專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向載藥系統(tǒng)及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥品領(lǐng)域，具體涉及一種腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)、該載藥系統(tǒng)的制備方法及該載藥系統(tǒng)對(duì)抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：腫瘤(癌癥)的發(fā)病率正在不斷地上升，己成為嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)疾病?；熥鳛槟[瘤治療的重要手段之一，在惡性腫瘤治療過(guò)程中具有手術(shù)和放療不能代替的地位。但現(xiàn)有的抗腫瘤藥物選擇性不高，既殺傷腫瘤細(xì)胞，也可能損害體內(nèi)某些類(lèi)型的正常細(xì)胞，因而在治療中常出現(xiàn)較明顯的毒性反應(yīng)，影響療效?；熕幬镒鳛橹委熌[瘤的有效制劑已被公認(rèn)，但要能有效殺傷腫瘤細(xì)胞，必須使細(xì)胞內(nèi)積聚的藥物分子達(dá)到相當(dāng)數(shù)量。研究表明即使是用最強(qiáng)的藥物殺傷最敏感的腫瘤細(xì)胞，靶細(xì)胞內(nèi)積聚的藥物分子也應(yīng)達(dá)到106個(gè)以上才能獲得有效的殺傷。雖然提高劑量可以滿足這一要求，但隨著藥物劑量的加大，在療效提高的同時(shí)由于藥物的無(wú)選擇性而會(huì)引起嚴(yán)重的毒副作用。而藥物的耙向治療可解決這一難題。近幾十年來(lái)，癌癥的靶向治療技術(shù)研究已得到廣泛重視。靶向治療能在病灶部位保持相對(duì)較高的藥物濃度，延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間，提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力，減輕藥物的不良反應(yīng)，從而減輕患者的痛苦。因此，將靶向制劑用于腫瘤化療具有明顯的優(yōu)勢(shì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)，該載藥系統(tǒng)用于腫瘤化療時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì)，其在殺傷高表達(dá)葉酸受體的腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常組織的毒性較低，且該載藥系統(tǒng)制備方法簡(jiǎn)單，易于實(shí)施。本發(fā)明按下述技術(shù)方案解決其技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明提供的腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)，是一種以長(zhǎng)春新堿作為活性藥物，所需輔料藥物牛血清白蛋白為載體材料，葉酸為靶頭，利用葉酸對(duì)葉酸受體的特異性耙向作用，將納米粒靶向到高度表達(dá)葉酸受體的腫瘤細(xì)胞，制備而成葉酸受體介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)。按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的有效成分含量為長(zhǎng)舂新堿510份，所需其他制備材料牛血清白蛋白100200份，葉酸200400份，25%戊二醛0.050.10份，乙醇0.0050.01份，無(wú)水二甲基亞砜515份，二環(huán)己基碳二亞胺80100份，N-羥基琥珀酰亞胺7080份及三乙胺0.40.6份，無(wú)水丙酮100200份，乙醚100200份，聚丁二酸丁二醇酯50100份。本發(fā)明提供的腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)，其制備方法包括以下步驟-(1)葉酸活性酯的制備稱(chēng)取200400份葉酸，溶于515份無(wú)水二甲基亞砜中，再加入80100份二環(huán)己基碳二亞胺和7080份N-羥基琥珀酰亞胺及0.40.6份三乙胺，283(TC反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾除去反應(yīng)副產(chǎn)物，減壓蒸餾除去部分溶劑，在攪拌中逐滴滴入冰冷的含30%丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得到黃色沉淀物，過(guò)濾，再經(jīng)無(wú)水乙醚洗滌數(shù)遍后真空干燥，得到葉酸活性酯；(2)葉酸-牛血清白蛋白的制備先將牛血清白蛋白溶于定量pH為1011的碳酸鹽緩沖液中，加入適量葉酸活性酯的無(wú)水二甲基亞砜，室溫?cái)嚢?，反?yīng)35小時(shí)后，將得到的產(chǎn)物過(guò)葡聚糖凝膠S印hadexG-25柱以pH為78的聚丁二酸丁二醇酯緩沖溶液進(jìn)行洗滌，再按照0.52ml*min-1的流速分段收集流出液，前段淡黃色有乳光部份經(jīng)冷凍干燥得到葉酸-牛血清白蛋白；(3)膠體混懸液的制備按重量份計(jì)，取制得的葉酸-牛血清白蛋白100200份，溶于緩沖溶液中，加入長(zhǎng)春新堿510份，高速攪拌，緩慢滴加無(wú)水乙醇；溶液渾濁后，繼續(xù)緩慢滴加0.050.IO份交聯(lián)劑戊二醛溶液，攪拌固化，減壓蒸餾除去乙醇，得到具有腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的膠體混懸液，該膠體混懸液作為腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)。在制備葉酸活性酯過(guò)程中可采用以下的方法稱(chēng)取300份葉酸，溶于10份無(wú)水二甲基亞砜中，再加入90份二環(huán)己基碳二亞胺和75份N-羥基琥珀酰亞胺及0.5份三乙胺，3CTC反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾除去反應(yīng)副產(chǎn)物，減壓蒸餾除去部分溶劑，在攪拌中逐滴滴入冰冷的含30%丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得到黃色沉淀物，過(guò)濾，無(wú)水乙醚洗滌數(shù)遍后真空干燥，得到葉酸活性酯。在制備葉酸-牛血清白蛋白過(guò)程中可采用以下方法將牛血清白蛋白100200份溶于pH為10.5的碳酸鹽緩沖液中，加入200400份葉酸活性酯的無(wú)水二甲基亞砜，室溫?cái)嚢?，反?yīng)數(shù)小時(shí)后，將得到的過(guò)葡聚糖凝膠S印hadexG-25柱以pH為7.4的聚丁二酸丁二醇酯緩沖溶液進(jìn)行洗滌，再按照l(shuí)ml，min-l的流速分段收集流出液，前段淡黃色有乳光部份經(jīng)冷凍干燥得到葉酸-牛血清白蛋白。本發(fā)明提供的腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)，其用于以下方面該載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞所具有的主動(dòng)耙向作用，葉酸受體一般在正常組織中的表達(dá)高度保守，只在脈絡(luò)叢、胎盤(pán)、肺、腸以及腎等一些正常上皮組織中有不同的表達(dá)，且僅分布于上皮細(xì)胞極化表面，不易接近血中的葉酸偶聯(lián)物，細(xì)胞對(duì)藥物的攝取則是通過(guò)腫瘤細(xì)胞表面豐富的葉酸受體介導(dǎo)產(chǎn)生的，因此通過(guò)載體結(jié)構(gòu)修飾或識(shí)別，將藥物定向運(yùn)送至病變部位發(fā)揮藥效而不損傷周?chē)恼＜?xì)胞、組織和器官的體系。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下的突出的效果1.可用于對(duì)抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)利用。2.與目前市面上用于腫瘤的藥物具有以下的主要優(yōu)勢(shì)其一，通過(guò)牛血清白蛋白(BSA)載體材料進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾或識(shí)別作用，將藥物定向運(yùn)送至病變部位發(fā)揮藥效而不損傷周?chē)恼＜?xì)胞、組織和器官的體系。其二，葉酸(FA)受體一般在正常組織中的表達(dá)高度保守，只在脈絡(luò)叢、胎盤(pán)、肺、腸以及腎等一些正常上皮組織中有不同的表達(dá)，且僅分布于上皮細(xì)胞極化表面，不易接近血中的葉酸偶聯(lián)物。其三，以牛血清白蛋白為載體材料，具有安全無(wú)毒、無(wú)免疫原性、可生物降解、生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)。其四，以長(zhǎng)春新堿(VCR)作為活性藥物，長(zhǎng)春新堿能抗癌，療效比長(zhǎng)春堿約高10倍，用于治療急性淋巴細(xì)胞性白血病，療效顯著，對(duì)其他急性白血病、何杰金氏病、淋巴肉瘤、網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤和乳腺癌也有療效。3.制備方法簡(jiǎn)單不需要特殊設(shè)備，用常規(guī)設(shè)備和工藝就能夠生產(chǎn)。易于實(shí)施。4.本發(fā)明以蛋白質(zhì)熒光探針FITC(Fluoresceinisothiocyanate，異硫氰基熒光素)為基礎(chǔ)，采用經(jīng)典方法對(duì)牛血清白蛋白進(jìn)行FITC標(biāo)記，采用熒光分析法研究人子宮頸癌HeLa細(xì)胞、人結(jié)腸癌CaCo-2細(xì)胞及猴腎細(xì)胞COS-l對(duì)各型牛血清白蛋白納米粒的攝取情況，實(shí)驗(yàn)表明FA-BSA-NP被不同細(xì)胞攝取情況卻明顯不同，Hela細(xì)胞熒光強(qiáng)度強(qiáng)于CaCo-2細(xì)胞的熒光強(qiáng)度，這兩種細(xì)胞的強(qiáng)度又都極強(qiáng)于COS-l細(xì)胞，這就說(shuō)明FA-BSA-NP對(duì)腫瘤細(xì)胞具有主動(dòng)耙向性，而且是通過(guò)腫瘤細(xì)胞表面的葉酸受體介導(dǎo)產(chǎn)生靶向性?？傊?，本發(fā)明提供的腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)可用于對(duì)抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)利用，該載藥系統(tǒng)在殺傷高表達(dá)葉酸受體的腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常組織的毒性較低。且葉酸免疫原性低、易于修飾、體積小、易穿透腫瘤、化學(xué)和生物穩(wěn)定性高、成本低、易貯存，具有到達(dá)靶點(diǎn)時(shí)間短、血液清除速度快、穿透能力強(qiáng)、幾乎無(wú)人體免疫反應(yīng)發(fā)生等優(yōu)點(diǎn)，用于腫瘤化療時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì)。圖1為VCR溶液對(duì)各型細(xì)胞的抑制情況的曲線圖。圖2為VCR-BSA-NP對(duì)各型細(xì)胞的抑制情況的曲線圖。圖3為VCR-FA-BSA-NP對(duì)各型細(xì)胞的抑制情況的曲線圖。具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但不限制本發(fā)明。一.腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的有效成分含量為長(zhǎng)春新堿510份。按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的各成分含量為牛血清白蛋白100200份，葉酸200400份，25%戊二醛0.050.10份，乙醇0.0050.01份，無(wú)水二甲基亞砜515份，二環(huán)己基碳二亞胺80100份，N-羥基琥珀酰亞胺7080份及三乙胺0.40.6份，無(wú)水丙酮100200份，乙醚100200份，聚丁二酸丁二醇酯50100份。實(shí)施例l.腫瘤細(xì)胞主動(dòng)耙向的載藥系統(tǒng)按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的成份及有效成分的含量為長(zhǎng)春新堿5份，牛血清白蛋白100份，葉酸200份，25%戊二醛0.05份，乙醇0.005份，無(wú)水二甲基亞砜5份，二環(huán)己基碳二亞胺80份，N-羥基琥珀酰亞胺70份及三乙胺0.4份，無(wú)水丙酮100份，乙醚100份，聚丁6二酸丁二醇酯50份。實(shí)施例2.腫瘤細(xì)胞主動(dòng)耙向的載藥系統(tǒng)按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的成份及有效成分的含量為長(zhǎng)春新堿10份，牛血清白蛋白200份，葉酸400份，25%戊二醛0.l份，乙醇0.01份，無(wú)水二甲基亞砜15份，二環(huán)己基碳二亞胺100份，N-羥基琥珀酰亞胺70份及三乙胺0.6份，無(wú)水丙酮200份，乙醚200份，聚丁二酸丁二醇酯100份。實(shí)施例3.腫瘤細(xì)胞主動(dòng)耙向的載藥系統(tǒng)按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的成份及有效成分的含量為長(zhǎng)春新堿O份，牛血清白蛋白150份，葉酸300份，25%戊二醛0.07份，乙醇0.007份，無(wú)水二甲基亞砜10份，二環(huán)己基碳二亞胺90份，N-羥基琥珀酰亞胺70份及三乙胺0.5份，無(wú)水丙酮150份，乙醚150份，聚丁二酸丁二醇酯75份。經(jīng)檢測(cè)，上述實(shí)施例提供的載藥系統(tǒng)均符合說(shuō)明書(shū)要求，其中實(shí)例2效果比較好。二.細(xì)胞主動(dòng)靶向的膠體混懸液的制備稱(chēng)取200-400份葉酸，溶于5-15份無(wú)水二甲基亞砜(DMSO)中，再加入80-IOO份二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和70-80份N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)及O.4_0.6份三乙胺，30'C反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾除去反應(yīng)副產(chǎn)物，減壓蒸餾除去部分溶劑，在攪拌中逐滴滴入冰冷的含30%丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得到黃色沉淀物，過(guò)濾，無(wú)水乙醚洗滌數(shù)遍后真空干燥，得到葉酸活性酯，將BSA溶于定量pH40-ll的碳酸鹽緩沖液中，加入適量葉酸活性酯的無(wú)水DMSO，室溫?cái)嚢?，反?yīng)數(shù)小時(shí)即得。將反應(yīng)液過(guò)葡聚糖凝膠S印hadexG-25柱，以p^7-8的聚丁二酸丁二醇酯(PBS)緩沖液為洗脫液，0.5-2ml*min—'的流速分段收集流出液，前段淡黃色有乳光部份即為FA-BSA。冷凍干燥得到FA-BSA，取制得FA-BSA適量，溶于緩沖溶液中，加入長(zhǎng)春新堿，高速攪拌，緩慢滴加無(wú)水乙醇。溶液渾濁后，繼續(xù)緩慢滴加適量交聯(lián)劑戊二醛溶液，攪拌固化，減壓蒸餾除去乙醇，即得到具有腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的膠體混懸液。此載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞具有主動(dòng)靶向作用，細(xì)胞對(duì)它的攝取是通過(guò)腫瘤細(xì)胞表面豐富的葉酸受體介導(dǎo)產(chǎn)生的，而且由于受體-配體結(jié)合存在競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用，葉酸受體的牛血清白蛋白納米粒的主動(dòng)靶向性可以被游離葉酸顯著抑制甚至完全被阻斷從而回歸到牛血清白蛋白納米的狀況。實(shí)施例l.稱(chēng)取300份葉酸，溶于10份無(wú)水二甲基亞砜(DMSO)中，再加入90份二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和75份N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)及0.5份三乙胺，30。C反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾除去反應(yīng)副產(chǎn)物，減壓蒸餾除去部分溶劑，在攪拌中逐滴滴入冰冷的含30%丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得到黃色沉淀物，過(guò)濾，無(wú)水乙醚洗滌數(shù)遍后真空干燥，得到葉酸活性酯，將BSA溶于定量pH40.5的碳酸鹽緩沖液中，加入適量葉酸活性酯的無(wú)水DMSO，室溫?cái)嚢?，反?yīng)數(shù)小時(shí)即得。將反應(yīng)液過(guò)葡聚糖凝膠SephadexG-25柱，以pH-7.5的聚丁二酸丁二醇酯(PBS)緩沖液為洗脫液，l，min-l的流速分段收集流出液，前段淡黃色有乳光部份即為FA-BSA。冷凍干燥得到FA-BSA，取制得FA-BSA適量，溶于緩沖溶液中，加入長(zhǎng)春新堿，高速攪拌，緩慢滴加無(wú)水乙醇。溶液渾濁后，繼續(xù)緩慢滴加適量交聯(lián)劑戊二醛溶液，攪拌固化，減壓蒸餾除去乙醇，即得到具有腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的膠體混懸液。實(shí)施例2.稱(chēng)取350份葉酸，溶于15份無(wú)水二甲基亞砜(DMSO)中，再加入95份二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和78份N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)及0.6份三乙胺，30'C反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾除去反應(yīng)副產(chǎn)物，減壓蒸餾除去部分溶劑，在攪拌中逐滴滴入冰冷的含30%丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得到黃色沉淀物，過(guò)濾，無(wú)水乙醚洗滌數(shù)遍后真空干燥，得到葉酸活性酯，將BSA溶于定量pH40.8的碳酸鹽緩沖液中，加入適量葉酸活性酯的無(wú)水DMSO，室溫?cái)嚢?，反?yīng)數(shù)小時(shí)即得。將反應(yīng)液過(guò)葡聚糖凝膠SephadexG-25柱，以pl^8的聚丁二酸丁二醇酯(PBS)緩沖液為洗脫液，1.5，min-l的流速分段收集流出液，前段淡黃色有乳光部份即為FA-BSA。冷凍干燥得到FA-BSA,取制得FA-BSA適量，溶于緩沖溶液中，加入長(zhǎng)舂新堿，高速攪拌，緩慢滴加無(wú)水乙醇。溶液渾濁后，繼續(xù)緩慢滴加適量交聯(lián)劑戊二醛溶液，攪拌固化，減壓蒸餾除去乙醇，即得到具有腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的膠體混懸液。實(shí)施例3.稱(chēng)取400份葉酸，溶于10份無(wú)水二甲基亞砜(DMSO)中，再加入100份二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和80份N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)及0.6份三乙胺，3(TC反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾除去反應(yīng)副產(chǎn)物，減壓蒸餾除去部分溶劑，在攪拌中逐滴滴入冰冷的含30%丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得到黃色沉淀物，過(guò)濾，無(wú)水乙醚洗滌數(shù)遍后真空千燥，得到葉酸活性酯，將BSA溶于定量pH-ll的碳酸鹽緩沖液中，加入適量葉酸活性酯的無(wú)水DMSO,室溫?cái)嚢瑁磻?yīng)數(shù)小時(shí)即得。將反應(yīng)液過(guò)葡聚糖凝膠SephadexG-25柱，以pH-7.5的聚丁二酸丁二醇酯(PBS)緩沖液為洗脫液，2，min-l的流速分段收集流出液，前段淡黃色有乳光部份即為FA-BSA。冷凍干燥得到FA-BSA，取制得FA-BSA適量，溶于緩沖溶液中，加入長(zhǎng)春新堿，高速攪拌，緩慢滴加無(wú)水乙醇。溶液渾濁后，繼續(xù)緩慢滴加適量交聯(lián)劑戊二醛溶液，攪拌固化，減壓蒸餾除去乙醇，即得到具有腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的膠體混懸液。上述三個(gè)實(shí)施例提供的膠體混懸液，經(jīng)檢測(cè)，均可以作為所述的腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)，其中實(shí)施例2效果比較好。三.腫瘤細(xì)胞主動(dòng)耙向的載藥系統(tǒng)的應(yīng)用實(shí)施例l.用于人子宮頸癌的治療，根據(jù)熒光分析法顯示此載藥系統(tǒng)有極強(qiáng)的主動(dòng)靶向性，對(duì)普通健康細(xì)胞影響較小(見(jiàn)圖l)。實(shí)施例2.用于人結(jié)腸癌的治療，根據(jù)熒光分析法顯示此載藥系統(tǒng)有極強(qiáng)的主動(dòng)靶向性，對(duì)普通健康細(xì)胞影響較小(見(jiàn)圖2和圖3)。由圖2可知，不管HeLa細(xì)胞、CaCo-2細(xì)胞還是COS-l細(xì)胞對(duì)各型VCR的敏感性均不同。游離VCR藥物對(duì)細(xì)胞作用強(qiáng)弱主要與細(xì)胞本身的通透性等性質(zhì)相關(guān)，因此如圖l所示，VCR溶液對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性較正常細(xì)胞的毒性稍強(qiáng)。VCR-BSA-NP的細(xì)胞毒性對(duì)各種細(xì)胞也有差異。而從圖3可以看出，F(xiàn)A的引入使得VCR-BSA-NP對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性明顯增強(qiáng)，并8且Hela細(xì)胞的藥敏性比Caco-2細(xì)胞的藥敏性強(qiáng)，這正與Hela細(xì)胞和CaCo-2細(xì)胞在細(xì)胞膜表面葉酸受體表達(dá)的數(shù)量情況一致。附表(2)各型不同細(xì)胞對(duì)同種藥劑的藥敏性比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2VCR-BSA-NP對(duì)各型細(xì)胞的抑制'h<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表3<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1.一種腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)，其特征是一種以長(zhǎng)春新堿作為活性藥物，所需輔料藥物牛血清白蛋白為載體材料，葉酸為靶頭，利用葉酸對(duì)葉酸受體的特異性靶向作用，將納米粒靶向到高度表達(dá)葉酸受體的腫瘤細(xì)胞，制備而成葉酸受體介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)；按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的有效成分含量為長(zhǎng)春新堿5～10份，按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的所需其它成分為牛血清白蛋白100～200份，葉酸200～400份，25％戊二醛0.05～0.10份，乙醇0.005～0.01份，無(wú)水二甲基亞砜5～15份，二環(huán)己基碳二亞胺80～100份，N-羥基琥珀酰亞胺70～80份及三乙胺0.4～0.6份，無(wú)水丙酮100～200份，乙醚100～200份，聚丁二酸丁二醇酯50～100份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載藥系統(tǒng)，其特征是按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的成分及有效成分含量為長(zhǎng)春新堿5份，牛血清白蛋白100份，葉酸200份，25%戊二醛0.05份，乙醇0.005份，無(wú)水二甲基亞砜5份，二環(huán)己基碳二亞胺80份，N-羥基琥珀酰亞胺70份及三乙胺0.4份，無(wú)水丙酮10份，乙醚100份，聚丁二酸丁二醇酯50份。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載藥系統(tǒng)，其特征是按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的成分及有效成分含量為長(zhǎng)春新堿5份，牛血清白蛋白200份，葉酸400份，25%戊二醛0.10份，乙醇0.01份，無(wú)水二甲基亞砜15份，二環(huán)己基碳二亞胺100份，N-羥基琥珀酰亞胺80份及三乙胺0.6份，無(wú)水丙酮200份，乙醚200份，聚丁二酸丁二醇酯100份。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載藥系統(tǒng)，其特征是按重量份計(jì)，該載藥系統(tǒng)的成分及有效成分含量為長(zhǎng)春新堿7份，牛血清白蛋白150份，葉酸300份，25%戊二醛0.07份，乙醇0.07份，無(wú)水二甲基亞砜10份，二環(huán)己基碳二亞胺90份，N-羥基琥珀酰亞胺75份及三乙胺0.5份，無(wú)水丙酮150份，乙醚150份，聚丁二酸丁二醇酯75份。5.—種腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)的制備方法，其特征是包括以下步驟(1)葉酸活性酯的制備稱(chēng)取200400份葉酸，溶于515份無(wú)水二甲基亞砜中，再加入80~100份二環(huán)己基碳二亞胺和7080份N-羥基琥珀酰亞胺及0.40.6份三乙胺，283(TC反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾除去反應(yīng)副產(chǎn)物，減壓蒸餾除去部分溶劑，在攪拌中逐滴滴入冰冷的含3(M丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得到黃色沉淀物，過(guò)濾，再經(jīng)無(wú)水乙醚洗滌數(shù)遍后真空干燥，得到葉酸活性酯；(2)葉酸-牛血清白蛋白的制備先將牛血清白蛋白溶于定量pH為1011的碳酸鹽緩沖液中，加入適量葉酸活性酯的無(wú)水二甲基亞砜，室溫?cái)嚢瑁磻?yīng)35小時(shí)后，將得到的產(chǎn)物過(guò)葡聚糖凝膠S印hadexG-25柱以pH為78的聚丁二酸丁二醇酯緩沖溶液進(jìn)行洗滌，再按照0.52m"min-l的流速分段收集流出液，前段淡黃色有乳光部份經(jīng)冷凍干燥得到葉酸-牛血清白蛋白；(3)膠體混懸液的制備按重量份計(jì)，取制得的葉酸-牛血清白蛋白100200份，溶于緩沖溶液中，加入長(zhǎng)春新堿510份，高速攪拌，緩慢滴加無(wú)水乙醇；溶液渾濁后，繼續(xù)緩慢滴加0.050.IO份交聯(lián)劑戊二酸溶液，攪拌固化，減壓蒸餾除去乙醇，得到具有腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的膠體混懸液，該膠體混懸液作為腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向的載藥系統(tǒng)。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是采用以下方法制備葉酸活性酯稱(chēng)取300份葉酸，溶于10份無(wú)水二甲基亞砜中，再加入90份二環(huán)己基碳二亞胺和75份N-羥基琥珀酰亞胺及0.5份三乙胺，3(TC反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾除去反應(yīng)副產(chǎn)物，減壓蒸餾除去部分溶劑，在攪拌中逐滴滴入冰冷的含30%丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得到黃色沉淀物，過(guò)濾，無(wú)水乙醚洗滌數(shù)遍后真空干燥，得到葉酸活性酯。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于采用以下方法制備葉酸-牛血清白蛋白將牛血清白蛋白100200份溶于pH為10.5的碳酸鹽緩沖液中，加入200400份葉酸活性酯的無(wú)水二甲基亞砜，室溫?cái)嚢?，反?yīng)數(shù)小時(shí)后，將得到的過(guò)葡聚糖凝膠S印hadexG-25柱以pH為7.4的聚丁二酸丁二醇酯緩沖溶液進(jìn)行洗滌，再按照l(shuí)mlmin-1的流速分段收集流出液，前段淡黃色有乳光部份經(jīng)冷凍干燥得到葉酸-牛血清白蛋白。8.—種基于權(quán)利要求1至4中任一權(quán)利要求所述載藥系統(tǒng)的應(yīng)用，其特征在于該載藥系統(tǒng)用于腫瘤化療，其在殺傷高表達(dá)葉酸受體的腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常組織的毒性較低。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的的應(yīng)用，其特征在于該載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞所具有的主動(dòng)靶向作用，葉酸受體一般在正常組織中的表達(dá)高度保守，只在脈絡(luò)叢、胎盤(pán)、肺、腸以及腎等一些正常上皮組織中有不同的表達(dá)，且僅分布于上皮細(xì)胞極化表面，不易接近血中的葉酸偶聯(lián)物，細(xì)胞對(duì)藥物的攝取則是通過(guò)腫瘤細(xì)胞表面豐富的葉酸受體介導(dǎo)產(chǎn)生的，因此通過(guò)載體結(jié)構(gòu)修飾或識(shí)別，將藥物定向運(yùn)送至病變部位發(fā)揮藥效而不損傷周?chē)恼＜?xì)胞、組織和器官的體系。全文摘要一種腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向載藥系統(tǒng)，其成分含量(重量)為牛血清白蛋白100～200份，葉酸200～400份，25％戊二醛0.05～0.10份，乙醇0.005～0.01份，無(wú)水二甲基亞砜5～15份，二環(huán)己基碳二亞胺80～100份，N-羥基琥珀酰亞胺70～80份及三乙胺0.4～0.6份，無(wú)水丙酮100～200份，乙醚100～200份，聚丁二酸丁二醇酯50～100份。該載藥系統(tǒng)包括葉酸活性酯、葉酸-牛血清白蛋白和膠體混懸液的制備步驟。該載藥系統(tǒng)在殺傷高表達(dá)葉酸受體的腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常組織毒性??；且葉酸免疫原性低、易于修飾、易貯存，具有到達(dá)靶點(diǎn)時(shí)間短、血液清除速度快等優(yōu)點(diǎn)；用于腫瘤化療時(shí)具有明顯優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明還公開(kāi)了腫細(xì)胞主動(dòng)靶向載藥系統(tǒng)的制備方法和應(yīng)用。文檔編號(hào)A61P35/00GK101537185SQ200910061840公開(kāi)日2009年9月23日申請(qǐng)日期2009年4月27日優(yōu)先權(quán)日2009年4月27日發(fā)明者園周,輝易,翰楊,樓一層,胡佳興,虎征宇,阮班昭,顏香鳳,芬黃申請(qǐng)人:武漢理工大學(xué)