專利名稱：多肽小分子mlif在制備防治心肌缺血藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術領域，是一種多肽小分子MLIF用于制 備防治心肌缺血藥物的新用途。
背景技術：
心肌缺血，是指心臟的血液灌注減少，導致心臟的供氧減少，心肌能
量代謝不正常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)。臨床顯示 引起心肌缺血最主要、最常見的病因，是冠狀動脈狹窄。而冠狀動脈 狹窄的主要原因是動脈粥樣硬化。因冠狀動脈粥樣硬化引起的心臟病 就是大家常說的冠心病。心肌缺血是冠心病的一種，目前有多種治療 方案如放置支架、球囊擴張術，但藥物治療仍為主要的方法?？蛇x擇 硝酸酯類藥物(如單硝酸異山梨酯或其緩釋劑型)，e-受體阻斷劑如 普萘洛爾和鈣通道阻滯藥如硝苯地平；主要是擴張冠狀動脈，增加心 肌的供氧.，減少外周阻力、心臟做功，降低心肌耗氧。還應該服用他 汀類藥物(如阿伐他汀、辛伐他汀) 一方面降低血漿中的膽固醇，一 方面穩(wěn)定動脈斑塊，防止斑塊脫落形成血栓，造成中風等。
炎癥反應在心肌缺血損傷中起重要作用，主要過程包括中性粒細 胞、單核細胞、淋巴細胞等炎癥細胞的趨化、浸潤以及炎癥因子的合 成和分泌。但目前臨床尚無主要從抗炎機制保護心肌缺血的藥物。單 核細胞移動抑制因子(MLIF)，是一種抗炎性反應的多肽，是從無菌 培養(yǎng)的溶組織內阿米巴中發(fā)現(xiàn)的五肽，其氨基酸序列為Met-Gln-Cys-Asn-Ser。體外培養(yǎng)和體內實驗證明該肽能抑制人單核細 胞、多形核白細胞的移動。溶組織內阿米巴通過產生該抗炎癥多肽， 影響細胞因子分泌，限制炎癥的產生，逃避宿主免疫。文獻報道，這 種五肽分子不僅可以直接作用于炎癥細胞，也可以通過干擾炎癥細胞 因子的分泌影響炎癥反應的過程，對MIP-la、 MP-ie等炎癥趨化 因子有顯著的抑制作用，同時還可以抑制1L-1 P 、 TNF-a等炎癥細 胞因子分泌以及相應受體的表達。本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，MLIF具 有防治缺血性腦血管病的功能，并已申請專利(申請?zhí)?200810200610.0)，但迄今為止，尚未見該多肽具有防治心肌缺血功 能的報道。
發(fā)明內容
本發(fā)明對多肽小分子MLIF提供一種用于制備防治心肌缺血藥物 的新用途。
經(jīng)大鼠冠狀動脈結扎造成心肌缺血模型的藥理實驗，多肽小分子 MLIF能顯著降低心肌缺血所致大鼠心肌損傷和心肌梗塞區(qū)范圍，表 明其具有防治心肌缺血功能，因此可用于制備防治心肌缺血藥物。
具體實施例方式
現(xiàn)對本發(fā)明作詳細描述。
一. 多肽小分子MUF: 氨基酸序列為Met-Gln-Cys-Asn-Ser 由上海生工生物科技公司合成，純度在95%以上。
二. 動物實驗(一)對大鼠急性心肌缺血損傷心肌梗死體積的保護作用
1、 實驗動物SD大鼠，雄性，清潔級，體重200-220克，由中國人 民解放軍第二軍醫(yī)大學實驗動物中心提供(許可證號SCXK (滬) -2007-0003)。
2、 實驗分組
將實驗大鼠隨機分成4組假手術組8只，模型組9只，MLIF 低劑量組ll只，MLIF高劑量組12只，給藥劑量按體重計，MLIF 低劑量組給予0.15mg/kg， MLIF高劑量組給予0.5mg/kg，以生理鹽 水為溶劑配成注射液，尾靜脈注射給藥。
3、 大鼠冠狀動脈結扎及心肌梗塞面積的測量
將雄性SD大鼠分別用25。/。烏拉坦(0.4ml/100g)腹腔麻醉，仰臥 位固定，在胸左側第五肋間處切開胸壁并沿胸骨左緣2 mm處切斷第 四和第五肋骨，剪開心包膜，暴露心臟，于左冠狀動脈前降支下穿1 根0/3號縫合線，從股靜脈緩慢注射給藥10 min后立刻結扎左心冠狀 動脈前降支，將心臟放回胸腔，用手盡量排出胸內殘留氣體，迅速關 閉胸腔并拉緊荷包抽口，整個開胸到閉胸操作過程在30 S內完成， 大鼠冠脈結扎后造成心肌缺血，假手術組大鼠冠脈不結扎。冠脈結扎 后15min各大鼠尾靜脈注射給藥，MLIF低劑量組給予0.15mg/kg， MLIF高劑量組給予0.5mg/kg，假手術組和模型組注射等體積生理鹽 水。各組動物都在冠脈結扎后5h處死大鼠。取出心臟，在冠脈結扎 線下，平行于冠狀溝，將心室肌平均橫切成5片，將5片心肌置于硝 基四氮唑藍(N-BT)染液中，振搖染色15min后取出，正常心肌染為暗藍色，梗塞區(qū)心肌則不著色，通常呈淺黃色。在解剖鏡下分離梗 塞區(qū)，分別稱全心重、左心重、梗死重，以梗塞區(qū)心肌重量占心肌重 量的百分比(％)來作為衡量梗塞范圍的測量指標。
4 、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學處理實驗數(shù)據(jù)以X士SD表示，用SPSS 10.0進行
方差分析，做差異的顯著性檢驗。結果見表1
表l藥物對冠脈結扎大鼠心肌缺血損傷的影響(5T土SD)
組別動物數(shù)全心重左心室重梗塞區(qū)重量梗塞區(qū)/全心(％)梗塞區(qū)/左心室
(mg)(mg)(%)
假手術組8728±58497 ±360±00±00±0
模型組9763±45532±33. 1201±37.4M26±4. 1M38 士6^
藥物低劑量組11832±63. 5566±48. 1187±22爭8^22±1.9械*33 ±3. 2
藥物高劑量組12158±22， C20±2. 7械**30 ±3. 7^**
與假手術比較，V:0.05,，0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。
由表1可見，大鼠冠脈結扎后缺血5h，模型組梗塞區(qū)/全心和梗塞
區(qū)/左心室的百分比分別為26土4.1%， 38±6%，與假手術比較差異非 常顯著(P<0.01)。 MLIF高劑量組(0.5mg/kg)梗塞區(qū)/全心和梗塞 區(qū)/左心室的百分比為20±2.7%， 30土3.7%，與模型組比較，差異非 常顯著(PO.01):低劑量組(0.15 mg/kg)梗塞區(qū)/全心和梗塞區(qū)/左 心室的百分比為22±1.9， 33土3.2%，與模型組比較，差異顯著 (P<0.05)。說明ML1F可減小缺血所致大鼠心肌損傷心肌梗塞區(qū)范 圍，對心肌缺血損傷有保護作用。
(二)對急性心肌缺血大鼠血清肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH) 的影響
l.實驗動物SD大鼠，雄性，清潔級，體重200-220克，由中國人 民解放軍第二軍醫(yī)大學實驗動物中心提供(許可證號SCXK (滬)-2007-0003)。
2、 實驗分組
將實驗大鼠隨機分成4組假手術組7只，模型組8只，MLIF 低劑量組8只，MLIF高劑量組9只，給藥劑量按體重計，MLIF低 劑量組給予0.15mg/kg， MLIF高劑量組給予0.5mg/kg,以生理鹽水 為溶劑配成注射液，尾靜脈注射給藥。
3、 大鼠冠狀動脈結扎及血清CK及LDH的測定
大鼠冠狀動脈結扎如前。各組動物在冠脈結扎后5h股動脈取血 3ml，按常規(guī)離心取血清，半自動生化儀測定其血清乳酸脫氫酶 (LDH)、肌酸激酶(CK)活性。
4、 數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學處理實驗數(shù)據(jù)以S土SZ)表示，用SPSS 10.0進行 方差分析，做顯著性檢驗。結果見表2。
表2藥物對冠脈結扎大鼠的肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)的影響(X土SD)
組另l』動物數(shù)CK (IU/L)5 。 〉工
假手術組72633 ±344. 91226±421.3
模型組87680±2380M4736±755. 7M
藥物低劑量組85258 ±2114. 3M''3156 ±864. 1M，
藥物高劑量組95244± 1787. 8M'*3642士817叢"
與假手術比較，AP<0.05,AAP<0.01;與模型組比較，叩<0.05， **P<0.01。
由表2可見，大鼠冠脈結扎后造成心肌缺血，心肌細胞損傷，細胞內 LDH、 CK釋放入血，模型組大鼠血清LDH和CK增加，分別為4736 土 755.7 IU/L和7680 ± 2380IU/L，與假手術比差異非常顯著
(P<0. 01)。高劑量組(0. 5rag/kg)大鼠血清LDH和CK分別為3642 土817 IU/L (P〈0.01)和5244士1787.8 IU/L (P〈0.05); 低劑量組
(0.15mg/kg)大鼠血清LDH和CK分別為3156±864. 1 IU/L(P〈0. 01)和5258±2114.3 IU/L (P<0.05)。說明藥物可降低心肌缺血大鼠血 清LDH和CK含量,對心肌缺血損傷有保護作用。
上述實驗結果表明，MLIF 0.15nig/kg和0. 5mg/kg能降低冠脈結 扎大鼠心肌梗塞面積，降低血清CK及LDH，表明對心肌缺血損傷具 有保護作用。因此，MLIF可用于制備防治心肌缺血藥物。
權利要求
1.多肽小分子MLIF在制備防治心肌缺血藥物中的應用，所說多肽小分子MLIF的氨基酸序列為Met-Gln-Cys-Asn-Ser。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術領域，是一種多肽小分子MLIF用于制備防治心肌缺血藥物的新用途。多肽小分子MLIF的氨基酸序列為Met-Gln-Cys-Asn-Ser。經(jīng)大鼠冠狀動脈結扎造成心肌缺血模型的藥理實驗，多肽小分子MLIF能顯著降低心肌缺血所致大鼠心肌損傷和心肌梗塞區(qū)范圍，表明其具有防治心肌缺血功能，因此可用于制備防治心肌缺血藥物。
文檔編號A61K38/08GK101612384SQ20091005520
公開日2009年12月30日 申請日期2009年7月23日 優(yōu)先權日2009年7月23日
發(fā)明者李鐵軍, 楊鵬遠, 章越凡, 芮耀誠 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學