專利名稱:一種治療婦科功血疾病的中藥組合物、其制備方法以及其膠囊劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域,具體地說(shuō),涉及一種治療婦科功血疾病的中藥組合物 及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù):
崩漏是指月經(jīng)周期、經(jīng)期、經(jīng)量出現(xiàn)嚴(yán)重紊亂,經(jīng)血非時(shí)暴下或淋漓不盡者,是婦 科的多發(fā)病和疑難病。有人統(tǒng)計(jì)以崩漏而就診者約占婦科門診的1/3,本病相當(dāng)于西醫(yī)之功 能性子宮出血,而與無(wú)排卵型功血尤其相似。功能失調(diào)性子宮出血是由于神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能失調(diào)所引起的異常子宮出血,簡(jiǎn) 稱“功血”,是婦產(chǎn)科常見(jiàn)病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)本病50%發(fā)生于更年期,30%發(fā)生于生育期,20% 發(fā)生于青春期。由于功血的發(fā)病機(jī)制不同,臨床上將功血分為無(wú)排卵型功血和排卵型功血 兩大類。無(wú)排卵型功血最常見(jiàn),約占80%左右,多發(fā)生于青春期和更年期,臨床表現(xiàn)為月經(jīng) 失去周期性,出現(xiàn)不規(guī)則子宮出血。排卵型功血多發(fā)生于生育期女性,可分為排卵型月經(jīng) 過(guò)多、黃體功能不健、黃體萎縮不全及月經(jīng)中期出血幾種類型。其特點(diǎn)是排卵功能正常,月 經(jīng)尚有周期性,但月經(jīng)的周期、經(jīng)期、經(jīng)量發(fā)生異常改變。功血應(yīng)排除內(nèi)、外生殖器器質(zhì)性病 變、全身出血性疾病及妊娠所導(dǎo)致的異常子宮出血。關(guān)于無(wú)排卵型功血的治療西醫(yī)多以激素療法,止血藥物為主,如效果不好,可進(jìn)一 步采取手術(shù)刮宮甚至子宮摘除術(shù),給病人造成了極大的痛苦。而中醫(yī)藥通過(guò)數(shù)千年的臨床 實(shí)踐,對(duì)本病的治療積累了豐富的經(jīng)驗(yàn),創(chuàng)制了許多療效確切的方劑。作為治療婦科疾病如功能失調(diào)性子宮出血的良藥,本發(fā)明膠囊劑已經(jīng)由申請(qǐng)人申 請(qǐng)多項(xiàng)產(chǎn)品及方法專利并投入工業(yè)生產(chǎn)多年,推廣于市場(chǎng),療效確切。隨著中藥技術(shù)的發(fā)展,提高藥效并且提高生產(chǎn)效率,提高藥品質(zhì)量的可控性,降低 成本是申請(qǐng)人要解決的一大難題。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期理論研究和工業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐,申請(qǐng)人找到了最佳制備用量和制備方案以及 鑒別、含量測(cè)定等質(zhì)量控制方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療婦科功血疾病的中藥組合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述中藥組合物的制備方法。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供上述中藥組合物膠囊劑的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明提供的治療婦科功血疾病的中藥組合物,由如下重量份的原料組成赤芍 900-1100份、益母草900-1100份、三七200-400份、仙鶴草900-1100份、地榆炭500-700 份、蒲黃炭500-700份。優(yōu)選地,由如下重量份的原料組成赤芍1000份、益母草1000份、三七300份、仙 鶴草1000份、地榆炭600份、蒲黃炭600份。
上述中藥組合物可以通過(guò)添加適當(dāng)?shù)妮o料,制備成膠囊、片劑、顆粒劑、丸劑、軟膠囊劑。上述中藥組合物的制備方法,包括如下步驟1、按重量份稱取赤芍、益母草、三七、仙鶴草、地榆炭、蒲黃炭,備用;2、取赤芍、三七粉碎成粗粉,加4-8倍量80%乙醇,回流提取1_3次,每次lh_3h, 合并提取液,濾過(guò),濾液減壓濃縮至60°C時(shí)相對(duì)密度1.05-1. 10的清膏,離心,濃縮至60°C 時(shí)相對(duì)密度1. 15-1. 20的稠膏,備用;3、取益母草等其余四味,加水煎煮1-3次,每次加8-12倍量的水,煎煮0. 5h_l. 5h, 合并水煎液,濾過(guò),濾液濃縮至60°C時(shí)相對(duì)密度1. 15-1.20的稠膏,加乙醇制成含醇量為 70%的溶液,靜置16h-32h,取上清液,并濃縮至60°C時(shí)相對(duì)密度1. 15-1. 20的稠膏,與上述 赤芍等浸膏合并,制成各種劑型。此外,本發(fā)明還提供了上述制得的中藥組合物膠囊劑的質(zhì)量控制方法,該方法包 括鑒別和含量測(cè)定兩部分,其中鑒別包括采用薄層色譜法,分別用赤芍對(duì)照藥材、芍藥苷對(duì) 照品、三七對(duì)照藥材、仙鶴草對(duì)照藥材、益母草對(duì)照藥材和鹽酸水蘇堿對(duì)照品進(jìn)行的鑒別; 含量測(cè)定以含赤芍確定,以芍藥苷(C23H28O11)計(jì),不得少于12. Omg/粒,膠囊粒重為0. 35g/ 粒-0. 45g/ 粒。其中,鑒別方法包括以下鑒別中的一種或多種A、赤芍的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0. 5g-l. 5g,加水12ml-38ml,超聲處理 15min-45min,濾過(guò),濾液加水飽和的正丁醇溶液提取1_5次,每次10ml-30ml,合并提取液, 加氨試液20ml-60ml洗滌,棄去洗液,蒸干,加lml_3ml甲醇溶解殘?jiān)?,作為供試品溶液;取赤芍?duì)照藥材lg_3g,加甲醇15ml-45ml,超聲處理0. 5h_l. 5h,濾過(guò),濾液蒸干, 殘?jiān)铀?2ml-38ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提取制成對(duì)照藥材溶液;取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成濃度為lmg/ml-3mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液;吸取上述三種溶液各4μ1,以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸為 30-50 2-8 5-15 0. 1-0. 3的混合液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以5%香草醛 硫酸甲醇溶液,在95°C-115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和 對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);B、三七的鑒別以A的供試品溶液作為供試品溶液;取三七對(duì)照藥材0. 5g-l. 5g,加水5d-15d,攪勻,加水飽和的正丁醇溶液 20ml-60ml,超聲處理20min_60min,濾過(guò),濾液加氨試液20ml_60ml洗滌,棄去氨液,加入正 丁醇飽和的水溶液20ml-60ml洗滌,棄去正丁醇水溶液,蒸干,殘?jiān)蛹状糽ml_3ml溶解,作 為對(duì)照藥材溶液;取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對(duì)照品,加甲醇制成各濃度均為0. 5mg/ ml-1. 5mg/ml的混合溶液作為對(duì)照品溶液;吸取上述三種溶液各2 μ 1,以在10°C以下放置過(guò)夜的三氯甲烷甲醇水為 10-16 4-10 1-3的混合液的下層溶液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以10%硫酸 乙醇溶液,在95°C-115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照 品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);置365nm波長(zhǎng)的紫外光燈下檢視,顯相同顏色的 熒光斑點(diǎn);
C、仙鶴草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0. 5g-l. 5g,加0. 2% _0. 8%氫氧化鈉溶液 15ml-45ml,超聲處理10min-30min,濾過(guò),濾液加鹽酸調(diào)pH值至2_3,濾過(guò),濾液加乙酸乙酯 提取1-3次,每次10ml-30ml,合并提取液,蒸干,殘?jiān)蛹状糽ml_3ml溶解,作為供試品溶 液;取仙鶴草對(duì)照藥材4g_12g,加水25ml_75ml,煎煮0. 5h_l. 5h,濾過(guò),濾液蒸干,殘 渣加0. 2% -0. 8%氫氧化鈉溶液15ml-45ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提 取制成對(duì)照藥材溶液;吸取上述兩種溶液各15 μ 1,以水飽和的甲苯乙酸乙酯甲酸為 4-8 2-4 0.5-1.5的混合溶液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以0.5%-1.5%三氯 化鐵乙醇溶液顯色,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);D、益母草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0.9g-1.5g,加乙醇22ml-38ml,加熱回流 0. 5h-l. 5h,放冷,濾過(guò),濾液濃縮至2. 5ml-7. 5ml,加于內(nèi)徑5mm-15mm、活性炭0. 3g_0. 7g、 100目-120目中性氧化鋁lg_3g的活性炭-氧化鋁柱上,用15ml-45ml乙醇洗脫,收集洗脫 液,蒸干,殘?jiān)?. 2ml-0. 8ml乙醇溶解,作為供試品溶液;取益母草對(duì)照藥材1. 5g-4. 5g,與供試品溶液同法制成對(duì)照藥材溶液;取鹽酸水蘇堿對(duì)照品,加乙醇制成濃度為2. 5mg/ml-7. 5m/mlg的溶液,作為對(duì)照 品溶液;吸取上述三種溶液各10 μ 1,以正丁醇鹽酸水為3-5 0. 5-1. 5 0. 2-0. 8的 混合溶液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以稀碘化鉍鉀試液顯色,供試品色譜中,在與 對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。稀碘化鉍鉀試液參照《中國(guó)藥典2005年版二部附錄XVB試液》取次硝酸鉍0. 85g, 加冰醋酸IOml與水40ml溶解后,即得。臨用前取5ml,加碘化鉀溶液(取碘化鉀溶液4ml 加水至10ml,混勻)5ml,再加冰醋酸20ml,加水稀釋至100ml,即得。碘化鉀溶液參照《中國(guó)藥典2005年版二部附錄XVB試液》取碘化鉀16. 5g,加水 使溶解成100ml,即得。本液應(yīng)臨用新制。其優(yōu)選的鑒別方法包括以下鑒別中的一種或多種A、赤芍的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物lg,加水25ml,超聲處理30min,濾過(guò),濾液加水 飽和的正丁醇溶液提取3次,每次20ml,合并提取液,加氨試液40ml洗滌,棄去洗液,蒸干, 加2ml甲醇溶解殘?jiān)?,作為供試品溶液;取赤芍?duì)照藥材2g,加甲醇30ml,超聲處理lh,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?5ml,溫 熱使溶解,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提取制成對(duì)照藥材溶液;取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成濃度為2mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液;吸取上述三種溶液各4μ1,以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸為 40 5 10 0.2的混合液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以5%香草醛硫酸甲醇溶 液,在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的 位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);B、三七的鑒別以A的供試品溶液作為供試品溶液;取三七對(duì)照藥材lg,加水10d,攪勻,加水飽和的正丁醇溶液40ml,超聲處理 40min,濾過(guò),濾液加氨試液40ml洗滌,棄去氨液,加入正丁醇飽和的水溶液40ml洗滌,棄去正丁醇水溶液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml溶解,作為對(duì)照藥材溶液;取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對(duì)照品,加甲醇制成各濃度均為lmg/ml的混 合溶液,作為對(duì)照品溶液;吸取上述三種溶液各2 μ 1,以在10°C以下放置過(guò)夜的三氯甲烷甲醇水為 13 7 2的混合液的下層溶液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以10%硫酸乙醇溶液, 在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上,顯相同顏色的斑點(diǎn);置365nm波長(zhǎng)的紫外光燈下檢視,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);C、仙鶴草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物化,加0. 5%氫氧化鈉溶液30ml,超聲處理 20min,濾過(guò),濾液加鹽酸調(diào)pH值至2_3,濾過(guò),濾液加乙酸乙酯提取2次,每次20ml,合并提 取液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml溶解,作為供試品溶液;取仙鶴草對(duì)照藥材8g,加水50ml,煎煮lh,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)?. 5%氫氧化鈉 溶液30ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提取制成對(duì)照藥材溶液;吸取上述兩種溶液各15 μ 1,以水飽和的甲苯乙酸乙酯甲酸為6 3 1的混 合溶液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以三氯化鐵乙醇溶液顯色,供試品色譜中,在 與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);D、益母草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物1.2g,加乙醇30ml,加熱回流lh,放冷,濾過(guò), 濾液濃縮至5ml,加于內(nèi)徑10mm、活性炭0. 5g、100目-120目中性氧化鋁2g的活性炭-氧 化鋁柱上,用30ml乙醇洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)?. 5ml乙醇溶解,作為供試品溶液;取益母草對(duì)照藥材3g,與供試品溶液同法制成對(duì)照藥材溶液;取鹽酸水蘇堿對(duì)照品,加乙醇制成濃度為5mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液;吸取上述三種溶液各10 μ 1,以正丁醇鹽酸水為4 1 0. 5的混合溶液為展 開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以稀碘化鉍鉀試液顯色,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜 和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法還包括以下含量測(cè)定1、精密稱取芍藥苷對(duì)照品10mg,W 50%甲醇制成濃度為0. lmg/ml的溶液,作為對(duì) 照品溶液;2、取所述膠囊內(nèi)容物0. lg,精密稱定,置具塞的三角燒瓶中,精密加入50%甲醇 50ml,稱定重量,冷浸過(guò)夜后,超聲處理30分鐘,再稱重,用50 %甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖 勻,0. 45 μ m微孔濾膜濾過(guò),濾液作為供試品溶液;3、精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1,注入液相色譜儀,照高效液相色譜 法進(jìn)行測(cè)定,色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0. 05mol/L的磷酸二氫鉀 溶液甲醇為70 30的混合液為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm,理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng) 不低于2500。本發(fā)明中藥組成物的處方中,赤芍,苦、微寒,歸肝經(jīng),功能清熱涼血,善治血熱妄 行之出血癥。同時(shí)又有祛瘀止痛之功效,可治療婦女血脈瘀阻所致之崩漏腹痛等癥,用為君 藥。益母草,辛、苦,微寒。歸心、肝、膀胱經(jīng)。不僅能清熱解毒涼血,而且性善走散,能 活血祛瘀而止痛,為婦人經(jīng)產(chǎn)要藥。如《本草求真》云“行血,祛瘀生新,調(diào)經(jīng)解毒,為胎前 產(chǎn)后要?jiǎng)薄H?,甘、微苦,溫。歸肝,胃經(jīng)。能入血分,功善止血,又能化瘀生新,具有止血而留瘀之特長(zhǎng),對(duì)體內(nèi)外各種出血而兼有瘀滯者,尤為適宜。同時(shí)又有化瘀定痛之功,不僅 能治療各種外傷性瘀滯腫痛,而且對(duì)瘀血阻滯之腹痛亦有良效。二者共助君藥以增強(qiáng)其化 瘀之功,并協(xié)同發(fā)揮止血之效,用為臣藥。仙鶴草,苦、澀,平。歸肺、肝、脾經(jīng)。其藥性平和,入血分以收斂止血為其特長(zhǎng),臨 床上廣泛用于各種出血證,而尤以治療崩漏下血等下焦出血癥見(jiàn)長(zhǎng)。地榆炭,苦、酸,微寒。 歸肝、胃、大腸經(jīng)。善入血分,有涼血泄熱,收斂止血之功,可用于多種出血證。由于本品性 沉降而走下焦,故對(duì)下焦血熱之疾效果更佳。如《太平圣惠方·卷第七十三·治婦人漏下 五色諸方》以地榆同醋煎服,治婦人漏下赤色不止。蒲黃炭,甘、平。歸肝、心包經(jīng)。功能專 擅收澀止血,用于崩漏不止。如《圣濟(jì)總錄·卷第一百五十二 ·經(jīng)血暴下》蒲黃丸,以之合 龍骨,艾葉同用,治婦人月經(jīng)過(guò)多,漏下不止。《備急千金要方 卷四 赤白帶下崩中漏下第 三》蒲黃散,以之與鹿茸,當(dāng)歸二味補(bǔ)益肝腎、調(diào)理沖任之品同用,以治肝腎沖任虧損漏下不 止者。三者共助臣藥三七,以增強(qiáng)止血調(diào)經(jīng)之功,用為佐藥。諸藥合用,使血熱得涼,瘀血得散,出血得止,經(jīng)歸正常。本發(fā)明提供的治療婦科功血疾病的中藥組合物、其制備方法以及其膠囊劑的質(zhì)量 控制方法,具有如下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明的中藥組合物具有療效更確切,止血速度更快等優(yōu)點(diǎn)。2、本發(fā)明制備方法將赤芍、三七用乙醇提取后采用了離心的制備方法,可以去除 不溶于乙醇的物質(zhì)和機(jī)械雜質(zhì),使中藥組合物純度更高。3、本發(fā)明質(zhì)量控制方法中的鑒別方法用赤芍、三七、仙鶴草、益母草對(duì)照藥材和芍 藥苷、鹽酸水蘇堿對(duì)照品來(lái)做對(duì)照,直接比較斑點(diǎn)大小和位置,使操作更加簡(jiǎn)便,直觀;含量 測(cè)定方法用芍藥苷對(duì)照品作檢測(cè),使質(zhì)量更有保障,藥效更為確切。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容,但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物膠囊劑的制備(1)稱取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鶴草1000g、地榆炭600g、蒲黃炭 600g,備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉,加6倍量80 %乙醇,回流提取二次,第一次2h,第 二次lh,合并提取液,濾過(guò),濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度1.05-1. 10(60°C )的清膏,離心 (3000轉(zhuǎn)/分,5分鐘),濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏,備用。(3)取益母草等其余四味,加水煎煮二次,每次加10倍量的水,煎煮lh,合并水煎 液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏,加乙醇制成含醇量為70%的溶 液,靜置24h,取上清液回收乙醇,并濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏,與上述赤 芍、三七浸膏合并,加34g淀粉,混勻,真空干燥制粒,加4g微粉硅膠,混勻,裝膠囊,制成 1000粒,粒重約為0. 4g/粒。實(shí)施例2本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物片劑的制備方法(1)稱取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鶴草1000g、地榆炭600g、蒲黃炭 600g,備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉,加6倍量80 %乙醇,回流提取二次,第一次2h,第二次lh,合并提取液,濾過(guò),濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度1.05-1. 10(60°C )的清膏,離心 (3000轉(zhuǎn)/分,5分鐘),濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏,備用。(3)取益母草等其余四味,加水煎煮二次,每次加10倍量的水,煎煮lh,合并水煎 液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏,加乙醇制成含醇量為70%的溶 液,靜置24h,取上清液回收乙醇,并濃縮至相對(duì)密度1. 15-1.20(60°C)的稠膏,取二分之一 的赤芍、三七浸膏合并,混勻,干燥成干膏粉,加入糊精30g,以余下的赤芍、三七清膏為粘合 劑,混勻,制粒,干燥,壓片,噴以320g包衣液,制得每片重約0. 38g的薄膜包衣片1000片。實(shí)施例3本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物顆粒劑的制備方法(1)稱取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鶴草1000g、地榆炭600g、蒲黃炭 600g,備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉,加6倍量80 %乙醇,回流提取二次,第一次2h,第 二次lh,合并提取液,濾過(guò),濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度1.05-1. 10(60°C )的清膏,離心 (3000轉(zhuǎn)/分,5分鐘),濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏,備用。(3)取益母草等其余四味,加水煎煮二次,每次加10倍量的水,煎煮lh,合并水煎 液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏,加乙醇制成含醇量為70%的溶 液,靜置24h,取上清液回收乙醇,并濃縮至相對(duì)密度1. 15-1.20(60°C)的稠膏,取二分之一 的赤芍、三七浸膏合并,混勻,干燥成干膏粉,加入糊精35g,以余下的赤芍、三七清膏為粘合 劑,混勻,制成顆粒,干燥,即得。實(shí)施例4本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物丸劑的制備方法(1)稱取赤芍900g、益母草900g、三七400g、仙鶴草900g、地榆炭700g、蒲黃炭 700g,備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉,加4倍量80 %乙醇,回流提取二次,第一次2h,第 二次lh,合并提取液,濾過(guò),濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度1.05-1. 10(60°C )的清膏,離心 (3000轉(zhuǎn)/分,5分鐘),濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏,備用。(3)取益母草等其余四味,加水煎煮二次,每次加10倍量的水,煎煮lh,合并水煎 液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏,加乙醇制成含醇量為70%的溶 液,靜置24h,取上清液回收乙醇,并濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏,取二分之 一的赤芍、三七浸膏合并,混合,濃縮至80°C相對(duì)密度1.20的清膏,干燥,粉碎成細(xì)粉,加入 150g乳糖、35g微晶纖維素、15g羧甲基淀粉鈉,混勻,以余下的赤芍、三七清膏為粘合劑制 軟材,煉丸,制丸,60°C條件下干燥14小時(shí),拋光、干燥,即得成品。實(shí)施例5本發(fā)明治療婦科功血疾病中藥組合物軟膠囊劑的制備方法(1)稱取赤芍1100g、益母草1100g、三七200g、仙鶴草1100g、地榆炭500g、蒲黃炭 500g,備用。(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉,加6倍量80 %乙醇,回流提取二次,第一次2h,第 二次lh,合并提取液,濾過(guò),濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度1.05-1. 10(60°C )的清膏,離心 (3000轉(zhuǎn)/分,5分鐘),濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (60°C )的稠膏,備用。(3)取益母草等其余四味,加水煎煮二次,每次加10倍量的水,煎煮lh,合并水煎 液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度1. 15-1. 20 (600C )的稠膏,加乙醇制成含醇量為70%的溶 液,靜置24h,取上清液回收乙醇,并濃縮至相對(duì)密度1. 15-1.20(60°C)的稠膏,取二分之一的赤芍、三七浸膏合并,混合,濃縮至80°C相對(duì)密度為1. 20的清膏,混合,濃縮至70°C相對(duì) 密度為1. 22的清膏,干燥,粉碎成100目的細(xì)粉,細(xì)粉加入橄欖油520克,蜂蠟18克,以膠體 磨混合30分鐘,得混合物備用;將明膠、甘油、水以10 3 10的配比配制成明膠液240g, 與前述混合物用自動(dòng)旋轉(zhuǎn)軋囊機(jī)壓制成0. 6g/粒的軟膠囊,在溫度20°C、相對(duì)濕度52%的 條件下干燥24小時(shí),取出,選丸,用乙醇洗滌,在上述條件下干燥48小時(shí),即得軟膠囊劑。實(shí)施例6本發(fā)明中藥組合物膠囊劑的鑒別方法本發(fā)明中藥組合物膠囊劑的鑒別方法包括如下方法中的一種或多中A、赤芍的鑒別取實(shí)施例1膠囊劑內(nèi)容物lg,加水25ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò), 濾液加水飽和的正丁醇提取3次,每次20ml,合并正丁醇液,加氨試液40ml洗滌,棄去洗液, 正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml溶解,作為供試品溶液。取赤芍對(duì)照藥材2g,加甲醇30ml,超聲處理1小時(shí),濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?25ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提取制成對(duì)照藥材溶液。取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成濃度為2mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種 溶液各4μ1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (40 5 10 0.2)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸甲醇溶液,105°C加 熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同 顏色的斑點(diǎn);B、三七的鑒別取A的供試品溶液作為供試品溶液。取三七對(duì)照藥材lg,加水10滴,攪勻,加水飽和的正丁醇40ml,超聲處理40分鐘, 濾過(guò),濾液加氨試液40ml洗滌,棄去氨液,再加正丁醇飽和的水40ml洗滌,棄去水液,正丁 醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml溶解,作為對(duì)照藥材溶液。取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對(duì)照品,加甲醇制成各濃度均為lmg/ml的混 合溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 2μ1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13 7 2)10°C以下放置過(guò) 夜的下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,105°C加熱至斑點(diǎn)顯色 清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn); 置紫外光燈(365nm)下檢視,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。C、仙鶴草的鑒別取上述實(shí)施例1的方法制備的膠囊劑內(nèi)容物lg,加0. 5%氫氧化 鈉溶液30ml,超聲處理20分鐘,濾過(guò),濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2_3,濾過(guò),濾液加乙酸乙酯 提取2次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml溶解,作為供試品溶液。取仙鶴草對(duì)照藥材8g,加水50ml,煎煮1小時(shí),濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)?. 5%氫氧 化鈉溶液30ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提取制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各 15μ1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯(用水飽和)-乙酸乙酯-甲酸(6 3 1) 為展開劑,展開,取出,晾干,噴以三氯化鐵乙醇溶液;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色 譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。D、益母草的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物1. 2g,加乙醇30ml,加熱回流1小時(shí),放冷,濾過(guò),濾液濃縮至約5ml,加于活性炭_氧化鋁柱上(活性炭_氧化鋁柱為活性炭 0. 5g/100-120目中性氧化鋁2g,內(nèi)徑IOmm),用乙醇30ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)右?醇0. 5ml使溶解,作為供試品溶液。取益母草對(duì)照藥材3g,與供試品溶液同法制成對(duì)照藥材溶液。取鹽酸水蘇堿對(duì)照品,加乙醇制成濃度5mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 10μ1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-鹽酸-水(4 1 0.5)為展開劑,展開, 取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的 位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例7本發(fā)明中藥組合物膠囊劑的鑒別方法Α、赤芍的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物0. 5g,加水12ml,超聲處理15分鐘,濾 過(guò),濾液加水飽和的正丁醇提取1次,每次IOml,合并正丁醇液,加氨試液20ml洗滌,棄去洗 液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状糏ml使溶解,作為供試品溶液。取赤芍對(duì)照藥材lg,加甲醇15ml,超聲處理0. 5小時(shí),濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?12ml,溫?zé)崛芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法制成對(duì)照藥材溶液。取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成濃度lmg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種 溶液各4μ1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (30 8 5 0.3)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸甲醇溶液,95°C加熱 至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏 色的斑點(diǎn);B、三七的鑒別取A的供試品溶液作為供試品溶液。取三七對(duì)照藥材0. 5g,加水5滴,攪勻,加水飽和的正丁醇20ml,超聲處理20分 鐘,濾過(guò),濾液加氨試液20ml洗滌,棄去氨液,再加正丁醇飽和的水20ml洗滌,棄去水液,正 丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状糏ml溶解,作為對(duì)照藥材溶液。取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對(duì)照品,加甲醇制成各濃度均為0. 5mg/ml的 混合溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 2μ1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(10 10 1)10°C以下放置 過(guò)夜的下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,95°C加熱至斑點(diǎn)顯色 清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn); 置紫外光燈(365nm)下檢視,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。C、仙鶴草的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物0.5g,加0.2%氫氧化鈉溶15ml, 超聲處理10分鐘,濾過(guò),濾液加鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2,濾過(guò),濾液加乙酸乙酯提取1次,每次 10ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,殘?jiān)蛹状糏ml使溶解,作為供試品溶液。取仙鶴草對(duì)照藥材4g,加水25ml,煎煮0. 5小時(shí),濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)?. 2%氫 氧化鈉溶液15ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各 15μ1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯(用水飽和)-乙酸乙酯-甲酸(4 4 0.5)
11為展開劑,展開,取出,晾干,噴以0.5%三氯化鐵乙醇溶液;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材 色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);D、益母草的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物0.9g,加乙醇22ml,加熱回流0.5小 時(shí),放冷,濾過(guò),濾液濃縮至約2. 5ml,加于活性炭_氧化鋁柱上(活性炭_氧化鋁柱為活性 炭0. 3g/100-120目中性氧化鋁lg,內(nèi)徑5mm),用乙醇15ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)?乙醇0. 2ml使溶解,作為供試品溶液。取益母草對(duì)照藥材1. 5g,與供試品溶液同法制成對(duì)照藥材溶液;再取鹽酸水蘇堿 對(duì)照品,加乙醇制成2. 5mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各 10 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-鹽酸-水(3 1.5 0.2)為展開劑,展 開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng) 的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例8本發(fā)明藥物膠囊劑的鑒別方法Α、赤芍的鑒別取實(shí)施例1的膠囊劑內(nèi)容物1. 5g,加水38ml,超聲處理45分鐘,濾 過(guò),濾液加水飽和的正丁醇提取5次,每次30ml,合并正丁醇液,加氨試液60洗滌,棄去水 液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液。取赤芍對(duì)照藥材3g,加甲醇45ml,超聲處理1. 5小時(shí),濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?38ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提取制成對(duì)照藥材溶液。取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成3mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中 國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(50 2 15 0. 1)為展開劑,展開,取出, 晾干,噴以5%香草醛硫酸甲醇溶液,115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照 藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。B、三七的鑒別取上述的供試品溶液作為供試品溶液;另取三七對(duì)照藥材1. 5g, 加水15滴,攪勻,加水飽和的正丁醇60ml,超聲處理60分鐘,濾過(guò),濾液加氨試液60ml洗 滌,棄去氨液,再加正丁醇飽和的水60ml洗滌,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使 溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對(duì)照品,加甲醇制成每Iml 各含1. 5mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各2 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-7Κ (16 4 3)10°C以下放置過(guò)夜的下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇 溶液,115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的 位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);置紫外光燈(365nm)下檢視,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);C、仙鶴草的鑒別取上述實(shí)施例1的方法制備的膠囊劑內(nèi)容物1. 5g,加0. 8%氫氧 化鈉溶液45ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3,濾過(guò),濾液加乙酸乙酯 提取3次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另 取仙鶴草對(duì)照藥材12g,加水75ml,煎煮1. 5小時(shí),濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)?. 8%氫氧化鈉溶 液45ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各15 μ 1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯 (用水飽和)_乙酸乙酯-甲酸(8 2 1.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以1.5%三氯化鐵乙醇溶液;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);D、益母草的鑒別取上述實(shí)施例1的方法制備的膠囊劑內(nèi)容物1. 5g,加乙醇38ml, 加熱回流1. 5小時(shí),放冷,濾過(guò),濾液濃縮至約7. 5ml,加于活性炭-氧化鋁柱上,活性炭-氧 化鋁柱為活性炭0. 7g/中性氧化鋁100-120目,3g,內(nèi)徑15mm,用乙醇45ml洗脫,收集洗脫 液,蒸干,殘?jiān)右掖?. 8ml使溶解,作為供試品溶液。另取益母草對(duì)照藥材4. 5g,同法制成 對(duì)照藥材溶液;再取鹽酸水蘇堿對(duì)照品,加乙醇制成每Iml含7. 5mg的溶液,作為對(duì)照品溶 液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各10μ 1, 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-鹽酸-水(5 0.5 0.8)為展開劑,展開,取 出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位 置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例9本發(fā)明藥物膠囊劑的含量測(cè)定方法Α、精密稱取芍藥苷對(duì)照品IOmgJn 50%甲醇制成濃度0. lmg/ml的溶液,作為對(duì)照 品溶液;B、取上述實(shí)施例1的方法制備的膠囊劑內(nèi)容物0. lg,精密稱定,置具塞的三角燒 瓶中,精密加入50%甲醇50ml,稱定重量,冷浸過(guò)夜后,超聲處理30分鐘(功率200W,頻率 40KHz),再稱重,用50 %甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,0. 45 μ m微孔濾膜濾過(guò),濾液作為供試 品溶液;C、照高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定,色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 以0. 05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇(70 30)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。理論板數(shù)按 芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500,分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1,注入液相 色譜儀,測(cè)得供試品溶液和對(duì)照品溶液的峰面積分別為2059025和2432109,按公式“芍藥 苷含量=樣品峰面積X對(duì)照品濃度Χ50Χ平均粒重/(對(duì)照品峰面積X樣品重量)”計(jì) 算,即得芍藥苷含量為14. 58mg/粒,大于12. Omg/粒。實(shí)驗(yàn)例1實(shí)驗(yàn)條件 動(dòng)物清潔級(jí)ICR小白鼠。藥物本發(fā)明實(shí)施例1的膠囊劑0. 4g/粒,每Ig膠囊內(nèi)容物含生藥11. 25g ;公開 號(hào)為CN1435243A的專利制得的膠囊劑0. 4g/粒,每Ig膠囊內(nèi)容物含生藥11. 25g ;均由湖 南株洲千金藥業(yè)股份有限公司提供。實(shí)驗(yàn)室溫度20°C -25°C,相對(duì)濕度42% -76%。實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果一、對(duì)小白鼠凝血時(shí)間的影響小白鼠30只,隨機(jī)分為3組,每組10只。第一組為陰性對(duì)照組,給與等容積生理鹽 水;第二組為公開號(hào)為CN1435243A的專利制得的膠囊劑組,給與公開號(hào)為CN1435243A的專 利制得的膠囊劑0. 4g/kg ;第三組為本發(fā)明實(shí)施例1的膠囊劑組,給與本發(fā)明膠囊劑11. 25g 生藥/kg。各組皆灌胃給藥,0.2ml/10g,每天1次,連續(xù)3天。末次給藥60min后小鼠眼球 采血,用玻片法測(cè)定小鼠凝血時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表1。表1本發(fā)明膠囊對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響(X士S) 與陰性對(duì)照組比較,*P< 0.05由表1可見(jiàn),本發(fā)明膠囊劑可縮短小鼠凝血時(shí)間,與陰性對(duì)照組比較,有顯著性差 異(P < 0. 05),說(shuō)明本發(fā)明膠囊劑對(duì)小鼠有促凝血作用,且較第二組促凝血效果更優(yōu)。二、對(duì)小白鼠出血時(shí)間的影響小白鼠30只,隨機(jī)分為3組,每組10只。第一組為陰性對(duì)照組,給與等容積生理 鹽水第二組為公開號(hào)為CN1435243A的專利制得的膠囊劑組,給與公開號(hào)為CN1435243A的 專利制得的膠囊劑0. 4g/kg ;第三組為本發(fā)明實(shí)施例1的膠囊劑組,給本發(fā)明膠囊劑11. 25g 生藥/kg。各組皆灌胃給藥,0.2ml/10g,每天1次,連續(xù)3天。末次給藥60min后,距尾尖 1/3處剪斷鼠尾,測(cè)定出血時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表2。表2本發(fā)明膠囊對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響(X士S)
組別動(dòng)物數(shù)(只)劑量(B/kg)出血時(shí)間(min)第一組1022. 37±5. 03第二組100. 4019. 68±9. 58第三組1011. 2515. 74±3. 39**與陰性對(duì)照組比較,#P< 0.01由表2可見(jiàn),本發(fā)明膠囊可縮短小鼠出血時(shí)間,與陰性對(duì)照組比較,有顯著性差異 (P < 0.01)。說(shuō)明本發(fā)明膠囊可縮短小鼠出血時(shí)間,而第二組膠囊對(duì)小鼠出血時(shí)間無(wú)明顯影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)論本發(fā)明膠囊與公開號(hào)為CN1435243A的專利制得的膠囊劑相比較,可以縮短小鼠 的出血時(shí)間,具有凝血更快,藥效更確切等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)例2實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)室溫度20°C -25°C,相對(duì)濕度42% -76%。一、對(duì)家兔血小板聚集功能的影響家兔40只,隨機(jī)分為5組,每組8只。第一組為陰性對(duì)照組,給與等容積生理鹽水; 第二組為陽(yáng)性對(duì)照組,給宮血寧膠囊(云南白藥股份有限公司生產(chǎn))0. 15g/Kg;第三、四、五 組為本發(fā)明膠囊組,分別給與本發(fā)明實(shí)施例1的膠囊組2. Ig生藥/kg、4. 2g生藥/kg、8. 4g 生藥/kg。各組皆灌胃給藥,5ml/kg,每天1次,連續(xù)7天。末次給藥60min后耳緣靜脈采血,用裝有A溶液(由0.077mol/LEDTA 3ml、4%甲醛溶液5ml、濃磷酸鹽緩沖液2ml、蒸餾水 12ml組成)或B溶液(由0. 077mol/LEDTA 3ml、濃磷酸鹽緩沖液5ml、蒸餾水12ml組成) 的注射器分別采血0. 5ml,充分混勻,室溫靜置15min,150g離心8min,取上清血漿計(jì)數(shù)血小 板,按下式計(jì)算循環(huán)血小板聚集率,結(jié)果見(jiàn)表3。
A溶液中血小板數(shù)
循環(huán)血小板聚集率(%) =1--χ 100
B溶液中血小板數(shù)
表3本發(fā)明膠囊對(duì)家兔循環(huán)血小板聚集率的影響(X士s) 與陰性對(duì)照組比較,*P < 0. 05,**P < 0. 01由表3可見(jiàn),本發(fā)明膠囊可升高家兔循環(huán)血小板聚集率,與陰性對(duì)照組比較,大劑 量組有顯著性差異(P < 0. 05),說(shuō)明本發(fā)明膠囊可輕度促進(jìn)循環(huán)血小板聚集,陽(yáng)性對(duì)照藥 宮血寧膠囊亦可升高家兔循環(huán)血小板聚集率。二、對(duì)家兔纖溶系統(tǒng)功能的影響家兔40只,隨機(jī)分為5組,每組8只。第一組為陰性對(duì)照組,給與等容積生理鹽 水;第二組為陽(yáng)性對(duì)照組,給與宮血寧膠囊0. 15g/kg ;第三、四、五組為本發(fā)明膠囊組,分別 給本發(fā)明膠囊2. Ig生藥/kg、4. 2g生藥/kg、8. 4g生藥/kg。各組皆灌胃給藥,5ml/kg,每天 1次,連續(xù)7天。末次給藥60min后耳緣靜脈采血,3. 8%枸櫞酸鈉抗凝(1 9),3000rpm離 心IOmin分離血漿。取0. 5ml血漿,加蒸餾水9. 0ml,再加1 %醋酸0. ImI使pH達(dá)到4. 5,充 分混合后,置于4°C冰箱lOmin,再以3000rpm離心lOmin。棄去上清液,加硼酸緩沖液(pH =9)0. 5ml,用玻璃棒攪拌約Imin0然后37°C水浴,2min后加l/40mol/L CaCl2O. 5ml,待其 凝固,觀察凝塊完全溶解所需時(shí)問(wèn)(優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間,ELT),結(jié)果見(jiàn)表4表4本發(fā)明膠囊對(duì)家兔優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間的影響(X士S)
由表4可見(jiàn),本發(fā)明膠囊對(duì)家兔ELT有縮短趨勢(shì),但與陰性對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)顯 著性差異(P >0.05),說(shuō)明本發(fā)明膠囊對(duì)家兔ELT無(wú)明顯影響。陽(yáng)性對(duì)照組宮血寧膠囊對(duì) 家兔ELT亦無(wú)明顯影響。三、對(duì)家兔在體子宮收縮的影響家兔40只,隨機(jī)分為5組,每組8只。第一組為陰性對(duì)照組,給與等容積生理鹽水; 第二組為陽(yáng)性對(duì)照組,給與縮宮素注射液0. 8U/kg;第三、四、五組為本發(fā)明膠囊組,分別給 與本發(fā)明實(shí)施例1膠囊2. Ig生藥/kg、4. 2g生藥/kg.、8. 4g生藥/kg。各組家兔靜脈注射 戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉,仰臥固定,剪去腹部手術(shù)部位毛,消毒,于下腹部正中切開皮膚, 打開腹腔,找出子宮。在一側(cè)子宮角選取長(zhǎng)約3cm的一段,中點(diǎn)穿一絲線與肌張力換能器連 接。子宮的陰道端和卵巢端分別縫合固定在塑料杯底部?jī)蓚?cè)支點(diǎn)上。將腹壁圍繞塑料杯四 周縫合固定。塑料杯內(nèi)放置樂(lè)氏液,用手術(shù)燈照射保溫。子宮負(fù)荷lg。待子宮收縮穩(wěn)定后描 記子宮正常收縮曲線,然后除陽(yáng)性對(duì)照組肌肉注射縮宮素1次外,其余各組十二指腸給藥1 次,5ml/kg。觀察記錄給藥后3011^11、601^11、901^11、1201^11子宮收縮曲線,結(jié)果見(jiàn)表5-表8由表5可見(jiàn),本發(fā)明膠囊增強(qiáng)家兔在體子宮收縮力,具有劑量依賴關(guān)系,與陰性對(duì) 照組比較,中、大劑量組各個(gè)觀察時(shí)間均有顯著性差異(P <0.05或P <0.01)中、大劑量 組作用持續(xù)2小時(shí)以上。由表6可見(jiàn),本發(fā)明膠囊增強(qiáng)家兔在體子宮平均收縮力,具有劑量依賴關(guān)系,與陰 性對(duì)照組比較,大劑量組各個(gè)觀察時(shí)間均有顯著性差異(P < 0. 05或P < 0. 01);大劑量組 作用持續(xù)2小時(shí)以上。由表7可見(jiàn),本發(fā)明膠囊增強(qiáng)家兔在體子宮收縮頻率,具有劑量依賴關(guān)系,與陰性 對(duì)照組比較,中劑量組給藥后30min有顯著性差異(P < 0. 05),大劑量組給藥后30min和 60min均有顯著性差異(P < 0. 01)作用持續(xù)1小時(shí)左右。由表8可見(jiàn),本發(fā)明膠囊增強(qiáng)家兔在體子宮收縮張力,具有劑量依賴關(guān)系,與陰性 對(duì)照組比較,小劑量組給藥后60min有顯著性差異(P < 0. 01),中、大劑量組給藥后30min、 60min和90min均有顯著性差異(P < 0_05或P < 0. 01);作用持續(xù)90min左右。由此可見(jiàn),本發(fā)明膠囊可加強(qiáng)家兔子宮收縮力和收縮頻率。陽(yáng)性對(duì)照藥縮宮素注 射液亦可加強(qiáng)家兔子宮收縮力和收縮頻率。
與陰性對(duì)照組比較,*P<0.05. **P<0.01表7本發(fā)明膠囊對(duì)家免子宮收縮頻率的影響(Xis)
率,對(duì)家兔ELT有縮短趨勢(shì);增強(qiáng)家免在體子宮收縮力、平均收縮力、收縮頻率和子宮收縮 張力。結(jié)果說(shuō)明,本發(fā)明膠囊有促凝血作用和止血作用,輕度促進(jìn)循環(huán)血小板聚集,加強(qiáng)子 官收縮力和收縮頻率。實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明含量測(cè)定方法精密度試驗(yàn)取芍藥苷對(duì)照品2. 85mg,置5ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì) 照品溶液,按實(shí)施例3中“含量測(cè)定”方法測(cè)定5次,記錄峰面積積分值,結(jié)果見(jiàn)表9。表9、精密度試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明本發(fā)明含量測(cè)定方法精密度好。實(shí)驗(yàn)例4本發(fā)明含量測(cè)定方法穩(wěn)定性試驗(yàn)按實(shí)施例3中“含量測(cè)定”方法測(cè)定,對(duì)實(shí)施例12中制得的供試品溶液,分別在0、 4、8、16、24小時(shí)進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表10。表10、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明,在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)例5本發(fā)明含量測(cè)定方法重復(fù)性試驗(yàn)取實(shí)施例1中制得的膠囊,去膠囊殼,稱樣量分別為0. IOllg, 0. 0997g,0. 1062g, 0. 1073g,0. 1023g,照實(shí)施例12中供試品溶液制備方法制備供試品溶液5份,按實(shí)施例9中 “含量測(cè)定”方法測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表11。表11、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明本發(fā)明含量測(cè)定方法重復(fù)性好。實(shí)驗(yàn)例6本發(fā)明含量測(cè)定方法加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量為14. 58mg/粒的實(shí)施例1中制得的樣品5份,每份約50mg,分 別精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液(1. 77mg/ml) 1ml,按實(shí)施例9中“含量測(cè)定”方法測(cè)定,結(jié)果 見(jiàn)表12。表12、回收率測(cè)定結(jié)果 結(jié)果表明,本方法回收率較好。
權(quán)利要求
一種治療婦科功血疾病的中藥組合物,其特征在于,由如下重量份的原藥材組成赤芍900 1100份、益母草900 1100份、三七200 400份、仙鶴草900 1100份、地榆炭500 700份、蒲黃炭500 700份。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物,其特征在于,由如下重量份的原藥材組成赤芍 1000份、益母草1000份、三七300份、仙鶴草1000份、地榆炭600份、蒲黃炭600份。
3.如權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物,其特征在于,所述中藥組合物為膠囊劑、片劑、 顆粒劑、丸劑、軟膠囊劑。
4.權(quán)利要求1-3任一所述中藥組合物的制備方法,其特征在于,包括如下步驟(1)按重量份稱取赤芍、益母草、三七、仙鶴草、地榆炭、蒲黃炭,備用;(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉,加4-8倍量80%乙醇,回流提取1-3次,每次lh-3h,合并 提取液,濾過(guò),濾液減壓濃縮至60°C時(shí)相對(duì)密度1. 05-1. 10的清膏,離心,濃縮至60°C時(shí)相 對(duì)密度1. 15-1.20的稠膏,備用;(3)取益母草等其余四味,加水煎煮1-3次,每次加8-12倍量的水,煎煮0.5h-l. 5h, 合并水煎液,濾過(guò),濾液濃縮至60°C時(shí)相對(duì)密度為1. 15-1. 20的稠膏,加乙醇制成含醇量為 70%的溶液,靜置16h-32h,取上清液,并濃縮至60°C時(shí)相對(duì)密度1. 15-1. 20的稠膏,與步驟 (2)的浸膏合并,制成各種劑型。
5.權(quán)利要求1-3任一所述的中藥組合物的膠囊劑的質(zhì)量控制方法,其特征在于,該方 法包括鑒別和含量測(cè)定兩部分,其中鑒別包括采用薄層色譜法,分別用赤芍對(duì)照藥材、芍 藥苷對(duì)照品、三七對(duì)照藥材、仙鶴草對(duì)照藥材、益母草對(duì)照藥材和鹽酸水蘇堿對(duì)照品進(jìn)行 的鑒別;含量測(cè)定以含赤芍確定,以芍藥苷計(jì),不得少于12. Omg/粒,膠囊粒重為0. 35g/ 粒-0. 45g/粒。
6.如權(quán)利要求5所述的質(zhì)量控制方法,其特征在于,所述鑒別包括如下鑒別中的一種 或多種A、赤芍的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0.5g-l. 5g,加水12ml-38ml,超聲處理 15min-45min,濾過(guò),濾液加水飽和的正丁醇溶液提取1_5次,每次10ml-30ml,合并提取液, 加氨試液20ml-60ml洗滌,棄去洗液,蒸干,加lml_3ml甲醇溶解殘?jiān)?,作為供試品溶液;取赤芍?duì)照藥材lg_3g,加甲醇15ml-45ml,超聲處理0. 5h_l. 5h,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)?加水12ml-38ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提取制成對(duì)照藥材溶液;取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成濃度為lmg/ml-3mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液;吸取上述三種溶液各4μ1,以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸為 30-50 2-8 5-15 0. 1-0. 3的混合液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以5%香草醛 硫酸甲醇溶液,在95°C _115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和 對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);B、三七的鑒別以A的供試品溶液作為供試品溶液;取三七對(duì)照藥材0. 5g-l. 5g,加水5d-15d,攪勻,加水飽和的正丁醇溶液20ml-60ml,超 聲處理20min-60min,濾過(guò),濾液加氨試液20ml_60ml洗滌,棄去氨液,加入正丁醇的飽和水 溶液20ml-60ml洗滌,棄去正丁醇水溶液,蒸干,殘?jiān)蛹状糽ml_3ml溶解,作為對(duì)照藥材溶 液;取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl對(duì)照品,加甲醇制成各濃度均為0. 5mg/ml-l. 5mg/ml的混合溶液,作為對(duì)照品溶液;吸取上述三種溶液各2 μ 1,以在10°C以下放置過(guò)夜的三氯甲烷甲醇水為 10-16 4-10 1-3的混合液的下層溶液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以10%硫酸 乙醇溶液,在95°C _115°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照 品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);置365nm波長(zhǎng)的紫外光燈下檢視,顯相同顏色的 熒光斑點(diǎn);C、仙鶴草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0.5g-l. 5g,加0. 2 % -0. 8 %氫氧化鈉溶液 15ml-45ml,超聲處理10min-30min,濾過(guò),濾液加鹽酸調(diào)pH值至2_3,濾過(guò),濾液加乙酸乙酯 提取1-3次,每次10ml-30ml,合并提取液,蒸干,殘?jiān)蛹状糽ml_3ml溶解,作為供試品溶 液;取仙鶴草對(duì)照藥材4g-12g,加水25ml-75ml,煎煮0. 5h_l. 5h,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)?0.2% -0.8%氫氧化鈉溶液15ml-45ml,溫?zé)崾谷芙?,濾過(guò),濾液與供試品溶液同法提取制 成對(duì)照藥材溶液;吸取上述兩種溶液各15μ 1,以水飽和的甲苯乙酸乙酯甲酸為 4-8 2-4 0.5-1. 5的混合溶液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以0.5-1. 5%三氯化 鐵乙醇溶液顯色,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);D、益母草的鑒別取所述膠囊內(nèi)容物0.9g-1.5g,加乙醇22ml-38ml,加熱回流 0. 5h-l. 5h,放冷,濾過(guò),濾液濃縮至2. 5ml-7. 5ml,加于內(nèi)徑5mm-15mm、活性炭0. 3g_0. 7g、 100目-120目中性氧化鋁lg_3g的活性炭-氧化鋁柱上,用15ml-45ml乙醇洗脫,收集洗脫 液,蒸干,殘?jiān)?. 2ml-0. 8ml乙醇溶解,作為供試品溶液;取益母草對(duì)照藥材1. 5g-4. 5g,與供試品溶液同法制成對(duì)照藥材溶液;取鹽酸水蘇堿對(duì)照品,加乙醇制成濃度為2. 5mg/ml-7. 5m/mlg的溶液,作為對(duì)照品溶液;吸取上述三種溶液各10 μ 1,以正丁醇鹽酸水為3-5 0. 5-1. 5 0. 2-0. 8的混合 溶液為展開劑,進(jìn)行薄層色譜法試驗(yàn),噴以稀碘化鉍鉀試液顯色,供試品色譜中,在與對(duì)照 藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
7.如權(quán)利要求5所述的質(zhì)量控制方法,其特征在于所述含量測(cè)定包括以下步驟(1)精密稱取芍藥苷對(duì)照品IOmgJa50%甲醇制成濃度為0. lmg/ml的溶液,作為對(duì)照 品溶液;(2)取所述膠囊內(nèi)容物0.lg,精密稱定,置具塞的三角燒瓶中,精密加入50%甲醇 50ml,稱定重量,冷浸過(guò)夜后,超聲處理30分鐘(功率200W,頻率40KHz),再稱重,用50%甲 醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,0. 45 μ m微孔濾膜濾過(guò),濾液作為供試品溶液;(3)精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1,注入液相色譜儀,照高效液相色譜法 進(jìn)行測(cè)定,色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0. 05mol/L的磷酸二氫鉀溶 液甲醇為70 30的混合液為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm,理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低 于 2500。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療婦科功血疾病的中藥組合物,其由如下重量份的原藥材組成赤芍900-1100、益母草900-1100、三七200-400、仙鶴草900-1100、地榆炭500-700、蒲黃炭500-700。赤芍、三七用80%乙醇提取,益母草等其余四味用水提取,通過(guò)適當(dāng)?shù)墓に噥?lái)制備上述中藥組合物。本發(fā)明還涉及該中藥組合物膠囊劑的質(zhì)量控制方法,包括鑒別和含量測(cè)定兩部分,其中鑒別采用薄層色譜法,分別用赤芍對(duì)照藥材、芍藥苷對(duì)照品、三七對(duì)照藥材、仙鶴草對(duì)照藥材、益母草對(duì)照藥材和鹽酸水蘇堿對(duì)照品進(jìn)行鑒別;含量測(cè)定以含赤芍確定,以芍藥苷(C23H28O11)計(jì),不得少于12.0mg/粒。該中藥組合物具有止血速度快、效果好等優(yōu)點(diǎn),并且其膠囊劑的質(zhì)量控制方法不僅能夠簡(jiǎn)便、直觀地鑒定制劑,而且可以更好地保障該藥物的藥效。
文檔編號(hào)A61K36/88GK101919942SQ20091008710
公開日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2009年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月10日
發(fā)明者劉建武 申請(qǐng)人:株洲千金藥業(yè)股份有限公司