專利名稱：：美白祛斑組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及化妝品及保健食品
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種美白祛斑組合物。
背景技術(shù)：
：人類皮膚的顏色取決于黑色素的含量與分布，當(dāng)黑色素過(guò)速增長(zhǎng)和分布不均時(shí)，就會(huì)造成局部皮膚過(guò)黑及色素沉著，從而產(chǎn)生雀斑、褐斑等黑色素過(guò)度沉積等疾病。黑素的形成過(guò)程，存在于黑素細(xì)胞組織中的酪氨酸在酪氨酸酶等酶的作用下經(jīng)多巴、多巴醌、多巴色素、二羥基巧l哚等中間體逐步轉(zhuǎn)化為黑色素。黑色素顆粒通過(guò)黑色素細(xì)胞樹(shù)枝狀突起向角朊細(xì)胞轉(zhuǎn)移；轉(zhuǎn)移至角朊細(xì)胞的黑色素顆粒隨表皮細(xì)胞上行至角質(zhì)層，并隨角質(zhì)層脫落而排泄。但是由于受紫外線、遺傳、內(nèi)分泌、炎癥介質(zhì)、飲食不當(dāng)?shù)纫蛩氐挠绊?，黑素代謝異常，皮膚黑素過(guò)快增長(zhǎng)和分布不均，就會(huì)造成局部皮膚過(guò)黑及色素沉著，表現(xiàn)為黃褐斑、雀斑和炎癥后色素沉著等。美白護(hù)膚作用機(jī)理概括起來(lái)包括三方面一、抑制酪氨酸酶活性及黑素細(xì)胞的增殖及合成皮膚黑素抑制機(jī)理是美白機(jī)理的核心內(nèi)容，可通過(guò)抑制酪氨酸酶活性或者阻斷酪氨酸生成黑素的氧化途徑，從而減少黑素的生成達(dá)到美白祛斑的效果。二、抗氧化作用機(jī)制黑素的生成過(guò)程是一個(gè)較為復(fù)雜的過(guò)程，該過(guò)程除與酪氨酸酶有關(guān)外，還與自由基等因素密切相關(guān)。研究表明，酪氨酸酶的催化作用和多巴醌及其以后的自動(dòng)氧化反應(yīng)均需自由基的參與，自由基數(shù)目減少可減少黑素的生成。有關(guān)研究實(shí)驗(yàn)顯示黃褐斑患者治療后血清中SOD含量明顯降低、丙二酮(MDA)含量升高。從而提出OFR與皮膚黑素的形成及色素沉著有關(guān)?？寡趸瘎㏒OD能有效清除多余超氧自由基，使LPO、MDA形成減少，從而阻止黃褐斑的產(chǎn)生。三、氣血調(diào)補(bǔ)改善異常的血液流變學(xué)黃褐斑是一種常見(jiàn)的色素沉著性皮膚病，《醫(yī)宗金鑒》認(rèn)為本病"源于憂思抑郁，血弱不華，火燥結(jié)滯而生于3面上，婦女多有之"?！锻饪普?黧黑斑》曰"黧黑斑者，水虧不能制火，血弱不能華肉，以致火燥結(jié)成斑黑，色枯不澤"。本病的產(chǎn)生與肝、脾、腎三臟關(guān)系甚密，而"氣血瘀滯，經(jīng)絡(luò)不通氣血不能上榮于面"是黃褐斑的主要病機(jī)。選用藥物時(shí)，眾醫(yī)家多以活血化瘀為先導(dǎo)。活血化癡法可疏通痂阻，使氣機(jī)得以流暢，促進(jìn)面部血液循環(huán)，改善面部皮膚代謝，使面部色素逐漸消散。臨床上采用活血化瘀法治療黃褐斑取得了較好的療效。近年來(lái)，酪氨酸酶抑制劑、抗氧化劑的研究非?；钴S，隨著氫醌、熊果苷及曲酸的相繼發(fā)現(xiàn)、研究及在化妝品行業(yè)的廣泛應(yīng)用，大量化學(xué)合成及植物來(lái)源的天然美白劑得到開(kāi)發(fā)應(yīng)用。比如水楊酸類、壬二酸類、熊果苷、果酸、維c、曲酸或者由它們合成的衍生物等。隨著化妝品行業(yè)的飛速發(fā)展，"組份天然化，，及"回歸大自然"的呼聲已成為化妝品工業(yè)的潮流，化妝品的原料天然化倍受重^L。"純天然"美白成分正日益成為化妝品中的一個(gè)主要組成部分。因此，尋找有效且對(duì)人體無(wú)不良反應(yīng)的天然酪氨酸酶抑制劑、強(qiáng)抗氧化劑已成為藥學(xué)和化妝品行業(yè)研究的趨勢(shì)；提供一種組方更加合理、效果更加顯著的減少色素沉著美白護(hù)膚的組合物，是該
技術(shù)領(lǐng)域：
科研人員急需開(kāi)發(fā)的新課題之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種美白祛斑組合物，以便更加合理、效果更加顯著地美白護(hù)膚。為此，本發(fā)明所采用的實(shí)施方式如下一種美白祛斑組合物，其特征在于該組合物包含酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑。本發(fā)明所述酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑是指同時(shí)具有酪氨酸酶抑制活性和抗氧化活性的物質(zhì)，優(yōu)選酪氨酸酶抑制活性ICso《0.541mg/ml，羥基自由基的清除活性IC50《0.78mg/ml，超氧陰離子自由基的清除活性IC50《19.5mg/ml。在一些實(shí)施方式中，所述酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑可為綠茶提取物、巴西大櫻桃提取物、葡萄籽提取物中之一或它們的任意組合。在一些實(shí)施方式中，所述美白祛斑組合物還包括輔料，其中以組合物總重量為基準(zhǔn)，酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑含量為0.1~99%，輔料含量為余量。另一方面，本發(fā)明還提供一種美白祛斑的保健食品或化妝品，其特征在于包含上述美白祛斑組合物。本發(fā)明的化妝品可以用作基礎(chǔ)皮膚護(hù)理的原材料，如軟性洗劑、營(yíng)養(yǎng)洗劑、營(yíng)養(yǎng)乳膏劑、香精、面膜或浴粉，或者可以用作皮膚的外用制劑。本發(fā)明所述美白祛斑組合物可以制成多種化妝品制劑，例如溶液、無(wú)水制劑、氣溶膠、乳液、油包水型微乳液或水包油型的多重乳液、凝膠、固體條狀物、軟膏等。此外，還可以含有其他化妝品制劑的輔料，如防腐劑、殺菌劑、香料、防泡劑、染料、色素、增稠劑、表面活性劑、乳化劑、軟化劑、增水劑、濕潤(rùn)劑、脂肪、油、蠟或其他化妝品中的常規(guī)成分，如醇、多元醇、聚合物、泡沫穩(wěn)定劑、電解質(zhì)、有機(jī)溶劑或硅氧烷^f汙生物等。制備化妝品時(shí)，在考慮乳化作用和經(jīng)濟(jì)效率之后就要確定油成分的含量。作為油成分，可以使用從由植物油、礦物油、硅油和合成油組成的組中選擇的一種或多種油。此外，為了提高乳化作用，可以加入0.1~5重量％的表面活性劑和高級(jí)醇?？衫闷胀ǖ谋砻婊钚詣┤绶请x子表面活性劑，而至于高級(jí)醇，可以單獨(dú)使用具有12~20個(gè)碳數(shù)的醇，或者將該醇與其它種類的醇混合使用。為制備化妝品；可以以0.001~5重量％將諸如卡波姆(carbomer)、膨潤(rùn)土、黃原膠等之類的增稠劑中的至少一種添加到水性組分中以調(diào)節(jié)粘度或凝固。為制備化本發(fā)明的妝品，也可以增添諸如高級(jí)脂肪酸、維生素等之類的藥物性質(zhì)以及諸如UV保護(hù)劑、抗氧化劑、防腐劑、香料、著色劑、pH值調(diào)節(jié)劑等之類的用于化妝品的其它常用添加劑。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，通過(guò)使用本發(fā)明所述美白祛斑組合物，可以制備軟性洗劑、粘稠溶液、乳狀洗劑和乳膏劑。為了制備含有本發(fā)明所述美白祛斑組合物的化妝品，向普通組合物中，另外加入1~10重量％的美白祛斑組合物，更優(yōu)選加入2~5重量％。5在使用本發(fā)明所述美白祛斑組合物制備化妝品時(shí)，還可以與選自下組的一種或多種抗氧化劑聯(lián)用維生素A、維生素E、半胱氨酸、抗壞血酸、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-Px)、金屬硫蛋白、木瓜巰基酶、輔酶QIO。本發(fā)明中所說(shuō)的"保健食品，，是指具有特定保健功能的食品，即適用于特定人群食用、具有調(diào)節(jié)機(jī)體功能、不直接以治療為目的的食品。該保健食品通常含有1-50%(重量)的本發(fā)明所述美白祛斑組合物。本發(fā)明所述的功能性食品，指含有本發(fā)明所述美白祛斑組合物的食品、飲料或乳制品等類似食品，有效部位可以以加入、混合、包衣、結(jié)合或其它途徑加到食品中去，或以溶解、懸浮或混懸于飲料、乳制品中。含有本發(fā)明所述提取物的食品、飲料或乳制品，能依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法容易地制備得到。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明從多種天然植物提取物中篩選出具有活性較高的酪氨酸酶抑步J和抗氧化雙效劑，酪氨酸酶活性的抑制作用對(duì)減少和抑制皮膚中黑色素的生成起著關(guān)鍵的作用，抗氧化劑保護(hù)細(xì)胞內(nèi)容物免受自由基的破壞，可以使皮膚保水性更好，有效改善皮膚毛孔狀況等；因此，能更加合理、效果更加顯著地美白護(hù)膚。圖l是綠茶提取物酪氨酸酶抑制活性實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖2是葡萄籽提取物酪氨酸酶抑制活性實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖3是巴西大櫻桃粉Vc25。/。酪氨酸酶抑制活性實(shí)-瞼曲線示意圖；圖4是脫水巴西大櫻桃粉酪氨酸酶抑制活性實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖5是甘草提取物酪氨酸酶抑制活性實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖6是八白散合劑酪氨酸酶抑制活性實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖7是美白酵母多肽酪氨酸酶抑制活性實(shí)-瞼曲線示意圖；圖8是綠茶提取物抗羥自由基能力實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖9是巴西大櫻桃粉Vc25。/。抗羥自由基能力實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖IO是葡萄籽提取物抗羥自由基能力實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖ll是脫水巴西大櫻桃粉抗雍自由基能力實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖12是丹參提取物抗羥自由基能力實(shí)驗(yàn)曲線示意6圖13是美白酵母多肽抗羥自由基能力實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖14是巴西大櫻桃粉Vc25。/?？钩蹶庪x子能力實(shí)驗(yàn)曲線示意圖；圖15是脫水巴西大櫻桃粉抗超氧陰離子能力實(shí)^^曲線示意圖。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1酪氨酸抑制和抗氧化雙效劑的篩選本發(fā)明進(jìn)行研究分析成分功效及組方原理的實(shí)驗(yàn)依據(jù)實(shí)驗(yàn)具體方法可分為原料的選擇和相關(guān)特性指標(biāo)的測(cè)定兩大部分。其中，原料的選擇著重從多肽類、多糖類、強(qiáng)抗氧化劑類、有機(jī)多酚類、植物提取物幾個(gè)方面選取了肌肽、GHK、紅藻多糖、龍眼多糖、八白散合劑、珍珠粉、葡萄籽、巴西大櫻桃、苦參、蘆薈、桑樹(shù)、茶多酚、鳳梨酵素、八白散合劑、美白酵母多肽等43余種作為美白原料測(cè)試樣品。對(duì)于美白原料相關(guān)特性指標(biāo)的測(cè)定包括酪氨酸酶抑制活性的測(cè)定、抗氧化能力的測(cè)定(包括對(duì)羥自由基和超氧陰離子自由基的清除率的測(cè)定兩項(xiàng))兩部分。(一)酪氨酸酶抑制活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理酪氨酸酶(EC.1.14.18.l)又稱多酚氧化酶，它廣泛存在于動(dòng)植物體和人體內(nèi)，是生物體合成黑色素的關(guān)鍵酶。酪氨酸酶是一種含銅的金屬酶，每一個(gè)亞基含兩個(gè)金屬銅離子，兩個(gè)銅離子分別與蛋白質(zhì)分子中組氨酸結(jié)合，另有一個(gè)內(nèi)源橋基將兩個(gè)銅離子聯(lián)系在一起，構(gòu)成酪氨酸酶催化氧化反應(yīng)活性中心，能夠催化單酚羥化成二酚(單酚酶活性)，并把二酚氧化成醌(二酚酶活性)，醌在非i^tl條件下形成最終的反應(yīng)產(chǎn)物黑色素?？梢?jiàn)酪氨酸酶是皮膚黑素生物合成的主要限速酶，其表達(dá)和活性決定著黑素生成的速度和產(chǎn)量。酪氨酸酶是一種銅結(jié)合金屬酶，兼有加氧酶和氧化酶雙重功能。因此，對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用對(duì)減少和抑制皮膚中黑色素的生成起著關(guān)鍵的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、酪氨酸酶抑制劑研究(1)原料初篩通過(guò)對(duì)肌肽、GHK、紅藻多糖、龍眼多糖、八白散合劑、珍珠粉、葡萄籽、巴西大櫻桃、苦參、蘆薈、桑樹(shù)、茶多酚、鳳梨酵素等(全部樣品共50多種)進(jìn)行初步測(cè)定。其中43余種樣品結(jié)果如下表1。表143種美白樣品對(duì)酪氨酸酶抑制活性的測(cè)定<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>名稱(規(guī)格)測(cè)定濃度抑制率％沙棘提取物lmg/ml0根皮提取物Jmg/ml13.4珍珠繡線菊提取物lmg/ml0瓜拉那提取物.lmg/ml30.0傅明酸lmg/ml0葡萄籽提取物lmg/ml51.9蝦青素lmg/ml0GHKlmg/ml0肌肽lmg/ml0巴西大櫻桃粉Vc250/0lmg/ml32.0脫水巴西大櫻桃粉lmg/ml61.0Vc(98%)lmg/ml2.9超細(xì)珍珠粉lmg/ml14.6名稱(液體樣品)測(cè)定濃度抑制率％珍珠水解液(水提)lmg/ml35,9靈芝提取液(水提)lmg/ml23.1甘草提取液(水提)lmg/ml63.1丹M取液(水提)lmg/ml10.0中性酵素美白液(50%)原液46.6鳳梨酵素甘醇萃取液(50%)原液66.9法國(guó)鮭魚(yú)卵提取物(3%)原液48.0檸檬皮提取液(92-96%)原液73.7海洋植物美白劑(1-4.99%)原液86.2美白酵母多肽(99%)原液100.0八白散合劑原液81.2由表1可知，所列出的43種美白原料樣品中，在濃度為lmg/ml時(shí)測(cè)定樣J對(duì)酪氨酸酶的抑制率Y，其中葡萄籽提取物為51.9%、脫水巴西大櫻桃粉61%甘草提取液為63.1%、綠茶提取物為85%，表現(xiàn)出顯著的抑制酪氨酸酶活性(Y>50%);蟬衣提取物為20.2%、蒼耳子提取物為20.6%、蘆薈提取物為22.8%、靈芝提取物為23.1%、苦參提取物為26.5%、瓜拉納提取物為30%、巴西大櫻桃粉為32%、珍珠水解液為35.9%、桑樹(shù)提取物為38.8%,表現(xiàn)出較強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性(20%<Y<50%);其余樣品對(duì)酪氨酸酶的有不同程度的抑制活性。(其中，白藜蘆醇、番茄紅素、香豆素、五倍子提取物只溶于有機(jī)溶劑，實(shí)驗(yàn)采用20%乙醇'溶解，并測(cè)得20%的乙醇溶液對(duì)酪氨酸酶的抑制率達(dá)到35.7%,由于樣品乙醇溶液對(duì)于酪氨酸酶的作用機(jī)制尚不明確，故這4種樣品不予考慮)。(2)原料復(fù)篩由初步篩選實(shí)驗(yàn)，可以從以上樣品中選取對(duì)酪氨酸酶抑制活性較顯著的，同時(shí)顏色相對(duì)較淺、溶解性較好的樣品。如綠茶提取物、葡萄籽提取物、巴西大櫻桃粉Vc25。/。、脫水巴西大櫻桃粉、聲薈提取物、苦參提取物、蒼耳子提取物、桑樹(shù)提取物、蟬衣提取物、瓜那拉提取物、靈芝提取液、甘草提取液、珍珠水解液13種；此外，添加了丹參提取液、Vc、超細(xì)珍珠粉、八白散合劑、鳳梨酵素甘醇萃取液、美白酵母多肽、海洋植物美白劑，這7種美白標(biāo)準(zhǔn)原料和較為新穎的美白樣品進(jìn)行進(jìn)一步的酶活性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如下表2。表221種美白樣品對(duì)酪氨酸酶抑制活性的測(cè)定名稱IC50(mg/ml)名稱IC50(mg/ml)蘆薈提取物5.405超細(xì)珍珠粉83.8苦參提取物2.281蒼耳子提取物13.91桑樹(shù)提取物2.959葡萄籽提取物0豫2蟬衣提取物9.24靈芝提取液6.791巴西大櫻桃Vc25%0.544珍珠水解液5.163脫水巴西大櫻桃0.36122.68瓜拉納提取物17.31甘草提取液0.0996Vc(98%)316.5綠茶提取物0.101<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注IC。/。指的是對(duì)原液的稀釋濃度從上表可知，與前述報(bào)道的熊果苷的酪氨酸酶抑制率的IC5o值1.44mg/ml相比，綠茶提取物的IC5o值為0.101mg/ml、巴西大櫻桃粉的ICso值為0.544mg/ml、脫水巴西大櫻桃的IC5。值為0.361mg/ml、葡萄籽提取物的ICso值為0.0022mg/ml、甘草提取液的IC5o值為0.0996mg/ml;美白酵母多肽的ICso值為0.022%。以上6種樣品表現(xiàn)出極為顯著的酪氨酸酶抑制活性，酶活性抑制的濃度曲線參見(jiàn)圖l-圖5及圖8。(二)抗氧化能力的測(cè)定生物體內(nèi)的自由基有許多種，其中最為典型二種為羥自由基(OH，)和超氧陰離子自由基((V)，因此我們測(cè)定的抗氧化活性分為對(duì)羥自由基(OH-)和超氧陰離子自由基(02.)的清除活性。(1)抗羥自由基能力的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理Fenton^應(yīng)是最常見(jiàn)的產(chǎn)生羥自由基的化學(xué)反應(yīng)，^1202的量和Fenton^應(yīng)產(chǎn)生的OH.量成正比，當(dāng)給與電子受體后，用griess試劑顯色，形成紅色物質(zhì)，其呈色與OH.的多少成正比關(guān)系。(2)抗超氧陰離子自由基能力的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理模擬機(jī)體中黃噤呤與黃噤呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)，產(chǎn)生超氧陰離子自由基02.，加入電子傳遞物質(zhì)及griess氏顯色劑，使反應(yīng)體系呈現(xiàn)紫紅色，可用分光光度計(jì)測(cè)其吸光度，當(dāng)被測(cè)樣品中含有02抑制劑時(shí)，則比色時(shí)測(cè)定管的吸光度低于對(duì)照管的吸光度，而如果被測(cè)樣品中含有產(chǎn)生02.物質(zhì)時(shí)，則比色時(shí)測(cè)定管的吸光度高于對(duì)照管的吸光度。選取酪氨酸酶抑制實(shí)驗(yàn)中抑制活性較為顯著的樣品，包括綠茶提取物、葡萄籽提取物、巴西大櫻桃粉Vc25。/。、脫水巴西大櫻桃粉、蘆薈提取物、苦參提取物、蒼耳子提取物、桑樹(shù)提取物、蟬衣提取物、瓜那拉提取物、靈芝提取液、甘草提取液、珍珠水解液13種；此外，添加了丹參提取液、Vc、超細(xì)珍珠粉、八白散合劑、鳳梨酵素甘醇萃取液、美白酵母多肽、海洋植物美白劑7種美白樣品進(jìn)^f亍抗氧化能力的測(cè)定。結(jié)果如下表3。表321種美白樣品的抗氧化能力測(cè)定名稱抗羥自由碁?zāi)芰钩蹶庪x子自由基能IC50(mg/ml)力IC50(mg/ml)VC(980/0)1.4567.2苦參提取物5.26507.2桑樹(shù)提取物1.779.0蜂衣提取物8.373110.3超細(xì)珍珠粉--瓜阿拉提取物48.9-名稱抗羥自由基能力抗超氧陰離子自由基能IC50(mg/ml)力IC50(mg/ml)，薈提取物11.7卯.7綠茶(茶多酚95%)0.1519.5巴西大櫻桃VC250/0,0.551.6脫水巴西大櫻桃0.781.3葡萄籽提取物0.128.1蒼耳子提取物2.0204.8靈芝提取液4.3835.9甘草提取液2.5218.36珍珠水解液-858.1丹M取液0.48159.112名稱抗羥自由基能力抗超氧陰離子自由基能IC50(0/o)力IC50(%)美白酵母多肽(99%)03325.9海洋植物提取物4.92228.9(1-4.99%)鳳梨酵素甘醇萃取液18.3137.56(50%)八白散合劑'70.979.9注IC。/。指的是對(duì)原液的稀釋濃度參見(jiàn)圖8-圖15，由實(shí)驗(yàn)可知，以Vc(98。/。)樣品為對(duì)照，其羥基自由基、超氧陰離子自由基的清除率IC5o值分別為1.45mg/ml和67.2mg/ml;眾多樣品中綠茶提取物、巴西大櫻桃粉、脫水巴西大櫻桃、葡萄籽提取物表現(xiàn)出顯著的清除羥自由基能力和超氧陰離子自由基能力，其中綠茶提取物的ICs()值分別為0.15mg/ml和19.5mg/ml、巴西大櫻桃粉的ICso值分別為0.55mg/ml和1.6mg/ml、脫水巴西大櫻桃ICso值分別為0.78mg/ml和1.3mg/ml、葡萄籽提取物的ICs。值分別為0.12mg/ml和8.1mg/ml;而丹^取液的清除羥自由基能力較強(qiáng)，ICso值達(dá)到0.48mg/ml;靈芝提取液的清除超氧陰離子自由基活性較顯著，ICso值達(dá)到35.9mg/ml。其余美白樣品表現(xiàn)出不同程度的清除自由基能力。(三)研究分析由酪氨酸酶抑制活性實(shí)驗(yàn)和抗氧化實(shí)驗(yàn)可知，綠茶提取物、巴西大櫻桃粉Vc250/。、脫水巴西大櫻桃粉、葡萄籽提取物、美白酵母多肽具有明顯的酪氨醉酶抑制活性和明顯的抗氧化能力。資料表明，綠茶提取物中的主要成分為茶多酚。茶多酚是一類存在于茶樹(shù)中的多羥基酚類的化合物，其主要成分為兒茶素類(黃烷醇類)、黃銅及黃酮醇類、花青素類和酚酸及縮酚酸類多化合物的復(fù)合物。茶多酚屬多酚結(jié)構(gòu)，可以螯合鈣、銅、鐵等10種金屬離子，通過(guò)對(duì)銅離子螯合作用，而抑制銅催化的低密度脂蛋白的氧化，從而保證一定范圍內(nèi)不會(huì)影響以銅為中心的SOD活性，進(jìn)而抑制酪氨酸酶活性減少黑色素的生成。另外，人在生命代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生有害自由基，自由基極強(qiáng)的氧化能力會(huì)氧化不飽和脂肪酸形成13LPO(過(guò)氧化脂質(zhì))，累積的LPO會(huì)消弱生物膜的正常功能，影響活性物質(zhì)的代謝，而茶多酚具有多個(gè)鄰位酚羥基結(jié)構(gòu)，因多酚羥基極易被氧化為醌類而提供質(zhì)子PT,故有較強(qiáng)的抗氧化性。同時(shí)，茶多酚自身生成穩(wěn)定的自由基中間體，抑制原來(lái)的自由基連鎖反應(yīng)，從而保護(hù)細(xì)胞成分不受損傷，與其他抗氧化劑相比，茶多酚清除氧自由基具有高效性，與自由基清除劑相比，lmg茶多酚清除02.的效能相當(dāng)于9嗎的Cu，Zn-SOD。與Vc、Ve相比其清除02.、.OH的效能要高幾倍。再者，茶多酚與Vc、Ve有極好的協(xié)同效應(yīng)。它可以產(chǎn)生和保護(hù)體內(nèi)Vc、Ve,提高體內(nèi)Vc、Ve的含量，而且茶多酚可能同時(shí)以水溶性和脂溶性兩種方式清除自由基，比單一的還原劑更有效的保護(hù)a-Vite。茶多酚還具有抗輻射作用和抗過(guò)敏作用，可吸收放射性物質(zhì)，被稱為天然的紫外線過(guò)濾器。還可通過(guò)抑制炎病過(guò)程中過(guò)量分泌的炎性細(xì)胞因子發(fā)揮抗炎作用。實(shí)為不可多得的具有巨大的潛力的皮膚美白劑。葡萄籽提取物(原花青素95%,白藜聲醇5%，多酚80%),該化合物中包含了黃烷醇類、花色素苷類、黃酮醇類和縮聚鞣質(zhì)等50多種物質(zhì)。其中酪氨酸酶抑制活性和抗氧化能力最強(qiáng)的是原花青素(多酚類化合物為花青素前體物質(zhì)花青素原)。有關(guān)研究表明，原花青素對(duì)酪氨酸酶有較強(qiáng)的抑制作用，且該抑制作用屬于竟?fàn)幮砸种啤Ｆ湓蚩赡苁怯捎谠ㄇ嗨嘏cL-多巴竟?fàn)幟傅慕Y(jié)合部位，或是原花青素能與酪氨酸酶中的金屬離子螯合，從而抑制酶的活力。隨著原花青素濃度的提高抑制率也不斷提高，并存在劑量依賴性關(guān)系，這與本實(shí)驗(yàn)中對(duì)葡萄籽提取物的測(cè)定結(jié)果一致。另外，葡萄籽提取物是迄今為止發(fā)現(xiàn)的植物來(lái)源最有效的抗氧化劑之一。通過(guò)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)表明葡萄籽提取物的抗氧化效果，是Vc和Ve的幾倍到幾十倍，眾多所含成分中也數(shù)原花青素的抗氧化能力最強(qiáng)。值得注意的是，同一地區(qū)不同品種或不同年份的葡萄，其籽中原花青素的聚合度和總含量有很大差別。巴西大櫻桃，又稱西印度櫻桃。屬于金虎尾科植物，富含各種維生素、鈣、果糖、糠醛、鐵、蛋白質(zhì)和蔗糖，其中新鮮果實(shí)中維生素C的含量特別高約1700-2200mg/100g，是番石榴、芒果、木瓜、獼猴桃等水果的7-170倍之多，大大超過(guò)了我國(guó)目前的主要水果。巴西大櫻桃粉Vcl7。/。的維生素含量每100g超過(guò)17000mgVc和Ve是主要的抗氧化物，抵抗自由基破壞的組織保護(hù)系統(tǒng)，同樣保護(hù)細(xì)胞內(nèi)容物免受自由基的破壞。Vc也是細(xì)胞外液中最重要的抗氧化劑，通過(guò)降低過(guò)氧自由基在水相中的過(guò)氧化，保護(hù)生物膜免受脂質(zhì)過(guò)氧化的破壞。巴西大櫻桃除了含有維生素以外，還含有無(wú)機(jī)鹽類，可以為緊繃的皮膚補(bǔ)充礦物質(zhì)。此外，其粘液和蛋白質(zhì)可以使皮膚保水性更好，更可以改善皮膚毛孔狀況。巴西大櫻桃對(duì)酪氨酸酶的抑制作用目前還鮮有報(bào)道，我們的研究數(shù)據(jù)顯示巴西大櫻桃表現(xiàn)出明顯的酪氨酸酶抑制活性。對(duì)于巴西大櫻桃提取物而言，其中的什么活性成分或組合組分既有強(qiáng)的抗氧化活性，又有強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性，這正是本發(fā)明研究的重點(diǎn)問(wèn)題。甘草提取液具有較強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性，其主要成分為黃酮類物質(zhì)，根據(jù)黃酮類的結(jié)構(gòu)可以推測(cè)它們是以螯合酶活性中心的銅來(lái)抑制酶活力，從而抑制酪氨酸的活性減少黑色素生成。甘草還具有抗氧化作用、消炎作用、抗癌和抗基因誘變作用。丹參提取液和靈芝提取液都表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化性能力。丹參的化學(xué)成分主要為兩類脂溶性二辟醌類化合物和水溶性酚性酸類成分。丹參具有較強(qiáng)的還原力，其還原力與較強(qiáng)的抑制羥自由基產(chǎn)生有關(guān)，也與一定的消除過(guò)氧化氫有關(guān)。此外，丹參還具有消除包括DPPH自由基和超氧陰離子等活性氧的能力。靈芝中含有10多種M酸、肽類和多糖，已經(jīng)從靈芝中分離得到160多種化合物，其中靈芝多糖和靈芝三薛是靈芝中主要的生物活性物質(zhì)。靈芝多糖肽(GLPP)具有體內(nèi)抗氧化作用，且其抗氧化作用與清除氧自由基有關(guān)。靈芝菌絲體含氮多糖能顯著的提高紅細(xì)胞中的SOD的活性，從而'對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用。靈芝能通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化物的形成和提高抗氧化酶的活性，改善D-半乳糖導(dǎo)致腦超微結(jié)構(gòu)變化，具有顯著的抗氧化作用。對(duì)于八白散合劑、鳳梨酵素甘醇萃取液(50%)、美白酵母多肽(99.9%)、海洋植物美白劑(1-4.99%)這4種新型皮膚美白劑，八白散合劑和美白酵母多肽的酪氨酸酶抑制活性抑制活性較為顯著，其IQo(。/。)值分別達(dá)到3.955。/o和0.022%(注IC。/。指的是對(duì)原液的稀釋濃度)。在稀釋濃度為10%的條件下，八白散合劑和海洋植物提取物的酪氨酸酶抑制率分別達(dá)到67.2%和50%,而鳳梨酵素甘醇萃取液的酪氨酸酶抑制率僅為1.6%;在稀釋濃度為0.2%的條件下，美白酵母多肽的酪氨酸酶抑制率達(dá)到76.3°/。。15值得我們關(guān)注的是，八白散合劑這種中藥復(fù)合組方的皮膚美白劑，它的主要成分為白丁香、白僵蠶、白牽牛、白蒺藜、白芨、白芷、白附子、白苻薈，皂角、綠豆10種中藥成分。萊博公司的數(shù)據(jù)顯示，八白散合劑通過(guò)抑制酪氨酸酶的活性和黑色素細(xì)胞的代謝，能夠有效抑制黑色素的產(chǎn)生。我們的數(shù)據(jù)也證明八白散合劑有不錯(cuò)的抑制酪氨酸酶的活性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)這些提取物大部分屬于氣血調(diào)和的中藥，如白芷、白蒺藜屬于散風(fēng)行血的中藥，從中醫(yī)氣血調(diào)和的角度應(yīng)該有美白功效。然而中醫(yī)理論又是非常微妙的可逆，如所有的疾病包括美白相反的白瘋風(fēng)，也是相同的調(diào)和原理，不同在于劑量、組合及其效果。鄧燕的研究結(jié)果表明:白芷在中低濃(0.019g/L、0.19g/L)時(shí)對(duì)黑素細(xì)胞增殖和黑素合成具有抑制作用(PO.05);白蒺藜對(duì)黑素細(xì)胞增殖和黑素合成具有低濃度抑制、高濃度激活作用，當(dāng)抑制濃度為0.0019g/L時(shí)與對(duì)照組比較差異顯著(PO.Ol)，當(dāng)激活濃度為0.19g/L、19g/L時(shí)與對(duì)照組比較差異顯著(P<0.01)。美白酵母多肽，是乳酸桿菌的發(fā)酵物，又稱刺鼠信號(hào)蛋白(ASIP)。國(guó)內(nèi)外眾多文獻(xiàn)已有報(bào)道，a-黑素細(xì)胞刺激素(a-MSH)及其受體黑皮素1受體(MC-1R)的表達(dá)，可以刺激皮膚黑素細(xì)胞中酪氨酸酶活性增加、合成黑素的功能增強(qiáng)，在皮膚過(guò)度色素沉著過(guò)程中起重要調(diào)控作用?？梢?jiàn)皮膚表皮細(xì)胞中a-MSH的表達(dá)上調(diào)使表皮黑素細(xì)胞合成黑素增多是皮膚呈過(guò)度色素沉著的重要原因。ASIP作用于皮膚表皮細(xì)胞后，ASIP與a-MSH竟?fàn)幗Y(jié)合黑素細(xì)胞表面MC-1R，使黑素細(xì)胞內(nèi)TYR的表達(dá)下調(diào)、活性抑制，從而拮抗a-MSH合成優(yōu)黑素等作用，使表皮細(xì)胞著色能力降低，從而達(dá)到美白的目的。美白酵母多肽(刺鼠信號(hào)蛋白ASIP)的來(lái)源是發(fā)酵產(chǎn)物,是一種m^"潛力的天然美白劑。綜上所述，篩選天然的酪氨酸抑制和抗氧化雙效劑，為美白化妝品或以酪氨酸酶為作用靶點(diǎn)藥物的開(kāi)發(fā)提^^l據(jù)。更為重要的是，綠茶提取物、巴西大櫻桃粉Vc25。/。、脫水巴西大櫻桃粉、葡萄籽提取物，不僅具有顯著的酪氨酸酶抑制活性，還同時(shí)具有顯著的抗氧化性，這也是本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)之一。此外，美白酵母多肽、八白散合劑、,薈提取物、苦^取物、蒼耳子提取物、桑樹(shù)提取物、蟬衣提取物、瓜那拉提取物、靈芝提取液、甘草提取液等(參照數(shù)據(jù))也都是效果不錯(cuò)、很有潛力的皮膚美白劑。相信這些美白原料具有巨大的潛在利用價(jià)值，必將在美白化妝品領(lǐng)域中擁有一席之地。(我們的選擇一般是根據(jù)美白作用機(jī)理，在酶抑制活性、抗氧化性和氣血調(diào)和考慮的結(jié)果。然而對(duì)產(chǎn)品原料的選擇，針對(duì)不同目的和介質(zhì)，對(duì)原料的顏色、pH、離子強(qiáng)度、物理防曬美白作用等，需要綜合考慮。制備含酪氨酸抑制和抗氧化雙效劑的美白祛斑組合物所述酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑的酪氨酸酶抑制活性ICs()《0.541mg/ml，羥基自由基的清除活性IC5o《0.78mg/ml，超氧陰離子自由基的清除活性ICsQ《19.5mg/ml。分別取含上述量酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑的綠茶提取物10g、巴西大櫻桃提取物10g、'葡萄籽提取物10g混合均勻，或取其中之一，或它們的任意組合。按常規(guī)加入輔料，其中以組合物總重量為基準(zhǔn)，酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑含量為0.1~99%，輔料含量為余量。實(shí)施例2制備含酪氨酸抑制和抗氧化雙效劑的功能性食品1.制備含綠茶提取物的食品將綠茶提取物加入到小麥粉中，制得每100g含綠茶提取物約5g的小麥粉混合物。采用該小麥粉混合物制備面包、蛋糕、曲奇餅干、薄脆餅干、面條、方便面等，從而獲得含綠茶提取物活性成分的功能性食品。2.制備含巴西大櫻桃粉的奶制品將脫水巴西大櫻桃粉加入到牛奶中，制得每100g牛奶中含脫水巴西大櫻桃粉約2-5g的混合奶，然后由其制備各種奶制品，如酸奶、水琪琳、奶酪等。3.制備含葡萄籽提取物的飲料將葡萄籽提取物加入到蔬菜汁、果汁或碳酸飲料中，獲得每100ml飲料中包含O.l-lOg的葡萄籽提取物，從而得到含葡萄籽提取物活性成分的功能性食品。實(shí)施例3制備含酪氨酸抑制和抗氧化雙效劑的化妝品乳劑將5g的脫水巴西大櫻桃粉，與lg硬脂酸、2g鯨蠟醇、lg的PEG-2017失水山梨糖醇單硬脂酸酯、lg失水山梨糖醇單硬脂酸酯、10g礦物油、5g三辛酸酯、0.5g三乙醇胺、5g甘油、3g丙二醇、適量防腐劑、適量香料和余量純水，混合，制成100g的美白祛斑的化妝品乳劑。同樣，還可按常規(guī)制成軟性洗劑、營(yíng)養(yǎng)洗劑、營(yíng)養(yǎng)乳膏劑、香精、面膜、浴粉等各種用作皮|夫的外用制劑。上述參照實(shí)施例對(duì)該美白祛斑組合物進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說(shuō)明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、一種美白祛斑組合物，其特征在于該組合物包含酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑；所述酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑的酪氨酸酶抑制活性IC50≤0.541mg/ml，羥基自由基的清除活性IC50≤0.78mg/ml，超氧陰離子自由基的清除活性IC50≤19.5mg/ml；所述酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑為綠茶提取物、巴西大櫻桃提取物、葡萄籽提取物中之一或它們的任意組合。2、如權(quán)利要求1所述的美白祛斑組合物，其特征在于所述美白祛斑組合物還包括輔料，其中以組合物總重量為基準(zhǔn)，酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑含量為0.1~99%，輔料含量為余量。3、一種如權(quán)利要求l所述的美白祛斑的保健食品，其特征在于包含權(quán)利要求l、2中任一項(xiàng)所述美白祛斑組合物。4、如權(quán)利要求3所述的美白祛斑的保健食品，其特征在于所述美白祛斑組合物含量為保健食品總重量的1~50%。5、如權(quán)利要求3所述的美白祛斑的保健食品，其特征在于所述保健食品，食品、飲料或乳制品。6、一種如權(quán)利要求1所述的美白祛斑的化妝品，其特征在于包含權(quán)利要求l、2中任一項(xiàng)所述美白祛斑組合物。7、如權(quán)利要求6所述的美白祛斑的化妝品，其特征在于所述美白祛斑組合物含量為化妝品總重量的1~10%。8、如權(quán)利要求6所述的美白祛斑的化妝品，其特征在于所述化妝品為軟性洗劑、營(yíng)養(yǎng)洗劑、營(yíng)養(yǎng)乳膏劑、、面膜、浴粉用作皮膚的外用制劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種美白祛斑組合物，該組合物包含酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑；所述酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑的酪氨酸酶抑制活性IC₅₀≤0.541mg/ml，羥基自由基的清除活性IC₅₀≤0.78mg/ml，超氧陰離子自由基的清除活性IC₅₀≤19.5mg/ml；所述酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑為綠茶提取物、巴西大櫻桃提取物、葡萄籽提取物中之一或它們的任意組合。美白祛斑組合物還包括輔料，其中以組合物總重量為基準(zhǔn)，酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑含量為0.1～99％。本發(fā)明從多種天然植物提取物中篩選出具有活性較高的酪氨酸酶抑制和抗氧化雙效劑，酪氨酸酶活性的抑制作用對(duì)減少和抑制皮膚中黑色素的生成起著關(guān)鍵的作用，抗氧化劑保護(hù)細(xì)胞內(nèi)容物免受自由基的破壞；因此，能更加合理、效果更加顯著地美白護(hù)膚。文檔編號(hào)A61K8/96GK101491490SQ20091006789公開(kāi)日2009年7月29日申請(qǐng)日期2009年2月20日優(yōu)先權(quán)日2009年2月20日發(fā)明者吳巧玲,李素霞,鵬王,王勇剛,王素英,胡彥學(xué),韓福森申請(qǐng)人:天津天獅生物工程有限公司;天津天獅生物發(fā)展有限公司;天津天獅生命源有限公司