專利名稱：脂肪鏈和yigsr五肽綴合物及其合成方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類綴合物，尤其涉及脂肪烷基鏈通過羰基、甲氨基及甲氧基與YIGSR 五肽的羧端或氨端綴合而得到的靶向陽離子藥質(zhì)體，本發(fā)明還涉及該綴合物的制備方法以 及該綴合物作為抗血栓劑、藥物載體或藥物靶向制劑材料的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在未來的5年到10年基因治療會有可能把基因傳送至細(xì)胞的理想載體。從生物 制劑的立場看，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)就是藥物釋放系統(tǒng)(DDS)。有多種化學(xué)合成的小分子構(gòu)建的基 因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)受到關(guān)注，其中陽離子脂質(zhì)構(gòu)成的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)是關(guān)注熱點。陽離子脂質(zhì)在藥 學(xué)領(lǐng)域遍用于構(gòu)建脂質(zhì)體運載小分子(包括多肽)藥物。與在DDS中一樣，在基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系 統(tǒng)中陽離子脂質(zhì)體有明顯好處，例如可通過電荷吸附與DNA形成復(fù)合物并有效避免被細(xì)胞 內(nèi)溶酶體降解、可將DNA高效導(dǎo)入細(xì)胞、對DNA的尺寸沒有限制、操作簡便等。陽離子脂質(zhì) 的基本構(gòu)造包括高級脂肪鏈構(gòu)成的疏水臂和親水的陽離子頭。
疏水臂陽離子脂質(zhì)的基本構(gòu)造細(xì)胞黏附在細(xì)胞黏附性疾病(癌轉(zhuǎn)移、血栓形成、化學(xué)致炎和骨質(zhì)疏松)的發(fā)展過 程中起關(guān)鍵作用，來源于層粘連蛋白Bl鏈的五肽YIGSR是一類典型的黏附多肽，它并不像 RGD那樣與細(xì)胞受體的整合素家族有關(guān)，而是與67kDa層粘連結(jié)合蛋白有關(guān)(LBP)。當(dāng)它被 移植到玻璃上時，發(fā)現(xiàn)促進(jìn)黏附和大量細(xì)胞遷移，包括血管內(nèi)皮細(xì)胞，成纖維細(xì)胞和平滑肌 細(xì)胞。YIGSR五肽的這種作用賦予了含YIGSR序列的化合物一種重要性質(zhì)，即可向血栓、癌 和骨質(zhì)疏松的患病部位富集。在這樣一個前提下，把YIGSR肽與脂肪鏈綴合便可以獲得靶 向藥質(zhì)體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的之一是將YIGSR肽與高級脂肪鏈綴合以獲得具有抗血栓活性并具有 靶向性的一類綴合物；本發(fā)明目的之二是提供一種制備上述綴合物的方法；本發(fā)明目的之三是將上述綴合物應(yīng)用于抗血栓劑、藥物載體或藥物靶向制劑材 料；本發(fā)明上述目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一類脂肪鏈和YIGSR五肽綴合物，該綴合物的通式為Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-X，Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Y, Z-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg，其中 X 為 CH3(CH2)nCH2OH, Y 為 CH3(CH2) nCH2NH2, Z 為 CH3(CH2)nCO2H ；其中 η = 6，8，10，12，14 或 16。一種制備上述脂肪鏈和YIGSR五肽的方法，包括以下步驟(1)合成 Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg ；(2)將 CH3 (CH2) nC02H、CH3 (CH2) nCH20H 分別與保護(hù)基保護(hù)的 Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg 的羧端或氨端綴合，脫去保護(hù)基，即得；或者將CH3 (CH2) nCH2NH2與保護(hù)基保護(hù)的 Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg的羧端綴合，脫去保護(hù)基，即得；其中η = 6,8,10，12，14或16。本發(fā)明結(jié)合了下述認(rèn)識或依據(jù)完成了上述技術(shù)方案。把基因傳送至細(xì)胞的理想載 體(基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng))是基因治療的關(guān)鍵任務(wù)之一；從生物制劑的立場看基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)與藥 物釋放系統(tǒng)(DDS)具有等同性；雖然有多種化學(xué)合成的小分子構(gòu)建的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)都受到 關(guān)注但是陽離子脂質(zhì)體構(gòu)成的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)應(yīng)格外給予關(guān)注；陽離子脂質(zhì)體可通過電荷吸 附與DNA形成復(fù)合物并有效避免被細(xì)胞內(nèi)溶酶體降解；陽離子脂質(zhì)體可將DNA高效導(dǎo)入細(xì) 胞、陽離子脂質(zhì)體對DNA的尺寸沒有限制；含YIGSR序列的化合物可以向血栓、炎癥、癌轉(zhuǎn)移 和骨質(zhì)疏松的患病部位富集。本發(fā)明人基于上述認(rèn)識，把脂肪鏈通過羰基、甲氨基及甲氧基與YIGSR五肽的羧 端或氨端綴合，使制得的分子獲得四種性能，即依賴于脂肪烷基鏈的疏水性、依賴于YIGSR 肽的氨基側(cè)鏈基和α-氨基質(zhì)子化形成的陽離子性質(zhì)和親水性和依賴于YIGSR五肽對 67kDa層粘連結(jié)合蛋白受體特異親和作用獲得的靶向性。這樣一來，把YIGSR肽與脂肪烷基 鏈綴合制得的分子便成為靶向陽離子藥質(zhì)體。本發(fā)明的又一目的是提供一種含有本發(fā)明上述通式化合物的抗血栓藥物組合物， 該藥物組合物由治療上有效劑量的本發(fā)明綴合物與藥學(xué)上可接受的賦型劑或者輔加劑組 成；即將有效量的本發(fā)明綴合物與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑配合后，按本領(lǐng)域常規(guī) 的制劑方法將其制備成任意一種適宜的藥物組合物。通常該組合物適合于口服給藥和注射 給藥，也適合其他的給藥方法。該組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑，或 口服液等液體制劑形式。根據(jù)不同的給藥方法，本發(fā)明藥物組合物可以含有0. 1% -99%重 量，優(yōu)選10-60%重量的本發(fā)明綴合物。在大鼠血栓形成模型上的評價表明，本發(fā)明綴合物具有優(yōu)秀的抗血栓活性，可作 為抗血栓劑應(yīng)用；在水相和生物相它們可自組裝成為納米顆粒，可作為制備微乳和脂質(zhì)體 的制劑材料。


圖1脂肪烷基和YIGSR肽通過羰基、甲氨基及甲氧基綴合制備靶向陽離子藥質(zhì)體 的合成路線圖。圖2本發(fā)明綴合物在水相中組裝成為納米球試驗。圖3由透射電鏡描述的本發(fā)明的代表性綴合物在水相組裝的納米球。圖4由掃描電鏡描述的本發(fā)明的代表性綴合物在水相組裝的納米球。
具體實施例方式為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。實施例ICH3 (CH2) 6C0YIGSR 的制備1) Boc-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl將0. 36g(l. 20mmol)Boc-Ser(Bzl)溶解在 6ml 無水 THF 中，O °C 下加入 0. 155g(l. 14mmol)N-羥基苯并三唑(HOBt)和 0. 26g(l. 20mmol) 二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)。 攪拌10分鐘后加入0. 255g(l. 14mmol)HCl · Arg(NO2)-OBzl的無水THF溶液。反應(yīng)混合物 用N-甲基嗎啉(NMM)調(diào)節(jié)pH 8-9，0°C攪拌24小時。停止反應(yīng)，過濾除去沉淀出的二環(huán)己 基脲(DCU)。濾液減壓濃縮，殘留物溶于乙酸乙酯中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶 液、5% KHSO4水溶液和飽和NaCl水溶液洗。乙酸乙酯層用無水NaSO4干燥3小時。濾除 NaSO4，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯。殘留物用柱層析分離(CHCl3 CH3OH,80 1)，得到 0. 55g(83% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 586 [M+H] +。2) HCl · Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl將0. 59g(l. OOmmol)Boc-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 溶解在 50ml 6M 氯化氫-乙酸 乙酯溶液中，室溫攪拌3小時，TLC檢測原料點消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn) 行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末，直接用于下一 步反應(yīng)。ESI-MS (m/z) 486 [M+H]+。3)Boc-Ile-Gly-OBzl用與制備Boc-Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 3g(l. 29mmol)Boc-Ile 和0. 194g(l. 17mmol)Tos .NH2-Gly-OBzl 為原料，得到0. 32g(73%)目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/ z)378[M+H]+。4)HCl · Ile-GlyOBzl用與制備HCl · Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 37g(l. Ommo 1) Boc-Ile-Gly-OMe 為原料，得到目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 278 [M+H]+。5)Boc-Tyr-Ile-Gly-OBzl用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 428g(l. 52mmol) Boc-Tyr 和 0. 38g(l. 36mmol)HCl 'H-Ile-Gly-OBzl 為原料，得到 0. 64g(86% )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z)542[M+H]+。6)Boc-Tyr-Ile-Gly將0. 31gBoc-Tyr-Ile-Gly-0Bzl 溶解在 20ml 甲醇中，0°C下加入 1. 5mol/l 的 NaOH 水溶液，調(diào)節(jié)PH值到11，攪拌反應(yīng)2. Ohr, TLC檢測反應(yīng)結(jié)束。加飽和KHS04調(diào)節(jié)pH值到 6 7，濾除析出的鹽，濾液減壓蒸餾除去全部甲醇，殘留水溶液繼續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到 2，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次，無水NaSO4干燥3小時，過 濾，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到0. 23g(89% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)451 [M-H]+。7) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 496g(l. IOmmol) Boc-Tyr-Ile-Gly 和 0. 48g(l. Ommol)HCl · Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 為原料，得到 0. 81g(90% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)919[M+H] +。8) HCl · Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl用與制備HCl · Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 92gBoc-Tyr-IIe-Gly
5-Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 為原料獲得目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)819[M+H] +。9)Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg將250mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 溶于 4ml 三氟醋酸中，加入 Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，冰浴下攪拌反應(yīng)1小時，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml 乙醚，析出的產(chǎn)品固體粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到160mg(91 % )目標(biāo)化合物。 ESI-MS (m/z)594[M+H]+。10) CH3 (CH2) 6C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl用與制備Boc-Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 17g(l. 2mmol) CH3(CH2)6C00H 和 0. 82g(l. 0mmol)HCl ‘ Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Arg(NO2) -OBzl 為原料獲得 0. 84g(89. 3% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)945[M+H] +。11) CH3 (CH2) 6C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser-Arg [CH3 (CH2) 6C0YIGSR]將250mgCH3(CH2)6CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 溶于 4ml 三氟醋 酸中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，0°C冰浴條件下攪拌反應(yīng)1小時，減壓抽氣5 分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出的產(chǎn)品固體粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到 150mg(79% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 721 [M+H] +。[ α ]D25 =-7. 60 (c = 1. 02 甲醇)，Mp 164. 0 165. 0°C。實施例2CH3 (CH2) 8C0YIGSR 的制備1) CH3 (CH2) 8C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 24g(l. 4mmol) CH3(CH2)8-C00H 和 0. 82g(l. 0mml)HCl ‘ Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Arg(NO2) -OBzl 為原料獲得 0. 87g(89. 69% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)973[M+H] +。2) CH3 (CH2) 8C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser-Arg [CH3 (CH2) 8C0YIGSR]將250mg CH3(CH2)8C0-Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 溶于 4ml 三氟醋 酸中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，0°C冰浴條件下攪拌反應(yīng)1小時，減壓抽氣5 分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出的產(chǎn)品固體粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到 160mg(83% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 748 [M+H]+。[ α ]D25 =-10 . 23 (c = 1. 02 甲醇)， Mp 121. 0 122. 0°C。實施例 3CH3 (CH2) 10COYIGSR 的制備1) CH3 (CH2) 10CO-Tyr-I Ie-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 28g(l. 4mmol) CH3(CH2) 1(lC00H 和 0. 82g(l. 0mml)HCl · Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl為原料獲得0. 87g(87. 0% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z) 1001 [M+H]+02) CH3 (CH2) 10CO-Tyr-I Ie-Gly-Ser-Arg [CH3 (CH2) 10COYIGSR]將250mg CH3 (CH2) 10CO-Tyr-IIe-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl 溶于 4ml 三氟 醋酸中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，0°C冰浴條件下攪拌反應(yīng)1小時，減壓抽氣5 分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出的產(chǎn)品固體粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到 160mg(84% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 776 [M+H] +。[ α ]D25 =-9. 76 (c = 1. 02 甲醇)，Mp 138. 50 139. 40°C。實施例4CH3 (CH2) 12C0YIGSR 的制備
1) CH3 (CH2) 12C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 27g(l. 2mmol) CH3(CH2) 12C00H 和 0. 82g(l. 0mml)HCl · Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 為原料獲得 0. 79g(79. 0% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z) 1030[M+H] +。2) CH3 (CH2) 12C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser-Arg [CH3 (CH2) 12C0YIGSR]將250mgCH3(CH2)12CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 溶于 4ml 三氟醋 酸中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，0°C冰浴條件下攪拌反應(yīng)1小時，減壓抽氣5 分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出的產(chǎn)品固體粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到 160mg(82% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 804 [M+H]+。[ α ]D25 =-11. 60 (c = 1. 01 甲醇)， Mp 141. 50 142. 40 °C。實施例5CH3 (CH2) 14C0YIGSR 的制備1) CH3 (CH2) 14C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 30g(l. 2mmol) CH3(CH2) 14C00H 和 0. 82g(l. 0mml)HCl · Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 為原料獲得 0. 89g(89. 0% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z) 1057[M+H] +。2) CH3 (CH2) 14C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser-Arg [CH3 (CH2) 14C0YIGSR]將250mgCH3(CH2)14CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 溶于 4ml 三氟醋 酸中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，0°C冰浴條件下攪拌反應(yīng)1小時，減壓抽氣5 分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出的產(chǎn)品固體粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到 160mg(81. 63% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 832 [M+H]+。[ α ]D25 =-13 . 60 (c = 1. 01 甲醇)， Mp :140. 50 141. 40 °C。實施例6CH2 (CH2) 16C0YIGSR 的制備1) CH3 (CH2) 16C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 相同的方法，以 0. 34g(l. 2mmol) CH3(CH2) 16C00H 和 0. 82g(l. 0mml)HCl · Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 為原料獲得 0. 89g(82. 40% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z) 1085[M+H] +。2) CH3 (CH2) 16C0-Tyr-I Ie-Gly-Ser-Arg [CH3 (CH2) 16C0YIGSR]將230mgCH3(CH2)16CO-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 溶于 4ml 三氟醋 酸中，加入Iml三氟甲磺酸和Iml苯甲醚，0°C冰浴條件下攪拌反應(yīng)1小時，減壓抽氣5 分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出的產(chǎn)品固體粉末使用S印hadex G 10進(jìn)行提純，得到 150mg(82. 41% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 860 [M+H]+。[α ]D25 = -19 . 60 (c = 1. 03 甲醇)， Mp :134. 50 135. 40 °C。實施例7YIGSRNH (CH2) 7CH3 的制備1) Boc-Arg (NO2) -NH- (CH2) 7CH3用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 相同的方法，以 1. 5g(4. 7mmol) Boc-Arg (NO2)和 0. 70ml (4. 30mmol) CH3 (CH2) 7NH2 為原料獲得 1. 60g (84. 66 % )目標(biāo)物。 ESI-MS (m/z) 431 [M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) -NH- (CH2) 7CH3用與制備HCl · NH2-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -OBzl 相同的方法，以 1. 6g(3. 7mmol)Boc-Arg (NO2)-NH-(CH2)7CH3 為原料獲得 1. 15g(94. 26% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 331 [M+H]+。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) -NH- (CH2) 7CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 75g (1. 4mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 禾Π 0. 46g(l. 3mmol) HCl · Arg(NO2)-NH-(CH2)7CH3 為原料，得到 1. 05g(88. 98% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)851 [M+H] +。4) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 7CH3先將0.62g Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg(NO2)-NH-(CH2)7CH3 溶于 20ml 甲醇，再加 入124mgPd/C(20% ),減壓排出反應(yīng)瓶中的空氣，通入氫氣置換，反復(fù)置換5次后，通氫氣 室溫攪拌三天，TLC(展開劑CHC13 MeOH = 10 l+3d冰醋酸)顯示化合物大部分消失， 停止反應(yīng)，濾除Pd/C，濾液減壓濃縮除去溶劑，得0. 45g(77. 6% )標(biāo)題化合物，為白色固體。 ESI-MS (m/z)805[M+H]+。 5) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 7CH3 [YIGSRNH (CH2) 7CH3]將420mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 7CH3 溶于 4ml 三氟醋酸中，0°C冰浴 條件下攪拌反應(yīng)0. 5小時，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出白色固體粉末，得 到 330mg(89. 91% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 705 [M+H]+。[a]D25 = -10. 10 (c = 1· 03 甲 醇)，Mp 121. 60 122. 40"C。實施例8YIGSRNH (CH2) 9CH3 的制備1) Boc-Arg (NO2) -NH- (CH2) 9CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. 7mmol) Boc-Arg (NO2) 和 0. 774g(5. 2mmol)CH3(CH2)9NH2 為原料獲得 2. 05g(95. 34 % )目標(biāo)物。ESI_MS(m/ ζ)459[M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) -NH- (CH2) 9CH3用制備HCl · Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 7g(3. 7mmol) Boc-Arg(NO2)-NH-(CH2)9CH3 為原料獲得 1. 21g(91. 66% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 359 [M+H]+。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) -NH- (CH2) 9CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 59g (1. Immol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 禾Π 0. 36g(l. Ommol)HCl · Arg(NO2)-NH-(CH2)9CH3 為原料，得到 0. 72g(81. 81% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 879 [M+H] +。4) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 9CH3先將0. 70gBoc-Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg(NO2) -NH-(CH2)9CH3 溶于 20ml 甲醇，再加入 140mgPd/C(20% ),減壓排出反應(yīng)瓶中的空氣，通入氫氣置換，反復(fù)置換5次后，通氫氣室溫 攪拌三天，TLC(展開劑CHC13 MeOH = 10 l+3d冰醋酸)顯示化合物大部分消失，停 止反應(yīng)，濾除Pd/C，濾液減壓濃縮除去溶劑，得0. 56g(84.8% )標(biāo)題化合物，為白色固體。 ESI-MS (m/z)833[M+H]+。5) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 9CH3 [YIGSRNH (CH2) 9CH3]將560mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 9CH3 溶于 5ml 三氟醋酸中，冰浴攪 拌0. 5小時，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出無色粉末，得到410mg(83. 33% ) 目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 733 [M+H] +。[a ]D25 = -16 . 20 (c = 1· 03 甲醇)，Mp 115. 60 116. 70°C。
實施例9yigsrnh (ch2) nch3 的制備1) Boc-Arg (NO2) -NH- (CH2) nCH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 4g(4. 4mmol) Boc-Arg (NO2) 和 0. 972g(5. 3mmol)CH3 (CH2)11NH2 為原料獲得 2. Olg (94. 36 % )目標(biāo)物。ESI_MS(m/ z)487[M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) -NH- (CH2) 9CH3用制備HCl · Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 8g(3. 7mmol) Boc-Arg (NO2)-NH-(CH2)11CH3 為原料獲得 1. 22g(85. 31% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 387 [M+H]+。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl) -Arg (NO2) -NH- (CH2) nCH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 87g (1. 4mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser (Bzl)和 0. 56g(l. 3mmol)HCl · Arg(NO2)-NH-(CH2)11CH3 為原料，得到 1. 20g(85. 71% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)997[M+H] +。4) Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg-NH-(CH2)11CH3[YigSRNH(CH2)11CH3]將 250mg Boc-Tyr-i Ie-Gly-Ser (Bzl)-Lys (Z)-NH-(CH2) 13013溶于 4ml 三氟醋酸中，加入 Iml 三氟甲磺酸和 Iml 苯甲醚，冰浴下攪拌1小時，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出的產(chǎn)品固體粉末 使用 S印hadex GlO 進(jìn)行提純，得到 176mg(89. 79% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z) 761 [M+H]+。 [α ]D25 = -9 . 56 (c = 1. 03 甲醇)，Mp 120. 60 121. 50°C。實施例Ii^IGSRNH(CH2) 13CH3 的制備1) Boc-Arg (Boc) -NH- (CH2) 13CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. Ommol) Boc-Arg (Boc)和 1. 02g(4. 8mmol)CH3 (CH2)13NH2 為原料獲得 2. 5g(90. 90% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 569 [M+H]+。2) HCl · Arg-NH- (CH2) 13CH3用制備HCl. Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 8g (4. 9mmol) Boc-Arg(Boc)-NH-(CH2)11CH3 為原料獲得 1. 02g(87. 93% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 369 [M+H]+。3) Boc-Tyr-I Ie-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 13CH3用與制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 2g (2. 2mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 0. 9g(2. lmmol)HCl · Arg-NH-(CH2)13CH3 為原料，得到 1. 90g(88. 78% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 890 [M+H] +。4) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 13CH3 [YIGSRNH (CH2) 13CH3]將520mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 13CH3溶于 5ml 三氟醋酸中，0°C冰浴 條件下攪拌反應(yīng)0. 5小時，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出白色固體粉末，得 IlJ 420mg(91. 30% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 790 [M+H] +。[ α ]D25 =-5 . 93 (c = 1. 03 甲 Il), Mp :149. 60 150. 50°C。實施例11YIGSRNH (CH2) 15CH3 的制備1) Boc-Arg (NO2) -NH- (CH2) 15CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. 7mmol) Boc-Arg (NO2) 和 1. 25g(5. 2mmol)CH3 (CH2)15NH2 為原料獲得 1. 90g(91. 34 % )目標(biāo)物。ESI_MS(m/ ζ)543[M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) -NH- (CH2) 15CH3
用制備HCl · Ser (Bz 1) -Arg (NO2) -OBzl 的方法，以 1. 8gBoc-Arg(NO2)-NH-(CH2)15CH3 為原料獲得 1.23g(84. 24 % )目標(biāo)物。ESI_MS(m/ z)443[M+H]+。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) -NH- (CH2) 15CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 23g (2. 3mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 1. 01g(2. lmmol)HCl .Arg(NO2)-NH-(CH2)15CH3 為原料，得到 1.05g(87. 21% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 963 [M+H]+。4) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 15CH3 [YIGSRNH(CH2) 15CH3]用制備YigSRNH(CH2)7CH3 的方法，以 0. 95g Boc-Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg (NO2) -NH-( CH2)15CH3 為原料，得到 0. 75g(80. 79% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)818[M+H] +。[α ]D25 = -11. 60 (c = 1. 02 甲醇)，Mp 124. 60 125. 50°C。實施例12HGSRNH (CH2) 17CH3 的制備1) Boc-Arg (NO2) -NH- (CH2) 17CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. 7mmol) Boc-Arg (NO2) 和 1. 25g(5. 2mmol)CH3 (CH2)17NH2 為原料獲得 1. 90g(91. 34 % )目標(biāo)物。ESI_MS(m/ ζ)571[M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) -NH- (CH2) 17CH3用與制備HCl · Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 相同的方法，以 1. 8gBoc-Arg(NO2)-NH-(CH2)17CH3 為原料獲得 1.23g(84. 24 % )目標(biāo)物。ESI_MS(m/ ζ)471[M+H]+。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) -NH- (CH2) 17CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. Olg (1. 9mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 禾Π 0. 91g(l. 8mmol)HCl · Arg(NO2)-NH-(CH2)17CH3 為原料，得到 1.7g(89. 47% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 991 [M+H]+。4) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH- (CH2) 17CH3 [YIGSRNH (CH2) 17CH3]用制備YigSRNH(CH2)7CH3 的方法，以 0. 95g Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg(NO2)-NH -(CH2)17CH3 為原料，得到 0. 54g(88. 52% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)846[M+H]+。[a]D25 =-14. 60 (c = 1. 03 甲醇)，Mp 126. 60 127. 50°C。實施例13HGSR0 (CH2)7CH3 的制備DBoc-Arg(NO2)O(CH2)7CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. 7mmol) Boc-Arg (NO2) 和 1. 22g(9. 40mmol)CH3 (CH2)7OH 為原料獲得 1. 80g(90. 01 % )目標(biāo)物。ESI-MS (m/ z)432[M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) 0 (CH2) 7CH3用制備HCl · Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 6g(3. 7匪ol)Boc-Arg(NO2) O(CH2)7CH3 為原料獲得 1. 15g(94. 26% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 332 [M+H]+。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) 0 (CH2) 7CH3
用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 64g (1. 2mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 0. 41g(l. 2mmol) HCl · Arg(NO2)-O(CH2)7CH3 為原料，得到 0. 92g(91. 08% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)852[M+H] +。4) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-O (CH2) 7CH3先將0. 62gBoc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg(NO2)-O(CH2)7CH3 溶于 20ml 甲醇，再加入 124mgPd/C(20% )，減壓排出反應(yīng)瓶中的空氣，通入氫氣置換，反復(fù)置換5次后，通氫氣室溫 攪拌三天，TLC(展開劑CHC13 MeOH = 10 l+3d冰醋酸)顯示化合物大部分消失，停 止反應(yīng)，濾除Pd/C，濾液減壓濃縮除去溶劑，得0. 45g (76. 30 % )標(biāo)題化合物，為無色固體。 ESI-MS (m/z)807[M+H]+。5) Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg-O (CH2) 7CH3 [YIGSRO (CH2) 7CH3]將420mg Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-O (CH2) 7CH3 溶于 4ml 三氟醋酸中，0°C冰浴條 件下攪拌反應(yīng)0. 5小時，減壓抽氣5分鐘，一次性加入IOOml乙醚，析出白色固體粉末，得到 340mg(92. 64% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 707 [M+H] +。[α ]D25 = -6. 21 (c = 1. 03 甲醇)，Mp 135. 60 136. 40°C。實施例14HGSR0 (CH2) 9CH3 的制備1) Boc-Arg (NO2) 0 (CH2) 9CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. 7mmol) Boc-Arg (NO2) 和 1. 49g (9. 40mmol)CH3 (CH2)9OH 為原料獲得 1. 80g(83. 33 % )目標(biāo)物。ESI-MS (m/ z)460[M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) 0 (CH2) 9CH3用制備HCl · Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 6g(3. 5mmol)Boc-Arg(NO2) O(CH2)9CH3 為原料獲得 1. 15g(92. 20% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 360 [M+H]+。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) 0 (CH2) 9CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 42g (0. 80mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 0. 28g (0. 78mmol) HCl · Arg(NO2)O(CH2)9CH3 為原料，得到 0. 59g(86. 76% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 880 [M+H] +。4) Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg-O (CH2) 9CH3 [YIGSRO (CH2) 9CH3]用制備YIGSRO (CH2)7CH3 的方法，以 1. 02g Boc-Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg (NO2) -0 (CH2) 9CH3 為原料，得到 0. 69g(81. 17% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 735 [Μ+Η] +。[α ]D25 = -7. 21 (c =1. 03 甲醇)，Mp 141. 60 142. 40°C。實施例15HGSR0 (CH2) nCH3 的制備1) Boc-Arg (NO2) 0 (CH2) nCH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. 7mmol) Boc-Arg (NO2) 和 1. 75g(9. 40mmol)CH3 (CH2)11OH 為原料獲得 2. IOg (91. 70 % )目標(biāo)物。ESI-MS (m/ z)488[M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) 0 (CH2) nCH3用制備HCl · Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 6g(3. 3匪ol)Boc-Arg(NO2) O(CH2)9CH3 為原料獲得 1. 15g(90. 55% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 388 [M+H]+。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) 0 (CH2) nCH3
用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 36g (0. 67mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 0. 26g (0. 67mmol) HCl · Arg(NO2)O(CH2)11CH3 為原料，得到
0.55g(91. 66% )目標(biāo)化合物。ESI-MS(m/z)908[M+H] +。4) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-O (CH2) nCH3 [YIGSRO (CH2) nCH3]用制備YIGSRO (CH2) 7CH3 的方法，以 1. 02g Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg(NO2) O(CH2)11CH3 為原料，得到 0. 75g (87. 21% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 763 [M+H]+。[a]D25 =-3. 90 (c = 1. 03 甲醇)，Mp 145. 60 146. 40 "C。實施例16HGSR0 (CH2) 13CH3 的制備1) Boc-Arg (NO2) 0 (CH2) 13CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 1. 6g(5. 0mmol)Boc-Arg(N02) 和 2. 15g(10. 0mmol)CH3 (CH2)13OH 為原料獲得 2. 48g(96. 12 % )目標(biāo)物。ESI-MS (m/ z)516[M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) 0 (CH2) 13CH3用制備HCl · Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 6g(3. lmmol)Boc-Arg(N02) O(CH2)13CH3 為原料獲得 1. 15g(89. 84% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 416 [M+H] +。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) 0 (CH2) 13CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 67g (1. 20mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 0. 57g(l. 32mmol) HCl · Arg(NO2)O(CH2)13CH3 為原料，得到
1.01g(87. 07% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 936 [M+H] +。4) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-O (CH2)13CH3 [YIGSRO (CH2) 13CH3]用制備YIGSRO (CH2) 7CH3 的方法，以 1. 09g Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg(NO2) O(CH2)13CH3 為原料，得到 0.81g (86.95 % )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 791 [M+H]+。[a]D25 =-8. 63 (c = 1. 03 甲醇)，Mp 139. 50 140. 20°C。實施例17 YIGSRO(CH2)15CH3 的制備1) Boc-Arg (NO2) 0 (CH2) 15CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. 7mmol)Boc-Arg(NO2)和
2.28g(9. 4mmol)CH3 (CH2)15OH為原料獲得 2. 41g(94. 50%)目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 544 [M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) 0 (CH2) 15CH3用制備HCl · Ser(Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 6g(2. 9匪ol)Boc-Arg(NO2) O(CH2)15CH3 為原料獲得 1. 20g(92. 30% )目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 444 [M+H] + 03) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) _0 (CH2) 15CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 93g (1. 70mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 0. 75g(l. 68mmol) HCl · Arg(NO2)O(CH2)15CH3 為原料，得到 1. 42g(87. 65% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 964[M+H] +。4) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-O (CH2)15CH3 [YIGSRO (CH2) 15CH3]用制備YIGSRO (CH2)7CH3 的方法，以 1. 19g Boc-Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg (NO2) -0 (CH2) 15CH3 為原料，得到 0. 83g (83. 01%)目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 819 [M+H]+。[a ]D25 = -5 . 76 (c =1. 03 甲醇)，Mp :149. 60 150. 40°C。實施例1OTIGSR0 (CH2) 17CH3 的制備
1) Boc-Arg (NO2) 0 (CH2) 17CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 5g(4. 7mmol)Boc-Arg(NO2)和
2.53g(9. 4mmol)CH3 (CH2)17OH為原料獲得 2. 50g(93. 28%)目標(biāo)物。ESI-MS (m/z) 572 [M+H]+。2) HCl · Arg (NO2) 0 (CH2) 17CH3用制備HCl · Ser (Bzl)-Arg(NO2)-OBzl 的方法，以 1. 6g(2. 8mmol)Boc-Arg(NO2) O(CH2)17CH3 為原料獲得 1. 16g(87. 87% )目標(biāo)物。ESI-MS(m/z)472[M+H] +。3) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (NO2) _0 (CH2) 17CH3用制備Boc-Ser (Bzl)-Arg (NO2)-OBzl 的方法，以 0. 93g (1. 70mmol) Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser 和 0. 89g(l. 87mmol) HCl · Arg(NO2)O(CH2)17CH3 為原料，得到 1. 61g(93. 56% )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 992 [M+H] +。4) Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-O (CH2)17CH3 [nGSRCKaynCHj用制備YIGSRO (CH2) 7CH3 的方法，以 1. 20g Boc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg(NO2) O(CH2)17CH3 為原料，得到 0.91g (89.21 % )目標(biāo)化合物。ESI-MS (m/z) 847 [M+H]+。[a]D25 =-5. 93 (c = 1· 03 甲醇)，Mp 156. 20 157. 10 °c。1hnmr(dmso-ci6) δ /ppm = 8. 62 (m, 2H), 8. 34 (d, J = 6. 20Hz, 1H)，8. 13(s，2H)，8. 01 (d, J = 6. 40Hz, 1H)，7. 40 (s, 1H)，7. 29 (s, 1H)，7. 19 (s，1H)，7. 02 (d, J = 4. 50Hz，2H)，6. 69 (d, J = 8. 40Hz，2H)，4. 28-2. 72 (m, 14H)， 1. 73-0. 8 (m, 48H)。試驗例1本發(fā)明化合物靜脈給藥的抗血栓試驗1)大鼠手術(shù)與器械SD大鼠(雄性，220 230g)按UOOmg-kg—1劑量腹腔注射烏拉坦溶液進(jìn)行麻醉。 麻醉大鼠仰臥位固定，分離右頸總動脈，近心端夾動脈夾，近心端和遠(yuǎn)心端分別穿入手術(shù) 線，將遠(yuǎn)心端的手術(shù)線于皮毛用止血鉗夾緊，準(zhǔn)備在遠(yuǎn)心端插管。2)插管插管為硅烷化過的聚乙烯膠管，分三段，中段為聚乙烯膠管，長60. Omm,內(nèi)徑
3.5mm ；兩端為相同的聚乙烯管，管長100. Omm,內(nèi)徑1. Omm，外徑2. Omm該管的一端拉成尖管 (用于插入大鼠頸動脈或靜脈)，外徑為1.0mm。將編好號的干凈青霉素小瓶中分別裝入6cm 長的黑色手術(shù)線，稱重；然后取出絲線，按照編號放入準(zhǔn)備好的插管的中段較粗的插管中。打開大鼠右側(cè)動脈夾，用注射器通過尖管端將管中注滿肝素生理鹽水溶液 (50IU · kg—1)，然后將插管的動脈端插入大鼠右側(cè)頸總動脈，將計算量的肝素緩緩注入大鼠 體內(nèi)。3)給藥藥品生理鹽水(3ml/kg)、阿斯匹林(劑量為30mg/kg)的生理鹽水溶液、本發(fā)明 的化合物(劑量為lOnmol/kg)的生理鹽水溶液。夾閉大鼠右側(cè)頸動脈夾，拔下插管靜脈端的注射器，將吸有計算量的藥品水溶的 藥液注射器插入插管的靜脈端，打開大鼠右側(cè)頸動脈夾，將藥品緩緩?fù)迫氪笫篌w內(nèi)。夾閉 右側(cè)頸動脈夾，將茶館的靜脈端插入分離好的大鼠左側(cè)頸靜脈，打開動脈夾，使血液開始循 環(huán)。并同時開始計時。此過程中插管中央的粗管中的絲線上會因為血液循環(huán)而產(chǎn)生血栓。4)血栓稱重計時開始15分鐘后，剪斷動靜脈插管，停止循環(huán)，用眼科鑷小心取出絲線，在濾紙上輕輕蘸掉血滴，放入事先稱重好的青霉素小瓶中，精確稱重并記錄。計算出血栓的濕重。 每個藥品重復(fù)12次給藥。統(tǒng)計各組的血栓濕重(I 士SD),并做t檢驗。5)結(jié)果經(jīng)靜脈給藥，本發(fā)明的化合物都具有很好的抗栓活性。結(jié)果列入表1。表1本發(fā)明的化合物經(jīng)靜脈給藥的抗血栓活性 η = 12 ；a.與生理鹽水相比，P < 0. 01.試驗例2本發(fā)明化合物YIGSRO (CH2) 7CH3 口服給藥的量效關(guān)系1)大鼠手術(shù)與器械SD 大鼠(雄性，220 230g)按 IOnmol · kg-1, Inmol · kg-1 和 0. Inmol · kg-1 劑量 口服YIGSKNC16，30min后按UOOmg-kg—1劑量腹腔注射烏拉坦溶液進(jìn)行麻醉。麻醉大鼠仰 臥位固定，分離右頸總動脈，于近心端夾動脈夾，近心端和遠(yuǎn)心端分別穿入手術(shù)線，將遠(yuǎn)心 端的手術(shù)線于皮毛用止血鉗夾緊，準(zhǔn)備在遠(yuǎn)心端插管。2)插管插管為硅烷化過的聚乙烯膠管，分三段，中段為聚乙烯膠管，長60. Omm,內(nèi)徑 3. 5mm ；兩端為相同的聚乙烯管，管長100. Omm,內(nèi)徑1. Omm，外徑2. Omm該管的一端拉成尖管 (用于插入大鼠頸動脈或靜脈)，外徑為1. Omm0將編好號的干凈青霉素小瓶中分別裝入6cm 長的黑色手術(shù)線，稱重；然后取出絲線，按照編號放入準(zhǔn)備好的插管的中段較粗的插管中。
14打開大鼠右側(cè)動脈夾，用注射器通過尖管端將管中注滿肝素生理鹽水溶液(50IU · kg—1)，然 后將插管的動脈端插入大鼠右側(cè)頸總動脈，將計算量的肝素緩緩注入大鼠體內(nèi)。3)給藥溶液藥品將Yigsro(CH2)7CH3 按 IOnmol · kg-1，0. Inmol · kg-1 和 0. Olnmol · kg-1 劑量 配置生理鹽水溶液，供口服給藥。4)血栓稱重計時開始15分鐘后，剪斷動靜脈插管，停止循環(huán)，用眼科鑷小心取出絲線，在濾紙 上輕輕蘸掉血滴，放入事先稱重好的青霉素小瓶中，精確稱重并記錄。計算出血栓的濕重。 每個藥品重復(fù)11次給藥。統(tǒng)計各組的血栓濕重(Z 士SD),并做t檢驗。5)結(jié)果經(jīng)口 服給藥，在 IOnmol · kg-1，0. Inmol · kg-1 和 0. Olnmol · kg-1 劑量下， YIGSRO (CH2) 7CH3劑量依賴地發(fā)揮抗血栓作用。結(jié)果列入表2。表2. 口服給予Yigsro(CH2)7CH3的量效關(guān)系 a)與 0. lnmol/kg 組比 ρ < 0. 05 ；b)與 0. 01nmol/kg 組比 ρ < 0. 05試驗例3本發(fā)明化合物在水相中組裝成為納米球試驗1)本發(fā)明的9種化合物按照mg/ml的濃度配置成為水溶液，在激光散射粒度儀 (型號)上連續(xù)測定8天，觀察粒徑及粒徑變化，結(jié)果見表3。得到的數(shù)據(jù)表明，這9種化合 物在水相中可以自組裝成為穩(wěn)定的納米球，因而是優(yōu)秀的微乳和脂質(zhì)體藥物的制備材料。 從表3中可以看出，母核接長的脂肪鏈后粒徑變大，截斷的脂肪鏈后粒徑變小，且均較母核穩(wěn)定。表3本發(fā)明的部分陽離子藥質(zhì)體(10_3M)在水中自組裝成為穩(wěn)定的納米球的粒經(jīng)
權(quán)利要求
脂肪烷基和YIGSR五肽綴合物，該綴合物的通式為Tyr Ile Gly Ser Arg X，Tyr Ile Gly Ser Arg Y或Z Tyr Ile Gly Ser Arg；其中X為CH3(CH2)nCH2OH，Y為CH3(CH2)nCH2NH2，Z為CH3(CH2)nCO2H；n＝6，8，10，12，14或16。
2.一種制備權(quán)利要求1所述的脂肪烷基和YIGSR五肽綴合物方法，包括以下步驟(1)合成Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg ；(2)將CH3 (CH2)nC02H、CH3(CH2)nCH2OH 分別與保護(hù)基保護(hù)的 Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg 的羧端或氨端綴合，脫去保護(hù)基，即得；或者將CH3 (CH2) nCH2NH2與保護(hù)基保護(hù)的 Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg的羧端綴合，脫去保護(hù)基，即得；其中η = 6,8,10，12，14或16。
3.—種抗血栓藥物組合物，其特征在于由治療或預(yù)防上有效量的權(quán)利要求1所述的 脂肪烷基和YIGSR五肽綴合物和藥學(xué)上可接受的載體或輔料所組成。
4.權(quán)利要求1所述的脂肪烷基和YIGSR五肽綴合物在制備抗血栓藥物中的用途。
5.權(quán)利要求1所述的脂肪烷基和YIGSR五肽綴合物在作為制備微乳或脂質(zhì)體藥物載體 中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了脂肪烷基和YIGSR五肽綴合物及其制備方法和在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。本發(fā)明綴合物的通式為Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-X，Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Y或Z-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg；其中X為CH3(CH2)nCH2OH，Y為CH3(CH2)nCH2NH2，Z為CH3(CH2)nCO2H；n＝6，8，10，12，14或16。本發(fā)明綴合物除具有優(yōu)秀的抗血栓活性外，還具有優(yōu)秀自組裝性能，可作為制備微乳、脂質(zhì)體等藥物載體的制劑材料。
文檔編號A61K9/127GK101906140SQ20091008512
公開日2010年12月8日 申請日期2009年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月2日
發(fā)明者彭師奇, 趙明, 高建玲 申請人:首都醫(yī)科大學(xué)