專利名稱：：六味地黃丸質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物制劑及質(zhì)量控制方法，特別涉及六味地黃丸質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：腎虧是腎虛、腎氣虛的俗稱，腎藏精，腎虛以腎精不足為主要癥狀，一般癥狀有精神疲乏、頭昏、耳鳴、健忘、腰腎功能的減退，男女皆有。六味地黃丸由熟地黃、山茱萸(制)、牡丹皮、山藥、茯苳、澤瀉等六味中藥組合而成的，作為滋陰補(bǔ)腎的中藥，臨床效果甚佳。但是現(xiàn)有技術(shù)在對(duì)該組合物的質(zhì)量進(jìn)行有效控制時(shí)，仍存在很多缺陷，有待進(jìn)一步提咼°
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供六味地黃丸的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明第一種質(zhì)量控制方法，包括如下步驟六味地黃制劑的質(zhì)量控制方法，該方法包括如下步驟鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末l-15g，加甲醇10-100ml，回流提取0.5-2小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-4ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各l-20iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5-10:1比例的石油醚(6090°C)_乙酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑l-15g，研細(xì)，加乙醚5-40ml，回流0.5-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?.2-2ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含0.2-2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2_20y1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以l-5:1比例的環(huán)己烷-醋酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。含量測(cè)定山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制劑l-15g，精密稱定，加水10-50ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水10-50ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于50-15(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取2-10小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡1-5次，每次5-25ml(浸泡約0.5-10分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)?0-5:2)無(wú)水乙醇-氯仿的混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至l-10ml7量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每lml含0.l-2mg的溶液，作為對(duì)照口溶液。吸取供試品溶液1-10y1與5_20y1，對(duì)照品溶液1-10ill與l-10iU，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(1-50:1-10:2-15)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在95-120"烘215分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)、=500-550nm，AK=680-720nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。上述質(zhì)量控制方法中優(yōu)選為鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各101，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)-乙酸乙酯(l:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑5g，研細(xì)，加乙醚20ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖猯ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各101，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。含量測(cè)定山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制5g，精密稱定，加水30ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于IO(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡2次，每次15ml(浸泡約2分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇_氯仿(3:2)混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照口溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5iU與10ii1，對(duì)照品溶液4iU與8ii1，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20:5:8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘57分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，薄層色譜掃描法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)As=520nm、AK=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。本發(fā)明第二種六味地黃制劑的質(zhì)量控制方法，該方法包括如下步驟鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末l-15g，加甲醇10-100ml，回流提取0.5-2小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-4ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各l-20iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5-10:1比例的石油醚(6090°C)_乙酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑l-15gg，研細(xì)，加乙醚5-40ml，回流O.5_3小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?.2-2ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含0.2-2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2_20y1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以l-5:1比例的環(huán)己烷-醋酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。含量測(cè)定C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①50-100iim，總長(zhǎng)20-80cm、有效長(zhǎng)度80_20cm;CTAB濃度為4-12,l/L、NaOH濃度為2-6mmol/L，體積分?jǐn)?shù)1.0_4.0%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為230-300nm。對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為2-15yg/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品0.5-4g，置量瓶中，加10-100ml甲醇，超聲15-60min，放冷至室溫甲醇定容至10-100ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液l-20ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至lO-lOOmL，O.45iim濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2-20iil，注入色譜儀，測(cè)定。上述質(zhì)量控制方法中優(yōu)選為鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各10ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)-乙酸乙酯(l:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑5g，研細(xì)，加乙醚20ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖猯ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各10ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。含量測(cè)定C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①75iim，總長(zhǎng)45cm、有效長(zhǎng)度30cm;CTAB濃度為8mmol/L、NaOH濃度為4mmol/L，體積分?jǐn)?shù)2.5%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為8iig/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品lg，置50ml量瓶中，加45ml甲醇，超聲30min，放冷至室溫甲醇定容至50ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液4ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至50mL，0.45ym濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入色譜儀，測(cè)定。本發(fā)明第三種六味地黃的質(zhì)量控制方法，該方法包括如下步驟鑒別9A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末l-15g，加甲醇10-100ml，回流提取0.5-2小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-4ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各l-20iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5-10:1比例的石油醚(6090°C)_乙酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑l-15gg，研細(xì)，加乙醚5-40ml，回流O.5_3小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?.2-2ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含0.2-2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2_20y1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以l-5:1比例的環(huán)己烷-醋酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。含量測(cè)定C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①50-100iim，總長(zhǎng)20-80cm、有效長(zhǎng)度80_20cm;CTAB濃度為4-12,l/L、NaOH濃度為2-6mmol/L，體積分?jǐn)?shù)1.0_4.0%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為230-300nm。對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為2-15yg/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品0.5-4g，置量瓶中，加10-100ml甲醇，超聲15-60min，放冷至室溫甲醇定容至10-100ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液l-20ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至lO-lOOmL，O.45iim濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2-20iil，注入色譜儀，測(cè)定。D、山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制劑l-15g，精密稱定，加水10-50ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水10-50ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于50-15(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取2-10小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡1-5次，每次5-25ml(浸泡約0.5-10分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)?0-5:2)無(wú)水乙醇-氯仿的混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至l-10ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每lml含0.l-2mg的溶液，作為對(duì)照口溶液。吸取供試品溶液1-10y1與5_20y1，對(duì)照品溶液1-10iU與l-10iU，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(1-50:1-10:2-15)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在95-120"烘215分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)、=500-550nm，AK=680-720nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。上述質(zhì)量控制方法中優(yōu)選為鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各10ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)-乙酸乙酯(l:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑5g，研細(xì)，加乙醚20ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖猯ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各10ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。含量測(cè)定C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①75iim，總長(zhǎng)45cm、有效長(zhǎng)度30cm;CTAB濃度為8mmol/L、NaOH濃度為4mmol/L，體積分?jǐn)?shù)2.5%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為8iig/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品lg，置50ml量瓶中，加45ml甲醇，超聲30min，放冷至室溫甲醇定容至50ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液4ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至50mL，0.45ym濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入色譜儀，測(cè)定。D、山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制5g，精密稱定，加水30ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于IO(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡2次，每次15ml(浸泡約2分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇_氯仿(3:2)混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照口溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5iU與10ii1，對(duì)照品溶液4iU與8ii1，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20:5:8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘57分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，薄層色譜掃描法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)As=520nm、AK=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。所述六味地黃制劑的原料組成為熟地黃80-240重量份、山茱萸(制)40-120重量份、牡丹皮20-100重量份、山藥40-120重量份、茯苳20-100重量份、澤瀉20-100重量份。所述六味地黃制劑的原料組成優(yōu)選為熟地黃160重量份、山茱萸(制)80重量份、牡丹皮60重量份、山藥80重量份、茯苓60重量份、澤瀉60重量份。所述六味地黃制劑的制備方法為牡丹皮提取丹皮酚；藥渣與部分山茱萸、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮1-5次，每次0.5-5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，山藥與剩余山茱萸粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床或藥學(xué)上可接受的劑型，包括但不限于片齊U、膠囊齊U、散齊IJ、軟膠囊齊u、滴丸、蜜丸、丸齊u、顆粒齊u、蜜煉膏齊u、緩釋制齊u、速釋制齊u、控釋制劑、口服液體制齊u、注射制劑或外用制劑。所述六味地黃丸劑的制備方法優(yōu)選為以上六味，牡丹皮提取丹皮酚；藥渣與山茱萸27重量份、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的稠膏；山藥與剩余山茱萸粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；將以上稠膏、細(xì)粉、丹皮酚混勻，制丸，干燥，打光，即得。上述質(zhì)量控制方法中六味地黃制劑優(yōu)選原料為熟地黃160重量份、山茱萸(制)80重量份、牡丹皮60重量份、山藥80重量份、茯苓60重量份、澤瀉60重量份的顆粒劑，并通過(guò)如下方法制備以上六味，熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮兩次，煎液濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度1.321.35(80°C)，備用；山茱萸、山藥、牡丹皮粉碎成細(xì)粉，與濃縮液混合，加糊精適量和甜蜜素溶液適量，并加75%乙醇適量，制成顆粒，烘干，制成1000g，即得。上述質(zhì)量控制方法中六味地黃制劑優(yōu)選原料為熟地黃160重量份、山茱萸(制)80重量份、牡丹皮60重量份、山藥80重量份、茯苓60重量份、澤瀉60重量份的膠囊劑，并通過(guò)如下方法制備以上六味，牡丹皮、山茱萸、茯苓粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，其余熟地黃等三味，加水煎煮三次，第一、二次各為2小時(shí)，第三次為1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)濃縮成膏，與上述粉末混合，低溫干燥，粉碎，加輔料適量，混勻，裝入膠囊制成1000粒，即得。上述質(zhì)量控制方法中六味地黃制劑優(yōu)選原料為熟地黃160重量份、山茱萸(制)80重量份、牡丹皮60重量份、山藥80重量份、茯苓60重量份、澤瀉60重量份的軟膠囊劑，并通過(guò)如下方法制備以上六味，牡丹皮蒸餾，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；山茱萸用70%乙醇回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液備用。熟地黃、山藥、澤瀉加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液與上述水溶液合并，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.151.20(5(TC熱測(cè))的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)70%，靜置48小時(shí)，取上清液與上述山茱萸提取液合并，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，備用；茯苓加水煮沸后，于8(TC溫浸二次，每次1.5小時(shí)，合并浸出液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.151.20(5(TC熱測(cè))的清膏，與上述備用液合并，濃縮至相對(duì)密度為1.30(5(TC熱測(cè))的稠膏，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，加入牡丹皮揮發(fā)油及植物油，混勻，制成軟膠囊，即得。上述質(zhì)量控制方法中六味地黃制劑優(yōu)選原料為熟地黃160重量份、山茱萸(制)80重量份、牡丹皮60重量份、山藥80重量份、茯苓60重量份、澤瀉60重量份的片劑，并通過(guò)如下方法制備以上六味，牡丹皮、山茱萸、茯苓粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，其余熟地黃等三味，加水煎煮三次，第一、二各為2小時(shí)，第三次為1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮成膏，與上述粉末混勻，低溫干燥，粉碎，加輔料適量，混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得。上述質(zhì)量控制方法中六味地黃制劑優(yōu)選原料為熟地黃160重量份、山茱萸(制)80重量份、牡丹皮60重量份、山藥80重量份、茯苓60重量份、澤瀉60重量份的膏劑，并通過(guò)如下方法制備以上六味，加水煎煮三次，第一、二次各2小時(shí)，第三次1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，靜置，取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.281.32(85°C)的清膏，每100g清膏加煉蜜300g，混勻，即得。本發(fā)明一種滋陰補(bǔ)腎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明含量測(cè)定薄層鑒別方法檢測(cè)專屬性好、穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好、精密度高，更加適合工業(yè)化的生產(chǎn)，真正確保了臨床用藥的安全、有效、可靠。附圖1:丹皮酚含量測(cè)定流動(dòng)相選擇圖(A丹皮酚對(duì)照品、B中藥組合物制劑、C缺牡丹皮陰性對(duì)照l(shuí)丹皮酚)附圖2:丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)曲線圖下面實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。本發(fā)明所有實(shí)驗(yàn)例所選用的制劑均為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1制得的本發(fā)明丸劑，但是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不僅限于該丸劑。實(shí)驗(yàn)例1:藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)下述中藥組合物制劑為本發(fā)明實(shí)施例1的方法制備。中藥組合物制劑對(duì)心肌缺血大鼠血清CK、LDH、AST的影響1、實(shí)驗(yàn)方法取SD大鼠，按性別隨機(jī)分成6組正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、三個(gè)受試藥組(中藥組合物制劑高、中、低劑量組)、藥物對(duì)照組(地奧心血康)。正常對(duì)照組給予正常飲食飲水，模型對(duì)照組灌胃給予水，受試藥組分別灌胃給予105mg/kg、150mg/kg、210mg/kg的中藥組合物制劑藥液，藥物對(duì)照組分別灌胃給予52.5mg/kg的地奧心血康藥液，灌胃量均為1.5ml/100g。每天灌胃給藥l次，連續(xù)30d。第29、30d給藥后lh，分別尾靜脈注射垂體后葉素O.7u/kg。末次靜注后lh、24h，分別用毛細(xì)玻管眼眥取血。將血液3000r/min離心15min，取上清液，采用紫外可見分光光度計(jì)，比色測(cè)吸光度OD值，依法求得血清CK、LDH、AST酶活力。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對(duì)SD大鼠血清CK的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。表1中藥組合物制劑對(duì)SD大鼠血清CK的影響(l士s)組別n給藥齊lj量(mg/kg)-CK活力(U/ml)lh24h正常對(duì)照組11—43.77±17.4951.16±31.07模型對(duì)照組11—52..5±28.7386.43±34.69A中藥組合物制劑低1210535.24±20.5868.18±20.13中藥組合物制劑中1015033.30±25.8065.04±13.86*中藥組合物制劑高1021040.25±17.0459.46±26.63*地奧心血康1252.537.66±26.0345.19±14.64"AP<0.05，AAP<0.Ol，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組組相比；*P<0.05，**P<0.01，藥物治療組與模型對(duì)照組相比。大鼠尾靜脈給予垂體后葉素后24h，模型組大鼠血清中CK升高(P<0.05);與模型對(duì)照組比較，中藥組合物制劑高、中劑量組的CK均有明顯下降(P<0.05)，中藥組合物制劑低劑量組也有下降趨勢(shì)但不顯著。表明中藥組合物制劑能降低尾靜脈注射給予垂體后葉素后24h所升高的血清CK水平。2.2對(duì)SD大鼠血清LDH的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2中藥組合物制劑對(duì)SD大鼠血清LDH的影響(^士s)13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>AP<0.05，AAP<0.Ol，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組組相比。大鼠尾靜脈給予垂體后葉素后lh及24h，模型組大鼠血清中LDH含量升高(P<0.01)。但與模型對(duì)照組比較，各給藥組LDH含量均無(wú)明顯變化。說(shuō)明中藥組合物制劑對(duì)尾靜脈注射給予垂體后葉素24h所致的血清LDH升高無(wú)明顯影響。2.3對(duì)SD大鼠血清AST的影響，結(jié)果見表3。表3中藥組合物制劑對(duì)SD大鼠血清AST的影響(X土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>AP<0.05，AAP<0.Ol，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組組相比；*P<0.05，**P<0.01藥物治療組與模型對(duì)照組相比。大鼠尾靜脈給予垂體后葉素后lh，模型組大鼠血清AST升高(P<0.05);與模型對(duì)照組比較，中藥組合物制劑三個(gè)劑量組的AST均下降(P<0.05)。大鼠尾靜脈給予垂體后葉素后24h，中藥組合物制劑高、中、低劑量組的AST與模型對(duì)照組比較，降低更為明顯(P<0.01)。表明中藥組合物制劑具有降低給予垂體后葉素后24h所升高的血清AST。大鼠尾靜脈注射垂體后葉素lh，血清LDH、AST升高；24h時(shí)血清中CK升高，LDH、AST仍高居不下。中藥組合物制劑能降低尾靜脈注射垂體后葉素lh時(shí)所升高的血清AST水平，降低24h時(shí)血清AST、CK活力，但對(duì)LDH影響不大。說(shuō)明中藥組合物制劑改善垂體后葉素所致的急性心肌缺血損傷的作用機(jī)制之一可能是通過(guò)降低CK、AST活力。實(shí)驗(yàn)例2:熟地黃薄層鑒別試驗(yàn)中藥熟地黃為生地黃的經(jīng)高溫炮制后的加工品。藥材中的多糖經(jīng)高溫裂解，生成5-羥甲基糠醛，為熟地黃中的代表性成分。本實(shí)驗(yàn)中所述中藥組合物制劑粉末為本發(fā)明實(shí)施例l所制備的丸劑。1、供試品提取溶劑的選擇以甲醇、乙酸乙酯作為提取溶劑，通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較、優(yōu)選供試品最優(yōu)的提取溶劑，結(jié)果見表4。表4供試品提取溶劑的選擇<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>對(duì)照藥材溶液的制備及薄層色譜操作按以下方法進(jìn)行熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液1、2及熟地黃對(duì)照藥材溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甲醇可以有效地將中藥組合物制劑中的熟地黃成份提取出來(lái)，而乙酸乙酯由于極性較小，滲透性差，未能將中藥組合物制劑中的熟地黃成份提取，因此選擇甲醇作為提取中藥組合物制劑中的熟地黃成份的最優(yōu)溶劑。以甲醇、乙酸乙酯作為提取溶劑，通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較、優(yōu)選供試品最優(yōu)的提取溶劑方法一取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液1。方法二取中藥組合物制劑粉末5g，加乙酸乙酯50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液2。熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液1、2及熟地黃對(duì)照藥材溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液1色譜中，在熟地黃對(duì)照藥材溶液相對(duì)應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，供試品溶液2色譜中，在熟地黃對(duì)照藥材溶液相對(duì)應(yīng)的位置上沒有相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甲醇可以有效地將中藥組合物制劑中的熟地黃成份提取出來(lái)，而乙酸乙酯由于極性較小，滲透性差，未能將中藥組合物制劑中的熟地黃成份提取，因此選擇甲醇作為提取中藥組合物制劑中的熟地黃成份的最優(yōu)溶劑。2、供試品提取方法的選擇通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較常用提取方法，如回流、超聲、冷浸等提取中藥組合物制劑中的熟地黃成份的提取效率，優(yōu)選最有的供試品提取方法，結(jié)果見表5。表5供試品提取方法的選擇試驗(yàn)方法試驗(yàn)結(jié)果方法一取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取l小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液供試品溶液1在熟地黃對(duì)照藥材溶液相對(duì)應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顏色明顯、清晰取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇供試品溶液2在熟地黃對(duì)照藥材方法二50ml，超聲提取l小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液溶液相對(duì)應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顏色較淺，較困難2c比對(duì)取中藥組合物制劑粉末5g，冷浸過(guò)夜，供試品溶液2在熟地黃對(duì)照藥材方法三提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作溶液相對(duì)應(yīng)的位置上顯相同顏色為供試品溶液3。的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顏色較淺，較困難比對(duì)對(duì)照藥材溶液的制備及薄層色譜操作按以下方法進(jìn)行熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液1、2、3及熟地黃對(duì)照藥材溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。由于回流溫度高，提取效率較超聲和冷浸法提取高的多，可以將中藥組合物制劑中的熟地黃成份更完全的提取出來(lái)，因此選擇回流法提取中藥組合物制劑中的熟地黃成份。通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較常用提取方法，如回流、超聲、冷浸等提取中藥組合物制劑中的熟地16黃成份的提取效率，優(yōu)選最優(yōu)的供試品提取方法。方法一取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取l小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液1。方法二取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，超聲提取l小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液2。方法三取中藥組合物制劑粉末5g，冷浸過(guò)夜，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液3。熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液1、2、3及熟地黃對(duì)照藥材溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液1、2、3色譜中，在熟地黃對(duì)照藥材溶液相對(duì)應(yīng)的位置上均顯相同顏色的斑點(diǎn)，但供試品溶液1中斑點(diǎn)顏色明顯、清晰，供試品溶液2、3中，尤其供試品溶液3，斑點(diǎn)顏色較淺，比對(duì)較困難。由于回流溫度高，提取效率較超聲和冷浸法提取高的多，可以將中藥組合物制劑中的熟地黃成份更完全的提取出來(lái)，因此選擇回流法提取中藥組合物制劑中的熟地黃成份。3、供試品及對(duì)照藥材最優(yōu)點(diǎn)樣量的選擇供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的制備及薄層色譜操作按以下方法進(jìn)行取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液。熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液及熟地黃對(duì)照藥材溶液各5、10、20ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。試驗(yàn)結(jié)果見表6、7:表6對(duì)照藥材最優(yōu)點(diǎn)樣量的優(yōu)選<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>明顯，斑點(diǎn)大小適中，無(wú)拖尾，前后無(wú)干擾供試品色譜中在與熟地黃對(duì)照藥材色譜斑點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的位置上斑點(diǎn)20nl偏大，斑點(diǎn)與前后斑點(diǎn)相連，明顯拖尾，而且點(diǎn)樣時(shí)由于點(diǎn)樣次數(shù)因此確定供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的最佳點(diǎn)樣量為10iU。取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液。熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。吸取供試品溶液及熟地黃對(duì)照藥材溶液各5、10、20ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。熟地黃對(duì)照藥材溶液點(diǎn)樣量為5iU時(shí)，熟地黃對(duì)照藥材色譜斑點(diǎn)顏色較淺，不宜觀察；點(diǎn)樣量為10yl的熟地黃對(duì)照藥材斑點(diǎn)明顯，斑點(diǎn)大小適中，無(wú)拖尾；點(diǎn)樣量為20iU的熟地黃對(duì)照藥材色譜斑點(diǎn)偏大，明顯拖尾。供試品溶液點(diǎn)樣量為5iU時(shí)，供試品色譜中，在與熟地黃對(duì)照藥材色譜斑點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的位置上斑點(diǎn)強(qiáng)度較低，不宜觀察；供試品溶液點(diǎn)樣量為10iU時(shí)，供試品色譜中，在與熟地黃對(duì)照藥材色譜斑點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的位置上斑點(diǎn)明顯，斑點(diǎn)大小適中，無(wú)拖尾，前后無(wú)干擾；供試品溶液點(diǎn)樣量為20iU時(shí)，供試品色譜中在與熟地黃對(duì)照藥材色譜斑點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的位置上斑點(diǎn)偏大，斑點(diǎn)與前后斑點(diǎn)相連，明顯拖尾，而且點(diǎn)樣時(shí)由于點(diǎn)樣次數(shù)較多，破壞了硅膠薄層的表面。因此，確定供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的最佳點(diǎn)樣量為10iU。4、最優(yōu)展開劑比例的選擇熟地黃成分極性較小，因此所以選擇石油醚(6090°C)和極性稍大的醋酸乙酯為展開劑，通過(guò)實(shí)驗(yàn)選擇合適的比例，使所需成分得到分離。供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的制備及薄層色譜操作按以下方法進(jìn)行取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液。熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。取缺確熟地黃的熟地黃陰性制劑5g按供試品制備方法制備缺熟地黃陰性對(duì)照溶液。取5塊硅膠G薄層板，每塊薄層均點(diǎn)樣供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10iU，以相應(yīng)溶劑為展開劑，展開，取出，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰，試驗(yàn)結(jié)果見表8:表8最優(yōu)展開劑比例的選擇<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>石油醚(6090°C)-展開劑極性太大，供試品、對(duì)照藥材中熟地黃成分Rf值較大，醋酸乙酯(1:3)與其他成分斑點(diǎn)重疊，分離失敗醋酸乙酯展開劑極性太大，供試品、對(duì)照藥材中熟地黃成分Rf值較大，與其他成分斑點(diǎn)重疊，分離失敗因此確定硅膠薄層分離中藥組合物制劑中熟地黃成份的最佳開劑為石油醚(6090°C)-醋酸乙酯(1:1)。取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液。熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。取缺確熟地黃的熟地黃陰性制劑5g按供試品制備方法制備缺熟地黃陰性對(duì)照溶液。取5塊硅膠G薄層板，每塊薄層均點(diǎn)樣供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10ii1，分別以石油醚(6090°C)、石油醚(6090°C)-醋酸乙酯(5:1)、石油醚(6090°C)-醋酸乙酯(1:1)、石油醚(609(TC)-醋酸乙酯(1:3)、醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果如下薄層板1以石油醚為展開劑，由于展開劑極性太低，供試品、對(duì)照藥材中熟地黃成分均未展開；薄層板2以石油醚(609(TC)-醋酸乙酯(5:1)為展開劑，極性較低，展開不充分，供試品中熟地黃成分未與其他斑點(diǎn)分離；薄層板3以石油醚(609(TC)-醋酸乙酯(1:1)為展開劑，極性適中，熟地黃對(duì)照藥材品中目標(biāo)斑點(diǎn)Rf值為0.55且與其他成分分離良好，供試品中在熟地黃對(duì)照藥材相對(duì)應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，且熟地黃成分目標(biāo)斑點(diǎn)與其他成分斑點(diǎn)分離良好，陰性無(wú)干擾；薄層板4、5分別以石油醚(609(TC)-醋酸乙酯(1:3)、醋酸乙酯為展開劑，由于展開劑極性太大，供試品、對(duì)照藥材中熟地黃成分Rf值較大，與其他成分斑點(diǎn)重疊，分離失敗。5、顯色條件的選擇熟地黃中的化學(xué)成分在日光下沒有顏色，而且均沒有紫外吸收，需要利用通用型顯色劑顯色后觀察。常用的通用型顯色劑為10%的硫酸乙醇溶液、磷鉬酸試液、碘蒸汽。供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的制備及薄層色譜操作按以下方法進(jìn)行取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液。熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。取缺確熟地黃的熟地黃陰性制劑5g按供試品制備方法制備缺熟地黃陰性對(duì)照溶液。取3塊硅膠G薄層板，每塊薄層均點(diǎn)樣供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10iU，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干，試驗(yàn)結(jié)果見表9:表9顯色條件的選擇顯色方法試驗(yàn)結(jié)果薄層1噴以10%的硫酸乙在日光下觀察，供試品溶液色譜中斑點(diǎn)較多，在與熟地黃對(duì)醇溶液，105'C烘烤10分照藥材相對(duì)應(yīng)的位置上有其他斑點(diǎn)干擾鐘R光下觀察，供試品溶液色譜在與熟地黃對(duì)照藥材溶液色譜薄層2噴以磷鉬酸試液，相對(duì)應(yīng)的位置上有明顯顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰前后無(wú)干擾薄層3置碘缸中約3分鐘日光、紫外(365rim)下觀察，供試品溶液色譜中斑點(diǎn)均較少，后取出，揮盡板上吸附的在與熟地黃對(duì)照藥材溶液色譜相對(duì)應(yīng)的位置上沒有觀察到明碘顯顏色的斑點(diǎn)。.因此確定鑒別中藥組合物制劑中熟地黃成份的顯色條件為磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。熟地黃中的化學(xué)成分在日光下沒有顏色，而且均沒有紫外吸收，需要利用通用型顯色劑顯色后觀察。常用的通用型顯色劑為10%的硫酸乙醇溶液、磷鉬酸試液、碘蒸汽。取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液。熟地黃對(duì)照藥材lg，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，制成對(duì)照藥材溶液。取缺確熟地黃的熟地黃陰性制劑5g按供試品制備方法制備缺熟地黃陰性對(duì)照溶液。取3塊硅膠G薄層板，每塊薄層均點(diǎn)樣供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10iU，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干。方法一薄層1噴以10%的硫酸乙醇溶液，105t:烘烤10分鐘；方法二薄層2噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰；方法三薄層3置碘缸中約3分鐘后取出，揮盡板上吸附的碘。方法一在日光下觀察，供試品溶液色譜中斑點(diǎn)較多，在與熟地黃對(duì)照藥材相對(duì)應(yīng)的位置上有其他斑點(diǎn)干擾。方法二薄層在日光下觀察，供試品溶液色譜在與熟地黃對(duì)照藥材溶液色譜相對(duì)應(yīng)的位置上有明顯顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，前后無(wú)干擾。方法三薄層在日光、紫外(365nm)下觀察，供試品溶液色譜中斑點(diǎn)均較少，在與熟地黃對(duì)照藥材溶液色譜相對(duì)應(yīng)的位置上沒有觀察到明顯顏色的斑點(diǎn)。因此確定鑒別中藥組合物制劑中熟地黃成份的顯色條件為磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。綜上試驗(yàn)最后確定中藥組合物制劑中熟地黃的薄層色譜鑒別條件為取中藥組合物制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液。另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各10Pl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯(1:1)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)例3:丹皮酚含量測(cè)定方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)毛細(xì)管電泳(HPCE)以其柱效高，分離速度快，試劑和樣品消耗少、成本低，耐污染，在中草藥及其制劑的分析中有著高效液相色譜無(wú)法企及的優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)中所述中藥組合物制劑粉末為本發(fā)明實(shí)施例1所制備的丸劑。檢測(cè)儀器ACS2000型高效毛細(xì)管電泳儀(北京彩陸科學(xué)儀器有限公司)，電源電壓030kV可調(diào)檢測(cè)器UV-2102PC型紫外-可見分光光度計(jì)(UNICOinstrumentsCO.，LTD)色譜柱未涂層熔融石英毛細(xì)管①75iim，總長(zhǎng)45cm、有效長(zhǎng)度30cm。毛細(xì)管的處理實(shí)驗(yàn)前依次用lmol/LNaOH水溶液、水分別沖冼15min，進(jìn)樣前用緩沖液沖洗30min，實(shí)驗(yàn)4h后更換緩沖液。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用水沖洗，并用水浸泡過(guò)夜。電泳條件電壓15kV;進(jìn)樣方式重力進(jìn)樣；進(jìn)樣高度llcm;進(jìn)樣時(shí)間30s;CTAB濃度為8mmol/L、NaOH濃度為4mmol/L，體積分?jǐn)?shù)2.5%的甲醇。實(shí)驗(yàn)所用的溶液進(jìn)樣前均用0.45iim的濾膜過(guò)濾，并經(jīng)超聲波脫氣30min。檢測(cè)波長(zhǎng)274nm柱溫25t:對(duì)照品來(lái)源丹皮酚(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所)對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為8iig/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱取本品lg，置50ml量瓶中，加45ml甲醇，超聲30min，放冷至室溫甲醇定容至50ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液4ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至50mL，0.45iim濾膜過(guò)濾，即得。樣品批號(hào):04012001、04012102、04012203缺牡丹皮空白溶液的制備按中藥組合制劑制備工藝制備缺牡丹皮的空白樣品，并按供試品溶液的制備方法制備牡丹皮陰性對(duì)照液。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照液各101，注入液相色譜儀，測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照品和供試品峰形良好，供試品分離良好。在對(duì)照品和供試品對(duì)應(yīng)出峰處，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見圖1。1、檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇以水為參比液，對(duì)丹皮酚溶液在200400nm波長(zhǎng)之間進(jìn)行掃描，結(jié)果丹皮酚在274±2nm處有一吸收峰，，故選擇274nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。2、電泳分離介質(zhì)的選擇2.1電泳緩沖液的選擇選擇了硼砂、乙酸-乙酸鈉等不同的緩沖體系，結(jié)果表明，在這些緩沖體系中丹皮酚不出峰。選擇陽(yáng)離子表面活性劑CTAB，直接用NaOH調(diào)節(jié)pH，并加入有機(jī)溶劑甲醇改善分離度進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明丹皮酚峰形良好且無(wú)雜峰干擾。因此確定CTAB-NaOH-甲醇為電泳分離介質(zhì)。2.2表面活性劑濃度的影響表面活性劑的濃度對(duì)丹皮酚的遷移時(shí)間有較大影B向，隨著CTAB濃度的增大，丹皮酚的遷移時(shí)間明顯延長(zhǎng)，遷移時(shí)間受CTAB濃度的影響較小。實(shí)驗(yàn)考察了不同濃度CTAB時(shí)對(duì)3種物質(zhì)遷移時(shí)間的影響，丹皮酚峰的遷移時(shí)間均隨CTAB濃度的增大而增大，這可能與分離物質(zhì)的疏水性有關(guān)。在試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，隨著CTAB濃度的增大，相鄰峰的分離度增大。但是同時(shí)引起基線噪音增加，靈敏度下降、遷移時(shí)間延長(zhǎng)等負(fù)面效應(yīng)，從而使信噪比和柱效降低、分析周期延長(zhǎng)。CTAB在毛細(xì)管內(nèi)壁吸附以及電流增大可能是基線噪音增加，靈敏度下降的原因。綜合考慮分離度、基線噪音及遷移時(shí)間，本試驗(yàn)選擇CTAB濃度8mmol/L為最佳用2.3有機(jī)改性劑的選擇有機(jī)改性劑的種類和體積分?jǐn)?shù)對(duì)電泳的分離效果有很大的影響。本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以乙腈產(chǎn)生的基線噪音較甲醇高。因此，選用甲醇作有機(jī)改性劑。還考察了甲醇的不同體積分?jǐn)?shù)(1%10%)對(duì)分離度的影響，發(fā)現(xiàn)隨著甲醇體積分?jǐn)?shù)的增大，丹皮酚的遷移時(shí)間延長(zhǎng)，分離度增加，但是體積分?jǐn)?shù)超過(guò)2.5%后分離度不再增加。同時(shí)，基線噪音隨其體積分?jǐn)?shù)的增大而迅速增加，遷移時(shí)間延長(zhǎng)，綜合考慮，本實(shí)驗(yàn)選擇2.5%的甲醇為最佳用量。2.4NaOH溶液的濃度緩沖體系的pH對(duì)電泳行為有很大的影響。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)改變的NaOH的濃度來(lái)表示并調(diào)節(jié)緩沖體系的pH，考察了NaOH濃度(18mmol/L)對(duì)測(cè)定的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NaOH濃度對(duì)丹皮酚的峰形與遷移時(shí)間有較大的影響。當(dāng)NaOH濃度超過(guò)4mmol/L時(shí)，丹皮酚的峰形展寬，這可能是由于CTAB為陽(yáng)離子表面活性劑，易被毛細(xì)管壁吸附，pH降低時(shí)，毛細(xì)管表面硅羥基的解離被抑制，從而減少了樣品的吸附。因而本試驗(yàn)選擇在NaOH濃度為4mmol/L時(shí)進(jìn)行電泳測(cè)定。2.5分離電壓的選擇實(shí)驗(yàn)考察了電壓為1025kV的效果，發(fā)現(xiàn)電壓低時(shí)，基線穩(wěn)定，但樣品的分析時(shí)間長(zhǎng)，峰形寬；隨著電壓的增加，樣品的分析時(shí)間縮短，峰形窄，分離效果好，但基線的穩(wěn)定性略有下降，基線噪音增大。為保證較短的分離時(shí)間和較好基線，本試驗(yàn)選用15kV分離電壓。3、方法學(xué)實(shí)驗(yàn)3.l線性關(guān)系考察取丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液(520iig/mL)稀釋為2、4、8、12、20yg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密吸取10ii1注入色譜儀，按實(shí)驗(yàn)方法，定峰面積并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，表明丹皮酚在220iig/mL間呈線性關(guān)系，其回歸方程為Area=1273XAmt+1137，r=0.996，數(shù)據(jù)見表10和附圖2。表10丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)樣量(wg/mL)2481220峰面積3668.96235.511353.716411.926607.33.2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)制備供試品溶液，分別于配制后0、2、4、6、12、24小時(shí)，依法測(cè)定，進(jìn)樣體積10iU，結(jié)果表明，其在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定，結(jié)果見表11。表11穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)時(shí)間(hr)02461224峰面積11389.711070.111321.7.10989.711129.111368.9RSD(%)1.53.3精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10y1，重復(fù)進(jìn)樣5次，求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差<2%，結(jié)果見表12。表12精密度實(shí)驗(yàn)次數(shù)12345峰面積11379.411389.511401.411405.311398.2RSD(%)0.33.4重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)04012001)樣品5份，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液5份，對(duì)每份進(jìn)行測(cè)定，求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差<2%，結(jié)果見表13。表13重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)次數(shù)12345含量(mg/g)5.024.964.994.935.05平均含量(mg/g)一4.99RSD(0/o)1.03.5回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的同一批號(hào)(批號(hào)04012001)的樣品0.5g五份，分別置具塞錐形瓶中，精密量取丹皮酚對(duì)照品溶液(2.52mg/ml)lml，按供試品溶液的制備方法操作，測(cè)定其含量，并計(jì)算其回收率，測(cè)定結(jié)果見下表14。表14回收率實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)號(hào)取樣量(g)樣品中丹皮酚量(mg)加入丹皮酚量(mg)測(cè)出丹皮酚量(mg)回收率(%)平均回收率(％)RSD(%)10.50042.502.524.9898.6320.49922.492.524.9697.9930.50082.502.524.9697.5498.160.540.50122.502.524.9998.7350.49882.492.524.9697.914、含量測(cè)定對(duì)三批樣品進(jìn)行了含量測(cè)定，發(fā)明結(jié)果見下表15:表15樣品的含量測(cè)定24批號(hào)含量(mg/g)040120014.99040121024.94040122035.02根據(jù)以上數(shù)據(jù)，將含量限度定為本品每克含牡丹皮按丹皮酚(C9H1Q03)計(jì)，不得少于3.8mg。下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1六味地黃丸(濃縮丸)熟地黃160g山茱萸(制)80g牡丹皮60g山藥80g茯苳60g澤瀉60制法牡丹皮提取丹皮酚；藥渣與山茱萸27g、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的稠膏；山藥與剩余山茱萸粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；將以上稠膏、細(xì)粉、丹皮酚混勻，制丸，干燥，打光，即得。實(shí)施例2六味地黃丸(濃縮丸)質(zhì)量控制方法熟地黃160g山茱萸(制)80g牡丹皮60g山藥80g茯苳60g澤瀉60制法牡丹皮提取丹皮酚；藥渣與山茱萸27g、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的稠膏；山藥與剩余山茱萸粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；將以上稠膏、細(xì)粉、丹皮酚混勻，制丸，干燥，打光，即得。鑒別A:取本品5g，研細(xì)，加乙醚20ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖猯ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。B:取本品粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各ioyi，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(eo9(rc)-乙酸乙酯(i:i)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定山茱萸取本品5g，精密稱定，加水30ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于IO(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡2次，每次15ml(浸泡約2分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇_氯仿(3:2)混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照口溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5ill與10ii1，對(duì)照品溶液4ill與8ii1，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20:5:8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘57分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)A5=520nmAK=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。本品每克含山茱萸按熊果酸(C3。H4803)計(jì)，不得少于O.2mg。實(shí)施例3六味地黃丸(濃縮丸)質(zhì)量控制方法熟地黃160g山茱萸(制)80g牡丹皮60g山藥80g茯苳60g澤瀉60制法牡丹皮提取丹皮酚；藥渣與山茱萸27g、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的稠膏；山藥與剩余山茱萸粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；將以上稠膏、細(xì)粉、丹皮酚混勻，制丸，干燥，打光，即得。鑒別A:取本品5g，研細(xì)，加乙醚20ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖猯ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。B:取本品粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各ioyi，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(eo9(rc)-乙酸乙酯(i:i)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①75ym，總長(zhǎng)45cm、有效長(zhǎng)度30cm;CTAB濃度為8mmol/L、NaOH濃度為4mmol/L，體積分?jǐn)?shù)2.5%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為8iig/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品lg，置50ml量瓶中，加45ml甲醇，超聲30min，放冷至室溫甲醇定容至50ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液4ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至50mL，0.45iim濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入色譜儀，測(cè)定。實(shí)施例4六味地黃丸(濃縮丸)質(zhì)量控制方法熟地黃160g山茱萸(制)80g牡丹皮60g山藥80g茯苳60g澤瀉60g制法牡丹皮提取丹皮酚；藥渣與山茱萸27g、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的稠膏；山藥與剩余山茱萸粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；將以上稠膏、細(xì)粉、丹皮酚混勻，制丸，干燥，打光，即得。C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①75iim，總長(zhǎng)45cm、有效長(zhǎng)度30cm;CTAB濃度為8mmol/L、NaOH濃度為4mmol/L，體積分?jǐn)?shù)2.5%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為8iig/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品lg，置50ml量瓶中，加45ml甲醇，超聲30min，放冷至室溫甲醇定容至50ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液4ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至50mL，0.45i！m濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入色譜儀，測(cè)定。D、山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制5g，精密稱定，加水30ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于IO(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡2次，每次15ml(浸泡約2分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇_氯仿(3:2)混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照口溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5iU與10iil，對(duì)照品溶液4ii1與8iU，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20:5:8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘57分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，薄層色譜掃描法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)AS=520nm、AR=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。權(quán)利要求六味地黃制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末1-15g，加甲醇10-100ml，回流提取0.5-2小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-4ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各1-20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5-10∶1比例的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑1-15gg，研細(xì)，加乙醚5-40ml，回流0.5-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?.2-2ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1ml含0.2-2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；吸取上述兩種溶液各2-20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以1-5∶1比例的環(huán)己烷-醋酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)；含量測(cè)定山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制劑1-15g，精密稱定，加水10-50ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水10-50ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于50-150℃烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取2-10小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?30～60℃)浸泡1-5次，每次5-25ml(浸泡約0.5-10分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)?0-5∶2)無(wú)水乙醇-氯仿的混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至1-10ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.1-2mg的溶液，作為對(duì)照口溶液；吸取供試品溶液1-10μl與5-20μl，對(duì)照品溶液1-10μl與1-10μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以1-50∶1-10∶2-15的環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在95-120℃烘2～15分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝500-550nm，λR＝680-720nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。2.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)_乙酸乙酯(l:l)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑5g，研細(xì)，加乙醚20ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖猯ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；吸取上述兩種溶液各10ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)；山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制5g，精密稱定，加水30ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于IO(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡2次，每次15ml(浸泡約2分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇_氯仿(3:2)混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照口溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5iU與10iU，對(duì)照品溶液4iU與8iU，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20:5:8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘57分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，薄層色譜掃描法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)AS=520nm、AK=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。3.六味地黃制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下步驟鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末l-15g，加甲醇10-100ml，回流提取0.5-2小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-4ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各1-20ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5-10:1比例的石油醚(6090°C)_乙酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑l-15gg，研細(xì)，加乙醚5-40ml，回流0.5_3小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?.2-2ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含0.2-2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；吸取上述兩種溶液各2_20y1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以1-5:1比例的環(huán)己烷-醋酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)；C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①50-100iim，總長(zhǎng)20-80cm、有效長(zhǎng)度80_20cm;CTAB濃度為4-12,l/L、NaOH濃度為2-6mmol/L，體積分?jǐn)?shù)1.0_4.0%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為230-300nm;對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為2-15yg/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品0.5-4g，置量瓶中，加10-100ml甲醇，超聲15-60min，放冷至室溫甲醇定容至10-100ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液l-20ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至lO-lOOmL，O.45iim濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2-20iil，注入色譜儀，測(cè)定。4.如權(quán)利要求3所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)_乙酸乙酯(l:l)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑5g，研細(xì)，加乙醚20ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖猯ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；吸取上述兩種溶液各10ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)；C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①75ym，總長(zhǎng)45cm、有效長(zhǎng)度30cm;CTAB濃度為8mmol/L、NaOH濃度為4mmol/L，體積分?jǐn)?shù)2.5%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm;對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為8iig/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品lg，置50ml量瓶中，加45ml甲醇，超聲30min，放冷至室溫甲醇定容至50ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液4ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至50mL，0.45ym濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入色譜儀，測(cè)定。5.六味地黃的質(zhì)量控制方法，該方法包括如下步驟鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末l-15g，加甲醇10-100ml，回流提取0.5-2小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-4ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各1-20ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5-10:1比例的石油醚(6090°C)_乙酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑l-15gg，研細(xì)，加乙醚5-40ml，回流0.5_3小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?.2-2ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含0.2-2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；吸取上述兩種溶液各2_20y1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以1-5:1比例的環(huán)己烷-醋酸乙酯混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)；C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①50-100iim，總長(zhǎng)20-80cm、有效長(zhǎng)度80_20cm;CTAB濃度為4-12,l/L、NaOH濃度為2-6mmol/L，體積分?jǐn)?shù)1.0_4.0%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為230-300nm;對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為2-15yg/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品0.5-4g，置量瓶中，加10-100ml甲醇，超聲15-60min，放冷至室溫甲醇定容至10-100ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液l-20ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至lO-lOOmL，O.45iim濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2-20iil，注入色譜儀，測(cè)定;D、山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制劑l-15g，精密稱定，加水10-50ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水10-50ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于50-15(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取2-10小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡l-5次，每次5-25ml(浸泡約0.5-10分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)?0-5:2)無(wú)水乙醇-氯仿的混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至l-10ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每lml含0.l-2mg的溶液，作為對(duì)照口溶液；吸取供試品溶液1-10y1與5-20y1，對(duì)照品溶液1-10iU與l-10iU，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(1-50:1-10:2-15)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在95-120"烘215分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)、=500-550nm，AK=680-720nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。6.如權(quán)利要求5所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟鑒別A、熟地黃薄層鑒別取六味地黃制劑粉末5g，加甲醇50ml，回流提取1小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml，作為供試品溶液，另取熟地黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液各10iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)_乙酸乙酯(l:l)為展開劑，展開，涼干，噴以磷鉬酸試液，電熱吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、牡丹皮薄層鑒別取六味地黃制劑5g，研細(xì)，加乙醚20ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖猯ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；吸取上述兩種溶液各10ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)；C、牡丹皮含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)未涂層熔融石英毛細(xì)管①75ym，總長(zhǎng)45cm、有效長(zhǎng)度30cm;CTAB濃度為8mmol/L、NaOH濃度為4mmol/L，體積分?jǐn)?shù)2.5%的甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm;對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對(duì)照品用水溶解，配制成濃度為8iig/mL的對(duì)照品丹皮酚溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取本品lg，置50ml量瓶中，加45ml甲醇，超聲30min，放冷至室溫甲醇定容至50ml，過(guò)濾后取續(xù)濾液4ml旋轉(zhuǎn)真空揮干，用水超聲振蕩溶解定容至50mL，0.45ym濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入色譜儀，測(cè)定；D、山茱萸含量測(cè)定取六味地黃制5g，精密稱定，加水30ml，放置使溶散，用濾紙濾過(guò)；藥渣再用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，于IO(TC烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?3060°C)浸泡2次，每次15ml(浸泡約2分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇_氯仿(3:2)混合液適量，微熱使溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取熊果酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照口溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5iU與10iU，對(duì)照品溶液4iU與8iU，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20:5:8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘57分鐘，至斑點(diǎn)清晰，取出在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，薄層色譜掃描法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)As=520nm、AK=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。7.如權(quán)利要求l-6所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述六味地黃制劑是有如下方法制備的取原料藥熟地黃80-240重量份、山茱萸(制)40-120重量份、牡丹皮20-100重量份、山藥40-120重量份、茯苓20-100重量份、澤瀉20-100重量份；牡丹皮提取丹皮酚；藥渣與山茱萸27重量份、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的稠膏；山藥與剩余山茱萸粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；將以上稠膏、細(xì)粉、丹皮酚混勻，制丸，干燥，打光，即得。全文摘要本發(fā)明公開了六味地黃丸的質(zhì)量控制方法，該方法包括熟地黃、牡丹皮薄層鑒別及山茱萸、牡丹皮的含量測(cè)定。本發(fā)明含量測(cè)定、薄層鑒別方法檢測(cè)專屬性好、穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好、精密度高，更加適合工業(yè)化的生產(chǎn)，真正確保了臨床用藥的安全、有效、可靠。文檔編號(hào)A61P37/04GK101773592SQ20091007633公開日2010年7月14日申請(qǐng)日期2009年1月13日優(yōu)先權(quán)日2009年1月13日發(fā)明者付建家,付立家申請(qǐng)人:北京亞?wèn)|生物制藥有限公司