專利名稱：：西沙海綿中一種環(huán)肽類(lèi)化合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是產(chǎn)自西沙群島附近海域的海洋動(dòng)物棕色扁海綿尸/2"fe//^/^Cfl中的一種具有抗腫瘤活性的新的環(huán)肽類(lèi)化合物。
背景技術(shù)：
：海綿是一種低等的多細(xì)胞動(dòng)物，其分布廣泛但常含有很多結(jié)構(gòu)罕見(jiàn)的具有抗癌活性的次生代謝產(chǎn)物，因此一直是海洋天然產(chǎn)物化學(xué)家首選海洋生物研究對(duì)象。本發(fā)明的藥源材料戶/wfe//^/MC"海綿屬尋常綱(Demospongiae)軟海綿目(Halichondrida)小軸海綿科(Axinellidae)海綿。2002年，曾從我國(guó)南海西沙永興島上采集的戶/w""海綿中發(fā)現(xiàn)了1個(gè)新的環(huán)肽phakelliastatin12并已申請(qǐng)專利(申請(qǐng)?zhí)?1113389.9)。之前的所有Phakellistatins類(lèi)環(huán)肽化合物均是由美國(guó)亞利桑那州立大學(xué)Pettit小組從屬海綿中發(fā)現(xiàn)的，但至今未見(jiàn)有關(guān)具有抗腫瘤活性的新的環(huán)肽類(lèi)化合物的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種從中國(guó)西沙群島附近海域的棕色扁海綿中分離到一種新的環(huán)肽類(lèi)化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下本發(fā)明化合物的制備方法如下1.提取，制備總提物將干燥的棕色扁海綿(戶/wM)粉碎后，按常規(guī)用95%乙醇冷浸提取，得提取液，將提取液濃縮得浸膏，加入50%的乙酸乙酯水溶液進(jìn)行提取，得乙酸乙酯總提物；2.分離純化1)制備粗提物:將乙酸乙酯總提物用90%甲醇混懸，按常規(guī)經(jīng)石油醚脫脂后，加水將混懸液的甲醇濃度調(diào)至60%，用二氯甲烷萃取，濃縮萃取液，得粗提物；2)分離純化環(huán)肽類(lèi)化合物將上述粗提物過(guò)SephadexLH-20凝膠柱，用CH2Cl2-MeOH:l:l洗脫，根據(jù)薄層層析檢識(shí)的結(jié)果，收集含有環(huán)肽類(lèi)化合物的洗脫液部分，再進(jìn)行反相硅膠柱色譜，以體積比為l:1-1:0的甲醇/水混合溶劑梯度洗脫，再以反相高效液相(58%甲醇/水，流速1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm)得到本發(fā)明化合物C44H56Ns09。體外活性試驗(yàn)證明，本發(fā)明化合物對(duì)P388、BEL-7402、SPC-A-1、HAC和Colo-26等多種不同的腫瘤細(xì)胞均有一定的抑制活性。因此可用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明化合物制備方法簡(jiǎn)單，抗腫瘤活性顯著。本發(fā)明為研究和開(kāi)發(fā)新的抗腫瘤藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，為開(kāi)發(fā)利用我國(guó)海洋藥用資源提供了科學(xué)依據(jù)。具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。實(shí)施例1.制備本發(fā)明化合物取干燥粉碎后的棕色扁海綿15kg，分別用95%乙醇50L冷浸提取8次，每次一周，合并提取液，提取液經(jīng)減壓濃縮得浸膏，用50%乙酸乙酯水溶液進(jìn)行提取，得乙酸乙酯總提物，將乙酸乙酯總提物用卯％甲醇混懸，用石油醚脫脂后，加水將混懸液的甲醇濃度調(diào)至60%，用二氯甲垸萃取3次，濃縮萃取液，得粗提物55g;將上述粗提物55g過(guò)SephadexLH-20凝膠柱，用CH2Cl2-MeOH=1:1洗脫，根據(jù)薄層層析檢識(shí)結(jié)果，收集含有環(huán)肽類(lèi)化合物的洗脫液，再進(jìn)行反相硅膠柱色譜，以體積比為l:1-1:0的甲醇/水混合溶劑梯度洗脫，再以反相高效液相(58%甲醇/水，流速1.5ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm)制備得到化合物C44H56N809。化合物C44H56N80的理化性質(zhì)和核磁共振譜數(shù)據(jù)如下化合物C44H56N809:白色玻璃狀粉末，ESI-MS中顯示有[M+Na]+峰863.30、[2M+Na]+峰1703.63，確定其分子量為840。核磁共振譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表。核磁共振譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表l。表l化合物C44H56N809的核磁共振譜數(shù)據(jù)(DMSO-d6，600MHz/150MHz)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</tabl29.79a:2.37(m)7-CH118.57.43(d,7.5)b:J.96(m)8-CH119.487.03(t,7.5)4-CH225.42a:2.00(m)9-CH122.197.14(t,7.5)b:1.79(m)10-CH111.697.37(d，8.0)5-CH246.75a:3.73(m)11-C136.58b:3.49(m)麗7,09(br.s)體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)使用的腫瘤細(xì)胞株為上海天甲公司提供的P388(小鼠白血病)、BEL-7402(人肝癌)、SPC-A-1(人肺癌)、HAC(小鼠肝癌腹水瘤)、Colo-26(小鼠結(jié)腸癌)。實(shí)驗(yàn)方法采用常規(guī)的四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法，臺(tái)盼蘭染色法。實(shí)驗(yàn)分3組空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和本發(fā)明化合物組。陽(yáng)性對(duì)照藥為長(zhǎng)春新堿。將本發(fā)明化合物和陽(yáng)性對(duì)照藥分別用DMSO溶解，配成IOO，50，25,12.5，6.25，3.125(微克/毫升)6種濃度，細(xì)胞先按常規(guī)以10%的小牛血清培養(yǎng)，傳代時(shí)貼壁細(xì)胞以0.2%的胰酶消化液消化，使細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，實(shí)驗(yàn)時(shí)細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，每孔接種180微升，濃度為5><104個(gè)/毫升的細(xì)胞懸液。置37匸的C02培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)過(guò)夜后，每孔加20微升藥物溶液，空白對(duì)照組加20微升DMSO，每種濃度重復(fù)5孔。藥物作用于細(xì)胞3天后進(jìn)行MTT法測(cè)定，于96孔培養(yǎng)板每孔加入濃度為5毫克/毫升的MTT工作液10微升，37。C孵育4小時(shí)，棄上清液，加100微升DMSO，在570納米波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值。臺(tái)盼蘭排染法，加入臺(tái)盼蘭工作液，計(jì)數(shù)活細(xì)胞。按下列公式計(jì)算被測(cè)物對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率-空白對(duì)照組細(xì)胞數(shù)一用藥組細(xì)胞數(shù)~~空白對(duì)照組細(xì)胞數(shù)~~xl00%半數(shù)有效抑制濃度IQo值采用Logit法計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2:表2化合物C44H56N809對(duì)腫瘤細(xì)胞的半數(shù)有效抑制濃度(嗎/ml)ic50P388BEL-7402SPC-A-1HACColo-26C44H56N809>5029.745.3>50>50長(zhǎng)春新堿60,2113.4122.383.279.0由表2可見(jiàn)，化合物C44H56N809對(duì)多種不同的腫瘤細(xì)胞株均表明有一定的抑制作用，其中對(duì)BEL-7402細(xì)胞的IC5。值為29.7pg/ml，明顯優(yōu)于對(duì)照藥長(zhǎng)春新堿，故可以用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥提供了新的先導(dǎo)化合物。權(quán)利要求1.一種環(huán)肽類(lèi)化合物，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下2.權(quán)利要求1所述環(huán)肽類(lèi)化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是產(chǎn)自西沙群島附近海域的海洋動(dòng)物棕色扁海綿Phakelliafusca中的一種具有抗腫瘤活性的新的環(huán)肽類(lèi)化合物。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如右所示。體外活性試驗(yàn)證明，本發(fā)明化合物對(duì)多種不同的腫瘤細(xì)胞均有一定的抑制活性，其中對(duì)BEL-7402細(xì)胞的IC₅₀值為29.7μg/ml，明顯優(yōu)于對(duì)照藥長(zhǎng)春新堿。因此可用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥提供了新的先導(dǎo)化合物。文檔編號(hào)A61K38/12GK101519438SQ20091004899公開(kāi)日2009年9月2日申請(qǐng)日期2009年4月9日優(yōu)先權(quán)日2009年4月9日發(fā)明者張紅軍,樸淑娟,帆楊,林厚文,陳萬(wàn)生申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)