專利名稱：從獼猴桃根提取抗腫瘤藥劑及其制備方法
從獼猴桃根提取抗腫瘤藥劑及其制備方法
背景技術(shù)：
近年來，多名學(xué)者對獼猴桃科獼猴桃屬植物的抗腫瘤作用進(jìn)行了研究，已證實(shí)中 華獼猴桃根中的肽多糖、中越獼猴桃根的提取物及山梨獼猴桃根的提取物均具有抗腫瘤作 用〔1 4〕。稱猴桃(A Ctin2 id ia deliciosa C1F1 liang etlAlRlFerguson)為稱猴桃 科獼猴桃屬植物，其根的60%乙醇提取物在體外具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用〔5〕，然而 獼猴桃根的提取物對動物體內(nèi)接種的腫瘤是否具有抑制作用未見有公開研究報(bào)道。另外， 筆者在前期的體外實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，獼猴桃根的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物對腫瘤細(xì) 胞的生長有較明顯的抑制作用，故本實(shí)驗(yàn)以體內(nèi)接種S180實(shí)體瘤和H22肝癌腹水瘤的小鼠 為對象，對獼猴桃根的乙酸乙酯和正丁醇提取物的體內(nèi)抗腫瘤作用及其對免疫功能的調(diào)節(jié) 作用進(jìn)行了初步研究。經(jīng)過對獼猴桃根乙酸乙酯提取物對S180實(shí)體瘤的抑制作用無菌 條件下取接種第7d生長良好的S180瘤源動物的腹水，立即置無菌管中，以注射用生理鹽水 按1 3比例稀釋成瘤細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)調(diào)整細(xì)胞濃度為2X107個(gè)活瘤細(xì)胞/ml。取50只 小鼠，雌雄各半，每只小鼠右前肢腋下皮下注射接種012ml。接種后次日稱重，隨機(jī)分成五 組，空白對照組(ig等體積蒸餾水)、陽性對照組(ip CTX 0102g/kg，隔日給藥)、獼猴桃根 乙酸乙酯提取物高、中、低劑量組(ig ADEE劑量分別為3130、1165、01825g/kg)，連續(xù)給藥 10d。末次給藥24h后稱重，脫白處死動物，剪開腫瘤部位，剝離瘤塊，用濾紙吸凈其上液體， 稱瘤塊重量，計(jì)算抑瘤率。并且分離胸腺和脾臟，精密稱重，計(jì)算胸腺和脾臟指數(shù)。抑瘤率 =(1-T/C) X 100% T為實(shí)驗(yàn)組平均瘤重，C為空白對照組平均瘤重。11412獼猴桃根正丁 醇提取物對S180實(shí)體瘤的抑制作用獼猴桃根正丁醇提取物高、中、低劑量組(ig ADBE劑 量分別為6152、3126、1163g/kg)。其余方法同11411。11413獼猴桃根乙酸乙酯和正丁醇提 取物對H22肝癌腹水瘤小鼠生命延長率試驗(yàn)取接種后7d的H22肝癌腹水(乳白色)，以 生理鹽水1 2稀釋后，取稀釋后的細(xì)胞瘤液(1X107個(gè)活瘤細(xì)胞/ml)，每只小鼠腹腔注射 012ml，次日稱重、分組，開始給藥，給藥劑量和方式同11411，連續(xù)給藥10d，隔日稱體重，記 錄動物死亡時(shí)間，計(jì)算生命延長率。小鼠生命延長率計(jì)算ILS = (T/C-l) X100% T為給藥 組小鼠平均存活天數(shù)，C為空白對照組小鼠平均存活天數(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
近年來對狗棗獼猴桃根的化學(xué)成分分析、藥理實(shí)驗(yàn)等已有文獻(xiàn)報(bào)道，例如，李淑華 等報(bào)道了從狗棗獼猴桃的根中提取的寡糖(簡稱AK0S)對小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果 表明AK0S是一種有效的免疫調(diào)節(jié)劑，對于增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能具有一定的意義[白求恩醫(yī) 科大學(xué)學(xué)報(bào)，1990，16 (4)，第350頁]；李平亞等從長白山產(chǎn)狗棗獼猴桃根中，分離得到兩個(gè) 白色單體，經(jīng)光譜分析和化學(xué)方法鑒定為狗棗三糖。對中華獼猴桃的藥理階段性研究，本發(fā) 明人已作了部分報(bào)道，但到目前為止，尚未見關(guān)于將中華獼猴桃根有效部位制成制劑，并通 過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)對其藥理與臨床進(jìn)行系統(tǒng)研究的文獻(xiàn)報(bào)道。盡管對獼猴桃的研究已經(jīng)報(bào)道很 多，但是，由于獼猴桃種類繁多，而且其根部所含有效成分復(fù)雜，所具有的藥理作用也各不 相同，因此，對狒猴桃的有效部位提取和制劑研究，以及進(jìn)一步的藥理和臨床研究是當(dāng)前的重要研究課題。特別是對于中藥的提取和分離，一方面要考慮其有效成分的純度和結(jié)構(gòu)。另 一方面還要考慮提取物的有效性，通常這兩者很難達(dá)到統(tǒng)一，在這種情況下，從獼猴桃根中 提取有效部位而制備一種療效廣泛而又效果良好的藥物制劑，是當(dāng)前這一領(lǐng)域需要解決的 一個(gè)技術(shù)難題。本發(fā)明目的是從中華獼猴桃的根部提取一種有效部位，制成藥物制劑。所述的藥 物制劑具有扶持正氣、增強(qiáng)免疫功能；祛疫癘、增強(qiáng)機(jī)體抗感染的能力和消腫散結(jié)、抑制腫 瘤的作用。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種從中華獼猴桃的根中提取具有所述特定藥用作 用的有效部位的方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種以中華獼猴桃根部有效部位制備藥物的方法。本發(fā)明所述的藥物制劑含有治療有效量的中華獼猴桃根部多糖總提取物，優(yōu)選含 有10-80%重量比的中華獼猴桃根部多糖總提取物。本發(fā)明所述的藥物制劑含有治療有效量的以下述方法從中華獼猴桃根部提取的 有效部位取獼猴桃根片，加2-8倍量20-50%的乙醇浸漬1_3次，每次18_30小時(shí)，取上清 液，合并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為60-95%，靜置，離心，沉淀物并用2-7倍量50-80%的乙 醇、無水乙醇各洗一次，棄去洗液，沉物再加2-4倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物室 溫減壓干燥，研碎得粉。本發(fā)明所述的藥物制劑優(yōu)選含有20-70%重量比的以下述方法從中華獼猴桃根部 提取的有效部位取獼猴桃根片，加3-6倍量25-40%的乙醇浸漬1_3次，每次20_28小時(shí)，取上清 液。合并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為65-80%靜量，離心，沉淀物并用3-6倍量60-78%的乙 醇、無水乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加2-4倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物 室溫減壓干燥，研碎得粉。本發(fā)明所述的藥物制劑優(yōu)選含有30-65%重量比的以下述方法從中華獼猴桃根部 提取的有效部位取獼猴桃根片，洗凈，加5倍量30%的乙醇浸漬2次，每次24小時(shí)，靜置，取上清 液，合并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為72%，靜置24小時(shí)，離心，沉淀物并用5倍量72%的乙醇、 無水乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加3倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物室溫 減壓干燥，研碎得粉。本發(fā)明藥物制劑最佳含有40-60 %重量比的上述中華獼猴桃根部有效部位。本發(fā)明藥物除了含有所述的中華獼猴桃根部有效部位之外，還含有常規(guī)的藥物賦 性劑，例如，溶劑，填充劑，粘合劑，崩解劑，增溶劑，增稠劑，矯味劑，防腐劑，濕潤劑，潤滑劑寸。本發(fā)明所說的藥物制劑，根據(jù)常規(guī)的制劑工藝，可以制成任何能夠在臨床上使用 的藥物劑型，如，片劑，膏劑，口服液，注射劑，混懸劑，丸劑，散劑，滴眼液，眼藥膏，擦劑，透 皮吸收劑，貼劑，膠囊劑，顆粒劑，栓劑等。本發(fā)明藥物滴眼液的制備方法如下取獼猴桃根片，洗凈，加5倍量30%的乙醇浸漬2次，每次24小時(shí)，靜置，取上清液，合并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為72%，靜置24小時(shí)，離心，沉淀物并用5倍量72%的乙 醇、無水乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加3倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物室 溫減壓干燥，研碎得粉。粗粉加注射用水溶解，離心，取上清液，經(jīng)微孔濾膜分級過濾，取 0. 45 u濾膜下的濾液，加入0. 03%的尼泊金乙酯與適量氯化鈉，加注射用水調(diào)至每毫升含 多糖為1毫克的溶液，濾過，無菌罐封，即得。上述制法中，粗粉加注射用水溶解后，優(yōu)選先用乳化機(jī)10000轉(zhuǎn)攪拌3分鐘，以 25000轉(zhuǎn)/分鐘離心1小時(shí)，傾取上清液，沉淀再加注射用水適量，再離心1小時(shí)，取上清液 與前次上清液合并，然后，再經(jīng)微孔濾膜分級過濾，取0.45 y濾膜下的濾液。加入0.03% 的尼泊金乙酯與適量氯化鈉，加注射用水調(diào)至每毫升含多糖為1毫克的溶液，濾過，無菌罐 封，即得。上述制法中，氯化鈉的加入量以成品達(dá)到等滲壓所需的量為準(zhǔn)。上述藥物的藥效作用主要依賴于從中華獼猴桃根部所提取的有效部位，由于獼 猴桃根部含有多種有效成分，篩選一種合理的提取方法，從中獲得具有所需藥效作用的有 效部位，是本發(fā)明的一項(xiàng)重要內(nèi)容。本發(fā)明所述的中華獼猴桃根部有效部位的提取方法如 下取獼猴桃根片，加2-8倍量20-50%的乙醇浸漬1_3次，每次18_30小時(shí)，取上清 液，合并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為60-95%，靜置，離心，沉淀物并用2-7倍量50-80%的乙 醇、無水乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加2-4倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物 室溫減壓干燥，研碎得粉。本發(fā)明所述的中華獼猴桃根部有效部位的優(yōu)選提取方法是取獼猴桃根片，洗凈，加5倍量30%的乙醇浸漬2次，每次24小時(shí)，靜置，取上清 液，合并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為72%，靜量24小時(shí)，離心，沉淀物并用5倍量72%的乙醇、 無水乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加3倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物室溫 減壓干燥，研碎得粉。本發(fā)明方法所制備的藥物具有廣泛的藥理作用，其主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)作用如下一、扶持正氣，增強(qiáng)免疫功能1、促進(jìn)小鼠脾、胸腺細(xì)胞的DNA合成。2、對人T細(xì)胞及其亞群的影響本發(fā)明的中華獼猴桃根部有效部位可刺激人的T淋巴細(xì)胞，對提高乙肝患者的外 血T4細(xì)胞數(shù)有一定作用。3、誘生白介素2(IL_2)本發(fā)明的中華獼猴桃根部有效部位可使脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-2活性較對照組 明顯提高。4、誘導(dǎo)M,產(chǎn)生白介素1 (IL-1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的中華獼猴桃根部有效部位可明顯的促進(jìn)小鼠釋放 IL-1。5、對天然殺傷(NK)細(xì)胞的作用實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的中華獼猴桃根部有效部位能激活NK細(xì)胞的活性。6、對遲發(fā)超敏(DTH)反應(yīng)的影響
實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物能有效地恢復(fù)被環(huán)磷酰胺抑制了的遲發(fā)超敏(DTH)反應(yīng)。7、對特異花結(jié)形成細(xì)胞及抗體形成細(xì)胞的影響實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物能明顯增加特異花結(jié)形成細(xì)胞(SRFC)數(shù)，但對抗體形成細(xì) 胞(PFC)無任何影響。二、祛疫癘、增強(qiáng)機(jī)體抗感染的能力本發(fā)明藥物體外實(shí)驗(yàn)對單純皰疹病毒等五種病毒的11個(gè)毒株(包括DNA病毒和 RNA病毒)均有抑制作用。對水泡性口炎病毒及髓灰質(zhì)炎病毒則無效。體內(nèi)對單皰、流感病 毒感染的致死有明顯保護(hù)作用，并能誘生干擾素。對家兔實(shí)驗(yàn)性單皰病毒角膜炎的療效優(yōu) 于西藥皰疹凈。因此，本發(fā)明藥物也是一種抗病毒中藥制劑，對致病菌感染的致死亦有明顯 保護(hù)作用。三、消腫散結(jié)、抑制腫瘤本發(fā)明藥物體內(nèi)給藥對小鼠移植瘤EAC、IfepS、P388有抑制作用。本發(fā)明藥物的臨床研究結(jié)果如下1、本發(fā)明藥物對正常志愿者40人眼的I期實(shí)驗(yàn)，表明本發(fā)明藥物對人眼無刺激 性。對46例人眼的單皰病毒性角膜炎的II期初步療效觀察表明，本發(fā)明藥物優(yōu)于西藥皰 疹凈，可縮短治愈期，提高治愈率。2、本發(fā)明藥物對89例艾滋病患者的治療結(jié)果顯示，長期(三個(gè)月)肌注，除少數(shù) 病例一過性發(fā)熱和局部疼痛外，無明顯毒副反應(yīng)。本發(fā)明藥物單獨(dú)或與中藥合用，取得了改 善癥狀和調(diào)整細(xì)胞免疫功能療效的作用。少數(shù)病例出現(xiàn)HIV血清抗體陰轉(zhuǎn)。3、本發(fā)明藥物對9例乙肝患者的初步治療結(jié)果顯示，對調(diào)整細(xì)胞免疫功能、改善 肝功能和癥狀有一定作用。實(shí)施例1提取中華獼猴桃根部的有效部位取獼猴桃根片1000克，洗凈，加5倍量30%的乙醇浸漬2次，每次24小時(shí)，靜置， 取上清液，合并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為72%，靜置24小時(shí)，離心，沉淀物并用5倍量72% 的乙醇、無水乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加3倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀 物室溫減壓干燥。研碎得粉100克。實(shí)施例2制備本發(fā)明藥物滴眼液取實(shí)施例1制備的粗粉，加注射用水溶解，先用乳化機(jī)10000轉(zhuǎn)攪拌3分鐘，以 25000轉(zhuǎn)/分鐘離心1小時(shí)，傾取上清液，沉淀再加注射用水適量再離心1小時(shí)，取上清液與 前次上清液合并，然后，再經(jīng)微孔濾膜分級過濾，取0. 45 u濾膜下的濾液，加入0. 03%的尼 泊金乙酯與適量氯化鈉(氯化鈉的加入量為成品達(dá)到等滲壓所需的量)，加注射用水調(diào)至 每毫升含多糖為1毫克的溶液，濾過，無菌罐封，即得。實(shí)施例3本發(fā)明藥物膠囊劑的制備取獼猴桃根片1000克，洗凈，加5倍量30%的乙醇浸漬2次，每次24小時(shí)，靜置， 取上清液，合并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為72%，靜置24小時(shí)，離心，沉淀物并用5倍量72% 的乙醇、無水乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加3倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀 物室溫減壓干燥，研碎，過100目篩，得粉100克，將所得藥粉與淀粉以1 1比例混合均勻， 裝膠囊，每克含藥1克。實(shí)施例4本發(fā)明藥物注射劑的制備
取實(shí)施例1制備的粗粉500克，加注射用水溶解，先用乳化機(jī)10000轉(zhuǎn)攪拌3分鐘， 以25000轉(zhuǎn)/分鐘離心1小時(shí)，傾取上清液，沉淀再加注射用水適量再離心1小時(shí)，取上清 液與前次上清液合并，然后，再經(jīng)微孔濾膜分級過濾，取0. 45 u濾膜下的濾液，加入0. 03% 的尼泊金乙酯與適量氯化鈉(氯化鈉的加入量為成品達(dá)到等滲壓所需的量)，加注射用水 調(diào)至每毫升含多糖為1毫克的溶液，濾過，無菌罐封，即得。實(shí)施例5本發(fā)明藥物片劑的制備取實(shí)施例1制備的粗粉1000克，加入賦性劑淀粉，混合均勻，以乙醇造粒，整粒，如 壓片機(jī)壓片，制得片劑。
權(quán)利要求
一種以中華獼猴桃根制備的藥物，其特征在于該藥物含有治療有效量的中華獼猴桃根多糖總提取物，對腫瘤尤其是肝臟腫瘤有療效。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于它含有10-80%重量比的中華獼猴桃根多 糖總提取物。
3.一種以中華獼猴桃根制備的藥物，其特征在于該藥物含有治療有效量的以下述方法 從中華獼猴桃根部提取的有效部位取獼猴桃根片，加2-8倍量20-50%的乙醇浸漬1-3次，每次18-30小時(shí)，取上清液，合 并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為60-95%，靜置，離心，沉淀物并用2-7倍量50-80%的乙醇、無水 乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加2-4倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物室溫減 壓干燥，研碎得粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于它含有20-70%重量比的以下述方法從中 華獼猴桃根部提取的有效部位取獼猴桃根片，加3-6倍量25-40%的乙醇浸漬1-3次，每次20-28小時(shí)，取上清液，合 并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為65-80%靜置，離心，沉淀物并用3-6倍量60-78%的乙醇、無水 乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加2-4倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物室溫減 壓干燥，研碎得粉。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其物征在于它含有30-65%重量比的以下述方法從中 華獼猴桃根部提取的有效部位取獼猴桃根片，洗凈，加5倍量30%的乙醇浸漬2次，每次24小時(shí)，靜置，取上清液，合 并，加乙醇調(diào)至含乙醇量為72%，靜置24小時(shí)，離心，沉淀物并用5倍量72%的乙醇、無水 乙醇各洗一次，棄去洗液，沉淀物再加3倍量乙醚洗滌一次，棄去乙醚液，沉淀物室溫減壓 干燥，研碎得粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于它含有40-60%重量比的所述中華獼猴桃 根的有效部位。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于它還含有常規(guī)的藥物賦性劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于該藥物的劑型是任何能夠在臨床上使用的 藥物劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從獼猴桃根提取抗腫瘤藥劑及其制備方法，獼猴桃根的乙酸乙酯提取物(Actinidia deliciosa ethyl acetate extracts，ADEE)和正丁醇提取物(Actinidia deliciosa n2butanol extracts，ADBE)具有明顯的體內(nèi)抗腫瘤作用。本發(fā)明設(shè)計(jì)了提取方法，并建立S180小鼠肉瘤和H22肝癌腹水瘤模型。乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物對S180實(shí)體瘤的生長有顯著的抑制作用，能夠明顯延長H22肝癌腹水瘤小鼠生命存活時(shí)間，并具有一定的免疫促進(jìn)作用。獼猴桃根的乙酸乙醇提取物和正丁醇提取物在小鼠體內(nèi)具有明顯的抗腫瘤作用。
文檔編號A61K36/185GK101862356SQ200910049349
公開日2010年10月20日 申請日期2009年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月15日
發(fā)明者郭蕾 申請人:郭蕾