專(zhuān)利名稱(chēng)：一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定方法，特別地，涉 及一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸含量的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定的 方法。
背景技術(shù)：
第ZL200410012347. 4號(hào)專(zhuān)利申請(qǐng)中公開(kāi)了 一種中藥組合物，該中藥組合物由 如下重量份的原料藥制成黃芪120-360、女貞子100-300、人參30-95、靈芝30-95、莪 術(shù)65-195、白術(shù)30-90、半枝蓮65-195、絞股藍(lán)120-360、茯苓30-95、雞內(nèi)金15-45、蛇莓 65-195、白英65-195、茵陳65-195、徐長(zhǎng)卿65-195、土鱉蟲(chóng)10-30、白花蛇舌草65-195。具有 健脾益腎、化瘀解毒的功效，適用于不宜手術(shù)的脾腎兩虛、瘀毒內(nèi)阻型原發(fā)性肝癌的輔助治 療。該中藥組合物中含有女貞子，女貞子中含有齊墩果酸和熊果酸，為有效控制其質(zhì)量，需 要建立該中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸含量的測(cè)定方法。齊墩果酸和熊果酸含量的測(cè)定往往采用高效液相色譜法，如相延英等的論文[相 延英，楊光.常用中藥中齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定.[J]中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志.2004， 24(5)316-318]中公開(kāi)了一種枇杷葉中齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定方法，該法色譜條件 為0DS C18色譜柱，甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(90 10 0.03 0. 06)為流動(dòng)相；檢 測(cè)波長(zhǎng)為210nm ；流速0. 6mL/min ；石敏娟等的論文[石敏娟，朱衛(wèi)豐，劉耀明.苦丁茶中的 齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定.[J]中醫(yī)藥學(xué)報(bào).2007，35 (2) 45-46]中公開(kāi)了苦丁茶中齊 墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定方法，該法色譜條件為色譜柱為HypersilODS-2 C18(5um, 250mmX4. 6mm)色譜柱；柱溫30°C;流動(dòng)相甲醇_0. 磷酸水溶液(85 15)；檢測(cè)波長(zhǎng) 210nm ；流速0. 6ml/min。由于中藥組合物成份復(fù)雜，因此，不同中藥組合物難以采用相同 的方法測(cè)定，不同的中藥組合物需要根據(jù)其組合物特點(diǎn)建立其特有的檢測(cè)方法，且需要嚴(yán) 格的方法學(xué)研究，才可以用于控制該中藥組合物的含量測(cè)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸含量的測(cè)定方法。所述中藥組合物是由如下重量份的原料藥制成黃芪120-360 女貞子 100-300 人參 30-95莪術(shù)65-195 白術(shù) 30-90半枝蓮 65-195茯等30-95 雞內(nèi)金 15-45 蛇莓 65-195茵陳65-195 徐長(zhǎng)卿 65-195 土鱉蟲(chóng) 10-30本發(fā)明含量測(cè)定方法為高效液相色譜_蒸發(fā)光散射檢測(cè)法，測(cè)定條件如下色譜條件和檢測(cè)條件色譜柱為反相色譜柱，流動(dòng)相由室溫下60-80體積份的甲 醇、10-30體積份的乙腈和5-15體積份的0. 5%冰乙酸組成，流速為0. 15-1. OOml/min，蒸發(fā) 光散射檢測(cè)器的漂移管溫度為75-85°C ；
靈芝30-95 絞股藍(lán)120-360 白英65-195 白花蛇舌草65-195 ；
供試品溶液的制備取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細(xì)，取0．5一0．7g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇l0一50ml，密塞，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理20分鐘，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每lml約含齊墩果酸0．05一0．15mg和熊果酸0．03一0．09mg的溶液，即得。
優(yōu)選地，本發(fā)明含量測(cè)定方法中色譜條件和檢測(cè)條件為
色譜柱為規(guī)格為4．6mm×250mm1填料粒徑為5 u m的C18柱，流動(dòng)相由室溫下70體積份的甲醇120體積份的乙腈和l0體積份的0．5％的冰乙酸混合而成，流速為0．35ml／min，理論塔板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算不得低于10000；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的漂移管溫度為80℃。
優(yōu)選地，本發(fā)明含量測(cè)定方法中供試品溶液的制備方法為
取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細(xì)，取0．6g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理20分鐘，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
優(yōu)選地，本發(fā)明含量測(cè)定方法中對(duì)照品溶液的制備方法為
精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每lml約含齊墩果酸0．10mg和熊果酸0．06mg的溶液，即得。
優(yōu)選地，本發(fā)明含量測(cè)定方法中，所述中藥組合物原料藥的重量份比例為
黃芪120女貞子300人參30靈芝95莪術(shù)65白術(shù)90
半枝蓮65絞股藍(lán)360茯苓30雞內(nèi)金45蛇莓65
白英195茵陳65徐長(zhǎng)卿195土鱉蟲(chóng)l0白花蛇舌草195
或者
黃芪360女貞子l00人參95靈芝30莪術(shù)195 白術(shù)30
半枝蓮195 絞股藍(lán)120茯苓95雞內(nèi)金15蛇莓195
白英65茵陳195徐長(zhǎng)卿65土鱉蟲(chóng)30白花蛇舌草65
或者
黃芪250女貞子200人參65靈芝65莪術(shù)132 白術(shù)64
半枝蓮128 絞股藍(lán)256茯苓65雞內(nèi)金30蛇莓128
白英128茵陳128徐長(zhǎng)卿128白花蛇舌草128土鱉蟲(chóng)20。
本發(fā)明含量測(cè)定方法中，所述中藥組合物的活性成分是由以下步驟制成的
(1)1按照原料藥重量比例稱(chēng)取中藥材，淨(jìng)選；
(2)1女貞子1人參加6一l0倍量50一90％乙醇提取卜3次，每次卜4小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，藥渣備用；
(3)1莪術(shù)1白術(shù)1徐長(zhǎng)卿加4—8倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘?jiān)八芤簜溆茫?br> (4)、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細(xì)粉；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(1)中所 得人參、女貞子的醇提后殘?jiān)?，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿提油后殘?jiān)八芤?合并，加7-10倍量水，加熱煎煮1-3次，每次1-3小時(shí)，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人 參、女貞子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；步驟⑷所得粉碎粉、步驟(3)所得揮發(fā)油與步驟(5)所得的干膏粉共同構(gòu)成該 中藥組合物的活性成分。本發(fā)明含量測(cè)定方法中，適用于所述中藥組合物的任何口服或非口服的固體制 劑，所述中藥組合物制劑劑型優(yōu)選為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑或丸劑。本發(fā)明中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定方法，適用于使用任何方法制 備成的上述劑型固體制劑。優(yōu)選為由如下方法制成的膠囊劑(1)、按照原料藥重量比例稱(chēng)取中藥材，凈選；(2)、人參、女貞子，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小 時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，人參、女貞子殘?jiān)鼈溆茫?3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿，合并提取揮發(fā)油，提油時(shí)間不少于8小時(shí)，揮發(fā)油另器收 集，殘?jiān)八芤簜溆茫?4)、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金兩味動(dòng)物藥，水洗，60°C烘干，與茯苓合并，粉碎成100目粉， 滅菌后備用；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(2)中所 得人參、女貞子的醇提后殘?jiān)?，及步驟(3)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿提油后殘?jiān)八芤?合并，加9倍量水，加熱煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎煮液，加入步驟(2)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成相對(duì)密度1. 20-1. 25的清膏，干燥，粉碎，備用；將步驟(5)所得干膏粉加入適當(dāng)藥學(xué)上可接受的輔料制粒；(6)、將步驟(3)中所得揮發(fā)油噴入步聚(4)中所得茯苓、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金的細(xì)粉 中，混勻，與步驟(5)中中所得的顆粒混勻，密閉半小時(shí)，裝膠囊即得。本發(fā)明方法測(cè)定齊墩果酸和熊果酸的含量從線(xiàn)性關(guān)系，溶液穩(wěn)定性，重現(xiàn)性試驗(yàn)， 回收試驗(yàn)和空白干擾方面評(píng)價(jià)該方法的可行性，評(píng)價(jià)方法如下1、儀器與試藥高效液相色譜儀(Waters) ；Alltech-500型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；齊墩果酸對(duì)照品 和熊果酸對(duì)照品(含量測(cè)定用，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所)；本發(fā)明藥物(石家莊以嶺 藥業(yè)股份有限公司提供)；甲醇、乙腈均為色譜純，水為雙蒸餾水，其它試劑均為分析純。2、線(xiàn)性關(guān)系考察精密吸取齊墩果酸對(duì)照品溶液2、5、10、20iU，注入高效液相色譜儀中，進(jìn)行測(cè)定。 以進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn) 性回歸，計(jì)算相關(guān)系數(shù)，相關(guān)系數(shù)應(yīng)該大于0. 99。精密吸取熊果酸對(duì)照品溶液2、5、10、20iU，注入高效液相色譜儀中，進(jìn)行測(cè)定。以 進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn)性 回歸，計(jì)算相關(guān)系數(shù)，相關(guān)系數(shù)應(yīng)該大于0. 99。
3、溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果在測(cè)定的24小 時(shí)內(nèi)，計(jì)算RSD值，齊墩果酸峰面積RSD值和熊果酸峰面積RSD值為均應(yīng)小于5%。4、重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，分別取高、中、低三個(gè)樣品量，每個(gè)樣品量3份，按供試品溶液的制 備方法，分別進(jìn)行提取，制備，測(cè)定結(jié)果計(jì)算齊墩果酸的RSD和熊果酸的RSD均應(yīng)小于3%。5、回收率試驗(yàn)采用加樣回收實(shí)驗(yàn)，取同一批該中藥組合物9份，分別加入低、中、高三個(gè)濃度的 齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品溶液，按供試品溶液的制備方法，進(jìn)行提取，制備，測(cè)定，計(jì) 算回收率。計(jì)算齊墩果酸和熊果酸的平均回收率和RSD，RSD值應(yīng)小于3%。6、空白試驗(yàn)按本發(fā)明中中藥物組合物的制備方法制成不含女貞子的模擬制劑，按供試品溶液 的制備方法制成空白對(duì)照品溶液，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明其它組分對(duì)測(cè)定無(wú) 干擾。為更好的理解本發(fā)明中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸含量測(cè)定方法的技術(shù)方案， 下面通過(guò)以下實(shí)施例的實(shí)施，不對(duì)本發(fā)明方法構(gòu)成任何限制。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1為了便于本發(fā)明方法的實(shí)施，將該中藥組合物制備為膠囊劑處方黃芪120g 女貞子300g人參30g 靈芝95g 莪術(shù)65g 白術(shù)90g半枝蓮65g 絞股藍(lán)360g茯苓30g 雞內(nèi)金45g蛇莓65g白英195g 茵陳65g 徐長(zhǎng)卿195g 土鱉蟲(chóng)10g 白花蛇舌草195g制備方法(1)、按照原料藥重量比例稱(chēng)取中藥材，凈選；(2)、人參、女貞子，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小 時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，人參、女貞子殘?jiān)鼈溆茫?3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿，合并提取揮發(fā)油，提油時(shí)間不少于8小時(shí)，揮發(fā)油另器收 集，殘?jiān)八芤簜溆茫?4)、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金兩味動(dòng)物藥，水洗，60°C烘干，與茯苓合并，粉碎成100目粉， 滅菌后備用；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(2)中所 得人參、女貞子的醇提后殘?jiān)?，及步驟(3)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿提油后殘?jiān)八芤?合并，加9倍量水，加熱煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎煮液，加入步驟(2)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成相對(duì)密度1. 20-1. 25的清膏，干燥，粉碎，備用；將步驟(5)所得干膏粉加入適當(dāng)藥學(xué)上可接受的輔料制粒；(6)、將步驟(3)中所得揮發(fā)油噴入步聚(4)中所得茯苓、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金的細(xì)粉 中，混勻，與步驟(5)中中所得的顆粒混勻，密閉半小時(shí)，裝膠囊即得。
色譜條件和檢測(cè)條件色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX250mm、填料粒徑為5iim的C18 柱，流動(dòng)相由室溫下70體積份的甲醇、20體積份的乙腈和10體積份的0. 5%的冰乙酸混合 而成，流速為0. 35ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 的漂移管溫度為80°C。供試品溶液的制備方法取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細(xì)，取0. 6g，精 密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理20分 鐘，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備方法精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水 乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0. 10mg和熊果酸0. 06mg的溶液，即得。評(píng)價(jià)結(jié)果表1評(píng)價(jià)結(jié)果表 實(shí)施例2為了便于本發(fā)明方法的實(shí)施，將該中藥組合物制備為片劑處方黃芪360g 女貞子100g人參95g 靈芝30g 莪術(shù)195g 白術(shù)30g半枝蓮195g 絞股藍(lán)120g茯苓95g 雞內(nèi)金15g蛇莓195g白英65g 茵陳195g 徐長(zhǎng)卿65g 土鱉蟲(chóng)30g 白花蛇舌草65g制備方法(1)、按照原料藥重量比例稱(chēng)取中藥材，凈選；(2)、女貞子、人參加7倍量50%乙醇提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾
液回收乙醇至無(wú)醇味，藥渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿加5倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘?jiān)八?溶液備用；(4)、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細(xì)粉；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(1)中所 得人參、女貞子的醇提后殘?jiān)?，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿提油后殘?jiān)八芤?合并，加7倍量水，加熱煎煮2次，每次1小時(shí)，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；(6)、按常規(guī)制劑方法制成片劑。色譜條件和檢測(cè)條件色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX250mm、填料粒徑為5iim的C18 柱，流動(dòng)相由室溫下60體積份的甲醇、10體積份的乙腈和5體積份的0. 5%的冰乙酸混合 而成，流速為0. 15ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 的漂移管溫度為75°C。供試品溶液的制備方法取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細(xì)，取0. 5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理20分 鐘，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備方法精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水 乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0. 05mg和熊果酸0. 03mg的溶液，即得。評(píng)價(jià)結(jié)果表1評(píng)價(jià)結(jié)果表 實(shí)施例3為了便于本發(fā)明方法的實(shí)施，將該中藥組合物制備為丸劑處方黃芪250g 女貞子200g 人參65g 靈芝65g 64g半枝蓮128g絞股藍(lán)256g茯苓65g 雞內(nèi)金30g白英128g 茵陳128g 徐長(zhǎng)卿128g白花蛇舌草128g制備方法(1)、按照原料藥重量比例稱(chēng)取中藥材，凈選；(2)、女貞子、人參加8倍量70%乙醇提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾 液回收乙醇至無(wú)醇味，藥渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿加6倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘?jiān)八?溶液備用；(4)、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細(xì)粉；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(1)中所 得人參、女貞子的醇提后殘?jiān)?，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿提油后殘?jiān)八芤?合并，加8倍量水，加熱煎煮2次，每次3小時(shí)，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；(6)、按常規(guī)制劑方法制成丸劑。色譜條件和檢測(cè)條件色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX250mm、填料粒徑為5iim的C18 柱，流動(dòng)相由室溫下80體積份的甲醇、10體積份的乙腈和15體積份的0. 5%的冰乙酸混合 而成，流速為0. 45ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 的漂移管溫度為79°C。供試品溶液的制備方法取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細(xì)，取0.6g，精 密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇35ml，密塞，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理20分 鐘，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備方法精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水 乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0. 10mg和熊果酸0. 05mg的溶液，即得。
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莪術(shù)132g 白術(shù)
蛇莓128g 土鱉蟲(chóng)20g
評(píng)價(jià)結(jié)果表1評(píng)價(jià)結(jié)果表 實(shí)施例4為了便于本發(fā)明方法的實(shí)施，將該中藥組合物制備為散劑處方黃芪250g 女貞子200g 人參65g 靈芝65g 64g半枝蓮128g絞股藍(lán)256g茯苓65g 雞內(nèi)金30g白英128g 茵陳128g 徐長(zhǎng)卿128g白花蛇舌草128g制備方法(1)、按照原料藥重量比例稱(chēng)取中藥材，凈選；(2)、女貞子、人參加9倍量80%乙醇提取3次，每次4小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾 液回收乙醇至無(wú)醇味，藥渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿加8倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘?jiān)八?溶液備用；(4)、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細(xì)粉；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(1)中所 得人參、女貞子的醇提后殘?jiān)?，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿提油后殘?jiān)八芤?合并，加9倍量水，加熱煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；(6)、按常規(guī)制劑方法制成散劑。色譜條件和檢測(cè)條件色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX250mm、填料粒徑為5iim的C18 柱，流動(dòng)相由室溫下70體積份的甲醇、20體積份的乙腈和10體積份的0. 5%的冰乙酸混合 而成，流速為0. 75ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 的漂移管溫度為85°C。供試品溶液的制備方法取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細(xì)，取0. 7g，精 密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理20分 鐘，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備方法精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水 乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0. 15mg和熊果酸0. 08mg的溶液，即得。評(píng)價(jià)結(jié)果表1評(píng)價(jià)結(jié)果表
莪術(shù)132g 白術(shù)
蛇莓128g 土鱉蟲(chóng)20g
權(quán)利要求
一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定方法，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪120-360女貞子100-300 人參30-95 靈芝30-95莪術(shù)65-195 白術(shù)30-90 半枝蓮65-195 絞股藍(lán)120-360茯苓30-95 雞內(nèi)金15-45 蛇莓65-195白英65-195茵陳65-195 徐長(zhǎng)卿65-195土鱉蟲(chóng)10-30 白花蛇舌草65-195；其特征在于該方法采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)外標(biāo)法測(cè)定，測(cè)定條件如下色譜條件和檢測(cè)條件色譜柱為反相色譜柱，流動(dòng)相由室溫下60-80體積份的甲醇、10-30體積份的乙腈和5-15體積份的0.5％冰乙酸組成，流速為0.15-1.00ml/min，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的漂移管溫度為75-85℃；供試品溶液的制備取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細(xì)，取0.5-0.7g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10-50ml，密塞，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處20分鐘，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0.05-0.15mg和熊果酸0.03-0.09mg的溶液，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的含量測(cè)定方法，其特征在于，色譜條件和檢測(cè)條件為色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX 250mm、填料粒徑為5 y m的C18柱，流動(dòng)相由室溫下70體積份 的甲醇、20體積份的乙腈和10體積份的0. 5%的冰乙酸混合而成，流速為0. 35ml/min,理論 塔板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的漂移管溫度為80°C。
3.如權(quán)利要求1所述的含量測(cè)定方法，其特征在于供試品溶液的制備方法為取所述 中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細(xì)，取0. 6g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25ml，密塞，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理20分鐘，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重 量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的馬錢(qián)苷的含量測(cè)定方法，其特征在于對(duì)照品溶液的制備方法 為精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品和熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每lml約含齊墩果酸 0. 10mg和熊果酸0. 06mg的溶液，即得。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的含量測(cè)定方法，其特征在于所述中藥組合物有如下重 量份的原料藥制成黃芪120 女貞子300 人參30靈芝95莪術(shù)65 白術(shù)90半枝蓮65 絞股藍(lán)360 茯苓30雞內(nèi)金45蛇莓65白英195 茵陳65徐長(zhǎng)卿195 土鱉蟲(chóng)10白花蛇舌草195。
6.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的含量測(cè)定方法，其特征在于所述中藥組合物由如下重 量份的原料藥制成黃芪360 女貞子100 人參95靈芝30莪術(shù)195 白術(shù)30半枝蓮195絞股藍(lán)120 茯苓95雞內(nèi)金15蛇莓195白英65 茵陳195 徐長(zhǎng)卿65 土鱉蟲(chóng)30白花蛇舌草65。
7.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的含量測(cè)定方法，其特征在于所述中藥組合物由如下重 量份的原料藥制成黃芪250 女貞子200 人參65靈芝65莪術(shù)132 白術(shù)64半枝蓮128絞股藍(lán)256 茯苓65雞內(nèi)金30蛇莓128白英128 茵陳128 徐長(zhǎng)卿128 白花蛇舌草128 土鱉蟲(chóng)20。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物的活性成分由以 下步驟制成(1)、按照原料藥重量比例稱(chēng)取中藥材，凈選；(2)、女貞子、人參加6-10倍量50-90%乙醇提取1-3次，每次1-4小時(shí)，合并提取液，過(guò) 濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，藥渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿加4-8倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘?jiān)八?液備用；(4)、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細(xì)粉；(5)、黃苗、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、蛇莓、白英、茵陳，與步驟⑴中所得人 參、女貞子的醇提后殘?jiān)安襟E(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿提油后殘?jiān)八芤汉喜ⅲ?加7-10倍量水，加熱煎煮1-3次，每次1-3小時(shí)，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人參、女 貞子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；步驟(4)所得粉碎粉、步驟(3)所得揮發(fā)油與步驟(5)所得的干膏粉共同構(gòu)成該中藥 組合物的活性成分。
9.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的含量測(cè)定方法，其特征在于所述中藥組合物制劑劑型 為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑或丸劑。
10.如權(quán)利要求9所述的含量測(cè)定方法，其特征在于所述中藥組合物膠囊劑由以下步 驟制成(1)、按照原料藥重量比例稱(chēng)取中藥材，凈選；(2)、人參、女貞子，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合 并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，人參、女貞子殘?jiān)鼈溆茫?3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿，合并提取揮發(fā)油，提油時(shí)間不少于8小時(shí)，揮發(fā)油另器收集， 殘?jiān)八芤簜溆茫?4)、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金兩味動(dòng)物藥，水洗，60°C烘干，與茯苓合并，粉碎成100目粉，滅菌 后備用；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(2)中所得人 參、女貞子的醇提后殘?jiān)?，及步驟(3)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長(zhǎng)卿提油后殘?jiān)八芤汉喜ⅲ?加9倍量水，加熱煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎煮液，加入步驟(2)中所得人參、女貞子醇 提液，濃縮成相對(duì)密度1. 20-1. 25的清膏，干燥，粉碎，備用；將步驟(5)所得干膏粉加入適當(dāng)藥學(xué)上可接受的輔料制粒；(6)、將步驟(3)中所得揮發(fā)油噴入步聚(4)中所得茯苓、土鱉蟲(chóng)、雞內(nèi)金的細(xì)粉中，混 勻，與步驟(5)中中所得的顆粒混勻，密閉半小時(shí)，裝膠囊即得。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定方法。該中藥組合物是由黃芪、女貞子等中藥組合而成，具有益氣養(yǎng)陰、健脾補(bǔ)腎、散結(jié)通絡(luò)的功效。為有效控制其質(zhì)量，本發(fā)明采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定了其中齊墩果酸和熊果酸的含量，該方法靈敏、高效、準(zhǔn)確、穩(wěn)定，可有效控制該中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量。
文檔編號(hào)A61K35/37GK101874886SQ200910074239
公開(kāi)日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2009年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月28日
發(fā)明者劉敏彥, 張運(yùn)芳, 李向軍, 王玉峰, 許紅輝 申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司