專利名稱：一種特異性結合cd15的全人源抗體及應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抗體技術領域，尤其涉及特異性結合CD15的全人源抗體及應用。
背景技術：
⑶15(也稱Sialyl lewis χ)主要分布在白細胞、血管內皮細胞和某些腫瘤表面。 ⑶15是一種細胞粘附分子，因其對霍奇金淋巴瘤(HD)中的R-S細胞具有良好的標記作用， 被認為是HD的重要標志物。除HD的鑒別診斷外，對胃癌、結直腸癌、甲狀腺癌、乳腺癌等 腫瘤⑶15的表達研究發(fā)現(xiàn)，⑶15表達隨癌細胞分化程度下降、淋巴結轉移和臨床分期增 高而明顯增高。認為CD15的表達是判斷腫瘤的發(fā)展、預測淋巴結轉移和預后的良好指標 (Brooks SA,Leathern AJC. Expression of the CD15 antigen (Lewis x)in breast cancer. Histochem J，1995 ；27 =689-693) 免疫電鏡觀察顯示，CD15抗原主要分布于大腸癌細胞漿 的界膜、內質網(wǎng)、高爾基體及近細胞核膜處，CD15可能是通過對所結合的鋪基構型改變影響 和參與腫瘤的形成和轉移過程。此外，CD15是白細胞的標記抗體，在淋巴瘤的診斷中有一 定的價值。腫瘤抗原特異的免疫治療可以分為抗體抗腫瘤免疫治療和T細胞抗腫瘤免疫治 療。由于抗體自身的限制，不能通過細胞膜進入胞內，所以抗體的抗腫瘤免疫反應均作用 于細胞表面表達的腫瘤抗原，比如靶向作用于AML細胞表面抗原⑶13、⑶15、⑶33、⑶155 和⑶66的抗體治療。例如膿皰型銀屑病(Pustular psoriasis, PP)是一種以炎癥為主的 亞型銀屑病，臨床特點為全身或局部反復發(fā)生無菌性膿皰。陳勝平等就有報道抗人黏附分 子⑶15、⑶lib或ICAM-I單克隆抗體的研制及應用將為PP的治療提供一條新途徑(陳勝 平，張國威，何威，劉向農(nóng).膿皰型銀屑病患者外周血中性粒細胞及皮損部位黏附分子的表 達.中國全科醫(yī)學，2006;9卷8期.)。本領域迫切需要具有高親和力的全人源的抗⑶15抗體，用于診斷和治療⑶15相 關疾病如胃癌、白血病、類風濕關節(jié)炎、銀屑病等。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種特異性結合CD15抗原的抗體，尤其是全人源單克隆抗 體，以滿足臨床上診斷和/或治療CD15相關疾病的需要。本發(fā)明的第一方面，提供了一種特異性結合CD15抗原的全人源抗體，該全人源抗 體的重鏈可變區(qū)包含如下的互補決定區(qū)SEQ ID NO 5 所示的 CDRl，SEQ ID NO 6 所示的 CDR2，SEQ ID N0:7 所示的 CDR3。在優(yōu)選的方案中，該全人源抗體的重鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO :2所示的氨基酸序 列。本發(fā)明的第二方面，提供了一種特異性結合CD15抗原的全人源抗體，該全人源抗體的輕鏈可變區(qū)包含如下的互補決定區(qū)SEQ ID N0:8 所示的 CDR1，SEQ ID N0:9 所示的 CDR2，SEQ ID NO :10 所示的 CDR3。在優(yōu)選的方案中，該人源抗體的輕鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO :4所示的氨基酸序列。本發(fā)明的第三方面，提供了一種特異性結合CD15抗原的全人源抗體，該全人源抗 體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)分別具有SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 4所示的氨基酸序列。本發(fā)明的第四方面，提供了一種特異性結合CD15抗原的全人源抗體片段，該全人 源抗體片段包括SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列和/或SEQ ID NO :4所示的氨基酸序列。 該全人源抗體片段包括單鏈抗體(SCFV)、Fab、Fab，、F(ab，)2等形式。本發(fā)明的第五方面，提供了一種特異性結合CD15抗原的融合蛋白或多肽，該融合 蛋白或多肽包括SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列和/或SEQ ID NO :4所示的氨基酸序列。本發(fā)明的第六方面，提供了一種小分子標記的活性蛋白，該活性蛋白包含SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列和/或SEQ ID NO 4所示的氨基酸序列。本發(fā)明的第七方面，提供了一種編碼特異性結合⑶15抗原的全人源抗體的重鏈 可變區(qū)的DNA序列，該DNA序列編碼SEQ ID NO 2所示的多肽。在一個優(yōu)選的方案中，該DNA序列如SEQ ID NO 1所示。本發(fā)明的第八方面，提供了一種編碼特異性結合CD15抗原的全人源抗體的輕鏈 可變區(qū)的DNA序列，該DNA序列編碼SEQ ID NO 4所示的多肽。在一個優(yōu)選的方案中，該DNA序列如SEQ ID NO 3所示。本發(fā)明的第九方面，提供了本發(fā)明的特異性結合CD15抗原的全人源抗體、抗體片 段、融合蛋白、小分子標記活性蛋白在治療或診斷淋巴細胞瘤、艾滋病、類風濕性關節(jié)炎、同 種異體器官移植排斥反應等疾病中的應用。本發(fā)明的第十方面，提供了一種藥物組合物，包含安全有效量的本發(fā)明的特異性 結合CD15抗原的全人源抗體、抗體片段、融合蛋白、小分子標記活性蛋白和藥學上可以接 受的載體。
圖1 實施例4制備的14株抗⑶15抗體陽性克隆菌的ELISA活性檢測結果。包被 抗原為IOOul的⑶15抗原(lug/ml)，空心柱狀體為加入IOOul陽性克隆菌提取的抗⑶15 抗體的試驗組，帶斜線的柱狀體為加入IOOul的BSA(100ug/ml)的對照組。其中活性最高 的陽性克隆菌是第10株，編號為3-17#。圖2 3-17#菌產(chǎn)生的抗⑶15抗體的二倍稀釋法檢測結果。
具體實施例方式本文所用的術語“抗體”是能夠通過至少一個抗原識別位點，和靶分子(包括糖、 多聚核酸、脂類、多肽等)特異結合的免疫球蛋白。完整的抗體是有相同結構特征的約 150000道爾頓的異四聚糖蛋白，其由兩個相同的輕鏈(L)和兩個相同的重鏈(H)組成。每 條輕鏈通過一個共價二硫鍵和重鏈相連，而不同免疫球蛋白同種型的重鏈間的二硫鍵數(shù)目不同。每條重鏈和輕鏈也有規(guī)則間隔的鏈內二硫鍵。每條重鏈的一端有可變區(qū)(VH)，其后 是多個恒定區(qū)。每條輕鏈的一端有可變區(qū)(VL)，另一端有恒定區(qū)；輕鏈的恒定區(qū)和重鏈的 第一個恒定區(qū)相對，輕鏈的可變區(qū)和重鏈的可變區(qū)相對。特殊的氨基酸殘基在輕鏈的重鏈 的可變區(qū)之間形成界面。本文所用的術語“單克隆抗體”是指包含參與選擇性結合某一抗原氨基酸結構 (自然或者經(jīng)改建)的同一抗體群。單克隆抗體具有高度特異性，針對某一單一抗原位點。本文所用的術語“可變區(qū)”表示抗體中可變區(qū)的某些部分在序列上有所不同，它形 成了各種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性。然而，可變性并不均勻地分布在整個可 變區(qū)中。它集中于輕鏈和重鏈可變區(qū)中稱為互補決定區(qū)(CDR)或超變區(qū)中的三個片段中。 可變區(qū)較保守的部分稱為構架區(qū)(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變區(qū)中各自包括四個FR區(qū)，它 們大致上呈β-折疊構型，由形成連接環(huán)的三個⑶R區(qū)相連，在某些情況下可形成部分β 折疊結構。每條鏈中的⑶R通過FR區(qū)緊密地靠在一起并與另一鏈的⑶R —起形成抗體的 抗原結合部位(參見Kabat等，NIH Publ. No. 91-3242，卷I，647-669頁(1991)。恒定區(qū)不 直接參與抗體與抗原的結合，但是它們表現(xiàn)出不同的效應功能，例如參與抗體的依賴于抗 體的細胞毒性。脊椎動物抗體(免疫球蛋白)的“輕鏈”可根據(jù)其恒定區(qū)的氨基酸序列歸為明顯 不同的兩類(稱為κ和λ)中的一類。根據(jù)其重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列，免疫球蛋白可以 分為不同的種類，主要有5類免疫球蛋白IgA，IgD, IgE, IgG和IgM，其中一些還可進一步 分為亞類(同類型)，如IgGl, IgG2，IgG3，IgG4，IgAl和IgA2。對應于不同免疫球蛋白重 鏈恒定區(qū)分別稱為α、β、ε、μ、Y。不同免疫球蛋白的亞單位結構和三維構型是眾所周 知的。本文所用的“全人源抗體”是指抗體基因來源人類的抗體。本文中，所謂“抗體”不但包括完整的多克隆或者單克隆抗體，也包括各種抗體片 段(如Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv)，單鏈抗體(ScFv)，二體，由抗體片段形成的多特異性抗體， 含有抗體片段的融合蛋白，以及任何經(jīng)過改造但包含所需特異性識別位點的免疫球蛋白分 子?？贵w的來源或者制備方法并不受限制，例如通過雜交瘤、噬菌體選擇、重組表達、轉基因 動物等。適宜的“標記”包括放射性核素、酶、底物、輔助因子、抑制劑、熒光部分、化學發(fā)光 部分、磁性顆粒等。下面將結合實施例進一步詳細地描述本發(fā)明，然而應該理解，列舉這些實施例只 是為了說明本發(fā)明，而不是用來限制本發(fā)明。下列實施例中未特別指明的濃度為質量百分 比濃度；未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，《分子克隆 實驗指南》(New York =Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的條件，或按 照制造廠商所建議的條件。實施例1.人源抗體庫的構建全人源單鏈抗體(scFv)庫的構建是采用He等人[He et al. Methods Mol Biol. 2004 ；248 177-189]報道的方法構建，從83例腫瘤患者的外周血液提取mRNA， 采用如下引物，用RT-PCR的方法體外擴增重鏈和輕鏈的可變區(qū)基因，用重疊延伸 PCR(Overlap-extension PCR)的方法將兩段基因通過一段Linker序列組裝成完整的抗體oDNA庫序列。
重鏈引物
(1)HuVH/B5'-CAGGT(c/g)CAGCTGG(t/a)G(c/g)AGTC(t/c)GG-3‘
(2)HuJH/F 5'-TGAGGAGACGGTGACCA(t/g)GGTCCC-3'連接序列引物(3)Linker/B 5' -GGGACC (a/c)TGGTCACCGTCTCCTCAGGCGGTGGCTCTGG-3'(4)Linker/F 5' -TTGCCACCGCCAGAACC-3'κ輕鏈引物(5)HuVk /B 5' -GGTTCTGGCGGTGGCAAAGA(a/c)AT(c/t) (g/a)TG(a/c)TGAC(c/g/t)CAGTCTCC-3'(6)HuC κ /F : 5' -TGAGGAGACGGTGACCA(t/g)GGTCCC-3'λ輕鏈引物(7)HuV/B 5' -GGTTCTGGCGGTGGCAAACAG(t/g)CTGTGCTGACTCAGCC (g/c) CC-3'(8)HuC/F 5' -AGATTCTGTAGGGGCCACTGTC-3'利用一對引物5' -ACCACCATGGAGGTSCASCTCGAGSAGTCTGG-3'和 5' -GCGAATTCTT AGCAGCCACCCAGGTGATGGTGATGGTGATGAGATGGTGCAGCCACAG-3 ‘在抗體 cDNA 庫的兩側分別弓丨 入Nco I和EcoR I兩個酶切位點。將scFv的cDNA文庫用Nco I和EcoR I酶切，pET22b 載體用Nco I和EcoR I酶切，分別回收酶切后的片段，酶切后的scFv文庫與載體連接后轉 化Rosetta感受態(tài)，涂布LB固體平板，挑取了 1500株單菌落，用濾紙粘附克隆顯藍反應法 (Colony filter method)對克隆子進行功能篩選。實施例2.濾紙粘附克隆顯藍反應法用一張甲醇處理過的PVDF膜影印平板上長出的菌落，之后菌落一面朝上平鋪于 含有ImM IPTG和50ug/ml of ampicillin的瓊脂平板上，30°C靜置培養(yǎng)4個小時。用含 0. 05% Tween 20的PBS洗滌緩沖液洗滌板孔3次，每次5分鐘，然后用含有0. 05% Tween 20和BSA的PBS室溫封閉1小時。用含0. 05% Tween 20的PBS洗滌緩沖液洗滌板孔 3 次，每次 5 分鐘，將 Anti-His HRP (Sigma 產(chǎn)品)用含 0. 05% Tween 20 和 1 % BSA 的 PBS 按1 5000稀釋成工作液后與PVDF膜孵育兩個小時，用含0. 05% Tween 20的PBS緩沖液 洗滌3次，再用化學發(fā)光試劑(Pierce公司產(chǎn)品)對膜進行曝光，得到了 420株陽性菌落。實施例3.抗原抗體作用的檢測(化學發(fā)光法)用80ul PBS將⑶15抗原(產(chǎn)品名稱Sialyl Lewis χ唾液酸化路易斯χ抗原； Calbiochem，產(chǎn)品貨號565950)稀釋成10ug/ml的濃度，包被在甲醇處理過的PVDF膜上， 4°C孵育過夜。用含0. 05% Tween 20的PBS洗滌三次，每次5分鐘。用Superblock buffer in PBS (Thermo公司)進行室溫封閉1小時。用含0. 05% Tween 20的PBS洗滌三次，每次 5分鐘。將抽提好的420株陽性菌落的周質蛋白分別點樣在PVDF膜上，與抗原進行特異作 用，室溫孵育1小時。再用0. 05% Tween 20的PBS洗滌三次，每次5分鐘。將anti_His HRP(Sigma aldrich)用含 0. 05% Tween 20 和 1 % B5A 的 PBS 稀釋 8000 倍，均勻地鋪在 膜上，室溫輕輕震蕩2個小時。再0. 05% Tween20的PBS洗滌三次，每次5分鐘。用化學發(fā)光試劑Supersignal west Pico (Pierce公司)室溫孵育5分鐘，在化學發(fā)光成像系統(tǒng) Chemidoc (Bio-rad公司)的暗室曝光，篩選出約14株與⑶15抗原特異結合的且斑點顏色 相對較深的陽性克隆菌。實施例4.抗體的表達及純化將上步篩選到的14株陽性克隆菌落用含0. 5%的葡萄糖的LB培養(yǎng)基分別37°C培 養(yǎng)過夜，其中加入終濃度為lOOug/ml的氨芐青霉素和64ug/ml的氯霉素，次日早上加入終 濃度為ImM的IPTG，繼續(xù)25-30°C培養(yǎng)4個小時后5000g離心5分鐘。按照每克菌重對應 5ml的比例加入洗滌緩沖液(300mM NaCl，50mMNaH2P04和IOmM咪唑，PH 8.0)，冰浴上超聲 波破碎細胞(超聲4s間隔5s，99個循環(huán))，之后12000g離心40分鐘。取上清液與之前用 洗滌緩沖液平衡的ImlNi-NTA親和填料混合，4°C震蕩1個小時加載在純化柱上，30個柱體 積的洗滌緩沖液洗滌。用Iml的洗脫緩沖液(300mM NaCl, 50mM NaH2PO4和250mM咪唑)洗 脫，收取目標洗脫液。對收集的樣品進行常規(guī)的ELISA實驗，結果見圖1，選擇0D450吸收值 最大的一株菌3_17#菌。3-17#菌分泌并純化后的抗體樣品經(jīng)SDS-PAGE電泳后，用Quality One分析軟件 得知其純度大于80%，達到ELISA親和力檢測法的基本純度，樣品的濃度采用Bradford方 法測定，為320ug/ml。實施例5. ELISA檢測抗原抗體的親和力用IOOul的lug/ml的CD15抗原包被酶標板檢測孔，4°C孵育過夜。用含0. 05% Tween 20的PBS洗滌緩沖液洗滌板孔3次，每次5分鐘，之后用含有0. 05% Tween20和1 % BSA的PBS室溫封閉1小時。按二倍稀釋法將3-17#菌產(chǎn)生并經(jīng)親和純化后的抗體稀釋為 濃度梯度樣品，分別加入IOOul稀釋樣品到上述包被有抗原的孔中，陰性對照采用沒有轉 化質粒的Rosetta菌提取的蛋白，37°C孵育1個小時。用含0.05% Tween 20的PBS洗滌 緩沖液洗滌板孔3次，每次5分鐘。將Anti-HisHRP(Sigma產(chǎn)品)用含0. 05% Tween 20 和BSA的PBS按1 5000稀釋成工作液后加在之前孵育樣品的孔中孵育兩個小時，用 含0. 05% Tween 20的PBS緩沖液洗滌3次。在孔中加入TMB溶液，37°C孵育10分鐘，加入 50ul IN HCl終止顯色反應，用ELISA酶標儀于450nm波長讀數(shù)。根據(jù)公式，計算抗體與抗 原的親和力為2. OXlO-7M, 二倍稀釋親和結果見圖2。實施例6.⑶15單克隆抗體基因的測序對篩選到的3_17#菌產(chǎn)生的單鏈抗體基因進行測序，結果在序列表中。其中SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :3是本發(fā)明獲得的高活性的單鏈抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的 DNA序列，SEQ ID NO :2和SEQ ID NO :4則是根據(jù)上述DNA序列推測出的氨基酸序列。SEQ ID NO :5 7是推測出的重鏈可變區(qū)的互補決定區(qū)CDRl CDR3 ；SEQ ID NO 8 10是推 測出的輕鏈可變區(qū)的互補決定區(qū)⑶Rl ⑶R3。上述實施例只是為了說明本發(fā)明，并非將本發(fā)明限定于上述范圍。上述實施例可 能作很多變動，在閱讀了本發(fā)明公開的內容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明做出各種 改動和修改，這些等價形式同樣落入本發(fā)明權利要求書的保護范圍之內。序列表<110>中國醫(yī)藥集團總公司四川抗菌素工業(yè)研究所<120> 一種特異性結合⑶15的全人源抗體及應用
Val Arg Thr Lys ArgGly AspTyrLeu Trp Gly Thr Tyr Arg Thr Tyr0109]100105 1100110]Tyr Phe Asp Tyr TrpGly GlnGlyThr Leu Val Thr Val Ser Ser0111]1151201250112]<210>30113]<211>3270114]<212>DNA0115]<213> 智人(Homo sapiens)0116]<220>0117]<221>misc_feature0118]<222>(1). . (327)0119]<223>輕鏈可變區(qū)0120]<400>30121]gacattgtga tgacgcagtc tccaggcaccctgtctttgt ctccagggga aagcgccacc600122]ctctcctgta gggccagtca gagtgttagaagcagttacg ttgcctggta ccagcagaag1200123]cctggccagg ctcccaggct cctcatctatggtgcattca gtagggccac tggcgtccca1800124]gacaggttca gtggcagtgg gtctgggacagacttcactc tcaccatcag cagactggag2400125]cctgaagatc ttgaagtgta ttactgtcagcagtatggta gctcaccggg aacctttggc3000126]caggggacca agctggagat caaacga3270127]<210>40128]<211>1090129]<212>PRT0130]<213> 智人(Homo sapiens)0131]<220>0132]<221>misc_feature0133]<222>⑴· · (109)0134]<223>輕鏈可變區(qū)0135]<400>40136]Asp lie Val Met ThrGln SerProGly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly0137]1 510 150138]Glu Ser Ala Thr LeuSer CysArgAla Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser0139]2025 300140]Tyr Val Ala Trp TyrGln GlnLysPro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu0141]3540450142]lie Tyr Gly Ala PheSer ArgAlaThr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser0143]5055600144]Gly Ser Gly Ser GlyThr AspPheThr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu0145]657075 800146]Pro Glu Asp Leu GluVal TyrTyrCys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
859095Gly Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg100105<210>5<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1). . (5)<223>重鏈可變區(qū)CDRl<400>5Tyr His Trp lie Gly15<210>6
<211>16<212>PRT<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1). . (16)<223>重鏈可變區(qū)CDR2<400>6Thr lie Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln151015<210>7<211>18<212>PRT<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1). . (18)<223>重鏈可變區(qū)CDR3<400>7Thr Lys Arg Gly Asp Tyr Leu Trp Gly Thr Tyr Arg Thr Tyr Tyr Phe151015Asp Tyr<210>8<211>12<212>PRT <213>人工序列 <220>
<221>misc_feature <222>(1). . (12) <223>輕鏈可變區(qū)CDRl <400>8
Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser Tyr Val Ala
1510
<210>9
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature <222>(1). . (7) <223>輕鏈可變區(qū)CDR2 <400>9
Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr 15
<210>10 <211>9 <212>PRT <213>人工序列 <220>
<221>misc_feature <222>(1). . (9) <223>輕鏈可變區(qū)3 <400>10
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Gly Thr 15
<210>11 <211>23 <212>DNA <213>人工序列 <220>
<221>misc_feature <222>(1). . (23) <223>引物
<400>11caggtscagc tggwgsagtc ygg23<210>12<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1). . (24)<223> 引物<400>12tgaggagacg gtgaccakgg tccc24<210>13<211>38<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1). . (38)<223> 引物<400>13gggaccmtgg tcaccgtctc ctcaggcggt ggctctgg38<210>14<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1). . (17)<223> 引物<400>14ttgccaccgc cagaacc17<210>15<211>41<212>DNA<213〉人工序列<220><221>misc_feature<222>(1). . (41)<223>引物 <400>15
ggttctggcg gtggcaaaga matyrtgmtg acbcagtctc c41
<210>16
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature <222>(1). . (24) <223>引物 <400>16
tgaggagacg gtgaccakgg tccc24
<210>17
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature <222>(1). . (41) <223>引物 <400>17
ggttctggcg gtggcaaaca gkctgtgctg actcagccsc c41
<210>18 <211>22 <212>DNA <213>人工序列 <220>
<221>misc_feature <222>(1). . (22) <223>引物 <400>18
agattctgta ggggccactg tc22
<210>19
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>misc feature
CN 10<222>(1). · (32)<223> 引物<400>19accaccatgg aggtscasct cgagsagtct gg32<210>20<211 >48<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1). . (48)<223> 引物<400>20gcgaattctt agcagccacc caggtgatgg tgatggtgat gagatggtgc agccacag 48
1權利要求
一種特異性結合CD15抗原的全人源抗體，其特征在于，所述的全人源抗體的重鏈可變區(qū)包含如下的互補決定區(qū)SEQ ID NO5所示的CDR1，SEQ ID NO6所示的CDR2，SEQ ID NO7所示的CDR3。
2 根據(jù)權利要求1的全人源抗體，其特征在于，所述的全人源抗體的重鏈可變區(qū)具有 SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列。
3.一種特異性結合CD15抗原的全人源抗體，其特征在于，所述的全人源抗體的輕鏈可 變區(qū)包含如下的互補決定區(qū)SEQ ID NO 8 所示的 CDRl，SEQ ID NO 9 所示的 CDR2，SEQ ID NO 10 所示的 CDR3。
4.根據(jù)權利要求3的全人源抗體，其特征在于，所述的全人源抗體的輕鏈可變區(qū)具有 SEQ ID NO :4所示的氨基酸序列。
5.一種特異性結合CD15抗原的全人源抗體，其特征在于，所述的全人源抗體的重鏈可 變區(qū)和輕鏈可變區(qū)分別具有SEQ ID NO :2和SEQ ID NO :4所示的氨基酸序列。
6.一種特異性結合CD15抗原的全人源抗體片段，其特征在于，所述的全人源抗體片斷 包含權利要求1所述抗體的重鏈可變區(qū)和/或權利要求3所述抗體的輕鏈可變區(qū)。
7.根據(jù)權利要求6的全人源抗體片段，其特征在于，所述的抗體片段包括單鏈抗體 (scFv)、Fab、Fab'、F(ab' )2 的形式。
8.一種特異性結合CD15抗原的融合蛋白或多肽，其特征在于，所述的融合蛋白或多肽 包含權利要求1所述抗體的重鏈可變區(qū)和/或權利要求3所述抗體的輕鏈可變區(qū)。
9.一種特異性結合CD15抗原的活性蛋白，其特征在于，所述的活性蛋白包含權利要求 1所述抗體的重鏈可變區(qū)和/或權利要求3所述抗體的輕鏈可變區(qū)，該活性蛋白帶有小分子 標記。
10.一種DNA分子，其特征在于，所述的DNA分子編碼SEQ ID NO :2所示的重鏈可變區(qū)。
11.根據(jù)權利要求10的DNA分子，其特征在于，所述的DNA分子具有SEQIDN0:1所示 的核苷酸序列。
12.—種DNA分子，其特征在于，所述的DNA分子編碼SEQ ID NO :4所示的輕鏈可變區(qū)。
13.根據(jù)權利要求12的DNA分子，其特征在于，所述的DNA分子具有SEQIDNO :3所示 的核苷酸序列。
14.根據(jù)權利要求1-9中的任一項所述的抗體、抗體片段、融合蛋白或帶有小分子標記 的活性蛋白在制備治療胃癌、白血病、類風濕關節(jié)炎或銀屑病藥物中的應用。
15.一種藥物組合物，其特征在于，包含安全有效量的權利要求1-9中的任一項所述的 抗體、抗體片段、融合蛋白或帶有小分子標記的活性蛋白和藥學上可以接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種全人源抗CD15抗體，其重鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO2所示的氨基酸序列，輕鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO4所述的氨基酸序列，本抗體分子與細胞粘附分子(CD15抗原)特異性地結合，其親和力大于10-7M。本發(fā)明還公開了編碼該抗體的DNA分子。該抗體在治療腫瘤抗原特異的疾病如白血病、胃癌、類風濕關節(jié)炎、銀屑病等中具有潛在的應用。
文檔編號A61P1/00GK101885770SQ20091005104
公開日2010年11月17日 申請日期2009年5月12日 優(yōu)先權日2009年5月12日
發(fā)明者叢聰, 代云見, 何勇智, 何明躍, 張勇俠, 杜天飛, 王明蓉, 高強 申請人:中國醫(yī)藥集團總公司四川抗菌素工業(yè)研究所