專(zhuān)利名稱：：藿香正氣制劑中紫蘇烯和紫蘇醛的鑒別方法和含量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中成藥中有效成分的鑒別方法和含量測(cè)定方法，具體來(lái)說(shuō)，是藿香正氣口服液中紫蘇烯和紫蘇醛的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：藿香正氣口服液為《中國(guó)藥典》2005年版一部收載的品種，是由傳統(tǒng)中藥藿香正氣水改進(jìn)而成的。它的制作方法是采用下列處方蒼術(shù)80g、陳皮80g、厚樸(姜制)80g、白芷120g、茯苓120g、大腹皮120g、生半夏80g、甘草浸膏10g、廣藿香油0.8ml和紫蘇葉油0.4mh制備方法是取厚樸加60%乙醇加熱回流1小時(shí)，取乙醇液備用；取蒼術(shù)、陳皮、白芷加水蒸熘，收集蒸餾液，蒸餾后的水溶液濾過(guò)，備用；取大腹皮加水煎煮二次，濾過(guò)；取茯苓加水煮沸后于8(TC溫浸二次，濾過(guò)；取生半夏用水泡至透心后，另加干姜6.8g，加水煎煮二次，濾過(guò)。合并上述各濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.101.20(50°C)，加入甘草浸膏，混勻，加入2倍量乙醇使沉淀，濾過(guò)，濾液與厚樸乙醇提取液合并，回收乙醇，加入廣藿香油、紫蘇葉油及上述蒸餾液，混勻，加水使全量成1025ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5.86.2，靜置，濾過(guò)，灌裝，滅菌，即得棕色的澄清液體；味辛、微甜。它的功能為解表化濕，理氣和中。主治外感風(fēng)寒、內(nèi)傷濕滯或夏傷暑濕所致的感冒，癥見(jiàn)頭痛昏重、胸膈痞悶、脘腹脹痛、嘔吐泄瀉；胃腸型感冒見(jiàn)上述證候者?？诜?，一次510ml，一日2次。目前藿香正氣口服液的質(zhì)量控制方法是(1)取本品20ml，用石油醚G06(TC)振搖提取2次，每次25ml，合并石油醚提取液，低溫蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml溶解，作為供試品溶液。另取百秋李醇對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液；再取厚樸酚對(duì)照品、和厚樸酚對(duì)照品，分別加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10u1、對(duì)照品溶液各5u1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-乙酸乙酯-甲酸(85:15:2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與百秋李醇對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)；在與厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(2)取本品20ml，加乙醚20ml，振搖提取，分取乙醚層，揮至約2ml，作為供試品溶液。另取歐前胡素對(duì)照品，加乙醚制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(4:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取蒼術(shù)對(duì)照藥材lg,加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取(2)項(xiàng)下供試品溶液及上述對(duì)照藥材溶液各10lU，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)-乙酸乙酯(19:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的一個(gè)污綠色主斑點(diǎn)。1、厚樸與廣藿香油的薄層鑒別取藿香正氣口服液20ml，用石油醚(3(TC6(TC)振搖提取2次，每次25ml，合并石油醚提取液，低溫蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺厚樸及廣藿香油陰性樣品，同法制成缺厚樸、缺廣藿香油陰性樣品溶液。再取百秋李醇對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每M含lmg的溶液，取厚樸酚對(duì)照品、和厚樸酚對(duì)照品加甲醇制成每lml含lmg的溶液作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液10ul，缺厚樸、缺廣藿香油陰性樣品溶液10"1，百秋李醇對(duì)照品溶液，厚樸酚對(duì)照品、和厚樸酚對(duì)照品溶液分別點(diǎn)于三張以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(60"C9(TC)-乙酸乙酯-甲酸(85:15:2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同顏色的對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)，缺厚樸、缺廣藿香油陰性樣品在相應(yīng)位置無(wú)干擾。經(jīng)多批樣品鑒別實(shí)驗(yàn)表明，該方法可靠，重現(xiàn)性好。2、白芷的薄層鑒別取藿香正氣口服液20ml，加乙醚振搖提取分収乙醚層，揮至約2mi，作為供試品溶液。另取缺白芷陰性樣品，同法制成缺白芷陰性樣品溶液。再取歐前胡素對(duì)照品，加乙醚制成lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。，吸取上述三種溶液各10ul，分別點(diǎn)于兩張以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(4:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)，缺白芷陰性樣品無(wú)干擾。經(jīng)多批樣品鑒別實(shí)驗(yàn)表明，該方法可靠，重現(xiàn)性好。93、蒼術(shù)的薄層鑒別取缺蒼術(shù)陰性樣品20ml，加乙醚振搖提取分取乙醚層，揮至約2ml，作為缺蒼術(shù)陰性溶液。取蒼術(shù)對(duì)照藥材lg，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液，吸取上述兩種溶液及(2)項(xiàng)下溶液各10til，分別點(diǎn)于兩張以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(6(TC9(TC)-乙酸乙酯(19:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾千，噴以5%對(duì)二氨基苯甲醛的溶液10%硫酸乙醇溶液,加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同顏色的污綠色斑點(diǎn)，缺蒼術(shù)陰性樣品在相應(yīng)位置無(wú)干擾。經(jīng)多批樣品鑒別實(shí)驗(yàn)表明，該方法可靠，重現(xiàn)性好。紫蘇葉油是藿香正氣口服液中主要成分之一，具有解表散寒，行氣和胃的功效。它是唇形科植物紫蘇尸en'〃fl/rw/^ce/w(L.)Britt.的干燥葉(或帶嫩枝葉)經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的揮發(fā)油。它含有紫蘇烯(Pcrillenc)化學(xué)結(jié)構(gòu)式為分子式為C1()H140;分子量為150.08。紫蘇醛(Perillaldehyde)化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:分子式為C,。H,40;分子量為149.99。紫蘇葉油為淺黃色或黃色的澄清液體，有紫蘇的特異香氣，味微辛辣。露置空氣中或貯存日久，色漸變深，質(zhì)漸濃稠。在乙醇、乙醚或石油醚中易溶，在水中幾乎不溶。而過(guò)去藿香正氣口服液的質(zhì)量控制方法中僅有廣藿香汕、白芷、厚樸三種藥材質(zhì)量控制方法，還不能完整反映出藿香正氣口服液的質(zhì)量，不能有效鑒別藿香正氣口服液中的一味主要藥味紫蘇葉汕。本發(fā)明就是為了克服上述缺陷，建立一種反映藿香正氣口服液中紫蘇葉油的鑒別及含量測(cè)定方法。本發(fā)明的目的就是提供一種藿香正氣口服液中紫蘇葉油的檢測(cè)方法。紫蘇葉油是藿香正氣口服液中主要成分之一，具有解表散寒，行氣和胃的功效。它是唇形科植物紫蘇尸en7/a/r她scem(L.)Britt.的干燥葉(或帶嫩枝葉)經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的揮發(fā)油。它含有紫蘇醛、紫蘇烯、檸檬烯、石竹烯等主要成分，經(jīng)篩選檸檬烯、石竹烯非紫蘇特征成分，紫蘇葉汕中最大組分為紫蘇醛、紫蘇烯，同時(shí)也是主要藥效成分。我們通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)促進(jìn)小鼠腸蠕動(dòng)來(lái)說(shuō)，重慶產(chǎn)紫蘇葉油(樣品n)效果明顯優(yōu)于普通紫蘇葉油；使用重慶產(chǎn)紫蘇葉油生產(chǎn)的太極藿香正氣口服液明顯優(yōu)于使用普通紫蘇葉油生產(chǎn)的市售藿香正氣口服液。其中重慶產(chǎn)紫蘇葉油與普通紫蘇葉油的最大差異就在于重慶紫蘇葉油中含有紫蘇烯而普通紫蘇葉油中幾乎不含紫蘇烯；而紫蘇烯具有促進(jìn)小腸蠕動(dòng)的作用。因此，我們?cè)黾幼咸K烯和紫蘇醛作為藿香正氣制劑如口服液、膠囊、酊劑、滴丸的新的質(zhì)量指標(biāo)。用紫蘇烯和紫蘇醛作為藿香正氣制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)的用途，其中藿香正氣制劑為藿香正氣口服液、藿香正氣酊劑、藿香正氣液體膠囊、藿香正氣軟膠囊、藿香正氣滴丸、藿香正氣膠囊、藿香正氣顆粒、藿香正氣片、藿香正氣丸或藿香正氣合劑。藿香正氣制劑優(yōu)選為藿香正氣口服液、藿香正氣液體膠囊或藿香正氣酊劑。同時(shí)我們研究了藿香正氣制劑如藿香正氣口服液中紫蘇烯和紫蘇醛的鑒別方法和含量測(cè)定方法。藿香正氣制劑中紫蘇醛和紫蘇烯的鑒別方法如下(1)采用氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)；(2)樣品的前處理使用固相萃取小柱進(jìn)行成分富集，具體為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相萃取小柱，依次用甲醇、1:IO的甲醇-水以及水沖洗柱，待用；精密量取供試品1525ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾，再用丙酮洗脫，用2nil量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得；(3)對(duì)照品溶液的制備12另取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯0.lmg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為二苯基-二甲基聚硅氧烷、苯基-甲基聚硅氧垸、腈丙苯基-二甲基硅氧垸、腈丙甲基-苯甲基聚硅氧烷或聚乙二醇；程序升溫初始溫度5080。C，保持115分鐘，以每分鐘310。C的速率升溫至10016(TC，保持14分鐘，再以每分鐘104(TC的速率升溫至200270°C，保持110分鐘；檢測(cè)器溫度250300°C，氣化溫度240270°C;分流比(1050):1;檢測(cè)器為氫火焰檢測(cè)器或質(zhì)荷比范圍為101000的質(zhì)譜檢測(cè)器；(5)分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各注入氣相色譜儀，測(cè)定，并將供試品色譜與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰進(jìn)行對(duì)照加以鑒別供試品中是否含有紫蘇烯和紫蘇醛。如果藿香正氣制劑為藿香正氣口服液，其中紫蘇烯和紫蘇醛的鑒別方法，步驟為(1)色譜條件采用50%苯基-50%甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)柱，初始溫度60°C，保持i分鐘，以每分鐘4。C的速率升溫至150°C，保持1分鐘，再以每分鐘15。C的速率升溫至25(TC，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度25(TC，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度250。C;分流比20:1;載氣N2，19rnl/分鐘；H2:30m1/分鐘；空氣350ml/分鐘；進(jìn)樣量Utl;(2)供試品溶液的制備取以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相填充物萃取小柱，依次用i0ml甲醇、3ml的1:10甲醇-水與6ml水沖洗柱，待用；精密量取供試品15ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾，再用丙酮洗脫，用2ml量瓶集洗脫液至刻度，搖勻，即得；(3)對(duì)照品溶液的制備另取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯0.lmg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)鑒別法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1W，注入氣相色譜儀，測(cè)定；并將供試品色譜與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰進(jìn)行對(duì)照，以鑒別供試品中是否含有紫蘇烯和紫蘇醛。優(yōu)選，藿香正氣口服液中紫蘇烯和紫蘇醛的鑒別方法，步驟為色譜條件采用50%苯基-50%甲基聚硅氧垸彈性石英毛細(xì)柱DM-17(30mX0.25睡X0.25Wn)，初始溫度60°C，保持1分鐘，以每分鐘4。C的速率升溫至15(TC，保持1分鐘，再以每分鐘15"的速率升溫至25(TC，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度250°C，F(xiàn)工D檢測(cè)器溫度250°C;分流比20:1;載氣N2，19ml/分鐘；H2:30ml/分鐘；Air:350ml/分鐘；進(jìn)樣量1W。(2)供試品溶液的制備取以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑的固相萃取小柱(填充物500mg，容積3ml)，依次用10ml甲醇、3ml甲醇-水(1:10)與6ml水沖洗柱，待用。精密量取供試品15ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通14過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用3ml水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾3分鐘，再用丙酮洗脫，用2ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。(3)對(duì)照品溶液的制備另取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯0.lmg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。(4)鑒別法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1W，注入氣相色譜儀，測(cè)定；供試品色譜中應(yīng)呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。一種藿香正氣制劑中紫蘇醛和紫蘇烯的測(cè)定方法，采用氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定；(1)樣品的前處理使用固相萃取小柱進(jìn)行成分富集，具體為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相萃取小柱，依次用甲醇、1:10的甲醇-水以及水沖洗柱，待用；精密量取供試品1525ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾，再用丙酮洗脫，用2ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得；(2)對(duì)照品溶液的制備另取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯.lmg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；(3)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為二苯基-二甲基聚硅氧烷、苯基-甲基聚硅氧烷、腈丙苯基-二甲基硅氧烷、腈丙甲基-苯甲基聚硅氧烷、聚乙二醇；程序升溫初始溫度508(TC，保持115分鐘，以每分釗'310。C的速率升溫至100160°C，保持14分鐘，再以每分鐘104(TC的速率升溫至200270。C，保持110分鐘；檢測(cè)器溫度250300°C，氣化溫度240270°C;分流比(1050):1;檢測(cè)器為氫火焰檢測(cè)器或質(zhì)荷比范圍為101000的質(zhì)譜檢測(cè)器；(4)分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1W，注入氣相色譜儀，測(cè)定，并分別計(jì)算供試品色譜圖中與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰面積，得到供試品中紫蘇烯和紫蘇醛的含量。藿香正氣口服液中紫蘇烯和紫蘇醛的測(cè)定方法，步驟為(1)色譜條件采用50%苯基-50%甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)柱，初始溫度60。C，保持l分鐘，以每分鐘4"C的速率升溫至15(TC，保持1分鐘，再以每分鐘15。C的速率升溫至25(TC，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度25(TC，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度250。C;分流比20:1;載氣N2，19ml/分鐘;H2:30m1/分鐘；空氣350ml/分鐘；進(jìn)樣量1W;(2)供試品溶液的制備取以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相填充物萃取小柱，依次用10ml甲醇、3ml的1:10甲醇-水與6rnl水沖洗柱，待用；精密量取供試品15ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾，再用丙酮洗脫，用2ml量瓶集洗脫液至刻度，搖勻，即得；(3)對(duì)照品溶液的制備另取紫蘇烯、紫蘇醒對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯0.lmg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1W，注入氣相色譜儀，測(cè)定；并分別計(jì)算供試品色譜圖中與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰面積，得到供試品中紫蘇烯和紫蘇醛的含量。本品紫蘇烯(C10H140)不得少于15mg/ml;含紫蘇醛(C1UH140)不得少于25mg7ml。以下具體詳細(xì)陳述指標(biāo)確定實(shí)驗(yàn)和測(cè)定方法開(kāi)發(fā)過(guò)程。實(shí)驗(yàn)例l(1)樣品I:普通紫蘇葉油(紫蘇醛含量40%)0.4。/。溶液(100ml含紫蘇葉油0.4ml，1%CMC-Na乳化稀釋)。(2)樣品II:重慶產(chǎn)紫蘇葉油(紫蘇醛紫蘇烯=25%:15%)0.4%溶液(100tn丄含紫蘇葉油0.4ml，應(yīng)C-Na乳化稀釋)。(3)樣品III:組合物(紫蘇醛紫蘇烯=25%:15%，用90%提取物1%CMC-Na稀釋)0.4%溶液(100ml含組合物0.4ml，1%CMC-Na乳化稀釋)，(4)樣品IV:組合物(紫蘇醛紫蘇烯=15%:25%，用90%提取物1%CMC-Na稀釋)0.4%溶液(100ml含組合物0.4ml，1%CMC-Na乳化稀釋)樣品IIV由太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司提供。(5)對(duì)照品I:藿香正氣液(批號(hào)09060754，太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司生產(chǎn))。(6)對(duì)照品II:藿香正氣液(批號(hào):0807024，北京亞?wèn)|生物制藥有限公司生產(chǎn))。2.印度墨汁，BDH公司，批號(hào)495860011。臨用時(shí)取墨汁，超聲振蕩至勻。二、試驗(yàn)動(dòng)物健康昆明種小白鼠，雌雄兼用，體重1824g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。三、試驗(yàn)方法與結(jié)果取昆明種小鼠70只，雌雄各半，隨機(jī)分為7個(gè)組，每組10只，即樣品iiv組、對(duì)照品in組、空白組。樣品i、n、ni、iv組與對(duì)照品in組灌胃給藥劑量相當(dāng)于成人劑量的30倍，空白組給予等量的生理鹽水。試驗(yàn)前l(fā)d禁食不禁水，24h后分別灌胃給予各組小鼠含200mL/L墨汁的生理鹽水、樣品iiv和對(duì)照品in的混懸液(樣品和對(duì)照品用1%CMC-Na乳化稀釋?zhuān)⒓尤肽?，臨用時(shí)超聲混勻)，20min后拉頸處死，立即剖取全部小腸，將其自然擺直，不加牽引地平鋪于濕潤(rùn)的玻璃板上，測(cè)量墨汁頭端在腸管內(nèi)移動(dòng)的距離及小腸全長(zhǎng)(從幽門(mén)至回盲部)，計(jì)算墨汁推進(jìn)率，結(jié)果見(jiàn)表l。_表l.對(duì)小鼠腸蠕動(dòng)的影響f±a3,"=10)_^小腸長(zhǎng)度墨汁推進(jìn)距離推進(jìn)率~~劃___(%)樣品I30.85±3.7815.33±3.6613.76P=0.916樣品n樣品in樣品iv對(duì)照品i對(duì)照品n空白組38.17±2.9232.33±3.3033.35±4.7330.85±4.1429.40±5.2234.60±3.2823.20±5.2719.92±3.8520.30±4.0120.31±3.2115.81±4.4617.09±4.2863.76±10.01P=0.01762.02±12.24P=0.04862.03±7.92P=0.04066.21±9.68P=0.004653.54±9.69P=0.46449.73±12.86注各用藥組推進(jìn)率與生理鹽水組比較，t檢驗(yàn)。表1顯示，樣品IIIV組和對(duì)照品I組對(duì)小鼠墨汁推進(jìn)率與空白組(生理鹽水)比較有顯著性提高(p〈o.o5);樣品i和對(duì)照品n與空白組比較無(wú)顯著性提高(P〉0.05)。各組間的對(duì)比情況見(jiàn)表2、3:表2.對(duì)小鼠腸蠕動(dòng)的影響f±=1G組別小腸長(zhǎng)度(cni)墨汁推進(jìn)距離(cm)推進(jìn)率(%)樣品I30.85±3.7815.33±3.6650.38±13.7663.76±樣品ll38.17±2.9223.20±5.2710.01P=0.02862.02±樣品m32.33±3爭(zhēng)3019.92±3.8512.241)=0.049樣品1V33.35±4.7320.30±4.0162.()3±7.92P=0.032注特〖品I組推進(jìn)率與樣品IIIV組比較，t檢驗(yàn)。表2顯示，樣品n、m、iv組對(duì)小鼠墨汁推進(jìn)率與樣品i組比較有顯著性提高(P〈0.05)。表3.對(duì)小鼠腸蠕動(dòng)的影響f±幼,"=10)19<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注:對(duì)照品i組推進(jìn)率與對(duì)照品n組比較，t檢驗(yàn)。表3顯示，對(duì)照品I對(duì)小鼠墨汁推進(jìn)率與對(duì)照品11組比較有極顯著性提高(P<0.01)。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)顯示，重慶產(chǎn)紫蘇葉油(樣品n)、紫蘇醛和紫蘇烯組合物(樣品m、IV)及藿香正氣液(批號(hào)09060754，太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司生產(chǎn))對(duì)小鼠小腸蠕動(dòng)(墨汁推進(jìn)率)有明顯的促進(jìn)作用(P〈0.05);普通紫蘇葉油(樣品I)和藿香正氣液(批號(hào)0807024，北京亞?wèn)|生物制藥有限公司生產(chǎn))對(duì)小鼠小腸蠕動(dòng)(墨汁推進(jìn)率)無(wú)明顯的促進(jìn)作用(P〉0.05)。對(duì)促進(jìn)小鼠腸蠕動(dòng)，重慶產(chǎn)紫蘇葉油(樣品n)、紫蘇醛和紫蘇烯組合物(樣品lll、IV)效果明顯優(yōu)于普通紫蘇葉油；使用自產(chǎn)紫蘇葉油生產(chǎn)的太極藿香正氣口服液明顯優(yōu)于使用普通紫蘇葉汕生產(chǎn)的市售藿香正氣口服液。實(shí)驗(yàn)例21、儀器與試藥儀器Agilent6890GC系列氣相色譜儀包括柱溫箱，自動(dòng)進(jìn)樣器，F(xiàn)ID檢測(cè)器。隔膜真空泵(抽氣速度20ml/min;功率160W;天津津騰儀器制造有限公司)。ProElut'、'U固相萃取柱(填充物500mg，容積3ml，D1KMA公司)。所用試劑均為分析純，水為重蒸餾水；紫蘇醛、紫蘇烯對(duì)照品自制。2、色譜條件的選擇根據(jù)揮發(fā)油的多組分和沸點(diǎn)不一樣的特性，我們采用毛細(xì)柱程序升溫條件對(duì)其進(jìn)行分離。參照文獻(xiàn)[2][3][4][5]初步擬定色譜條件為初始溫度70°C，保持1分鐘，以每分鐘4t:的速率升溫至150°C，保持1分鐘，再以每分鐘15"C的速率升溫至25(TC，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度25(TC，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度250°C;分流比20:1;載氣N2，19ml/min;H2:30ml/min;Air:350ml/min;進(jìn)樣量1W。1)、色譜柱的選擇在以上色譜條件不變，我們分別采用Agilent公司的5%苯基-95%二甲基聚硅氧垸彈性石英毛細(xì)柱朋-5(30mX0.25隱X0.2'5剛)與Dikma公司的50%苯基-50%甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)柱DM-17(30mX0.25,X0.25陶)色譜柱進(jìn)行樣品分析，其對(duì)色譜分離效果的影響見(jiàn)表1。表1不同色譜柱對(duì)分離效果的影響色譜柱分離度拖尾因子理論板數(shù)(以紫紫蘇烯紫蘇醛紫蘇烯紫蘇醛蘇醛峰計(jì))X0.32隱X30014030080.25Wn)，，一XO'^nX13.67014524850.25!im)_注分離度分別以紫蘇烯、紫蘇醛和它相鄰的后一個(gè)峰計(jì)算。從表1可以看出，采用50%苯基-50%甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)柱DM-17(30mXO.25mmXO.25Wn)分析藿香正氣口服液中紫蘇烯、紫蘇醛成分，分離效果好，對(duì)稱性好，理論板數(shù)高。2)、柱溫的選擇采用50%苯基-50%甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)柱DM-17(30raX0.25mmX0.25陶)，其他色譜條件不變，改變程序升溫初始溫度，對(duì)色譜分離效果的影響見(jiàn)表2。表2升溫方式對(duì)分離效果的影響—丁B曰t寸分離度拖尾因子理論板數(shù)(以紫蘇烯紫蘇醛紫蘇烯紫蘇醛紫蘇醛峰計(jì))3.440.971.125438133.670.941.104524853.760.931.07334652注分離度分別以紫蘇烯、紫蘇醛和它相鄰的后一個(gè)峰計(jì)算。從表2可以看出，采用程序升溫初始溫度為6(TC分析藿香正氣口服液中紫蘇烯峰分離度好。綜合分離度、拖尾因子及理論板數(shù)等指標(biāo)，我們擬訂色譜條件為采用50%苯基-50%甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)柱DM-17(30mX0.25mmX0.25陶)，初始溫度6(TC，保持1分鐘，以每分鐘4。C的速率升溫至15(TC，保持1分鐘，再以每分鐘15。C的速率升溫至25(TC，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度250。C，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度25(TC;分流比20:1;載氣N2，19ml/分鐘；H2:30nil/分釗'；Air:350ml/分鐘；進(jìn)樣量1(4。3、供試品溶液的制備根據(jù)藿香正氣口服液樣品中揮發(fā)油成分量少、易揮發(fā)的特性，我們參考文獻(xiàn)WH"采用固相萃取技術(shù)進(jìn)行樣品前處理。由紫蘇烯、紫蘇醛的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)可知，屬非極性-弱極性化合物，為此采用反相固定相。我們按固相萃取柱系統(tǒng)適用性試驗(yàn)下分別考察了常用固相萃取柱C18，C8。60°C(lmin)—150°C(lmin)-'250。C(3tnin)70°C(丄min)—150°C(linin)—250°C(3min)80°C(lmin)—150°C(lmin)—250。C(3min)結(jié)果表明C18回收率高(見(jiàn)表3)。因此以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相萃取柱進(jìn)行樣品前處理。表3固相萃取柱考察固相萃取柱分類(lèi)C18C8紫蘇烯回收率(％)98.2396.18紮蘇醛回收率(％)98.1497.451)、萃取柱活化取d8固相萃取小柱(填充物500mg，容積3ml)，依次用10ml甲醇、3ml甲醇-水(1:10)與6ml水沖洗柱，待用。2)、上樣精密吸取藿香正氣口服液樣品適量置于SPE柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)SPE柱(上樣量選擇見(jiàn)表6)。3)、淋洗因藿香正氣口服液樣品為水樣，為此采用水淋洗至流出液無(wú)色，我們分別用2ml、3ml、4ml水淋洗，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)利用3ml水淋洗即可，再利用真空抽干小柱中殘留溶劑。4)、洗脫取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇溶解后滴加吐溫80(2滴)制成每lml中含6.0mg的紫蘇烯與12.0mg的紫蘇醛對(duì)照品溶液，搖勻；再精密吸取lml于10ml量瓶中，加熱水稀釋?zhuān)鋮s，定容，搖勻；再精密吸取0.5ml，置處理后的固相蘋(píng)取柱上，使其重力通過(guò)SPE柱，采用不同洗脫劑洗脫并收集，分別計(jì)算紫蘇烯、紫蘇醛回收率。(洗脫劑選擇見(jiàn)表4，'洗脫齊lU毛量選擇見(jiàn)表5)。表4洗脫劑選擇洗脫劑甲醇丙酮二氯甲烷紫蘇烯回收率(％)89.2398.1598.11紫蘇醛回收率(％)88.4998.2498.28由表3可以看出，當(dāng)洗脫劑用量3ml時(shí)，采用丙酮及二氯甲烷洗脫收集，紫蘇烯、紫蘇i醛回收率較高，但因二氯甲垸在反相固定相中溶劑23強(qiáng)度較丙酮強(qiáng)，易將藿香正氣口服液中其他強(qiáng)保留物質(zhì)洗脫出來(lái)，故只采用丙酮作為洗脫劑。表5丙酮洗脫劑用量選擇洗脫劑用量2ml3ml4ml紫蘇烯回收率(％)紫蘇醛回收率(％)95.4198.4694.6398.7998.5298.67由表4可以看出，當(dāng)采用3ml及4ml丙酮洗脫收集，紫蘇烯、紫蘇醛回收率無(wú)顯著差異，但因用4ml丙酮洗脫收集，分析所得紫蘇烯、紫蘇醛峰面積較小，故采用3ml丙酮量洗脫。表6樣品上樣量選擇的考察樣品上樣量15ml20ml25ml紫蘇烯含量(mg/ml)紫蘇醛含量(mg/ml)0.0120.0120.0270.0280.0120.028以上不同上樣量經(jīng)3ml丙酮洗脫樣品，紫蘇烯、紫蘇醛含量無(wú)顯著差異，參考前處理樣品所需時(shí)間及分析樣品所得峰面積的大小，選擇15ml上樣量較好。真空條件下千燥3分鐘，是為了除去多余的水，有助于樣品的定容。綜上所述，供試品溶液的制備取以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相萃取小柱(填充物500mg，容積3ml)，依次用10ml甲醇、3ml甲醇-水(1:10)與6ml水沖洗柱，待用。精密量取供試品15ml，加于上述Slf柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)SPE柱，待溶劑滴盡后，用3ml水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾3分鐘，用2ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。4、方法學(xué)考察1)、色譜條件Agilent6890GC系列氣相色譜儀包括柱溫箱，自動(dòng)進(jìn)樣器，F(xiàn)ID.檢測(cè)器。DM-17(30mX0.25rnmX0.25to)，初始溫度60。C，保持1分鐘，以每分鐘4。C的速率升溫至150。C，保持1分鐘，再以每分鐘15。C的速率升溫至25(TC，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度25(TC，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度250。C;分流比20:1;載氣N2，19ml/min;H2:30ml/min;Air:350ml/min;進(jìn)樣量1W。2)、對(duì)照品溶液的制備取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯O.lmg、紫蘇醛0.2mg的混合溶液，搖勻，即得。3)、供試品溶液的制備取以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相萃取小柱(填充500mg，容積3ml)，依次用10ml甲醇、3ml甲醇-水(1:10)與6ml水沖洗柱，待用。精密量取供試品20ml，加于上述SPE柱儲(chǔ)樣器中，待溶劑滴盡后，用3ml水沖洗，真空條件下干燥3分鐘，再用丙酮洗脫，用3ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。4)、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)(1)、固相萃取柱系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物；以供試品溶液的制備中相同的處理?xiàng)l件和洗脫條件試驗(yàn)。為了與藿香正氣口服液樣品溶液保持一致，特在對(duì)照品溶液中滴加增溶劑吐溫80;取紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇溶解后滴加吐溫80(2滴)制成每lml中含12.0mg的紫蘇醛對(duì)照品溶液，搖勻；再精密吸取lml于10ml量瓶中，加熱水稀釋?zhuān)鋮s，定容，搖勻；再精密吸収0.5ml，置處理后的固相萃取柱上，以供試品溶液的制備方法處理，用3ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻。分別精密量取該洗脫液與每lml含紫蘇醛0.2mg的對(duì)照品溶液各mi，分別注入氣相色譜儀，平行測(cè)定5份，記錄色譜圖。洗脫液與對(duì)照品溶液色譜圖中紫蘇醛峰面積的比值在O.97L03之間(見(jiàn)表7)。表7紫蘇醛峰面積的比值結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>(2)、色譜條件系統(tǒng)適用性試驗(yàn)依法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液；另取缺紫蘇葉油藿香正氣口服液的陰性樣品，按供試品溶液制備的方法制備陰性供試品溶液。照擬定色譜條件分別進(jìn)樣分析，結(jié)果表明在此色譜條件下陰性樣品無(wú)干擾，色譜圖見(jiàn)附圖八。5)、線性關(guān)系考察(1)、紫蘇烯線性關(guān)系考察精密稱取紫蘇烯對(duì)照品0.01243g，置25ml量瓶中，加無(wú)水乙醇配制成濃度為0.4974mg/rnl的對(duì)照品溶液。再分別精密吸取0.5、1.0、3.0、5.0、10.0ml于10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。照擬定色譜條件，分別進(jìn)樣bl測(cè)定峰面積。結(jié)果見(jiàn)表8。表8紫蘇烯線性測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>以進(jìn)樣量X(Pg)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖l)。按照最小二乘法原理進(jìn)行回歸，紫蘇烯在0.024870.497扭g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=748.09X+2.44(r:O.99984)。稱取紫蘇醛對(duì)照品0.07470g，置100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇配制成濃度為0.7470mg/ml的對(duì)照品溶液。再分別精密吸取l.O、3.0、5.0、10.0、15.0、20.0ml于25ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。照擬定色譜條件，分別進(jìn)樣l"l測(cè)定峰面積。結(jié)果見(jiàn)表9。表9紫蘇醛線性測(cè)定結(jié)果進(jìn)樣量(卜lg)0.029880.089640.14940.29880.44820.5976平均峰面積24.5069.30114.8226.5338.7451.0以進(jìn)樣量X(4g)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖2)。按照最小二乘法原理進(jìn)行回歸，紫蘇醛在0.029880.5976Pg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=752.65X+1.48(r=0.99999)。6)、精密度試驗(yàn)取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯0.462mg、含紫蘇醛0.422mg的混合溶液，照擬定色譜條件，取lul注入氣相色譜儀，連續(xù)測(cè)定5次，其紫蘇烯峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.42%;紫蘇醛峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.57%。結(jié)果表明，精密度良好，見(jiàn)表10。表10精密度試驗(yàn)結(jié)果測(cè)定次數(shù)12345紫蘇烯峰而積355.65353.92352.82352.36351.94紫蘇醛峰面積308.56307.03305.28304.33304.967)、重復(fù)性試驗(yàn)精密吸取藿香正氣口服液20ral(批號(hào)88080001)各5份，按供試品溶液的制備方法處理，照擬定色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表ll。表11重復(fù)性試驗(yàn)樣品號(hào)12345紫蘇烯含量(mg/ml)紫蘇醛含量(mg/ml)0.0120.0270,0120.0270.0120.0260.0110.0260,0120.0265份的平均值紫蘇烯含量為0.012mg/ml，RSD二3.79%;紫蘇醛含量0.026mg/ml，RSD=2.07%。結(jié)果表明，重復(fù)性良好。8)、穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取藿香正氣口服液20ml(批號(hào)88080001)按供試品溶液的制備方法處理，照擬定色譜條件，每隔2小時(shí)測(cè)定一次，各進(jìn)樣l"l，共測(cè)定5次，其中藿香正氣口服液中紫蘇烯峰面積的平均值為56.60，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41%;紫蘇醛峰面積的平均值為175.83，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.52%。結(jié)果表明，藿香正氣口服液中紫蘇烯、紫蘇醛的含量測(cè)定，在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，見(jiàn)表12。表12穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果測(cè)定時(shí)間(h)02468紫蘇烯的峰面積56.4256.9256.5556.3656.74紫蘇醛的峰面積174.98176.90174.79176.06176.409)、加樣回收試驗(yàn)精密吸取藿香正氣口服液(批號(hào)88080001，紫蘇烯含量為0.012mg/ml，紫蘇醛含量為0.027mg/ml)15ml，共六份，分別置SPE柱儲(chǔ)樣器中，依次精密加入每lml含紫蘇烯0.3980mg、含紫蘇醛0.8157mg的混合溶液0.5ml，按供試品溶液的制備方法處理，照擬定色測(cè)得量-樣品量回收率=x100%加入量表13藿香正氣口服液加紫蘇烯對(duì)照品的回收試驗(yàn)結(jié)果樣品樣品中紫蘇烯的量紫蘇烯加入量紫蘇烯測(cè)得量回收率編號(hào)(%)10.06000.06630.125098.0420.06000.06630.125398.4930.06000.06630.125799.1040.06000.06630.125698.9450.06000.06630.125298.3460.06000.06630.125799.10以上六'份的紫蘇烯平均回收率為98.7%，RSD為0.45%。表14藿香正氣口服液加紫蘇醛對(duì)照品的回收試驗(yàn)結(jié)果—J"丫l二'樣品中紫蘇醛的量紫蘇醛加入量紫蘇醛測(cè)得量回收率編號(hào)(yg)(yg)"g)(%)10,13500.畫(huà)0.2716100.4420.13500.13600.269999.1930.13500.13600.2750102.9440.13500.1360.0.270799.7850.13500.13600.270499.5660.13500.13600.2720100.74以上六份的紫蘇醛平均回收率為100.4%，RSD為1.34%。由以上實(shí)驗(yàn)可知，本法可準(zhǔn)確測(cè)定樣品中紫蘇烯、紫蘇醛含量，如實(shí)反應(yīng)處方投料，工藝的穩(wěn)定性等，其分離度好、靈敏度高，回收率也很好，因而可以作為控制藿香正氣口服液質(zhì)量的一個(gè)可靠方法。5、樣品的測(cè)定。十批大生產(chǎn)藿香正氣口服液中紫蘇醛、紫蘇烯含量測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表15。表15十批樣品中紫蘇烯、紫蘇醛的含量測(cè)定結(jié)果批號(hào)成品紫蘇烯含量(mg/ml)紫蘇醛含量(mg/ml)880800040.0210.029880800050.0200.027880800060.0180.027880800070.0210.031880800080.0190.025880800090.0230.030880800100.0170.030880800H0.0220.029880800120.0210.033880800130.0220.032本發(fā)明所引用的以下參考文獻(xiàn)，也作為說(shuō)明書(shū)的一部分《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版一部方洪矩，李章萬(wàn).揮發(fā)油的氣相色譜分析[J].中草藥，1982，(10):45.常麗萍，盛龍生，揚(yáng)敏智，等.程序升溫氣相色譜的精油成分保留指數(shù)的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1989，24(2):847.范秉琳、史政海.香紫蘇油化學(xué)成分的GC-MS分析.阜陽(yáng)師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版).2004，21(1):2730.王玉萍、朱兆儀、揚(yáng)峻山.紫蘇葉的質(zhì)量研究-I.氣相色譜法測(cè)定紫蘇葉中紫蘇醛的含量.藥物分析雜志.2000，20(5):307309.[5]孟青、馮毅凡、梁漢明、陳耕夫.紫蘇揮發(fā)油GC/MS分析.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào).2004,20(6):59059L馬娜、陳玲、熊飛.固相萃取技術(shù)及其研究進(jìn)展.上海環(huán)境科學(xué).2002，21(3):181184.賈瑞寶.用固相萃取技術(shù)富集水中多環(huán)芳烴.色譜，1997，15(6):4950。.1.一-蘇烯對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線；2.---紫蘇醛對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線；3—----紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品GC圖譜；4——缺紫蘇葉油的藿香正氣口服液陰性樣品GC圖譜；5——紫蘇葉油的GC圖譜；6——藿香正氣口服液樣品GC圖譜。中l(wèi)--紫蘇烯；2------紫蘇醛。甘；3權(quán)利要求1、一種藿香正氣制劑中紫蘇醛和紫蘇烯的鑒別方法，其特征在于(1)采用氣相色譜法進(jìn)行鑒別；(2)樣品的前處理使用固相萃取小柱進(jìn)行成分富集，具體為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相萃取小柱，依次用甲醇、1∶10的甲醇-水以及水沖洗柱，待用；精密量取供試品15～25ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾，再用丙酮洗脫，用2ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得；(3)對(duì)照品溶液的制備另取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含紫蘇烯0.1mg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為二苯基-二甲基聚硅氧烷、苯基-甲基聚硅氧烷、腈丙苯基-二甲基硅氧烷、腈丙甲基-苯甲基聚硅氧烷或聚乙二醇；程序升溫初始溫度50～80℃，保持1～15分鐘，以每分鐘3～10℃的速率升溫至100～160℃，保持1～4分鐘，再以每分鐘10～40℃的速率升溫至200～270℃，保持1～10分鐘；檢測(cè)器溫度250～300℃，氣化溫度240～270℃；分流比(10～50)∶1；檢測(cè)器為氫火焰檢測(cè)器或質(zhì)荷比范圍為10～1000的質(zhì)譜檢測(cè)器；(5)分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，并將供試品色譜與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰進(jìn)行對(duì)照，以鑒別供試品中是否含有紫蘇烯和紫蘇醛。2、藿香正氣口服液中紫蘇烯和紫蘇醛的鑒別方法，步驟為(1)色譜條件采用50%苯基-50%甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)柱，初始溫度60°C，保持1分鐘，以每分鐘4。C的速率升溫至15(TC，保持1分鐘，再以每分鐘15。C的速率升溫至25(TC，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度250。C，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度25(TC;分流比20:1;載氣N2，19ml/分鐘;H2:30ml/分鐘;空氣350ml/分鐘;進(jìn)樣量1M1;(2)供試品溶液的制備取以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相填充物萃取小柱，依次用10ml甲醇、3ml的1:10甲醇-水與6ml水沖洗柱，待用；精密量取供試品15ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾，再用丙酮洗脫，用2ml量瓶集洗脫液至刻度，搖勻，即得；(3)對(duì)照品溶液的制備另取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯0.lmg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)鑒別法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1W，注入氣相色譜儀，測(cè)定；并將供試品色譜與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰進(jìn)行對(duì)照加以鑒別供試品中是否含有紫蘇烯和紫蘇醛。3、一種藿香正氣制劑中紫蘇醛和紫蘇烯的測(cè)定方法，其特征在于(1)采用氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定；(2)樣品的前處理使用固相萃取小柱進(jìn)行成分富集，具體為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相萃取小柱，依次用甲醇、1:IO的甲醇-水以及水沖洗柱，待用；精密量取供試品1525ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾，再用丙酮洗脫，用2ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得；(3)對(duì)照品溶液的制備另取紫蘇浠、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯0.lmg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)色譜條件色譜柱為彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為二苯基-二甲基聚硅氧垸、苯基-甲基聚硅氧垸、腈丙苯基-二甲基硅氧烷、腈丙甲基-苯甲基聚硅氧烷、聚乙二醇；程序升溫初始溫度508(TC，保持115分鐘，以每分鐘3l(TC的速率升溫至100160°C，保持14分鐘，再以每分鐘1040。C的速率升溫至200270°C，保持110分鐘；檢測(cè)器溫度250300。C，氣化溫度240270。C;分流比(1050):1;檢測(cè)器為氫火焰檢測(cè)器或質(zhì)荷比范圍為101000的質(zhì)譜檢測(cè)器；(5)分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1W，注入氣相色譜儀，測(cè)定，并分別計(jì)算供試品色譜圖中與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰面積，得到供試品中紫蘇烯和紫蘇醛的含量。4、藿香正氣口服液中紫蘇烯和紫蘇醛的測(cè)定方法，步驟為(1)色譜條件采用50%苯基-50%甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)柱，初始溫度60°C，保持1分鐘，以每分鐘4。C的速率升溫至15(TC，保持1分鐘，再以每分鐘15。C的速率升溫至25(TC，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度250。C，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度25(TC;分流比20:1;載氣N2，19ml/分鐘;H2:30ml/分釗'；空氣350ml/分鐘；進(jìn)樣量ll^l;(2)供試品溶液的制備取以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑的固相填充物萃取小柱，依次用10ml甲醇、3ml的1:10甲醇-水與6ml水沖洗柱，待用；精密量取供試品15ml，加于上述柱儲(chǔ)樣器中，使其重力通過(guò)柱，待溶劑滴盡后，用水沖洗，真空抽濾，多余的水全部通過(guò)柱子后保持真空抽濾，再用丙酮洗脫，用2ml量瓶集洗脫液至刻度，搖勻，即得；(3)對(duì)照^溶液的制備另取紫蘇烯、紫蘇醛對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每lml含紫蘇烯0.lmg與紫蘇醛0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1W，注入氣相色譜儀，測(cè)定；并分別計(jì)算供試品色譜圖中與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰面積，得到供試品中紫蘇烯和紫蘇醛的含量。5、紫蘇烯和紫蘇醛作為藿香正氣制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)的用途。6、根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中藿香正氣制劑為藿香正氣口服液、藿香正氣酊劑、藿香正氣液體膠囊、藿香正氣軟膠囊、藿香正氣滴丸、藿香正氣膠囊、藿香正氣顆粒、藿香正氣片、藿香正氣丸或藿香正氣合劑。7、根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中藿香正氣制劑為藿香正氣口服液、藿香正氣液體膠囊或藿香正氣酊劑。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了藿香正氣口服液中紫蘇烯和紫蘇醛的鑒別方法和含量測(cè)定方法。藿香正氣口服液為《中國(guó)藥典》2005年版一部收載的品種，我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)對(duì)促進(jìn)小鼠腸蠕動(dòng)來(lái)說(shuō)，使用重慶產(chǎn)紫蘇葉油生產(chǎn)的太極藿香正氣口服液明顯優(yōu)于使用普通紫蘇葉油生產(chǎn)的市售藿香正氣口服液，而其中重慶產(chǎn)紫蘇葉油與普通紫蘇葉油的最大差異就在于重慶紫蘇葉油中含有紫蘇烯而普通紫蘇葉油只含有紫蘇醛；而紫蘇烯同樣具有促進(jìn)小腸蠕動(dòng)的作用。為此我們對(duì)藿香正氣口服液中的紫蘇醛和紫蘇烯的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究。文檔編號(hào)A61P11/00GK101670029SQ200910104600公開(kāi)日2010年3月17日申請(qǐng)日期2009年8月11日優(yōu)先權(quán)日2009年8月11日發(fā)明者伍永富,余佳文,冉亞?wèn)|,劉世琪,柳官,濤彭,徐成文,秦少容申請(qǐng)人:太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司