專利名稱：用于制備膽酸偶聯(lián)物的化合物、其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬藥物化學領域，涉及膽酸類化合物活性硫酯(I)，其制備方法和在制 備膽酸偶聯(lián)物類治療藥物中的應用。
(式中R,, R2, R3表示H、 a-OH、 p-OH、 =0; R,， 112和113可以相同，也可以不同; R4表示2-吡啶基、2-苯并噻唑基)。
膽酸類化合物廣泛存在于人和哺乳動物的膽汁中，為膽汁的主要成分，通過膽 酸類化合物的腸肝循環(huán)可促進脂肪及脂溶性維生素的吸收。在人體肝臟中，膽酸類 化合物由膽固醇合成，當人體腸肝循環(huán)受到一些疾病的干擾，使膽酸類化合物的生
物代謝受到阻礙，可引起多種肝膽系統(tǒng)疾病，如膽汁淤積、脂肪肝、膽固醇型結
石、膽汁反流性胃炎、膽源性胰腺炎、高脂血癥、及各型肝炎等。目前，臨床上對 于這類肝膽系統(tǒng)疾病的治療一般是給予外源性的膽酸類化合物或其氨基酸偶合物。 在天然膽汁中，膽酸類化合物多與各種氨基酸以偶合物形式存在，常見的為?；悄?汁酸和甘氨膽汁酸，而在許多動物膽汁中又以?；悄懼岣鼮槎嘁?，且它們大多為 鈉鹽。由于這類結合型膽汁酸在動物膽汁中含量較少，其大量來源有限，并且結合 型膽汁酸為親水性化合物，提取分離困難，成本較高。因此，目前臨床上使用的膽
酸偶聯(lián)物類治療藥物均為通過化學合成得到，己有文獻■/h》W i^e^c/2 1973， 14, 367; /丄/pW i ewa/r/z 1977, 18, 404; J丄—W We^flrc/z 1989， 30, 771;爿cto C&附 5"函d 1963, 17, 173;所離g麵'c c&C7z畫勿1996, 4(6), 885; 一/e" 1995， 861;丄—tfe 1997, 32(7)，775;,/^wOzewSoc 1937， 59, 2532; t/S 5362891; "S 5508453;
背景技術：
7S 5565587;少^^"^OTJ^^^吉2003， 34 (12)， 594; ^房秀學染,吉1997, 32 (4)， 236; GV 1896091等描述了這類膽酸偶聯(lián)物類治療藥物的制備方法，這些方法按照 膽酸類化合物與氨基酸類化合物形成酰胺鍵的不同策略，可分為以下幾種方法-方法一
膽酸類化合物分子中的羧基用氯甲酸酯、N-乙氧羰基-2-乙氧基-l，2-二氫喹啉 (EEDQ)、碳二亞胺(DCC、 EDCI)、氰基磷酸二乙酯(DEPC)等縮合劑活化， 形成混合酸酐或活性酯，然后再與牛磺酸類或甘氨酸酯類化合物反應，經后處理得 膽酸偶聯(lián)物類治療藥物。 方法二.-
膽酸類化合物在濃硫酸催化下與醇成酯，與水合肼反應得相應的酰肼，經重氮 化生成酰基疊氮化合物后再與牛磺酸類或甘氨酸酯類化合物反應，經常規(guī)后處理， 得膽酸偶聯(lián)物類治療藥物。
方法三
將膽酸類化合物母環(huán)上的羥基用甲?；椒ūＷo，然后與氯化亞砜作用生成相 應的酰氯，再與牛磺酸類或甘氨酸酯類化合物反應，采用常規(guī)后處理方法，得膽酸 偶聯(lián)物類治療藥物。
方法四
膽酸類化合物與氯甲酸酯作用，形成混合酸酐后，與酚類化合物(如對硝基 苯酚、對羥基苯丙酮等)反應，形成相應的膽酸類化合物活性酚酯，再與?；撬犷?或甘氨酸酯類化合物反應，經后處理得膽酸偶聯(lián)物類治療藥物。
上述合成方法存在使用原料價格較高、且不易得(如EEDQ、 DEPC、對羥基 苯丙酮等)；反應條件苛刻(需絕對無水溶劑)；反應歩驟多、總收率偏低；制備 過程中"三廢"排放嚴重；反應操作及后處理過程繁瑣等不足；使膽酸偶聯(lián)物類治 療藥物的制備成本較高，工業(yè)規(guī)模制備受到限制。因此，本領域仍需開發(fā)原料價廉 易得、反應條件溫和、操作簡便、收率高、"綠色環(huán)保"的膽酸偶聯(lián)物類治療藥物 合成方法
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于公開一種新型的用于制備膽酸偶聯(lián)物類治療藥物的關鍵中間 體~~膽酸類化合物活性硫酯(I);
本發(fā)明的另一目的在于公丌該類新型化合物的制備方法；
本發(fā)明的第三個目的在于公開該類關鍵中間體在制備膽酸偶聯(lián)物類治療藥物中 的應用。
本發(fā)明所提供的膽酸類化合物活性硫酯(I)的化學結構式為
O
(式中R,， R2, R3表示H、 a-OH、 p-OH、 =0; Rh 112和113可以相同，也可以不同； R4表示2-吡啶基、2-苯并噻唑基)。
本發(fā)明所提出的膽酸類化合物活性硫酯(I)可利用膽酸類化合物與相應巰基化 合物或二硫化合物在縮合劑存在條件下制備得到，所得活性硫酯(I)可用于制備膽 酸偶聯(lián)物類治療藥物，其合成路線如下(式中Rp R2， R3表示H、 a-OH、 P-OH、 =0; R,， R2和R3可以相同，也可以不 同；R4表示2-吡啶基、2-苯并噻嘩基；R5表示C, Q脂肪醇)
上述化學反應式給出的膽酸類化合物活性硫酯(I)及其用于制備膽酸偶聯(lián)物類 治療藥物的合成方法，其具體步驟為
A) 以膽酸類化合物為起始原料，與巰基化合物或二硫化合物經縮合反應，制得 膽酸類化合物活性硫酯(I);
B) 由歩驟A)得到的活性硫酯(I)與?；撬犷惢衔锇l(fā)生氨解反應，得牛磺酸 膽酸類化合物偶聯(lián)物(II);
C) 由歩驟A)得到的活性硫酯(I)與甘氨酸酯類化合物發(fā)生氨解反應，得甘氨 酸酯膽酸類化合物偶聯(lián)物，經水解后得甘氨酸膽酸類化合物偶聯(lián)物(III)。
本合成方法的各歩驟具體描述如下
歩驟A):膽酸類化合物與巰基化合物或二硫化合物在堿性和適當溶劑條件下，
經縮合劑作用發(fā)生縮合反應，得膽酸類化合物活性硫酯(I)。其中膽酸類化合物包
括膽酸(R尸H， R2=a-OH， R3=a-OH)、去氧膽酸(R尸H ， R2=H ， R3=a-OH )、石膽酸(R,=H ， R2=H ， R3=H ) 、 7-酮基石膽酸(R^H ， R2=CO ， R3=H)、豬膽酸(Rfa-OH， R2=H， R3=a-OH)、豬去氧膽酸(R尸a-OH ， R2=H， R3=H)、鵝去氧膽酸(R產H， R2=a-OH， R3=H)、熊去氧膽酸(R產H， R尸卩-OH， R3=H):
巰基化合物包括2-巰基吡啶、2-巰基苯并噻嗶；二硫化合物包括2,2'-二硫二
吡啶、2，2'-二硫二苯并噻唑；
縮合反應所用溶劑為乙醚、乙腈、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞 砜、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、二氯甲垸、氯仿、C3 Cs脂肪酮、苯、正庚垸、甲
苯，優(yōu)選溶劑為乙腈、四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、甲苯；
膽酸類化合物與巰基化合物或二硫化合物的摩爾投料比為1.0:1.0~2.0,優(yōu)選摩 爾投料比為1.0: 1.0 1.3;
縮合反應所用堿為有機叔胺類或季銨堿類(如三乙胺、三丁胺、三辛胺、吡
啶、N.N-二甲基-a-苯乙胺、4-甲基嗎啉、四丁基氫氧化銨)，優(yōu)選堿為三乙胺、N-甲基嗎啉；堿與膽酸類化合物的摩爾投料比為1.0~4.5丄0，優(yōu)選摩爾投料比為 1.0 2.0:1.0;
反應所用縮合劑為三芳基膦類化合物或亞磷酸酯類化合物，優(yōu)選縮合劑為三苯 基膦、亞磷酸三乙酯、亞磷酸三丁酯；所用縮合劑與膽酸類化合物的摩爾投料比為 1.0 2.5:1.0，優(yōu)選摩爾投料比為1.(K2.0:1.0;
縮合反應溫度為0 1(XTC，優(yōu)選反應溫度為室溫 55'C;縮合反應時間為30分 鐘 12小時，優(yōu)選反應時間為1~3小時。
歩驟B):活性硫酯(I)與?；撬犷惢衔镌趬A性條件下發(fā)生氨解反應，得牛 磺酸膽酸類化合物偶聯(lián)物(II)。其中活性硫酯(I)與牛磺酸類化合物的摩爾投料 比為1.0:1.0~2.0，優(yōu)選摩爾投料比為1.0: 1.0~1.5;氨解反應所用堿為堿金屬或堿土 金屬氫氧化物、堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、堿金屬或堿土金屬碳酸氫鹽、有機叔胺 類或季銨堿類(如三乙胺、三丁胺、三辛胺、吡啶、N,N-二甲基-a-苯乙胺、4-甲 基嗎啉、四丁基氫氧化銨)，優(yōu)選堿為碳酸氫鈉、碳酸鉀、三乙胺、4-甲基嗎 啉；堿用量與?；撬犷惢衔锏哪柾读媳葹?.0 4.5:1.0，優(yōu)選摩爾投料比為 1.0~2.0: 1.0;氨解反應溫度為(M00。C，優(yōu)選反應溫度為室溫 35。C;氨解反應時間 為2~48小時，優(yōu)選反應時間為4~12小時。
歩驟C):活性硫酯(I)與甘氨酸酯類化合物在堿性條件下發(fā)生氨解反應，得 甘氨酸酯膽酸類化合物偶聯(lián)物，經水解和酸中和得甘氨酸膽酸類化合物偶聯(lián)物
(III)。其中甘氨酸酯類化合物包括甘氨酸與C廣Q脂肪醇所形成的酯(如甲 酯、乙酯、丙酯、芐酯、叔丁酯等)及甘氨酸酯的無機酸鹽(如鹽酸鹽、硫酸鹽 等)和有機酸鹽(如對甲苯磺酸鹽、甲烷磺酸鹽等)；活性硫酯(I)與甘氨酸酯 類化合物的摩爾投料比為1.0:1.0~2.0，優(yōu)選摩爾投料比為1.0: L0 1.5;氨解反應所 用堿為堿金屬或堿土金屬氫氧化物、堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、堿金屬或堿土金屬 碳酸氫鹽、有機叔胺類或季鈸堿類(如三乙胺、三丁胺、三辛胺、吡啶、N,N-二 甲基-a-苯乙胺、4-甲基嗎啉、四丁基氫氧化銨)，優(yōu)選堿為碳酸氫鈉、碳酸鉀、 三乙胺、4-甲基嗎啉；堿用量與甘氨酸酯類化合物的摩爾投料比為1.0 4.5:1.0，優(yōu) 選摩爾投料比為1.0-2.0: 1.0;氨解反應溫度為0~100°C，優(yōu)選反應溫度為室溫 35 °C;氨解反應時間為2 48小時，優(yōu)選反應時間為4 20小時；所得甘氨酸酯膽酸類化合物偶聯(lián)物經無機堿水溶液與醇的混合溶液水解，再用酸中和得甘氨膽酸偶聯(lián)物 (III)。
本發(fā)明的優(yōu)點在于與現(xiàn)有技術相比，該方法所用原料價廉易得、反應條件溫 和、反應所需溶劑不需無水處理，操作簡便、成本低、收率高、"三廢"污染少， 適合大量制備膽酸偶聯(lián)物類治療藥物。
具體實施例方式
實施例1熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯的制備
在反應瓶中加入熊去氧膽酸15.7克(0.04 mol)、亞磷酸三乙酯8.0克(0.048 mol) 、 2,2'-二硫二苯并噻唑16.0克(0.048 mol)和乙酸乙酯100毫升，室溫攪拌反 應1小時后，滴加7.0毫升三乙胺溶于20毫升乙酸乙酯的溶液，滴畢，升溫至35 4(TC反應2.5小時，反應畢，冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑，柱層析純化(洗脫劑
氯仿丙酮乙酸=20: 1: 1 (v/v))，得熊去氧膽酸-2-苯并噻嘩硫酯的淡黃色油狀
液體19.3克，收率89.0%。 'HNMR(CDC13)5: 8.03(dd, J尸0.8Hz, J產8.0Hz， 1H， Ar-H4)， 7.91(dd， J尸0.8Hz， J2=7.2Hz, 1H， Ar-H7), 7.52~7.41(m， 2H, Ar-H5, Ar-H6)， 3.67~3.60(m, 2H, C7-H, C3-H), 2.87~2.80(m, 1H， C23-H)， 2.78 2.65(m， 1H, C23-H), 0.98(d, ^6.0Hz， 2H, CH3-21)， 0.94(s, CH3-19), 0.68(s， CH3-18); ESI-MSO外564.3(M+Na)十，542.4(M+H)+。 實施例2?；切苋パ跄懰岬闹苽?br> 將?；撬?.0克(0.024 mol)、氫氧化鈉0.88克(0.024 mol)和水40毫升加入 反應瓶中，攪拌均勻，冰水浴冷卻至0~10°C，滴加入熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯 10.8克(0.02 mol)溶于30毫升四氫呋喃的溶液，室溫攪拌反應8小時，反應畢， 蒸除有機溶劑，用10。/。鹽酸調節(jié)水溶液pH至3 4，乙酸乙酯2x20毫升萃取，所得 水層減壓濃縮剩約20毫升，用濃鹽酸調至pH 1~2，加入少量晶種，于0 5'C攪拌2 小時，抽濾，濾餅用少量丙酮洗滌，再用丙酮-水(12: 1)重結晶，得?；切苋パ?膽酸白色粉末固體7.5克，mpl44 145。C， [a]^= +43.2°(c =2.0， EtOH)，收率 78.6%。純度99.2% (HPLC歸一化法)。'HNMR(400MHz, D20)S: 3.65 3.62(m, 2H， CrH， C3-H)， 3.60(t, J=7.2Hz, 2H， CH2NH), 3,1 l(t, J=7.2Hz， 2H, CHiSOsH), 2.37 2.33(m, 1H, C23-H), 2.24 2.21(m, 1H， C23-H), 2.08~2.05(m, 1H, Cl2-H(3)， 1.98~1.75(m, 5H, C6-Ha, C15-Ha， C6-Hp， C廣Ha， C22-Hp)， 1.69~1.58(m， 5H, C2-Hp， C4-Ha, C6-Ha， C4-Hp, C5-Hp)，1.55~1.43(m， 5H, C8-Hp, C9-Ha， Cn陽Ha, C15-H|3， C20-H), L42 1.22(m， 6H, C22-Ha, C16-Hp, Cn-Hp， C14-Ha， C2-Ha, C12-Ha)， 1.17~1.07(m， 2H， C17-Ha， C廣Hp)， l.Ol(d， T^4.2Hz， 3H, CH3-21), 0.99(s， 3H， CH3-19)， 0.75(s， 3H, CH3-18); 13CNMR(100MHz, D20)S: 179.2, 73.5, 73.4， 58.2， 57.3, 52.5, 46.1， 45.7, 44.9, 42.8, 41.9, 39.4， 38.8, 37.9， 37.8， 37.6, 36.4, 35.4, 34.4， 32.3, 31.0， 29.2, 26.0, 24.0, 21.1, 14.7; ESI-MS(m/z， -Q): 498.3(M_H)—。 實施例3甘氨熊去氧膽酸的制備
在反應瓶中加入甘氨酸乙酯鹽酸鹽3.35克(0.024 mol)、三乙胺3.34毫升 (0.024 mol)和乙酸乙酯35毫升，攪拌均勻后，置冰水浴冷卻至0 10'C，滴加入 熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯10.8克(0.02 mol)溶于乙酸乙酯30毫升的溶液，室溫 攪拌反應過夜，反應畢，濾除不溶物，乙酸乙酯溶液依次用5n/。NaOH水溶液36毫 升、10%鹽酸水溶液30毫升、飽和NaCl水溶液30毫升洗滌，無水Na2S04干燥后 減壓蒸除溶劑，得熊去氧膽酰甘氨酸乙酯偶聯(lián)物粗品。所得粗品溶于氫氧化鈉0.8 克(0.02 mol)、水20毫升和甲醇30毫升的混合溶液中，室溫攪拌反應3小時，反 應結束后，減壓蒸除甲醇，殘余物中加入40毫升去離子水，攪拌均勻后，用10%鹽 酸水溶液調節(jié)混合液pH至強酸性，過濾，濾餅用少量冰水洗滌，干燥，得甘氨熊 去氧膽酸白色粉水固體7.33克，mp230 232。C， [oc]2》+50.5°(c =1.0, EtOH)，收率 81.6%，純度99.3%(HPLC歸一化法)；'HNMR(400MHz， DMSO-S: 12.45(brs， 1H, COOH)， 8.09(t, J=6.0Hz, 1H， NHCH2COOH)， 3.70(d, J=6.0Hz， 2H， CH2COOH)， 0.89(d, J=6.4Hz, 3H， CH3-21)， 0.87(s， 3H, CH3-19), 0.61(s， 3H， CH3-18); ESI-MS(m/z, -Q): 448舉-町。
實施例4鵝去氧膽酸-2-巰基吡啶酯的制備
操作過程同實施例1，只是將熊去氧膽酸用鵝去氧膽酸替代，亞磷酸三乙酯用 三苯基膦替代，2,2'-二硫二苯并噻唑用2,2'-二硫二吡啶替代，乙酸乙酯用四氫呋喃 替代，得鵝去氧膽酸-2-巰基吡啶酯的淡黃色油狀液體，收率78.7%: ESI-MS(m/z): 486.1(M+H)+。
實施例5牛磺鵝去氧膽酸的制備
操作過程同實施例2，只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用鵝去氧膽酸-2-巰基 吡啶酯替代，得?；蛆Z去氧膽酸白色粉末固體，mpl33 135"C，收率76.2%，純度
1098.9% (HPLC歸一化法)。'HNMR(D20)5: 3.87(m, 1H, C7-H), 3,57(t, /=7.2Hz， 2H, CH2NH), 3.48(m, 1H， C3-H), 3.07(t,片2Hz， 2H, CHiSOsH), 2.34 2.29(m, IH, C23-H), 2.19~2.16(m, 1H， C23-H), 2.14~2.07(m, IH, C4-Ha), 1.96~1.94(m， 3H, C'6-Ha， C12-Hp, C6-Hp), 1.86 1.82(m, 2H， C'-Ha， C9-Ha), 1.72~1.62(m, 4H, C15-Ha, C22-Hp， C4-Hp， C2-H(3)， 1.59 1.51(m, 2H, C6-Ha， Cu-Ha;), 1.49 1.32(m， 6H, C8-H[3, C20-H, C22-Ha, CI4-Ha, C5-Hp，C2-Ha), lJ0 1.21(m, 4H, C12-Ha， C16-% C"-Hp, C17-Ha),1.12~0.98(m, 2H, C15-Hp，C廣Hp)， 0,97(d, J=4.2Hz, 3H， CH3-21)， 0.92(s， 3H， CH3-19)， (X67(s， 3H， CH3-18); 13CNMR(100MHz, D20)5: 179.5， 74.7, 71.2， 58.0， 53.1， 52.9, 45.3, 44.5, 42.5, 42.4, 41.6， 38.5, 38.3， 38.0， 37.7, 37.4, 35.7, 35.5, 34.7, 32.9, 30.1， 26.6, 26.0, 23.8， 21.3, 14.8; ESI-MS(肌/z, -Q): 498.1 (M-H)-。
實施例6甘氨鵝去氧膽酸的制備
操作過程同實施例3，只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用鵝去氧膽酸-2-巰基 吡啶酯替代，得甘氨鵝去氧膽酸白色粉末固體，mpl68 170'C，收率77.3%， [a^= +10.9°(c =1.0, EtOH)， 'HNMR(400MHz, DMSO-c/6) 5: 12.40(brs, 1H， COOH), 8.09(t, J=6.0Hz， 1H, NHCH2CO OH)， 3.70(d， J=6.0Hz, 2H, CH2COOH), 0.89(d, J=6.4Hz， 3H, CH3-21)， 0.84(s， 3H, CH3-19), 0.60(s, 3H, CH3-18); ESI-MS(m/z, -Q): 448.1(M—H)扁。
實施例7豬去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯的制備
操作過程同實施例1，只是將熊去氧膽酸用豬去氧膽酸替代，亞磷酸三乙酯用 三苯基膦替代，2,2'-二硫二苯并噻唑用2-巰基苯并噻唑替代，乙酸乙酯用乙腈替 代，得豬去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯的淡黃色油狀液體，收率85.8%; ESI-MS(w/z): 542.2(M+H)+。
實施例8?；秦i去氧膽酸的制備
操作過程同實施例2，只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用豬去氧膽酸-2-苯并 噻唑硫酯替代，得?；秦i去氧膽酸白色粉末固體，mpl98 20(TC， [a]^=十6.5。(c =0.5， EtOH)，收率75.26%，純度98.9% (HPLC歸一化法)。'HNMR(D20)5: 4.12(m， 1H, C6-H), 3.69(m, 1H, C3-H), 3,60(t， J=7.2Hz， 2H， CH2NH), 3.1 l(t, /=7,2Hz， 2H, CH2S03H), 2J9 2.31(m， 1H, C23-H), 2.25 2.16(m, IH, C23-H), 2.07 1.91(m， 2H， C4-Ha， Cl6-Ha,)， 1.83~1.76(m， 3H)， 1.75~1.66(m， 4H), 1.53 l,32(m, 7H), 1.31 U7(m， 8H), L02(d, J=4.8 Hz, 3H, CH3-21), 0.99(s， 3H, CH3-19)， 0'73(s， 3H， CH3-18); '3CNMR(100MHz, D20)5:179.4, 74.0, 70.8, 58.7, 52.8, 50.7， 45.7, 43.0, 42.7, 38.7, 38.5, 38.3, 38.2, 37.8， 36.8， 35.9, 34.7, 33.2, 32.6, 31.1, 30.7, 27.1， 26.5, 23.9， 21.4, 15.1; ESI-MS(m/z, -Q): 498.1(M-町。 實施例9甘氨豬去氧膽酸的制備
操作過程同實施例3，只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用豬去氧膽酸-2-苯并 噻唑硫酯替代，得甘氨豬去氧膽酸白色粉末固體，mpl63 165'C，收率83.0%， [a]2D° =+7.0。(c =1.0， EtOH)， 'HNMR(400MHz， DMSO-^) 5: 12.43(brs, 1H, COOH), 8.08(t, J=6.0Hz， 1H, NHCH2CO OH), 3.71(d, J=6.0Hz, 2H, CH2COOH), 0.89(d， J=6.4Hz， 3H, CH3-21), 0.84(s, 3H, CH3-19), 0.61(s, 3H, CH3-18); ESI-MS(m/z, -Q): 448.3(M_H).。
實施例10膽酸-2-苯并噻唑硫酯的制備
操作過程同實施例1，只是將熊去氧膽酸用膽酸替代，亞磷酸三乙酯用三苯基 膦替代，乙酸乙酯用四氫呋喃替代，得膽酸-2-苯并噻唑硫酯的淡黃色油狀液體，收 率83.6%; ESI-MS(w/z): 558.0(M+H)+。
實施例ll?；悄懰岬闹苽?br> 操作過程同實施例2，只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用膽酸-2-苯并噻唑硫 酯替代，得牛磺膽酸白色粉木固體，mpl25 128。C，
2D°=+31.9°(c =1.0, EtOH)，收 率79.7%; 'HNMR(400MHz, DMSO陽^) S: 12.35(brs, 1H， COOH), 8.09(t, J=6.0Hz， 1H, NHCH2CO OH)， 3.70(d, J:6.0Hz， 2H, CH2COOH), 0.93(d, J=6.4Hz, 3H， CH3-21), 0.81(s, 3H， CH3-19), 0.59(s， 3H， CH3-18); ESI-MS—, -Q): 464.2(M-H).。
實施例13去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯的制備操作過程同實施例1，只是將熊去氧膽酸用去氧膽酸替代，亞磷酸三乙酯用三 苯基膦替代，乙酸乙酯用四氫呋喃替代，得去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯的淡黃色油狀 液體，收率80.7%; ESI-MS—/z): 564翠+Na)+。
實施例14?；侨パ跄懰岬闹苽?br> 操作過程同實施例2，只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用去氧膽酸-2-苯并噻 唑硫酯替代，得?；侨パ跄懰岚咨坌g固體，mpl84 186'C， [a]2DQ= +29.2°(c =1.0， H20)，收率75.9%。 'HNMR(D20)5: 4.05(m, 1H, C12-H), 3.60(m， 1H, C3-H), 3.58(t， ,/=7.2Hz， 2H， CH2NH), 3.09(t，片2Hz， 2H, CH2S03H)， 2.40 2.31(m, IH, C23-H)， 2.27~2.16(m， 1H， C23-H), l.OO(d, J=4.8 Hz, 3H, CH3-21), 0.90(s， 3H， CH3-19)， 0.69(s, 3H， CH3-18); 13CNMR(100MHz, D20)5: 179.6, 75.7， 74.2, 52.8, 50.7， 49.1， 49.0， 45.1， 38.7， 38.4， 38.3， 38.2, 38.1, 36.8, 36.2， 35.0, 34.4， 32.3, 30.9, 30.3， 30.2， 29.0, 26.7, 26.0， 19.5， 15.4; ESI-MS(w/z, -Q): 498.0(M-H)—。
實施例15甘氨去氧膽酸的制備
操作過程同頭'施例3，只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用去氧膽酸-2-苯并噻 嘩硫酯替代，得甘氨去氧膽酸白色粉水固體，mpl87 189。C， [a]^= +47.2°(c =2.0， EtOH)，收率72.3%。 'HNMR(400MHz, DMSO-^;) 5: 12.35 (brs， 1H, COOH), 8.1 l(t， 7=6.0Hz, 1H, NHCH2COOH), 3.74(d, ,/=6.0Hz, 2H， CH2COOH)， l.OO(d, J=6.4Hz, 3H， CH3-21), 0.86(s, 3H, CH3-19), 0.63(s, 3H， CH3-18); ESI-MS—, -Q): 448.3(M_H).。
實施例16甘氨石膽酸的制備
操作過程同實施例3，只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用石膽酸-2-苯并噻唑 硫酯替代，得甘氨石膽酸白色粉末固體，mp206 208'C， [cx]2DQ= +32.3°(c =1.0， EtOH)，收率80.2%; 'HNMR(400MHz， DMSO-^) 5: 12.45(brs， 1H, COOH), 8.09(t, 7=6.0Hz, 1H， NHCH2CO OH), 3.70(d, ,/=6.0Hz, 2H, CH2COOH)， 0.89(d， J=6.4Hz, 3H, CH3-21), 0.87(s, 3H， CH3-19), 0.61(s, 3H， CH—r18); ESI-MS(w/z, -Q): 432翠-町。
實施例17?；?7-酮基石膽酸的制備
操作過程同實施例2,只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用7-酮基石膽酸-2-苯 并噻唑硫酯替代，得?；?-酮基石膽酸白色粉末固體，mp225 226'C(dec)， [a|2DQ=-11.8°(c =0.5, EtOH)，收率84.5%; 'HNMR(400MHz, DMSO-^) S: 3.65(t, J=6.8Hz， 2R
13CH2S03H), 3.16(t,聲6.8Hz, 2H， NHCH2)， 1.31(s, 3H, CH3-19), 1.03(d,力6.4Hz， 3H, CH3-21), 0,76(s, 3H, CH3-18); ESI陽MS(附/z, -Q): 496.1(M-H)-。 實施例18甘氨-7-酮基石膽酸的制備
操作過程同實施例3,只是將熊去氧膽酸-2-苯并噻唑硫酯用7-酮基石膽酸-2-苯 并噻唑硫酯替代，得甘氨7-酮基石膽酸白色粉木固體，mp212 214'C，收率86.3 %， [a]2》-23.1°(c =1.0, E認)，'HNMR(400MHz， DMSO-^) S: 12.41(brs, 1H, COO H), 8.08(t, J^6.0Hz, 1H, NHCH2CO OH), 3.71(d, ./=6.0Hz, 2H， CH2COOH), 1.14(s， 3H， CH3-19)， 0.89(d, J=6.4Hz， 3H， CHr21)， 0.61(s， 3H, CH3-18) ; ESI-MS(m/z, -Q): 446.2(M-H)-。
本發(fā)明不限于上述實施例
權利要求
1. 一類具有如下通式的膽酸類化合物活性硫酯(I)其特征在于R1，R2，R3表示H、α-OH、β-OH、＝O；R1，R2和R3可以相同，也可以不同；R4表示2-吡啶基、2-苯并噻唑基。
2. 如權利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于以膽酸類化合物和巰基化合物 或二硫化合物為起始原料，在堿性條件下，經縮合反應得活性硫酯(I)。
3. 如權利要求2所述化合物的制備方法，其特征在于膽酸類化合物為膽酸、去氧 膽酸、石膽酸、7-酮基石膽酸、豬膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸；巰基化合物為2-巰基吡啶、2-巰基苯并噻唑；二硫化合物為2，2'-二硫二吡啶、2,2'-二硫二苯并噻唑。
4. 如權利要求2所述化合物的制備方法，其特征在于縮合反應所用溶劑為乙醚、乙腈、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、二 氯甲烷、氯仿、C廣Q脂肪酮、苯、正庚垸、甲苯。
5. 如權利要求2所述化合物的制備方法，其特征在于膽酸類化合物與巰基化合物或 二硫化合物的摩爾投料比為1.0:1.0 2.0;縮合反應所用堿為有機叔胺類或季銨堿 類；堿與膽酸類化合物的摩爾投料比為1.0 4.5:1.0。
6. 如權利要求2所述化合物的制備方法，其特征在于反應所用縮合劑為三芳基膦類 化合物或亞磷酸酯類化合物；縮合劑與膽酸類化合物的摩爾投料比為1.0-2.5:1.0。
7. 如權利要求2所述化合物的制備方法，其特征在于縮合反應溫度為0 10(TC;縮 合反應時間為30分鐘~12小時。
8. —種制備膽酸偶聯(lián)物類治療藥物的方法，其特征在于，包括如下步驟B)膽酸類化合物活性硫酯(I)與牛磺酸類化合物發(fā)生氨解反應，得?；撬崮懰犷?化合物偶聯(lián)物(II);C)膽酸類化合物活性硫酯(I)與甘氨酸酯類化合物發(fā)生氨解反應，得甘氨酸酯 膽酸類化合物偶聯(lián)物，經水解和酸中和得甘氨酸膽酸類化合物偶聯(lián)物(III)。
9. 如權利要求8所述膽酸偶聯(lián)物類治療藥物的制備方法，其特征在于，所述歩驟B)中活性硫酯(I)與牛磺酸類化合物的摩爾投料比為1.0丄0 2.0;氨解反應所用堿為堿金屬或堿土金屬氫氧化物、堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、堿金屬或堿土金屬碳酸氫鹽、有機叔胺類或季銨堿類；堿用量與?；撬犷惢衔锏哪柾读媳葹?1.0 4.5:1.0;氨解反應溫度為0~100°C;氨解反應時間為2 48小時；所述歩驟C)中甘氨酸酯類化合物為甘氨酸與C, C8脂肪醇所形成的酯及甘氨酸酯的無機酸鹽 和有機酸鹽；活性硫酯(I)與甘氨酸酯類化合物的摩爾投料比為1.0丄0 2.0;氨解反應所用堿為堿金屬或堿土金屬氫氧化物、堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、堿金屬或堿土金屬碳酸氫鹽、有機叔胺類或季銨堿類；堿用量與甘氨酸酯類化合物的摩 爾投料比為1.0 4.5:1.0;氨解反應溫度為0~100°C;氨解反應時間為2~48小時。
10. 如權利要求1所述的化合物在制備膽酸偶聯(lián)物類治療藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了膽酸類化合物活性硫酯(I)，還公開了該類化合物的制備方法，及其在制備膽酸偶聯(lián)物類治療藥物中的應用。(式中R₁，R₂，R₃表示H、α-OH、β-OH、＝O；R₁，R₂和R₃可以相同，也可以不同；R₄表示2-吡啶基、2-苯并噻唑基)。
文檔編號A61P3/06GK101503454SQ200910058470
公開日2009年8月12日 申請日期2009年3月2日 優(yōu)先權日2009年3月2日
發(fā)明者怡 沈, 王海龍, 勇 鄧, 鐘裕國 申請人:四川大學