專利名稱：舒拉明鹽治療肝纖維化的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物化合物新的用途，特別涉及舒拉明鹽在制備抗肝纖維化藥物 中的新用途。
背景技術(shù)：
舒拉明(Suramin，別名蘇拉明，分子式=C51H4tlN6O23S6,分子量1291)為尿素衍生 物，屬多磺酸萘醌，是一種化學(xué)合成藥物，實(shí)際應(yīng)用時(shí)常制成其水溶性的金屬元素鹽或銨 鹽，以增大其水溶解性和穩(wěn)定性。其常用的鹽有鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、亞鐵鹽、銅鹽、鋅鹽 和銨鹽。舒拉明的金屬鹽之一舒拉明鈉是德國BAYERAG公司于1961年合成的一種抗錐 蟲類化合物，主要用于治療非洲錐蟲病和盤尾絲蟲病[要博等，河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008， 29(1)]。1986年初，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)舒拉明鈉能夠抑制病毒相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄酶活性，故將舒拉明鈉 應(yīng)用于獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immuno-deficiency syndrome,AIDS)的治療，但 是患者在臨床及免疫學(xué)方面并未見顯著的改變。因此，美國AIDS防治組織宣布舒拉明鈉不 是治療AIDS的有效藥物[梅文青，國際免疫學(xué)雜志，1986，03]。1987年后，人們開始研究這 種化合物治療惡性腫瘤的可能性。原因是在使用舒拉明鈉治療AIDS時(shí)發(fā)現(xiàn)患者同時(shí)患有 的卡西肉瘤(kaposis sarcoma)和非何杰金淋巴瘤(non-hodgkin lymphoma, NHL)完全消 退[馬炳南，國外醫(yī)學(xué).內(nèi)科學(xué)分冊(cè)，1986，11]。結(jié)合體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)舒拉明鈉能夠阻斷某些 與腫瘤生長密切相關(guān)的生長因子和酶的活性，故將舒拉明鈉作為一種抗腫瘤藥物廣泛應(yīng)用 于各種惡性腫瘤的治療，如前列腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、骨肉瘤等等[要博等，河北醫(yī)科大學(xué)學(xué) 報(bào)，2008，29(1)]。近年的研究結(jié)果表明舒拉明鹽可拮抗多種促進(jìn)纖維化發(fā)生的生長因子，提示該藥 具有抗纖維化的作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示舒拉明鈉對(duì)青光眼術(shù)后瘢痕的形成有抑制作用；局部 注射舒拉明鈉對(duì)小鼠受損的肌腱內(nèi)瘢痕的形成有抑制作用；體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明舒拉明 鈉對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的生長及膠原合成有抑制作用，提示舒拉明鈉可能成為治療瘢痕 疙瘩的有效藥物之一[韓軍濤等，現(xiàn)代康復(fù)，2001，5 (12)]。但舒拉明鈉對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的 小鼠肺纖維化的發(fā)生沒有影響。且到目前為止，尚無舒拉明鹽治療肝纖維化的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供舒拉明鹽在制備抗肝纖維化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案為本發(fā)明提供了舒拉明鹽在制備抗肝纖維化藥物中的應(yīng)用。其中本發(fā)明中用于小鼠 舒拉明鹽的劑量為5 20mg/kg體重，每周2次，根據(jù)小鼠與人用劑量的醫(yī)學(xué)換算關(guān)系，小 鼠使用劑量約為人用劑量的9倍，人日用劑量為0. 16mg/kg 0. 64mg/kg。人的平均體重 為60kg，人日用劑量為9. 6mg 38. 4mg。人日用劑量常用的是舒拉明鹽的劑量10mg，15mg, 20mg,28mg,30mg,35mg。
3
本發(fā)明舒拉明鹽可以制成藥劑學(xué)可接受的任意劑型，如注射劑、膠囊劑、片劑、顆 粒劑、散劑、口服液、合劑、糖漿劑、混懸劑、栓劑、丸劑、滴鼻劑等制劑。本發(fā)明可以將人日用 劑量作為舒拉明鹽在單位制劑(如每片、顆粒劑每袋、散劑每袋、口服液每10ml、注射液每 Iml等)中的含量。


圖1 :BDL肝纖維化小鼠肝組織天狼猩紅染色結(jié)果其中A，正常對(duì)照組；B，模型組；C，舒拉明鈉低劑量治療組；D，舒拉明鈉中劑量治 療組；E.舒拉明鈉高劑量治療組；F，秋水仙堿陽性對(duì)照治療組。圖2 :CC14肝纖維化小鼠肝組織天狼猩紅染色結(jié)果其中A，正常對(duì)照組；B，模型組；C，舒拉明鈉低劑量治療組；D，舒拉明鈉中劑量治 療組；E.舒拉明鈉高劑量治療組；F，秋水仙堿陽性對(duì)照治療組。圖3 :DMN肝纖維化小鼠肝組織天狼猩紅染色結(jié)果其中A，正常對(duì)照組；B，模型組；C，舒拉明鈉低劑量治療組；D，舒拉明鈉中劑量治 療組；E.舒拉明鈉高劑量治療組；F，秋水仙堿陽性對(duì)照治療組。實(shí)驗(yàn)例1舒拉明鈉對(duì)膽管結(jié)扎(bile duct ligation, BDL)方法制成的小鼠肝纖 維化模型的治療作用動(dòng)物分組將72只ICR雄性小鼠(SPF級(jí)，體重28_30g，6周齡左右)隨機(jī)分為6 組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型組、舒拉明鈉低劑量組(治療I組，5mg/kg體重)、 舒拉明鈉中劑量組(治療II組，10mg/kg體重)、舒拉明鈉高劑量組(治療III組，20mg/kg 體重)、秋水仙堿組(陽性對(duì)照組，lmg/kg體重)。模型制備小鼠經(jīng)4%水合氯醛麻醉、皮膚消毒后，沿腹正中線切開，暴露膽總管， 共結(jié)扎3道近端結(jié)扎2道，遠(yuǎn)端結(jié)扎1道?？拷h(yuǎn)端剪斷膽總管，關(guān)腹。正常對(duì)照組(假 手術(shù)組)僅開腹并游離膽總管后關(guān)腹。造模當(dāng)日即開始給予藥物，治療組和陽性對(duì)照組分別經(jīng)腹腔注射舒拉明鈉注射液 或秋水仙堿注射液，2次/周，連續(xù)2周。正常對(duì)照組和模型組動(dòng)物以生理鹽水替代。肝臟和血液標(biāo)本的采集小鼠剖殺前6小時(shí)禁食不禁水。小鼠稱重后予4%水合氯醛(10ml/kg體重)腹腔 注射麻醉動(dòng)物，下腔靜脈取血，迅速取出肝臟，肝臟組織分為三部分處理1)用于提取總RNA 取最大的兩葉肝臟，切除邊緣部分，保留中間部分，然后將肝 組織切成約Imm3大小，分別從兩肝葉中取兩塊Imm3組織放入有300 μ 1裂解液中提取肝組 織總 RNA ( QIAGEN RNeasy Mini Kit)，將 2 μ g 總 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，取 IOng 的 cDNA 進(jìn) 行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timeRT-PCR)，檢測(cè)I型膠原(procollagen α 1 (I) )、III型 膠原(procollagen α 1 (III) )mRNA 表達(dá)水平。2)用于羥脯氨酸測(cè)定每葉肝臟中均取一部分組織放入試管中，然后將肝組織制 成勻漿，用冷凍干燥機(jī)制成干粉。之后測(cè)定干粉中羥脯氨酸含量。3)用于肝組織形態(tài)學(xué)分析其余的肝組織在4%多聚甲醛內(nèi)保存。石蠟包埋， 常規(guī)切片，擬行天狼猩紅染色，觀察肝組織膠原纖維增生情況。在10X5放大倍數(shù)下，每 張肝組織切片隨機(jī)選10個(gè)不同視野，采用Leica QwinV3 (Leica. Microsystems ImagingSolutions Ltd,. Cambridge,UK)圖像分析軟件對(duì)纖維化區(qū)域進(jìn)行圖像半定量分析，以纖維 化面積占視野面積百分比的平均值為每張切片半定量數(shù)值。血液標(biāo)本使用低溫離心機(jī)4°C、1800g/min條件下離心lOmin，分離的血清凍存 于-80°C，統(tǒng)一檢測(cè)血清透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、III型膠原前肽(PCIII)、IV型膠 原(IV-C)水平，測(cè)定方法=ELISA0統(tǒng)計(jì)方法用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，組間的兩兩比較用方差分析。結(jié)果1.舒拉明鈉明顯降低BDL小鼠肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)包括血清透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、III型膠原前肽 (PCIII)和IV型膠原(IV-C)。模型組血清中的擬、1^沖(111、1￥-〇4比正常對(duì)照組明顯增 高，舒拉明鈉各劑量組及秋水仙堿組血清中的HA、LN、PCIII、IV-C均明顯低于模型組，舒拉 明鈉高、中劑量組的HA、LN、PCIII、IV-C均低于低劑量組(P < 0. 01)，但高、中劑量組之間 差異無顯著性，見表1。表1舒拉明鈉對(duì)BDL肝纖維化小鼠血清中肝纖維化指標(biāo)的影響(X士SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 01與模型組比較2.舒拉明鈉明顯降低BDL小鼠肝組織中羥脯氨酸含量模型組肝組織中羥脯氨酸含量比正常對(duì)照組明顯增高，舒拉明鈉各劑量組及秋水 仙堿組肝組織中羥脯氨酸含量均明顯低于模型組，舒拉明鈉高、中劑量組的羥脯氨酸含量 均低于低劑量組(P < 0. 01)，但高、中劑量組之間差異無顯著性，見表2。表2舒拉明鈉對(duì)BDL肝纖維化小鼠肝組織中纖維化指標(biāo)的影響(X士SD)
注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較;#P < 0. 01與模型組比較3.舒拉明鈉明顯減少BDL小鼠肝組織中膠原纖維的含量天狼猩紅染料可特異地將肝組織內(nèi)膠原成分染成紅色，常用于評(píng)估肝組織纖維化 程度。小鼠肝組織切片天狼猩紅染色結(jié)果顯示正常對(duì)照組(圖1A)只在匯管區(qū)有極少量 膠原纖維，小葉中央靜脈(CLV)周圍未見膠原纖維。模型組(圖1B)小葉中央靜脈周圍出現(xiàn)多量膠原纖維向小葉內(nèi)延伸，可見CLV-CLV橋接纖維間隔并包繞肝組織，肝纖維化明顯。 經(jīng)過舒拉明鈉治療，高、中、低劑量組均未出現(xiàn)假小葉的形成。相比較而言，高、中劑量組纖 維增生較少，局限于匯管區(qū)(圖1D，E)，低劑量組療效稍差，纖維組織由匯管區(qū)向周圍延伸 (圖1C)，秋水仙堿可較好改善肝纖維化損傷(圖1F)。圖像分析結(jié)果顯示，與模型組相比， 舒拉明鈉各劑量組及秋水仙堿組小鼠肝組織切片中膠原纖維所占面積百分比分別降低，差 異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。4.舒拉明鈉明顯降低BDL小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá)水平由于I型膠原和III型膠原是形成肝纖維化的主要膠原成分。故我們應(yīng)用實(shí)時(shí)定 量聚合酶鏈反應(yīng)(real time RT-PCR)方法測(cè)定BDL小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá) 水平。結(jié)果顯示BDL模型組小鼠肝組織I型和III型膠原mRNA表達(dá)水平分別較正常對(duì)照 組提高了 25倍和30倍。舒拉明鈉各劑量組及秋水仙堿組I型和III型膠原mRNA表達(dá)水 平均明顯低于模型組(P < 0. 05)，見表3。表3舒拉明鈉對(duì)BDL肝纖維化小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá)水平的影響 (X 士 SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 05與模型組比較結(jié)論BDL模型是由于膽汁淤積使膽管上皮細(xì)胞代償性增生繼而管周肌成纖維細(xì) 胞大量活化，最終導(dǎo)致膽管性肝纖維化/硬化。舒拉明鈉抑制BDL引起的小鼠肝纖維化。實(shí)驗(yàn)例2舒拉明鈉對(duì)四氯化碳(CC14)方法制成的小鼠肝纖維化模型的治療作用動(dòng)物分組同實(shí)驗(yàn)例1。模型制備模型組、治療組和陽性對(duì)照組動(dòng)物腹腔注射10% CC14橄欖油溶液 (10 μ 1/g體重)，2次/周，連續(xù)4周；正常對(duì)照組動(dòng)物僅腹腔注射橄欖油。造模當(dāng)日即開 始給予藥物，治療組和陽性對(duì)照組分別經(jīng)腹腔注射舒拉明鈉注射液或秋水仙堿注射液，2次 /周，連續(xù)4周。正常對(duì)照組和模型組動(dòng)物以生理鹽水替代。肝臟和血液標(biāo)本的采集方法、統(tǒng)計(jì)方法同實(shí)驗(yàn)例1。結(jié)果1.舒拉明鈉明顯降低CC14小鼠肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)模型組血清中的HA、LN、PCIII、IV-C4比正常對(duì)照組明顯增高，舒拉明鈉各劑量組 及秋水仙堿組血清中的HA、LN、PCIII、IV-C均明顯低于模型組，舒拉明鈉高、中劑量組的 HA、LN、PCHIII、IV-C均低于低劑量組(P < 0. 01)，但高、中劑量組之間差異無顯著性，見表 4。表4舒拉明鈉對(duì)CC14肝纖維化小鼠血清中肝纖維化指標(biāo)的影響(X士SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 01模型組比較2.舒拉明鈉明顯降低CC14小鼠肝組織中羥脯氨酸含量模型組肝組織中羥脯氨酸含量比正常對(duì)照組明顯增高，舒拉明鈉各劑量組及秋水 仙堿組肝組織中羥脯氨酸含量均明顯低于模型組，舒拉明鈉高、中劑量組的羥脯氨酸含量 均低于低劑量組(P < 0. 01)，但高、中劑量組之間差異無顯著性，見表5。表5舒拉明鈉對(duì)CC14肝纖維化小鼠肝組織中纖維化指標(biāo)的影響(X士SD)
組別羥脯氨酸(pg/mg肝組織) 膠原纖維所占面枳的百分比(％) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 01與模型組比較3.舒拉明鈉明顯減少CC14小鼠肝組織中膠原纖維的含量小鼠肝組織切片天狼猩紅染色結(jié)果顯示正常對(duì)照組(圖2A)只在匯管區(qū)有極少 量膠原纖維，小葉中央靜脈(CLV)周圍未見膠原纖維。模型組(圖2B)小葉中央靜脈周圍 出現(xiàn)多量膠原纖維向小葉內(nèi)延伸，可見CLV-CLV橋接纖維間隔并包繞肝組織，肝纖維化明 顯。經(jīng)過舒拉明鈉治療，高、中、低劑量組均未出現(xiàn)假小葉的形成。相比較而言，高、中劑量 組纖維增生較少，局限于匯管區(qū)(圖2D，E)，低劑量組療效稍差，纖維組織由匯管區(qū)向周圍 延伸(圖2C)，秋水仙堿可較好改善肝纖維化損傷(圖2F)。圖像分析結(jié)果顯示，與模型組 相比，舒拉明鈉各劑量組及秋水仙堿組小鼠肝組織切片中膠原纖維所占面積百分比分別降 低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表5。4.舒拉明鈉明顯降低CC14小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá)水平應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time RT-PCR)方法測(cè)定CC14小鼠肝組織中 I、III型膠原mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示CC14模型組小鼠肝組織I型和III型膠原mRNA 表達(dá)水平分別較正常對(duì)照組提高了 15倍和18倍。舒拉明鈉各劑量組及秋水仙堿組I型和 III型膠原mRNA表達(dá)水平均明顯低于模型組(P < 0. 05)，見表6。表6舒拉明鈉對(duì)CC14肝纖維化小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá)水平的影響 (X 士 SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 05與模型組比較結(jié)論舒拉明鈉能抑制CC14引起的小鼠肝纖維化。實(shí)驗(yàn)例3舒拉明鈉對(duì)二甲基亞硝胺(DMN)方法制成的小鼠肝纖維化模型的治療作 用動(dòng)物分組同實(shí)驗(yàn)例1。模型制備將ImlDMN原液溶于200ml生理鹽水配制0. 5% DMN溶液，避光保存，2 周內(nèi)使用。模型組、治療組和陽性對(duì)照組動(dòng)物腹腔注射0. 5% DMN(2ml/kg體重)，第1周前 3d連續(xù)給2/3藥量，后4d不給藥，第2周開始前3d連續(xù)給全藥量，后4天不給藥，持續(xù)4 周。正常對(duì)照組動(dòng)物僅腹腔注射生理鹽水。造模當(dāng)日即開始給予藥物，治療組和陽性對(duì)照 組分別經(jīng)腹腔注射舒拉明鈉注射液或秋水仙堿注射液，2次/周，連續(xù)4周。正常對(duì)照組和 模型組動(dòng)物以生理鹽水替代。肝臟和血液標(biāo)本的采集方法、統(tǒng)計(jì)方法同實(shí)驗(yàn)例1。結(jié)果1.舒拉明鈉明顯降低DMN小鼠肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)模型組血清中的HA、LN、PCIII、IV-C4比正常對(duì)照組明顯增高，舒拉明鈉各劑量組 及秋水仙堿組血清中的HA、LN、PCIII、IV-C均明顯低于模型組，舒拉明鈉高、中劑量組的 HA、LN、PCIII、IV-C均低于低劑量組(P < 0. 01)，但高、中劑量組之間差異無顯著性，見表 7。表7舒拉明鈉對(duì)DMN肝纖維化小鼠血清中肝纖維化指標(biāo)的影響(X士SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 01與模型組比較2.舒拉明鈉明顯降低DMN小鼠肝組織中羥脯氨酸含量模型組肝組織中羥脯氨酸含量比正常對(duì)照組明顯增高，舒拉明鈉各劑量組及秋水 仙堿組肝組織中羥脯氨酸含量均明顯低于模型組，舒拉明鈉高、中劑量組的羥脯氨酸含量 均低于低劑量組(P < 0. 01)，但高、中劑量組之間差異無顯著性，見表8。表8舒拉明鈉對(duì)DMN肝纖維化小鼠肝組織中纖維化指標(biāo)的影響(X士SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 01與模型組比較3.舒拉明鈉明顯減少DMN小鼠肝組織中膠原纖維的含量小鼠肝組織切片天狼猩紅染色結(jié)果顯示正常對(duì)照組(圖3A)只在匯管區(qū)有極少 量膠原纖維，小葉中央靜脈(CLV)周圍未見膠原纖維。模型組(圖3B)小葉中央靜脈周圍 出現(xiàn)多量膠原纖維向小葉內(nèi)延伸，可見CLV-CLV橋接纖維間隔并包繞肝組織，肝纖維化明 顯。經(jīng)過舒拉明鈉治療，高、中、低劑量組均未出現(xiàn)假小葉的形成。相比較而言，高、中劑量 組纖維增生較少，局限于匯管區(qū)(圖3D，E)，低劑量組療效稍差，纖維組織由匯管區(qū)向周圍 延伸(圖3C)，秋水仙堿可較好改善肝纖維化損傷(圖3F)。圖像分析結(jié)果顯示，與模型組 相比，舒拉明鈉各劑量組及秋水仙堿組小鼠肝組織切片中膠原纖維所占面積百分比分別降 低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表8。4.舒拉明鈉明顯降低DMN小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá)水平應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time RT-PCR)方法測(cè)定DMN小鼠肝組織中I、 III型膠原mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示DMN模型組小鼠肝組織I型和III型膠原mRNA表達(dá) 水平分別較正常對(duì)照組提高了 12倍和15倍。舒拉明鈉各劑量組及秋水仙堿組I型和III 型膠原mRNA表達(dá)水平均明顯低于模型組(P < 0. 05)，見表9。表9舒拉明鈉對(duì)DMN肝纖維化小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá)水平的影響 (X 士 SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 05與模型組比較結(jié)論舒拉明鈉抑制DMN引起的小鼠肝纖維化。實(shí)驗(yàn)例4舒拉明鉀、舒拉明鎂、舒拉明鈣、舒拉明亞鐵、舒拉明銅、舒拉明鋅和舒拉 明銨7種舒拉明鹽對(duì)四氯化碳(CC14)方法制成的小鼠肝纖維化模型的治療作用動(dòng)物分組將288只ICR雄性小鼠(SPF級(jí)，體重28_30g，6周齡左右)隨機(jī)分為24 組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型組、舒拉明鉀等7種舒拉明鹽低劑量組(治療I組， 5mg/kg體重)、舒拉明鉀等7種舒拉明鹽中劑量組(治療II組，10mg/kg體重)、舒拉明鉀等7種舒拉明鹽高劑量組(治療III組，20mg/kg體重)、秋水仙堿組(陽性對(duì)照組，lmg/kg 體重)。模型制備模型組、治療組和陽性對(duì)照組動(dòng)物腹腔注射10% CC14橄欖油溶液 (10 μ 1/g體重)，2次/周，連續(xù)4周；正常對(duì)照組動(dòng)物僅腹腔注射橄欖油。造模當(dāng)日即開 始給予藥物，治療組分別經(jīng)腹腔注射舒拉明鉀等7種舒拉明鹽注射液，陽性對(duì)照組經(jīng)腹腔 注射秋水仙堿注射液，2次/周，連續(xù)4周。正常對(duì)照組和模型組動(dòng)物以生理鹽水替代。肝臟和血液標(biāo)本的采集方法、統(tǒng)計(jì)方法同實(shí)驗(yàn)例1。結(jié)果1.舒拉明鉀等7種舒拉明鹽明顯降低CC14小鼠肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)模型組血清中的HA、LN、PCIII、IV-C4比正常對(duì)照組明顯增高，舒拉明鉀等7種舒 拉明鹽各劑量組及秋水仙堿組血清中的HA、LN、PCIII、IV-C均明顯低于模型組，舒拉明鉀 等7種舒拉明鹽高、中劑量組的HA、LN、PCIII、IV-C均低于低劑量組(P < 0.01)，但高、中 劑量組之間差異無顯著性，見表10。表10舒拉明鉀等7種舒拉明鹽對(duì)CC14肝纖維化小鼠血清中肝纖維化指標(biāo)的影響 (X 士 SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 01模型組比較2.舒拉明鉀等7種舒拉明鹽明顯降低CC14小鼠肝組織中羥脯氨酸含量模型組肝組織中羥脯氨酸含量比正常對(duì)照組明顯增高，舒拉明鉀等7種舒拉明鹽 各劑量組及秋水仙堿組肝組織中羥脯氨酸含量均明顯低于模型組，舒拉明鉀等7種舒拉明 鹽高、中劑量組的羥脯氨酸含量均低于低劑量組(P < 0. 01)，但高、中劑量組之間差異無顯 著性，見表11。表11舒拉明鉀等7種舒拉明鹽對(duì)CC14肝纖維化小鼠肝組織中纖維化指標(biāo)的影響 (X 士 SD)
陽性對(duì)照組0.177±0.065#0. 688±0. 256#注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 01與模型組比較3.舒拉明鉀等7種舒拉明鹽明顯減少CC14小鼠肝組織中膠原纖維的含量小鼠肝組織切片天狼猩紅染色結(jié)果顯示正常對(duì)照組(圖2A)只在匯管區(qū)有極少 量膠原纖維，小葉中央靜脈(CLV)周圍未見膠原纖維。模型組(圖2B)小葉中央靜脈周圍 出現(xiàn)多量膠原纖維向小葉內(nèi)延伸，可見CLV-CLV橋接纖維間隔并包繞肝組織，肝纖維化明 顯。經(jīng)過舒拉明鉀等7種舒拉明鹽治療，高、中、低劑量組均未出現(xiàn)假小葉的形成。相比較 而言，高、中劑量組纖維增生較少，局限于匯管區(qū)(圖2D，E)，低劑量組療效稍差，纖維組織 由匯管區(qū)向周圍延伸(圖2C)，秋水仙堿可較好改善肝纖維化損傷(圖2F)。圖像分析結(jié)果 顯示，與模型組相比，舒拉明鉀等7種舒拉明鹽各劑量組及秋水仙堿組小鼠肝組織切片中膠原纖維所占面積百分比分別降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表11。4.舒拉明鉀等7種舒拉明鹽明顯降低CC14小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表 達(dá)水平應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)方法測(cè)定CC14小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá) 水平。結(jié)果顯示CC14模型組小鼠肝組織I型和III型膠原mRNA表達(dá)水平分別較正常對(duì) 照組提高了 15倍和18倍。舒拉明鉀等7種舒拉明鹽各劑量組及秋水仙堿組I型和III型 膠原mRNA表達(dá)水平均明顯低于模型組(P < 0. 05)，見表12。表12舒拉明鉀等7種舒拉明鹽對(duì)CC14肝纖維化小鼠肝組織中I、III型膠原mRNA 表達(dá)水平的影響(X士SD) 注*P < 0. 001與正常對(duì)照組比較 ’#P < 0. 05與模型組比較結(jié)論舒拉明鉀、舒拉明鎂、舒拉明鈣、舒拉明亞鐵、舒拉明銅、舒拉明鋅和舒拉明 銨7種舒拉明鹽能抑制CC14引起的小鼠肝纖維化。下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:舒拉明鉀經(jīng)常規(guī)工藝制成片劑，每片含舒拉明鉀10mg，日用劑量為2片，用于治療肝纖維化。實(shí)施例2:舒拉明鎂經(jīng)常規(guī)工藝制成膠囊劑，每粒含舒拉明鎂10mg，日用劑量為2粒，用于治 療肝纖維化。實(shí)施例3:舒拉明鈣經(jīng)常規(guī)工藝制成顆粒劑，顆粒劑每袋含舒拉明鈣10mg、日用劑量為2袋， 用于治療肝纖維化。實(shí)施例4:舒拉明亞鐵經(jīng)常規(guī)工藝制成散劑，散劑每袋含舒拉明亞鐵10mg，日用劑量為2 袋，，用于治療肝纖維化。實(shí)施例5:舒拉明銅經(jīng)常規(guī)工藝制成口服液，口服液每IOml含舒拉明銅10mg，日用劑量為 20ml，用于治療肝纖維化。實(shí)施例6:舒拉明鋅經(jīng)常規(guī)工藝制成注射劑，每Iml含舒拉明鋅10mg，日用劑量為1ml，用于 治療肝纖維化。實(shí)施例7:舒拉明銨經(jīng)常規(guī)工藝制成合劑，合劑每IOml含舒拉明銨10mg，日用劑量為20ml， 用于治療肝纖維化。實(shí)施例8:舒拉明銨經(jīng)常規(guī)工藝制成糖漿劑，糖漿劑每IOml含舒拉明銨10mg，日用劑量為 20ml，用于治療肝纖維化。實(shí)施例9:舒拉明鋅經(jīng)常規(guī)工藝制成混懸劑，混懸劑每IOml含舒拉明鋅10mg，日用劑量為 20ml，用于治療肝纖維化。實(shí)施例10 舒拉明鋅經(jīng)常規(guī)工藝制成栓劑，栓劑每粒含舒拉明鋅10mg，日用劑量為2粒，用于 治療肝纖維化。實(shí)施例11 舒拉明銅經(jīng)常規(guī)工藝制成滴鼻劑，滴鼻劑每Iml含舒拉明銅10mg，日用劑量為 lml，用于治療肝纖維化。實(shí)施例12 舒拉明鈉經(jīng)常規(guī)工藝制成丸劑，丸劑每IOg含舒拉明鈉10mg，日用劑量為20g，用 于治療肝纖維化。
權(quán)利要求
舒拉明鹽治療抗肝纖維化的新用途，其特征是化學(xué)合成藥物舒拉明的金屬鹽和銨鹽作為抗肝纖維化藥物在臨床中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的舒拉明鹽是指能增大其水溶解性和穩(wěn)定性的舒拉明金屬鹽和 銨鹽，常用的鹽有舒拉明鈉、舒拉明鉀、舒拉明鎂、舒拉明鈣、舒拉明亞鐵、舒拉明銅、舒拉明 鋅和舒拉明銨。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中抗肝纖維化是指降低肝組織中羥脯氨酸含量。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中抗肝纖維化是指減少肝組織中膠原纖維的含量。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中抗肝纖維化是指降低肝組織中I、III型膠原mRNA表 達(dá)水平。
6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中抗肝纖維化是指降低肝纖維化HA、LN、PCIII、IV-C4 血清學(xué)指標(biāo)。
7.如權(quán)利要求1-6任一所述的應(yīng)用，其中舒拉明鹽的人日服劑量為9.6mg 38. 4mg。
8.如權(quán)利要求7任一所述的應(yīng)用，其中舒拉明鹽的人日服劑量為10mg。
9.如權(quán)利要求7任一所述的應(yīng)用，其中舒拉明鹽的人日服劑量為15mg。
10.如權(quán)利要求7任一所述的應(yīng)用，其中舒拉明鹽的人日服劑量為20mg。
11.如權(quán)利要求7任一所述的應(yīng)用，其中舒拉明鹽的人日服劑量為28mg。
12.如權(quán)利要求7任一所述的應(yīng)用，其中舒拉明鹽的人日服劑量為30mg。
13.如權(quán)利要求7任一所述的應(yīng)用，其中舒拉明鹽的人日服劑量為35mg。
全文摘要
本發(fā)明公開了舒拉明鹽在制備抗肝纖維化藥物中的應(yīng)用。舒拉明鹽抗肝纖維化是指降低肝組織中羥脯氨酸含量，減少肝組織中膠原纖維的含量，降低肝組織中I、III型膠原mRNA表達(dá)水平，降低肝纖維化HA、LN、PCIII、IV-C4血清學(xué)指標(biāo)。舒拉明鹽在制備抗肝纖維化藥物中的人日用劑量為9.6mg～38.4mg。人日用劑量常用的是10mg，15mg，20mg，28mg，30mg，35mg。
文檔編號(hào)A61P1/16GK101904832SQ200910085298
公開日2010年12月8日 申請(qǐng)日期2009年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月5日
發(fā)明者李麗英 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué);亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司