專利名稱：：一種白細胞介素-2脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：木發(fā)明屬于藥物制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是白細胞介素-2脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
：白細胞介素-2(IL-2)是一種強效免疫刺激劑，具有廣譜免疫增強作用，在臨床上應(yīng)用廣泛，用于腎癌、黑色素癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、惡性淋巴瘤以及病毒感染、免疫缺陷病及自身免疫病的治療，具有確切良好的療效。但普通IL-2注射劑副作用較大，可引起發(fā)熱、嘔吐等一般癥狀，還可導(dǎo)致水鹽代謝紊亂和腎、肝、心、肺等功能異常；最常見、最嚴重的是毛細血管滲漏綜合征，使患者不得肝、心、肺等功能異常；最常見、最嚴重的是毛細血管滲漏綜合征，使患者不得不中止治療。同時，IL-2在體內(nèi)半衰期短、不穩(wěn)定也限制了其臨床應(yīng)用。脂質(zhì)體具有類細胞結(jié)構(gòu)，由磷脂膽固醇等為膜材包合而成，是適合于生物體內(nèi)降解、對人體無毒、無免疫原性的靶向藥物載體。脂質(zhì)體具有靶向性、低毒、高效的特點，脂質(zhì)體包裹藥物為物理過程，不改變藥物結(jié)構(gòu)，包裹藥物后，可以對被包裹藥物形成有效的保護，提高生物利用度，由于脂質(zhì)體能夠有效地將生物活性分子引進各種細胞以調(diào)節(jié)其生物合成、代謝，已成為當今生物醫(yī)學工程領(lǐng)域內(nèi)的高新技術(shù)之一，廣泛應(yīng)用于基因重組技術(shù)、藥物運載系統(tǒng)、藥劑改革及靶向性藥物等方面的研究。研究證明，IL-2脂質(zhì)體能夠顯著延長IL-2半衰期，具有比游離IL-2更優(yōu)越的抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)效能，并顯著降低IL-2的毒性反應(yīng)，更有效地活化巨噬細胞等免疫活性細胞，釋放趨化因子，促進激活的T細胞朝腫瘤部位遷移。脂質(zhì)體技術(shù)能顯著降低IL-2毒性，增強其療效。IL-2脂質(zhì)體使用劑量小，治療指數(shù)高，突破了傳統(tǒng)IL-2制劑在臨床使用的瓶頸，為臨床的安全、合理用藥提供了良好的空間，具備極大的市場潛力，必將產(chǎn)生良好的經(jīng)濟和社會效益，經(jīng)檢索，現(xiàn)有技術(shù)中，有關(guān)于制備IL-2前體脂質(zhì)體的專利，專利號為200410067266.4，但是該專利技術(shù)存在一些缺陷，如使用的輔料較多，導(dǎo)致工藝復(fù)雜化，而且其工藝中存在加熱熔融過程，易引起磷脂氧化，產(chǎn)生甘油磷酸復(fù)合物及脂肪酸等對人體有毒物質(zhì)；同時，該專利方法獲得的白細胞介素-2脂質(zhì)體粒徑僅在900nm，體內(nèi)循環(huán)時間相對較短。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提高IL-2的活性回收率和包封率，減小IL-2脂質(zhì)體的粒徑，提高IL-2脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。本發(fā)明的目的是提供一種IL-2脂質(zhì)體。本發(fā)明采取的技術(shù)方案是，IL-2及其制劑輔料按重量百分比計為白細胞介素-20.005—0.2%磷脂類載體15—40%膽固醇類載體2—10%凍干保護劑25—80%抗氧劑0.5—2%其中，磷脂類載體是大豆卵磷脂、神經(jīng)鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰甘油磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酰膽堿中的一種或兩種以上；膽固醇類載體可以是膽固醇、麥角甾醇的一種或一種以上；凍干保護劑是海藻糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖的一種或兩種以上；抗氧劑是維生素E、硫脲、硫代甘油中的一種或兩種以上。優(yōu)選地，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是，IL-2及其制劑輔料按重量百分比計為白細胞介素-2大豆卵磷脂膽固醇海藻糖維生素E0.05%26.00%6.00%66.60%1.35%本發(fā)明的另一個目的是提供IL-2脂質(zhì)體的制備方法，該方法為取IL-2溶于適量磷酸鹽緩沖液中，加入膽固醇、磷脂、抗氧劑，混勻；加入海藻糖、磷酸緩沖液，攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力，冷凍干燥即可。上述方法中，磷酸鹽緩沖液的PH為6.5-7.0，用量為處方量的10-30倍；均質(zhì)機控制壓力在5000-15000psi，循環(huán)1—2次；冷凍干燥條件為-2(TC預(yù)凍，-52t:冷凍干燥。上述方法中，磷酸鹽緩沖液的用量為處方量的20倍；均質(zhì)機控制壓力在7000-10000psi。分析檢測方法活性檢測方法CTLL-2細胞/MTT比色法(《中國藥典》三版附錄XD)粒徑檢觀(J:配制濃度約3mg/ml，馬爾文HPPS5001測試脂質(zhì)體分離方法選用葡聚糖凝膠G50裝柱(1.5X40cm)分離。包封率(％)=包封藥物的活性/總的藥物活性乂100%活性回收率(％)=制劑實測活性/制劑理論活性乂100%本發(fā)明的優(yōu)點提高了IL-2的活性回收率和包封率。制劑活性回收率達到95.2—100.5%,包封率達到93.5—97.2%;本發(fā)明處方、工藝簡單易行，沒有加熱環(huán)節(jié)，最大程度降低磷脂氧化，所制備的前體脂質(zhì)體吸濕性小，有利于IL-2的穩(wěn)定性?？刂艻L-2脂質(zhì)體平均粒徑在303—365nm，延長體內(nèi)循環(huán)時間。本發(fā)明使用高壓均質(zhì)法獲取粒徑較小、分布范圍較窄的IL-2脂質(zhì)體，其有利于在人體內(nèi)延長循環(huán)時間。具體實施方式實施例lIL-2大豆卵磷脂膽固醇海藻糖維生素E0.11%(l.OX雨IU)31.21%(2.500g)4.68%(0.375g)62.43%(5細g)1.56%C0.125g)制備工藝取1.0X108IUIL-2溶于50ml(PH為7.0)的磷酸鹽緩沖液中，按上述量加入膽固醇、磷脂、維生素E，混勻；加入海藻糖、100ml磷酸緩沖液，攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力在5000-7000psi，循環(huán)2次，-20"預(yù)凍，-52"冷凍干燥即可。檢測結(jié)果活性回收率95.2%，包封率93.5%，平均粒徑330.3nm實施例2IL-20.05%(5.6X畫U)大豆卵磷脂26.00%(2.600g)膽固醇6.00%(0'600g)海藻糖66.60%(6'660g)維生素E1.35%(0.135g)制備工藝取5.6X107IUIL-2溶于60ml(PH為7.0)的磷酸鹽緩沖液中，按上述量加入膽固醇、磷脂、維生素E，混勻；加入海藻糖、140ml磷酸緩沖液，攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力在7000-10000psi，-20°C預(yù)凍，-52°(:冷凍干燥即可。檢測結(jié)果活性回收率100.5%,包封率97.2%，平均粒徑303.7nm實施例3白細胞介素-20.005%(1.68X106IU)二硬脂酰磷脂酰膽堿40.0%(1.20g)麥角甾醇2.0%(0.06g)蔗糖57.495%(1.725g)硫代甘油0.5%(0.015g)制備工藝取1.68X106IUIL-2溶于20ml(PH為6.8)的磷酸鹽緩沖液中，按上述量加入膽固醇、大豆卵磷脂、硫代甘油，混勻；加入海藻糖、60ml磷酸緩沖液，攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力在10000-15000psi，-20'C預(yù)凍，-52°。冷凍干燥即可。檢測結(jié)果活性回收率95.5%，包封率94.5%，平均粒徑310.3nm實施例4白細胞介素-20.2%(1.78X108IU)二棕櫚酰磷脂酰膽堿30.0%(2.400g)膽固醇5.0%(0.400g)麥芽糖63.8%(5.104g)硫脲1.0%(0.080g)制備工藝取1.78X108IUIL-2溶于40ml(PH為6.5)的磷酸鹽緩沖液中，按上述量加入膽固醇、大豆卵磷脂、硫脲，混勻；加入麥芽糖、160ml磷酸緩沖液，攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力在9000-11000psi，-20'C預(yù)凍，-52匸冷凍干燥即可。檢測結(jié)果活性回收率96.3%，包封率96.1%，平均粒徑320.7nm實施例5白細胞介素-20.10%(1.12X108IU)二棕櫚酰磷脂酰膽堿8.0%(0.80g)大豆卵磷脂20.0%(2.00g)膽固醇6.0%(0.60g)海藻糖63.9%(6.39g)維生素E2.0%(0.20g0制備工藝取U2X108IUIUIL-2溶于40ml(PH為7.0)的磷酸鹽緩沖液中，按上述量加入膽固醇、大豆卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、維生素E，混勻；加入海藻、160ml磷酸緩沖液，攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力在7000-10000psi，-20°(:預(yù)凍，-52。C冷凍干燥即可。檢測結(jié)果活性回收率98.2%，包封率94.7%，平均粒徑310.8nm實施例6白細胞介素-20.05%(5.6X107IU)大豆卵磷脂26.00%(2.600g)膽固醇6.00%(0.600g)乳糖40.0%(4.000g)海藻糖26.60%(2.660g)維生素E1.35%(0.135g)制備工藝取5.6X107IUIL-2溶于50ml(PH為7.0)的磷酸鹽緩沖液中，按上述量加入膽固醇、大豆卵磷脂、維生素E，混勻；加入海藻、乳糖、250ml磷酸緩沖液，攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力在5000-7000psi，循環(huán)2次，-20°(:預(yù)凍，-52°(3冷凍干燥即可。檢測結(jié)果活性回收率98.2%，包封率95.1%，平均粒徑343.1nm穩(wěn)定性考察結(jié)果貯存條件6土2。C7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求1、一種白細胞介素-2脂質(zhì)體，其特征是白細胞介素-2及其制劑輔料按重量百分比計為白細胞介素-20.005—0.2％磷脂類載體15—40％膽固醇類載體2—10％凍干保護劑25—80％抗氧劑0.5—2％其中，磷脂類載體是大豆卵磷脂、神經(jīng)鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰甘油磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酰膽堿中的一種或兩種以上；凍干保護劑是海藻糖；抗氧劑是維生素E、硫脲、硫代甘油中的一種或兩種以上。2、如權(quán)利要求1所述的一種白細胞介素-2脂質(zhì)體，其特征是白細胞介素-2及其制劑輔料按重量百分比計為白細胞介素-20.05%大豆卵磷脂26.00%膽固醇6.00%海藻糖66.65%維生素E1.35%。3、如權(quán)利要求1或2所述一種白細胞介素-2脂質(zhì)體的制備方法，其特征是取IL-2溶于適量磷酸鹽緩沖液中，加入膽固醇、磷脂、抗氧劑，混勻；加入海藻糖、磷酸緩沖液，攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力，冷凍干燥即可。4、如權(quán)利要求3所述方法，其特征是磷酸鹽緩沖液的PH為6.5-7.0，用量為IL-2和其他制劑輔料的10-30倍；均質(zhì)機控制壓力在5000-15000psi，循環(huán)2次；冷凍干燥條件為-2(TC預(yù)凍，-52°。冷凍干燥2011。5、如權(quán)利要求4所述方法，其特征是磷酸鹽緩沖液的用量為IL-2和其他制劑輔料的20倍；均質(zhì)機控制壓力在7000-10000psi。全文摘要本發(fā)明屬于藥物制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是提供了一種白細胞介素-2脂質(zhì)體及其制備方法?，F(xiàn)有技術(shù)表明白細胞介素-2(IL-2)脂質(zhì)體劑型存在使用輔料多，工藝復(fù)雜等問題。本發(fā)明技術(shù)方案為IL-2及其制劑輔料按重量百分比計為白細胞介素-20.005-0.2％、磷脂類載體15-40％、膽固醇類載體2-10％、凍干保護劑25-80％、抗氧劑0.5-2％。其制備方法，其特征是取IL-2溶于適量磷酸鹽緩沖液中，加入膽固醇、磷脂、抗氧劑、混勻；加入海藻糖、磷酸緩沖液、攪拌混合均勻；轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機儲料罐，啟動均質(zhì)機，控制壓力，冷凍干燥即可。本發(fā)明所得IL-2脂質(zhì)體具有包封率、回收率高，粒徑小，穩(wěn)定性好的優(yōu)點。文檔編號A61K47/36GK101507709SQ20091004813公開日2009年8月19日申請日期2009年3月24日優(yōu)先權(quán)日2009年3月24日發(fā)明者玄振玉,王小虎,陳葉明,韓慶惠申請人:蘇州玉森新藥開發(fā)有限公司