專利名稱：：結(jié)合到人類白細(xì)胞抗原(hla)ⅰ類或ⅱ類分子上用作疫苗的腫瘤相關(guān)肽新制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及結(jié)合到人類白細(xì)胞抗原(HLA)I類或II類分子上在免疫治療方法中用作疫苗的腫瘤相關(guān)肽的新制劑。特別是，本發(fā)明涉及用于癌癥免疫治療，特別是用于腎癌的制劑。本發(fā)明還涉及用于引起抗腫瘤免疫反應(yīng)的疫苗組合物。為了本發(fā)明的目的，本文引用的所有參考資料均通過引用作為整體納入本發(fā)明。
背景技術(shù)：
：WO2007/028573專利中公開了一種注射用組合物，其由粉末狀的肽和一種由碳酸氫鈉組成的稀釋劑構(gòu)成，用作腎細(xì)胞癌疫苗。然而，該制劑具有多個(gè)缺點(diǎn)。最主要的缺點(diǎn)是其溶解性差，導(dǎo)致其在任何應(yīng)用期間很難使用，比如臨床使用。為了溶解該組合物中的粉末，需要將裝有待溶解肽和稀釋劑的小瓶用力搖動(dòng)3分鐘，然后超聲勻漿l分鐘，再搖動(dòng)1分鐘。但并非所有的內(nèi)科醫(yī)生都能在其診所中使用該治療藥物，因?yàn)樗麄兺ǔＨ鄙偎璧脑O(shè)備，因而壓縮的混合物可能不夠均勻，不能進(jìn)行有效使用。該組合物的另一個(gè)問題在于，考慮到有效成分溶解于給定濃度的碳酸氫鈉中的速度，所得到的溶液只能使用約30分鐘。此外，上述制劑的性質(zhì)隨時(shí)間而變化，使得安全使用幾乎不可能。所公開的該制劑在-20。C到+25°(:的不同溫度下儲(chǔ)存12個(gè)月后，即使超聲勻漿幾分鐘，也得不到澄清溶液。因此，需要溶解性和凍干粉潤(rùn)濕性均增強(qiáng)的新型肽制劑，以便提供一種安全有效的制劑，尤其是抗癌疫苗這種情況。本發(fā)明可滿足這一需求。
發(fā)明內(nèi)容在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含的腫瘤相關(guān)肽數(shù)目在2至18個(gè)之間，優(yōu)選為小于15個(gè)，更優(yōu)選為小于13個(gè)，進(jìn)而更優(yōu)選為2至12個(gè)，還要更優(yōu)選為3至12個(gè)；其中每個(gè)肽的長(zhǎng)度為8至22個(gè)氨基酸，優(yōu)選為9至16個(gè)氨基酸；其中所述肽在90。/。乙酸中的溶解度至少為2.7mg/mL;該藥物組合物還包括甘露醇和泊洛沙姆188，其中所述肽:甘露醇:泊洛沙姆188的重量比范圍在1:5:1.5到1:8:2.2之間(含)；或該藥物組合物還包括甘露醇和吐溫80，其中肽:甘露醇:吐溫80@的重量比范圍在1:2:1.5到1:8:2.2之間(含)。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，本發(fā)明提供一種如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其含有至少兩個(gè)肽，其中所述肽包括一個(gè)氧基酸序列，其選自由SEQIDNO:1到SEQIDNO:10，或SEQIDNO:12到SEQIDNO:23構(gòu)成的組；但要求該組合物包括至少一個(gè)含有SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13或其變體或鹽的肽；并還包括甘露醇和泊洛沙姆188，其中肽與甘露醇和泊洛沙姆188的重量比范圍在1:5:1.5到1:8:2.2之間(含)。在本發(fā)明的乂一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，本發(fā)明提供一種如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其含有至少兩個(gè)肽，其中所述肽包括一個(gè)氨基酸序列，其選自由SEQIDNO:1到SEQIDNO:10，或SEQIDNO:12到SEQIDNO:23構(gòu)成的組；但要求該組合物包括至少-個(gè)含有SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13或其變體或鹽的肽；并還包括甘露醇和吐溫80，其中肽與甘露醇和吐溫8(f的重量比范圍在l:2丄5到1:8:2.2之間(含)。有利地，根據(jù)本發(fā)明的制劑適合于含有疏水肽(例如IMA-CHI-001;SEQIDNO:23)的穩(wěn)定制劑。例如，該肽極難溶于水，僅微溶于90%乙酸(溶解度約2.9mg/mL)。驚奇的是，現(xiàn)在己經(jīng)能夠?qū)⒏鶕?jù)SEQIDNO:23的肽與另一種可用于生物的制劑中的任何一種肽結(jié)合制成制劑。因此本發(fā)明申請(qǐng)公開了一種制劑，配制的肽數(shù)目為2至18個(gè)之間，優(yōu)選為小于15個(gè)，更優(yōu)選為小于13個(gè)，進(jìn)而更優(yōu)選為2至12個(gè)，還要更優(yōu)選為3至12個(gè)，肽長(zhǎng)度為8至22個(gè)氨基酸，優(yōu)選為9至16個(gè)氨基酸；但要求肽在90%乙酸中的溶解度至少為2.7mg/mL，優(yōu)選為2.9mg/mL，并進(jìn)一步包括甘露醇和泊洛沙姆188，其中肽與甘露醇和泊洛沙姆188的重量比范圍在1:5:1.5到1:8:2.2之間〔含)。在本發(fā)明的藥物組合物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，肽與甘露醇和泊洛沙姆188的重量比范圍在1:0:2至U1:0:2.2之間(含)。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例提供一種如上的藥物組合物，其含有至少兩個(gè)肽，其中所述肽包括一個(gè)氨基酸序列，其選自由SEQIDNO:12到SEQIDNO:23組成的組；但要求該組合物包括至少一個(gè)含有SEQIDNO:12或SEQIDNO:13或其變體或鹽的肽；并進(jìn)一步包括甘露醇和吐溫8(f，其中肽與甘露醇和吐溫8(f的重量比范圍在1:5:0.5到1:5:2之間(含)。優(yōu)選地，本發(fā)明肽的總長(zhǎng)度為9至16個(gè)氨基酸。肽可能含有非肽鍵。5在其它優(yōu)選實(shí)施例中，該藥物組合物包括由SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2的氨基酸序列組成的肽，以及至少一個(gè)由SEQIDNO:3至SEQIDNO:10中的任意一個(gè)氨基酸序列組成的肽。在一些優(yōu)選實(shí)施例中，該藥物組合物可進(jìn)一步包括一個(gè)含有SEQIDNO:11氨基酸序列的肽，條件是所述肽不是相對(duì)全長(zhǎng)腫瘤相關(guān)多肽。在其它實(shí)施例中，該藥物組合物可能還包括由SEQIDNO:11氨基酸序列組成的肽。在其它優(yōu)選實(shí)施例巾，該藥物組合物包括由SEQIDNO:12禾Q/或SEQIDNO:13的氨基酸序列組成的肽，以及至少一個(gè)由SEQIDNO:14至SEQIDNO:23中的任意一個(gè)氨基酸序列組成的肽。在一些優(yōu)選實(shí)施例中，該藥物組合物可進(jìn)一步包括含有SEQIDNO:11氨基酸序列的肽，但要求所述肽不是相對(duì)全長(zhǎng)腫瘤相關(guān)多肽。在其它實(shí)施例中，該藥物組合物可進(jìn)步包括由SEQIDNO:11氨基酸序列組成的肽。在某些實(shí)施例中，該組合物中的肽選自對(duì)腫瘤、癌癥和/或患者具有特異性的肽。在又一些優(yōu)選實(shí)施例中，該藥物組合物可進(jìn)一步包括至少一種合適的佐劑。佐劑能非特異性地提高或增強(qiáng)免疫反應(yīng)(例如，由CTLs和輔助細(xì)胞-T(TH)介導(dǎo)的對(duì)于抗原的免疫反應(yīng))，因此認(rèn)為其在本發(fā)明藥劑中是有用的。合適的佐劑包括，但不限于，1018ISS、鋁鹽、Amplivax、AS15、BCG、CP-870,893、CpG7909、CyaA、dSLIM、鞭毛蛋白或鞭毛蛋白TLR5配體、FLT3配體、GM-CSF、IC30、IC31、咪喹莫特Imiquimod(ALDARA)、瑞喹莫特resimiquimod、ImuFactIMP321、IL-2、IL-13、IL-21的白細(xì)胞介素、干擾素-a或干擾素-(3或其聚乙二醇化衍生物、ISPatch、ISS、ISCOMATRIX、ISCOMs、Juvlmmune、LipoVac、MALP2、MF59、單磷酰基脂A、MontanideIMS1312、MontanideISA206、MontanideISA50V、MontanidelSA-51、油包水和水包油乳化劑、OK-432、OM-174、OM-197-MP-EC、ONTAK、OspA、PepTel⑧載體系統(tǒng)、PLG和葡聚糖微粒、雷西莫特、SRL172、病毒體和其它病毒樣顆粒、YF-17D、VEGF阱、R84S、(3-葡聚糖、Pam3Cys、來源于皂苷、分歧桿菌提取物和合成細(xì)菌細(xì)胞壁模仿物的Aquila'sQS21刺激子、以及其它特許專賣佐劑，如Ribi'sDetox、Quil或Superfos。優(yōu)選的佐劑如Freund's或GM-CSF。一些對(duì)樹突狀細(xì)胞及其制劑具有特異性的免疫佐劑之前已有報(bào)道(DupuisM等人，1998年；Allison,1998年)。也可使用細(xì)胞因子。一些細(xì)胞因子直接與下列行為相關(guān)影響樹突狀細(xì)胞至淋巴組織(如TNF-)的遷移，加速樹突狀細(xì)胞的成熟使其成為T-淋巴細(xì)胞(如GM-CSF,IL-1和IL-4)的有效抗原呈遞細(xì)胞(美國(guó)專利No.5,849,589,此處通過引用特別將其整體納入木文)，發(fā)揮免疫佐劑的作用(如IL-12、IL墨15、IL-23、IL-7、IFN-alpha、IFN-beta)(Gabrilovich等人，1996年)。有報(bào)道CpG免疫刺激性寡核苷酸可加強(qiáng)疫苗中佐劑的作用。不受理論的限制，CpG寡核苷酸通過Toll樣受體(TLR)(主要是TLR9)來活化先天(非適應(yīng)性)免疫系統(tǒng)。CpG觸發(fā)的TLR9活化增強(qiáng)了針對(duì)各種抗原的抗原特異性體液和細(xì)胞反應(yīng)，包括肽或蛋白抗原、活病毒或死病毒、樹突狀細(xì)胞疫苗、自身細(xì)胞疫苗以及預(yù)防和治療疫苗中的多糖綴合物。更重要的是，它增強(qiáng)了樹突狀細(xì)胞的成熟和分化，從而在缺少CD4T細(xì)胞的輔助下，也能增強(qiáng)Tm細(xì)胞的活化和產(chǎn)生強(qiáng)細(xì)胞毒性的T-淋巴細(xì)胞(CTL)。甚至當(dāng)通常促進(jìn)Tm偏向的疫苗佐劑(如明礬或弗氏小完全佐劑(IFA))存在時(shí)，也保持由TLR9刺激誘導(dǎo)的Tw偏向。當(dāng)與其它佐劑一起配制或給藥時(shí)，或用在微粒、納米粒子、脂肪乳劑或類似制劑中時(shí)，CpG寡核苷酸顯示更強(qiáng)的佐劑活性，當(dāng)抗原相對(duì)較弱時(shí)，上述制劑對(duì)誘導(dǎo)強(qiáng)反應(yīng)尤其必要。它們也可加速免疫反應(yīng)，并使得抗原劑量降低約兩個(gè)數(shù)量級(jí)，在一些實(shí)驗(yàn)中，抗體反應(yīng)可與無(wú)CpG的全劑量疫苗相比(Krieg等人，2006年)。美國(guó)專利No.6,406，705Bl描述了聯(lián)合使用CpG寡核苷酸、非核酸佐劑和一種抗原來誘導(dǎo)抗原特異性的免疫反應(yīng)。Mologen(德國(guó)柏林)生產(chǎn)的dSLIM(雙干環(huán)免疫調(diào)節(jié)劑)是一種CpGTLR9拮抗劑，它是本發(fā)明的藥物組合物的優(yōu)選組分。也可使用其它TLR結(jié)合分子，如結(jié)合RNA的TLR7、TLR8禾n/或TLR9。其它有用的佐劑包括，但不限于，化學(xué)改性的CpGs(如CpR、Idera)、dsRNA類似物如Poly(I:C)和AmpliGen、非CpG細(xì)菌DNA或RNA、以及免疫活性小分子和抗體，如環(huán)磷酰胺、舒尼替尼、貝伐單抗、西樂葆、NCX-4016、西地那非、他達(dá)那非、伐地那非、索拉非尼、替莫唑胺、西羅莫司脂化物、XL-999、CP-547632、帕唑帕尼、VEGFTrap、ZD2171、AZD2171、抗-CTLA4和SC58175，其可發(fā)揮治療作用和/或用作佐劑。本發(fā)明中佐劑和添加劑的有用量和濃度可由本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要太多的實(shí)驗(yàn)即可確定。優(yōu)選的佐劑為dSLIM、十?dāng)_素-oc、干擾素-(3、CpG7909、IC31、咪喹莫特、瑞喹莫特、PeviTer、RNA、他達(dá)那非、替莫唑胺和Juvlmmune。優(yōu)選的佐劑為dSLIM、BCG、OK432、咪喹莫特、瑞喹莫特、GMCSF、干擾素-a、PeviTer和Juvlmmune或以卜.的組合。在本發(fā)明的藥物組合物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，佐劑選自由集落刺激因子構(gòu)成的組，如粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落剌激因子(GM-CSF、沙格司亭)、咪喹莫特、瑞喹莫特和干擾素-a。在本發(fā)明的藥物組合物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，佐劑選自由集落刺激因子構(gòu)成的組，如粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF、沙格司亭)、咪喹莫特和瑞喹莫特。在本發(fā)明藥物組合物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，佐劑為咪喹莫特或瑞喹莫特。該組合物可用于腸胃外給藥，如皮下、皮內(nèi)、肌肉或口服給藥。該肽也可與細(xì)胞因子等免疫刺激物質(zhì)一起服用。本發(fā)明的藥物組合物可用作抗癌疫苗。本發(fā)明也包括一個(gè)藥劑盒，其包括至少一種上述肽和/或上述藥物組合物，預(yù)先制備或裝入單獨(dú)容器或小瓶中進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)混合。優(yōu)選的藥劑盒包括(a)—個(gè)裝有本發(fā)明藥物組合物溶液或凍十粉的容器；(b)可選地，一個(gè)裝有用于所述凍干制劑的稀釋劑或重溶溶液和/或至少一種佐劑的第二容器；和(C)可選地，關(guān)于(1)使用該溶液或(2)重溶復(fù)原和/或使用所述凍干制劑的說明書。本發(fā)明的優(yōu)選藥劑盒還包括一個(gè)或多個(gè)(1)緩沖液、(2)稀釋劑、(3)過濾器、(4)針頭以及(5)注射器。圖1:含有作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的P-萘基丙氨酸(NAL)的肽(SEQIDNO:l-ll)的HPLC分析色譜圖。圖2:不含賦形劑的制劑l(對(duì)照物)在+25。C的穩(wěn)定性。圖3:含甘露醇和LutrolF68(泊洛沙姆188)的本發(fā)明制劑2在+25。C的穩(wěn)定性。圖4:含甘露醇和Tween80⑧的本發(fā)明制劑3在+25。C的穩(wěn)定性。圖5:含甘露醇和Tween80⑧的本發(fā)明制劑4在+25。C的穩(wěn)定性。圖6:不含賦形劑的制劑l(對(duì)照)在+40。C的穩(wěn)定性。圖7:含甘露醇和LutrolF68(泊洛沙姆188)的本發(fā)明制劑2在+40。C的穩(wěn)定性。圖8:含甘露醇和Tween80⑧的本發(fā)明制劑3在+40。C的穩(wěn)定性。圖9:含甘露醇和Tween80⑧的本發(fā)明制劑4在+40。C的穩(wěn)定性。圖10:賦形劑泊洛沙姆188(LutrolF68⑧可購(gòu)自德國(guó)路德維希港BASF公司)和甘露醇在體內(nèi)對(duì)008+T細(xì)胞引發(fā)的作用。小鼠免疫后9天殺死，收集脾細(xì)胞，四聚體染色，流式細(xì)胞儀分析。四聚體陽(yáng)性細(xì)胞占所有CD8+T細(xì)胞的百分比由誤差棒顯示其平均標(biāo)準(zhǔn)偏差。根據(jù)雙尾非成對(duì)學(xué)生T檢驗(yàn)分析(p<0.05)，肽免疫所有三個(gè)組與陰性對(duì)照組有顯著不同。含或不包泊洛沙姆188(LutrolF68)/甘露醇的兩組之間無(wú)明顯差異(p=0.49)。圖ll:實(shí)施例2中描述的制造過程。8圖12:含有作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的(3-萘基丙氨酸(NAL)的肽(SEQIDNO:ll-23)的HPLC分析色譜圖。圖13:含甘露醇/LutrolF68⑧的SEQIDNO11至23的肽的"用中"穩(wěn)定性。圖14:不含賦形劑的SEQIDNO11至23的肽的"用中"穩(wěn)定性。圖15:含甘露醇/Lu加l68@的SEQIDNO11至22的肽在+25。C的穩(wěn)定性。圖16:含甘露醇/Lu加lF68戀的SEQIDNO11至22的肽在+5。C的穩(wěn)定性。圖17:含甘露醇/Lutrol68@的SEQIDNO11至22的肽在-20。C的穩(wěn)定性。圖18:實(shí)施例2所示的制劑在-20。C的24月穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。圖19:實(shí)施例2所示的制劑在+5。C的24月穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。圖20:實(shí)施例2所示的制劑在+25。C的24月穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。序列清單顯示了用于本發(fā)明制劑的肽(SEQIdNo.1至23)。發(fā)明詳述本發(fā)明提供可用作疫苗的藥物組合物，其中所述藥物組合物包括各種腫瘤相關(guān)肽(TUMAPs)外加甘露醇與吐溫80⑧的混合物，或甘露醇與泊洛沙姆188的混合物，該混合物為所述組合物提供穩(wěn)定性和溶解性。此處所用的"藥物組合物"優(yōu)選為一種包含肽、甘露醇和吐溫80⑧或包含肽、甘露醇和泊洛沙姆188的凍干制劑，或優(yōu)選為一種重溶復(fù)原的液體組合物。因此，此處使用的"藥物組合物"一詞還可能指凍干的制劑，以指明該組合物以凍干的方式存在。優(yōu)選地，該藥物組合物中的肽包括至少一個(gè)SEQIDNO:1至10的肽，其位于并已確認(rèn)在原發(fā)性腎癌細(xì)胞上，或至少一個(gè)SEQIDNO:11至22及11至23的肽，其位于并已確認(rèn)在原發(fā)性神經(jīng)膠質(zhì)瘤癌細(xì)胞上。在其它優(yōu)選實(shí)施例中，該藥物組合物包括由SEQIDNO:12和/或SEQIDNO:13氨基酸序列組成的肽，以及至少一個(gè)由SEQIDNO:14至SEQIDNO:23的任意一個(gè)氨基酸序列組成的肽。該肽組合包括HLAI類和II類肽。優(yōu)選地，本發(fā)明的一種藥物組合物包括一個(gè)SEQIDNO:l禾口/或SEQIDNO:2肽和/或至少一個(gè)包含SEQIDNO:3-10的其它肽，或一個(gè)SEQIDNO:12禾卩/或SEQIDNO:13肽和/或至少一個(gè)包含SEQIDNO:11和14-23的其它肽。該藥物組合物包括游離形式的肽或藥學(xué)可接受鹽形式的肽。此處所用的"藥學(xué)可接受鹽"指所公開的肽的衍生物，其中該肽由制備該試劑的酸式鹽或堿式鹽進(jìn)行改性。例如，酸式鹽通過游離堿(代表性地，藥物的中性形式具有中性的-NH2基團(tuán))與合適的酸反應(yīng)而制備。用于制備酸式鹽的合適的酸包括有機(jī)酸和無(wú)機(jī)酸，有機(jī)酸例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸及其類似物，無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似物。相反地，制備肽的酸性部分的堿式鹽需使用藥學(xué)可接受堿，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、三甲基胺或其類似物。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施例中，該藥物組合物包括作為乙酸鹽或鹽酸鹽的肽。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明的藥物組合物包括作為鹽酸鹽的SEQIDNO:5和作為乙酸鹽的其它肽。本發(fā)明的藥物組合物可能還包括至少一個(gè)作為陽(yáng)性對(duì)照肽的肽，其用作免疫標(biāo)記物以測(cè)試皮內(nèi)給藥的效率。這種肽的一個(gè)例子為衍生自HBV核心抗原(SEQIDNO:ll)。在一個(gè)特定實(shí)施例中，該藥物組合物包括11個(gè)不同的肽，每一個(gè)都由SEQIDNO:1至11的氨基酸序列組成(見表1)。優(yōu)選地，該藥物組合物中的每個(gè)肽的量均為約1500嗎至75嗎，優(yōu)選為約1000嗎至750嗎，更優(yōu)選為約500嗎至600嗎，最優(yōu)選為約578嗎。優(yōu)選地，每個(gè)肽均由HPLC和離子交換色譜純化，呈白色至灰白色粉末。在另一個(gè)特定實(shí)施例中，該藥物組合物包括12個(gè)不同的肽，每一個(gè)都由SEQIDNO:11至22和SEQIDNO:11至23的氨基酸序列組成(見表1)。優(yōu)選地，該藥物組合物中的每個(gè)肽的量均為約1500嗎至75嗎，優(yōu)選為約1000嗎至750嗎，更優(yōu)選為約500|ig至600|xg，最優(yōu)選為約578pg。優(yōu)選地，每個(gè)肽均由HPLC和離子交換色譜純化，呈白色至灰白色粉末。表l:本發(fā)明藥物組合物中的優(yōu)選肽內(nèi)部序列ID抗原序列SEQIDNO:MA-MMP-OOl基質(zhì)金屬蛋白酶7SQDDIKGIQKLYGKRS1IMA-ADF-002脂肪分化相關(guān)蛋白VMAGDIYSV2IMA-ADF-001脂肪分化相關(guān)蛋白SVASTITGV3IMA-APO-001載脂蛋白UALADGVQKV4IMA-CCN-001細(xì)胞周期蛋白DlLLGATCMFV5IMA-GUC-001GUCY1A3SVFAGVVGV6IMA-K67-001KIAA0367ALFDGDPHL7IMA-MET-001c-met原癌基因YVDPVITSI8IMA-MUC-001MUC1STAPPVHNV9IMA-RGS德RGS-5LAALPHSCL10MA-HBV-001HBVFLPSDFFPSV11IMA-BCA-002短縮素(NP—068767，478-486)ALWAWPSEL12IMA-BIR-002桿狀病毒IAP重復(fù)包含5TLGEFLKLDRERAKN13(NP一001159，97-111)IMA-CSP-001硫酸軟骨素蛋白多糖4TMLARLASA14(NP—001888，21-29)IMA-FABP7-001脂肪酸結(jié)合蛋白7，腦LTFGDVVAV15(NP一001437，118-126)IMA-IGF2BP3-001胰島素樣生長(zhǎng)因子2mRNA結(jié)KIQEILTQV16合蛋白3(NP—006538，552-560)IMA-MET-005Met原癌基因(NP—000236,TFSYVDPVITSISPKYG17651-667)IMA-NLGN4X-001神經(jīng)連接素4，X連接NLDTLMTYV18(NP一065793，131-139)IMA-NRCAM-001神經(jīng)元細(xì)胞粘附分子19(NP—001032209，692-700)IMA-PTP-003蛋白酪氨酸磷酸酶，受體型，ZAIIDGVESV20多肽1(NP—002842，195-203)IMA-PTP-005蛋白酪氨酸磷酸酶，受體型，ZKVFAGIPTV21多肽1(NP—002842，1347-1355)IMA-TNC-001肌腱蛋白C(NP一002151，3-11)AMTQLLAGV22IMA-CHI-001SLWAGVVVL23本文使用的"肽"這一術(shù)語(yǔ)指一系列通過肽鍵連接的氨基酸殘基，alpha-氨基與相鄰氨基酸的羰基連接。肽的典型長(zhǎng)度為MHCI類，9個(gè)氨基酸，MHCII類，更長(zhǎng)(15或16個(gè)氨基酸)，但也可短至8個(gè)氨基酸和長(zhǎng)至16個(gè)氨基酸。本文使用的"寡肽"這一術(shù)語(yǔ)指一系列通過肽鍵連接的氨基酸殘基，OC-氨基與相鄰氨基酸的羰基連接。只要保持正確的表位，寡肽的長(zhǎng)度對(duì)本發(fā)明不關(guān)鍵。寡肽的典型長(zhǎng)度小于約30個(gè)氨基酸，大于約14個(gè)氨基酸。"多肽"這一術(shù)語(yǔ)指一系列通過肽鍵連接的氨基酸殘基，a-氨基與相鄰氨基酸的羰基連接。只要保持正確的表位，多肽的長(zhǎng)度對(duì)本發(fā)明不關(guān)鍵。與術(shù)語(yǔ)"肽"或"寡肽"相對(duì)，"多肽"這一術(shù)語(yǔ)指長(zhǎng)度大于30個(gè)殘基的蛋白質(zhì)分子。如果能誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，肽、寡肽、蛋白質(zhì)或多肽的編碼是"免疫原性"的(因此有本發(fā)明中的"免疫原")。在本發(fā)明中，免疫原性更明確地限定為誘導(dǎo)CTL-介導(dǎo)的反應(yīng)。因此，"免疫原"是可誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的分子，在本發(fā)明中是可誘導(dǎo)CTL反應(yīng)的分子。T細(xì)胞"表位"是結(jié)合于I類或II類MHC分子并隨后被T細(xì)胞識(shí)別的短肽分子。結(jié)合于I類MHC分子的T細(xì)胞表位代表性的長(zhǎng)度為8-14個(gè)氨基酸，最典型為9個(gè)氨基酸。結(jié)合于II類MHC分子的T細(xì)胞表位的典型長(zhǎng)度為12-30個(gè)氨基酸。對(duì)于結(jié)合于II類MHC分子的表位，相同的T細(xì)胞表位可能共有一個(gè)核心片段，但羧基端和氨基端的側(cè)翼序列長(zhǎng)度不同，因?yàn)樵撾姆肿拥哪┒瞬⒎窍裨贗類MHC分子肽結(jié)合裂縫中一樣包埋于II類MHC分子肽結(jié)合裂縫的結(jié)構(gòu)中。編碼I類MHC分子的有三個(gè)不同的遺傳位點(diǎn)HLA-A，HLA-B和HLA-C。HLA-A1、HLA-A2和HLA-A11是可由這些位點(diǎn)表達(dá)的不同I類MHC分子的例子。當(dāng)涉及到多肽時(shí)，本文使用的術(shù)語(yǔ)"部分"、"片段"和"碎片"指連續(xù)的殘基如氨基酸殘基序列，該序列組成一個(gè)更大序列的亞群。例如，如果一個(gè)多肽同常用的肽鏈內(nèi)切酶(如胰島素或糜蛋白酶)一起用于治療的話，形成的寡肽將代表該起始多肽的部分、片段或碎片。這意味著任何這樣的碎片都必定包含有大體上相同的片段、碎片或部分作為其氨基酸序列的一部分，如果它們不是完全相同，也和SEQIDNO:l至23中的一個(gè)序列相同，該序列對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:1至23的自然發(fā)生的"母體"蛋白。當(dāng)涉及到多核苷酸時(shí)，這些術(shù)語(yǔ)指將所述多核苷酸和任何常用的核酸內(nèi)切酶一起用于治療時(shí)得到的產(chǎn)物。依照本發(fā)明，當(dāng)涉及到一個(gè)序列時(shí)，術(shù)語(yǔ)"相同度"或"相同性"是指將待比較的序列("比較序列")與所述的或請(qǐng)求保護(hù)的序列("參考序列")對(duì)準(zhǔn)后，二者相比較。然后根據(jù)下列公式來判定"相同度"相同度=100[I-(C/R)]12其中，C是參考序列與被比較序列之間在二者對(duì)準(zhǔn)長(zhǎng)度上的差異數(shù)量，其中(i)在被比較序列中無(wú)對(duì)應(yīng)的對(duì)準(zhǔn)堿基或氨基酸的參考序列中的每一個(gè)堿基或氨基酸，以及(ii)參考序列中的每個(gè)裂隙，以及(iii)參考序列中每個(gè)對(duì)準(zhǔn)的堿基或氨基酸與被比較序列中一個(gè)對(duì)準(zhǔn)的堿基或氨基酸不同時(shí)構(gòu)成一個(gè)差異；并且，R是參考序列和被比較序列在對(duì)準(zhǔn)長(zhǎng)度上的堿基或氨基酸數(shù)目，其中參考序列中出現(xiàn)的任何裂隙也計(jì)為一個(gè)堿基或氨基酸。如果被比較序列與參考序列之間存在一個(gè)對(duì)準(zhǔn)，其相同度按上述計(jì)算約等于或大于一指定的最小相同度，則該被比較序列與該參考序列相比具有該指定最小相同度，即使可能出現(xiàn)按上述計(jì)算的相同度小于該指定相同度的對(duì)準(zhǔn)。本發(fā)明藥物組合物中的肽可通過在肽鏈的不同(可能是選擇性地)位點(diǎn)取代一個(gè)或多個(gè)殘基而進(jìn)行改性。這些取代可能是保守性的，例如，一個(gè)氨基酸被另一個(gè)具有相似結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的氨基酸取代，如一個(gè)疏水性氨基酸被另一個(gè)疏水性氨基酸所取代。更保守的取代是具有相同或相似尺寸和化學(xué)性質(zhì)的氨基酸的取代，例如亮氨酸被異亮氨酸取代。在研究自然發(fā)生的同源蛋白族的序列變異時(shí)，一些氨基酸取代較之另外一些更具有耐受性，而這些取代反應(yīng)中的原始氨基酸和其取代物通常在尺寸、電荷、極性和疏水性方面相似，這就是定義"保守性取代"的基礎(chǔ)。此處定義的保守性取代是以下五組中組內(nèi)的交換第1組-小的脂肪族非極性或略帶極性的殘基(Ala、Ser、Thr、Pro、Gly);第2組——極性帶負(fù)電荷的殘基及其氨基化合物(Asp、Asn、Glu、Gln);第3組——極性帶正電荷的殘基(His、Arg、Lys);第4組——大型的脂肪族非極性殘基(Met、Leu、Ile、Val、Cys);和第5組——大型芳基殘基(Phe、Tyr、Trp)。次保守取代可能包括一個(gè)氨基酸被另一個(gè)具有相似性質(zhì)但尺寸稍微不同的氨基酸取代，例如丙氨酸被異亮氨酸殘基取代。高度非保守取代可能包括將氨基酸取代為一個(gè)極性或甚至堿性的氨基酸。然而，不能因?yàn)檫@些"激進(jìn)"的取代可能無(wú)效就不予考慮，因?yàn)榛瘜W(xué)效果并非總是可預(yù)測(cè)的，激進(jìn)的取代也可能會(huì)引起由簡(jiǎn)單的化學(xué)原理無(wú)法預(yù)測(cè)的意外效果。當(dāng)然，這些取代可能包括不同于通常的L-氨基酸的結(jié)構(gòu)。因此，D-氨基酸可能被取代為L(zhǎng)-氨基酸，后者常常出現(xiàn)在本發(fā)明的抗原肽中但應(yīng)仍屬于本發(fā)明范圍內(nèi)。此外，具有非標(biāo)準(zhǔn)R基團(tuán)的氨基酸(如不同于天然蛋白質(zhì)中常見的20種氨基酸中的R基團(tuán))也可能用于取代，13以生產(chǎn)本發(fā)明中的免疫原和免疫原性多肽。如果發(fā)現(xiàn)超過一處位置上的取代導(dǎo)致肽產(chǎn)生如下定義的基本相同或更大的抗原活性，將測(cè)試那些取代的組合，以確定是否該組合的取代導(dǎo)致肽抗原性的累加作用或協(xié)同作用。肽上至多不超過四個(gè)位置會(huì)同時(shí)被取代。優(yōu)選地，當(dāng)與取代肽對(duì)比，測(cè)試對(duì)SEQIDNO:1至23中的肽特異的CTLs時(shí)，取代肽相對(duì)于背景達(dá)到溶解最大增加值的一半時(shí)，肽濃度不高于lmM，優(yōu)選為不高于lpM，更優(yōu)選為不高于lnM，進(jìn)而更優(yōu)選為不高于100pM，最優(yōu)選為不高于10pM。優(yōu)選的是，取代肽被超過一個(gè)CTLs識(shí)別，至少為兩個(gè)，更優(yōu)選為三個(gè)。黏蛋白(MUC1)是高度糖基化的I型跨膜蛋白，大量過度表達(dá)在許多人類腺癌如乳腺癌和卵巢癌的細(xì)胞表面。惡性腫瘤的異常去糖基化很普遍，且揭露出腫瘤細(xì)胞的表位可能與正常細(xì)胞不同。而且，MUC1的表達(dá)已被證明出現(xiàn)在多發(fā)性骨髓瘤和一些B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中。一些最近的報(bào)道(ApostolopoulosV禾口McKenzieIF。Cellularmucins:targetsforimmunotherapy。CritRev.Immunol.14:293-309(1994);FinnOJ、JeromeKR、HendersonRA、PecherG、DomenechN、Magarian-BlanderJ禾口Barratt-BoyesSM。MUC-lepithelialtumormucin-basedimmunityandcancervaccines。Immunol.Rev.145:6卜89(1995》Barnd，1989年；Takahashi，1994年；Noto，1997年)顯示，源自卵巢、乳房、胰臟和多發(fā)性骨髓瘤腫瘤的MHC-不受限制的T細(xì)胞可辨認(rèn)MUC1的表位，其蛋白質(zhì)核心位于串聯(lián)重復(fù)。源自MUCl蛋白的兩個(gè)HLA-A2-限制性的T細(xì)胞表位己被識(shí)別(Brossart，1999年，EP1484397)。其中一個(gè)肽源自MUCl蛋白的串聯(lián)重復(fù)區(qū)域。第二個(gè)肽位于MUC1的信號(hào)序列內(nèi)。在晚期乳腺癌或卵巢癌的患者身上，以肽脈沖的樹突狀細(xì)胞作疫苗接種，使用那些肽去活體誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴反應(yīng)已經(jīng)成功(Brossart,2000年)(Wierecky，2005年)。至于腎細(xì)胞癌，MUCl表達(dá)在常規(guī)腫瘤中常見，有報(bào)道其與腫瘤等級(jí)和分期有關(guān)。對(duì)于MUC1，蛋白質(zhì)的過度表達(dá)與mRNA的過度表達(dá)無(wú)關(guān)。脂肪分化相關(guān)蛋白是包含脂肪滴的特別分化細(xì)胞和脂質(zhì)聚集細(xì)胞相關(guān)疾病的標(biāo)志物(Heid，1998年)。脂肪分化相關(guān)蛋白在大范圍的培養(yǎng)細(xì)胞株產(chǎn)生，包括纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞。然而，在組織中，脂肪分化相關(guān)蛋白的表達(dá)被局限于某些細(xì)胞類型，例如，泌乳乳腺上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、雄性生殖系統(tǒng)的支持細(xì)胞和睪丸間質(zhì)細(xì)胞，以及酒精肝硬化的皮脂腺病或肝細(xì)胞脂肪變性(Heid，1998年)。有報(bào)告指出脂肪分化相關(guān)蛋白在結(jié)直腸癌(Saha，2001年)、肝細(xì)胞癌(Kurokawa，2004年)和腎細(xì)胞癌(Young，2001年)中會(huì)過度表達(dá)。C-Met編碼一種有著酪氨酸激酶活性的異質(zhì)二聚合跨膜受體，是由一個(gè)與p-亞單位以二硫鍵連接的a-鏈組成(Bottaro，1991年；Rubin,1993年)。兩個(gè)亞單位均在表面表達(dá)，重型卩-亞單位負(fù)責(zé)連接配體和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)，ot-亞單位包含一個(gè)介導(dǎo)不同信號(hào)傳遞途徑的活化的細(xì)胞內(nèi)區(qū)域。c-Met信號(hào)參與器官再生，這顯示在肝臟、腎臟、胚胎形成、造血作用、肌肉發(fā)育，而且參與正?；罨腂細(xì)胞和單核細(xì)胞在遷移和吸附作用的調(diào)節(jié)(Zamegar，1995年；Naldini，1991年；Montesano，1998年；Schmidt,1995年；Uehara，1995年；Bladt，1995年；Takayama，1996年；Mizuno，1993年；van，V，1997年；Beilmann，2000年)。此外，大量研究顯示c-Met在惡性轉(zhuǎn)化和惡性腫瘤的侵襲時(shí)會(huì)過度表達(dá)。c-Met介導(dǎo)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子/離散因子的多功能和潛在致癌活性，包括促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、活力、生存力、胞外基質(zhì)溶解和血管新生(Bottaro1991;Rubin1993;Zarnegar1995)。HGF結(jié)合至受體會(huì)誘導(dǎo)c-Met的自磷酸化作用并活化下游信號(hào)事件，包括ras、磷脂酰肌醇3激酶、磷脂酶CY和絲裂素活化蛋白激酶相關(guān)路徑。c-Met基因主要表達(dá)在上皮細(xì)胞中，并過度表達(dá)在幾種惡性組織和細(xì)胞株中。有日益增加的報(bào)告顯示，非上皮細(xì)胞(例如造血、神經(jīng)和骨骼細(xì)胞)反應(yīng)至HGF和血液學(xué)的惡性腫瘤(如多發(fā)性骨髓瘤、霍奇金病、白血病和淋巴瘤)均表達(dá)c-Met蛋白。由c-Met活化突變、c-Met放大/過度表達(dá)及HGF/c-Met自分泌環(huán)路的獲得，引起致癌基因c-Met的活化，而解除對(duì)侵襲型生長(zhǎng)表達(dá)型的控制，從而給予惡性細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)變的性質(zhì)。值得注意的是，在HGF過渡表達(dá)的基因轉(zhuǎn)殖小鼠上基礎(chǔ)性活化c-Met可促進(jìn)大范圍的腫瘤發(fā)生。G-蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)子5(RGS5)是異質(zhì)三聚體G-蛋白信號(hào)路徑的負(fù)向調(diào)節(jié)子，即使它在體內(nèi)的功能仍然是難了解的。RGS蛋白包括一個(gè)有著統(tǒng)一催化功能但組織分布多變的分子族群。它們激起具有活化的Gcx亞單位的鳥苷三磷酸酶(GTPase)的內(nèi)在活性，從而加速G-蛋白的失活作用。因而，RGS分子抑制G-蛋白偶合受體的信號(hào)下游(De，2000年)。最近顯示在腫瘤新生血管化期間，G-蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)子5在周細(xì)胞的誘導(dǎo)與活性血管重建相符。在胰臟小島細(xì)胞致癌作用的小鼠模型和高度血管生成的星形細(xì)胞瘤中，顯示RGS5在血管生成的開關(guān)期間伴隨活性血管重建會(huì)在周細(xì)胞過度表達(dá)。與正常朗格漢斯小島相比，過度表達(dá)僅限于腫瘤脈管系統(tǒng)。但是在創(chuàng)傷愈合和排卵期間，RGS5的表達(dá)是上調(diào)的(Berger，2005年)。RGS5在RCC中的表達(dá)增加(Rae，2000年)。在另一項(xiàng)研究中，RT-PCR顯示RGS5在所有被檢査的RCC里有強(qiáng)表達(dá)，且其在正常腎臟中的表達(dá)是非常微弱或檢測(cè)不到的(實(shí)時(shí)15PCR中的反應(yīng)是6.6:1)。在RCC中，腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞是RGS5的主要部位(Furuya，2004年)。此外，有報(bào)道RGS5在肝細(xì)胞癌中是竇狀內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物(Chen，2004年)。載脂蛋白L1(APOL1)是結(jié)合載脂蛋白A-I的分泌高密度脂蛋白。載脂蛋白A-I是相對(duì)豐富的血漿蛋白且是HDL的主要載脂蛋白。它參與血漿中多數(shù)膽固醇脂的形成，并且促進(jìn)細(xì)胞中膽固醇脂的外排。載脂蛋白Ll也許在貫穿整個(gè)身體的脂質(zhì)交換和運(yùn)輸上起一定的作用，以及從外周細(xì)胞到肝臟的反向膽固醇運(yùn)輸。血槳蛋白是一個(gè)有著明顯約40kDa分子質(zhì)量的單鏈多肽(Duchateau，1997年；Duchateau，2001年)。AP0L1cDNA從一個(gè)活化的內(nèi)皮細(xì)胞的cDNA基因庫(kù)被分離，顯示是被TNF-a上調(diào)，TNF-a是有效的促炎細(xì)胞因子。(Monajemi，2002年)。KIAA0367在KazusacDNA項(xiàng)目中被識(shí)別，該項(xiàng)目的目的是為推定蛋白識(shí)別未知的人類轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)編碼(Oharal997)。盡管KIAA0367基因推定的820氨基酸長(zhǎng)度的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的功能是未知的，它包含一個(gè)位于C端的CRAL-TRIO脂質(zhì)鍵結(jié)區(qū)段剖面，可結(jié)合小疏水分子，且存在于BCL2/腺病毒E1B19-kDa蛋白交互作用蛋白2(BNIP-2)。BNIP-2涉及控制不同細(xì)胞的功能，包括細(xì)胞形態(tài)學(xué)、遷移、內(nèi)嗜作用和細(xì)胞周期進(jìn)展(Zhou，2005年)。KIAA0367位于染色體區(qū)域9q21。在許多腫瘤里，該區(qū)域被描述為純合性缺失的一個(gè)共同標(biāo)耙(Gursky，2001年；Weber，年2001)或異合子性的喪失(Louhelainen，2000年；Tripathi，2003年)?？扇苄曾B苷酸環(huán)化酶(sGC)是由一個(gè)alpha和一個(gè)beta亞單位組成的異質(zhì)二聚體蛋白(1個(gè)血紅素群組)，其可催化GTP轉(zhuǎn)化為第二信使cGMP，并發(fā)揮一氧化氮和硝基血管擴(kuò)張劑藥物的主要受體的作用(Zabel，1998年)。GUCYa3和b3在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤中被過度表達(dá)。轉(zhuǎn)染反義的GUCY1A3或GUCY1B3減少了裸鼠的血管再生和腫瘤生長(zhǎng)。這也許歸結(jié)為VEGF被cGMP誘導(dǎo)的事實(shí)(Saino，2004年)。GUCY1A3促進(jìn)小鼠乳房腫瘤細(xì)胞株的腫瘤細(xì)胞遷移(Jadeski，2003年)。周期蛋白D1屬于高度恒定的周期蛋白族，更確切地屬于周期蛋白D亞族(Xiong，1991年；Lew，1991年)。周期蛋白起到CDKs(周期蛋白依賴激酶)調(diào)節(jié)子的作用。不同的周期蛋白具有不同的表達(dá)和降解模式，有助于每次有絲分裂事件的時(shí)態(tài)協(xié)同(Deshpande，2005年)。周期蛋白Dl與CDK4或CDK6形成一復(fù)合體且作為其調(diào)節(jié)亞單位，其活性對(duì)細(xì)胞周期Gl/S的轉(zhuǎn)變是必須的。CCND1與CDK4和CDK6形成一種絲氨酸/蘇氨酸激酶全酶的復(fù)合體，其使得底物對(duì)此復(fù)合體具有專一性(Bates,1994年)。該蛋白顯示與腫瘤抑制蛋白R(shí)b交互作用(Loden，2002年)，且該基因的表達(dá)由Rb正向調(diào)節(jié)(Halaban，1999年)。該基因的突變、放大和過度表達(dá)可改變細(xì)胞周期進(jìn)展，其在各種各樣的腫瘤中被頻繁觀察到，也可能是引起腫瘤發(fā)生的原因(Hedberg，1999年；Vasef，1999年；Troussard，2000年)。CSPG4(硫酸軟骨素蛋白多糖)代表了一種膜內(nèi)在硫酸軟骨素蛋白多糖。其被看作是早期細(xì)胞表面黑色素瘤進(jìn)展的標(biāo)志物，涉及到刺激腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。CSPG4在大于90%的人體黑色素瘤病變中都有很強(qiáng)的表達(dá)。盡管CSPG4并非嚴(yán)格意義上的腫瘤特異，在沒有自身免疫的情況下，黑色素瘤患者和健康個(gè)體的腫瘤反應(yīng)性的CD4+T-cdl反應(yīng)能在HLA陽(yáng)DR11-表達(dá)黑色素瘤細(xì)胞中識(shí)別CSPG4693.7Q9(Erfurt等人，2007年)。有描述CSPG4在一些正常組織中表達(dá)，此外也在活化周細(xì)胞中表達(dá)，例如內(nèi)皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、表皮內(nèi)的一些基底角質(zhì)形成細(xì)胞，以及毛囊中的細(xì)胞(Campoli等人，2004年)。在血管生成和CNS病理反應(yīng)時(shí)，高度游動(dòng)的CSPG4細(xì)胞會(huì)發(fā)生快速的形態(tài)改變，并被補(bǔ)充到血管生長(zhǎng)和修復(fù)的位置。CSPG4在惡性腦腫瘤的血管上被腫瘤細(xì)胞和周細(xì)胞過度表達(dá)。通過將CSPG4-陽(yáng)性的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的細(xì)胞移植到免疫缺陷的裸鼠腦中，顯示這些腫瘤相對(duì)于對(duì)照組具有更高的微血管密度，說明CSPG4表達(dá)能調(diào)節(jié)宿主源腫瘤脈管系統(tǒng)的功能和結(jié)構(gòu)(Brekkeetal.，2006)。在將GBM活檢材料異種移植到裸鼠的實(shí)驗(yàn)中，確定CSPG4主要與腫瘤脈管系統(tǒng)的周細(xì)胞和基底膜上的血管有關(guān)，其表達(dá)也與高細(xì)胞增生區(qū)域有關(guān)(Chekenya等人，2002a)。此外，CSPG4表達(dá)與一個(gè)神經(jīng)膠質(zhì)瘤移植模型中的腫瘤進(jìn)展平行(Wiranowska等人，2006年)。CSPG4在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤中差異表達(dá)，在相對(duì)高級(jí)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤中表達(dá)更高(Chekenya等人，1999年)。CSPG4的高表達(dá)與多藥耐藥性相關(guān)，該多藥耐藥性由ct3pi整合素/PI3K信號(hào)調(diào)節(jié)子及其下游靶標(biāo)增加的活化介導(dǎo)，以促進(jìn)細(xì)胞的存活(Chekenya等人，2008年)。FABP7:脂肪酸結(jié)合蛋白(FABPs))是14-15kDa的胞槳蛋白，認(rèn)為其參與脂肪酸(FA)的攝入、運(yùn)輸和導(dǎo)向。當(dāng)在膜區(qū)室間運(yùn)輸FAs及將FAs帶到核靶時(shí)，認(rèn)為它們能增加FAs在細(xì)胞質(zhì)中的溶解性。FABPs可能會(huì)調(diào)節(jié)FA濃度，并以該種方式影響各種細(xì)胞功能，例如酶活性、基因表達(dá)、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化(Glatz和Storch，2001年)。FABP7mRNA在神經(jīng)上皮源組織和惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤中表達(dá)(WHOIII和IV級(jí))?；虮欢ㄎ坏饺旧w帶6q22-23，該區(qū)域也包括原癌基因c-myc，并經(jīng)常在惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤中缺失雜合子。對(duì)惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的分析顯示，F(xiàn)ABP7通常與膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)共同表達(dá)，暗示惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤源的細(xì)胞可能是一種具有能正常表達(dá)蛋白和形成腫瘤能力的星形前體細(xì)胞(Godbout等人，1998)。FABP7蛋白在GBM中顯示中等到強(qiáng)的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。FABP7轉(zhuǎn)染的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞顯示了較之對(duì)照細(xì)胞5倍強(qiáng)的遷移能力。因此，與FABP7在GBM中過度表達(dá)相關(guān)的總體存活期較短，可能是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞對(duì)周圍的腦薄壁組織的遷移和侵襲有所增加(Liang等人，2005年)。對(duì)FABP7在星形細(xì)胞瘤分布的進(jìn)一步分析顯示，在腫瘤浸潤(rùn)區(qū)FABP7水平升高，這說明FABP7在驅(qū)動(dòng)惡性細(xì)胞浸潤(rùn)到相鄰腦組織中起著重要的作用(Mita等人，2007年)。在神經(jīng)膠質(zhì)組織和所有級(jí)別的星形細(xì)胞瘤中，F(xiàn)ABP7具有不同的表達(dá)水平和亞細(xì)胞定位。然而，似乎FABP7的細(xì)胞核定位尤其與神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞浸潤(rùn)表型和EGFR通路有關(guān)，因?yàn)槠浜宿D(zhuǎn)位是在EGFR活化后檢測(cè)到的，且與EGFR-陽(yáng)性的GBM中的預(yù)后不良有關(guān)。此外，在I級(jí)星形細(xì)胞瘤中觀察不到核FABP7免疫反應(yīng)性(Liang等人，2006年；Kaloshi等人，2007年)。X連接的神經(jīng)連接素4是細(xì)胞粘附蛋白族的成員之一，它似乎在神經(jīng)元突觸的成熟和功能上發(fā)揮作用。神經(jīng)連接素家族的成員都具有相關(guān)的結(jié)構(gòu)組，如N端信號(hào)肽、具有兩處選擇性剪接的酯酶樣結(jié)構(gòu)域、跨膜域前的具有低序列等同度的小連接區(qū)，以及具有高度保守的C端的短胞質(zhì)部分。已發(fā)現(xiàn)的相關(guān)神經(jīng)連接素4mRNA的最高水平在心臟中。肝臟、骨骼肌和胰腺中檢測(cè)到神經(jīng)連接素4mRNA的較低表達(dá)，但腦、胎盤、肺和腎臟中幾乎檢測(cè)不到神經(jīng)連接素4mRNA(Bolliger等人，2001年)。X連接的NLGN4基因突變是自閉癥譜系障礙的一個(gè)潛在原因，有報(bào)道突變發(fā)生在患有孤獨(dú)癥、亞斯伯格綜合癥和智力低下的患者身上(Jamain等人，2003年；Laumo皿ier等人，2004年;Lawson-Yuen等人，2008年)。較少描述NLGN4X與癌癥的關(guān)系在胃腸基質(zhì)腫瘤中，相對(duì)于成年人，在兒童與年輕人中發(fā)現(xiàn)了NLGN4X的過度表達(dá)(Prakash等人，2005年)。肌腱蛋白C:腫瘤細(xì)胞周圍的細(xì)胞外基質(zhì)與正常組織中的細(xì)胞外基質(zhì)不同。肌腱蛋白C(TNC)是一種在與升高的遷移活性緊密相關(guān)的過程中高度上調(diào)的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，這些升高的遷移活性如胚胎發(fā)育(Bartsch等人，1992年)，傷口愈合(Mackie等人，1988年)和瘤形成過程(Chiquet-Ehrismann，1993年；Chiquet-Ehrismann和Chiquet，2003年)。此外，TNC在具有高增殖指數(shù)的腫瘤血管中過度表達(dá)，暗示TNC參與腫瘤血管生成(Kimetal.,2000)。在正常人腦中很少檢測(cè)到TNC的表達(dá)，但其在惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤中高度表達(dá)(Bourdonetal.,1983)。TNC表達(dá)可由缺氧(Lal等人，2001年)或TGF-betal誘導(dǎo)，提供了高級(jí)神經(jīng)膠質(zhì)瘤侵入健康薄壁組織的機(jī)理(Hau等人，2006年)，也或者被胃泌素誘導(dǎo)，其顯著調(diào)節(jié)人GBM18細(xì)胞的遷移(Kucharczak等人，2001年)。TNC下調(diào)原肌球蛋白-1，從而使得肌動(dòng)蛋白應(yīng)力纖維不穩(wěn)定。此外它還造成了Wnt抑制劑Dickkopfl的下調(diào)。因?yàn)榧∏虻鞍?l表達(dá)的降低和Wnt信號(hào)子的增加同腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)化緊密相關(guān)，TNC特定地調(diào)節(jié)這些信號(hào)通路以增加神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖(Ruiz等人，2004年)。在GBM組織中觀察到圍繞腫瘤供給血管的TNC的血管周圍染色，但其在WHOII級(jí)和III級(jí)神經(jīng)膠質(zhì)瘤中較為少見，暗示TNC染色的密度與腫瘤級(jí)別相關(guān)，最強(qiáng)的染色表明最差的預(yù)后。TNC也有助于產(chǎn)生室下區(qū)(SVZ)內(nèi)的干細(xì)胞巢，該室下區(qū)統(tǒng)籌生長(zhǎng)因子信號(hào)子以加速神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)育。SVZ中TNC對(duì)細(xì)胞的主要影響是調(diào)節(jié)發(fā)育進(jìn)展(Garcion等人，2004年)。TNC是定向人神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)遷移的最強(qiáng)誘導(dǎo)劑。腫瘤生成的ECM從而為到播散的腫瘤細(xì)胞的NSC取向提供了許可環(huán)境(Ziu等人，2006年)。NRCAM(神經(jīng)細(xì)胞粘附分子)是具有多個(gè)免疫球蛋白樣C2型和纖維粘連蛋白III型結(jié)構(gòu)域的一種神經(jīng)跨膜細(xì)胞粘附分子。它通過與其它IgCAMs形成親同種抗原和異嗜性抗原相互作用(Volkmer等人，1996年；Sakurai等人，1997年；Zacharias等人，1999年)，參與神經(jīng)細(xì)胞的導(dǎo)向、增生和成束(Grumet等人，1991年；Morales等人，1993年；Stoeckli和Landmesser，1995年；Perrin等人，2001年；Sakurai等人，2001年)。錨蛋白結(jié)合的NRCAM(DavisandBennett,1994)在管腔形成內(nèi)皮細(xì)胞中被上調(diào)，暗示其可能在管腔形成和血管生成中起作用(A他enhead等人，2002年)。NRCAM是有助于腫瘤發(fā)生的fi-連環(huán)蛋白和斑珠蛋白-LEF/TCF復(fù)合物的耙基因(Conacci-Sorrell等人，2002年)。NRCAM胞外域可通過金屬蛋白酶樣活動(dòng)從細(xì)胞表面脫落。該脫落域能激活各種信號(hào)通路，提高細(xì)胞的游動(dòng)性，及導(dǎo)致小鼠腫瘤發(fā)生(Conacci-Sorrell等人，2005年)。相對(duì)于正常腦，NRCAM在間變性星形細(xì)胞瘤和GBM腫瘤組織中被上調(diào)，且水平上升與侵入行為有關(guān)(Sehgal等人，1998年)?？筃RCAM的反義RNA降低了人GBM細(xì)胞的致瘤能力(Sehgal等人，1999年)。IGF2BP3是胰島素樣生長(zhǎng)因子-IImRNA結(jié)合蛋白家族的成員，與RNA的定位、轉(zhuǎn)化和翻譯調(diào)控有關(guān)。該蛋白包括一些KH(K同源)結(jié)構(gòu)域，其在RNA結(jié)合中很重要，已知其參與RNA合成和代謝。表達(dá)主要發(fā)生在胚胎發(fā)育過程中，已有報(bào)道其會(huì)產(chǎn)生腫瘤。因此認(rèn)為IGF2BP3是一種癌胚胎蛋白(Liao等人，2005年)。相對(duì)于對(duì)照組織，IGF2BP3在各種癌組織中的高轉(zhuǎn)錄水平暗示，IGF2BP3蛋白可能在增生的轉(zhuǎn)化細(xì)胞中起著功能性作用。支持該假19說的發(fā)現(xiàn)是表達(dá)IGF2BP3轉(zhuǎn)錄的唯一一個(gè)非惡性人體組織是人胎盤，其以細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖為特征(Mueller-Pillasch等人，1997年)。例如，IGF2BP3在透明細(xì)胞RCC樣本中表達(dá)，其表達(dá)與原發(fā)腫瘤的高級(jí)階段和級(jí)別相關(guān)。此外，與IGF2BP3的陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)的是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加5-10倍，及RCC死亡的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加42%-50%(Hoffmann等人，2008年；Jiang等人，2006年；Jiang等人，2008年)。IGF2BP3在胰腺癌中也高度表達(dá)。在兩項(xiàng)研究中，大于90%的胰腺腫瘤組織樣本在免疫染色后顯示IGF2BP3表達(dá)，而非腫瘤的胰腺組織對(duì)IGF2BP3呈陰性。此外，該表達(dá)隨腫瘤的分期而逐漸增加(Yantiss等人2005;Yantiss等人，2008年)。發(fā)現(xiàn)IGF2BP3表達(dá)在高級(jí)尿道上皮腫瘤中顯著增加，而其在良性尿道上皮和低級(jí)尿道上皮腫瘤中通常無(wú)表達(dá)。此外，具有IGF2BP3陽(yáng)性腫瘤的患者較之IGF2BP3陰性腫瘤的患者的無(wú)腫瘤進(jìn)展和無(wú)疾病的存活率要低得多(Li等人，2008年；Sitnikova等人，2008年；Zheng等人，2008年)。短縮素(BCAN)是一種腦特異性硫酸軟骨素蛋白多糖，屬于凝集素蛋白聚糖家族。已報(bào)道兩種BCAN亞型一種是分泌入細(xì)胞外基質(zhì)的全長(zhǎng)亞型，一種是具有可預(yù)測(cè)糖磷脂酰肌醇(GPI)定位的序列的較短的亞型。該分泌的亞型自出生起8年內(nèi)均高度表達(dá)，之后20年下調(diào)到低水平，然后在正常成年人的大腦皮層中保持該水平。GPI亞型在發(fā)育期間均以低水平表達(dá)(Gary等人，2000年)。BCAN屬于蛋白多糖家族，通常被描述為在成人神經(jīng)系統(tǒng)中阻止細(xì)胞和神經(jīng)突起游動(dòng)性的屏障分子(Viapiano禾nMatthews,2006年)?；铙w內(nèi)，BCAN沿喙側(cè)遷移流邊界表達(dá)(Jaworski和Fager，2000年)且是神經(jīng)受傷后膠質(zhì)瘢痕的主要上調(diào)組分(Jaworski等人，1999年)。BCAN在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中顯示了引人注目的上調(diào)，在該神經(jīng)膠質(zhì)瘤中可檢測(cè)到較正常水平約七倍的表達(dá)增加。在非死于神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥的成人個(gè)體的大腦皮層樣本中未檢測(cè)到BCANmRNA。形成鮮明對(duì)比的是，在27例人神經(jīng)膠質(zhì)瘤的手術(shù)樣品中均檢測(cè)到BCANmRNA，因而提議BCAN可能是神經(jīng)膠質(zhì)瘤中一種獨(dú)特的和選擇性的標(biāo)記物(Jaworski等人，1996年)。受體型蛋白酪氨酸磷酸酶Zetal(PTPRZ1,PTP-《)-PTPRZ1屬于受體型蛋白酪氨酸磷酸酶家族，其編碼一個(gè)單通道I型膜蛋白，該膜蛋白具有兩個(gè)細(xì)胞質(zhì)酪氨酸蛋白磷酸酶結(jié)構(gòu)域、一個(gè)alpha-碳酸酐酶結(jié)構(gòu)域和一個(gè)纖維連接蛋白III型結(jié)構(gòu)域。該基因的表達(dá)可在胃癌細(xì)胞(Wu等人，2006年)、乳腺癌(Perez-Pinera等人，2007年)、各種硬化病變的髓鞘再生少突膠質(zhì)細(xì)胞(Harroch等人，2002年)和缺氧條件下人胚胎腎臟細(xì)胞(Wang等人，2005年)中20被誘導(dǎo)。蛋白質(zhì)和轉(zhuǎn)錄都在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中過度表達(dá)，促進(jìn)其趨觸性遷移(Lu等人，2005年)和在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的遺傳DNA擴(kuò)增(Mulholland等人，2006年)。幾丁質(zhì)酶3-樣2(CHI3L2)-CHI3L2最初從軟骨細(xì)胞中鑒定出來，在如骨關(guān)節(jié)炎中上調(diào)(Stecketa1.，2002)。盡管該蛋白尚未被表征，其很有可能分泌到細(xì)胞外空間。其通常被描述為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的靶標(biāo)抗原。人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株siRNA轉(zhuǎn)染(VEGF-A)誘導(dǎo)的抗血管生成實(shí)驗(yàn)造成CHI3L2的上調(diào)。存活素(BIRC5)禾口BIRC5(存活素)的表達(dá)屬于凋亡蛋白(IAP)家族抑制劑，其在胚胎組織和各種人類癌癥中有所升高。存活素似乎可以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡細(xì)胞的死亡。尤其是在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，可檢測(cè)到極高水平的存活素表達(dá)(Angileri等人，2008)。暗示在腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的存活素的過度表達(dá)可能在惡性增生、抗凋亡和血管生成中具有重要作用(Zhen等人，2005;Liu等人，2006年)。尤其對(duì)于膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和其它腫瘤體，存活素表達(dá)與惡性腫瘤等級(jí)(膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中存活素表達(dá)最高)和比具有存活素陰性腫瘤的患者更短的總生存期顯著相關(guān)(Kajiwara等人，2003年；Saito等人，2007;Uematsu等人，2005年；Mellai等人，2008年；Grunda等人，2006年；Xie等人，2006年；Sasaki等人，2002年；Chakravarti等人，2002年)?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)族的蛋白質(zhì)涉及在正常生理過程中細(xì)胞外基質(zhì)的破壞，這些生理過程如胚胎發(fā)育、生殖、組織重建，以及關(guān)節(jié)炎和瘤轉(zhuǎn)移等疾病過程(Mott，2004年)。分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)是一種不具有活性的29.6kDa的原蛋白，其由細(xì)胞外蛋白質(zhì)酶切割而被活化。該活化酶的分子量為19.1kDa，每個(gè)亞單位可結(jié)合兩個(gè)鋅離子和兩個(gè)f丐離子(Miyazaki，1990年；Browner,1995年)。MMP7降解明膠、纖維連接蛋白和酪蛋白(Miyazaki，1990年；Quantin，1989年)且與MMP家族的多數(shù)成員不同，因?yàn)樗狈σ粋€(gè)恒定的C端蛋白質(zhì)區(qū)段(Gaire，1994年)。經(jīng)常發(fā)現(xiàn)MMP7在惡性組織中過度表達(dá)(Lin，2004年；Bramhall，1997年；Denys，2004年)，顯示其可促進(jìn)活體腫瘤細(xì)胞的侵襲(Wang，2005年)。在多種類型的癌癥里，這些蛋白可作為腫瘤專一免疫反應(yīng)的標(biāo)耙。B型肝炎病毒核心抗原肽HBV-001不是內(nèi)源的人類腫瘤相關(guān)抗原，而是源自B型肝炎病毒核心抗原。首先，允許定量比較由本發(fā)明的藥物組合物中的腫瘤相關(guān)肽(TUMAPs)誘導(dǎo)的T細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度，因此允許研究其剌激抗腫瘤反應(yīng)的能力。第二，在患者缺乏任何T細(xì)胞21反應(yīng)的病例下，可作為重要陽(yáng)性對(duì)照。第三，允許監(jiān)控患者的免疫活性狀態(tài)。B型肝炎病毒(HBV)感染是肝臟疾病的主要起因，影響全世界約三億五千萬(wàn)人(Rehermann，2005年)。由于很容易通過水平和垂直傳播，且具有引起能導(dǎo)致肝硬化和肝細(xì)胞癌的慢性疾病的潛在能力，HBV在全世界許多國(guó)家代表對(duì)公共衛(wèi)生系統(tǒng)的一種主要沖擊。HBV基因體(Previsani，2002年)包括部分雙鏈環(huán)狀DNA。在HBV的病毒粒子中，其與核心蛋白HBc和其它蛋白包在一起形成核殼體，該核殼體由含脂質(zhì)和表面蛋白質(zhì)族HBs(也叫包膜蛋白質(zhì))的一個(gè)外包膜所包圍。與HBc和HBs連接的抗原決定簇分別作為HBcAg和HBsAg。這些抗原與血清學(xué)(即在患者血液中發(fā)現(xiàn)的抗體反應(yīng))相關(guān)，是在臨床上診斷HBV感染的最有用的抗原抗體系統(tǒng)。對(duì)于之前無(wú)HBV感染史的個(gè)體，HBc代表一種新的外來抗原。由于該抗原為有名的致免疫肽，在IMA內(nèi)源自HBcAg的一個(gè)十氨基酸肽被選作陽(yáng)性對(duì)照抗原。HBc肽專一的CTLs誘導(dǎo)將被作為患者免疫活性和成功接種的標(biāo)記。本發(fā)明的藥物組合物可用于腸胃外給藥，如皮下、皮內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或口服給藥。為此，肽溶解于或懸浮于一藥學(xué)上可接受的，優(yōu)選為水性的載體中。此外，該組合物也可包含賦形劑，如抗氧化劑、防腐劑、緩沖劑、粘合劑、爆炸劑、稀釋劑和調(diào)味劑。該肽也可與細(xì)胞因子等免疫刺激物質(zhì)一起服用?？捎糜谶@一組合物的許多賦形劑清單可取自例如A.Kibbe所著的AmericanPharmaceuticalAssociationandpharmaceuticalpress出版的《藥學(xué)賦形劑手冊(cè)》(HandbookofPharmaceuticalExcipients)2000年第三版。本發(fā)明的組合物可用于腺瘤性或癌性疾病的防止、預(yù)防和/或治療。本發(fā)明的藥物組合物可用于患有與SEQIDNO:l-lO相關(guān)肽或抗體有關(guān)的腺瘤性或癌性疾病的患者，或用于患有與SEQIDNO:ll至22或11至23相關(guān)肽或抗體有關(guān)的腦癌，特別是神經(jīng)膠質(zhì)瘤，尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤癌性疾病的患者。該藥物組合物中的肽可觸發(fā)患者體內(nèi)的T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。如上所述，在腎細(xì)胞癌的情況下，本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選包括含有SEQIDNO:l和/或SEQIDNO:2氨基酸序列的肽，并還包括至少額外一個(gè)含有SEQIDNO:3至SEQIDNO:10的氨基酸序列的腫瘤相關(guān)肽。在腦癌，特別是神經(jīng)膠質(zhì)瘤，尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤癌的情況下，該藥物組合物優(yōu)選包括SEQIDNO:12和/或SEQIDNO:13的氨基酸序列，并還包括至少額外一個(gè)含有SEQIDNO:11以及14至22和/或23的氨基酸序列的腫瘤相關(guān)肽。優(yōu)選地，本發(fā)明藥物組合物中的肽總長(zhǎng)度為9至100個(gè)氨基酸，優(yōu)選9至30個(gè)氨基酸，最優(yōu)選為9至16個(gè)氨基酸。此外，至少有一個(gè)根據(jù)SEQIDNO:1至SEQIDNO:23中任何一個(gè)的肽可以包括非肽鍵。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選藥物組合物(優(yōu)選為腎細(xì)胞癌疫苗)包括一個(gè)由SEQIDN0:1和/或SEQIDN0:2的氨基酸序列組成的肽，在其它實(shí)施例中，還包括至少一個(gè)由SEQIDNO:3至SEQIDNO:ll的氨基酸序列組成的肽。本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選藥物組合物(腦癌，特別是神經(jīng)膠質(zhì)瘤，尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤癌疫苗)包括一個(gè)由SEQIDNO:12和/或SEQIDNO:13的氨基酸序列組成的肽，在其它實(shí)施例中，還包括至少一個(gè)由SEQIDNO:ll至SEQIDNO:22和/或23的氨基酸序列組成的肽。該肽也可能是標(biāo)記的，或可能是融合蛋白，或可能是雜交分子。本發(fā)明所述序列的肽預(yù)計(jì)可刺激CD8+CTL。然而，在CD4+T-細(xì)胞幫助下的刺激更為有效。因而，雜交分子的融合伴或區(qū)段合適地提供刺激CD4+T-細(xì)胞的表位。CD4+刺激表位在本領(lǐng)域己為人熟知并包括那些己在破傷風(fēng)類毒素中確認(rèn)的表位。在又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，該肽是一個(gè)融合蛋白，特別包括HLA-DR抗原相關(guān)的恒定鏈(Ii)的N端氨基酸。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的肽是一個(gè)截短人蛋白或一個(gè)蛋白碎片和另一個(gè)多肽部分中的融合蛋白，假若人的那部分包括一個(gè)或多個(gè)有創(chuàng)造性的氨基酸序列?？捎糜谠撍幬锝M合物的肽可能基本上是純的，或與免疫刺激佐劑結(jié)合，或與免疫刺激細(xì)胞因子聯(lián)合使用，或通過一合適的給藥系統(tǒng)給藥，例如脂質(zhì)體、微納顆粒、膠束、乳劑、凝膠。通常肽疫苗接種需要佐劑，如此，優(yōu)選為GM-CSF(人GM-CSF市售商品名為Sargramostim、Leukine,可夠J自Berlex，5見在是BayerHealthCarePharmaceuticals)其它合適的佐劑包括Aquila'sQS21刺激子(AquilaBiotech,Worcester,MA,USA)，其來自于皂苷、分歧桿菌提取物和合成細(xì)菌細(xì)胞壁模擬，以及專賣的佐劑如Ribi'sDetox。另一個(gè)由皂苷衍生的佐劑QuiIA也可能使用(Superfos,Denmark)。其它佐劑如Freund's也可能有用。使得該肽與匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)或甘露聚糖共軛也可能是有用的(見WO95/18145以及Longenecker等人(1993)Ann.NYAcad.Sci.690,276-291)。既然佐劑被定義為能提高對(duì)抗原免疫反應(yīng)的物質(zhì)(MedlinePlusMedicalDictionary,NIH)，具有該功能的其它物質(zhì)也可能被使用，包括但不限于toll樣受體拮抗劑(TLR拮抗劑)，優(yōu)選為可與TLR3、7、8和9互相抗拮的物質(zhì)，如精蛋白固定的RNA、CpG寡核苷酸、CpR寡核苷酸、細(xì)菌DNA、咪唑并喹啉等。本領(lǐng)域已知的可增強(qiáng)免疫反應(yīng)的其它物質(zhì)包括但不限于下列物質(zhì)的抑制劑可誘導(dǎo)的一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(ARG1)、吲哚胺-2，3-雙加氧酶(IDO)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR-1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、環(huán)氧合酶(COX-2)、TGF-beta受體I23(TGF-beta-RI)。這些抑制劑可能是抗分子或小分子的單克隆抗體。本領(lǐng)域已知的對(duì)上述因子具有抑制功能和免疫反應(yīng)增強(qiáng)效應(yīng)的小分子和單克隆抗體例如l-MT、NCX-4016、羅非西布、西樂葆、BEC、ABH、nor-NOHA、SB-505124、SD-208、LY580276、AMD3100、阿西替尼、貝伐單抗、JSI-124、CPA-7、XL-999、ZD2171、帕唑帕尼、CP-547632以及VEGF阱。此夕卜，能減少調(diào)節(jié)T細(xì)胞(CD4+，CD25+,FoxP3+)數(shù)量的物質(zhì)也可用作佐齊[J。這些包括(但不限于)環(huán)磷酰胺(Cytoxan)、ONTAK(denileukindiftitox)、舒尼替尼、anti-CTLA-4(MDX-010,CP-675206)、anti-CD25、anti-CCL22以及anti-GITR。本發(fā)明的藥物組合物中肽的優(yōu)選量可在約0.1至100mg之間變動(dòng)，優(yōu)選為約0.1至lmg之間，最優(yōu)選為每500pl溶液含約300昭至800嗎。如果未明確說明，術(shù)語(yǔ)"約"指給定值的+/-10%。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)各種因素調(diào)整肽的實(shí)際用量，例如，患者個(gè)體的免疫狀態(tài)和/或特定類型癌癥中存在的TUMAP量。較之以前已知的組合物，本發(fā)明的藥物組合物提供了具有極高的溶解性和凍干粉潤(rùn)濕性的制劑。這可以通過使用特別的賦形劑組合物實(shí)現(xiàn)。因此，可開發(fā)含有SEQIDNO:1至10或SEQIDNO:l至11及其變體的本發(fā)明藥物組合物，其在(-20。C、+5。C、+25°C)溫度下具有優(yōu)異的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，而且容易再溶解。術(shù)語(yǔ)"儲(chǔ)存穩(wěn)定性"指兩年內(nèi)副產(chǎn)物的百分比上升不超過5%。此外，術(shù)語(yǔ)"穩(wěn)定性"指特定性質(zhì)(如溶解性、溶液的光學(xué)澄清度、溶液中微粒的數(shù)目)在該期限內(nèi)無(wú)可覺察的改變。術(shù)語(yǔ)"容易再溶解"指通過使用緩沖液或其它賦形劑，凍干粉可以在不使用超聲勻漿的情況下在數(shù)秒到兩分鐘內(nèi)完全溶解。此外，通過皮內(nèi)給藥和較不優(yōu)選的皮下給藥，該組合物可很容易地給予需要治療的患者。所得溶液的pH值應(yīng)在pH2.7至pH9之間。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的藥物組合物可能包括構(gòu)成骨架的糖、糖醇、氨基酸如甘氨酸、精氨酸、谷氨酸等。糖可能是單糖、二糖或三糖。這些糖可以單獨(dú)使用，也可以與糖醇聯(lián)合使用。糖包括作為單糖的葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖或山梨糖，作為二糖的蔗糖、乳糖、麥芽糖或海藻糖，以及作為三糖的棉子糖。糖醇例如甘露糖。優(yōu)選的配料為蔗糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、甘露醇和/或山梨糖醇，更優(yōu)選甘露醇。此外，本發(fā)明的藥物組合物還可包括生理耐受性好的賦形劑(見RaymondRowe、PaulSheskey和SianOwen編輯的《藥學(xué)賦形劑手冊(cè)》(HandbookofPharmaceuticalExcipients)第5版，PharmaceuticalPress出版(2006年))，例如抗氧化劑如抗壞血酸或谷胱甘肽，防腐劑如苯酚、m-甲酚、對(duì)經(jīng)基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯，氯丁醇、硫柳汞或苯扎氯銨，穩(wěn)定劑和骨架形成劑如蔗糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、甘露糖、甘露醇和/或山梨糖醇、甘露醇和/或乳糖，增溶劑如聚乙二醇(PEG)，即PEG3000、3350、4000或6000，或環(huán)糊精，即羥丙基-13-環(huán)糊精、磺丁乙基-fi-環(huán)糊精，或Y環(huán)糊精，或右旋糖苷，或泊洛沙姆，即泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、或吐溫2(f、吐溫80@。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的藥物組合物包括一或多種選自抗氧化劑、骨架形成劑和穩(wěn)定劑的耐受性好的賦形劑。本發(fā)明涉及一個(gè)發(fā)現(xiàn)，即制劑如果包括至少兩組根據(jù)SEQIDNO:l至10或SEQIDNO:l至1I的肽、及成一定比的甘露醇和泊洛沙姆188，則該組合物的穩(wěn)定性將大為提高，不使用超聲處理的情況下即Rj'溶解。且溶解只需要幾秒鐘。按照該凍干劑的說明書，在用4.2%的碳酸氫鈉溶液溶解后，視覺可觀察到溶液由澄清變?yōu)槿榘咨?。本發(fā)明的該藥物組合物的重溶解特征在-20。C、+5°C和+25。C下儲(chǔ)存2年后仍可重現(xiàn)。此外，本發(fā)明涉及的制劑包括至少四組根據(jù)SEQIDNO:11至SEQIDNO:22、SEQIDNO:11至SEQIDNO:23、SEQIDNO:12至SEQIDNO:22或SEQIDNO:12至SEQIDNO:23的肽，其中成一定比的甘露醇和泊洛沙姆188使得組合物易溶解。按照該凍干劑的說明書，在用4.2%的碳酸氫鈉溶液溶解后，視覺可觀察到溶液由澄清變?yōu)槿榘咨Ｋ鲋苿┲械碾脑?20°C、十5。C和+25。下儲(chǔ)存至少3個(gè)月后仍穩(wěn)定。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的藥物組合物包括成一個(gè)特定比的肽:甘露醇:吐溫8(f(重量比)，比例范圍是1:2:1.5至1:8:2.2之間(含)。本發(fā)明包括的其它優(yōu)選比見下面的圖表。一個(gè)尤其優(yōu)選的比例是1:5:2。另一個(gè)尤其優(yōu)選的比例是1:8:2。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的藥物組合物包括成一個(gè)特定比的肽:甘露醇:泊洛沙姆188(重量比)，比例范圍是1:5:1.5至1:8:2.2之間(含)。本發(fā)明包括的其它優(yōu)選比例見下面的圖表。一個(gè)優(yōu)選的比例是1:5:1。另一個(gè)尤其優(yōu)選的肽:甘露醇:泊洛沙姆188的重量比是1:8:2。一個(gè)更優(yōu)選的組合物包括肽:甘露醇:泊洛沙姆188@重量比為1:5:2的混合物(見實(shí)施例2)。另一個(gè)比例包括肽:甘露醇:泊洛沙姆188的重量比為1:0:2至1:2:2.2。本發(fā)明的其它實(shí)施例包括下列重量比:<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>151.7181.711.8181.8151.9-.…—_1——81.915218212.1182.112.2182.2161.515.51,5161.615.51.6161.715.51.7161.815.51.8161.915.51.916215.52162.115.52.1162.215.52.2171.516.51.5171.616.51.6171.716.51.7171.86.51,8171.916.51.91726.52172.116.52.1172.216.52.217.51.510217.51.6102.17.51.7102.27.51.8優(yōu)選制劑MA95017.51.9150,526<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>本發(fā)明的藥物組合物可被凍干。通過加入含水溶劑，所得的凍干劑可溶解于一含水組合物中。優(yōu)選地，該含水組合物可直接通過非腸道給予患者。因此本發(fā)明的乂一個(gè)實(shí)施例就是上面所公開的制劑的一含水藥物組合物，其可通過上述的凍干劑溶解于含水溶劑中獲得。靜脈內(nèi)和肌肉內(nèi)給藥可接受的pH范圍是pH2-12，但皮下給藥的pH范圍則降至2.7-9.0，因?yàn)轶w內(nèi)稀釋的速率降低，導(dǎo)致其在注射部位放射的可能性增大。StrickleyRobertG,Pharm.Res.,21,NO:2，201-230(2004)。本發(fā)明含水組合物優(yōu)選的pH值為7-9，更優(yōu)選的pH值為8-9，更加優(yōu)選的pH值為8.3-8.7。本發(fā)明的藥物組合物生理耐受性好，容易生產(chǎn)，劑量精確，其濃度、分解產(chǎn)物和集合物在儲(chǔ)存時(shí)間內(nèi)具有優(yōu)良的穩(wěn)定性。在-20。C的冷凍機(jī)中，在+2-8。C的冰箱中，甚至在室溫(+25。C)和60%的相對(duì)濕度下，該制劑都可在2年內(nèi)穩(wěn)定儲(chǔ)存。供體內(nèi)使用的本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選為無(wú)菌制劑。本發(fā)明也提供一種提高用藥對(duì)象免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括向用藥對(duì)象給予本發(fā)明藥物組合物，其中所述肽及其變體或鹽以有效量給藥，優(yōu)選能引起所述免疫反應(yīng)的有效量。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的用途，將該藥物給予用藥對(duì)象以引起抗癌免疫反應(yīng)。還包括使用本發(fā)明藥物組合物治療癌癥，優(yōu)選為腎癌，以及用其制造藥物，給予用藥對(duì)象以引起抗癌免疫反應(yīng)，從而治療癌癥。該藥物組合物所用的肽優(yōu)選為純的或基本為純，且希望是基本均勻的(即不含帶雜質(zhì)的肽或蛋白質(zhì)等)。"基本為純"指HPLC檢測(cè)的純度至少為90%,優(yōu)選為至少95%的肽制劑。"基本均勻"的制劑指該制劑總重量的至少99%是肽的肽制劑。本發(fā)明還包括一個(gè)藥劑盒，其包括(a)—個(gè)裝有上述的藥物組合物溶劑或凍干劑的容器(b)可選地，一個(gè)裝有該凍干制劑稀釋劑或重溶復(fù)原溶液的第二容器；和(c)可選地，關(guān)于(1)使用該溶液，或(2)重溶復(fù)原和/或使用該凍干制劑的說明書。該藥劑盒可能還包括一或多個(gè)(1)緩沖液、(2)稀釋劑、(3)過濾器、(4)針頭或(5)注射器。該容器優(yōu)選為瓶、小瓶、注射器或試管，也可為多用途容器。該藥物組合物優(yōu)選為凍干劑。本發(fā)明的藥劑盒優(yōu)選包括一種置于合適容器中的本發(fā)明凍干制劑及其重溶復(fù)原和/或使用的說明書。合適的容器包括瓶、小瓶(如雙室小瓶)、注射器(如雙室注射器)和試管。該容器可由多種材料，如玻璃或塑料形成。優(yōu)選地，該藥劑盒和/或容器中裝有對(duì)于或關(guān)于該容器的說明書以指導(dǎo)重溶復(fù)原和/或使用。例如，標(biāo)簽可能指出凍干制劑按上述方法重新溶解至肽濃度。標(biāo)簽可能還會(huì)指出該制劑可用于或設(shè)計(jì)用于皮下給藥。容納該制劑的容器可為一多用小瓶，其允許重復(fù)(例如2-6次給藥)給予該重溶復(fù)原的制劑。該藥劑盒還可包括一含有合適稀釋劑(如碳酸氫鈉溶液)的第二容器。將稀釋劑和凍千制劑混合后，重溶復(fù)原的制劑中最終的肽濃度優(yōu)選為至少0.15mg/mL/肽(=75嗎)且不超過3mg/mL/肽(=1500(ig)。該藥劑盒還可包括從商業(yè)和用戶角度所需的其它材料，包括其它緩沖劑、稀釋劑、過濾器、針頭、注射器和含用藥指導(dǎo)的藥品包裝說明書。本發(fā)明的藥劑盒可具有容納本發(fā)明藥物組合物制劑的單獨(dú)容器，含或不含其它組分(如其它化合物或這些化合物的藥物組合物)，或者可以每種組分各有不同的容器。優(yōu)選地，本發(fā)明藥劑盒包括一種包裝的本發(fā)明制劑，其與一第二化合物(例如佐劑如GM-CSF、化療劑、天然產(chǎn)物、激素或拮抗劑、抗血管生產(chǎn)劑或抑制劑、凋亡誘導(dǎo)劑或螯合劑)聯(lián)合給藥。該藥劑盒中的各組分可以預(yù)先混合，或者在給予患者之前，每個(gè)組分容納在單獨(dú)的不同容器中。該藥劑盒中的各組分可以一種或多種液體溶液的形式提供，優(yōu)選為水溶液，更優(yōu)選為無(wú)菌水溶液。該藥劑盒中的各組分也可以固體形式提供，其在加入合適的溶劑時(shí)可轉(zhuǎn)化為液體，這些溶劑優(yōu)選為裝在另一個(gè)不同的容器中。治療藥劑盒的容器可以是小瓶、試管、燒瓶、瓶、注射器，或其它任何可容納固體或液體的裝置。通常情況下，當(dāng)組分超過一種時(shí)，該藥劑盒將包括一第二小瓶或其它容器以便單獨(dú)配劑。該藥劑盒也可包括容納藥學(xué)可接受液體的另一個(gè)容器。優(yōu)選地，治療藥劑盒包括一裝置(如一或多個(gè)針頭、注射器、滴管、移液器等)，使得該藥劑盒組件的本發(fā)明試劑可以給藥。29本制劑的肽可通過任何可接受的途徑給藥，例如口服(腸衣)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或透皮。優(yōu)選地，給藥為皮下，最優(yōu)選為皮內(nèi)。也可通過輸液泵給藥。分析測(cè)試步驟用RP-HPLC分析色譜法來進(jìn)行定性分析，測(cè)定純度和肽含量。檢測(cè)波長(zhǎng)是220nm。穩(wěn)定性測(cè)試(試驗(yàn)制劑的穩(wěn)定性)a)腎細(xì)胞癌疫苗用HPLC法來測(cè)試各種凍干劑中各肽在+25。C和+40。C下的穩(wěn)定性。壓力測(cè)試在+25。C和+40。C下進(jìn)行，以測(cè)試制劑在環(huán)境溫度和更高溫度下更穩(wěn)定的趨勢(shì)。根據(jù)SEQIDNOs:1至10的肽在無(wú)任何賦形劑，并加入甘露醇和泊洛沙姆188(LutrolF68)或吐溫8(f的情況下凍干。生產(chǎn)下列試驗(yàn)制劑并用HPLC法來評(píng)價(jià)其在+25。C和+40。C下的穩(wěn)定性制劑l:不含任何賦形劑的肽；制劑2:肽:甘露醇丄utrolF68⑧(泊洛沙姆188)(重量比1:5:2)制劑3:肽:甘露醇:吐溫80(重量比1:5:2);和制劑4:肽:甘露醇:吐溫8(f(重量比1:5:1).在儲(chǔ)存于人工氣候室之前，已經(jīng)對(duì)每種制劑進(jìn)行初始HPLC測(cè)量。為此，將兩個(gè)小瓶中的物質(zhì)完全溶解于30%乙酸，并由RP-HPLC進(jìn)行重復(fù)測(cè)定。為確保單次測(cè)量的相似性，使用13-萘基丙氨酸作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)并與肽一起凍干。在7、14、21和28天后，將另外的兩個(gè)小瓶從人工氣候室中取出評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性。通過對(duì)一個(gè)小瓶的重復(fù)測(cè)定來評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)。對(duì)于一個(gè)時(shí)間點(diǎn)和溫度，使用兩個(gè)獨(dú)立的小瓶來得到共計(jì)四個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。用這些數(shù)值來計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差，并在相關(guān)圖表中以誤差棒顯示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，含有甘露醇和Lutrol68@的制劑中的每種肽的穩(wěn)定性與不含任何賦形劑的制劑所得的結(jié)果具有可比性。含有吐溫80②的制劑尤其在+40。C時(shí)IMA-RGS-OOl的降解增強(qiáng)，尤其是肽IMA-ADF-OOl的信號(hào)增加。該增加可能是由肽降解帶來的雜質(zhì)一起洗脫造成的。b)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞癌疫苗測(cè)試各種凍干劑混合物中肽制劑的溶解度和穩(wěn)定性。根據(jù)SEQIDNOs:11至23的肽在無(wú)任何賦形劑，并加入甘露醇/泊洛沙姆188(Lutrol30F68)和甘露醇/吐溫8(f的情況下凍干。生產(chǎn)下列試驗(yàn)制劑，并在+25。C和+40。C下，測(cè)試其在不同溶液中的溶解性和穩(wěn)定性。制劑l:不含任何賦形劑的肽；制劑2:肽:甘露醇:1^加^68@(泊洛沙姆188)(重量比1:5:2)制劑3:肽:甘露醇:吐溫8(f(重量比1:5:2)制劑的穩(wěn)定性都很好。制劑2的溶解性最好，呈無(wú)色澄清混合物，但制劑2在更高濃度情況下有輕微沉淀。制劑1完全不能溶解。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，含有甘露醇/LutrolF68⑧和甘露醇/吐溫8(f制劑中的每種肽的穩(wěn)定性與不含任何賦形劑的制劑所得的結(jié)果具有可比性。不含任何賦形劑的制劑在合適的溶液，如碳酸氫鈉(4.2%)溶液中也不溶解。制備IMA901的效價(jià)計(jì)算測(cè)試賦形劑泊洛沙姆188和甘露醇對(duì)T細(xì)胞的引發(fā)效率。IMA卯1制劑中穩(wěn)定的賦形劑是泊洛沙姆188(LutrolF68⑧)和甘露醇。這兩種賦形劑在第1階段小試中未包含在IMA901制劑中，但包含在第2階段小試制劑中，以提高IMA901的溶解性和用中穩(wěn)定性。在該項(xiàng)研究中，在鼠類模型肽免疫之后，通過一個(gè)小鼠模型測(cè)試這些物質(zhì)對(duì)T細(xì)胞引發(fā)效率的影響。未觀察到泊洛沙姆188(LutrolF68)和甘露醇有毒性效應(yīng)。免疫后九天，通過四聚體染色和流式細(xì)胞儀間接體內(nèi)分析T細(xì)胞引發(fā)。免疫溶液中加入泊洛沙姆⑧(LutrolF68)/甘露醇不會(huì)改變CD8+T細(xì)胞引發(fā)效率。測(cè)試原理免疫引發(fā)CD8+T細(xì)胞，免疫原性的H2-Kb結(jié)合肽Ova257.264(SIINFEKL)與通常用于小鼠免疫的佐劑(CpG脫氧寡核苷酸)一起隨4.2%的重碳酸緩沖液皮內(nèi)注射入8-12周大的雌性小鼠中(C57BL/6品系，每組3只)。比較含和不含泊洛沙姆188(Lutro1F68(16.5mg/ml))和甘露醇(41.3mg/ml)的注射液。賦形劑濃度與IMA901注射液中的相同。陽(yáng)性對(duì)照組用含有經(jīng)Titermaxclassic(Sigma-Aldrich)乳化的CpG的肽溶液進(jìn)行皮下免疫。四聚體染色9天后，殺死小鼠，用四聚體染色和流式細(xì)胞儀間接體內(nèi)分析脾臟中的0^257.264-特異T細(xì)胞。四聚體技術(shù)使得能夠特異靈敏地檢測(cè)帶有相容T細(xì)胞受體的T細(xì)胞。結(jié)果在注射部位和全身均未觀察到泊洛沙姆188(LutrolF68BASF,Ludwigshafen,Germany)/甘露醇的毒性。相對(duì)于陰性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組、CpG組和CpG/泊洛沙姆188/甘露醇組顯示出明顯更高的肽特異性T細(xì)胞頻率(p<0.05)。CpG組和CpG/泊洛沙姆188/甘露醇組無(wú)顯著差異。五天體外肽刺激后，通過對(duì)增殖肽-特異性細(xì)胞的四聚體染色，排除人工觀察到陽(yáng)性人群的可能性(未顯示數(shù)據(jù))?？傊?，泊洛沙姆188(Lu加lF68)/甘露醇在免疫雞尾酒中的存在并未改變小鼠中肽引發(fā)的免疫反應(yīng)，因此，預(yù)期泊洛沙姆188(LutrolF68⑧)和甘露醇對(duì)基于肽的免疫療法的功效和安全性通常無(wú)反作用或不利影響。材料和方法用于生產(chǎn)不同制劑的肽由瑞士BachemAG合成和供應(yīng)。實(shí)施例實(shí)施例1:每種肽的儲(chǔ)備液是通過將肽根據(jù)其溶解特性溶解在合適的溶劑中制得的(見表2)。將1.47mL高濃縮的肽溶液(肽5至10)與7.34mL肽溶液1至4合并，然后加入1.47mL10%乙酸。該混合物渦旋2分鐘，水浴超聲1分鐘。將得到的澄清溶液轉(zhuǎn)移約1mL于玻璃小瓶，再加入19.2mg甘露醇和50吐溫80儲(chǔ)備液(將77mg吐溫8(f溶解于30%的乙酸溶液中)。幾分鐘后，將該溶液在-40。C下冷凍，0.06mbar下凍干14小時(shí)，再在0.003mbar下干燥6小時(shí)(見表3)。表2:實(shí)施例l所用的肽肽SEQIDNO:肽肽含量(。/。)含量[mg]溶劑mlj4IMA-CCN-00195.516.657.57(50%HAc)6IMA-GUC陽(yáng)OOl88.817.727.50(卯％HAc)3IMA-ADF-00191.717.357.58(10%HAc)2IMA-ADF-00294.016.957.58(10%HAc)10IMA-RGS-00189.417.661.50(10%HAc)8IMA-MET-00191.817.681.55(50%HAc)9IMA-MUC-00190.617.841.54(10%HAc)1IMA-MMP-00189.617.921.53(WFI)4IMA-APO-00192.117.761.56(WFI)32IMA-K67-00192.417.221.52(WFI)表3:實(shí)施例1中的低壓凍干法參數(shù)處理時(shí)間冷凍3:00初次干燥0:10初次干燥3:00初次干燥10:00初次干燥6:00二次干燥3:00二次干燥6:00真空度atm0.06mbar0.06mbar0.06mbar0.06mbar0.003mbar0.003mbar溫度-40°C-39。C-20。C十OT+20QC+20°C+25°C實(shí)施例2:生產(chǎn)了一個(gè)GMP批，包括2.000個(gè)小瓶，每瓶含有的每種肽為578|ig，還含有甘露醇和泊洛沙姆188。該制劑包括重量比為1:5:2的肽、甘露醇和泊洛沙姆188。根據(jù)表4中列出的量，稱取每種凍干肽，置于單獨(dú)的玻璃容器中。稱取后，將所有的肽溶解于一指定溶劑中。表4:實(shí)施例2所用的肽肽SEQ肽凈含量lmg]肽含量1%]總含量[mg]IDNO:溶劑[ml]4IMA-CCN-0011156.0091.6%1262.01550(50o/oHAc)6IMA-RGS-0011156.0083.2%1389.42110(10%HAc)3IMA誦GUC-OOl1156.0092.9%1244.35550(卯％HAc)2IMA-MET-0011156.0092.6%1248.38110(50%HAc)10IMA-ADF-0011156.0093.3%1239.01540(10%HAc)8IMA-ADF-0021156.0095.5%1210.47540(10%HAc)9IMA-麗C-OOl1156.0087.2%1325.69110(10%HAc)1IMA-MMP-0011156.0088.6%1304.74110(WFI)4IMA-APO-0011156.0095.0%1216.84110(WFI)337IMA-K67-0011156.0088.3%1309.17110(WFI)由于肽的溶解性不同，不得不按照表4中提供的順序從肽1開始將其溶解?？紤]到肽溶解性的差異和本體溶液的最后填充體積，采用不同量和濃度的乙酸溶液和注射用水(WFI)來溶解肽。為提高溶解性，每個(gè)小瓶均劇烈振蕩最多5分鐘，如果必要再超聲最多5分鐘。采用的量和濃度列于表4。一旦肽已容易溶解，應(yīng)將溶液按照表4中給出的順序從1號(hào)肽開始混合。將溶液收集到一個(gè)無(wú)菌的玻璃容器中。用105ml的乙酸溶液(30%)潤(rùn)洗各肽小瓶。最后，將該溶液加入肽溶液的混合物中并攪拌五分鐘。將23.1g泊洛沙姆188(LutrolF68)和57.8g甘露醇加入到肽混合物中，將整個(gè)溶液攪拌五分鐘。含有全部10種肽和賦形劑的本體溶液經(jīng)孔徑尺寸為0.22pm的過濾器進(jìn)行無(wú)菌過濾。將1.485ml溶液在無(wú)菌條件和惰性氮?dú)鈿夥罩凶⑷胨葴缇?R玻璃小瓶中，預(yù)密封并轉(zhuǎn)移入冷凍干燥機(jī)進(jìn)行凍干操作。該凍干過程(見表5)包括在-45。C下冷凍小瓶，逐步升高溫度至+20。C(主要干燥階段)，以及在+25。C下的最后干燥步驟。干燥完成后，用已經(jīng)無(wú)菌過濾的干燥氮?dú)鈱⒗鋬龈稍餀C(jī)降到大氣壓。表5:實(shí)施例2中的低壓凍干法參數(shù)No.步驟時(shí)間[min]T[。C]真空度[mbar]1裝填-452冷凍180-45主干燥15-451,50E-014主干燥300-201,50E-01主干燥48001，50E-016主干燥360201,50E-01主干燥60201,50E-018干燥后1525,00E-039干燥后180205,00E-0310干燥后120255,00E-0311干燥后240255,00E-033412預(yù)通氣1258,00E+0213密封5258，00E+0214通入N2125l，00E+0315儲(chǔ)存35l，00E+03再溶解步驟上述制劑溶解于700pi碳酸氫鈉(4.2%)中用于臨床試驗(yàn)。取下小瓶上的塑料帽。再溶解前至少30分鐘，打開包裝，將碳酸氫鈉(4.2%)從冰箱中取出，使其在注射前達(dá)到室溫。準(zhǔn)備好用于重溶復(fù)原的注射器和針頭。無(wú)菌操作取出700pL稀釋劑用于凍干劑的重溶復(fù)原。為溶解該凍干劑，應(yīng)劇烈搖動(dòng)該小瓶和稀釋劑1分鐘，檢查溶液是否澄清，否則繼續(xù)搖動(dòng)直到溶液澄清。GM-CSF注射后10至30分鐘，使用一新注射器在同一位置皮內(nèi)給予500pL重溶復(fù)原的制劑。給藥應(yīng)在重溶復(fù)原后1小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行。重溶復(fù)原后，溶解的凍干粉可在室溫?zé)o菌條件下儲(chǔ)存達(dá)1小時(shí)。重溶復(fù)原后的穩(wěn)定性測(cè)試顯示大多數(shù)肽在重溶復(fù)原后仍然足夠穩(wěn)定。但有兩種肽有所降低，即IMA-CCN-001和IMA-RGS-OOl。(見表6)。因?yàn)檫@些肽含有半胱氨酸殘基，二聚反應(yīng)會(huì)隨著時(shí)間發(fā)生。表6:以4.2y。碳酸氫鈉溶液進(jìn)行重溶復(fù)原后的用中穩(wěn)定性HPLC分析結(jié)果。含和不含賦形劑的制劑之間比較。肽制劑初始*1h2h3h4h5h6hADF-00無(wú)賦形劑100.0102.4102.4100.0n.d.n.d.n.d.1+甘露醇/泊洛100.099.699.6100.100.99.9101.8沙姆78ADF-00無(wú)賦形劑100.0100.9100.097.2n.d.n.d,n.d.2+甘露醇/泊洛跳o99.9100.0101.1101.299.9101.9沙姆APO-00無(wú)賦形劑100.0100.097.497.4n,d..n.d.n.d.1+甘露醇/泊洛100.099.899.8100.7100.999.6101.5沙姆CCN-00無(wú)賦形劑100.082.872.163.3n.d.n.d.n.d1+甘露醇/泊洛100.095.692.291.389,286.185.9沙姆GUC-00無(wú)賦形劑100.0100.0100.098.6n.d.n.d.n.d.1+甘露醇/泊洛100.099.799.5100.6100.899.7101.6沙姆K67-001無(wú)賦形劑100.0100.899.297.5n.d.n.d.n.d.+甘露醇/泊洛100.099.8100.4101.6101.8100.6102.5沙姆MET-00無(wú)賦形劑■100.0100.099.296.7n.d.n.d.n.d.1+甘露醇/泊洛100.099.899.8101.0101.199.8101.7沙姆MMP-00無(wú)賦形劑100.098.697.195.7n.d.n.d.n.d.1+甘露醇/泊洛100.099.599.3100.2100.498.9100.9沙姆MUC-00無(wú)賦形劑100.0100.899.296.6n.d.n.d.n.d.1+甘露醇/泊洛100.099.899.6100.6100.699.5101.3沙姆RGS-001無(wú)賦形劑100.0卯.977.864.6n.d.n.d.n.d.+甘露醇/泊洛100.097.995.594.291.688.086.8沙姆*初始值設(shè)定為100%。再溶解后的第一次HPLC。在小鼠模型中評(píng)價(jià)不同pH值(pH8.5左右)和高容量碳酸鹽緩沖液對(duì)肽免疫成功性的影響。在不同注射液中使用標(biāo)準(zhǔn)免疫原性模型肽，用標(biāo)準(zhǔn)"Cr釋放法測(cè)試引發(fā)效率。四聚體染色后用流式細(xì)胞儀分析來驗(yàn)證結(jié)果?？偨Y(jié)而言，在pH7.5、8.5(IMA901稀釋劑的pH)和pH9.5下的皮內(nèi)免疫的引發(fā)效率未檢測(cè)到顯著差異。此外，相對(duì)于等滲注射緩沖液，高離子強(qiáng)度未降低觀察到的免疫反應(yīng)。在以pH7.5、8.5注射液、及以IMA901稀釋劑進(jìn)行免疫時(shí)未觀察到毒性副作用，但是在注射液為pH9.5時(shí)毒性副作用變得明顯(在注射部位皮膚發(fā)生局部壞死性病變)。這些結(jié)果支持所選緩沖液為IMA901的合適稀釋劑。36實(shí)施例3:每種肽的儲(chǔ)備液是通過將肽根據(jù)其溶解特性溶解在合適的溶劑中制得的(見表6)。表6:實(shí)施例3所用的肽肽NO:肽肽純度(％)含量[mgl溶劑[mll23IMA-CHI-00199，723,1911,560(穿/oHAc)15IMA-FABP7-00192,025,134,624(卯o/oHAc)17IMA-MET-00593,124,833,853(50%HAc)18IMA-NLGN4X-00190,325,605,780(50%HAc)22IMA-TNC-00194,024,605，780(30%HAc)20IMA-PTP-00396,324,012,890(20%HAc)12IMA-BCA-00297,723,663,303(10%HAc)13IMA-BIR-00296,024,082，312(腦HAc)14IMA-CSP-00198，123,575,780(10%HAc)16IMA-IGF2BP3-00194,624,442,890(腦HAc)19IMA-NRCAM-00196，024,082,312(腦HAc)21IMA-PTP-00597,023,842，312(10%HAc)11IMA-HBV-00199,023,354,624(WFI)-/-Rinsingvolume-/--/-1，800(30%HAc)-/-Fillupvolume-/--/-0,180(WFI)由于肽的溶解性不同，必須按照表4中提供的順序從肽1開始將其溶解。考慮到肽溶解性的差異和本體溶液的最后填充體積，采用不同量和濃度的乙酸溶液和注射用水(WFI)來溶解肽。為提高溶解性，每個(gè)小瓶均劇烈振蕩最多5分鐘，如果必要再超聲最多5分鐘。采用的量和濃度列于表6。一旦肽已經(jīng)容易，應(yīng)將溶液按照表6中給出的順序從1號(hào)肽開始混合。將溶液收集到一個(gè)帶有攪拌棒的玻璃容器中。最后，將該溶液加入肽溶液的混合物中并攪拌至少五分鐘。將6011g泊洛沙姆188(LutrolF68)和15028mg甘露醇加入到肽混合物中，將整個(gè)溶液攪拌五分鐘。含有全部13種肽和賦形劑的本體溶液經(jīng)孔徑尺寸為0.22的過濾器進(jìn)行無(wú)菌過濾。將1,500ml溶液裝入2R玻璃小瓶中，預(yù)密封，轉(zhuǎn)移入冷凍干燥機(jī)中凍干。該凍干過程(見表7)37包括在-45。C下冷凍小瓶，逐步升高溫度至+20。C(主要干燥階段)，以及在+25。C下的最后干燥步驟。干燥完成后，用氮?dú)鈱⒗鋬龈稍餀C(jī)降到大氣壓。表7:實(shí)施例3中的低壓凍干法參數(shù)No.步驟時(shí)間[min]T[。C]真空度[mbar]1裝填-452初次干燥10-450,50E-013初次干燥360-200,50E-014初次干燥48000，50E-01初次干燥360200,50E-016初次干燥60200,50E-01二次干燥15205,00E-038二次干燥180205,00E-039二次干燥120255，00E-0310二次干燥240255'00E陽(yáng)0311通入N2125l，00E+0312密封25l,00E+03再溶解步驟:上述制劑溶解于700^碳酸氫鈉(4.2%)中用于臨床試驗(yàn)。為溶解該凍干劑，應(yīng)劇烈搖動(dòng)該小瓶和稀釋劑1分鐘，檢査溶液是否澄清，否則繼續(xù)搖動(dòng)直到溶液澄清。應(yīng)在重溶復(fù)原后1小時(shí)之內(nèi)使用該500nL溶液。在重溶復(fù)原后，溶解的凍干粉可在室溫?zé)o菌條件下儲(chǔ)存達(dá)1小時(shí)。重溶復(fù)原后的穩(wěn)定性測(cè)試顯示大多數(shù)肽在重溶復(fù)原后仍然足夠穩(wěn)定(見表8)。表8:以4.2y。碳酸氫鈉溶液進(jìn)行重溶復(fù)原后的用中穩(wěn)定性HPLC分析結(jié)果。含和不含賦形劑的制劑之間比較。肽初始2h4h6h肽[%肽[%肽[%]肽[%NRCAM-001+甘露醇/泊洛沙姆100,099.9100.099.5無(wú)賦形劑00.099.8100.295.6BIR-002+甘露醇/泊洛沙姆100.0100.8101,2100.9無(wú)賦形劑100.0100.6101.496.2CSP-001+甘露醇/泊洛沙姆100.0100.0100.199.6無(wú)賦形劑100.099.299.795.0PTP-003+甘露醇/泊洛沙姆100.0100.3100.5100.1無(wú)賦形劑100.0100.4100.996.1IGF2BP3-001+甘露醇/泊洛沙姆跳o100.4100.6100.7無(wú)賦形劑100.0100.0101.296.0PTP-005+甘露醇/泊洛沙姆100.0跳l100,399.8無(wú)賦形劑100.099.9100.495.8TNC-001+甘露醇/泊洛沙姆100.0100.5100.6100.2無(wú)賦形劑100.0100.0100.495.7MET-005+甘露醇/泊洛沙姆跳o100.5100.7100.4無(wú)賦形劑100.0跳3跳796.0FABP7-001+甘露醇/泊洛沙姆100.0100.9100.7跳6無(wú)賦形劑100.0100.5100.996.3NLGN4X-001+甘露醇/泊洛沙姆100.0100.8跳9100.5無(wú)賦形劑100.099.9跳595.7HBV-001+甘露醇/泊洛沙姆100.0100.3鳳6100.3無(wú)賦形劑100.0100.2100.695.8CHI-001+甘露醇/泊洛沙姆100.0100.0跳7100.2無(wú)賦形劑100,0102.2101.390.6BCA-002+甘露醇/泊洛沙姆100.099.899.698.9無(wú)賦形劑100.099.9100.195.4實(shí)施例4:每種肽的儲(chǔ)備液是通過將肽根據(jù)其溶解特性溶解在合適的溶劑中制得的(見表9)。表9:實(shí)施例4所用的肽肽SEQIDNO:肽肽純度(％)含量[mg]溶劑[ml23IMA-FABP7-00192,028,274,335(卯。/。HAc)15IMA-MET-00594,027,674,335(50%HAc)17IMA-NLGN4X-00191,028,586,503(50%HAc)18IMA-TNC-00194，027,673,251(500/oHAc)22IMA-PTP-00397,026,813,251(20%HAc)20IMA-BCA-00298,026,543,251(腦HAc)12IMA-BIR-00296,027,093,251(腦HAc)13IMA-CSP-00191,028,585,202(10%HAc)14IMA-IGF2BP3-00195,027,385,202(腦HAc)16IMA-NRCAM-00196,026,543,251(腦HAc)19IMA-PTP-00597,026,813,251(腦HAc)21IMA-HBV-00199,026,275,202(WFI)-/-潤(rùn)洗體積-/--/-3,375(30%HAc)-/-填充體積-/--/-13,839(WFI)由于肽的溶解性不同，不得不按照表4中提供的順序從肽1開始將其溶解?？紤]到肽溶解性的差異和本體溶液的最后填充體積，采用不同量和濃度的乙酸溶液和注射用水(WFI)來溶解肽。為提高溶解性，每個(gè)小瓶均劇烈振蕩最多5分鐘，如果必要再超聲最多5分鐘。采用的量和濃度列于表9.一旦肽已容易溶解，應(yīng)將溶液按照表9中給出的順序從SEQIDNO:23肽開始混合。將溶液收集到一個(gè)帶有攪拌棒的玻璃容器中。最后，將該溶液加入肽溶液的混合物中并攪拌五分鐘。將624.2mg泊洛沙姆188(LutrolF68)和15606mg甘露醇加入到肽混合物中，將整個(gè)溶液攪拌五分鐘。含有全部12種肽和賦形劑的本體溶液經(jīng)孔徑尺寸為0.22pm的過濾器進(jìn)行無(wú)菌過濾。將1.500ml溶液裝入2R玻璃小瓶中，預(yù)密封，轉(zhuǎn)移入冷凍干燥機(jī)中凍干。該凍干過程(見表10)包括在-45。C下冷凍小瓶，逐步升高溫度至+20。C(主要干燥階段)，以及在+25。C下的最后干燥步驟。干燥完成后，用干燥氮?dú)鈱⒗鋬龈稍餀C(jī)降回到大氣壓。表10:實(shí)施例4中的低壓凍干法參數(shù)No.步驟時(shí)間[min]T[。C]真空度[mbar]1裝填5-45402初次干燥10-450，50E-013初次干燥360-200，50E-014初次干燥48000,50E-01初次干燥360200,50E-016初次干燥60200,50E-01二次干燥15205，00E-038二次干燥180205，00E-039二次干燥120255,00E-0310二次干燥240255,00E-0311通入N2125l,00E+0312密封25l,00E+03不同溫度下的穩(wěn)定性測(cè)試顯示，即使在壓力(+25°C)條件下，所有的肽都充分穩(wěn)定'表11)。表11:在+25^>C+/-2°C下制劑中肽3個(gè)月穩(wěn)定性的HPLC分析結(jié)果肽初始[%1M[%初始2M[%初始3M[%初始]NRCAM-001100.097.9096.7397.59BIR-002100.097.4996.2498.93CSP-001100.098.0496.9998.71PTP-003100.098.2997.1198.29IGF2BP3-001100.098.0196.7797.34PTP-005100.098.1697.1098.30TNC-001脆097.8696.8097.21MET-005100.097.4996.1397.21FABP7-001跳098.4397.7198.67NLGN4X-001100.097.卯96.3096.41HBV-001100.097.8396.4797.50BCA德100.098.2097,0597.88表12:在+5。C+/-3°C下制劑中肽3個(gè)月穩(wěn)定性的HPLC分析結(jié)果41肽NRCAM-001BIR-002CSP-001PTP-003IGF2BP3-001PTP-005TNC-001MET-005FABP7-001NLGN4X-001HBV-001BCA-002初始[%100.0100,0100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.01M[%初始99.1398.5398.9999.0799.0098.9399.0299.0699.0899.1298.8799.132M[%初始]98.1797.2898.0597.9597.9297.7998.1097.9298.1598.2497,7698.043M1%初始98.79100.0199.8198.6898.5798.6798.7298.5998.6698,8498.4798.73表13:在-20。C+/-5°C下制劑中肽3個(gè)月穩(wěn)定性的HPLC分析結(jié)果肽NRCAM-001BIR-002CSP-001PTP-003IGF2BP3-001PTP-005TNC-001MET-005FABP7-001NLGN4X-001HBV-001BCA-002初始[%]100.0跳o100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.01M[%初始]99.2398.4398.9999.1199.1098.9999.0199.1499.0999.0598.9399.172M％初始197.8696.9897.6197.4897.5497.4197.6197.5497.6097.6097,3997.613M[%初始98.91100.1499.6198.5798.4298.3498.5799.0098.3998.6298.3498.614權(quán)利要求1.一種藥物制劑，包含2至18個(gè)，優(yōu)選為2至15個(gè)，更優(yōu)選為2至13個(gè)，進(jìn)而更優(yōu)選為2至12個(gè)，還要更優(yōu)選為3至12個(gè)腫瘤相關(guān)肽；其中每一個(gè)肽的長(zhǎng)度為8至22個(gè)氨基酸，優(yōu)選為9至16個(gè)氨基酸；其中所述肽在90％乙酸中的溶解性為至少2.7mg/mL；還包含甘露醇和泊洛沙姆188，其中所述肽與甘露醇和泊洛沙姆188的重量比范圍在1∶5∶1.5全1∶8∶2.2之間(含)；或包含甘露醇和吐溫id="icf0001"file="A2009101350950002C1.tif"wi="7"he="4"top="83"left="68"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>其中肽與甘露醇和吐溫id="icf0002"file="A2009101350950002C2.tif"wi="6"he="3"top="83"left="120"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>的重量比范圍在1∶2∶1.5至1∶8∶2.2之間(含)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中肽與甘露醇和泊洛沙姆188的所述重量比范圍在1:0:2至1:0:2.2之間(含)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其含有至少兩個(gè)肽，其中所述肽包括一個(gè)選自由SEQIDNO:1至SEQIDNO:10，或SEQIDNO:12至SEQIDNO:23組成的氨基酸序列；但要求該組合物包括至少一個(gè)含有SEQIDNO:l,SEQIDNO:2,SEQIDNO:12或SEQIDNO:13或其變體或鹽的肽；還包括甘露醇和泊洛沙姆188，其中肽與甘露醇和泊洛沙姆188的重量比范圍在1:5:1.5至1:8:2.2之間(含)。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中肽與bT露醇和泊洛沙姆188的重量比范圍在1:0:2至1:0:2.2之間(含)。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其含有至少兩個(gè)肽，其中所述肽包括選自由SEQIDNO:1至SEQIDNO:10，或SEQIDNO:12至SEQIDNO:23組成的一個(gè)氨基酸序列；但要求該組合物包括至少一個(gè)含有SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13或其變體或鹽的肽；還包括廿露醇和吐溫80，其中肽與甘露醇和吐溫80⑧的重量比范圍在1:2:1.5至1:8:2.2之間(含)。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述肽的總長(zhǎng)度為9至16個(gè)氨基酸。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中至少一個(gè)所述肽包含非肽鍵。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述組合物包括由SEQIDNO:1禾口/或SEQIDNO:2的氨基酸序列組成的肽，以及至少一個(gè)由SEQIDNO:3至SEQIDNO:10中的任意一個(gè)氨基酸序列組成的肽。9.根據(jù)權(quán)利要求l至8中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述組合物包括由SEQIDNO:12禾口/或SEQIDNO:13的氨基酸序列組成的肽，以及至少一個(gè)由SEQIDNO:14至SEQIDNO:23中的任意一個(gè)氨基酸序列組成的肽。10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，還包括一個(gè)含有SEQIDNO:11氨基酸序列的肽，但要求所述肽不是相應(yīng)的全長(zhǎng)腫瘤相關(guān)多肽，優(yōu)選還包括一個(gè)由SEQIDNO:11氨基酸序列組成的肽。11.根據(jù)權(quán)利要求I至10中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中該組合物中肽的含量具有組織、癌癥和/或患者特異性。12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，還包含至少一種合適的佐劑。13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物作為抗癌疫苗的用途。14.一種藥劑盒，包括(a)—個(gè)裝有根據(jù)權(quán)利要求1至13中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物溶液或凍干粉的容器；(b)可選地，一個(gè)裝有用于所述凍干制劑的稀釋劑或重溶復(fù)原溶液和/或至少一種佐劑的第二容器和(c)可選地，關(guān)于(1)使用該溶液，或(2)重溶復(fù)原和/或使用所述凍干制劑的說明書。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥劑盒，還包括一個(gè)或多個(gè)(1)緩沖液、(2)稀釋劑、(3)過濾器、(4)針頭和(5)注射器。全文摘要本發(fā)明涉及結(jié)合到人類白細(xì)胞抗原(HLA)I類或II類分子上在免疫治療方法中用作疫苗的腫瘤相關(guān)肽新制劑。特別地，本發(fā)明涉及用于癌癥免疫治療，特別是用于腎癌、腦癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤，尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的制劑。本發(fā)明還涉及用于引起抗腫瘤免疫反應(yīng)的疫苗組合物。文檔編號(hào)A61K39/00GK101648012SQ20091013509公開日2010年2月17日申請(qǐng)日期2009年4月23日優(yōu)先權(quán)日2008年4月24日發(fā)明者克里斯蒂安·弗羅赫,彼德·勒旺德羅斯基申請(qǐng)人:伊瑪提克斯生物技術(shù)有限公司