專(zhuān)利名稱(chēng)：用于integrinα_vβ₃陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腫瘤診斷及治療的放射性藥物，特別涉及用于integrin av|33陽(yáng)性 腫瘤的RGD多肽放射性藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中關(guān)鍵的一環(huán)是腫瘤血管生成。沒(méi)有新的血管生成腫瘤在長(zhǎng) 到幾個(gè)厘米大小之后便不能再繼續(xù)生長(zhǎng)。腫瘤血管生成被各種蛋白分子調(diào)控， 其中包括integrinavp3。 integrinav|33是一種細(xì)胞外基質(zhì)受體，它是由a和卩兩個(gè) 亞基組成的異源二聚體跨膜糖蛋白。integrin av(33是整合素家族重要的組成成員， 作為與新生血管相關(guān)的分子標(biāo)志物之一，它高表達(dá)在新生血管內(nèi)皮細(xì)胞表面和 某些腫瘤細(xì)胞表面(成神經(jīng)細(xì)胞瘤、骨肉瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌和前列腺癌 等)，而在已存在的血管和正常組織中不表達(dá)或表達(dá)很低。integrin (33在腫瘤生 長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的高度限制表達(dá)，使其成為一個(gè)非常有吸引力的耙點(diǎn)，用于腫 瘤的診斷和治療。
研究證實(shí)含有RGD(Arg-Gly-Asp，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列的配體與 integrin c^3具有高親和力和特異性。不同放射性核素標(biāo)記的RGD序列配體，如 現(xiàn)有的RGD環(huán)肽二聚體和四聚體等已被用于腫瘤的顯像和治療研究。RGD 二 聚體或四聚體比其單體具有更高的integrin (XvP3親和力，主要源于兩個(gè)因素，一 是兩個(gè)RGD模序(motif)能同時(shí)與細(xì)胞表面的integrin 01^3相結(jié)合，或者是一個(gè) RGD模序與integrin av|33結(jié)合之后增加了細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)局部RGD濃度。如 果兩個(gè)RGD模序之間的距離足夠長(zhǎng)，那么它們可以同時(shí)與integrin 0^3結(jié)合； 如果兩個(gè)RGD模序之間的距離不是足夠長(zhǎng)，那么它們只能增加局部RGD濃度。 目前報(bào)道的RGD環(huán)肽二聚體E[c(RGDxK)]2 (E代表谷氨酸，c代表環(huán)化，R代 表精氨酸，G代表甘氨酸，D代表天冬氨酸，x為f或y，分別代表苯丙氨酸或 酪氨酸)，其兩個(gè)RGD模序之間的距離為6個(gè)鍵，由于距離不夠長(zhǎng)，因此 E[c(RGDxK)]2的兩個(gè)RGD模序很難同時(shí)與細(xì)胞表面相鄰的兩個(gè)的integrin av(33 受體結(jié)合(參見(jiàn)圖l)。從這個(gè)意義上講，兩個(gè)RGD模序(motif)能同時(shí)與細(xì)胞表面的integrin avP3相結(jié)合具有更重要的作用。為此，有必要提出新型的RGD多 肽二聚體，使二聚體分子中的兩個(gè)RGD模序之間距離足夠長(zhǎng)以能同時(shí)與細(xì)胞表 面表達(dá)的相鄰的integrin avp3受體相結(jié)合，增強(qiáng)RGD多肽與integrin avp3的親和 力，提高腫瘤對(duì)藥物的攝取，并在此基礎(chǔ)上發(fā)明用于integrin av|33陽(yáng)性腫瘤的 RGD多肽放射性藥物，以達(dá)到更好的診治效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性 藥物及其制備方法。該藥物首先將三個(gè)甘氨酸分子(G3， G:glycine)或四個(gè)聚乙 二醇分子(PEG4， PEG = Polyethylene glycol)與RGD單體連接，然后再將此二聚 化合成新型RGD環(huán)肽二聚體E[L-c(RGDxK)]2,使二聚體分子中的兩個(gè)RGD模 序之間距離足夠長(zhǎng)以使其能同時(shí)與細(xì)胞表面表達(dá)的相鄰的integrin avp3受體相結(jié) 合(參見(jiàn)圖2)，即以雙價(jià)形式與integrin (XvP3結(jié)合，這樣會(huì)進(jìn)一步增強(qiáng)結(jié)合親和 力以及腫瘤對(duì)藥物的攝取，達(dá)到更好的診斷治療效果。該藥物通過(guò)DOTA、DTPA、 NOTA及其衍生物作為雙功能螯合劑將放射性核素mIn、 9GY、 177Lu、 68Ga及64Cu 等標(biāo)記到新型RGD環(huán)肽二聚體分子上，在體內(nèi)標(biāo)記藥物通過(guò)RGD多肽的靶向 作用濃聚到腫瘤部位，利用核醫(yī)學(xué)的單光子斷層顯像技術(shù)和正電子斷層顯像技 術(shù)對(duì)integrin av|33陽(yáng)性腫瘤進(jìn)行顯像診斷，還可以通過(guò)放射性核素放射的p—粒子 殺傷腫瘤細(xì)胞，對(duì)integrin (33陽(yáng)性腫瘤進(jìn)行放射靶向治療。當(dāng)通過(guò)雙功能螯合 劑DOTA或DTPA或其衍生物標(biāo)記放射性核素mIn時(shí)，本發(fā)明RGD多肽放射 性藥物用于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的單光子斷層顯像診斷。當(dāng)通過(guò)雙功能螯合劑 DOTA或NOTA或其衍生物標(biāo)記放射性核素68Ga時(shí)，本發(fā)明RGD多肽放射性 藥物用于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的正電子斷層顯像診斷。當(dāng)通過(guò)雙功能螯合劑 DOTA或TETA或其衍生物標(biāo)記放射性核素64Cu時(shí)，本發(fā)明RGD多肽放射性藥 物用于integrin av|33陽(yáng)性腫瘤的正電子斷層顯像診斷。當(dāng)通過(guò)雙功能螯合劑 DOTA或DTPA或其衍生物標(biāo)記放射性核素9QY或177Lu時(shí)，本發(fā)明RGD多肽 放射性藥物用于integrin av|33陽(yáng)性腫瘤的放射靶向治療。
本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種用于integrin av(33陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥物，包括RGD多肽、 雙功能螯合劑(Chelator)和放射性核素(Nuclide)，所述RGD多肽為RGD環(huán)肽二 聚體，所述RGD環(huán)肽二聚體是將連接劑L與RGD多肽單體c(RGDfK)連接，再
6將兩個(gè)連接有連接劑L的RGD多肽單體L-c(RGDfK)二聚化而合成的RGD環(huán)肽 二聚體E[L-c(RGDxK)]2;所述放射性核素通過(guò)一個(gè)雙功能螯合劑標(biāo)記所述RGD 環(huán)肽二聚體，所述RGD環(huán)肽二聚體與所述雙功能螯合劑之間還連接有藥代動(dòng)力 學(xué)修飾分子 PKM ， 所述 RGD 多肽放射性藥物為 Nuclide-Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2;所述RGD多肽放射性藥物為無(wú)色透明 液體針劑。
所述連接劑L為PEG4或G3。
所述藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM為G2或G3或G4或PEG4( G2代表兩個(gè)甘氨
酸分子，G4為四個(gè)甘氨酸分子)。
所述放射性核素為mIn，所述放射性核素mIn是通過(guò)雙功能螯合劑DOTA 和DTPA及其衍生物中的一種標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體。
所述放射性核素為64Cu，所述放射性核素64Cu是通過(guò)雙功能螯合劑DOTA 和TETA及其衍生物中的一種標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體。
所述放射性核素為68Ga，所述放射性核素68Ga是通過(guò)雙功能螯合劑DOTA 和NOTA及其衍生物中的一種標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體。
所述放射性核素為9QY或177Lu ，所述放射性核素9QY或mLu是通過(guò)雙功 能螯合劑DOTA和DTPA及其衍生物中的一種標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體。
所述的用于integrin a、,p3陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥物的制備方法，包 括以下步驟
a、 L-c(RGDxK)的制備 (L為PEG4或Gs)
將Boc(t-Butyl carbamate,叔丁氧羰基)保護(hù)的連接劑L溶于1 mL DMF(二甲 基甲酰胺)中，加入NHS (N-羥基琥珀酰亞胺,也為HOSu)和DCC (二環(huán)己基碳二 亞胺)，室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)；將RGD多肽單體c(RGDxK)加入到上述反應(yīng) 液中，用D正A(N,N-二異丙基乙胺)將pH調(diào)節(jié)到8.0-8.5，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜；向反 應(yīng)液中加入3 mL 0.5 M NH4OAc緩沖溶液(pH = 7.0)并過(guò)濾，濾液經(jīng)Zorbax C18 半制備柱HPLC分離純化，收集目標(biāo)物的餾分，合并收集液并凍干；獲得產(chǎn)物 經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物Boc-L-c(RGDxK);將Boc-L-c(RGDxK)力口 入到3.0mLTFA(三氟乙酸)中，室溫反應(yīng)30分鐘；旋蒸去除TFA，殘留物溶 于2 mL 0.5 M NH4OAc緩沖溶液(pH = 7.0)，經(jīng)Zorbax CI8半制備柱HPLC方法 分離純化，收集目標(biāo)物的餾分，合并收集液并凍干；獲得產(chǎn)品經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分 析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物L(fēng)-c(RGDxK);
b、 E[L-c(RGDxK)]2的制備將Boc保護(hù)的谷氨酸(E)溶于5mLDMF，加入NHS和DCC，室溫?cái)嚢?0 小時(shí)；濾掉副產(chǎn)物DCU(二環(huán)己基脲)，濾液真空蒸干得到粗產(chǎn)物；用3 mL CH2C12 溶解粗產(chǎn)物，濾掉不溶物，濾液濃縮至l mL左右；緩慢逐滴加入到30mL乙 醚中，析出白色沉淀，過(guò)濾并真空干燥得到產(chǎn)品；獲得產(chǎn)物經(jīng)& NMR核磁譜 分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物Boc-E(OSu)2;將Boc-E(OSu)2溶于無(wú)水1 mL DMF中，加 入L-c(RGDxK);使用DIEA調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，經(jīng)Zorbax C18 半制備柱HPLC分離純化，合并收集液并凍干，獲得產(chǎn)物經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確 認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物Boc-E[L-c(RGDxK)]2。用無(wú)水TFA浸泡Boc-E[L-c(RGDxK)]25分 鐘，去除Boc-保護(hù)基團(tuán)；粗產(chǎn)品經(jīng)Zorbax C18半制備柱HPLC分離純化，合并 收集液并凍干，得到產(chǎn)品經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物E[L-c(RGDxK)]2;
c、 PKM-E[L-c(RGDxK)]2的制備 (PKM為G2或G3或G4或PEG4)
將Boc-PKM-OSu和E[L-c(RGDxK)h溶于2 mL DMF和H20的混合液 (l:l=v:v)，使用0.1 NNaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)液真 空蒸干，得到粗產(chǎn)品并將之溶于2mLTFA，將溶液在室溫下攪拌15分鐘；產(chǎn)品 經(jīng)Zorbax C18半制備柱HPLC分離純化，收集目標(biāo)物的餾分，合并收集液并凍
干，獲得產(chǎn)物經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)品PKM-E[L-cCRGDxK)]2;
d、 Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2的制備(Chelator為DOTA或DTPA或NOTA 或TETA或其衍生物)
將Chelator和PKM-E[L-c(RGDxK)]2溶于1 mL DMF(二甲基甲酰胺)中，用
DIEA(N,N-二異丙基乙胺)將pH調(diào)節(jié)到8.5-9.0，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜；產(chǎn)品經(jīng)Zorbax
C18半制備柱HPLC分離純化，收集目標(biāo)物的餾分，合并收集液并凍干；
e、 Nuclide-Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2的制備(Nuclide為mIn或90Y或 177Lu或68Ga或64Cu)
將0.2 mL溶有Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2偶聯(lián)物(濃度0.2-0.5 mg/mL) 的NaOAc(pH = 5.0)緩沖溶液加入到西林瓶中，加入10-50 放射性核素(20-50 mCi)， 10(TC水浴加熱西林瓶，反應(yīng)10-15分鐘，反應(yīng)結(jié)束后室溫冷卻10分鐘， 制成RGD多肽放射性藥物Nuclide-Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2。
所述HPLC方法為使用LabAlliance HPLC系統(tǒng)配備Zorbax C18半制備柱， 梯度淋洗36分鐘，流速2.5mL/min，其中流動(dòng)相A為25 mMNHjOAc, B為乙 睛。淋洗梯度設(shè)定為起始時(shí)90% A和10% B， 5分鐘時(shí)85% A和15% B， 30分 鐘時(shí)65% A和35% B， 32-36分鐘時(shí)50% A和50% B。
8本發(fā)明的有益效果
1、 在本發(fā)明RGD多肽放射性藥物，首先將三個(gè)甘氨酸分子(G3)或四個(gè)聚乙 二醇分子(PEG4)與RGD多肽單體c(RGDfK)]2連接，然后再將此二聚化，即合成 E[G3-c(RGDxK)]2或E[PEG4-c(RGDxK)]2，這樣兩個(gè)RGD模序之間的距離就從6 個(gè)鍵增加到26個(gè)鍵或38個(gè)鍵，使二聚體分子中的兩個(gè)RGD模序之間距離足夠 長(zhǎng)以使其能同時(shí)與細(xì)胞表面表達(dá)的相鄰的integrina^3受體相結(jié)合，即以雙價(jià)形 式與integrin avp3結(jié)合，這樣會(huì)進(jìn)一步增強(qiáng)結(jié)合親和力以及腫瘤對(duì)藥物的攝取， 達(dá)到更好的診斷或治療效果。
2、 本發(fā)明不僅在兩個(gè)RGD模序之間引入G3和PEG4，同時(shí)在RGD多肽分 子新型RGD環(huán)肽二聚體E[L-c(RGDxK)]2與雙功能螯合劑之間引入PKM，即 Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2，以進(jìn)一步改善藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，特別是從非腫 瘤組織的清除動(dòng)力學(xué)。
3、 利用本發(fā)明制備方法，當(dāng)通過(guò)雙功能螯合劑DOTA或DTPA或其衍生物 標(biāo)記放射性核素mIn時(shí)，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物用于integrin avp3陽(yáng)性腫 瘤的單光子斷層顯像診斷。當(dāng)通過(guò)雙功能螯合劑DOTA或NOTA或其衍生物標(biāo) 記放射性核素68Ga時(shí)，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物用于integrin ccvp3陽(yáng)性腫瘤 的正電子斷層顯像診斷。當(dāng)通過(guò)雙功能螯合劑DOTA或TETA或其衍生物標(biāo)記 放射性核素64Cu時(shí)，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物用于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的 正電子斷層顯像診斷。當(dāng)通過(guò)雙功能螯合劑DOTA或DTPA或其衍生物標(biāo)記放 射性核素9()Y或177Lu時(shí)，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物用于integrin (xvp3陽(yáng)性腫 瘤的放射耙向治療。
以下結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。


圖1為結(jié)構(gòu)改造前RGD環(huán)肽二聚體與integrin avJ33受體結(jié)合示意圖； 圖2為結(jié)構(gòu)改造后RGD環(huán)肽二聚體與integrin av|33受體結(jié)合示意圖； 圖3為RGD環(huán)肽二聚體及其mIn標(biāo)記物結(jié)構(gòu)示意圖； 圖4為不同RGD多肽體外受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合分析；
圖5為min標(biāo)記的不同RGD多肽于注射后不同時(shí)間在神經(jīng)膠質(zhì)瘤攝取的對(duì)比； 圖6為注射mIn-DOTA-3PEG4-dimer后24 h神經(jīng)膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型的y顯像圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明實(shí)施例中所采用的材料Dicyclcohexylcarbodiimide (DCC， N,N'-二 環(huán)己基碳二亞胺)，N-hydroxysuccinimide (NHS ， N-羥基琥珀酰亞胺)， N,N-Diisopropylethylamine (DIEA， N，N-二異丙基乙胺)，N,N-Dimethylform amide (DMF， N,N-二甲基甲酰胺)，Trifluoroacetic acid (TFA，三氟乙酸)，購(gòu)自美國(guó) Sigma-Aldrich 公司。DOTA (l,4,7,10-tetraazacyclododecane-N,N，，N，，,N，，， -tetraacetic acid, 1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷四乙酸)、DTPA (diethylenetriamine pentaacetic acid， 二乙烯三胺五乙酸)及NOTA (l,4,7-triazacyclononane-N,N，,N，， -triacetic acid, 1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷三乙酸)購(gòu)自美國(guó)Macrocyclics公司。環(huán)化 RGD多肽單體c(RGDfK)]2購(gòu)自美國(guó)Peptide International, Inc.公司。mIn核素購(gòu) 自美國(guó)PerkinElmer公司。 實(shí)施例1:
本實(shí)施例以min-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2(簡(jiǎn)稱(chēng)mIn-DOTA-3PEG4-dimer) RGD多肽放射性藥物及其制備方法為例。
min-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2(簡(jiǎn)稱(chēng)min-DOTA匿3PEG4-dimer)多肽放 射性藥物包括RGD環(huán)肽二聚體、雙功能螯合劑DOTA和放射性核素mIn。 RGD 環(huán)肽二聚體是將連接劑PEG4與RGD多肽單體c(RGDfK)連接，再將兩個(gè)連接有 PEG4的RGD多肽單體PEG4-c(RGDfK)二聚化而合成的RGD環(huán)肽二聚體，即 E[PEG4-c(RGDfK)]2，放射性核素mIn通過(guò)一個(gè)雙功能螯合劑DOTA標(biāo)記所述 RGD環(huán)肽二聚體，所述RGD環(huán)肽二聚體與所述雙功能螯合劑之間還連接有藥 代動(dòng)力學(xué)修飾分子PEG4 ，所述RGD多肽放射性藥物為 mIn-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2;所述RGD多肽放射性藥物為無(wú)色透明液 體針劑。
該藥物首先將四個(gè)聚乙二醇分子(PEG4， PEG = Polyethylene glycol)與RGD 單體連接，然后再將此二聚化合成新型RGD環(huán)肽二聚體E[L-c(RGDxK)]2，使二 聚體分子中的兩個(gè)RGD模序之間距離足夠長(zhǎng)以使其能同時(shí)與細(xì)胞表面表達(dá)的相 鄰的integrin 卩3受體相結(jié)合(參見(jiàn)圖2)，即以雙價(jià)形式與integrin 卩3結(jié)合， 與現(xiàn)有技術(shù)RGD環(huán)肽二聚體E[c(RGDxK)]2的兩個(gè)RGD模序很難同時(shí)與細(xì)胞表 面相鄰的兩個(gè)的integrin 01^3受體結(jié)合(參見(jiàn)圖l)相比，新型RGD環(huán)肽二聚體 E[L-c(RGDxK)]2兩個(gè)RGD模序(motif)能同時(shí)與細(xì)胞表面的integrin ^|33相結(jié)合 具有更重要的作用，進(jìn)一步增強(qiáng)了結(jié)合親和力以及腫瘤對(duì)藥物的攝取，達(dá)到更
10好的診治效果。
該藥物通過(guò)DOTA作為雙功能螯合劑將放射性核素mIn標(biāo)記到新型RGD 環(huán)肽二聚體分子上，在體內(nèi)標(biāo)記藥物通過(guò)RGD多肽的靶向作用濃聚到腫瘤部位， 利用核醫(yī)學(xué)的單光子斷層顯像技術(shù)對(duì)integrin otv(33陽(yáng)性腫瘤進(jìn)行顯像診斷，
min-DOTA隱PEG4-E[PEG4誦c(RGDfK)]2(min誦DOTA-3PEG4-dimer)制備方法
如下
預(yù)先配備Zorbax C18半制備柱，HPLC方法一使用LabAlliance HPLC 系統(tǒng)，配備ZorbaxC18半制備柱(9.4 mm x 250 mm， 100 A pore size),梯度淋洗 36分鐘，流速2.5mL/min，其中流動(dòng)相A為25 mM NH4OAc (pH 5.0)， B為乙 腈。淋洗梯度設(shè)定為起始時(shí)90。/。A和10%B， 5分鐘時(shí)85。/。A和15。/。B， 30分 鐘時(shí)65% A和35% B， 32-36分鐘日寸50% A和50% B。 PEG4-c(RGDfK)的制備
將Boc(t-Butyl carbamate,叔丁氧羰基)保護(hù)的PEG4-OH溶于1 mL DMF(二 甲基甲酰胺)中，加入NHS (N-羥基琥珀酰亞胺，也為HOSu) (3.5 mg， 0.03 mmol) 和DCC(二環(huán)己基碳二亞胺)(6.2 mg, 0.03 mmol)，室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)。將 c(RGDfK) (26.3 mg, 0.02 mmol)加入到以上反應(yīng)液中，用DIEA(N,N-二異丙基乙 胺)將pH調(diào)節(jié)到8.0-8.5，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。向反應(yīng)液中加入3 mL 0.5 M NH4OAc 緩沖溶液(pH = 7.0)并過(guò)濾，濾液經(jīng)Zorbax C18半制備柱(HPLC方法一)分離純 化，收集保留時(shí)間約為14分鐘的餾分，合并收集液并凍干。獲得產(chǎn)品 Boc-PEG4-c(RGDfK)約7.5 mg。 ESI-MS質(zhì)譜分析結(jié)果為m/z=1665([M+H]+)， [C75H117N2。023]+理論值為1665.85。
將上述所得Boc-PEG4-c(RGDfK) (10 mg, 6 mol)加入到3.0 mL TFA (三氟乙 酸)中，室溫反應(yīng)30分鐘。旋蒸去除TFA，殘留物溶于2mL0.5MNH4OAc緩 沖溶液(pH:7.0)，經(jīng)Zorbax C18半制備柱(HPLC方法一)分離純化，收集保留時(shí) 間約為14分鐘的餾分，合并收集液并凍干。獲得產(chǎn)品PEG4-c(RGDfK)約7.0 mg。 ESI-MS質(zhì)譜分析結(jié)果為m/z=1565.2([M+H]+)， [C70H109N20O21]+理論值為 1565.80。
E[PEG4-c(RGDfK)]2的制備
將Boc-保護(hù)的谷氨酸(E) (0.247 g， 1.0 mmol)溶于5 mL DMF，加入NHS (0.253 g, 2.2 mmol)禾P DCC (0.453 g， 2.2 mmol)，室溫?cái)囻?0小時(shí)。濾掉副產(chǎn)物DCU(二環(huán)己基脲)，濾液真空蒸干得到粗產(chǎn)物。用3mLCH2Cl2溶解粗產(chǎn)物，濾 掉不溶物，濾液濃縮至l mL左右。緩慢逐滴加入到30mL乙醚中，析出白色 沉淀，真空千燥得到產(chǎn)品0.27g。獲得產(chǎn)物經(jīng)"HNMR核磁譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn) 物Boc-E(OSu)2。
將上述所得Boc-E(OSu)2(4.4 mg, 0.01 mmol)溶于無(wú)水1 mL DMF中，加入 PEG4-c(RGDfK) (5.28 mg， 0.03 mmol)。使用DIEA調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0，室溫?cái)?拌過(guò)夜，經(jīng)ZorbaxC18半制備柱(HPLC方法一)分離純化，合并收集液并凍干， 得到15 mg白色粉末。經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物 Boc-E[PEG4-c(RGDfK)]2 。 ESI-MS質(zhì)譜分析結(jié)果為m/z=1913.13([M+H]+)， [C86H138N21028]+理論值為1912.99。
用無(wú)水TFA浸泡上述產(chǎn)物Boc-E[PEG4-c(RGDfK)]2 5分鐘，去除Boc-保護(hù) 基團(tuán)。粗產(chǎn)品經(jīng)Zorbax C18半制備柱(HPLC方法一)分離純化，合并收集液并 凍干，得到產(chǎn)品經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物E[PEG4-c(RGDfK)]2 。 ESI-MS 質(zhì)譜分析結(jié)果為m/z^813.0([M+H]+)， [C81H13QN21026]+理論值為1812.99。
PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2的制備
將Boc-PEG4-OSu(5.1mg, llnmol)和E[PEG4-c(RGDfK)]2(5 mg, 2.76 [imol)溶 于2 mL DMF和H20的混合液(l:l=v:v)，使用0.1 N NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0， 室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。然后反應(yīng)液真空蒸干，得到粗產(chǎn)品，溶于2mLTFA，將溶液在 室溫下攪拌15分鐘。產(chǎn)品經(jīng)Zorbax C18半制備柱(HPLC方法一)分離純化，收 集保留時(shí)間為16.4分鐘時(shí)的餾分，合并收集液并凍干。獲得預(yù)期產(chǎn)品 PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2約2.4 mg，純度大于95%。 ESI-MS質(zhì)譜分析結(jié)果為 m/z^2061.46([M+H]+)， [C92H151N22031]+理論值為2061.1。
DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2 (簡(jiǎn)稱(chēng)DOTA-3PEG4-dimer)的制備
將DOTA-OSu (5.0 mg， 10.0 ^M)和PEG4-E[PEG4-c(RGDfk)]2 (10.30 mg， 5.0 (iM)溶于1 mL無(wú)水DMF,使用DIEA調(diào)節(jié)pH值至8.5 - 9.0，室溫 攪拌過(guò)夜；向反應(yīng)液中加入3mL0.5MNH4OAc緩沖溶液(pH-7.0)并過(guò)濾，濾 液經(jīng)Zorbax C18半制備柱HPLC(方法一)分離純化，收集保留時(shí)間為22.5分鐘 時(shí)的餾分，合并收集液并凍干，得到產(chǎn)物4.0 mg (產(chǎn)率為33%)。 ESI-MS質(zhì) 譜分析結(jié)果m/z=2447.35 ([M+H]+)， [C1Q8H177N26038]+理論值為2447.27。
mIn-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2的制備將0.2 mL溶有DOTA-3PEG4-dimer(濃度0.25 mg/mL)的NaOAc(pH-5,0)緩 沖溶液加入到西林瓶中，加入20pL放射性核素標(biāo)記液(20-50mCi)， IO(TC水浴 加熱西林瓶,反應(yīng)10-15分鐘，反應(yīng)結(jié)束后室溫冷卻10分鐘，制成本發(fā)明的RGD 多 肽 放 射 性 藥 物 mIn-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)〗2 (11 !ln-DOTA陽(yáng)3PEG4-dimer)。
本發(fā)明的RGD多肽放射性藥物中，當(dāng)連接劑L為G3、藥代動(dòng)力學(xué)修飾分 子PKM為G3時(shí)，本發(fā)明藥物為 mIn-DOTA-G3-E[G3-c(RGDfK)]2 (mIn-DOTA-3G3-dimer)。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM也可以是G2或G4。
本發(fā)明的RGD多肽放射性藥物中，當(dāng)雙功能螯合劑為DTPA時(shí)，本發(fā)明藥 物可以是mIn-DTPA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2 (mIn-DTPA-3PEG4-dimer)或 mIn-DTPA-GrE[G3-c(RGDfK)]2 (mIn-DTPA-3G3-dimer)。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子 PKM也可以是G2或G4。
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或 DTPA或其衍生物標(biāo)記放射性核素"'In。本實(shí)施例中的RGD多肽放射性藥物用 于單光子斷層顯像技術(shù)對(duì)integrin av(33陽(yáng)性腫瘤進(jìn)行顯像診斷。
參見(jiàn)圖3，圖3為RGD環(huán)肽二聚體及其min標(biāo)記物結(jié)構(gòu)示意圖。
對(duì)依據(jù)本發(fā)明方法制備的RGD多肽放射性藥物mIn-DOTA-3PEG4-dimer取 樣進(jìn)行放射性HPLC分析(HPLC方法二使用LabAllianceHPLC系統(tǒng)，配備放 射性在線(xiàn)檢測(cè)器和ZorbaxC18分析柱(4.6 mm x 250 mm, 300 A pore size),梯度 淋洗25分鐘，流速1.0mL/min，其中流動(dòng)相A為25 mM NH4OAc (pH 5.0)， B 為乙腈。淋洗梯度設(shè)定為起始至2分鐘時(shí)90% A和10% B， 5分鐘時(shí)85% A和 15% B， 20分鐘時(shí)80% A和20% B， 25分鐘時(shí)90% A和10% B)， mIn-DOTA-3PEG4-dimer的標(biāo)記率>95%，經(jīng)Sep-Pak C18柱純化后放射化學(xué)純 度〉98%。
DOTA-3PEG4-dimer與integrin avp3結(jié)合親和力測(cè)定高表達(dá)integrin avp3的 U87MG人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)樣本，使用"I-c(RGDyK)作為integrin av(33 受體特異性結(jié)合的放射性配基，采用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)測(cè)定DOTA-3PEG4-dimer的 IC50值(半抑制濃度)，并設(shè) c(RGDyK) 、 DOTA-PEG4-c(RGDfK) (DOTA-PEG4-monomer)、 DTPA-Bz-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2 (DTPA-3PEG4-dimer) 、 DOTA-G3-E[Grc(RGDfK)]2(DOTA-3G3-dimer) 、 DOTA-E[c(RGDfK)]2 (DOTA-dimer)和DOTA-E{E[c(RGDfK)]2}2 (DOTA-tetramer)為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，c(RGDyK)、 DOTA-PEG4-monomer 、 DOTA畫(huà)dimer、 DOTA-3PEG4-dimer 、 DTPA-3PEG4-dimer、 DOTA-3Grdimer和DOTA-tetramer競(jìng)爭(zhēng)^I-c(RGDyK)與 U87MG細(xì)胞結(jié)合的ICso值分別為49.9 ± 5.5 nM， 42.1 ± 3.5 nM， 8.0土2.8nM， 1.3 ± 0.2 nM， 1.3 ± 0.3 nM， 1.1 ± 0.1 nM和1.4 ± 0.1 nM (參見(jiàn)圖4)，表明 DOTA-3PEG4-dimer、 DTPA-3PEG4-dimer以及DOTA-3G3-dimer與integrin av(33 的親和力明顯好于其RGD多肽單體和現(xiàn)有二聚體，說(shuō)明改造后的RGD環(huán)肽二 聚體能以雙價(jià)形式與integrin av(33結(jié)合。
mIn-DOTA-3PEG4-dimer在荷瘤裸鼠生物分布將荷U87MG人神經(jīng)膠質(zhì)瘤 BALB/c裸鼠隨機(jī)分成若干組，每組4只。各組實(shí)驗(yàn)裸鼠分別經(jīng)尾靜脈注射100 |LiL ( 74kBq)不同的min標(biāo)記的RGD多肽，于注射后0.5小時(shí)，1.0小時(shí)，4.0小時(shí) 和24.0小時(shí)按組分別處死實(shí)驗(yàn)裸鼠，取血及主要臟器，稱(chēng)重并測(cè)量放射性計(jì)數(shù)， 經(jīng)衰變校正后計(jì)算每克組織百分注射劑量率(Q/。ID/g)。
在U87MG人神經(jīng)膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型中，mIn-DOTA-3PEG4-dimer 、 mIn-DOTA-3G3-dimer及mIn-DTPA-3PEG4-dimer的腫瘤攝取明顯高于 mIn-DTPA-dimer(參見(jiàn)圖5)。這充分說(shuō)明 mIn-DOTA-3PEG4-dimer 、 mIn-DOTA-3G3-dimer及mIn-DTPA-3PEG4-dimer是以雙價(jià)形式與integrin avp3 結(jié)合，而mIn-DTPA-dimer是以單價(jià)形式與integrin 0^3結(jié)合。參見(jiàn)圖6，圖6 為荷U87MG人神經(jīng)膠質(zhì)瘤裸鼠注射mIn-DOTA-3PEG4-dimer后24 h的y顯像圖 (圖中箭頭代表腫瘤部位)。 實(shí)施例2:
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或TETA 或其衍生物標(biāo)記放射性核素64Cu，當(dāng)連接劑L為PEG4、藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子 PKM為PEG4時(shí)，本發(fā)明藥物為64Cu-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2 (64Cu曙DOTA-3PEGrdimer)或64Cu-TETA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)〗2 (64Cu-TETA-3PEG4-dimer)，其制備方法同實(shí)施例1。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM也可以是G2
或G4。
當(dāng)連接劑L為G3、藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM為G3時(shí)，本發(fā)明藥物為^Cu -DOTA-G3-E[Grc(RGDfK)]2 (64Cu-DOTA-3G3-dimer)或 64Cu-TETA-GrE[Gr c(RGDfK)]2(64Cu-TETA-3G3-dimer)，其制備方法同上。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM
也可以是G2或G4。
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或TETA
14或其衍生物標(biāo)記放射性核素64Cu，本實(shí)施例中的RGD多肽放射性藥物用于 integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的正電子斷層顯像診斷。 實(shí)施例3:
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或 NOTA或其衍生物標(biāo)記放射性核素68Ga。當(dāng)連接劑L為PEG4、藥代動(dòng)力學(xué)修飾 分子PKM為PEG4時(shí)，本發(fā)明藥物為68Ga-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2 (68Ga -DOTA-3PEG4-dimer)或 68Ga-NOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2 (68Ga-NOTA -3PEG4-dimer),其制備方法同實(shí)施例1。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM也可以是 G2或G"
當(dāng)連接劑L為G3、藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM為G3時(shí)，本發(fā)明藥物為"Ga -DOTA-G3-E[G3-c(RGDfK)]2 (68Ga-DOTA-3G3-dimer) 或 68Ga-NOTA-G3-E[Grc(RGDfK)]2 (68Ga-NOTA-3Grdimer)。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM也可以是
G2或G4。
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或 NOTA或其衍生物標(biāo)記放射性核素68Ga，本實(shí)施例中的RGD多肽放射性藥物用 于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的正電子斷層顯像診斷。 實(shí)施例4:
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或 DTPA或其衍生物標(biāo)記放射性核素9QY。當(dāng)連接劑L為PEG4、藥代動(dòng)力學(xué)修飾 分子PKM為PEG4時(shí)，本發(fā)明藥物為9QY-DTPA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2 (90Y-DTPA-3PEG4-dimer)或 90Y-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)〗2 (90Y-DOTA-3PEG4-dimer)，其制備方法同實(shí)施例1。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM也可以是G2
或G4。
當(dāng)連接劑L為G3、藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM為G3時(shí)，本發(fā)明藥物為 90Y-DTPA-GrE[G3-c(RGDfK)]2(90Y-DTPA-3G3-dimer) 或 90Y-DOTA-GrE[Gr c(RGDfK)]2(9QY-DOTA-3G3-dimer)，其制備方法同上。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM
也可以是G2或G4。
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或 DTPA或其衍生物標(biāo)記放射性核素WY。本實(shí)施例中的RGD多肽放射性藥物用 于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的放射靶向治療。 實(shí)施例5:
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或DTPA或其衍生物標(biāo)記放射性核素177Lu。當(dāng)連接劑L為PEG4、藥代動(dòng)力學(xué)修飾 分子PKM為PEG4時(shí)，本發(fā)明藥物為177Lu-DTPA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfKXl2 (177Lu-DTPA-3PEG4-dimer)或 177Lu-DOTA-PEG4-E[PEG4-c(RGDfK)]2 (177Lu -DOTA-3PEG4-dimer)，其制備方法同實(shí)施例1。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM也可
以是G2或G4。
當(dāng)連接劑L為G3、藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM為G3時(shí)，本發(fā)明藥物為177Lu -DTPA-G3-E[G3-c(RGDfK)〗2(177Lu-DTPA-3G3-dimer)或 177Lu-DOTA-G3-E[G3-c(RGDfK)]2 (177Lu-DOTA-3Grdimer)，其制備方法同上。藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子 PKM也可以是G2或G4。
本實(shí)施例中，本發(fā)明RGD多肽放射性藥物使用雙功能螯合劑DOTA或 DTPA或其衍生物標(biāo)記放射性核素177Lu。本實(shí)施例中的RGD多肽放射性藥物用 于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的放射靶向治療。
1權(quán)利要求
1、一種用于integrin αvβ3陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥物，包括RGD多肽、雙功能螯合劑(Chelator)和放射性核素(Nuclide)，其特征在于所述RGD多肽為RGD環(huán)肽二聚體，所述RGD環(huán)肽二聚體是將連接劑L與RGD多肽單體c(RGDfK)連接，再將兩個(gè)連接有連接劑L的RGD多肽單體L-c(RGDfK)二聚化而合成的RGD環(huán)肽二聚體E[L-c(RGDxK)]2；所述放射性核素通過(guò)一個(gè)雙功能螯合劑標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體，所述RGD環(huán)肽二聚體與所述雙功能螯合劑之間還連接有藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM，所述RGD多肽放射性藥物為Nuclide-Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2；所述RGD多肽放射性藥物為無(wú)色透明液體針劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥物，其特征在于所述連接劑L為PEG4或G3。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于integrin av|33陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥 物，其特征在于所述藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM為G2或G3或G4或PEG4。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于integrin avp3陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥 物，其特征在于所述放射性核素為"'In，所述放射性核素mIn是通過(guò)雙功能 螯合劑DOTA和DTPA及其衍生物中的一種標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于integrin av(33陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥 物，其特征在于所述放射性核素為64Cn，所述放射性核素"Cu是通過(guò)雙功能 螯合劑DOTA和TETA及其衍生物中的一種標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于integrin av|33陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥 物，其特征在于所述放射性核素為68Ga，所述放射性核素MGa是通過(guò)雙功能 螯合劑DOTA和NOTA及其衍生物中的一種標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于integrin av(33陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥 物，其特征在于所述放射性核素為或mLu ，所述放射性核素9()Y或mLu 是通過(guò)雙功能螯合劑DOTA和DTPA及其衍生物中的一種標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二 聚體。
8、 一種權(quán)利要求1所述的用于integrin av|33陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥 物的制備方法，其特征在于所述方法包括以下步驟a、 L-c(RGDxK)的制備(L為PEG4或G3)將Boc(t-Butyl carbamate,叔丁氧羰基)保護(hù)的連接劑L溶于1 mL DMF(二甲 基甲酰胺)中，加入NHS (N-羥基琥珀酰亞胺,也為HOSu)和DCC (二環(huán)己基碳二亞胺)，室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)；將RGD多肽單體c(RGDxK)加入到上述反應(yīng) 液中，用D正A(N,N-二異丙基乙胺)將pH調(diào)節(jié)到8.0-8.5，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜；向反 應(yīng)液中加入3 mL 0.5 M NH4OAc緩沖溶液(pH = 7.0)并過(guò)濾，濾液經(jīng)Zorbax C18 半制備柱HPLC分離純化，收集目標(biāo)物的餾分，合并收集液并凍干；獲得產(chǎn)物 經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物Boc-L-c(RGDxK);將Boc-L-c(RGDxK)加 入到3.0mLTFA(三氟乙酸)中，室溫反應(yīng)30分鐘；旋蒸去除TFA，殘留物溶 于2 mL 0.5 M NH4OAc緩沖溶液(pH = 7.0)，經(jīng)Zorbax C18半制備柱HPLC方法 分離純化，收集目標(biāo)物的餾分，合并收集液并凍干；獲得產(chǎn)品經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分 析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物L(fēng)-c(RGDxK:i;b、 E[L-c(RGDxK)]2的制備 將Boc保護(hù)的谷氨酸(E)溶于5mLDMF，加入NHS和DCC，室溫?cái)嚢?0小時(shí)；濾掉副產(chǎn)物DCU(二環(huán)己基脲)，濾液真空蒸干得到粗產(chǎn)物；用3 mL CH2C12 溶解粗產(chǎn)物，濾掉不溶物，濾液濃縮至l mL左右；緩慢逐滴加入到30mL乙 醚中，析出白色沉淀，過(guò)濾并真空干燥得到產(chǎn)品；獲得產(chǎn)物經(jīng)& NMR核磁譜 分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物Boc-E(OSu)2;將Boc-E(OSu)2溶于無(wú)水lmLDMF中，加 入L-c(RGDxK);使用DIEA調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，經(jīng)Zorbax C18 半制備柱HPLC分離純化，合并收集液并凍千，獲得產(chǎn)物經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確 認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物Boc-E[L-c(RGDxK)]2;用無(wú)水TFA浸泡Boc-E[L-c(RGDxK)]2 5 分鐘，去除Boc-保護(hù)基團(tuán)；粗產(chǎn)品經(jīng)ZorbaxC18半制備柱HPLC分離純化，合 并收集液并凍干，得到產(chǎn)品經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)物 E[L-c(RGDxK)]2;c、 PKM-E[L-c(RGDxK)]2的制備 (PKM為G2或G3或G4或PEG4)將Boc-PKM-OSu和E[L-c(RGDxK)]2溶于2 mL DMF和H20的混合液 (l:l=v:v)，使用O.l NNaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜；將反應(yīng)液真 空蒸干，得到粗產(chǎn)品并將之溶于2 mL TFA，將溶液在室溫下攪拌15分鐘；產(chǎn) 品經(jīng)Zorbax C18半制備柱HPLC分離純化，收集目標(biāo)物的餾分，合并收集液并 凍干，獲得產(chǎn)物經(jīng)ESI-MS質(zhì)譜分析確認(rèn)為預(yù)期產(chǎn)品PKM-E[L-c(RGDxK)]2;d、 Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2的制備(Chelator為DOTA或DTPA或NOTA 或TETA或其衍生物)將Chelator和PKM-E[L-c(RGDxK)]2溶于1 mL DMF(二甲基甲酰胺)中，用 DIEA(N，N-二異丙基乙胺)將pH調(diào)節(jié)到8.5-9.0,室溫?cái)嚢柽^(guò)夜；產(chǎn)品經(jīng)Zorbax C18半制備柱HPLC分離純化，收集目標(biāo)物的餾分，合并收集液并凍干； e、 Nuclide-Chdator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2的制備(Nuclide為"In或9GY或177Lu或68Ga或64Cu)將0.2 mL溶有Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2偶聯(lián)物(濃度0.2-0.5 mg/mL) WNaOAc(pH = 5.0)緩沖溶液加入到西林瓶中，加入10-50 (iL放射性核素(20-50 mCi)， IO(TC水浴加熱西林瓶，反應(yīng)10-15分鐘，反應(yīng)結(jié)束后室溫冷卻IO分鐘， 制成RGD多肽放射性藥物Nuclide-Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]2。
9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于integrin otv|33陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥 物的制備方法，其特征在于所述HPLC方法為使用LabAmance HPLC系統(tǒng)配 備Zorbax C18半制備柱，梯度淋洗36分鐘，流速2.5 mL/min，其中流動(dòng)相A 為25 mM NH4OAc， B為乙睛；淋洗梯度設(shè)定為起始時(shí)90% A和10% B， 5分 鐘時(shí)85% A和15% B， 30分鐘時(shí)65% A和35% B， 32-36分鐘時(shí)50% A和50% B。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于integrin α_vβ₃陽(yáng)性腫瘤的RGD多肽放射性藥物，包括RGD多肽、雙功能螯合劑(Chelator)和放射性核素(Nuclide)，所述RGD多肽為RGD環(huán)肽二聚體，所述RGD環(huán)肽二聚體是將連接劑L與RGD多肽單體c(RGDfK)連接，再將兩個(gè)連接有連接劑L的RGD多肽單體L-c(RGDfK)二聚化而合成的RGD環(huán)肽二聚體E[L-c(RGDxK)]₂；所述放射性核素通過(guò)一個(gè)雙功能螯合劑標(biāo)記所述RGD環(huán)肽二聚體，所述RGD環(huán)肽二聚體與所述雙功能螯合劑之間還連接有藥代動(dòng)力學(xué)修飾分子PKM，所述RGD多肽放射性藥物為Nuclide-Chelator-PKM-E[L-c(RGDxK)]₂；所述RGD多肽放射性藥物為無(wú)色透明液體針劑。
文檔編號(hào)A61K51/00GK101474415SQ200910077039
公開(kāi)日2009年7月8日 申請(qǐng)日期2009年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月16日
發(fā)明者史繼云, 凡 王, 兵 賈 申請(qǐng)人:北京大學(xué)