeptideII(CGRRAGGSC)和80150ml無水乙醇的比例混合，并在6080°C加熱條件下，攪拌冷凝回流8小時。10.如權(quán)利要求25所述的番荔枝內(nèi)酯衍生物在治療前列腺癌以及恢復癌癥患者的免疫功能中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了番荔枝內(nèi)酯衍生物、制備方法及其用途。所述番荔枝內(nèi)酯衍生物以番荔枝內(nèi)酯為主體，進一步包含1個反式四氫呋喃環(huán)、1個羰基、1個丁-內(nèi)酯環(huán)、IL-11α配體CGRRAGGSC和/或羥基。本發(fā)明采用番荔枝科植物粗粉作為原料，進行提純、萃取等得到番荔枝內(nèi)酯(Corossolone)，再和多肽IL-11αBindingPeptideII(CGRRAGGSC)進行進一步的酯化反應，得到所述番荔枝內(nèi)酯衍生物。本發(fā)明所公開的番荔枝內(nèi)酯衍生物具有較高的抗癌活性，針對性地治療前列腺癌以及恢復癌癥患者的免疫功能。文檔編號A61K38/10GK101812040SQ200910046628公開日2010年8月25日申請日期2009年2月25日優(yōu)先權(quán)日2009年2月25日發(fā)明者李云森,檀愛民,程萍,陳子珺,雷啟福申請人:上海金昊藥業(yè)開發(fā)有限公司