專利名稱：：低氧誘導(dǎo)因子(HIF)α的穩(wěn)定化的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及低氧誘導(dǎo)因子(HIF)的a亞基的穩(wěn)定化方法，還涉及可用于這些方法的化合物，
背景技術(shù)：
：組織低氧的早期反應(yīng)是產(chǎn)生低氧誘導(dǎo)因子(HIF),所述HIF是一種堿性蛾旋-環(huán)-蛾旋(bHLH)PAS(Per/Anrt/Sim)轉(zhuǎn)錄激活因子，它能針對(duì)細(xì)胞中氧濃度的變化緩沖基因表達(dá)的變化,HIF是包含調(diào)節(jié)氧的a亞基(HIFa)和表達(dá)結(jié)構(gòu)的P亞基(HIF附的雜二聚體，也稱作芳烴受體核轉(zhuǎn)運(yùn)子(AKNT).在常氧(含氧量正常的)細(xì)胞中，HIFci亞基在一種機(jī)制的作用下快速降解，該機(jī)制涉及vonHippel-Lindau腫瘤抑制劑(pVHL)E3連接酶絡(luò)合物的泛素化(ubiquitination).在低氣條件下，HIFa是不被降解的，話性HIFa/p絡(luò)合物富集在細(xì)胞核中，激發(fā)包括糖酵解酶、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子(GLUT)-1、紅細(xì)胞生成素(EPO)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)在內(nèi)的數(shù)種基因的表達(dá)-(Jiang等(1996)J.Biol.Ch咖.271:17771-17778:Iliopoulus等(1996)Proc.Natl.AcadScLUSAPS-lOSgS-lOSW,Maxwell等(1999)Na加e399:271-275:Su加r等<2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:47484753:Cockman等(2000)J.Biol.Ch咖.275:25733-25741:T幼imoto等(2000)EMBOJ19:42訴~4309.)在多數(shù)細(xì)胞中，HIFci蛋白的含量會(huì)因低氧而升高，如果動(dòng)物貧血或低氧，其體內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生HIFtt.—旦低氣，HIFci含量在數(shù)小時(shí)內(nèi)就會(huì)上升，在持續(xù)低氣條件下將恢復(fù)到基線.在無數(shù)細(xì)胞活動(dòng)和發(fā)育過程中涉及HIF,包括細(xì)胞增殖、血管新生和細(xì)胞周期終止。心肌嚴(yán)重缺血和早期梗死、動(dòng)脈髙血壓及炎癥也與HIFoi相關(guān).雖然已經(jīng)有人將HIFot與腫瘤生長和轉(zhuǎn)移聯(lián)系起來，但沒有充分證據(jù)表明18HIF直接與腫瘤發(fā)生有關(guān)。研究表明，使目標(biāo)組織短期低氧的低氣預(yù)調(diào)理方法能保護(hù)心肌和大腦免受低氧-缺血傷害。HIFa的穩(wěn)定化與缺血密切相關(guān)，可通過預(yù)調(diào)理方法產(chǎn)生。(W油g和Semenza(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA卯:43014308:Stroka等(2001)FASEBJ15:2445-2453;Semen幼等(1997)KidneyInt51:553-555;Carmeliet等(1998)Nature394:485-4卯；Zhong等(1999)CancerRes.59:5830-5835;Lee等(2000)NEnglJMed343:148-149:Sharp等(200t))JCerebBloodFlowMetab20:10l-1032iSeme旭a等(2000)AdvExpMedBiol475:123-130:Thornton等(2000)BiochemJ350:307-312;Deindl和Schaper(1998)Mo1CellBiochein186:43-51;Bergeron等(2000)A加Neurol48:285-296)一些研究人員研究了HIFci與pVHL之間的作用機(jī)理.最初認(rèn)為HF-la中從殘基401到603之間的依氣降解域(ODD)足以將依氣不穩(wěn)定性傳遞給蛋白質(zhì)嵌合體結(jié)構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn)，依賴于pVHL的降解需涉及從526到652之間的部分ODD區(qū)域.此外，在HIFa同源蛋白中的保留區(qū)域里(HUMa中的殘基55&574〉，P5MYI突變?yōu)樘扉T冬氨酸或者&32突變?yōu)榫彼崾拐蜨IFa蛋白在常氣條件下具有穩(wěn)定性，并能抵抗pVHL調(diào)節(jié)的降解.(Hu旭g等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:7987-7992:Tanimoto等(200t))EMBOJ19:4298-4309)HIFtt含量在許多類似于低諷的因素作用下可升髙，包括鐵嵌合體如去鐵敏(DFO)和二價(jià)金屬鹽如CoCl2.血管緊縮素II、凝血酶和血小板生長因子在常氧條件下通過涉及活性氧物種的機(jī)理提髙HIFot的含量。還有報(bào)道提出，HIFa由磷酸化作用調(diào)節(jié)，該途徑涉及受氧化氣擻活的磷脂酰肌醇3'-激酶(PI3K)、肝細(xì)胞生長因子或受分裂素徵活的蛋白激酶，肝糖合酶激嗨是PI3K的下游靶，直接使mFoiODD域發(fā)生磷酸化，(Richard等(2000)JBiolChem275:26765-26771:Sandau等(2060)Bioch加BiophysResCommun278:263-267:tacchini等(20(H)Carci加g咖sis22:1363-1371:Sodhi等(2001)Bioch咖BiophysResCommun287:292-300)當(dāng)肺功能受損或血流量下降時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)低氧現(xiàn)象--種供氧量減少的狀態(tài).與血流量下降相應(yīng)的缺血現(xiàn)象可由動(dòng)脈或靜脈阻塞引起，如血凝塊(血栓)或外來循環(huán)物質(zhì)(栓塞物)，或血管異常，如動(dòng)脈硬化。血流量下降可突然發(fā)作并且持續(xù)時(shí)間短(急性缺血)，也可能緩慢發(fā)作并持續(xù)較長時(shí)間或反復(fù)發(fā)作(慢性缺血).急性缺血通常與局部不可逆組織壞死(梗阻)有關(guān)，而慢性缺血通常與短暫低氣組織損傷有關(guān)，但是，如果灌注下降持續(xù)時(shí)間太長或太厲害，慢性缺血也可能與梗阻有關(guān)，梗阻常常出現(xiàn)在脾、腎、肺、腦和心臟中，產(chǎn)生諸如腸梗阻、肺部梗阻、缺血中風(fēng)和心肌梗阻等疾病。缺血異常的病理變化取決于缺血持續(xù)的時(shí)間和嚴(yán)重程度以及患者存活時(shí)間的長短.在發(fā)生梗阻的最初24小時(shí)內(nèi)就會(huì)出現(xiàn)組織壞死，在靠近梗阻部位的可見組織中會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，同時(shí)白細(xì)胞會(huì)遷移到壞死組織區(qū)域。在隨后幾天里，嗜菌作用會(huì)逐漸分解并消除梗阻部位的細(xì)胞，代以膠原或膠質(zhì)痂。一個(gè)器官中的低灌注狀態(tài)或梗阻往往會(huì)波及其他器官。例如，由肺栓塞等引起的肺部缺血不僅影響肺，而且使心臟和其他器官(如腦)處于低氧應(yīng)激反應(yīng)下。心肌梗阻常常涉及血栓引起的冠狀動(dòng)脈阻塞、冠狀動(dòng)脈壁痙攣或心臟病毒感染，會(huì)引起充血性心力衰竭和系統(tǒng)性低血壓。如果心臟因持續(xù)低血壓而長時(shí)間停止正常工作，則會(huì)引發(fā)第二并發(fā)癥，如完全性缺血腦病.大腦缺血最普遍的情況是由因動(dòng)脈硬化而發(fā)生的血管梗阻引起的，它的嚴(yán)重程度可以輕到暫時(shí)性腦缺血(TIA),重到腦梗阻或中風(fēng)。雖然TIA的癥狀是暫時(shí)的，并且是可以恢復(fù)的，但TIA容易復(fù)發(fā)，而且常常導(dǎo)致中風(fēng)，梗阻性動(dòng)脈疾病包括冠狀動(dòng)脈疾病，可引起心肌梗阻和周邊動(dòng)脈疾病，會(huì)影響腹部大動(dòng)脈、其主要支動(dòng)脈和腿動(dòng)脈。周邊動(dòng)脈疾病包括Buerger疾病、Raynaud疾病和手足發(fā)紺，雖然周邊動(dòng)脈疾病通常由動(dòng)脈硬化引起，其他起因還包括糖尿病等.周邊動(dòng)脈疾病的并發(fā)癥包括嚴(yán)重腿部痙攣、絞痛、心律不齊、心力衰竭、心臟病、中風(fēng)和腎衰竭.缺血和低氧問邇是影響患病率和死亡率的重要因素.心血管疾病每年至少導(dǎo)致1500萬人死亡，占全球死亡人數(shù)的30%。在各種心血管疾病中，缺血性心臟病和腦血管疾病導(dǎo)致死亡的人數(shù)約占總數(shù)的17%,每年見諸報(bào)告的非致命性嚴(yán)重心肌梗阻病例有130萬，大約10萬人中有600人患此類疾病.此外，每年估計(jì)有500萬美國人受到靜脈血栓困擾，其中約60萬人最終患有肺栓塞，約l/3肺栓塞患者最終死亡，使肺栓塞成為美國引起死亡的第三大主因。目前，對(duì)缺血性和低氧性疾病的治療集中在緩解癥狀和治療誘因疾病上，例如對(duì)心肌梗阻的治療包括使用硝化甘油和止痛藥控制病痛，緩解心臟負(fù)荷。同時(shí)用其他藥物來穩(wěn)定病情，如地髙辛、利尿劑、氨力農(nóng)、P-阻斷劑、降脂劑和血管緊縮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，但沒有一種治療方法是直接針對(duì)缺血和低氧引起的組織損傷的。由于當(dāng)前治療方法存在缺陷，仍然需要能有效治療缺血和低氧引起的疾病的方法，如梗阻性動(dòng)脈疾病、心絞痛、腸梗阻、肺梗阻、腦缺血和心肌梗阻，另外，20還需要能有效預(yù)防缺血引起組織損傷的方法，舉例來說，所述缺血的起因有動(dòng)脈硬化、糖尿病和肺部疾病，如肺栓塞等?？偠灾?，本領(lǐng)域需要能用來穩(wěn)定HIF、治療和預(yù)防HIF疾病，包括缺血、低氧引起的疾病的方法和化合物。發(fā)明概述這里介紹的是穩(wěn)定低氧誘導(dǎo)因子的a亞基(HIFa)的方法。這些方法可用于生物體內(nèi)或體外，本發(fā)明總體上涉及穩(wěn)定低氧誘導(dǎo)因子(HIF)的a亞基的方法。在一種實(shí)施方式中，穩(wěn)定HIF的a亞基(HIFtt)的方法包括給治療對(duì)象提供一種能抑制HIF(i發(fā)生羥基化反應(yīng)的化合物，在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，HIFa選自HIF-la、HIF-2ot、HIF-3d和它們的任何片段。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述方法包括給治療對(duì)象提供一種能抑制2-酮戊二酸雙加氧酶活性的化合物。在各種實(shí)施方式中，所述2-兩戊二酸雙加氧酶選自EGLN1、EGLN2、EGLN3、原膠原脯氨酰4-羥基酶、原膠原脯氨酰3-羥基瞎、原膠原賴氨酰羥基酶、PHD4、FIH-l,它們的任何片段或亞基。本發(fā)明穩(wěn)定HIFa的一些特定方法包括抑制HIF脯氨酰羥化酶活性*在其他實(shí)施方式中，HIF脯氨酰羥化酶選自EGLN1、EGLN2、EGLN3和它們的任何片段或亞基.本發(fā)明一方面提供了穩(wěn)定內(nèi)生HIFtt的方法。因此，在一個(gè)特定實(shí)施方式中，HIFa是內(nèi)生于治療對(duì)象上的.本發(fā)明的實(shí)施方式包括這樣一種穩(wěn)定HIFa的方法，即在治療對(duì)象體內(nèi)提供穩(wěn)定HIFa的化合物.治療對(duì)象包括動(dòng)物，宜為晡乳動(dòng)物，更宜為人。這也預(yù)期了體外給藥的方法。在這種方法中，治療對(duì)象可以是細(xì)胞、組織或器官等.在某些實(shí)施方式中，治療對(duì)象可以是諸如腎臟、心臟、肝臟、肺、造血系統(tǒng)、腸胃、神經(jīng)系統(tǒng)或骨骼肌肉系統(tǒng)等系統(tǒng)內(nèi)的細(xì)胞、組織或器官。本發(fā)明還提供了治療、預(yù)防或預(yù)治療與HIF有關(guān)的疾病的方法.特別地，本發(fā)明提供了一種治療、預(yù)防或預(yù)治療與HIF有關(guān)的疾病的方法，該方法包括穩(wěn)定HIFa.具體說來，本發(fā)明針對(duì)患者與HIF有關(guān)的疾病，提供了一種治療、預(yù)防或預(yù)治療/預(yù)調(diào)理方法，該方法包括穩(wěn)定HIFa。分而論之，與HIF相關(guān)的疾病包括與缺血或低氧有關(guān)的疾病。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面包括給治療對(duì)象服用能穩(wěn)定HIFa的化合物.在各種實(shí)施方式中，所述化合物選自雜環(huán)羧酰胺、菲咯啉、異羥肟酸和生理活性鹽以及由它們制成的前體藥物。在特定實(shí)施方式中，該化合物是雜環(huán)羧酰胺，21選自吡啶羧酰胺、喹啉羧酰胺、異喹啉羧酰胺、肉啉羧酰胺和P-咔啉羧酰胺。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述化合物以口服劑的形式提供。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述化合物以皮透藥劑的方式提供。在本發(fā)明穩(wěn)定HIFa的一種方法中，所述化合物通過專門抑制HIFci中至少一個(gè)氨基酸殘基發(fā)生羥基化來穩(wěn)定HIFa。另一方面，氨基酸殘基選自脯氨酸和夭冬酰胺。提供治療、預(yù)防或預(yù)治療與HIF有關(guān)的疾病的方法，所述方法包括抑制2-酮戊二酸雙加氧酶活性，本發(fā)明還包括其中所述HIF疾病與缺血或低氧有關(guān)的方法。本發(fā)明一方面提供了一種治療、預(yù)防或預(yù)治療與HIF有關(guān)的疾病的方法，該方法包括給治療對(duì)象提供能抑制2-翻戊二酸雙加氧酶活性的化合物。在—個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明針對(duì)患者與HIF有關(guān)的疾病，提供了一種治療、預(yù)防或預(yù)治療/預(yù)調(diào)理方法，該方法包括抑制H1F脯貧酰羥化酶的活性。同樣，所述與HIF有關(guān)的疾病包括與低氧或缺血等有關(guān)的疾病。在一個(gè)特定實(shí)施方式中，所述方法包括給治療對(duì)象提供能抑制HIF脯氨酰羥化酶活性的化合物.在另一個(gè)實(shí)施方式中，該方法還包括服用第二種化合物。在特定實(shí)施方式中，所述第二種化合物能抑制2-酮戊二酸雙加氧酶的活性，或者前述化合物和第二種化合物能抑制不同2-鵬戊二酸雙加氧酶的活性，或者第二種化合物選自ACE抑制劑(ACEI)、血管緊縮素II受體阻斷劑(ARB)、利尿劑、地髙辛、抑胃酶氨酸或肉誠等。在具體實(shí)施方式中，與HIF有關(guān)的疾病包括肺部疾病(例如肺栓塞等)、心臟病(例如心肌梗塞、充血性心力袞竭等)、神經(jīng)疾病等。因此本發(fā)明明確提出能用來治療、預(yù)防或預(yù)治療/預(yù)調(diào)理與HIF有關(guān)的缺血性疾病的方法，無論是急性或暫時(shí)性或慢性疾病.急性缺血情況包括與外科手術(shù)、器官移植、梗阻(例如腦梗阻、腸梗阻、心肌梗塞、肺梗阻等)、外傷、損傷或創(chuàng)傷等有關(guān)的情況，慢性缺血情況包括髙血壓、糖尿病、閉合動(dòng)脈疾病、慢性靜脈功能不足、肢端動(dòng)脈痙攣癥(Raynaud'sdisease)、硬化、充血性心力袞竭、系統(tǒng)性硬化癥等。本發(fā)明特別考慮了預(yù)調(diào)理或預(yù)治療的方法.在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了在與HIF疾病相關(guān)的情況如缺血等出現(xiàn)之前,或者與HIF相關(guān)的疾病惡化之前,通過穩(wěn)定HIFa來進(jìn)行預(yù)治療或預(yù)調(diào)理的方法。缺血可由急性事件引發(fā)，如外科手術(shù)(例如血管成形、器官移植等)和相關(guān)治療過程如實(shí)施麻醉等。此外，在慢性情況下，預(yù)治療或預(yù)調(diào)理的方法適用于治療對(duì)象患有可預(yù)知惡化趨勢的HIF疾病的情22形，例如短時(shí)間缺血或心絞痛、早期中風(fēng)和心肌梗塞等，目的是防止HIF疾病的惡化或減輕fflF疾病的惡化程度，在一個(gè)特定實(shí)施方式中，可給治療對(duì)象提供一種化合物，以增加缺血預(yù)調(diào)理因子，如EPO等.這里特別提出了增加各種HIF相關(guān)因子的表達(dá)的方法。一方面，本發(fā)明提供了一種增加患者血管生成因子的表達(dá)的方法，該方法包括穩(wěn)定HIFa。另一方面，本發(fā)明提供了一種增加患者糖酵解因子的表達(dá)的方法，該方法包括穩(wěn)定HIFou再一方面，本發(fā)明提供了增加患者與氣化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)的因子的表達(dá)的方法，該方法包括穩(wěn)定HIFtt。本發(fā)明還提出了一種治療患者與缺血再灌注損傷有關(guān)的疾病，該方法包括穩(wěn)定HIFa.這里還提供了鑒別能穩(wěn)定HIFtt的化合物的方法。例如，本發(fā)明提供了一種這樣一種鑒別能穩(wěn)定HIFa的化合物的方法，它包括(a)為患者或來自患者的樣本提供目標(biāo)化合物;(b)測定患者或樣本中的HIFa含量:(c)比較患者或樣本中的HIFa含量和標(biāo)準(zhǔn)含量，、如果患者或樣本中fflFd含量增加，表明該化合物能穩(wěn)定HIFix。另一方面，可用本發(fā)明方法預(yù)防由HIF相關(guān)疾病引起的組織損傷，包括(但不限于)缺血和低氧疾病。在一種實(shí)施方式中，治療取決于預(yù)先診斷的病情，例如高血壓、糖尿病、閉合動(dòng)脈疾病、慢性靜脈功能不足、肢端動(dòng)脈痙攣癥、硬化、充血性心力袞竭、系統(tǒng)性硬化癥等。另一方面，本發(fā)明方法可作為預(yù)治療方法，用來降低或預(yù)防由HIF疾病引起的組織損傷，包括(但不限于)缺血和低氧疾病。在一種實(shí)施方式中，是否需要預(yù)治療取決于患者病史中缺血疾病，如心肌梗塞或暫時(shí)性缺血的復(fù)發(fā)周期，或者患者有持續(xù)缺血的癥狀，例如心肌絞痛等.在另一個(gè)實(shí)施方式中，是否需要預(yù)治療取決于表示可能缺血或低氧的物理參數(shù)，例如個(gè)體經(jīng)過普通麻醉或臨時(shí)在高緯度工作的情況中.在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明方法可用在器官移植中，用來對(duì)器官捐獻(xiàn)者進(jìn)行預(yù)處理，并在器官從體內(nèi)移出但移植到接受者之前保護(hù)器官，另—方面，本發(fā)明提供了穩(wěn)定HIF(i的化合物和用所述化合物預(yù)防、預(yù)治療或質(zhì)量如上所述HIF疾病。在一種實(shí)施方式中，有效量的化合物或其藥用鹽可單獨(dú)或與藥用賦形劑一道施與患有HIF疾病的治療對(duì)象，在一個(gè)具體實(shí)施方式中，一旦診斷出嚴(yán)重缺血，就應(yīng)立即施用所述化合物。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，化合物在患慢性缺血疾病的過程中施與患者.在又一個(gè)具體實(shí)施方式中，缺血是由暫時(shí)或嚴(yán)重外傷、損傷或創(chuàng)傷引起的，例如脊髓受傷。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，在病人診斷出肺部疾病如COPD等之后，根據(jù)需要將所述化合物施與患者.23所述化合物一方面可針對(duì)易患疾病如慢性病施與患者，或者作為預(yù)治療藥物用來降低或預(yù)防HIF疾病引起的組織損傷，具體說來，所述化合物可施與有缺血疾病，例如心肌梗塞或暫時(shí)性缺血的復(fù)發(fā)病史的患者，或者患有持續(xù)缺血的癥狀，例如心肌絞痛等的患者。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述化合物的施用取決于表示可能缺血或低氧的物理參數(shù)，例如個(gè)體經(jīng)過普通麻醉或臨時(shí)在高緯度工作的情況中.在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物可用在器官移植中，用來對(duì)器官捐獻(xiàn)者進(jìn)行預(yù)處理，并在器官從體內(nèi)移出但移植到接受者之前保護(hù)器官。一方面，本發(fā)明化合物通過具體抑制HIFa蛋白中氨基酸殘基發(fā)生羥基化反應(yīng)來穩(wěn)定HIF(u在一種實(shí)施方式中，所述試劑抑制HIFu脯氨酸殘基的羥基化反應(yīng)。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述試劑抑制HIF-laP^4殘基或另一個(gè)HIFd異構(gòu)體中的同族脯氨酸的羥基化反應(yīng)。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述試劑抑制HIF-laP4e2殘基或另一個(gè)HIFci異構(gòu)體中的同族脯氨酸的羥基化反應(yīng).在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物可額外抑制HIFoi天冬酰胺殘基的羥基化反應(yīng)。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述試劑抑制HIF-laHHo殘基或另一個(gè)HIFci異構(gòu)體中的同族天冬酰胺殘基的羥基化反應(yīng).在特定實(shí)施方式中，本發(fā)明方法所用化合物選自式(I)所示化合物A是1，2-亞芳基、1，3-亞芳基、1，4-亞芳基或(CVC》-亞烴基(任選為一個(gè)或多個(gè)鹵原子、慨基、硝基、三氟甲基取代)、(CrC6)-烷基、(C廣C6)-羥烷基、(C廣CJ-烷氧基、-0-[CH2K-CfH(2f+w-齒素B、(C廣C6)-氟代烷氧基、(C,-C,)-氟代亞烴氧基、(C廣Q)-瓶代亞烯氧基、-OCF2Cl,-0-CF2-CHFCl;(C,-C^烷基巰基、(Q-C6)-烷基亞琉?；?、(CVC士烷基硫?；?CVC6)-烷基羰基、(CVCe)-烷氧基羰基、氨基甲?；?、N-(C,-C4)-烷基氨基甲?；，N-二-(C,-C4)-烷基氨基甲?；?、(C廣C6)-垸基羰氧基、(CVCg)-環(huán)烷基、苯基、芐基、苯氧基、苯氧基、苯胺基、N-甲基苯胺基、苯基巰基、苯基硫?；⒈交鶃喠蝓；?、氨磺酰基、N-(CVQ)-烷基氨磺?；，N-二-(CVC》-垸基氨磺跌基取代或者為(Ce-Cu)-芳氧基、(CVCn)-芳烷氧基、(C6-其中，24Cu)-芳基、(CVCn)-芳垸基(在芳基部分中具有1-5個(gè)相同或不同取代基，所述取代基選自鹵素、氟基、硝基、三氟甲基)、(CVCJ-烷基、(C廣C6)-烷氧基、-o-[CH丄-CfH(2fH-g)-鹵素B、-OCF2Cl、-0-CF2-CHFCI、(C,-C6)-烷基巰基、(C，-C6)-烷基亞硫?；?C，-C6)-烷基硫?；?C,-C6)-烷基羰基、氨基甲?；?、N-(C,-C4)-烷基氨基甲?；?、N,N-二-(d-C4)-烷基氨基甲酰基、(CrC6)-烷基羰基氧基、(CrC8)-環(huán)烷基、氨磺?；?、N-(d-C4)-烷基氨磺酷基、N,N-二-(C,-C4)-烷基氨磺?；〈蛘逜為CRSR6,R5和RS各自獨(dú)立選自氫、(C廣C6)-烷基、(CVC7)-環(huán)烷基、芳基，或者a氣基酸的a碳原子的取代基,其中氨基酸是天然L氨基酸或其D型異構(gòu)體。B是-COH2、-NH2、-NHS02CF3、四唑基、咪唑基、3-羥異唑基、-CONHCOR"'，-CONHSOR'"，其中R"'是芳基、雜芳基、(CVC7)-環(huán)烷基、(0烷基、任選的被(C,-C4)-硫代烷基、(C廣C4)-亞硫?；?C,-CU)-硫?；?、CF3、Cl、Br、F、I、N02、-COOH、(C2-Cs)-烷氧基羰基、NH2、單-(C,-C4-垸基)-氨基、二-(C廣CV烷基)-氨基或(CVC"-全氟代烷基取代；或者B是C02-G羧基，其中G是醉G-OH中的基團(tuán)，G選自(CrC2。)-烷基、(CrCg)-環(huán)烷基、(CrC加)-烯基、(CVCg)-環(huán)烯基、視黃基、(CVC2o)-炔基、((VC加)-鏈多烯基(alkenynyl)，其中烯基、環(huán)烯基、炔基和鏈多烯基包含一個(gè)或多個(gè)多鍵；(cvCw)-碳環(huán)芳基、(CVCJ-芳烷基、雜芳基或雜芳烷基，其中雜芳烷基中的雜芳基或雜芳部分包含5-6個(gè)環(huán)原子；G所定義的基團(tuán)可為一個(gè)或多個(gè)其他基團(tuán)取代，這些基團(tuán)包括羥基、鹵素、氰基、三氟甲基、硝基、羧基、(CrCn)-烷基、(CVQ)-環(huán)烷基、(Q-Ca)-環(huán)鏈烯基、(CVCn)-芳基、(CrC16)-芳烷基、(C2-c,2)-烯基、(cvc,2)-炔基、(c,畫c，2)-烷氧基、(0廣(:12)-烷氧基-((:1-(:12)-烷基、((:1-€:12)-烷氧基-((:1《12)-烷氧基、((:<;-€;12)-芳氧基、(07-(:16)-芳垸氧基、(0:，-€:8)-羥烷基、-O-[CH丄-CfH(洲.g)-F,、-OCF2Cl、-0-CF2-CHFC1、(C「Cu)-烷基羰基、(cvc8)-環(huán)烷基羧基、((Vd2)-芳基羰基、(cvc,6)-芳烷基幾基、肉桂酰、(crc12)-烯基羰基、((Vd2)-炔基羰基、(C,-C,2)-烷氧基羰基、(CVCu)-烷氧基-(C,-C,2)-烷基羰基、(Q-Cu)-芳氧基幾基、(CVCw)-芳烷氧基羰基、((VCg)-環(huán)垸氧基羰基、(CVCJ-烯氧基羰基、(CVd2)"炔氧基羰基、酰氧基、(d-d2)-垸氧基羰氧基、(C,-Cu)-烷氧基-(C廣C,2)-烷基羰氧基、(Q-C,2)-芳氧基羰氧基、(CVCw)-芳烷氧基羰氧基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基羰氧基、(CVCu)-烯氧基羰氧基、(cvd2)-炔氧基羰氧基、氨基甲?；-(CVCu)^烷基氨基甲?；，N-二-(C廣C,2)-烷基氨基甲?；?、N-(CVCg)-環(huán)烷基氨基甲?；?、N-(CVd6)-芳基氨基甲?；-(C7-CM)-芳垸基氨基甲?；?、N-(c，-do)-烷基-N-((vCw)-芳基氨基甲?；-(€:1-€:1。)-烷基-:^(07-&6)-芳烷基貧基甲酰基、N-((C!-C，o)-烷氧基-(C廣C,o)-烷基)氨基甲酰基、N-((C6-C2)-芳氧基-(C廣C，o)烷基)氨基甲?；?、>1-((<>(:16)-芳烷氧基-(C-do)-烷基)氨基甲?；?、N-(Ci-C,。)-烷基-N-((C「d。)-烷氧基-(CVdQ)-烷基)氨基甲?；?、N-(C廠C,。)-烷基-N-((C6-C，6)-芳氧基-(C廣C,。)-烷基)氨基甲?；-(C廣C,。)-烷基-N-((C7-CJ-芳烷氧基-(C,-Cn))-垸基)氨基甲?；被柞Ｑ趸?、N-(d-C，2)-烷基氨基甲酰氧基、N，N-二-(C,-C,2)-烷基氨基甲酰氧基、N-(C3-C,)-環(huán)烷基氨基甲酰氣基、N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基、N-(cvcM)-芳烷基氨基甲酰氧基、1^-(01-0:1())-烷基-^((:6-(:16)-芳基氨基甲酰氧基、N-(CVC,。)-烷基-N-(C7-C,6)-芳烷基氨基甲酰氧基、N-((C,-C,o)-烷氧基-(CrC,o)-烷基)貧基甲酰氧基、1^-((06-<:12)-芳氧基-(C廠C，o)烷基)氨基甲酰氧基、1^(((:7《16)-芳烷氧基-(C,-C,。)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(C,-C,。)-烷基-N-((CVdo)-烷氧基-(C「C,。)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(CVd。)-烷基-N-((C6-C,6)-芳氧基-(c'-do)-烷基)氨基甲酰氧基、^(01-0;10)-烷基-1^((€:7^16)-芳烷氧基-(c「c,。)-烷基)氨基甲酰氧基、氨基、(C,-C,2)-垸基氨基、二(C廣d2)-垸基氨基、(C3-Qj)-環(huán)烷基氨基、(Crd2)-烯基氨基、(CVCu)-炔基氨基、N-(QrCu)-芳基氨基、N-(C-C)-芳烷基貧基、N-烷基-芳烷基氨基、N-烷基-芳氨基、(&-0:12)-烷氧基善((:,^))-烷基氨基、(CVC8)-環(huán)烷基羰基氨基、(CVC^-芳基羰基氨基、(CVCw)-芳烷基羰基氨基、(C,-d2)-烷基羰基-N-(d-C,o)-垸基氨基、(CVC8)-環(huán)烷基羰基-N-(C,-C,o)-烷基氨基、(C6-Cu)-芳基羰基-N-(d-dc)-烷基氨基、(CVC")-芳烷基羰基-N-((VQo)-烷基氨基、(CVC^烷基羰基氨基-(C，-Cg)-烷基、(CVCg)-環(huán)烷基羰基氨基-(CVQ)-烷基、((:6-0芳基羰基氨基-(c廣C8)-烷基、((:7-(:12)-芳烷基羰基氨基-(c廣CB)-烷基、氨基-(C,-Qo)-烷基、N國(C廣Co)-烷基氨基-((Vdo)-垸基、N.N-二-(C廣do)-烷基氨基-(CVC,。)-烷基、(€3《8)-環(huán)烷基氨基-(C廣C。)-垸基、(C廣C皿2)-烷基巰基、(CVCu)-烷基亞硫?；?CVCu)-烷基硫?；?、(CVd6)-芳基巰基、(CVd6)-芳基亞硫酰基、(CVC,2)-芳基硫酰基、(C7-C,6)-芳垸基巰基、(Crda)-芳基亞硫?；?、(CVC,2)-芳基硫?；被酋；?、N-(CVQ。)-烷基氨磺酰基、N,N-二-(CVC,。)-烷基氨磺酰基、(CVCg)-環(huán)烷基氨磺酰基、N-(CVCu)-烷基氨磺酰基、N-(CVCw)-芳垸基氨磺酸基、N-(c,-c,。)-烷基-N-(cvd2)-芳基氨磺敏基、^((:1-0:1。)-垸基->1-(€:7-0:16)-芳垸基氨磺?；?C「Cm)-烷基亞磺酰氨基、N-((CVCw)-烷基)-(C廣Cw)-烷基亞磺酰氨基、(CVd6)-芳烷基亞磺酰氨基或N-((CVdc)-烷基)-(C7-CJ-芳烷基亞磺酰氨基；其中芳基或含芳基基團(tuán)中的芳基可為1-5個(gè)相同或不同的基團(tuán)取代，它們包括羥基、鹵素、氰基、三氟甲基、硝基、羧基、(C,-C,2)-烷基、(cvc,)-環(huán)烷基、(C6-Cu)-芳基、(CrCw)-芳烷基、(C廣Cu)-烷氧基、(Crd2)-烷氧基-(C，-C，2)-烷基、(C,-d2)-烷氧基-(Q-C,2)-烷氧基、(CVC。-芳氧基、(CVC,6)-芳烷氧基、(C,-Cs)-羥烷基、(C,-C,2)-烷基羰基、(C3-Q)-環(huán)烷基羰基、((VCu)-芳基羰基、(CVC,6)-芳烷基羰基、(CVCJ-烷氧基羰基、(C,-CJ-烷氧基-(CrC,2)-烷氧基羰基、(CVC,2)-芳氧基羰基、((VC,6)-芳烷氧基羰基、(CVCg)-環(huán)烷氣基羰氧基、(CVC,2)-烯氧基羰氧基、(C2-C,2)-炔氧基羰氧基、(C,-C，2)-烷基羰氧基、(CVQ)-環(huán)烷基羰氧基、(C6-C12)-芳基羰氧基、(CVC")-芳烷基羰氧基、肉桂酰氧基、(CVCu)-烯基羰氧基、(C2-C12)-炔基羰氣基、(c廣Cu)-烷氧基羰氧基、(<:,-(:12)-烷氧基-(c,-c,2)-烷基羰氧基、(cvc,2)-芳氧基羰氧基、(cvCw)-芳烷氧基羰氣基、(C3-Q)-環(huán)垸氧基羰氧基、(C2-Cu)-烯氧基羰氧基、(CVC,2)-炔氧基羰氧基、氨基甲?；?、N-(d-Cu)-烷基氨基甲?；?、N,N-二-(d-Cu)-垸基氨基甲?；?、N-(CVCn)-環(huán)垸基氨基甲?；?、N-(Q-Cu)-芳基氨基甲?；?、N-(CVd6)-芳烷基氨基甲?；?、N-(C,-C,o)-烷基-N-(CerC,2)-芳基氨基甲?；?、N-(d-C,。)-烷基-N-(CVd6)-芳烷基氨基甲?；?、N-((C廣CJ-烷氧基-(CVQo)-烷基)氨基甲?；?、N-((Q-Cu)-芳氧基-(C，-C,。)烷基)氨基甲?；?、N-((C7-Cw)-芳烷氧基-(C，-Cu))-烷基)氨基甲?；?、N-(CVC,。)-烷基-N-((d-d。)-烷氧基-(cvCw)-烷基)氨基甲?；?、^(^-(:1。)-烷基-^(((:-(:12)-芳氧基-(c廣c,。)-烷基)氨基甲?；?、N-(C廣C,。)-烷基-N-((C7-C，A芳烷氧基-(CVC,。)-烷基)氨基甲?；?、氨基甲酰氧基、N-(C,O烷基氨基甲酰氧基、N，N-二-(C,-d2)-烷基氨基甲酰氧基、N-((VQ-環(huán)垸基氨基甲瑯氧基、N-(C6-Cu)-芳基氨基甲酰氧基、N-(C7-Cw)-芳烷基氨基甲酰氧基、N-(d-do)-烷基-N-(CVCw)-芳基氨基甲酰氧基、N-(d-Cm)-烷基-1^-(07-<:16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N-((C,-Cw)-烷氧基-(CVC,o)-烷基)氨基甲酰氧基、N-((CVCu)-芳氧基-(C，-C,。)烷基)貧基甲酰氧基、N-(((VCw)-芳烷氧基-(C,-Cuj)-垸基)氨基甲酰氧基、N-(d-Cw)-烷基-N-((d-Cm)-烷氣基-(C,-C,。)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(d-do)-烷基-N-((CVC,6)-芳氧基.(C,-do)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(C廣C，o)-垸基-N-(((VCw)-芳垸氧基-((Vdo)-烷基)氨基甲酰氧基、氨基、(C廣Cu)國烷基氨基、二(C,-CJ-烷基氨基、(CVCg)-環(huán)烷基氨基、(CrC,2)-烯基氨基、(CrC12)-炔基氨基、N-(CVC,2)-芳基氨基、N-(C-Cn)-芳烷基氨基、N-烷基-芳烷基氨基、N-烷基-芳氨基、(C,-C,2)-烷氧基-N-(d-C,。)-烷基氨基、(CVCg)-環(huán)烷基羰基氨基、(QrC,2)"芳基羰基氨基、(cvd6)-芳烷基羰基氨基、((:1-(:12)-烷基羰基-^((:1-0:10)-垸基氨基、((:3《8)-環(huán)烷基簾基-N-(d-do)-烷基氨基、(cvc公芳基羰基-N-(cvC,o)-烷基氨基、(CVCn)-芳烷基羰基-N-(d-C皿Q)-烷基氨基、(Crd2)-烷基羰基氨基27-(cvc,)-烷基、(cvCg)-環(huán)烷基羰基氨基-(c廣Cs)-烷基、((:6《|2)-芳基羰基氨基-(d-Cs)-烷基、(^-(:12)-芳烷基羰基氨基-(c廣c。-烷基、氨基-(c,-c,。)-烷基、n-(CVC，A烷基氨基-(C,-C,。)-烷基、N.N-二-(C廣C,o)-垸基氨基-(C廠C,。)-烷基、N-(〔3-€:8)-環(huán)烷基氨基-(cvdo)-烷基、(c廣c，2)-烷基巰基、(c廣c,2)-烷基亞硫?；?、(C，-C公烷基硫?；?、(CVCw)-芳基巰基、(C6-C,6)-芳基亞硫?；?、(CVd2)-芳基硫?；?、((VC,6)-芳垸基巰基、(CVC,6)-芳基亞硫?；?C7-Cu)-芳基硫酰基X是O或S:Q是O、S、NR'或化學(xué)鍵；其中，如果Q是化學(xué)鍵，則V是鹵素、腈或三氟甲基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>或者，如果Q是O、S、NR',則R4是氫、(CrC，。)-烷基、(C2-C,。)-烯基、(C2-C10)-炔基，其中烯基或炔基包含一個(gè)或多個(gè)C一C多鍵具有化學(xué)式-O-[CH丄-CfH(洲《-Fg的未取代裉烷基、(C廣C,)-烷氧基-(C,-C6)-烷基、(C「C6)-烷氧基-(C廣C》-烷諷基-(C,-C》-烷基、芳基、雜芳基、(cvc,)-芳烷基或具有式(z)所示化學(xué)式的基團(tuán)-[CH2]v-rE(Z)其中，E是雜芳基、(C3-C,)-環(huán)烷基或具有式F所示化學(xué)式的苯基t是0-3，且R7、RB、R9、R'c和R"可以相同或不同，可以是氫、鹵素、氰基、三氟甲基、硝基、羧基、(C廠C6)-烷基、(CVCg)-環(huán)烷基、(C廣C6)-芳垸基、-O-[CH2L"CjH。w-,)-F,、-OCF2Cl、-0-CFrCHFCl、(C廣C6)-烷基巰基、(C「C6)-羥基烷基、(C,-C》-烷氧基-(CVC6)-烷氧基、(C,-C6)-烷氧基-(C，-C6)-烷基、(C廣C6)-垸基亞硫?；?CVC6)-烷基硫?；?CVQ)-烷基羰基、(CVQO-烷氧基羰基、氨基甲酰基、N-(C廣C8)-垸基氨基甲?；,N-二-(d-Cg)-烷基氨基甲?；?C7-Cu)-芳基烷基氨基甲?；芜x為以下基團(tuán)所取代，即氟、氯、溴、三氟甲基、(C,-C6)-烷氧基、N-(CVCg)-環(huán)垸基氨基甲酰基、N-(C3-Cg)-環(huán)烷基-(Ci-CJ-烷基氨基甲酰基、v是0-6,w是0或1，(C,-C6)-條基羰氧基、苯基、芐基、苯氧基、芐氧基、NRYRZ,其中RY和RZ獨(dú)立選自氫、(C,-C,2)-垸基、(C,-Cg)-烷氧基-(C'-Q)-垸基、(C7-C，2)-烷氧基-(C,-C8)-烷基、(C6-d2)-芳氧基-(C「Q)-烷基、(CVC,o)-環(huán)烷基、(CVC,2)-烯基、(CVCu)-炔基、(Q-Cu)-芳基、(CVCn)-芳烷基、(C「C,2)-烷氧基、((VQ2)-芳氧基、(Q-C,2)-垸基羰基、(CVCg)-環(huán)烷基羰基、(Q-C,2)-芳基羰基、(CVCM)-芳烷基羰基或者RY和RZ都是-[CH丄，其中012可為0、S、N-(d-C4)-烷基羰基亞氨基或N-(C,-C4)-烷氧基羰基亞氨基；苯基巰基、苯硫?；⒈絹喠蝓；⒈桨被酋；-(C,-Cg)-烷基氨磺?；騈，N-二-(d-Cg)-垸基氨磺?；蛘遅和R8、R8和R9、W和R1。或R1。和R"均是選自-[CH丄或-CH《H-CH-CH-的鏈，其中CH2任選為O、S、SO、S02或NRY取代n是3、4或5:如果E是雜芳基，則所述基團(tuán)可含1-3個(gè)為R、R"所定義的取代基，或者如果E是環(huán)烷基，則所述基團(tuán)可含一個(gè)為R、R"所定義的取代基；或者當(dāng)Q是NR'時(shí)，V是R"，其中R'和R"可以相同或不同，具體可以是氫、(CVC，2)-芳基、(CVCH)-芳烷基、(C「Cg)-烷基、(C「C(j)-烷氧基-(C,-Cg)-烷基、(C7-Cu)-烷氧基-(d-C"-烷基、(CVd2)-芳氧基-(C,-C,)-烷基、(C,-C,。)-烷基羰基，任選取代的(CVCM)-芳烷基羰基或任選取代的(CVC,2)-芳基羰基；或者R'和R"均為-[CH2]h，其中CH2為0、S、N-酰亞氨基或N-(C,-C,。)-烷氧基羰基亞氨基，h是3-Y是N或CR3;R'、112和113可以相同或不同，具體為氫、羥基、氰基、三氟甲基、硝基、羧基、(C廣C加)-烷基、(CrCg)-環(huán)垸基、(CVCg)-環(huán)烷基-(d-d2)-烷基、(CVCg)-環(huán)烷氧基、(CVC,)-環(huán)烷基-(d-d2)-烷氣基、(CVC,)-環(huán)烷氧基-(d-C,2)-烷基、(CrCg)-環(huán)垸氧基-((VCu)-烷氧基、(C3-Cs)-環(huán)烷基-(C廣Cg)"烷基-(C廣C6)-烷颯基、(C3-Q)-環(huán)烷基-((VCg)-烷氧基-(C,-C6)-烷基、(CVC,)-環(huán)烷氧基-(C,-Cg)-烷氧基-(d-Ce)-烷基、(CVQ)-環(huán)垸氧基-(C廠Cg)-烷氧基-(d-C6)-烷氧基、(CVCu)-芳基、(CVC，6)-芳烷基、(C7-C,6)-芳烯基、(C7-Cw)-芳炔基、(CVC加)-烯基、(C2-C2。)-炔基、(C廣C20)-烷氧基、(CVC2c)-烯氧基、(CVC加)-炔氧基、視黃氧基、(C,-C加)-烷氧基-(C-d2)-烷基、(C廣d2)-烷氧基-(CVd》-烷氧基、(C廣Cu)-烷氧基-(d-Cg)-烷氧基-(d-Q)-垸基、(Q國d2)-芳氧基、(CVC,6)-芳烷氧基、(C6-C,2)-芳氧基-(C廣Q)-烷氧基、(CVCw)-芳烷氧基-(C廣C^烷氧基、(C廣C,6)-羥烷基、(CVCw)-芳氧基-(CrC8)-烷基、(C7-C16)-芳烷氧基-(C,-Q)-烷基、(QrCu)-芳氧基-(C,-C，)-烷氧基-(d-C6)-烷基、(07-(:12)-芳垸氧基-(C,-C8)-垸氧基-(CVC6)-烷基、(C2-C2Q)-烯氧基-(C廣C6)-烷基、(C2-C加)-炔氧基-(C廣CJ-烷基、視黃氧基-(C廣Q;)-烷基、-O-[CH丄-CfH(洲.g)-Fg、-OCF2C、-O-CF2-CHFC1、(C,-C加)-烷基羰基、(CVQ)-環(huán)垸基羰基、(Q-Cu)-芳基羰基、(C7-C16)-芳垸基幾基、肉桂酰基、(CVC加)-烯基羰基、(CVC2Q)-炔基羰基、(C,-C2。)-烷氧基羰基、(d-Cu)-烷氧基-(C,-C，2)-烷氧基羰基、(CVCu)-芳氧基羰基、(CVC,6)-芳烷氧基羰基、(CVC^環(huán)烷氧基羰基、(CVC2。)-烯氧基羰基、視黃氧基羰基、(C2-C20)-炔氧基幾基、(C6-C,2)-芳氧基-(C,-Q)-烷氧基羰基、(CVC,6)-芳烷氧基-(CVC6)-烷氧基羰基、((VC,)-環(huán)烷基-(CVQ)-烷氧基羰基、(C3-Cg)-環(huán)烷氧基-(d-C6)-垸氧基羰基、(c,-c,2)-烷基羰氧基、(cvc^環(huán)烷基羰氧基、(CVd2)-芳基羰氧基、(c7-cl6)-芳烷基羰氧基、肉桂酰氧基、(CVCu)-烯基羰氧基、(CrC,2)-炔基羰氧基、(c,-c12)-烷氧基裝氧基、(d-c,2)-烷氧基.(c,-c,2)-烷基羰氧基、((VCu)-芳氧基羰氧基、(^《16).芳烷氣基幾氧基、(cvCg)-環(huán)烷氧基羰氧基、((Vd2)-烯氧基鈸氧基、(^-&2)-炔氧基羰氧基、氨基甲酰基、>1-((:1《12)-烷基氨基甲?；?、:^:^二-((:1《12)-烷基氨基甲酰基、N-(CVCB)-環(huán)烷基氨基甲酰基、N,N-二環(huán)-(CVC8)-烷基氨基甲?；?、N-(C,-C，o)-烷基-N-(C3-C,)-環(huán)烷基氨基甲?；-((CVCg)-環(huán)烷基-(C廣C6)-烷基)氨基甲琉基、N-(C,-Q)-烷基-N-((CVCg)-環(huán)烷基-(C,-C6)-烷基)氨基甲酰基、N-(+)-脫每樅基氨基甲酰基、N-(d-C。-烷基-N-(+)-脫氫樅基氨基甲?；?、N-(C6-C12>芳基氨基甲酰基、N-(CVCw)-芳烷基氨基甲?；-(d-Qo)-烷基-N-(CVCu)-芳基氨基甲?；-(CrC,。)-烷基-N-((VCw)-芳烷基氨基甲酰基、N-((d-d。)-垸氧基-(cvdo)-烷基)氨基甲?；?amp;((€:6-(:12)-芳氧基-(cvdo)烷基)氨基甲?；?、n-((^《,6)-芳烷氧基-(CVQo)"烷基)氨基甲?；-(C廣C，o)-烷基-N-((C,-C,。)-烷氧基-(c廣c,。)-烷基)氨基甲?；?、1^(0:1-0:10)-烷基-1^((€:6-0;12)-芳氧基-(c-c,。)-烷基)氨基甲?；?、N-(d-C^-烷基-N-((CVCJ-芳烷氧基-(CVdo)-烷基)氨基甲?；籆ON(CH2)h,其中CHz可為O、S、N-(Q-Cg)-烷基亞氨基、N-(CVC8)-環(huán)烷基亞氨基、N畫(C3-Cs)-環(huán)烷基-(C廣C4)-烷基亞氨基、N-(C6誦C，2)-芳基亞氨基、N-(CVC,2)-芳烷基亞IT塞、N:(C廣C4)-烷氧塞-((VC6)-烷塞並氧基敢代,h是3-7;3#%，式R的氨基甲酰氧基吸其中，Rx和Rv各自獨(dú)立地選自氨、(C,-C6)-烷基、(CVC7)-環(huán)烷基、芳基或ct氨基酸的ct碳原子的取代基，其中氨基酸是天然L氨基酸或其D型異構(gòu)體，s是l-5，T是OH或NWR",R*、R"和R"t可以相同或不同，選自氫、(Q-C,2)-芳基、(CrCH)-芳烷基、(C,-C8)-烷基、(C3-C"-環(huán)烷基、(+)-脫氫樅基、(C,-Cg)-烷氧基-(C,-Q)-烷基、(CVd2)-芳烷氧基-(d-Cg)-烷基、(C6-d2)-芳氧基-(C,-Cg)-烷基、(C,-C,o)-烷?；?、任選取代(CVC,6)-芳烷?；?、任選取代(CVCu)-芳?；蛘逺*和R"均為CH2，其中CH2可為0、S、SO、S02、N-酰氨基、N-(C,-C,o)陽垸氧基羰基亞氨基、N-((VQ)-烷基亞氨基、N-(C3-Q)-環(huán)垸基亞氨基、N-((VCg)-環(huán)烷基-(<:1-01)-烷基亞氨基、N-(CVC,2)-芳基亞氨基、N-(C7-C,6)-芳垸基亞氨基、N-(C廣Q)-烷氧基-(d-Ce)-垸基亞氨基，h是3-7;氣基甲酰氧基、N-(CVCu)-烷基氨基甲酰氧基、N^N-二-(C,-Cu)-烷基氨基甲酰氧基、lHCVC。-環(huán)烷基氨基甲酰氧基、N-(CVCu)-芳基氨基甲酰氧基、N-(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N-(CrC,。)-烷基-N-(CVC")-芳基氨基甲酰氧基、N-(C,-C，o)-烷基-:NKC7-Cw)-芳烷基氨基甲酰氧基、N-((d-do)-烷氧基-(C廣do)-烷基)氨基甲酰氧基、^((0^12)-芳氧基-(CVd。)垸基)氨基甲酰氧基、1^((07《16)-芳垸氧基-(CVC一-烷基)氨基甲酰氧基、N-(d-do)-垸基-N-((CVC,o)-烷氧基-(C「C,。)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(C廣C,o)-烷基-N-((CVCw)-芳氧基-(C廣C,o)"烷基)氨基甲酰氧基、^(&-(:10)-烷基-1^((€:7-0:16)-芳烷氧基-(CrC，。)-烷基)氨基甲酰氧基、氨基、(c,-C,2)-烷基氨基、二(CrCu)-烷基氨基、((VCg)-環(huán)烷基氨基、(CVC,2)-烯基氨基、(CVCu)-炔基氨基、N-(CVCu)-芳基氨基、N-(C-Cu)-芳烷基氨基、N-烷基-芳烷基氨基、N-烷基-芳氨基、(Q-C,2)-烷氧基-N-(CVdo)-烷基氨基、(CrCg)-環(huán)烷基羰基氨基、(CVCu)-芳基羰基氨基、(CVCw)-芳烷基羰基氨基、(^《12)-烷基羰基-^(C廣C,。)-烷基氨基、(C3-Q)-環(huán)烷基羰基-N-(CVd。)-烷基氨基、((^《12)-芳基羰基-N-(CVdo)-烷基氨基、(C7-C")-芳烷基羰基-N-(CrC,。)-烷基氨基、((VC,2)-烷基羰基氨基.(C，-Cg)-烷基、(CVCg)-環(huán)烷基羰基氨基-(C廣C8)-烷基、(cvc,2)-芳基羰基氨基-(C,-C^烷基、(C7-C,2)-芳烷基羰基氨基-(CVC8)-垸基、氨基-(C廣C，。)-烷基、N-(C廣C,o)畫烷基氨基-(d-C,o)-垸基、N.N-二-(C,-C,o)-烷基氨基-(C廣C,o)-烷基、N-(03-(:8)-環(huán)烷基氨基-(c廣c,。)-烷基、(c,-c,2)-烷基巰基、(c廣c,2)-垸基亞硫?；?cvCu)-烷基硫?；?、(cvc,6)-芳基巰基、(cvd6)-芳基亞硫?；?、((VCu)-芳基硫酰基、(C7-C")-芳烷基巰基、(C7-C,6)-芳基亞硫酰基、(C7-C,2)-芳基硫酰基、氨磺酰基、N-(C,-C,o)-烷基氨磺酰基、N，N-二-(d-C,。)-烷基氨磺?；?、(C3-Cg)-環(huán)垸基氨磺?；?、N-((VC,2)-烷基氨磺酰基、N-(CVQ6)-芳烷基氨磺?；?、N-(C,-C，n)-垸基-N-(CVd2)-芳基氨磺?；-(C,-C,。)-烷基-N-(C7-C,6)-芳烷基氨磺?；?、(C,-C,o)-烷基亞磺酰氨基、N-((C廣Cw)-烷基)-(d-C，o)-烷基亞磺酰氨基、(CVd6)-芳烷基亞磺酰氨基或N-((C,-C,o)-烷基)-(CVCw)-芳烷基亞磺酰氨基；其中芳基或含芳基基團(tuán)中的芳基可為l-5個(gè)相同或不同的基團(tuán)取代，它們包括羥基、鹵素、氟基、三氟甲基、硝基、羧基、(C,-C,2)-垸基、(C3-Cs)-環(huán)垸基、(CVC,2)-芳基、(C7-C16)-芳烷基、(c,-Cu)-烷氧基、(d-c,2)-烷氧基-(c,-Cu)-垸基、((:1^12)-烷氧基-(01-(:12)-烷颯基、(CVC,z)-芳氧基、(CVC,6)-芳垸氧基、(C,-Cg)-羥垸基、(C,-Cu)-烷基羰基、(CVCg)-環(huán)烷基羰基、(Q-C,2)-芳基羰基、(CVC,6)-芳烷基羰基、(C,-C,2)-烷氧基羰基、(C,-Cu).烷氧基-(C,-C^)-烷氧基羰基、(C6-C,2)-芳氧基羰基、(cvc,6)-芳烷氧基羰基、(CVC,)-環(huán)烷氧基羰氧基、(CVCu)-煒氧基羰氧基、(CVCu)-炔氧基羰氧基、(C廣Cu)-烷基羰氧基、(CVC。-環(huán)烷基羰氧基、(CVd2)-芳基羰氧基、(C7-Cw)-芳烷基羰氧基、肉桂酰氧基、(CVC,2)-烯基羰氧基、(C2-Cu)-炔基羰氧基、(C，-Q2)-垸氧基羰氧基、(cvcj-烷氧基-(C,-C,2)-垸基羰氧基、(cvc,2)-芳氧基羰氧基、(^-&6).芳垸氧基羰氣基、(cvco-環(huán)烷氧基幾氧基、(cvc,2)-烯氧基幾氧基、(CVC,2》炔氧基羰氧基、氨基甲?；?、N-(C,-Cu)-烷基氨基甲瑯基、N，N-二-(CVCu)-烷基氣基甲?；"(CVC8)-環(huán)垸基氨基甲?；-(CVCu)-芳基氨基甲?；-((VCA芳烷基氨基甲?；?、N-(d-C,。)-烷基-N-(Q-Cu)-芳基氨基甲?；-(C,-C,o)-烷基-N-(CVCw)-芳烷基氨基甲?；鵻N-((d國do)-烷氧基-(C,-C，。)-烷基)氨基甲?；-(((VCu)-芳?xì)饣?(c,-do)烷基)氨基甲?；?4-(((:7-€;16)-芳垸氧基-(c,-C,o)-烷基)氨基甲?；?、N-(d-C,J-烷基-N-((C,-Cw)-烷氧基-(C,-d。)-烷基)氨基甲?；-(C廣Cw)-烷基-N-(((VC,2)-芳氧基-(CVdQ)-烷基)氨基甲?；?、N-(C,-do)-烷基-N-((C7-C,6)-芳烷氧基-(CVCm)-烷基)氨基甲酰基、氨基甲酰氧基、N-(CVC12)-烷基氮基甲酰氧基、N,N-二-(d-Cu)-烷基貧基甲酰氧基、N-(CVC8)-環(huán)烷基氨基甲酰氧基、N-(CVd2)-芳基氨基甲酰氧基、N-(CVCw)-芳烷基氨基甲酰氧基、N-(C「C，。)-烷基-N-((VC,6)-芳基氨基甲酰氧基、N-(C-d。)-烷基-N-(C7-CM)-芳垸基氨基甲32酰氧基、N-((d-C,o)-烷氧基-(C廣C,o)-烷基)氨基甲酰氧基、N-((CVCu)-芳氧基-(cvcuO烷基)氨基甲酰氧基、^(((:7-(:16)-芳烷氧基-(c廣c,o)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(C廣C,o)-烷基-N-((C,-C,o)-烷氧基-(C,-C,o)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(C廣C,o)-垸基-N-(((VCJ-芳氧基-(C,-C,。)-烷基)氨基甲酰氣基、N-(C,-C,。)-烷基-N-((C7-C,6)-芳烷氧基-(C,-C,。)-烷基)氨基甲酰氧基、氨基、(C,-Cu)-烷基氨基、二(C，-C,2)-烷基氨基、((VCg)-環(huán)烷基氨基、(C2-C。-烯基氨基、(CVC,2)-炔基氨基、N-(CVCu)-芳基氨基、N-(C-Cu)-芳烷基氨基、N-烷基-芳烷基氨基、N-烷基-芳氨基、(C,-C12)-烷氧基-N-(C,-C,。)-垸基氨基、((:3-<:8)-環(huán)烷基羰基氨基、(CVC,2)-芳基羰基氨基、(CVC,6)-芳垸基羰基氨基、(C,-Cu)-垸基羰基-N-(C,-C,。)-烷基氨基、(CVQ)-環(huán)烷基羰基-N.(C,-C,c)-烷基氛基、(C6-C,2)-芳基羰基-N-(d-Q。)-烷基氨基、(CVCu)-芳烷基羰基-N-(c,-Cm)-垸基氨基、((:1《12)-垸基羰基氨基-(c廣Cg)-烷基、(C3-Cg)-環(huán)垸基羰基氨基-(C廠Q)-烷基、(CVCJ-芳基羰基氨基-(Q-Cg)-烷基、(CVCu)-芳烷基羰基氨基-(C,-Q)-烷基、氨基-(C,-Q。)-烷基、N-((Vdc)-烷基氨基-(CVdo)-垸基、N.N-二"(d-Cm)-烷基氨基-(d-Cin)"烷基、&(03-0>環(huán)烷基氨基-(C,-d。)-烷基、(C,-C,2)-烷基巰基、(d-Q2)-烷基亞硫?；?、(Q-C,2)-烷基硫?；?、(CVC,6)-芳基巰基、(CVCJ-芳基亞硫?；?、(CVC,2)-芳基硫?；?、(C7-C,6)-芳烷基巰基、(C7-C,6)-芳基亞琉敢基或(CVCw)-芳基硫?；蛘逺'與RZ或W與RS形成鏈[CHJ。，可以是飽和鏈，也可以是含C-C雙鍵的不飽和鏈，其中1或2個(gè)012任選為0、S、SO、SC^或NR'取代，其中R'是氫、(CVC,2)-芳基、(CrCs)-烷基、(C,-C,)-烷氧基-(C廣C8)-烷基、((VC,2)-芳烷氧基-(C廣Cs)-烷基、(C6-C,2)-芳?xì)饣?(C,-Cg)-烷基、(CVdo)-垸?；⑷芜x取代(CVCM)-芳烷?；?、任選取代(CVC,2)-芳酰基o是3、4或5:或者W與RZ或W與RS同包含它們的吡啶或噠嗪形成5，6，7，8-四氫異喹啉環(huán)、5，6，7，8-四氫喹啉環(huán)或5，6,7，8-四氨肉啉環(huán)；或者R1與R2或R2與R3形成5元或6元芳碳環(huán)或芳雜環(huán)或者R1與P或B與S同包含它們的觀坡或瞎嗪形成任選取代的雜壞體系,所述體系可選自噻吩并吡啶、呋喃并吡啶、吡啶并吡啶、嘧啶并吡啶、咪唑并吡啶、噻唑并吡啶、噁唑并吡啶、喹啉、異喹啉和肉啉；其中，喹啉、異喹啉和肉啉宜滿足式Ia、Ib和Ic:0a)cn>〉腳其中RU-R23各自獨(dú)立，定義同R1、R2和R3;或者基團(tuán)R'與R2同包含它們的吡啶形成式Id所示化合物-其中V是S、0或NR、其中W選自氫、(d-C6)-烷基、芳基或芐基其中芳基可如上所述為1-5個(gè)取代基取代且R24、R2S、R26和R27各自獨(dú)立，定義同R1、R2和R3:g是0或1到(2f+l):x是0-3;h是3-7;包括上述化合物的生理活性鹽和前體藥物，在某些實(shí)施方式中，以上式(1)所示化合物包括(但不限于)[(3-甲氧基-吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸鹽酸3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((十六烷氧基)-羰基)-甲基)-酰胺；3-甲氣，吡啶-2-羧酸N-(((l-辛氧基)-羰基)-甲基)-酰胺3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((己^i):羰基)-甲基)-酰胺3-甲氧基吡啶-2-羧^N-(((丁氧基)-羰基)-甲基)-酰胺外消旋酒石酸3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((2-壬氧基)-羰基)-甲基)-酰胺；3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((庚氧基)-羰基)-甲基)-酰胺；3-苯氧基吡啶-2-羧酸N-(((辛氧基)-羰基)-甲基)-酰胺3-苯甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((丁氧基)-羰基)-甲基)-酰胺；5-(((3-(1-丁氧基)-丙基)-氛基)-羰基)-3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-((苯甲氧基羰基)-甲基)-酰胺；5-(((3-(l-丁氧基)-丙基)-氨基)-羰基)-3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((l-丁氧基)-羰基)-甲基)-酰胺5-(((3-十二烷氧基丙基)-氨基)-羰基)-3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-((苯甲氧基羰基)-甲基)-酰胺；[(3-羥基-吡啶-2-羰基)-氨基]乙酸[(3-甲氧基-吡啶-2-羰基)-氨基)乙酸，在另一些實(shí)施方式中，以上式(Ia)所示化合物包括(但不限于)N-((3-羥基-6-異丙氧基-喹啉-2-羰基)-氨基)乙酸、N-((6-(l-丁氧基)-3-羥基喹啉-2-基)-幾基)氨基乙酸、[(3-羥基-6-三氟甲諷基-喹啉-2-羰基)氣基]乙酸、N-((6"氯.3-羥基喹啉-2-基)-羰基)氨基乙酸、>1-((7-氯-3-羥基喹啉-2-基)-羰基)氨基乙酸和[(6-氯-3-羥基-喹啉-2-羰基)氨基]乙酸。在其他一些實(shí)施方式中，以上式(Ib)所示化合物包括(但不限于)^((1-氯-4-羥基-7-(2-丙氧基)異喹啉-3-基)羰基)氨基乙酸、>1-((1-氯-4-羥基-6-(2-丙氧基)異喹啉-3-基潘基)氨基乙酸、N-((l-氯-4-羥基-異喹啉-3-羰基)氨基)乙酸、N-((l-豕-4"羥基-7-甲氧基異喹啉-3-基)羰基)氛基乙酸、N-((l-氯-4-羥基-6-甲氧基異喹啉-3-基)羰基)氨基乙酸、1^-((7-丁氧基)-1-氯-4-羥基異喹啉-3-基)羰基)氛基乙酸、N-((6-苯甲氧基-l-氯-4-羥基異喹啉-3-羰基〉氨基)乙酸、((7-苯甲氧基-l-氯一羥基異喹啉-3-羰基)氨基)乙酸甲酯、N-((7-苯甲氧基-l-氯-4-羥基異喹啉-3-紫基)氨基)乙酸、N-((8-氯-4"羥基異喹啉-3-基)羰基)氨基乙酸、N-((7-丁氧基-4>羥基異喹啉-3-羰基)氣基)乙酸.在其他實(shí)施方式中，用于本發(fā)明方法的化合物選自具有化學(xué)式(II)的化合物其中，R^是氫、硝基、氮基、銀基、鹵素、(C,-C4)-烷基、羧基或它們的易代謝酯衍生物；(C,-C4)-烷基氨基、二-(CVQ)-烷基氨基、(C,-C6)-烷氧基羰基、(C2-C4)-烷?；?，羥基-(CVQ)"烷基、氨基甲酰基、N-(C,-CJ-烷基氨基甲?；?CVC》-烷硫基、(C廣C》-瓊基亞硫酰S^(CrC4下烷基Wm基、苯硫基、苯基亞硫?；⒈交蝓；?，所述苯基可任選為l-4個(gè)相同或不同鹵素取代、(d-C4)-烷氧基、(CVC4)-烷基、銀基、羥基、三氟甲基、氟代-(CVQ)-烷硫基、氟代-(C,-C4)-垸基亞硫酰基、氟代-(C廣C4)-烷基硫酰基、(C廣C4)-烷氧基-(C2-C4〉-烷氧基羰基、N，N-二-[(C,-C4)-烷基]氨基甲酰基-(CVCO-烷氧基羰基、(CVC4)-烷基氨基-(CVC4)-烷氧基羰基、二-(<:,-(:4)-烷基氨基-(C2-Q)-烷氧基羰基、((:,-(:4)-烷氧基-((:2-<:4)-烷氧基-((:2《4)-烷氧基羰基、(C:-C》-烷酰氧基-(CVQ)-烷基或N-[氨基-(C2-Qi)-烷基-氨基甲酰基RW是氫、羥基、氨基、氣基、鹵素、(C,-C》-垸基、羧基或它們的易代謝酯衍生物；(C,-C4)-烷基氨基、二-(CVC》-烷基氨基、(C廣C6)-烷氧基羰基、(CrC4)-烷?；?C,-C4)-烷氧基、羧基-(C，-C4)-垸氧基、((VC4)-烷氧基羰基-(CVC4)-烷氧基、氨基甲?；?、N-(d-Cg)-烷基氨基甲酰基、N，N-二-(C,-C,)-烷基氨基甲酰基、N-[氨基-(CVC8)-垸基]貧基甲?；?、N-[(C,-C4)-烷基氨基-(CVC8)-烷基]氨基甲?；?、N-[二-(C，-C4)-烷基氨基-(CVC8)-烷基]氛基甲?；-環(huán)己基氨基甲?；?、N-環(huán)戊基氨基甲?；?、N-(C,-C4)-垸基環(huán)己基氨基甲酰基、N-(C,-C》-烷基環(huán)戊基氨基甲?；-苯基貧基甲?；?、N-(d-C4)-烷基-N-苯基氨基甲?；?、N，N-二苯基氨基甲酰基、N-苯基-(d-C4)-烷基]氨基甲?；?、N-(C,-C4)-垸基-N-[苯基-(d-C4)-烷基]氨基甲酸基、或N,N-二[苯基-(C,-C4)-烷基]氨基甲酰基，所述苯基可任選為1-4個(gè)相同或不同鹵素取代、(C廣C4)-烷氧基、(C廣C4)-垸基、基、羥基、三氟甲基、N-[(C2-Q)-烷瑯基]貧基甲酰基、N-[(d-CJ-烷氧基羰基]氨基甲琉基、N-[氟-(d-C6)-垸基]氨基甲?；^N-[氟-(C2-C^烷基]-N-(d-C4)-烷基氨基甲?；,N-[二氟-(CVQ)-烷基氨基甲?；?、1-吡咯基-羰基、哌啶基羰基、1-呢嗪基-羰基、嗎啉基羰基，其中雜環(huán)基團(tuán)任選為14個(gè)以下基團(tuán)取代(CVC4)-烷基、芐基、1，2，3，4~四氫異畦啉-2-基-羰基、N,N-[二-(d-Q)-烷基憤代氨基甲?；-(C2-C4)-烷?；被騈-[(C,-Q)-烷氣基羰基]氨基R鄧是氫、(C廣C4)-烷基、(CVC4)-烷氧基、鹵素、硝基、羥基、氟-(l-4C)烷基或吡啶基R"是氨、(C廣C4)-垸基、(CVQ)-烷氧基、鹵素、硝基、羥基、氟-(C廣C4)烷基、吡啶基或甲氧基R"是氨、羥基、氨基、(CVC4)-烷基氨基、二(CrC4)-烷基氨基、鹵素、(C，-C4)-烷氧基-(C2-d)-烷氧基、氟-(d-Q)-烷氧基、吡咯-l-基、哌啶基、哌嗪-l-基或嗎啉基，其中雜環(huán)基任選為l-4個(gè)相同或不同的(d-C4)-烷基或苯基取代R"和R"各自單獨(dú)選自氫、(CVC4)-烷基和(C,-Q)-烷氧基還包括它們的藥用鹽和前體藥物。在某些實(shí)施方式中，化學(xué)式(n)所示化合物包括(但不限于)4-氧-l，4-二氫-[1，10]菲咯啉-3-羧酸、3-羧基-5-羥基-4-氧-3,4-二氫-l,10-菲咯啉、3-羧基-5-甲氧基-4-氧-3，4-二氫-1，10-菲咯啉、5-甲氧基-4>氧-1,4-二氫[1，10菲咯啉-3-羧酸乙酯、5-甲氧基-4-氧-l，4-二氫[l,10]菲咯啉-3-羧酸和3-羧基-8-羥基-4>氧-3，4<二氫-1,10-菲咯啉。所述化合物可單獨(dú)施用，也可結(jié)合其他各種治療手段施用.在一種實(shí)施方式中，所述化合物與另一種2-酮戊二酸雙加氧酶抑制劑一起施用，對(duì)于單獨(dú)的2-酮戊二酸雙加氧酶族成員來說，這兩種化合物具有不同的特異性。這兩種化合物可以一定比例同時(shí)施用，也可在治療過程中依次施用，例如用于心肌梗塞，在一個(gè)具體實(shí)施方式中，一種化合物專門抑制HIF脯氮酰羥化酶的活性，另一種化合物專門抑制膠原脯氨酰4-羥化酶的活性，在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物與另一個(gè)具有不同作用模式的醫(yī)療試劑一起使用，例如ACE抑制劑(ACEI)、血管緊縮素-II受休阻斷劑(ARB)、利尿劑和/或地高辛。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物與肉堿一起施用。一方面，本發(fā)明化合物能抑制一種或多種2-酮戊二酸雙加氧酶.在一種實(shí)施方式中，所述化合物能抑制至少兩種2-酮戊二酸雙加氧酵族成員，例如HIF脯氨酰羥化酶和膠原脯氨酰4-羥化酶，它們的特異性可相同或不同。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物可對(duì)一個(gè)2-酮戊二酸雙加氧酶具有特異性，例如HIF脯氨酰羥化酶，并對(duì)其他族成員顯示很小特異性或沒有特異性。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式包含利用口腔送藥或透皮送藥機(jī)制的方法。因此，本發(fā)明還提供了一種包含本發(fā)明化合物的口服藥劑.在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明方法涉及通過透皮機(jī)制施用本發(fā)明化合物。因此，本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明化合物的透皮用藥裔，根據(jù)這里的介紹，本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易理解本發(fā)明的上述及其他實(shí)施方式所有這些實(shí)施方式都是專門設(shè)計(jì)的。附圖簡介圖1A和1B所示為用本發(fā)明化合物處理的細(xì)胞中HIF-la的穩(wěn)定化。圖1A所示為用本發(fā)明各種化合物處理的人包皮纖維原細(xì)胞(HFF)中HIF-lci的穩(wěn)定和富集，圖1B所示為用本發(fā)明化合物處理的不同人細(xì)胞中HIF-l(i穩(wěn)定和富集的劑量應(yīng)答應(yīng)答。圖中所示細(xì)胞線包括HFF、人類微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMEC)、靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(AG7)、人類臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)、鱗狀上皮癌細(xì)胞(SCC)、人肺纖維原細(xì)胞(HLF)、乳腺上皮癌細(xì)胞(MCF7)、變性胎兒腎細(xì)胞(293A)和子宮頸癌細(xì)胞(HeLa)。圖2A和2B所示為用本發(fā)明化合物處理的人細(xì)胞中HIF-la的穩(wěn)定和富集，圖2A所示為用本發(fā)明各種化合物處理的293A和人類肝癌細(xì)胞(Hep3B)。圖2B所示為用本發(fā)明示例性化合物處理的H印3B細(xì)胞中HIF-l(i穩(wěn)定化的劑量應(yīng)答，37圖3A和3B所示為用本發(fā)明化合物處理的人體細(xì)胞中的耗氧量和細(xì)胞存活能力。圖3A所示為用本發(fā)明各種化合物處理的細(xì)胞中的單劑量和劑量應(yīng)答耗氧量。圖3B所示為用圖3A中選定的化合物處理的細(xì)胞中的細(xì)胞增殖和存活能力，測定的是WST-1四唑鹽的分裂情況(RocheDiagnosticsCorp"IndianapolisIN)。圖4A和4B所示為用本發(fā)明化合物處理的人體細(xì)胞在HIF-反應(yīng)基因的表達(dá)上得到提髙。圖4A所示為用本發(fā)明化合物處理之后，人體細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)的水平，其中所述因子是血管形成過程中的關(guān)鍵基因，圖中所示細(xì)胞線為293A、Hep3B和HFF。圖4B所示為用本發(fā)明化合物處理過的細(xì)胞中醛縮嗨隨時(shí)間增加的過程，其中醛縮酶是糖酵解通路中的關(guān)鍵酶。圖5A和5B所示為用本發(fā)明化合物處理后，動(dòng)物肺部血管生長蛋白的表達(dá)得到提髙。圖5A所示為血管生長基因表達(dá)的綜合圖。圖中所示基因包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)-C、Flt-1/VEGF受體-1、腎臟髄質(zhì)素、內(nèi)皮質(zhì)素-1、血漿酶原激活因子抑制劑(PAI)-1和Cyr61。圖5B所示為從圖5A中選擇的內(nèi)皮質(zhì)素-1和腎臟讎質(zhì)素在編碼過程中的基因表達(dá).圖6A和6B所示為體內(nèi)HIF反應(yīng)基因的表達(dá)得到提髙，圖6A所示為用本發(fā)明化合物處理后，大鼠的肝和腎中的VEGF在編碼過程中的轉(zhuǎn)錄水平得到提髙。圖6B所示為與未經(jīng)處理的對(duì)照組相比，用本發(fā)明化合物做最終處理之后，大鼠血漿中的VEGF在2小時(shí)、5小時(shí)和20小吋吋的水平。圖7A和7B所示為用本發(fā)明化合物處理之后，動(dòng)物腎臟中糖酵解酶的表達(dá)得到提髙.圖7A所示為糖酵解基因表達(dá)的綜合圖，圖中所示基因包括醒縮酶-A、烯醇酶-1、Ghitl、Glut3、GAPDH、己糖激酶-1和-2、乳酸脫氫酶-A、磷酸果糖激酶-L和-C、磷酸甘油酸激酶-1和丙酮酸檄酶-M。圖7B所示為從圖7A中選擇的醛縮酶-A和磷酸果糖激酶-L在編碼過程中的基因表達(dá)。圖8所示為誘導(dǎo)心肌梗塞樣本中，用本發(fā)明化合物處理的組(n-34)和未經(jīng)處理的對(duì)照組(n-34)在不同時(shí)間間隔時(shí)的存活百分?jǐn)?shù)，菌9A和W所錄為患^lltMMW^^IW靴合物蹄H租肝耒經(jīng)處理的對(duì)照組，在心臟結(jié)構(gòu)上的改善，圖9A所示為患心肌梗塞的樣本中用本發(fā)明化合物處理的組相對(duì)于未經(jīng)處理的對(duì)照組，在不同間隔時(shí)期左心室收縮末期的直徑(LVESD)的變化。圖9B所示為患心肌梗塞的樣本中用本發(fā)明化合物處理的組相對(duì)于未經(jīng)處理的對(duì)照組，在不同間隔時(shí)期左心室舒張末期的直徑(LVEDD)的變化.圖10A和IOB所示為患心肌梗塞的動(dòng)物用本發(fā)明化合物治療之后，相對(duì)于未38經(jīng)處理的對(duì)照組，其心臟功能得到改善，圖IOA所示為相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照組，用本發(fā)明化合物治療過的誘導(dǎo)心肌梗塞樣本組在不同間隔時(shí)期在左心室噴血分?jǐn)?shù)上的變化。圖IOB所示為相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照組，用本發(fā)明化合物治療過的心肌梗塞樣本組在不同間隔時(shí)期噴血分?jǐn)?shù)減少的情況。圖ll所示為相對(duì)于未經(jīng)處理的對(duì)照組，用本發(fā)明化合物處理的樣本組4周之后心臟的收縮反應(yīng)，所述樣本包括受異丙腎上腺素激發(fā)和不受其激發(fā)的樣本.圖12A和12B所示為患心肌梗塞的動(dòng)物用本發(fā)明化合物預(yù)治療之后，相對(duì)于未經(jīng)處理的對(duì)照組，在心臟結(jié)構(gòu)上得到改善。圖12A所示為誘導(dǎo)產(chǎn)生心肌梗塞1周后，經(jīng)過處理的動(dòng)物與未經(jīng)處理的對(duì)照動(dòng)物相比，噴血分?jǐn)?shù)縮短在統(tǒng)計(jì)上明顯改善(p〈0.05)。圖12B所示為誘導(dǎo)產(chǎn)生心肌梗塞1周后，經(jīng)過處理的動(dòng)物與未經(jīng)處理的對(duì)照動(dòng)物相比，左心室舒張末期的直徑(LVEDD:pO.05)和左心室收縮末期的直徑(LVESD:p〈0.01)在統(tǒng)計(jì)上明顯改善，圖13所示為先對(duì)動(dòng)物進(jìn)行預(yù)治療，然后使之受到腎臟缺血再灌注損傷，隨后用本發(fā)明化合物處理，與未經(jīng)處理和進(jìn)行假手術(shù)的樣本相比，動(dòng)物的存活率提高,圖14A和14B所示為先對(duì)動(dòng)物進(jìn)行預(yù)治療，然后使之受到腎臟缺血再灌注損傷，隨后用本發(fā)明化合物處理，與未經(jīng)處理的對(duì)照樣本相比，其腎功能得到改善，圖14A折示為受到誘導(dǎo)缺血再灌注損傷3天和7天之后，進(jìn)行治療的動(dòng)物與未經(jīng)治療的動(dòng)物相比，低血尿中氮的含量.圖14B所示為受到誘導(dǎo)缺血再灌注損傷3天、7天和14天之后，進(jìn)行治療的動(dòng)物與未經(jīng)治療的動(dòng)物相比，低血膽固醇的含量。圖15A和15B所示為與未經(jīng)處理的對(duì)照組相比，用本發(fā)明處理過的動(dòng)物在慢性創(chuàng)傷的治療效果上得到改善。圖15A所示為受傷7天和IO天之后，經(jīng)過處理的動(dòng)物與未經(jīng)處理的對(duì)照組相比，上皮細(xì)胞和肉芽組織的生長情況得到改善。圖15B所示為經(jīng)過處理的動(dòng)物與未經(jīng)處理的動(dòng)物傷疤中峰-峰距離沒有差別.發(fā)明詳述在介紹本發(fā)明組合物和方法之前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不受具體方法、原則、細(xì)胞線、化驗(yàn)和試劑的限制，因?yàn)檫@些都是可以變化的.還應(yīng)當(dāng)理解，這里所用術(shù)語也只是為了說明本發(fā)明的特定實(shí)施方式，決不是限制本發(fā)明附屬權(quán)利要求中所設(shè)定的范圍.必須指出，說明書和附屬權(quán)利要求中所用單數(shù)形式"一"包括復(fù)數(shù)情況，除非文中另外明確指出，因此，舉例來說，"一個(gè)片段"包括許多個(gè)這樣的片段；"一種抗體"可以指一種或多種抗體，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的等價(jià)抗體依次類推。除非另有說明，這里所用所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語的含義與本領(lǐng)域通常理解的含義相同.盡管類似于或等價(jià)于這里所描述的任何方法和材料都可用于本發(fā)明實(shí)踐或?qū)嶒?yàn)中，下面仍給出優(yōu)選方法、裝置和材料，這里引用的所有文獻(xiàn)都以其整體形式作為參考，目的是介紹這些文獻(xiàn)中與本發(fā)明相關(guān)的方法、試劑和工具。這決不可誤解為我們承認(rèn)本發(fā)明無權(quán)在先前的發(fā)明中作類似的介紹。除非另有說明，本發(fā)明在實(shí)踐中將采用本
技術(shù)領(lǐng)域：
中的常規(guī)化學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因?qū)W、免疫學(xué)和藥學(xué)方法.例如，可參見Geimaro，A.R.編的《R咖ington藥物學(xué)》(Remington'sPhannaceuticalSciences)(]990),第18版，Mack出版公司；Hard咖，J.G,，Limbir4LE.和Gilman，A.G.編的《治療方法的藥理基礎(chǔ)》(ThePhannaceuticalBasisofTherapeutics)(2001),第IO版，McGraw-Hill公司Colowick，S.等編《免疫學(xué)方法》(MethodsInEnzymology),Academic出版公司W(wǎng)eir，D.M.和Blackwell，C.C.編《實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)手冊》(HandbookofExperimentalImmunology)(1986)，VoU-IV,BlackwellScientific出版社Maniatis，T.等編《汾子克隆實(shí)驗(yàn)手冊》(MoIecualrCloning:ALaboratoryManual)(1989),第2版，Vols.I-III,ColdSpringHarborLaboratory出版社；Ausubel，F(xiàn).M.等編《分子生物學(xué)簡明協(xié)議》(ShortProtocolsinMolecularBiology)(1999),第4版，JohnWiley&Sons:Ream等編《分子生物技術(shù)精編實(shí)驗(yàn)室課程》(MolecualrBiologyTechniques:AnIntensiveLaboratoryCourse)(1998)，Academic出版社Newton，C.R.和Graham,A.編《PCR》(生物技術(shù)入門系列)(IntroductiontoBiotechniquesSeries)(1997)，第2版,SpringerVerlag,定義術(shù)語"局部缺血"指血流量下降。局部缺血便併JS給組織的官喬物頂卜降，包括氧氣。在這樣一些情況下會(huì)引起局部缺血，如動(dòng)脈硬化、動(dòng)脈或靜脈中形成血栓、動(dòng)脈或靜脈受栓塞物堵塞、其他原因引起的血管封閉，例如由血管痙攣等引起.這些情況會(huì)減少血流量，產(chǎn)生對(duì)器官或組織的低灌注狀態(tài)，或者完全堵塞血流.引起缺血的其他情況包括受傷導(dǎo)致的組織損傷，例如脊髓受傷毒菌感染，例如，它會(huì)引起充血性心力衰竭等。術(shù)語"缺血性疾病"和"缺血性失調(diào)"包括嚴(yán)重缺血性疾病和慢性缺血性疾病，嚴(yán)重缺血性疾病包括(但不限于)心肌梗塞、缺血性中風(fēng)、肺栓塞、圍產(chǎn)低氧、循環(huán)系統(tǒng)休克(例如包括失血、敗血、心原缺血等)、髙山病、嚴(yán)重呼吸袞竭等，慢性缺血性疾病包括動(dòng)脈硬化、慢性靜脈功能不足、慢性心力衰竭、心臟硬化、糖尿病、斑狀惡化、睡眠呼吸暫停、肢端動(dòng)脈痙攣癥、系統(tǒng)硬化、非細(xì)菌性成栓心內(nèi)膜炎、動(dòng)脈閉合疾病、心絞痛、TIAs、慢性酒精肝疾病等.當(dāng)個(gè)體置于普通麻醉狀態(tài)下時(shí)，也會(huì)引起缺血性疾病，并引起準(zhǔn)備移植的組織損壞。術(shù)語"低氧"和"低氧的"指環(huán)境含氧量低于常規(guī)水平。在低氧環(huán)境中培養(yǎng)細(xì)胞可使細(xì)胞低氧，或者用模擬低氧的化合物處理細(xì)胞。在細(xì)胞培養(yǎng)中用來確定低氧狀態(tài)的氧含量可用本領(lǐng)域中的技術(shù)測定.術(shù)語"低氧性疾病"和"低氧性失調(diào)"包括(但不限于)上述缺血性疾病(缺血性低氧)，這里低氧是由循環(huán)量減少引起的；肺部疾病(低氧性低氧)，如COPD、嚴(yán)重肺炎、肺水腫、肺部髙血壓、透明膜疾病等，這里低氧是由肺中的氧交換量減少引起的；貧血疾病(貧血性低氧)，如胃潰瘍或十二指腸浪瘍、肝病或腎病、血小板減少或凝血病、癌癥或其他慢性疾病，癌癥化療和其他治療干預(yù)產(chǎn)生的貧血等，這里低氧是由血色素或紅細(xì)胞濃度下降引起的高原疾病等。術(shù)語"失調(diào)"和"疾病"用來泛指任何偏離常規(guī)狀態(tài)的疾病。術(shù)語"缺血性疾病"和"缺血性失調(diào)"指任何與缺血有關(guān)的疾病或不適。術(shù)語"低氧性疾病"和"低氧性失調(diào)"指任何與低氧有關(guān)的疾病或不適。這種缺血和低氧疾病包括(但不限于)上述疾病.術(shù)語"HIFtt"指低氧誘導(dǎo)因子蛋白的a亞基。HIFtt可以是任何人或哺乳動(dòng)物蛋白或蛋白片段，包括(但不限于)人HIF-1(X(基因庫續(xù)編號(hào)No.Q16665)、HIF-2<1(基因庫續(xù)編號(hào)No.AAB41495)和HIF-3a(基因庫續(xù)編號(hào)No.AAD22668);鼠科HIF-la(基因庫續(xù)編號(hào)No.Q61221)、HIF-2a(基因庫續(xù)編號(hào)No.BAA20130和AAB41496)和HIF-3a(基因庫續(xù)編號(hào)No.AAC72734):大鼠HIF-la(基因庫續(xù)編號(hào)No.CAA70701)、HIF-2a(基因庫續(xù)編號(hào)No.CAB96612)和HIF-3a(基因庫續(xù)編號(hào)No.CAB96611);牛HIF-la(基因庫續(xù)編號(hào)No.BAA78675)。HIFa也可以是任何非哺乳動(dòng)物蛋白或蛋白片段，包括XenopuslaevisHIF-1(X(基因庫續(xù)編號(hào)No.CAB96628)、Drosophilamel幼o(hù)gasterHIF-la(基因庫續(xù)編號(hào)No,JC4851)和雞HIF-la(基因庫續(xù)編號(hào)No.BAA34234)。HIFa基因序列也可通過常規(guī)克隆技術(shù)獲得，例如用上述全部或部分HIFa基因序列作為探針，測定另一片段中的HIFa序41列.HIFa片段包括人類HIF-la所規(guī)定的區(qū)域，包括氨基酸40卜603(Hu油g等，同上)、氨基酸531-575(^加8等(1997)JBiolChem272:19253-19260)、氨基酸556-575(Tanimoto等，同上)、氨基酸557-571(Srinivas等(1999)Bioche邁BiophysResCommun260:557-561)和氨基酸556-575(Iv幼和Kaelin(2001)Science292:464-468)。另外，HIFa的片段包含至少出現(xiàn)一次的基序LXXLAP,例如出現(xiàn)在HIF-la主序列中的L397TLAP和L9EMLAP.此外，fflFa的片段包含任何保留了HIFa的至少—個(gè)功能或結(jié)構(gòu)特征的片段。例如,用于實(shí)施例7中篩選化驗(yàn)的HIF多肽可包含[甲氧基香豆素1-DLDLEALAPYIPADDDFQL-酰胺(SE1IDNO:5)。術(shù)語"HIF脯氨酰羥化嗨"和"HIFPH"指任何能使HIF蛋白中的脯氨酸殘基發(fā)生羥基化的酶。由HIFPH羥化的脯氨酸殘基包含基序LXXLAP中的脯氨酸，例如出現(xiàn)在HIF-la主序列中的L397TLAP和LSS9EMLAP。HIFPH包含Egl-Ni加(EGLN)基因族中的成員，如Taylor(2001,Gene275:125-132)所述，Aravind和Koonin(2001,GenomeBiol2:RESEARCH0007)、Epstein等(2001,Cell107:43-54)、Bruick和McKnight(2001，Science294:1337-1340)對(duì)其進(jìn)行了表征。HIFPH酶的例子有人SM-20(EGLN1X基因庫續(xù)編號(hào)No.AAG33965:Dupuy等(2000)Ge加mics69:348-54)、EGLN2異構(gòu)體l(基因庫續(xù)編號(hào)No.AAG33965;Taylor,同上)、EGLN2異構(gòu)體2(基因庫續(xù)編號(hào)No.NP—060025)和EGLN3(基因庫續(xù)編號(hào)No.CAC42511:Taylor,同上):小鼠EGLNl(基因庫續(xù)編號(hào)No.CAC42515)、EGLN2(基因庫續(xù)編號(hào)No.CAA42511)和EGLN3(SM-20)(基因庫續(xù)編號(hào)No.CAC42517):大鼠SM-20(基因庫續(xù)編號(hào)No.AAA19321)。此外，HIFPH可包含Cae加rhabditiselega加EGL-3(基因庫續(xù)編號(hào)No.AAD56365)和DrosophilamelanogasterCGI114基因產(chǎn)品(基因庫續(xù)編號(hào)No.AAF52050),HIFPH也包含至少保留了前述全長蛋白的一個(gè)結(jié)構(gòu)或功能特征的任何片段，包括具有羥化酶活性的片l這里所用術(shù)語"氨基酸序列"或"多肽"指HIFtt及其片段，或者HIFPH及其片段，包括低肽、肽或蛋白質(zhì)序列，或者指它們的片段和天然或合成分子，"片段"可指一個(gè)序列中的任何部分，它至少包含了蛋白質(zhì)的一個(gè)結(jié)構(gòu)或功能特征，免役原片段或抗原片段是多肽片段，宜為長約5-15個(gè)氨基酸、保留了至少一種生物或免役活性的片段。用"氨基酸序列"指稱天然蛋白分子的多肽序列時(shí)，"氨基酸序列"和類似術(shù)語并非將氨基酸序列限定在與所述蛋白分子相關(guān)的完全天然42序列上。這里所用術(shù)語"相關(guān)蛋白質(zhì)"指與HIFa脯氨酰羥化酶有關(guān)的蛋白質(zhì)，它包含其他2-酮戊二酸雙加氧酶，特別是那些類似需要Fe2+、2-酮戊二酸和氧來維持羥化酶活性的族成員，這種酶包括(但不限于)膠原賴氨酰羥化酶、膠原脯氨酰4-羥化酶和因子抑制HIF(FIH),后者是負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)HIF(i交叉激活的天冬酰胺羥化酶，(基因庫續(xù)編號(hào)No.AAL27308:Mahon等(2001)GenesDev15:2675-2686:Lando等(2002)Science295:858-861:Lando等(2002)Ge加sDev16:1466-1471。另見Elkins等(2002)JBiolChemC200644200,)術(shù)語"促效藥"指增加或延長特定分子如酶或蛋白，或者特定環(huán)境如低氧環(huán)境的持續(xù)效果的分子。促效藥包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或其他能調(diào)節(jié)靶分子的效果的任何分子。術(shù)語"拮抗劑"指降低特定分子的生物或免役活性的效果或持續(xù)時(shí)間的分子。拮抗劑包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物、抗體或其他任何能降低靶分子效果的分子，術(shù)語"微陣列"指核酸、氨基酸、抗體等在基底上的任何排列方式.基底可以是任何合適的載體，例如珠子、玻璃、紙、硝基纖維、尼龍或任何合適的膜等.基底可以是任何剛性或半剛性載體，包括(但不限于)膜、過濾器、晶片、芯片、載玻片、纖維、珠子(包括磁性或非磁性)珠子、凝膠、管材、板材、聚合物、微粒、毛細(xì)管等，所述基底可提供表面進(jìn)行涂敷操作，且/或具有各種表面形式，如井、針、溝、槽和孔，核酸、氨基酸等可以附著在它們上面。這里所用術(shù)語"賦形劑"指在藥品或其他片劑的生產(chǎn)中所用的惰性或非活性物質(zhì)，包括(但不限于)用作粘合劑、崩解劑、涂料、壓縮/囊封助劑、霜?jiǎng)┗蛳磩?、潤滑劑、注射劑、甜味劑或調(diào)味劑、懸浮/凝膠劑、濕法造粒劑的任何物質(zhì).粘合劑包括卡波普(carbopol)、聚維酮、黃原膠等涂料包括纖維素乙酸酯對(duì)二苯甲酸酯、乙基纖il素^J&^多蘆膠、麥芽餹Jt精等j^EM/連封助劑包括碳酸鈣、右旋糖、果糖dc、蜂蜜dc、乳糖(無水或一水；任選與阿巴斯甜、纖維素或微晶纖維素組合)、淀粉dc、蔗糖等崩解劑包括交聯(lián)羧甲纖維素鈉、胞外多糖膠、淀粉羥乙酸鈉等霜?jiǎng)┖拖磩┌溠刻呛?、卡拉膠等潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、硬脂基富馬酸鈉用于咀噃藥片的材料包括右旋糖、果糖dc、乳糖(一水合物,任選與阿巴斯甜或纖維素混合)等注射劑包括甘露醇、聚維酮等；增塑劑包括癸二酸二丁酯、聚乙烯乙酸鄰二苯甲酸酯等懸浮/凝膠劑包括卡拉膠、淀粉羥乙酸鈉、黃原膠等甜味劑包括阿巴斯甜、右旋糖、果糖dc、山梨醇、蔗糖dc等濕法造粒劑包括碳酸鈣、麥芽糖糊精、微晶纖維素等。術(shù)語"樣本"在這里使用其廣泛含義。樣本可取自任何來源，例如體液、分泌物、組織、細(xì)胞或培養(yǎng)液中的細(xì)胞，所述培養(yǎng)液包括(但不限于)唾液、血液、尿液、血消、血漿、玻璃液、滑液、腦髄液、羊水和器官組織(例如活檢組織)基因組DNA、cDNA、RNA、mRNA等摘除的細(xì)胞或組織，或者這種細(xì)胞或組織上的斑點(diǎn)或印記。樣本也可取自這樣一些來源，例如人或人以外的哺乳動(dòng)物等。樣本也可以是任何疾病的動(dòng)物模型，樣本可放在溶液中，也可固定或附著在基底上。樣本可指任何材料，只要它適合用來測定HIF(J或HIF(i片段的存在，或者適合用來篩選黏附在HIFa或HIFa片段上的分子。獲取這種樣本的方法是本領(lǐng)域的技術(shù)水平所具備的。術(shù)語"處理對(duì)象"在這里使用其廣泛含義。處理對(duì)象可包括分離細(xì)胞(原核細(xì)胞或真核細(xì)胞)或培養(yǎng)液中生長的組織。處理對(duì)象宜包括動(dòng)物，特別是晡乳動(dòng)物，包括鼠、兔、牛、綿羊、豬、鼠類、馬和靈長類動(dòng)物，尤其是人.發(fā)明本發(fā)明提供了穩(wěn)定HIFa的方法、用在所述方法中的化合物以及這些方法在預(yù)防或治療HIF疾病中的應(yīng)用，包括(但不限于)上述低氧和/或缺血性疾病。本發(fā)明還涉及這樣的發(fā)現(xiàn)，即對(duì)低氧誘導(dǎo)因子(HIFa)oi亞基的穩(wěn)定是一個(gè)有效的治療途徑，當(dāng)用來治療或預(yù)防低氧性和/或缺血性疾病，例如心肌梗塞、中風(fēng)、閉合動(dòng)脈疾病、心絞痛、心臟硬化、動(dòng)脈硬化等時(shí)，可獲得意外的好處。本發(fā)明提出了穩(wěn)定HIF的方法，用以促進(jìn)血管生長、加強(qiáng)對(duì)嚴(yán)重低氧的反應(yīng)和促進(jìn)對(duì)慢性低氧的適應(yīng)，由于組織缺血是發(fā)病和死亡的主要誘因，所以尋找能穩(wěn)定HIFa的方法將有益于低氧性疾病的治療。此外，使用所述方法對(duì)于預(yù)調(diào)理低氧反應(yīng)等具有良好效果，它是在發(fā)生局部缺血或低氧事件之前在常氧環(huán)境中穩(wěn)定HIFa.所述方法還可用來誘導(dǎo)產(chǎn)生HIFa專有的效果，如下所述，包括治療性血管生長，用以恢復(fù)受損組織的血流；神經(jīng)保護(hù)，用以防止神經(jīng)退化疾病引起的神經(jīng)元萎縮等；對(duì)反應(yīng)活性物種產(chǎn)生的氧化損傷的保護(hù)，所述氧化物種源自缺血或低氧事件中的再灌注。當(dāng)用本發(fā)明方法治療缺血性和/或低氧性疾病時(shí)，所述疾病可以是急性缺血疾病，如肺梗塞、腸梗塞、腦梗塞和/或心肌梗塞，也可以是慢性缺血疾病，如動(dòng)脈封閉疾病、肝硬化、充血性心力衰竭等.此外，本發(fā)明方法可用于治療由于短期或急性受傷引起的缺血，例如脊髓受傷，或者用于治療患有肺部疾病等的病人，如肺栓塞等。當(dāng)用本發(fā)明方法預(yù)防由HIF疾病，包括(但不限于)缺血性和低氧性疾病引起的組織損傷時(shí)，治療取決于預(yù)診斷的疾病，例如髙血壓、糖尿病、動(dòng)脈閉合疾病、慢性靜脈功能不足、肢端動(dòng)脈痙攣癥、系統(tǒng)硬化、硬化癥、充血性心力衰竭等，類似地，本發(fā)明方法可用于預(yù)治療，以緩解或預(yù)防HIF疾病引起的組織損傷，包括(但不限于)缺血性和低氧性疾病。是否需要預(yù)治療取決于缺血性疾病的復(fù)發(fā)史，例如心肌梗塞或臨時(shí)性缺血取決于持續(xù)缺血的癥狀，例如心絞痛；或者取決于指示可能缺血或低氧的物理參數(shù)，如在個(gè)體受到普通麻醉或在髙緯度地區(qū)短期工作的情況下。所述方法還可用于器官移植，對(duì)器官捐獻(xiàn)者進(jìn)行預(yù)治療，并在從體內(nèi)取出后但移植給受捐者之前維護(hù)器官。這里介紹的發(fā)現(xiàn)是，對(duì)HIFa的穩(wěn)定受脯氨酸羥基化的調(diào)節(jié)，穩(wěn)定HIFtt能有效治療或預(yù)防缺血性疾病，防止其續(xù)存或發(fā)展，所述缺血性疾病如DVT、心絞痛、肺栓塞、中風(fēng)、心肌梗塞等.特別地，研究表明，與兔子網(wǎng)狀細(xì)胞溶解液(RRL)—起預(yù)培養(yǎng)且與殘基556-575[HIF(556-575)]對(duì)應(yīng)的HIF-la和HIF-la肽可專門結(jié)合到vonHippelLindau蛋白質(zhì)(pVHL)上，這種結(jié)合可引起HIF-loi的泛素化和降解*研究還表明，HIF(556-575)中髙度保留的共線性序列M56LAPYIPM在常壓條件下突變成8個(gè)連續(xù)丙氨酸后能穩(wěn)定HIF(556-575)。(Srinivas等，同上)對(duì)該區(qū)域丙氨酸的掃描顯示，全長HIF-la中或谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)-HIF-ltx氧降解區(qū)(ODD)融合蛋白(Gal4-ODD)中？554突變?yōu)楸彼嵯藀VHL結(jié)合活性.電噴離子捕獲串列質(zhì)譜法(MS/MS)和Gal4-HIF(555-575)的薄層色譜法確定Ps"的變性過程為羥基化過程，其中Gal4-HIF(555-575)是在[HS]脯氨酸存在下用RRL在體內(nèi)翻譯的。脯氨酸羥基化在功能上的重要性在于，P糊羥基化HIFa結(jié)合到pVHL上，而包含^5J點(diǎn)突變?yōu)楸彼岬腍HMa突變因子在COS7細(xì)胞中是穩(wěn)定的，對(duì)低氣的仿去鐵敏不敏感。(見Ivan和Kaelin,同上；Jaakkola等(2001)Science292:468-472)由于HIF(i受到脯氨酸羥基化(一種霈要氧氣和F一+的反應(yīng))的修飾，本發(fā)明一方面提出。HIFa羥基化中的嗨是2-兩戊二酸雙加氧酶族中的成員.這種酶包括(但不限于)膠原賴氨酰羥化酶、膠原脯氨酰3-羥化酶、膠原脯氨酰4-羥化酶a(I)和a(II)、胸腺嘧啶7-羥化酶、天冬氨酸(天冬酰胺)p羥化酶、e-N-三甲基賴氨酰羥化酶和，丁內(nèi)銨鹽羥化酶等。這些酶霈要氧、Fe2+、2-酮戊二酸和維生素C酸來獲得羥化酶活性，(參見，例如Majamaa等(1985)Bioch加J229:127-133:Myllyhaiju和Kivirikko(1997)EMBOJ16:1173-1180;Thornb加g等(1993)32:14023-14033;Jia等(1994)ProcNatlAcadSciUSA91:7227-7231)脯氨酰4-羥化酶的若干小分子抑制劑已經(jīng)得到鑒定。(參見，例如Maj咖aa等，同上；Kivirikko和Myllyhaiju(1998)MatrixBiol16:357-368;Bickel等(1998)H印atology28:404411:Friedman等(2000)ProcNatlAcadSciUSA97:4736-4741;Franklin等(2001)BiochemJ353:333-338;所有文獻(xiàn)在此完整引用)本發(fā)明提出在這里所提供的方法中使用這些化合物?？捎糜诒景l(fā)明方法的化合物包括2-兩戊二酸的結(jié)構(gòu)類似物。這些化合物可抑制2-酮戊二酸雙加氧酶族中的目標(biāo)成員，相對(duì)于2-酮戊二酸具有競爭優(yōu)勢，而相對(duì)于鐵則沒有競爭優(yōu)勢。(Maj咖aa等(1984)EurJBioche邁138:239-245;Majamaa等，同上)在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明方法所用化合物選自化學(xué)式(I)所示化合物其中A是l，2-亞芳基、1,3-亞芳基、1,4>亞芳基或(C,-C4)-亞烴基(任選為一個(gè)或多個(gè)鹵原子、氟基、硝基、三氟甲基取代)、(C,-C6)-烷基、(C廣C6)-羥烷基、(CrC6)-烷氧基、-0-)^111(^，_15>鹵素'、(C,-C6)-氟代烷氧基、(C廣Q)-氟代亞烴氧基、(C廣Ca)-氟代亞烯氧基、-OCF2Cl,-0-CF2-CHFCl:(&《6)-烷基巰基、(C,-C6)-烷基亞琉酰基、(CrO)-垸基硫?；?、(C,-Q)-烷基羰基、(C,-Q)-烷氧基羰基、氨基甲?；-(C廣Q)-垸基氨基甲?；?、N，N-二-(Ci-C4)-烷基氨基甲?；?、(Q-Q)-烷基狹基筑基、(CVC,)-環(huán)烷基、苯基、，基、苯莉基、苯甲颯基、苯肢基、基苯胺基、苯基巰基、苯基硫?；?、苯基亞硫?；被酋；-(CVC》-烷基氨磺?；，N-二-(C,-C4)-烷基氨磺酰基取代或者為(CVd2)-芳氧基、(CVCh)-芳烷氧基、(Ce-C，2)-芳基、(CVC^芳烷基(在芳基部分中具有l(wèi)-5個(gè)相同或不同取代基，所述取代基選自鹵素、氰基、硝基、三氟甲基)、(C廣Q)-烷基、(C，-C6)-烷氧基、-0-v-K-CfH(2f+w-Fg、-OCF2Cl、-0-CF2-CHFCl、(CVQi)-烷基巰基、(C廣C6)-羥基烷基、(C,-C6)-烷氧基-(C,-C6)-烷氧基、(C「C6)-烷氧基-(d-C6)-烷基、(C,-C6)-烷基亞直?；?、(CVO烷基硫酰基、(d-CJ-烷基羰基、(C,-Cg)-烷諷基羰基、氨基甲酰垂、N-(C廣C(J-玩3SSas中耽S、N，N-二-(C,-Cn)-烷基氨基甲?；?CVCn)-芳基垸基氨基甲酰基，任選為以下基團(tuán)所取代，即氟、氯、溴、三氟甲基、(C,-C》-烷氧基、N-(CVCg)"環(huán)烷基氨基甲?；-(C3-Cg)-環(huán)烷基-(C,-C4)-烷基氨基甲酜基、(C「C6)-烷基羰氧基、苯基、芐基、苯氧基、節(jié)氧基、NRYrz,其中RY和RZ獨(dú)立選自氫、(C廣Cu)-烷基、(C,-Cg)-垸氧基-(C,-C8)-烷基、(CVC,2)-垸氧基-(CVQ)-烷基、(CfC,2)-芳氧基-(CVCg)-烷基、(C3-C,o)-環(huán)烷基、(CVCu)-烯基、(CrCu)-炔基、(Q-C,2)-芳基、(CrC")-芳烷基、(C,-C,2)-烷氧基、(CVC,2)-芳氧基、(C廣C,2)陽烷基羰基、((VQ)-環(huán)烷基羰基、(Q-C,2)-芳基羰基、(CrC,6)-芳烷基羰基；或者RY和RZ都是-[CH丄，其中042可為0、S、N-(C,-C4)-垸基羰基亞氨基或N-(d烷氧基羰基亞氨基苯基巰基、苯硫酰基、苯亞硫酰基、苯氨磺?；?、N-((VCO-烷基氨磺酜基或N，N-二-(C,-C8)-烷基氨磺酰基或者R和R8、R8和R9、V和R'e或R1D和R11均是選自-[CH丄或-CH-CH-CH-CH-的鏈，其中CH2任選為O、S、SO、S02或NRY取代n是3、4或5:如果E是雜芳基，則所述基團(tuán)可含1-3個(gè)為I^-R"所定義的取代基，或者如果E是環(huán)烷基，則所述基團(tuán)可含一個(gè)為R^R"所定義的取代基或者當(dāng)Q是NR'時(shí)，V是R",其中R'和R"可以相同或不同，具體可以是氫、(C6-C,2)"芳基、(CVCu)-芳垸基、(C,-Q)-烷基、(CVCg)-垸氧基-(C,-Q)-烷基、(C7-C,2)-烷氣基-(C,-C,)-烷基、(Q-C,2)-芳氧基-(C廣Cg)-烷基、(CpC,。)-烷基羰基，任選取代的(CVC,6)-芳烷基羰基或任選取代的(CVCu)-芳基羰基；或者R，和R"均為-[CH丄，其中CH,為O、S、N-酰亞氨基或N-(CVC,。)-烷氧基羰基亞氨基，h是3-7。Y是N或CR3;R，、W和W可以相同或不同，具體為氫、羥基、銀基、三氟甲基、硝基、羧基、(CrC加)-烷基、(C3-C0-環(huán)烷基、(CVCB)-環(huán)烷基-(CVd2)-烷基、(CVQ)-環(huán)烷氧基、(CVC8)-環(huán)烷基-(CVCu)-烷氧基、(CVC8)-環(huán)烷氧基-(CVCJ-烷基、(CVCg)-環(huán)烷氧基-(C,-Cu)-烷氧基、(C3-Q)-環(huán)烷基-(C廣Cg)-烷基-(CVC6)-烷氧基、(CrCg)-環(huán)烷基-((VQ)-烷氧基-(CVC6)-烷基、(CVCg)-環(huán)烷氧基-(CrCg)-烷氧基-(d-C6)-烷基、(C3-C8)鄰?fù)檠趸?(C,-Cg)-垸氧基-(C,-Q)-烷氧基、(CVC,2)-芳基、(CrC,6)-芳烷基、(cvc，6)-芳烯基、(CrCw)-芳炔基、(cvc2。)-烯基、(<:2-(:2。)-炔基、(C,-C2。)-垸氧基、(C2-C20)-烯氧基、(C2-C幼)-炔氧基、視黃氧基、(C,-C加)-烷氧基-(d-d2)-垸基、(C,-C,2)-烷氧基-(d-d2)-烷氧基、(Crd2)-烷氧基-(d-Cg)-烷氧基-((VCg)-烷基、(Qi-C，2)-芳氧基、(CVC,6)-芳烷氧基、(Q-C，2)-芳氧基-(C，-Q)-烷氧基、(CrC")-芳烷氧基-(C廣Q)-烷氧基、(C廣C,6)-羥烷基、(CVCJ-芳氧基-(CVCg)-垸基、(CrCl6)-芳烷氧基-(C廣C,)-垸基、(Q-C^)-芳氧基-((VCn)-烷氧基-(CVC6)-烷基、(C7-C12)j烷氧基-(C，-Cg)-烷氧基-(C廣C6)-烷基、(C2-C加)-烯氧基-(CVC6)-烷基、(C2-C加)-炔氧基-(CrC6)-烷基、視黃氧基-(C，-C6)-烷基、-0-[CH2]x-CfH(2f+1.g)-FB、-0CF2C1、-O-CF2-CHFC1、(C,-C加)-烷基羰基、(C3-Cg)-環(huán)烷基羰基、(CVd2)-芳基羰基、(C7-C1<s)-芳烷基羰基、肉桂?；?C2-CM)-煒基羰基、(CVC2c)-炔基羰基、(C廣C2。)-烷氧基羰基、(CrC,2)-烷氧基-((Vd2)-烷氧基羰基、(C6-C，2)-芳氧基羰基、(CVC，6)-芳烷氧基羰基、(CVCg)-環(huán)烷氧基羰基、(CVC2。)-烯氧基羰基、視黃氧基羰基、(C2-C2())-炔氧基羧基、(CVd2)-芳氧基-((VC6)-烷氧基羰基、(CVC,6)-芳烷氧基-(C,-C6)-烷氧基羰基、(C3-C8)-環(huán)烷基-(C,-C6)-烷氧基羰基、(CVC8)-環(huán)烷氧基-(CVC6)-垸氧基羰基、(CrCu)-垸基羰氧基、(C3-Cg)-環(huán)烷基羰氧基、(CVCu)-芳基羰氧基、(C7-Cl6)-芳垸基羰氧基、肉桂酰氧基、(CVCu)-烯基羰氧基、(CVd》-炔基羰氧基、(C,-C12)-烷氧基羰氧基、(&-(:12)-烷氧基-(cvc,2)-烷基羰氧基、(Q-Cu)-芳氧基羰氧基、(cvd+芳烷氧基羰氧基、(cvCg)-環(huán)烷氧基羰氣基、(cvc,2)-烯氧基羰氧基、(CVC,2)-炔氧基羰氧基、氨基甲?；-(C廣C,2)-烷基氨基甲?；?、N,N-二-(CVd2)-烷基氨基甲?；-(CVCg)-環(huán)烷基氨基甲?；?、N,N-二環(huán)-((VCa)-垸基氨基甲酰基、N-(d-C,o)-烷基-N-(CVCg)-環(huán)烷基氨基甲?；?、N-((CVCg)-環(huán)烷基-(C廣C6)-烷基)氨基甲?；?^-((:1《6)>烷基-^((€;3-0:8)-環(huán)垸基-(c廣q)-烷基)氨基甲?；?、n-(+)-脫氫樅基氨基甲酰基、N-(C廣Q)"烷基-N-(+)-脫氨樅基氨基甲酰基、N-(C6-C12)-芳基氨基甲?；?、N-(CrCi6)-芳烷基氨基甲?；?、N-(C,-C,o)-烷基-N-((Vd2)-芳基氨基甲敏基、N-(CVCH0-烷基-N-(C7-CJ-芳烷基氨基甲酰基、N-((C廣C，o)-垸氧基-(Q-do)-烷基)氨基甲?；?、N-((Q-Cu)-芳敢基-(Crdo)烷基)氨基甲?；?、N-((07-(:16)-芳烷氧基-(C廣C,。)-烷基)氨基甲酰基、N-(C廣C,。)-烷基-N-((C廣C,。)-烷氧基-(C,-do)-烷基)氨基甲?；?、N-(C廣do)-烷基-N-((CVCu)-芳氧基-(C，-C,o)-烷基)氨基甲酰基、N-(d-C,o)-烷基-N-((CVCw)-芳烷氧基-(CVCw)-烷基)氨基甲酰基CON(CHA，其中CH2可為0、S、N-(C廣Cg)-烷基亞氨基、N陽(CVCg)-環(huán)烷基亞氨基、N-(CVCg)-環(huán)烷基-(C,-C4)-烷基亞氨基、N-(QrCi2)-芳基亞氨基、N-((VC,2)-芳烷基亞氨基、N-(CVC4)-烷氧基-(C，-C6)-烷基亞氨基取代，h是3-7:具有化學(xué)式R的氨基甲酰氧基其中，Rx和IT各自獨(dú)立地選自氫、(C廣Ce)-烷基、(QrC7)-環(huán)垸基、芳基或a氨基酸的a碳原子的取代基，其中氨基酸是天然L氨基酸或其D型異構(gòu)體，s是1-5，T是OH或NI^R"，R*、11**和11***可以相同或不同，選自氫、((VC,2)-芳基、(CVCn)-芳烷基、(d-Cg)-烷基、(CVCg)-環(huán)烷基、(+)-脫氫樅基、(C,-Cg)-垸氧基-(C,-Q)-烷基、(C7-C，2)-芳烷氧基-(C,-C8)-垸基、((VC，》-芳氧基-(C,-Cg)-烷基、(C，-C,o)-烷酰基、任選取代(CVC，6)-芳烷敏基、任選取代((VC,2)-芳?；蛘遅和R"均為CH2，其中CH2可為0、S、SO、S02、N-酰氨基、N-(C廣C,o)-烷氧基羰基亞氨基、N-(C,-C,)-烷基亞氨基、N-((VC)-環(huán)烷基亞氨基、N-(C3-Cg)-環(huán)垸基-(^-(:4>烷基亞氨基、N-(CVCu)-芳基亞氨基、N-(CrCw)-芳烷基亞氨基、N-(C「C4)-垸氧基-(C,-Q)-烷基亞氨基，h是3-7:氨基甲酰氧基、N-(C「C，2)-烷基氨基甲酰氧基、N,N-二-(C,-C,2)-烷基氨基甲酰氧基、N-(CVCg)-環(huán)烷基氨基甲酰氧基、N-(CVC,2)-芳基氨基甲酰氧基、N-(C7-C16)-芳烷基氨基甲酜氧基、N-(C,-C,。)^烷基-N-(CVC,6)-芳基氨基甲酰氧基、N-(C廣C,o)-烷基-N-(CrCw)-芳烷基氨基甲瑯氧基、N-((CVdo)-烷氧基-(C,-dc)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(((VCu)-芳氧基-(C,-C，。)烷基)氨基甲酰氧基、N-((C7-Cw)-芳垸氧基-(C廣C，o)"烷基)氨基甲酰氧基、N-(C,-C，o)-烷基-N-((C,-do)-烷氧基-(C,-C,o)-烷基)氨基甲酰氧基、^-(^1())-烷基-^((0^16)-芳氧基-(C,-C,。)-烷基)氨基甲酰氧基、>^-(01-<:1。)-烷基-1^(((:7-€:1(!)-芳烷氣基-(c,-c,。)-烷基)氨基甲酰氧基、氨基、(crCJ-烷基氨基、二(Q-d2)-烷基氨基、(CVCB)-環(huán)烷基氨基、(QrC,2)-烯基氨基、(CVC公炔基氨基、N-(CVC,2)-芳基氨基、N-(CVCn)-芳烷基氨基、N-烷基-芳垸基氨基、N-烷基-芳氨基、(d-Cu)-烷氧基氨基、(CrCJ-烷氧基-N-(CVC,。)-烷基氨基、(C,-C"—烷基羰基(alkanoyl)氨基、(CVC,)-環(huán)烷基羰基氨基、(CVC，j)-芳基羰基氨基、(CVCw)-芳烷基羰基氨基、(C廣Cu)-烷基羰基-N-(d-C,n)-烷基氨基、(CrCg)-環(huán)烷基羰基-N-(d-C,。)-烷基氨基、(Q-C,2)-芳基羰基-N-(CVd。)-烷基氨基、(CrCn)-芳烷基羰基-N-(C廣C，o)-烷基氨基、(&-(:12)-烷基羰基氨基-(C廣Ca)-烷基、(CrCg)-環(huán)貌基羰基氨基-(d-C,)-烷基、(CVCu)-芳基羰基氨基-(d-Cg)-垸基、(C7-C16)-芳烷基羰基氨基-(C,-Cg)-烷基、氨基-(C廠C,o)-烷基，N-(CVC,o)-烷基氨基-(C,-C10)-烷基、N,N-二-(C廣CH!)-烷基氨基-(C,-C,o)-烷基、N-(CVCg)-環(huán)烷基氨基-(C,-C'o)-烷基、(CVC加)-烷基巰基、(C,-C加)-烷基亞硫酰基、(CVCM)-烷基硫?；?C6-C,2)-芳基巰基、(CVC,2)-芳基亞硫酰基、(CVCu)-芳基硫酰基、(CVCM)-芳烷基巰基、(C7-C,6)-芳烷基亞硫?；?、(CVC，6)-芳烷基硫?；?C,-Cu)-烷基巰基-(CVC6)-烷基、(C廠Cu)"烷基亞硫?；?(CVC6)-烷基、(C廣C,2)-烷基硫?；?(CVC6)-烷基、(c6-c12)-芳基葶基-(c廣C6)-烷基、((Vd2)-芳基亞硫酰基-(cvc6)-烷基、(cvCu)-芳基硫?；?(Q-C6)-烷基、((VC,6)-芳烷基巰基-((VQ)-烷基、(C7-C16)-芳垸基亞硫?；?(Q-Q)-烷基、(CrC16>芳烷基硫?；?(d-C6)-烷基、氨磺酰基、N-(C,-d。)-垸基氮磺?；，N-二-(CVCJ烷基氨磺酰基、(CrQ)-環(huán)烷基氨磺酰基、N-(Q-Cn)-烷基氨磺酰基、N-(C7-dJ-芳烷基氨磺?；-(CVCm)-烷基-N-(C6-0芳基氨磺?；?、N-(C，-C^烷基-N-(CVC,6)-芳烷基氨磺?；?C,-C，。)-烷基亞磺酰氨基、N-((Q-C,o)-烷基)-(C廣Cw)-烷基亞磺酰氨基、(CVC,6)-芳烷基亞磺酰氨基或N-((C,-C,o)-垸基)-(CVC,e)-芳烷基亞磺酰氨基其中芳基或含芳基基團(tuán)中的芳基可為1-5個(gè)相同或不同的基團(tuán)取代，它們包括羥基、鹵素、氰基、三氣甲基、硝基、羧基、(C2-C,6)-烷基、(Cj-Cg)-環(huán)烷基、(C3-Cg)-環(huán)烷基-(C廣C,2)-烷基、((VCg)-環(huán)烷氧基、(C3-C8)-環(huán)烷基-(C廣C，2)-烷氧基、(C3-C8)-環(huán)烷氧基-(C廣C,2)-烷基、(CVCg)-環(huán)垸氧基-(C廣c,2)-烷氧基、(cvCg)-環(huán)烷基-(d-c,)-烷基-(cvc6)-烷氧基、(€3(8)-環(huán)烷基-(&-(:8)-烷氧基-(CVC6)"烷基、((VC8)-環(huán)烷氧基-(C「C,)-烷氧基-(CrC6)-烷基、(C3-Cg)-環(huán)烷氧基-(C,-Cg)-烷氣基-(d-C6)-垸氣基、(CVC，2)-芳基、(C7-C，6)-芳烷基、(cvc")-烯基、(CrC^炔基、(c廣c,6)-烷氧基、(c,-Cw)-烯氧基、(^《12)-垸氧基-((:|-0:12)-烷基、(c廣Cu)-烷氧基-(cvd2)-烷氧基、((:1-(:12)-垸氧基-((:1-(:8)-烷氧基-((:1-(:8)-烷基、((VC,2)-芳氧基、(CVCw)-芳烷氧基、(CVCu)-芳氧基-(d-C6〉-嫁氧基、(c7-Cw)-芳諒氣基-(C,-Q)-烷氧基、(C,-Cg)-羥烷基、(CVC,6)-芳氧基-(C,-Cs)-烷基、(C7-C,6)-芳烷氧基-(C廣Cg)-烷基、(Q-Cu)-芳氧基-(C,-Cg)-垸氧基-(C廣Q)-烷基、(C7-C,2)-芳垸氧基-(d-C，)-烷氧基-(C,-C6)-烷基、-0-[CH2]x-CfH(2f+l_grFg、-0CF2C1、-0-CF2-CHFCl、(C廣C,2)-烷基羰基、((:3《8)-環(huán)烷基羰基、(CVd2)-芳基羰基、(CVC,6)-芳烷基羰基、(d-Cu)-烷氧基羰基、(CVC,2)-烷氧基-(d-Cu)-烷氧基羰基、(Q-C。-芳氧基羰基、(CVC^芳垸氣基羰基、(CVCg)-環(huán)烷氧基鈸基、(CrCJ-烯氧基羰基、((Vd2)-炔氧基羰基、((Vd2)-芳氧基-(C,-Ce)-烷氧基羰基、(C7-C16)-芳烷氧基-(C,0烷氧基羰基、(CVCg)-環(huán)烷基-(CVC6)-烷氧基羰基、(CVCg)-環(huán)烷執(zhí)基-(CrC6)-烷颯基簾基、(C廣d2)-炔基羰颯基、(C3-Q)-環(huán)烷基羰氧基、(C6-C12)-芳基羰氧基、(CVCM)-芳烷基羰氡基、肉桂酰氣基、(CVd2)-烯基羰氧基、(CrC12)-炔基羰氧基、(C廣C^)-烷氧基羰氧基、(CVCu)-烷氧基-(CVC,2)-烷基羰氧基、(C6-C^芳氧基羰氧基、(CVC,6)-芳烷氧基羰氧基、(CVQ)-環(huán)烷氧基羰氧基、(C2-C,^烯氧基羰氧基、(C2-d2)-炔氧基羰氧基、氨基甲酰基、N-(C,-C,》-烷基氨基甲?；，N-二-(C，-C，2)-垸基氨基甲酰基、N-(C3-Cg)-環(huán)烷基氨基甲?；?、AN-二環(huán)-(CVCg)-烷基氨基甲酰基、N-(C,-C,。)"烷基-N-(C3-C(()-環(huán)烷基氮基甲?；?、N-(((:3《8)-環(huán)烷基-(c,-C6)-烷基)氨基甲酰基、&(01-(:6)-烷基-^((€3《|1)-環(huán)烷基-(CrC6)-烷基)氨基甲酰基、N-(+)-脫氫樅基氨基甲?；?4-((:1《6)-烷基-N-(+V脫氫樅基氨基甲?；-(CVC，2)-芳基氨基甲酰基、N-(C7-C")-芳烷基氨基甲?；-(C,-C,o)-烷基-N-((VC,2)-芳基氨基甲?；?、N-(Ci-C,o)-烷基-N-(C7-C")-芳烷基氨基甲敏基、N-((C,-C,。)-烷氧基.(C,-C，。)-烷基)氨基甲?；?、N-((CVCu)-芳氧基-(C,-C,。)垸基)氨基甲酰基、N-((CVCJ-芳烷氧基-(C,-C,o)-烷基)氨基甲?；?、N-(C廣do)-烷基-N-((CVQo)-烷氧基-(C'陽C,o)-垸基)氨基甲?；-(C,-C,o)-垸基-N-((QiO芳氧基-(C廣do)-烷基)氨基甲?；-(C廣C,o)-烷基-N-((C7-d6)-芳烷氧基-(C廣C,o)-烷基)氨基甲酷基CON(CHz)h，其中CHz可為O、S、N-(C,-Cg)-烷基亞氨基、N-(CVC,)-環(huán)烷基亞氨基、N-(CrCg)-環(huán)烷基-(Q-C,)-烷基亞氨基、N-(C6-C12)-芳基亞氨基、N-(C7-C，2)-芳烷基亞氨基、N-(CVC4)-垸氧基-(CrCe)-烷基亞氨基取代，h是3-7:氨基甲酰氧基、N-(C,-C,^烷基氨基甲酰氧基、N,N-二-(C皿-Cu)-烷基氨基甲酰氧基、N-(CVC,〉-環(huán)烷基氨基甲瑯氧基、N"(CVC,j)-芳基氨基甲敢氧基、N-(C7-C")-芳烷基氨基甲酜氧基、N-(C,-C，。-烷基-N-(CVC")-芳基氨基甲酰氧基、N-(CVC,。)-烷基-N-(C7-CJ-芳烷基氨基甲酰氧基、N-((CVC,o)-烷氧基-(CrC,o)-烷基)氨基甲欲氣基、^《(^-(:12)-芳氧基-(d-Cw)烷基)氨基甲酰氧基、N-((C7-C16)-芳烷氧基-(C，-C，o)-垸基)氨基甲酰氧基、N-(C廣Cw)-烷基-N-((d-C,o)-烷氧基-(C廣Cw)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(CVCw)-烷基-N-((CVC,e)-芳氡基-(C,-C,。)-烷基)氨基甲酰氧基、N-(CVC^垸基-N-((CVC,6)-芳烷氧基-(CVdo)-烷基)氨基甲酰氧基、氨基、(C,-C,j)-烷基氨基、二(d-Cu)-烷基氨基、(CVCg)-環(huán)烷基氨基、(CVCu)-烯基氨基、(C2-C,2)-炔基氨基、N-(CVC,2)-芳基氨基、N-(CVd,)-芳烷基氨基、N-烷基-芳烷基氨基、N-烷基-芳氨基、(CVC,^烷氧基-N-((VC,。)-烷基氨基、(QrC8)-環(huán)烷基羰基氨基、(Q-C,2)-芳基羰基氨基、(CVCw)-芳烷基羰基氨基、(C,-Cu)-烷基羰基-N-(d-C,。)-烷基氨基、(CVCg)-環(huán)烷基羰基-N-(C,-Cn))-垸基氨基、(CVC,2)-芳基羰基-N-(C,-C,o)-烷基氨基、(CVC")-芳烷基撥基-N-(C,《w)-烷基氨基、(CVC,2)-垸^!^基氛a^e廣e^烷基、^3-C^環(huán)烷基羰MC基-(C廣C^烷基、0^rCt2)^基羰基氨基-(c皿-co-烷基、(<:7-<:12)-芳烷基羰基氨基-(d-Cg)-垸基、氨基-(cvq。)-烷基、N-(C,-dc)-烷基氨基-(CVC,。)-烷基、N.N-二-(C,-C,o)-烷基氨基-(C,-C,。)-烷基、1<1-((:3《11)-環(huán)烷基氨基-(d-Cm)"烷基、(c「Cu)-烷基巰基、(c,-Cu)-烷基亞硫?；?、(C,-Cu)-垸基硫酰基、(CVC,6)-芳基巰基、(CVCM)-芳基亞硫?；?C6-Cl6>55芳基琉?；?CVCw)-芳烷基巰基、(CVC^)-芳基亞硫瑯基或(C7-C,6)-芳基硫酰基；或者R'與R2或I^與RS形成鏈ICH2。，可以是飽和鏈，也可以是含C-C雙鍵的不飽和鏈，其中1或2個(gè)CHi任選為O、S、SO、S02或NR'取代，其中R'是氫、(CVC,2)-芳基、(d-Cg)-垸基、((VC,)-烷氧基-(C「Cg)-烷基、(CVd2)-芳烷氧基國(c廣CB)-烷基、((vc,2)-芳氧基-(cvc,)-烷基、(c廣c,o)-烷?；?、任選取代((:7《16)-芳烷酰基、任選取代(CVCJ-芳酰基o是3、4或5:或者R1與W或W與R3同包含它們的吡徒或噠嗪形成5,6,7，8-四il異喹啉環(huán)、5,6，7，8-四貧喹啉環(huán)或5,6,7,8-四氫肉啉環(huán)或者R1與W或R2與R3形成5元或6元芳碳環(huán)或芳雜環(huán)或者R'與V或V與W同包含它們的吡啶或噠嗪形成任選取代的雜環(huán)體系，所述體系可選自噻吩并吡^、呋喃并吡啶、吡啶并吡啶、哦啶并吡啶、咪唑并吡啶、噻唑并吡啶、噁唑并吡啶、喹啉、異喹啉和肉啉其中喹啉、異喹啉和肉啉宜滿足式la、Ib和Ic,W)腳腳其中RU-R"各自獨(dú)立，定義同R1、W和R、或者基團(tuán)R1與R2同包含它們的吡啶形成式Id所示化合物腳其中V是S、0或NR、其中Rk選自氫、(C,-C6)-烷基、芳基或芐基；其中芳基可如上所述為l-5個(gè)取代基取代且R24、R"、R26和R27各自獨(dú)立，定義同R1、R2和R3:f是1-8:g是0或1到(2f+l):x是0-3;h是3-7:包括上述化合物的生理活性鹽和前體藥物.式(I)所示化合物的例子見述于歐洲專利EP065096和EP0650961EP065096和EP0650961所列所有化合物，特別是化合物權(quán)利要求部分和工作實(shí)例的最終產(chǎn)品中所列化合物在本發(fā)明申請中引為參考。式(I)所示化合物的例子包括(但不限于)[(3-羥基-吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸(化合物0)和[(3-甲氣基-吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸(化合物P)。此外，式(I)所示化合物的例子見述于美國專利5658933。美國專利5658933所列所有化合物，特別是化合物權(quán)利要求部分和工作實(shí)例的最終產(chǎn)品中所列化合物在本發(fā)明申請中引為參考.式(I)所示化合物的例子包括(但不限于)鹽酸3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((十六烷氧基)-羰基)-甲基)-瑯胺3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((l-辛氧基)-羰基)-甲基)-酰胺3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((己氧基)-羰基)-甲基)-酷胺；3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((丁氧基)-羰基)-甲基)-酰胺；外消旋酒石酸3-甲氧基吡啶-2-羧酸>-(((2-壬氣基)-羰基)-甲基)-酰胺3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((庚氧基)-羰基)-甲基)-酰胺；3-苯氧基吡啶-2-羧酸N-(((辛氧基)-羰基)-甲基)-酰胺3-苯甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((丁氧基)-羰基)-甲基)-酰胺5-(((3-(1-丁氧基)-丙基〉-氨基)-羰基)-3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-((苯甲氧基羧基)-甲基)-酰胺5-(((3-(l-丁氧基)-丙基)-氨基)-羰基)-3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((l-丁氧基)-羰基)-甲基)-酸胺5-(((3沖二烷氧基丙基)-氨基)-羰基"-甲氧基吡啶-2-羧酸N-((苯甲氧基羰基)-甲基)-酰胺。式(I)所示其他化合物有美國專利5620995中所述取代雜環(huán)羧基酰胺；美國專利6020350中所述3-羥基吡啶-2-羧基酰胺酯；美國專利5607954中所述磺酰氨基羰基-吡啶-2-羧基酜胺；美國專利5610172和5620996中所述磺酰氨基羰基-吡啶-2-羧基酰胺和確琉氨基羰基-吡啶-2-羧基酰胺酯，這些專利中所列所有化合物，特別是化合物權(quán)利要求部分和工作實(shí)例的最終產(chǎn)品中所列化合物在本發(fā)明申請中引為參考.式(Ia)所示化合物的例子見述于美國專利5719164和5726305,前述專利中所列所有化合物，特別是化合物權(quán)利要求部分和工作實(shí)例的最終產(chǎn)品中所列化合物在本發(fā)明申請中引為參考，式(1)所示化合物的例子包括(但不限于)>1-((3-羥基-6-異丙氧基-喹啉-2-羰基)-氨基)乙酸(化合物H)、N-((6-(l-丁氧基)-3-羥基喹啉-2-基)-羰基)氨基乙酸、[(3-羥基-6-三氟甲氧基-喹啉-2-羰基)氨基]乙酸(化合物1)、N-((6>氯-3-羥基喹啉-2-基)-羰基)氣基乙酸、N-((7-氯-3-羥基喹啉-2-基)-羰基)氨基乙酸和[(6-氯-3-羥基-喹啉-2-羰基)氨基]乙酸(化合物O)。式(Ib)所示化合物的例子見述于美國專利6093730。美國專利6093730中所列所有化合物，特別是化合物權(quán)利要求部分和工作實(shí)例的最終產(chǎn)品中所列化合物在本發(fā)明申請中引為參考。式(Ib)所示化合物的例子包括(但不限于)N-((I-氯-4-羥基-7-(2-丙氧基)異喹啉-3-基)羰基)氨基乙酸、^((1-氯-4-羥基-6-(2-丙氧基)異喹啉-3-基)羰基)氨基乙酸、N-((l-氯-4-羥基-異喹啉-3-紫基)氨基)乙酸(化合物B)、N-((l-氯-4-羥基-7-甲氧基異喹啉-3-基)羰基)氣基乙酸、N-((l-氯-4-羥基-6-甲氧基異喹啉-3-基)羰基)氨基乙酸、N-((7-丁氧基)-l-氯-4-羥基異喹啉-3-基)羰基)氨基乙酸、N-((6-苯甲氣基-1-氯-4-羥基異喹啉-3-羰基)氨基)乙酸(化合物J)、((7-苯甲氧基-1-氯-4-羥基異喹啉-3-羰基)氨基)乙酸甲酯(化合物K)、N-((7-苯甲氧基-l-氯-4-羥基異喹啉-3-羰基)氨基)乙酸(化合物L(fēng))、N-((8-氯-4-羥基異喹啉-3-基)羰基)氨基乙酸、N-((7-丁氧基-4>羥基異喹啉-3-羰基)氨基)乙酸(化合物M).同樣可用于本發(fā)明方法的與式(I)相關(guān)的化合物包括(但不限于)6-環(huán)己基-l-羥基-4-甲基-lH-吡啶-2-酮(化合物N)、7-(4-甲基-哌嗪-l-甲基)-5-苯基硫烷基甲基-喳啉-8-羥基(化合物D)、4~硝基-喹啉-8-羥基(化合物E)和5-丁氧基甲基-喹啉-8-羥基(化合物F)。此外，本發(fā)明提供了其他化合物實(shí)例，其中位置A和B可一起形成己酸、氰甲基、2-氨基乙基、苯甲酸、1H-苯并咪唑-2-甲基等，在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明方法所用化合物選自式(II)所示化合物其中R"是氫、硝基、氨基、慨基、囪素、(d-C4)-烷基、羧基或它們的易代謝酯:(C廣C4)-烷基氨基、二-(C,-C4)-烷基氨基、(CVC6)-垸氧基羰基、(CVQ)-烷?；?、羥基-(C廣C4)-烷基、氨基甲?；?、N-(C,-C4)-垸基氨基甲?；?、(C,-C4)-烷硫基、(C,-C4)-烷基亞硫酰基、(CVC^烷基硫?；?、苯硫基、苯基亞硫酰基、苯基硫?；?，58所述苯基可任選為14個(gè)相同或不同鹵素、(C廣C4)-烷氧基、(C「C4)-烷基、IR基、羥基、三氟甲基、氟代-(cvc4)-烷硫基、氟代-(c,-C4)-垸基亞硫?；⒎?((:|-(:4)-烷基琉?；?、(C,-Q)-烷氧基-((VC4)-烷氧基羰基、N,N-二-[(C,-C4)-烷基氨基甲?；?(C,-C4)-烷氧基羰基、(d-C4)-烷基氨基-(C2-")-垸氧基羰基、二-(c,-c》-烷基氨基-(CVC4)-烷氧基羰基、(C,-C4)-烷氧基-(CVC4)-烷氧基-(C2-C4)-垸氧基羰基、(C2-C丄垸酰氧基-(CVC4)-烷基或N-氨基-(CVC8)-烷基]-氨基甲敏基；R"是氫、羥基、氨基、慨基、鹵素、(C,-Q)-烷基、羧基或它們的易代謝酯衍生物(CrC4)-烷基氨基、二-(C廣Q)-烷基氨基、(C廣Q)-垸氧基羰基、(C2-C4)-垸酰基、(C廣C4)-烷諷基、羧基-(C「C4)-烷氧基、(C廣C4)-烷氧基羰基-((VC4)-烷氧基、氨基甲酰基、N-(C廣C^烷基氨基甲酰基、N,N-二-(C,-Cg)-烷基氨基甲?；?、N-[氨基-(CVCg)-烷基]氨基甲?；?、N-(C廣C4)-垸基氨基-(CVCg)-烷基]氨基甲?；?、N-[二-(C,-C4)-烷基氨基-(C,-C,)-烷基]貧基甲敢基、N-環(huán)己基氨基甲?；-環(huán)戊基氨基甲?；-(C,-C4)-烷基環(huán)己基氨基甲?；?、N-(C,-C4)-烷基環(huán)戊基氨基甲?；?、N-苯基氨基甲瑯基、N-(C,-C》-烷基-N-苯基氨基甲?；?、N,N-二苯基氨基甲?；?、N-[苯基-(C廣C4)-烷基]貧基甲?；?、N-(C廣C4)-烷基-N-[苯基-(C「C4)-烷基]氨基甲?；⒒騈，N-二[苯基-(CVQ)-烷基]氣基甲酰基，所述苯基可任選為l-4個(gè)相同或不同鹵素、(C廣Q)-烷氧基、(d-C4)-烷基、氰基、羥基、三氟甲基、N-[(CrC4)-烷酰基豫基甲?；?、N-[((VQ)-垸氣基羰基]氨基甲酰基、N-[氟-(C2-C6)-烷基]氨基甲?；?、N，N-氟-(C2-Q)-烷基]-N-(d-C4)-烷基氨基甲?；,N-[二氟-(CrC6)-垸基]氨基甲?；?、1-吡咯基-羰基、哌啶基羰基、1-哌嗪基-羰基、嗎啉基羰基，其中雜環(huán)基團(tuán)任選為l-4個(gè)以下基團(tuán)取代，即(CVQ)-烷基、芐基、1，2,3，4-四氨異喹啉-2-基-羰基、N,N-[二-(C廣C4)-烷基]硫代氨基甲酰基、N-(C2-C4)-垸酰基氨基或N-[(C，-C》-烷氧基羰基銜基R^是氫、(C,-C》-垸基、(CrC4)-烷氧基、鹵素、硝基、羥基、氟-(l-4C)烷基或吡啶基R"是貧、(CVQ)-烷基、(C2-Q)-烷氧基、鹵素、硝基、羥基、氟-(d-CJ烷基、吡啶基或甲氧基；R32是氫、羥基、氨基、(C,-Q)-烷基氨基、二(C「C4)-烷基氨基、鹵素、(C,-Q)-烷氧基-(CVC4)-烷氧基、氟-(d-Ce)-烷氧基、吡咯小基、哌啶基、哌嗪-l-基或嗎啉基，其中雜環(huán)基任選為l-4個(gè)相同或不同的((VC4)-垸基或苯基取代；R"和R"各自獨(dú)立地選自氫、(C,-C4)-烷基和(d-C4)-烷氧基；還包括它們的藥用鹽和前體藥物。式(II)所示化合物的例子見述于美國專利5916898和6200974以及國際專利公告WO99/21860。前述專利和公告中所列所有化合物，特別是化合物權(quán)利要求部分和工作實(shí)例的最終產(chǎn)品中所列化合物在本發(fā)明申請中引為參考。式(II)所示化合物的例子包括4-氧-l，4-二氫-l，10]菲咯啉-3-羧酸(化合物A)(參見，例如Seki等(1974)ChemAbstracts81:424,No.21)、3-羧基-5-羥基-4-氧-3，4^二氫-l，10-菲咯啉、3-羧基-5-甲氧基斗氧-3，4-二氫-l,10-菲咯啉、5-甲氧基-4-氧-1，4>二氫[1，10]菲咯啉-3-羧酸乙酯、5-甲氧基-4-氧-1，4-二氫[l,10I菲咯啉-3-羧酸(化合物Q)和3-羧基-8-羥基-4-氣-3,4-二氫-1，10-菲咯啉.在其他實(shí)施方式中，用于本發(fā)明方法的化合物選自式(m)所示化合物或它們的藥用鹽其中a是14之間的整數(shù)b是0-4之間的整數(shù)；c是0-4之間的整數(shù)；Z選自(CVC,。)環(huán)垸基、被一個(gè)或多個(gè)￥1獨(dú)立取代的(€3《1())環(huán)烷基、3-10元雜環(huán)烷基和被一個(gè)或多個(gè)Y'獨(dú)立取代的3-10元雜環(huán)烷基(CVC2。)芳基、被一個(gè)或多個(gè)Y1獨(dú)立取代的(Q-Cm)芳基、5-20元雜芳基和被一個(gè)或多個(gè)Y1獨(dú)立取代的5-20元雜芳基；Arl選自((VC2o)芳基、被一個(gè)或多個(gè)YS獨(dú)立取代的(CVC2Q)芳基、5-20元雜芳基和被一個(gè)或多個(gè)YZ獨(dú)立取代的5-20元雜芳基；每個(gè)Y'獨(dú)立選自親脂功能基、(CVCJ芳基、(CVCM)烷基芳基、5-20元雜芳基和6-26元烷基雜芳級(jí)每個(gè)Y2獨(dú)立選自-R'、-OR'、-OR"、-SR，、-SR"、-NR，R'、-N02、-CN、-卣素、-三鹵代甲基、-三鹵代甲氣基、-C(O)R，、-C(O)OR'、-C(O)NR'R'、-C(O)NR'0R，、-C(NR，R，)=NOR'、-NR,-C(O)R,、國S02R，、S02R"、-NR，誦S02-R，-、-NR，-C(O)-NR，R'、四唑-5-基-、-NR'-C(O)-OR，、-C(NR'R，)-NR，、-S(O)-R'、-S(O)-R"和-NR，-C(S)NR，R，每個(gè)R，獨(dú)立選自-H、(C廣C8)烷基、(Cz-Cg)烯基和(C2-Cg)炔基；每個(gè)R"獨(dú)立選自(Cs-C2。)芳基和被一個(gè)或多個(gè)-OR'、-SR'、-NR'R'、-NO:-CN、-鹵素、-三鹵代甲基獨(dú)立取代的((:5《20)芳基；或其中c是O,Ar"是N'取代脲-芳基，所述化合物具有式(IIIa)所示結(jié)構(gòu)卿)或者其藥用鹽；式中，a、b和Z定義同上；R"和R36各自獨(dú)立地選自氫、(C廣C8)烷基、(C2-Q0烯基、(CVCg)炔基、(CrC,o)環(huán)烷基、((VC2o)芳基、(Cs-C加)取代芳基、(Q-C26)烷基芳基、(Q-C26)取代烷基芳基、5-20元雜芳基、5-20元取代雜芳基、6-26元烷基雜芳基和6-26元取代垸基雜芳基R"各自獨(dú)立地選自氫、(Q-C,)烷基、(CVCg)烯基和(CVCg)炔基。式(III)所示化合物的例子見述于國際專利公告WO00/50390.WOOO/503卯中所列所有化合物，特別是化合物權(quán)利要求部分和工作實(shí)例的最終產(chǎn)品中所列化合物在本發(fā)明申請中引為參考，式(III)所示化合物的例子包括3-{[4-(3，3-二芐基-脲基)-苯琉?；鵋2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-氨基卜N-羥基-丙酰胺(化合物C)、3-U4"[3-(冬氣-苯基)-脲基]-苯硫?；穂2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-氣基卜N-羥基-丙酰胺和3-{{4-[3-(1，2-二苯基乙基)-脲基]-苯硫?；鶀-2-(4~甲氧基-苯基)-乙基]-氨基}-N-羥基.丙酰胺.基于2-酮戊二酸雙加氧醉族成員的一般作用機(jī)理，如活性對(duì)F+和2-酮戊二酸的依賴性，本發(fā)明在某些方面涉及用化合物，包括上述化合物來抑制HIF(i羥基化，從而以不依賴于氧的方式穩(wěn)定HIFa,此外，本發(fā)明的實(shí)施例和數(shù)據(jù)表明，利用這些化合物可穩(wěn)定HIFa,從而在體內(nèi)和體外產(chǎn)生HIF調(diào)節(jié)基因產(chǎn)品.在具體實(shí)施方式中，這些化合物在預(yù)防和治療缺血性和低氧性疾病方面具有獨(dú)特好處。本發(fā)明方法在穩(wěn)定常氧環(huán)境中生長的細(xì)胞中的HlFa時(shí)，對(duì)劑量有依賴性。雖然在本發(fā)明化合物存在下，不同類型的細(xì)胞顯示不同水平的HIFa,但測定的細(xì)胞線都顯示出某種水平的HlFa穩(wěn)定作用。未經(jīng)處理的細(xì)胞中HIFtt的水平一般很低，無法檢測。HIFtt的穩(wěn)定導(dǎo)致的是HIF依賴性基因在體內(nèi)和體外的表達(dá)，包括基因編碼血管生長因子，如VEGF、Flt-KEG-VEGF、PAI-K腎臟髄質(zhì)素和Cyr61。因此，在誘導(dǎo)血管生長和防止缺血和低氧引起的組織損傷方面，穩(wěn)定HIFot的能力具有潛在的好處，例如，在上皮中表達(dá)結(jié)構(gòu)活性HIF-la的轉(zhuǎn)基因鼠對(duì)每個(gè)VEGF異構(gòu)體的表達(dá)得到加強(qiáng)，表皮毛細(xì)管顯著增加.不像單個(gè)VEGF異構(gòu)體過分表達(dá)后那樣，HIFa誘導(dǎo)產(chǎn)生的超級(jí)血管質(zhì)沒有出現(xiàn)浮腫、炎癥或血管破裂。(見Elson等(200l)Ge加sDev15:2520-2532;Detai虹等(l998)JInvestDerm111:1-6;Larcher等(19訴)Oacogene17:303-311;Th咖ton等(1999)Science286:251l-2514)因此，在某些方面，本發(fā)明方法可用來誘導(dǎo)產(chǎn)生醫(yī)療性血管生長，它涉及旁系血管的發(fā)育，使缺血組織重新形成血管。此外，本發(fā)明方法使細(xì)胞中的耗氧量根據(jù)劑量降低，而不會(huì)對(duì)細(xì)胞存活力產(chǎn)生任何影響。穩(wěn)定的HIF絡(luò)合物能撖活與葡萄糖的吸收和利用有關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)，如菊萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子(GluT)-l和GluT-3:醛縮酵-A、烯酵酶-1、己糖激酶-1和-2、磷酸果糖激酶-L和-C。HIFa穩(wěn)定后，耗氧量可能減少，因?yàn)榧?xì)胞代謝從依氧能量生成轉(zhuǎn)向厭氧能量生成。因此，本發(fā)明方法可用來在低氧條件下產(chǎn)生能量，這有利于缺血性和低氧性疾病，如周邊動(dòng)脈疾病、DVT、心絞痛、肺栓塞、中風(fēng)和心肌梗塞.本發(fā)明還提供了增加體細(xì)胞吸收和利用葡萄糖的方法，通常可用于質(zhì)量其他疾病。本發(fā)明還提供了提高輸氧能力的方法，例如誘導(dǎo)產(chǎn)生紅血球、促進(jìn)鐵的運(yùn)輸和利用，具體說來，本發(fā)明方法促進(jìn)了紅細(xì)胞生成素(EPO)的表達(dá)，它是天然存在的荷爾紫，能激發(fā)紅細(xì)胞的產(chǎn)生.(參見，例如共同擁有的待審美國專利申請_，題目是"增加內(nèi)生紅細(xì)胞生成素(EPO)的方法"，同日登記，在此全文引用.)增強(qiáng)酶和蛋白表達(dá)的方法具體涉及鐵的吸收、運(yùn)輸和加工。這些酶和蛋白包括(但不限于)鐵傳遞蛋白和鐵傳遞蛋白受體，它們一起促進(jìn)鐵運(yùn)輸?shù)郊t細(xì)胞組織和血漿銅藍(lán)蛋白中，并被其吸收；血漿銅藍(lán)蛋白是將亞鐵離子氧化為鐵離子所需要的鐵氣化酶.由于鐵傳遞蛋白只能結(jié)合并運(yùn)輸鐵離子，血漿銅藍(lán)蛋白在向組織提供鐵的過程中具有重要作用。本發(fā)明方法能增加內(nèi)生紅細(xì)胞生成素同時(shí)促進(jìn)鐵的運(yùn)輸和利用，它對(duì)于在常氧和低氧環(huán)境中輸送氧具有特別的好處.本發(fā)明一方面提供了保護(hù)神經(jīng)的方法，例如通過穩(wěn)定HIFa。例如，VEGF和EPO都能保護(hù)神經(jīng)。(參見，例如Jin等(2000)ProcNatlAcadSciUSA97:10242-6210247-.Bocker-Mcffert等(2O02)InvestOphthalmolVisSci43:2021-2026;Buemi等(2002)ClinSci(Lond)103:275-282:Siren等(2001)ProcNatlAcadSciUSA98:4044-4049)。如果在局部缺血事件發(fā)生前引入EPO，它還能加快脊髓損傷的恢復(fù)，并能保護(hù)神經(jīng)。(參見，例如Gorio等(2002)ProcNatlAcadSciUSA99:9450-9455:Dawson(2002)Lancet359:96-97)由于本發(fā)明方法能促進(jìn)神經(jīng)保護(hù)因子，如VEGF和EPO的表達(dá)，所述方法能提供神經(jīng)保護(hù)，因而能用于治療、預(yù)治療活預(yù)防各種疾病，例如包括糖尿病性神經(jīng)病、中風(fēng)、神經(jīng)退化疾病、受傷(例如展蕩、脊髄受損等)，或者用于手術(shù)前，因?yàn)槭中g(shù)有可能導(dǎo)致腦缺血再灌注損傷等。低氧預(yù)調(diào)理對(duì)于保護(hù)嚴(yán)重缺血損傷具有良好效果。由于低氧的初期反應(yīng)是HIFot的穩(wěn)定化及隨后對(duì)HIF調(diào)節(jié)基因的活化，本發(fā)明方法將在常氧環(huán)境中模擬缺血預(yù)調(diào)理。例如，所述方法可在手術(shù)之前應(yīng)用，因?yàn)槭中g(shù)中的缺血再灌注損傷有可能對(duì)患者產(chǎn)生有害結(jié)果。這種預(yù)防性治療在局部缺血事件發(fā)生之前應(yīng)用，而且可在局部缺血事件發(fā)生之前的任何時(shí)刻應(yīng)用，可以應(yīng)用一個(gè)療程，也可以應(yīng)用多個(gè)療程.本發(fā)明方法還能協(xié)同調(diào)節(jié)氧化應(yīng)急和血管品質(zhì)中涉及的基因.這些基因包括誘導(dǎo)氧化一氮合成酶(iNOS)和亞鐵血紅素氧化激酶1。在幾個(gè)動(dòng)物樣本中.產(chǎn)生iNOS也是低氧預(yù)調(diào)理帶來的有益效果，(參見，例如Sciracino-Inglott等(2002)BMCGastroenterol2:22-27:Kuntecher等(2002)BrJPlastSurg55:430-433)特別地，阻斷iNOS的活性可降低但不能消除預(yù)調(diào)理帶來的有益效果，但非特異性阻斷蛋白質(zhì)的產(chǎn)生卻能完全消除預(yù)調(diào)理帶來的好處。(Wang等(2002)CardiovascRes56:33-42)這表明，iNOS是預(yù)調(diào)理產(chǎn)生的生理反應(yīng)的重要組成部分，但不是唯一因素。由于本發(fā)明方法可協(xié)同調(diào)節(jié)各種因子，包括低氧反應(yīng)中涉及的iNOS,本發(fā)明方法能更準(zhǔn)確地再現(xiàn)低氧預(yù)調(diào)理所具有的益處.使用本發(fā)明化合物的方法本發(fā)明提供了抑制HIFa羥化的方法，由此穩(wěn)定HIF并激活HIF調(diào)節(jié)基因的表達(dá).所述方法可用于預(yù)防、預(yù)治療或治療HIF疾病，包括缺血性和低氧性疾病。舉例來說，這些疾病包括心肌梗塞、肝缺血、腎缺血和中風(fēng):周邊血管疾病、潰瘍、灼傷和慢性創(chuàng)傷肺栓塞缺血再灌注損傷，例如手術(shù)和器官移植中發(fā)生的缺血再灌注損傷.在一種少數(shù)方式中，本發(fā)明提供了在缺血或低氧發(fā)生之前、當(dāng)中或之后穩(wěn)定HIFa的方法，特別是與心肌梗塞、中風(fēng)或腎缺血再灌注損傷有關(guān)的63本發(fā)明一方面提供了治療各種缺血性和低氧性疾病的方法，特別是用上述化合物進(jìn)行治療的方法。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明方法在缺血或低氧發(fā)生后應(yīng)用能帶來較好的治療效果。例如，本發(fā)明方法用于心肌梗塞時(shí)，能顯著降低發(fā)病率;和死亡率，并能顯著提髙心臟結(jié)構(gòu)和機(jī)能。此外，對(duì)肝中毒缺血損傷應(yīng)用本發(fā)明方法，可改善肝功能。低氧是肝病的重要表現(xiàn)，特別是由肝中毒化合物如乙醇引起的慢性肝病，此外，HIFcx,例如氧化一氮合成酶和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子-1誘導(dǎo)產(chǎn)生的基因表達(dá)在酒精所致肝病中得到加強(qiáng)。(參見，例如Areel等(1997)Hepatology25:920-926:Strubelt(l訴4)Fund咖ApplToxicol4:144-151:Sato(1983)PharmacoliBiochemBehav18(Suppl1):443^447;N幼ji等(1995)AmJPathol146:329-334:Morio等(2001)Toxico1ApplPharmacol172:44-51)因此，本發(fā)明提供了治療缺血性或低氧性疾病的方法，所述方法包括給治療對(duì)象施用有效量的化合物或其藥用鹽，單獨(dú)施用或與藥用賦形劑組合施用。在一種實(shí)施方式中，化合物在急性缺血性疾病發(fā)生之后立即施用，例如心肌梗塞、肺栓塞、腸梗阻、缺血性中風(fēng)和腎缺血再灌注損傷.在另一個(gè)實(shí)施方式中，化合物可施用于經(jīng)診斷患有慢性缺血疾病的病人，例如心臟硬化、斑狀退化、肺栓塞、急性呼吸系統(tǒng)衰竭、新生呼吸壓抑綜合癥和充血性心力衰竭。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物在受傷之后立即施用.本發(fā)明另一方面為缺血性或低氧性疾病的潛在患者提供了用上述化合物進(jìn)行治療的方法，例如極有可能患動(dòng)脈硬化的個(gè)體。導(dǎo)致動(dòng)脈硬化的潛在因素包括髙血脂、抽煙、髙血壓、糖尿病、胰島素過高和腹部肥胖。因此，本發(fā)明提供了預(yù)防缺血性組織損傷的方法，所述方法包括給治療對(duì)象施用有效量的化合物或其藥用鹽，單獨(dú)施用或與藥用賦形劑組合施用.在一種實(shí)施方式中，所述化合物可根據(jù)事先診斷出的疾病施用，例如髙血壓、糖尿病、動(dòng)脈閉合疾病、慢性靜脈功能不足、肢端動(dòng)脈痙孿癥、慢性皮膚潰瘍、硬化癥、充血性心力衰竭和系統(tǒng)硬化。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述方法可用來促進(jìn)受傷組織、創(chuàng)傷和潰瘍中血管和/或肉芽組織的形成，例如，研究表明，本發(fā)明化合物在創(chuàng)傷治療中能有效促進(jìn)肉芽組織的形成，肉芽組織包含新生但仍漏血的血管和血漿蛋白的臨時(shí)基質(zhì)，如纖維蛋白原和血漿粘連蛋白.發(fā)炎細(xì)胞、血小板和受激內(nèi)皮中釋放的生長因子能激發(fā)纖維原細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在肉芽組織中的遷移和增生，如果血管生長或神經(jīng)激發(fā)受損，則會(huì)發(fā)生潰瘍.本發(fā)明方法能有效促進(jìn)肉芽組織的形成。因此，本發(fā)明起的組織損傷、因外傷等引起的創(chuàng)傷或因糖尿病等疾病引起的慢性創(chuàng)傷或潰瘍。所述方法包括根據(jù)需要給治療對(duì)象施用有效量的化合物或其藥用鹽，單獨(dú)施用或與藥用賦形劑組合施用。本發(fā)明另一方面提供了使用所述化合物對(duì)患者進(jìn)行預(yù)治療的方法，以緩解或預(yù)防缺血性或低氧性組織損傷的惡化，本發(fā)明方法在患上缺血性或低諷性疾病之前應(yīng)用可產(chǎn)生較好的治療效果.例如，從統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，在誘導(dǎo)產(chǎn)生心肌梗塞之前應(yīng)用本發(fā)明方法明顯改善了心臟的結(jié)構(gòu)和功能。此外，本發(fā)明方法在缺血性再灌注損傷發(fā)生之前和發(fā)生過程中立即應(yīng)用可產(chǎn)生較好的治療效果，明顯降低了與腎衰竭有關(guān)的診斷參數(shù)。因此，本發(fā)明提供了對(duì)患者展開預(yù)治療，以緩解或預(yù)防缺血性或低氧性組織損傷，所述方法包括給有缺血性病史(例如心肌梗塞)或有慢性缺血癥狀(例如心絞痛)的患者施用有效量的化合物或其藥用鹽，單獨(dú)施用或與藥用賦形劑組合施用，在另一個(gè)實(shí)施方式中，根據(jù)可能缺血或低氧的指示性物理參數(shù)施用所述化合物，例如個(gè)休經(jīng)過普通麻醉或臨時(shí)在髙諱度工作.在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明方法可用在器官移植中，用來對(duì)器官捐獻(xiàn)者進(jìn)行預(yù)處理，并在器官從體內(nèi)移出但移植到接受者之前保護(hù)器官。前面的研究表明，用于本發(fā)明方法中的某些化合物能有效抑制膠原脯氨酰4-羥化酶.雖然人們認(rèn)識(shí)到從初始梗塞或創(chuàng)傷恢復(fù)要在壞死區(qū)沉積結(jié)締組織，但就形成疤痕而言，本發(fā)明在治療上沒有表現(xiàn)出負(fù)面影響.因此，鑒于本發(fā)明的某些化合物在治療和預(yù)防低氧組織損傷和纖維癥方面具有的優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明提出了一種"雙療效"方法，用于治療或預(yù)防缺血性或低氧性疾病，包括反應(yīng)性纖維化并發(fā)缺血或低氧，例如心肌梗塞和由此導(dǎo)致的充血性心力袞竭，所述方法可用一種化合物抑制一種以上的2-酮戊二酸雙加氧嗨，例如H1F脯氨酰羥化酶和膠原脯氨酰4-羥化酶，它們具有相同或不同的特異性.或者，所述方法可組合應(yīng)用化合物，其中每種化合物專門抑制一種2-酮戊二酸雙加氧酶,例如一種化合物專門抑制HIF脯氨酰羥化酶，而第二種化合物專門抑制膠原脯氨酰4-羥化酶。本發(fā)明化合物一方面能抑制一種或多種2-酮戊二酸雙加氧酶。在一種實(shí)施方式中，所述化合物能抑制至少兩個(gè)2-酮戊二酸雙加氧酶族成員，例如HIF脯氨酰羥化酶和HIF天冬酰胺羥化酶(FIH-1),它們的特異性可相同或不同.在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物對(duì)一種2-酮戊二酸雙加氧酶有特異性，例如H1F脯氨酰羥化酶，而對(duì)其他同族成員具有很少乃至沒有特異性。所述化合物可結(jié)合其他各種治療手段施用。在一種實(shí)施方式中，所述化合物可與另一種2-酮戊二酸雙加氧酶抑制劑同時(shí)施用，這兩種化合物對(duì)單個(gè)2-酮戊二酸雙加氧酶族成員具有不同的特異性。這兩種化合物可以一定比例同時(shí)施用。指定治療過程或特定患者適用的比例可利用本領(lǐng)域已有技術(shù)測定。或者，兩個(gè)化合;物在治療過程中可依次施用，例如針對(duì)心肌梗塞。在一個(gè)特定實(shí)施方式中，一種化合物專門抑制HIF脯氨酷羥化酵活性，第二種化合物專門抑制膠原脯氨酰4-羥化嗨活性。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，一種化合物專門抑制HIF脯氨酰羥化酶活性，而第二種化合物專門抑制H1F天冬酰胺羥化酶活性。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物與另一個(gè)具有不同作用模式的治療劑同時(shí)施用，例如ACE抑制劑,(ACEI)、血管緊縮素-II受體阻斷劑(ARB)、抑制素、利尿劑、地髙辛、肉堿等。鄉(xiāng)ffi布J緣艦fe本發(fā)明組合物可直接輸入，也可與合適的載體或賦形劑一起形成藥用組合物，如本領(lǐng)域所已知的。本發(fā)明治療方法包括給可能患缺血性疾病，例如充血性心力衰竭、動(dòng)脈硬化等的患者施用有效量的本發(fā)明化合物*在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，治療對(duì)象是哺乳動(dòng)物，在多數(shù)優(yōu)選實(shí)施方式中，治療對(duì)象是人。優(yōu)選給藥途徑包括口服和透皮輸藥機(jī)制。利用常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法可方便地確定這種試劑的有效量，還可確定最有效和最方便的給藥途徑以及最合適的配劑。各種配劑和藥物輸入系統(tǒng)都是已知的，對(duì)合適i配劑的選擇也在本領(lǐng)域技術(shù)掌握之內(nèi)，(參見，例如Gennaro編(1995)《Remington藥學(xué)》，同上；Hardman、Li邁bird和Gilm幼編(2001)《治療的藥理基礎(chǔ)》，同上。)合適的給藥途徑可包括口服、直腸給藥、透壁、鼻吸或小腸給藥和腸胃外給藥，包括肌肉注射、皮下注射、脊髄內(nèi)注射，以及膜內(nèi)注射、直接心室內(nèi)注射、靜脈注射、腹膜內(nèi)注射、鼻內(nèi)注射或眼內(nèi)注射.所述試劑或組合物可在局部給藥，'而不是系統(tǒng)給藥。例如，合適的試劑可通過注射或在目標(biāo)送藥系統(tǒng)中送入，如緩釋配劑，本發(fā)明的藥用組合物可通過本領(lǐng)域成熟的方法生產(chǎn)，如常規(guī)混合、溶解、造粒、制糖丸、粉化、乳化、囊封或干凍。如上所述，本發(fā)明組合物可包含一種或多種生理上可接受的載體，如賦形劑和輔劑，以幫助活性分子制成藥物。>合適的配劑依賴于所選擇的給藥途徑。例如，對(duì)于注射方法，組合物可形成水溶液，宜為生理緩沖液，如Hanks溶液、林格氏溶液活生理活性鹽水緩沖液。對(duì)于透壁或彝腔給藥，配劑中可使用適合屏蔽劑滲透的滲透劑。這種滲透劑在本領(lǐng)域通常是己知的。對(duì)于口腔給藥，通過使活性化合物與本領(lǐng)域熟知的藥用載體結(jié)合，所述化合物可方便地配制而成。這樣的載體可使本發(fā)明化合物形成片劑、丸劑、糖丸、膠襄、藥液、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等，以便患者口服。所述化合物也可制成直腸組合物，如栓劑或緩釋灌腸劑，它們可包含傳統(tǒng)栓劑基底，如可可油或其他甘油酯，口服藥劑可以是這樣獲得，在化合物中加入固體陚形劑，任選研磨所得混合物，加工粒狀混合物，如果需要可加入合適的輔劑，然后得到片劑或糖丸核。合適的賦形劑特別包括填充劑，如糖，包括果糖、蔗糖、甘露醉或山梨醇；纖維素配劑，如玉米粉、小麥粉、米粉、土豆粉、凝膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入分解劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷鵬、瓊脂或褐藻酸或它們的鹽，如褐藻鹽.糖丸核上要包裹合適的包衣，為此，可使用濃縮糖溶液，其中可任選包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷覿、卡波普膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦，清漆溶液和有機(jī)溶劑或溶劑混合物.可在片劑或糖丸包農(nóng)上加入染料或顏料，以作標(biāo)記或表征不同的活性化合物劑量組合?？诜巹┌ㄓ赡z制成的插接膠襄，由凝膠和增塑劑制成的柔軟密封膠囊，如甘油或山梨酵*插接膠囊可包含活性組分與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂及任選穩(wěn)定劑組成的混合物.在軟膠囊中，活性化合物可溶解或懸浮在合適的液體中，如脂肪油、液體石蝤或液體聚乙二醇，此外，可加入穩(wěn)定劑，在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明化合物可透皮給藥(如通過裔藥)或局部給藥。一方面，本發(fā)明透皮或局部配劑可另外包含一種或多種滲透促進(jìn)劑或其他增效劑，包括能促進(jìn)待送化合物遷移的試劑。在霈要定位給藥等場合下，優(yōu)選透皮或局部給藥。對(duì)于吸入給藥，用于本發(fā)明的化合物可以氣溶膠噴霧的形式從壓縮包或噴霧器中方便地輸送，可以借助合適助推劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他任何合適的氣體.對(duì)于壓縮氣溶膠，合適的劑量可通過閥門控制，以實(shí)現(xiàn)定量給藥。用于吸藥器或吹藥器中的凝膠可制成膠囊或筒的形式。用于腸胃外注射，例如造影劑注射或連續(xù)灌注的組合物可制成單位劑量的形67式，例如裝在安瓿或多劑量容器中，可以加入防腐劑。所述組合物的形式可以是以油或水為媒介的懸浮液、溶液或乳液，可包含配藥試劑，如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。腸胃外注射配劑包括水溶液或其他水溶性組合物形式?；钚曰衔锏膽腋∫阂部芍瞥珊线m的油狀注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或媒介包括脂肪油(如芝麻油)和合成脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酸酯)，或脂質(zhì)體。水溶性注射懸浮液可包含能增加懸浮液粘性的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖。任選地，懸浮液也可包含合適的穩(wěn)定劑或試劑，以增加這些化合物的溶解性，從而方便制備高度濃縮的溶液?；蛘撸钚越M分可雖粉末形式，以便在使用前與合適的媒介如消毒無熱源質(zhì)水混合。如上所述，本發(fā)明組合物也可制成儲(chǔ)備藥劑.這種長效配劑可通過植入(例如皮下或肌肉植入)或通過肌肉注射送藥。因此，舉例來說，本發(fā)明化合物可與合適的聚合材料或疏水材料配藥(例如在可用油中形成乳液)，或與離子交換樹脂配藥，或者配成微溶衍生物，例如配成微溶鹽。適合用作本發(fā)明疏水分子的載體在本領(lǐng)域是廣為人知的，包括共溶劑體系和水相，前者包括芐基醇、非極性表面活性劑、易溶于水的有機(jī)聚合物等。共溶劑體系可以是VPD共溶劑體系。VPD是3W(w/v)芐醉、8yn(w/v)非極性表面活性劑聚山梨醇酯80和65。/。(w/v)聚乙二醉300組成，并用無水乙醉配足體積的溶液，VPD共溶劑體系(VPD:5W)中的VPD是在水溶液中用5%右旋糖以1:1的比例稀釋的，這種共溶劑體系能有效溶解疏水性化合物，在系統(tǒng)給藥過程中產(chǎn)生的毒性低，當(dāng)然，共溶劑體系的配比可作相當(dāng)大的改變，只要不破壞其溶解性和毒性特征。此外，共溶劑組分液可以改變，例如，可用其他低毒非極性表面活性劑代替聚山梨酵酯80,聚乙二醇的比例可以改變，其他生物相容聚合物可代替聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮，其他糖和多糖可代替右旋糖。此外，對(duì)于疏水性分子，也可采用其他給藥體系，脂質(zhì)體和乳液可用作疏水性藥物的輸送媒介或載體是廣為人知的例子。脂質(zhì)體給藥體系在上面已結(jié)合基因輸送體系討論過，某些有機(jī)溶劑，如二甲基亞砜也可以采用，雖然往往會(huì)帶來較大的毒性.此外，所述化合物可用緩釋體系輸送，如固體疏水性聚合物的半透過性基質(zhì)，所述聚合物包含有效量要輸入的組合物.各種緩釋材料都是已知的，本領(lǐng)域技術(shù)人員不難得到。根據(jù)它們的化學(xué)特性，緩釋膠囊可在數(shù)周到100天以上的時(shí)間里釋放化合物。根據(jù)醫(yī)療試劑的化學(xué)性質(zhì)和生物穩(wěn)定性，可以采用其他策略增加蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。對(duì)于本發(fā)明治療方法中所用的任何組合物，一開始可用本領(lǐng)域熟悉的技術(shù)測定有療效的劑量。例如，根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)化驗(yàn)得到的信息，可以配成一個(gè)劑量，在動(dòng)物樣本中達(dá)到包含ICs。的循環(huán)濃度范圍。類似地可以確定適合于人體的劑量范圍，例如利用細(xì)胞培養(yǎng)化驗(yàn)和其他動(dòng)物研究中獲得的信息。一種試劑有療效的劑量指該試劑能緩解癥狀或延長治療對(duì)象存活時(shí)間的量。這種分子的毒性和療效可通過標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)程序在培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物測定，例如測定LD"使群體的50%致命的劑量)和EDs。(對(duì)群體的50%有療效的劑量).毒性與療效的劑量比是治療指數(shù)，可表示為LD5o/EDs。比。試劑的治療指數(shù)越高越好。劑量宜落在循環(huán)濃度范圍之內(nèi)，該濃度范圍包含ED5。但具有很小或沒有毒性。劑量可在此范圍內(nèi)根據(jù)所用藥劑形式和給藥途徑變化，按照本領(lǐng)域已知方法，實(shí)際采用的配劑、給藥途徑和劑量要根據(jù)患者所患疾病的具體情況選擇。給藥劑量和間隔可根據(jù)個(gè)體情況調(diào)整，使提供給血漿的活性組分含量足以調(diào)節(jié)HIFa的穩(wěn)定化過程和受HIF調(diào)節(jié)的基因誘導(dǎo)過程，如所希望的那樣獲得最小有效濃度(MEC).MEC可隨每個(gè)化合物而變化，但可從體外數(shù)據(jù)估計(jì)出。達(dá)到MEC所露的劑量取決于化合物的個(gè)體特征和給藥途徑.試劑或組合物應(yīng)當(dāng)通過一個(gè)控制載體輸送，使血漿水平保持高于MEC,在治療期間約為10-卯％,宜為約30-卯％,最好約為50-卯％,在局部給藥或選擇吸收的情況中，藥物的有效局部濃度不一定與血漿濃度相關(guān)，當(dāng)然，試劑或組合物的給藥量取決于多種因素，包括治療對(duì)象的性別、年齡和體重，病痛的嚴(yán)重程度，給藥方式和處方醫(yī)師的判斷。如果需要，本發(fā)明組合物可裝在藥包或分藥裝置中，可含有一個(gè)或多個(gè)劑量的含有活性組分的藥物。舉例來說，這種藥包或裝置可包含金屬或塑料箔，如硬質(zhì)泡沫塑料襯墊包*所述藥包或分藥裝置上可附注用藥說明.在藥用載體中配制的、含本發(fā)明化合物的組合物也可裝在合適的容器中，并貼上說明治療指定疾病的標(biāo)簽。標(biāo)簽上所指明的相應(yīng)疾病可包括以缺血或低氧為主的疾病或失調(diào).化合物的篩選和鑒定沐發(fā)明還提供了篩選和鑒定能抑制HIFa羥基化或穩(wěn)定HIFa等的其他化合物o各種化驗(yàn)和篩選技術(shù)，包括下面將要介紹的，可用來鑒定調(diào)節(jié)(例如增加或降低)HIFtt水平或活性的小分子?；?yàn)通常提供與反應(yīng)底物的消耗或反應(yīng)產(chǎn)物的產(chǎn)生相關(guān)的可檢測信號(hào)。舉例來說，檢測可涉及熒光團(tuán)、放射性同位素、共軛酶和本領(lǐng)域已知的其他可檢測標(biāo)記。所得結(jié)果可以是定性或定量的.諸如生物素或組氨酸這樣的標(biāo)記可幫助跟蹤反應(yīng)產(chǎn)物的分離情況，這種分離可通過沉淀或親合色譜法將一種反應(yīng)產(chǎn)物從其他反應(yīng)組分中純化出來。對(duì)HIFa羥基化過程的化驗(yàn)可涉及HIFtt或其片段中羥化脯氨酸或賴氨酸殘基的測定(參見，例如Palmerini等(1985)JChromatogr339:285-292),或涉及在酶和HIFa或其片段存在下由2-酮戊二酸形成琥珀酸酯的測定(參見，例如Cunliffe等(19S6)BiochemJ240:617-619)。測定HIFa羥基化過程的示例性程序見述于Ivan等(同上)和實(shí)施例10。測定由2-酮戊二酸形成琥珀酸酯的示例性程序見述于Kaue和Gunzlcr(1990:AmdBiochem184:291-297。)底物分子可包括HIFa或其片段，例如HIF(556-575):例如，實(shí)施例10所描述的化驗(yàn)中所采用的示例性底物是[甲氧基香豆素]-DLDLEALAPYIPADDDFQL-酰胺(SEQIDNO:5).酶可包括，例如HIFtt脯氨酰羥化酶(參見，例如基因庫續(xù)編號(hào)NO.AAG33965等)，可來自任何來源》S6也可存在于粗細(xì)胞溶解產(chǎn)物中或以部分純化形式存在，穩(wěn)定HIFa或抑制HIFa羥化的化合物可通過測定并比較該化合物存在與不存在的情況下酵的活性。另外，化合物可通過本領(lǐng)域已知的各種篩選技術(shù)鑒定，這些技術(shù)也可與上述方法組合使用。這些篩選方法可使溶液中不含目標(biāo)多肽或化合物，也可使它們附著在固體載體上，生成在細(xì)胞表面上，或者位于細(xì)胞內(nèi)部，例如，實(shí)驗(yàn)化合物可以類似于本領(lǐng)域現(xiàn)有的陣列方法陣列在表面上，然后分析其活性(參見，例如Shalon等(1995)國際公開專利WO95/35505:Baldesclweiler等(1995)國際公開專利W095/251116;Bre加肌等(1995)美國專利5474796;Heller等(1997)美國專利5605662,)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在看過本說明書后，不難理解本發(fā)明的上述及其他實(shí)施方式，這些實(shí)施方式經(jīng)過了專門反復(fù)推敲，實(shí)施例結(jié)合以下實(shí)施例可更好理解本發(fā)明，但這些實(shí)施例僅僅是本發(fā)明的示例。本發(fā)明的范圍不受示例中的實(shí)施方式限制，這些實(shí)施方式只是說明了本發(fā)明的單個(gè)側(cè)面。任何在作用上等價(jià)的方法都包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)，根據(jù)前面的描述和附圖，本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員不難在這里描述的實(shí)施方式之外，對(duì)本發(fā)明作出各種修改。這些修改也在附屬權(quán)利要求范圍之內(nèi)，實(shí)施例1體外細(xì)胞中HIFoi的穩(wěn)定將來自腺病毒變性胎兒腎上皮細(xì)胞(293A)、子宮頸上皮腺癌細(xì)胞(HeLa)、肝癌細(xì)胞(H印3B)、包皮纖維原細(xì)胞(HFF)、乳腺上皮癌細(xì)胞(MCF7)、帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)、微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMEC-1)、臍鱗狀上皮癌細(xì)胞(SCC-25)、肺纖維原細(xì)胞(HLF)、靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(AG10774B)組織(參見,例如美國模式菌種收集，M幼assaVA;Qbiogene,CarsbadCA)的人體細(xì)胞分別在35mm培養(yǎng)皿中下種，在3710、20%O2、5%032環(huán)境中培養(yǎng)，介質(zhì)如下HeLa細(xì)胞在經(jīng)Dulbeceo改進(jìn)的Eagle介質(zhì)中(DMEM),2。/。幼牛血清(FBS);HFF和HLF細(xì)胞在DMEM中，10%FBS;293A細(xì)胞在DMEM中，5%FBS:HUVEC和AG10774B細(xì)胞在內(nèi)皮生長介質(zhì)中(EGM-2:BioWhittaker，Inc.,WalkersvilleMD);HMEC-1在RPMI1640中，10%FBS:Hep3B細(xì)胞在MinimalEssential介質(zhì)中(MEM),EarieBSS(MediatechInc.,HerndonVA),2mML"谷氨酸，O.hnM次要氨基酸，lmM丙酮酸鈉，10%FBS,當(dāng)細(xì)胞層匯合后，介質(zhì)用OPTI-MEM介質(zhì)替換(InvitrogenLifeTechnologies,CarlsbadCA),細(xì)胞層在37TC的20。/。O:、5%002中培養(yǎng)約24小時(shí)。然后向現(xiàn)有介質(zhì)中加入本發(fā)明化合物(化合物A-O之一)或DMSO(0.5-1%),繼續(xù)培養(yǎng)過夜。培養(yǎng)結(jié)束，除去介質(zhì)，離心、保存，以備分析(見下文)，在冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)中洗條細(xì)胞2次，然后在冰凍情況下讓細(xì)胞在lml10mMTris(pH7.4)、lmMEDTA、150mMNaCl、0.5%IGEPAL(Sigma-Aldrich,St.LouisMO)和蛋白酶抑制劑混合物(RocheMolecularBiodiemcals)中溶解15分鐘，細(xì)胞溶解物在4*0下于3000xg下離心5分鐘，收集細(xì)胞溶解部分(上清液)，使核(小球)重新懸浮，并在100[il20mMHEPES(pH-7.2)、400mMNaCl、lmMEDTA、ImM二硫蘇糖醇和蛋白酶混合物中溶解(RocheMolecularBiochemicals)，在4t:下以13000xg的轉(zhuǎn)速離心，收集核蛋白部分.根據(jù)蛋白質(zhì)濃度校正核部分，負(fù)載到4-12%TG凝膠中，并在還原條件下分餾.在5O0mA電流下，在1.5小時(shí)內(nèi)將蛋白貭轉(zhuǎn)移到PVDF膜中(InvitrogcnCorp.,CarlsbadCA)'膜在T-TBS、2。/。牛奶中于室溫下屏蔽l小時(shí)，并將大鼠抗人體HIF-la抗體(BDBioscience,BedfordMA)培養(yǎng)過夜，所述抗體在T-TBS、2%牛奶中按1:250的比例稀釋。用SUPERSIGNALWEST化學(xué)發(fā)光基底(Picrce，RockfordIL)培育斑點(diǎn)。如圖1A所示，本發(fā)明的各種化合物(A-F)在常氧環(huán)境中以劑量依賴性方式穩(wěn)定HIF(U如圖1B所示，當(dāng)在常氧環(huán)境中用本發(fā)明化合物處理時(shí)，各種細(xì)胞類型，包括來自各種來源的纖維原細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和肝細(xì)胞，都顯示出HIFa的劑量依賴性穩(wěn)定作用，或者，利用QUANTIKTNE免役測定裝置(R&DSystems,Inc.,MinneapolisMN),根據(jù)商家說明書分析細(xì)胞核部分和包液部分的HIF-la。如圖2A所示，與用媒介處理的對(duì)照細(xì)胞相比，用本發(fā)明各種化合物(化合物B和G-O)處理的上皮細(xì)胞(293A)和肝細(xì)胞(Hep3B)中的HIFa得到穩(wěn)定和富集。如圖2B所示，用本發(fā)明化合物處理的細(xì)胞對(duì)HIFot具有依賴于劑量的穩(wěn)定作用。實(shí)施例2:耗氧效果氧傳感細(xì)胞培養(yǎng)皿(BDBioscience,BedfordMA)含有釘絡(luò)合物，該絡(luò)合物在低氧情況下具有更好的熒光性。因此，如果培養(yǎng)皿中存在耗氧細(xì)胞，則熒光讀出信號(hào)增強(qiáng)，它使平衡偏向低氧飽和性和高熒光狀態(tài)?？梢灶A(yù)計(jì)，通過抑制羥化穩(wěn)定HIF的化合物可降低耗氧量，即羥化作用本身的耗氧量降低，且/或使細(xì)胞代謝從有氧供能轉(zhuǎn)向無氧供能.培養(yǎng)腺病毒變性胎兒腎上皮細(xì)胞(293A)或子宮頸上皮腺癌細(xì)胞(HeLa)(美國模式菌種收集)，使它們在37"C和10%C02條件下于介質(zhì)(高葡萄糖DMEM(Mediatech，I加.，Hetnd加VA),1%青每素/鏈每素混合物(Mediatech)，1%幼牛血清)中匯合.收集細(xì)胞，并重新懸浮在介質(zhì)中，密度為500000個(gè)細(xì)胞/毫升，將懸浮液分發(fā)到OxygenBiosensor96穴細(xì)胞培養(yǎng)皿(BDBioscience)的每個(gè)穴中，每穴0.2ml,以10fil體積將下列處理時(shí)試劑加入三穴組中(l)0.5。/oDMSO:(2)200mM十二烷基硫酸鈉,或(3)1,10或50nM化合物(化合物B、G或化合物V的前體藥物[pV]之一).培養(yǎng)液在37"10%0)2中培養(yǎng)72小時(shí)，然后通過FL600熒光儀(BiotekInstrumenfa，Inc.，Wi加oskiVT)在激發(fā)波長485nm和發(fā)射波長590nm讀取培養(yǎng)皿數(shù)據(jù).利用所得數(shù)據(jù)繪制相對(duì)于DMSO參照物或在450nm(WST-l)波長處的吸收率的倍數(shù)函數(shù)關(guān)系(耗02量)，并用EXCEL軟件(微軟公司，BellevueWA)進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)分析。圖3A所示為用所述化合物處理的細(xì)胞相對(duì)于參照物在耗氧量上的倍數(shù)變化。從圖中可以看出，所有的化合物都在某種程度上降低了耗氧量。此外，耗氧量的降低依賴于劑量(圖3A)，即使在最髙劑量下，也很少或沒有檢測到細(xì)胞存活率的損失(圖1B)。在各種細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)體系中進(jìn)行的其他實(shí)驗(yàn)(未示出)，包括加入311-72胸腺嘧啶脫氧核苷和全氨基酸，都證實(shí)耗氧量的下降與細(xì)胞毒性無關(guān)。實(shí)施例3:體外HIF調(diào)節(jié)基因的表達(dá)利用QUANT1KINE免疫測定裝置(R&D),根據(jù)商家說明書對(duì)從如實(shí)施例1制備的細(xì)胞培養(yǎng)液中收集的調(diào)理介質(zhì)分析血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。如圖4A所示，用本發(fā)明各種化合物(化合物A、B、C、H、K、L、Q和化合物V的前體藥物[pV〗之一)處理的包皮纖維原細(xì)胞(HFF)、腺病毒變性胎兒腎上皮細(xì)胞(293A)和肝癌細(xì)胞(Hep3B)在VEGF的表達(dá)上都有所下降(圖4A),Y軸上的值代表相對(duì)于參照物的誘導(dǎo)倍數(shù)的log2值，這樣數(shù)值1代表2倍誘導(dǎo).或者，在37t和10%0)2環(huán)境下的DMEM、5%FBS、1°/。青霉素-鏈霉素中培養(yǎng)來自腺病毒變性胎兒腎上皮細(xì)胞(293A)的人體細(xì)胞。48小時(shí)后，收集細(xì)胞，匯集在35mm培養(yǎng)皿中，所用介質(zhì)為常規(guī)介質(zhì)，1天后將介質(zhì)換成Opti-MemI。18-24小時(shí)后，在介質(zhì)中加入化合物B,再培養(yǎng)18小時(shí)。除去培養(yǎng)皿中的上清液，將培養(yǎng)皿放在冰上，加入細(xì)胞溶解緩沖液(LB)-l,刮出細(xì)胞.將刮出的細(xì)胞收集起來，在冰上培養(yǎng)15分鐘，然后在4"C下以3000xg離心5分鐘，收集代表細(xì)胞液的上清液，在變質(zhì)和減壓條件下用SDS聚丙烯酸酰胺凝膠分離細(xì)胞液蛋白質(zhì)，每條通道負(fù)載等量的蛋白貭。在150V電壓下進(jìn)行2小時(shí)凝膠電泳，SDS-PAGE之后，在400mA電流和4"C溫度下，在1.5小時(shí)內(nèi)將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。然后在屏蔽緩沖液中培養(yǎng)膜，用T-TBS洗滌一次，加入在屏蔽緩沖液中稀釋到工作濃度的抗醛縮兩抗體，在4"C下輕輕攪拌過夜，培養(yǎng)斑點(diǎn)。然后用T-TBS洗滌膜4次，然后在室溫下培養(yǎng)I小時(shí)，其中屏蔽緩沖液含有標(biāo)記次級(jí)抗體，然后用T-TBS洗滌膜4次，曝光X-射線膜，用ECLSUPERSIGNALWESTFEMTO或PICO化學(xué)熒光基底(Pierce,RockfordIL)按照說明進(jìn)行顯影，可以看到對(duì)原始抗體有專一性的抗原，圖4B所示為所述化合物在不同時(shí)間對(duì)醛縮酶表達(dá)的增加情況，醛縮酶是醣酵解中涉及的酶。因此，本發(fā)明化合物對(duì)HIFa的穩(wěn)定會(huì)附帶引起HIF調(diào)節(jié)基因表達(dá)的增加。實(shí)施例4:體內(nèi)細(xì)胞中HIFa的穩(wěn)定從CharlesRiverLaboratories,Inc.(WilmingtonMA)或Simonsen，Inc.(Gilroy，CA)等單位獲取瑞士韋伯斯特公鼠(30-32g),通過喂入2ml/kg體積0.5%羧甲基纖維素(CMC:Sigma-Aldrich)(對(duì)照)或5.0%化合物(0.5%0^0，至少喂一天，每天一次或多次。在最后一個(gè)劑量的一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，例如2-5小時(shí)，用異氟烷對(duì)動(dòng)物實(shí)施麻醉，抽取0.1ml血，例如從眼竇抽取，放入肝素化試管中，所有時(shí)間點(diǎn)都選好后，給動(dòng)物施以亞致死量的C02,從腹部靜脈抽血，放入肝素化試管中。所有的血樣品保存在-80lC下。按照下述方法對(duì)從上述經(jīng)本發(fā)明化合物處理過的動(dòng)物身上分離出來的組織分析HIFa蛋白水平。用POLYTRONPT-1200均化器(Brinkm咖Instruments,Inc.,WestburyNY)在3ml10mMTris(pH7.4)、lmMBDTA、150mMNaCl、0.5。/。IGEPAL(Sigma-AldTich)中對(duì)所述組織均化15秒鐘，在41C下對(duì)細(xì)胞溶解液以3000xg離心5分鐘，收集細(xì)胞液(上清液)。使細(xì)胞核(小球)再懸浮并溶解在lOOjil20mMHEPES(pH7.2)、400mMNaCl、lmMEDTA、lmM二硫蘇糖醇和蛋白酶混合物(RocheMolecularBiochemicals)中，在4t:下對(duì)細(xì)胞溶解液以3000xg離心5分鐘，收集核蛋白(上清液)。根據(jù)蛋白質(zhì)濃度對(duì)細(xì)胞核部分進(jìn)行歸一化，在減壓條件下負(fù)載到4-12WTG凝膠上。在500mA電流下，在1.5小時(shí)內(nèi)將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上(InvitrogenLifeTechnologies),在室溫下的T-TBS,2%牛奶中屏蔽膜1小時(shí)，用在T-TBS,2%牛奶中稀釋的抗HIFa抗體培養(yǎng)過夜。用SUPERSIGNALWEST化學(xué)發(fā)光基底(Pierce，RockfordIL)培育斑點(diǎn).或者，利用QUANTIKINE免役測定裝置(R&DSystems,Inc.,MinneapolisMN),根據(jù)商家說明書分析如上制備的細(xì)胞核部分和包液部分的HIF-la。實(shí)施例5:體內(nèi)HIF調(diào)節(jié)基因的表達(dá)實(shí)驗(yàn)I從CharlesRiverLaboratories,Inc.(WilmingtonNtA)或Shnonsen，l加.(GilToy，CA)等單位獲取24只瑞士韋伯斯特公鼠(30-32g),喂入4ml/kg體積0.5%羧甲基纖維素(CMC;Sigma-Aldrich)(Omg/kg/天)或1.25%化合物A(25mg/ml,在0.5%CMC中)(100mg/kg)。喂入最后一個(gè)劑量4、8、16、24、48或72小時(shí)后，用異氟烷對(duì)動(dòng)物實(shí)施麻醉，從腹部靜脈抽取血樣.將血樣收集到MICROTAINER血清分離試管中(Becton-Dicki加on，F(xiàn)ranklinLakesNJ),在室溫下培養(yǎng)30分鐘，在4X:下以8O00rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，將細(xì)胞板再懸浮在RNALATER溶液中(Ambion),儲(chǔ)存在-80"C下.然后殺死這些大鼠，分離腎、肝、腦、肺和心臟中的組織樣本，并在-80TC下保存在RNALATER溶液(Ambion)中，用下述方法進(jìn)行RNA分離。從每個(gè)器官上切下一塊50mg的組織，加入875nlRLT緩沖液(RNEASY工具箱QiagenInc.,ValenciaCA),用轉(zhuǎn)子-定子POLYTRON均化器(Ki加matica,I加.，CincinnatiOH)對(duì)每塊組織均化約20秒。將勻漿進(jìn)行3分鐘微離心,使不溶物質(zhì)成粒,將上清液轉(zhuǎn)移到新試管中，用RNEASY工具箱(Qiagen)按照說明書分離RNA.將RNA洗提到80fd水中，用RIBOGREEN試劑(MolecularProbes,EugeneOR)測定其量。用DNA-FREE工具箱(AmbionInc.,AustinTX)按照說明書將基因組DNA從RNA中除去。在260和280nm處測定吸光率，從而確定RNA的純度和濃度?；蛘?，切下組織樣本后，在TRIZOL試劑(InvitrogenLifeTechnologies,CarlsbadCA)中用轉(zhuǎn)子-定子POLYTRON均化器(Kinematica)均化.將勻漿置于室溫下，加入0.2份體積的氯仿，劇烈挽拌樣本。室溫下培養(yǎng)混合物數(shù)分鐘，然后在4'C以12000g離心15分鐘，收集水相，加入0.5份體積的異丙醇，浪合樣本，室溫下培養(yǎng)IO分鐘，在4TC以12000g離心IO分鐘。除去上清液，用75"/nEtOH洗滌細(xì)胞板，在4X:以7500g離心5分鐘。然后用DNA-FREE工具箱(AmbionInc.，AustinTX)按照說明書將基因組DNA從RNA中除去，在260和280nm處測定吸光率，從而確定RNA的純度和濃度。在-20"下，在0.3M乙酸鈉(pH5.2)、50ng/ml肝糖和2.5份體積乙醉中沉淀RNA1小時(shí).離心樣本，用80%冷乙酵洗滌細(xì)胞板，千燥，用水再懸浮.利用T7-(dT)24作為第一股引物(Affymetrht,Inc.,SantaClaraCA),用SUPERSCRIPTCHOICE系統(tǒng)(Invitrogen)按照使用說明合成雙股cDNA,利用PHASELOCKGEL插件(Brinkman，I加.，WestburyNY),用25:24:1苯酚氯仿異戊醇萃取最后的cDNA*收集水相，用0.5體積的7.SM乙酸銨和2.5體積的乙醇沉淀cDNA。或者，用GENECHIP樣品清潔模塊(AEfymetrix)按照使用說明純化cDNA,利用BIOARRAYHighYieldRNA轉(zhuǎn)錄標(biāo)記工具箱(EnzoDiagnostices,I加.,FarmingdaleNY),按照使用說明在體外翻譯(IVT)反應(yīng)中由cDNA合成標(biāo)記了生物素的cWSIA.用GENECHIP樣品清潔模塊(Affymetrix)按照使用說明對(duì)最終標(biāo)記產(chǎn)品進(jìn)行純化和分片，將5fig探測試樣加入lOOjillx雜化緩沖液(lOOmMMES,lM[Na+]，20mMEDTA,0.01%Tween20)、100ng/ml青魚精子DNA、500jig/ml乙酸酯化BSA、0.03nM對(duì)照低B2(Affymetrix)和lxGENECHIP真核雜化對(duì)照(Affymetrix),由此制備雜化75"雞尾酒"。所述雞尾酒依次在99'C培養(yǎng)5分鐘和在45"C培養(yǎng)5分鐘，然后離心5分鐘.將Murine基因組U74AV2陣列(MG-U74AV2:Affymetrix)置于室溫下，然后加入lx雜化緩沖液，在45*0旋轉(zhuǎn)10分鐘，進(jìn)行預(yù)雜化。然后用80ixl雜化雞尾酒取代緩沖液，在451C下以60rp邁的轉(zhuǎn)速反向旋轉(zhuǎn)，將該陣列雜化16小時(shí)。雜化之后，用6xSSPE,0.1%Tween20對(duì)陣列洗滌一次，然后用R-藻紅蛋白-共軛鏈霉胍(分子探針，EugeneOR)、山羊抗鏈霉胍抗體(VectorLaboratories,BurlingameCA)和GENECHIPFluidicesStation400儀器(Affymetrix),按照商家的微-lvI協(xié)議(Affymetrix)進(jìn)行洗滌和沾污，用GENEARRY掃描儀(Affymetrix)和MicroarraySuite軟件(Affymetrix)分析陣列，MurineGenomeU74AV2陣列(Affymetrix)代表MouseUniGene數(shù)據(jù)庫74(國家生物技術(shù)信息中心，BethesdaMD)中所有序列(6000)(它們在功能上都己得到表征)和約6O00個(gè)未標(biāo)注表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)續(xù)。從圖5A可以看出，以肺為代表器官，用本發(fā)明化合物處理之后，給血管生長蛋白質(zhì)編碼的基因表達(dá)以同等方式增加。圖中所示轉(zhuǎn)錄方式包括VEGF-C、Flt-1/VEGF受體-1、腎臟髄質(zhì)素、內(nèi)皮質(zhì)素-1、血漿嗨原活化抑制劑(PAI)-1和Cyr61.隨著時(shí)間的變化，mRNA離開峰較早，24小時(shí)后恢復(fù)到對(duì)照水平，圖5B所示為兩個(gè)基因的具體表達(dá)-時(shí)間關(guān)系，這兩個(gè)基因是內(nèi)皮質(zhì)素-l和腎臟髄質(zhì)素，代表圖5A中的基因簇，在類似實(shí)驗(yàn)中，其他HIF調(diào)節(jié)基因的表達(dá)也能看到明顯增加，這些基因包括磷酸果糖激酶、烯醇酶1、乳酸脫復(fù)酶、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子1、?；鵆oA琉代酯痗、亞鐵血紅素氧化酶、鐵傳遞蛋白受體、IGFBP-1、nip3、nix和cyclinG3,從圖7A中可以看出，以腎為代表器官，用本發(fā)明化合物處理之后，給糖酵解酶編碼的基因表達(dá)以同等方式增加*圖中所示轉(zhuǎn)錄方式包括醛縮酶A、烯醇酶l、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子(GluT)-l和-3、GAPDH、己糖激酶-1和-2、乳酸脫氫酶A、磷酸果糖激酶-L和-C、磷酸甘油酸酯激酶-1和丙酮酸酯激酵-M.隨著時(shí)間的變化，mRNA離開峰校早，24小時(shí)后恢復(fù)到對(duì)照水平，圖78所示為兩個(gè)基因的具體具體表達(dá)-時(shí)間關(guān)系，這兩個(gè)基因是醛縮酶和磷酸果糖激酶，代表圖7A中的基因簇。實(shí)驗(yàn)n從Shnonsen,Inc.獲取12只瑞士韋伯斯特公鼠(30-32g)，喂入4ml/kg體積0.5%羧甲基纖維素(CMC:Sigma-Aldrich)(0mg/kg/天)或2.5%化合物B或E(25mg/ml，在0.5%CMC中)(200mg/kg)，每天2次，共喂2.5天(5個(gè)劑量)，喂入最后一個(gè)劑量4后，用異氟烷對(duì)動(dòng)物實(shí)施麻醉，從腹部靜脈抽取血樣，將血樣收集到MICROTAINER血清分離試管中(Becton-Dickins加)，在室溫下培養(yǎng)30分鐘，在4"下以S000ipm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，利用QUANTIKINE免役測定裝置(R&DSystems),根據(jù)商家說明書處理并分析血清部分的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá).然后殺死這些大鼠，分離約150mg肝和腎，并在-20X:下保存在RNALATER溶液(Ambion)中，用下述方法進(jìn)行RNA分離。將組織切片切成小塊，加入1.75mlRLT緩沖液(RNEASY工具箱Qiagen),用轉(zhuǎn)子-定子POLYTRON均化器(Kinematica，lnc.，CincinnatiOH)對(duì)每塊組織均化約20秒。對(duì)350nl勻漿進(jìn)行3分鐘微離心，使不溶物質(zhì)成粒，將上清液轉(zhuǎn)移到新試管中，用RNEASY工具箱(Qiagen)按照說明書分離RNA,將RNA洗提到80^1水中，用RIBOGREEN試劑(MolecularProbes,EugeneOR)測定其量。用DNA-FREE工具箱(Ambion)按照說明書將基因組DNA從RNA中除去，在260和280n邁處測定吸光率，從而確定RNA的純度和濃度。用1fiM無規(guī)六聚引物、|ig全RNA和OMNISCRIPT逆向轉(zhuǎn)錄酶(Qiagen)按照說明書合成cDNA.所得cDNA用四倍的水稀釋，使最終體積為lOOpl.用FASTSTARTDNAMASTERSYBRGREENI工具箱(RocheMolecularBiochemicals)和VEGF特異性引物，利用LIGHTCYCLE系統(tǒng)(RocheMolecularBiochemicals)按照使用說明通過定量PCR分析血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因表達(dá)的相對(duì)水平.在6分鐘內(nèi)將樣本加熱到94,然后在15秒內(nèi)轉(zhuǎn)到95，在5秒內(nèi)轉(zhuǎn)到60,在10秒內(nèi)轉(zhuǎn)到72，總共循環(huán)42次，VEGF特異性引物如下m-VEGF-FlGTTGCAAGGCGAGGCAGCTT(SEQIDNO:l)邊-VEGF-RlTGACGATGATGGCATGGTGGT(SEQIDNO:2)測定18S核醣體RNA基因表達(dá)的相對(duì)水平，作為對(duì)照.利用QUANTITECTSYBRGREENPCR工具箱(Qiagen)和18SrRNA特異性引物，用LIGHTCYCLER系統(tǒng)(RocheMolecularBiochemicals)按照使用說明定量測定PCR,在6分鐘內(nèi)將樣本加熱到94，然后在15秒內(nèi)轉(zhuǎn)到95，在5秒內(nèi)轉(zhuǎn)到60，在10秒內(nèi)轉(zhuǎn)到72,總共循環(huán)42次.核醣體RNA特異性引物如下，18S-大鼠-2BTAGGCACGGCGACTACCATCGA(SEQIDNO:3)18S-大鼠-2ACGGCGGCTTTGGTGACTCTAGAT(SEQIDNO:4)每一輪PCR都包括一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線和水空白，此外，每輪PCR完成之后，測定熔融曲線，以評(píng)價(jià)擴(kuò)大的專一性，VEGF基因表達(dá)根據(jù)該樣本的18S核糖體RNA77的表達(dá)水平校正。圖6A所示為用化合物E增強(qiáng)的腎中VEGF表達(dá)和肝與腎中化合物B增強(qiáng)的VEGF表達(dá)。從圖6B中可以看出，相對(duì)于未經(jīng)處理的對(duì)照動(dòng)物，施用最后一個(gè)劑量之后的2、5和20小時(shí)，用所述化合物處理的動(dòng)物血漿中VEGF水平明顯增加。實(shí)施例6:心臟局部缺血實(shí)驗(yàn)INwogu等(2O01;Circulation104:2216-2221)曾報(bào)道用本發(fā)明化合物治療心肌梗塞。雖然作者從所述化合物影響纖維癥的角度解釋了他們的結(jié)果，但本發(fā)明清楚顯示，對(duì)心臟功能帶來主要好處的是HIFa的穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)方法如Nwogu等所述(同上)，下面也將具體介紹。對(duì)70只成年Wistar雄鼠(200-250g)實(shí)施麻醉，使它們的左冠狀動(dòng)脈閉合，從而產(chǎn)生急性心肌梗塞(AMI),對(duì)9只動(dòng)物進(jìn)行相同的手術(shù)，但不捆扎冠狀動(dòng)脈。術(shù)后2448小時(shí)，將心電圖儀(ECG〉的電極接到爪子上，使15MHz直線探針(AcusonCorp.,MountainViewCA)接觸胸部，在中部乳突附近獲得短軸胸腔心回聲圖像(2DE)。將探針向頭部或尾部移動(dòng)，并改變角度，直到能清晰地檢測到左心室的心內(nèi)圖像，圖像用Sequoia超聲系統(tǒng)(Acuson)獲得.2DE上分級(jí)縮短小于20%和局部壁動(dòng)異常的動(dòng)物用化合物A(n-14)或媒介(ii-12)隨機(jī)處理，對(duì)照假樣本也用化合物A(n—)或媒介(n-5)隨機(jī)處理.在實(shí)驗(yàn)期間，每天給動(dòng)物單獨(dú)喂2次化合物A(50mg/kg)或媒介。周期測定藥物的血清水平，以確定在療動(dòng)物持續(xù)接受了足夠量的藥物，測定出來的水平足以抑制脯氨酰4-羥基瞎，代表是2-酮戊二酸雙加氧酶。每周收集系列2DE圖像，捕捉并保存三個(gè)短軸2DE數(shù)字夾，該數(shù)字夾包含5個(gè)或更多心臟收縮和舒張圖像.兩個(gè)不熟悉治療方法的觀察者進(jìn)行離線測定。測量時(shí)，放慢數(shù)字圖像，并在收縮和舒張端部定格，測定三個(gè)數(shù)字夾中每個(gè)數(shù)字夾的兩張牧縮和舒張圖像，直到獲得一致結(jié)果，然后求平均。收縮前壁(AWS)和舒張前壁(AWD)、收縮后壁(PWS)和舒張后壁(PWD)，以及左心室收縮端(LVESD)和舒張端(LVEDD)根據(jù)美國心回聲學(xué)學(xué)會(huì)(ASE)的引邊方法測定。為了保持連貫，測定在左心室從前中點(diǎn)到后中點(diǎn)之間進(jìn)行，隨機(jī)重復(fù)，以確?？芍貜?fù)性(復(fù)制率約為96%)。抬療4周之后，通過股靜脈灌注(l分鐘內(nèi)0.2ml)l(TM異丙腎上腺素之前和之后，在體內(nèi)進(jìn)行血液動(dòng)力測定，接著如下所述鍛煉并稱量心臟?；蛘撸瑢?duì)140只成年Wistar雄鼠(200-250g)實(shí)施麻醉，使它們的左冠狀動(dòng)脈閉合，從而產(chǎn)生急性心肌梗塞(AMI)。術(shù)后48小時(shí)得到2DE圖像，有顯著梗塞區(qū)域的動(dòng)物隨機(jī)用化合物A(n-34)或媒介(n-34)。在實(shí)驗(yàn)期間，每天給動(dòng)物單獨(dú)喂2次化合物A(50mg/kg)或媒介。周期測定藥物的血淸水平，以確定在療動(dòng)物持續(xù)接受了足夠量的藥物，測定出來的水平足以抑制脯氛酰4-羥基酶.對(duì)每組中的一半動(dòng)物測定中部乳突肌肉和頂部四室的2DE數(shù)字圖像，隔周一次，測滿8周。由兩個(gè)不熟悉治療方法的觀察者進(jìn)行離線測定.測量時(shí)，放慢數(shù)字圖像，并在收縮和舒張端部定格。在短軸和四個(gè)心室方向跟蹤兩三個(gè)心臟內(nèi)部表面，求平均值，測定左心室收縮和舒張時(shí)的面積、噴血分?jǐn)?shù)比例、各部分面積的變化、壁厚、二尖瓣峰E波速、大動(dòng)脈峰速和栓塞尺寸.治療10周后，在體內(nèi)進(jìn)行血液動(dòng)力測試，心臟如下所述進(jìn)行鍛煉和稱重。為了收集體內(nèi)血液動(dòng)力測試數(shù)據(jù)，對(duì)動(dòng)物實(shí)施麻醉，從周圍組織上切下右頸動(dòng)脈，用SPR-671超微壓力變換器(MillarInstruments,Inc.,HoustonTX)做成中空的結(jié)構(gòu)，然后將導(dǎo)液管插入左心室.建立平衡態(tài)后，記錄基準(zhǔn)心跳速率(HR)、產(chǎn)生的壓力(DP)、收縮指數(shù)(CI)、左心室收縮壓(SBP)、末期舒張壓(LVEDP)和壓力升降(分別是+dP/dt和-dP/dt)的最大速率。在血液動(dòng)力測定中，鍛煉并稱量心臟.將遠(yuǎn)離栓塞部位的結(jié)痂心肌、右心室和左心室肌肉切出小片，稱重.用Pal邁erini等(1985，JChromatogr339:285-92)的方法測定羥化脯氨酸和脯氨酸，不同的是用1^吖丁啶-2-羧酸^811-Aldrich)代替3,4^脫氨脯氨酸作為內(nèi)標(biāo)，如果將本發(fā)明化合物施用在心肌梗塞患者身上，則可以看到死亡率立即下降.從圖8可以看出，心臟受傷后經(jīng)過治療的組中沒有馬上看到病例死亡，而且8周之后治療組仍有超過卯％的的病例存活。形成對(duì)照的是，未治療組中只有約60%的病例在此期間存活。從統(tǒng)計(jì)上看，與未經(jīng)治療的組相比，治療組在2-8周之內(nèi)的存話率明顯提髙伊<0.05),死亡率相對(duì)下降77%。與未治療組相比，治療組的心臟參數(shù)也得到改善，表l表明，治療組的左心室舒張末期的直徑(LVEDD)沒有增加，而未治療組同期測定的LVEDD和左心室收縮末期的直徑(LVESD)增加。治療1周之后，治療組和未治療組的心臟擴(kuò)大統(tǒng)計(jì)結(jié)果明顯不同。表l左心室舒張末期的直徑白勺變化<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>表中數(shù)值表示平均值i標(biāo)準(zhǔn)偏差，圖9A和9B所示為LVESD和LVEDD各自隨時(shí)間變化的圖線。三組中左心室舒張末期的和收縮直徑在任意時(shí)刻都相近。在圖IOA中，在第2周到第8周，經(jīng)過治療的動(dòng)物與未經(jīng)治療對(duì)照組相比，左心室噴血分?jǐn)?shù)(LVEF)在統(tǒng)計(jì)結(jié)果上明顯提高，在任意時(shí)刻，兩個(gè)組的LVEF均為33%.在第4周到第6周，未治療對(duì)照組的LVEF明顯提髙，這反映出該組成員的死亡率髙，治療組在心肌收縮過程中的部分縮短也得到改善，表3從統(tǒng)計(jì)上表明，在1-4周之內(nèi)，治療組與未治療組相比，部分縮短明顯改善。表3部分縮短的變化周數(shù)治療-MI(W)未治療-Mi(y。)偽樣(％)010±0.812±134±3117±113±133±3220±215±233±2321±212±135±2421±316±236±1表中數(shù)值表示平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，此外，從圖IOB中可以看出，治療組的部分縮短從起點(diǎn)的10%增加到第2周時(shí)的20%,相對(duì)于起點(diǎn)增加了79%。未治療組和偽處理對(duì)照組在4周時(shí)間里保持不變。因心臟缺血引起損傷后，治療組的心臟收縮和舒張能力也提髙。表4A從統(tǒng)計(jì)上顯示，治療4周之后，治療組與未治療組相比，壓力隨時(shí)間的負(fù)變化(-dP/dt)有明顯差異，其中-dP/dt衡量的是心臟收縮之后的舒張能力，如表4A和圖11所示,治療組與未治療組相比，受異丙腎上腺素刺激后，心臟的壓力隨時(shí)間的正變化(+dP/dt)在統(tǒng)計(jì)上存在明顯差異，其中+dP/dt衡量的是心臟收縮的能力，表4A患MI四周后血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)治療-MI未治療-MI偽樣收縮BP(mmHg)基線143±7142±3144±5異丙腎上腺素130±9123±7197±3發(fā)展壓力(mmHg)基線133±6133±3135±6異丙腎上腺素121±9115±8173±3+dP/dt(mmHg/sec)基線9477±5818642±2099925±1194異丙腎上腺素16830±119513832±109721515±1074-dP/dt(ramHg/sec)基線9978±8278009±42611578±622異丙腎上腺素9234±703柳4±62211549±10742表中數(shù)值表示平均值i標(biāo)準(zhǔn)偏差。表4B從統(tǒng)計(jì)上表明，治療10周后，治療組與未治療組相比，+dP/dt和-dP/dt都存在明顯差異。表4B患MI四周后血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>表中數(shù)值表示平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差,治療組與未治療組相比，在第io周的改進(jìn)壓力和收縮壓力也有明顯改善。雖然人們認(rèn)識(shí)到從初始梗塞或創(chuàng)傷恢復(fù)要在壞死區(qū)沉積結(jié)締組織，但就形成疤痕而言，本發(fā)明在治療上沒有表現(xiàn)出負(fù)面影響。相反，從表5A中統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，4周后疤痕和無梗死組織中的膠原質(zhì)沉積沒有明顯改變，這表明頭四周里心臟功能的改巷與膠原質(zhì)的沉積無關(guān).<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>表中數(shù)值表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。但是，從表5B中可以看出，治療組與未治療組在IO周之后相比，無梗塞心肌和疤痕組織中郊原質(zhì)含量在統(tǒng)計(jì)上有明顯的絕對(duì)下降，這表明本發(fā)明方法的確能在更長的吋間里減少活性心肌的纖維化.圖5B患MIIO周后心臟中的膠原質(zhì)含量<table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table>表中數(shù)值表示平均值i標(biāo)準(zhǔn)偏差。實(shí)驗(yàn)II對(duì)4-5周大的Wistar雄鼠(10(M10g)進(jìn)行常規(guī)喂養(yǎng)，將其置于12小時(shí)晝-夜周期中。如下將這些動(dòng)物隨機(jī)分成三個(gè)治療組(1)假手術(shù)動(dòng)物(n-12),(2)心肌梗塞對(duì)照組(n-25)和(3)用化合物B治療心肌梗塞的組(11=25)*在進(jìn)行手術(shù)之前，對(duì)動(dòng)物治療兩天，手術(shù)后繼續(xù)治療一周，治療過程中，每天給動(dòng)物喂服2次0.5%CMC(Sigma-Aldrich)(對(duì)照)或50mg/kg溶于0,5%CMC中的化合物B。動(dòng)物切開喉管后，在人工供氣下對(duì)左前下行冠狀動(dòng)脈進(jìn)行捆扎.術(shù)后1周殺死動(dòng)物，做心臟回聲測試.客觀地測定部分縮短、舒張末期的直徑和收縮末期的直徑。從圖12A可以看出，部分縮短從假手術(shù)動(dòng)物的51W下降到未治療MI參照組的29%。用化合物治療后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與未治療對(duì)照組相比，部分縮短有明顯提髙(p《.05:單向ANOVA/Turey實(shí)驗(yàn))，達(dá)到41%,類似地，圖12B從統(tǒng)計(jì)上顯示，經(jīng)過治療的動(dòng)物與未治療MI的對(duì)照組相比，左心室舒張末期的(LVEDD)和收縮末期的(LVESD)直徑有明顯改善(p分別小于0.005和0.001;單向ANOVA/Turey實(shí)驗(yàn))。與做過假手術(shù)的動(dòng)物相比，用化合物治療的動(dòng)物在左心室收縮末期的直徑?jīng)]有增加，而舒張末期的直徑增加18%。但是，未經(jīng)治療的對(duì)照組的LVESD和LVEDD分別增加15%和65%。實(shí)施例7:肝局部缺血Bickel等(1998;Hcpatology28:404-411)曾報(bào)道用本發(fā)明化合物治療肝中毒性缺血損傷。盡管作者從化合物對(duì)纖維化的效果這個(gè)角度解釋了他們的結(jié)果，但他們承認(rèn)，對(duì)肝功能指標(biāo)，包括膽紅素的血清水平、膽酸和堿性磷酸酶的良好效果不能直接歸因于纖維化的減少.Bicke傳(同上)描述了中毒性低氧肝損傷的模型.簡單說,Wistar雄鼠(212.！3208)要么通過喂服接受lml/kg溶于橄槐油的四氣化碳(CCl4)(l:l),每周兩次，總共9周(n-l鄰)，要么不接受治療(對(duì)照n-lO)。此外，一組接受CCU(n-60)的動(dòng)物同時(shí)接受化合物P。所述化合物通過腹膜注射施用，每天2次，劑量為60mg化合物/2ml鹽水/kg體重。9周后，殺死動(dòng)物，稱肝的重量.用商用工具箱測定血清中的膽紅素、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、清蛋白和總膽酸。從表6可以看出(Bickel等，同上，表2)，肝受損后體重(BW)明顯下降，但肝本身重量沒有明顯變化(未示出)。<table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table>表中數(shù)值表示平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差.從統(tǒng)計(jì)上看，肝損傷也對(duì)使肝功骼明顯下降，這從以下指標(biāo)的測定可以看出來膽紅素中的血清水平(BR)、總膽酸(tBA)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和堿性磷酸酶(AP),分別增加117%、856%、201%和72%.但是，用本發(fā)明化合物(CPD)治療從統(tǒng)計(jì)上看可明顯改善肝功能。治療組與未治療組相比，血清水平BR、tBA、ALT和AP分別下降64"/。、65%、43%和65%。肝功能的改善可歸因于本發(fā)明方法對(duì)HIFa的穩(wěn)定作用，實(shí)施例8:腎缺血再灌注損傷Nemoto等描述了缺血性急性腎袞竭的模型(2001,KidneyInt59:246-251)。簡單說來，通過喂服0.5c/o羧甲基纖維素(CMC:Sigma-Aldrich)或1.5%懸浮在CMC中的化合物B對(duì)Sprague-Dawley雄鼠(200-250g)進(jìn)行治療，劑量為4ml/kg/d。先對(duì)大鼠進(jìn)行4天連續(xù)預(yù)治療(第-3天至第0天)。在第0天進(jìn)行第4次，也就是最后一個(gè)劑量的喂服后數(shù)小時(shí)，進(jìn)行腎缺血再灌注損傷(IRI)實(shí)驗(yàn)。將動(dòng)物分成四組(l)用媒介預(yù)處理并進(jìn)行模擬手術(shù)；(2)用化合物B預(yù)治療并進(jìn)行模擬手術(shù)；(3)用媒介預(yù)處理并進(jìn)行IRI手術(shù)；(4)用化合物B預(yù)治療并進(jìn)行IRI手術(shù)。用異氟烷對(duì)動(dòng)物實(shí)施麻醉，在腹部中線切一道口子，直接切割腎蒂。用血管夾將右腎蒂夾住45分鐘，同時(shí)切除左腎。每次閉合后，將夾子松開45分鐘，通過腎顏色的變化可以看出再灌注，溫度維持恒定，含有Buprenex止痛劑的溫鹽水(0.5%體重)直接灌入腹部，然后縫合切口.監(jiān)測動(dòng)物體重和死亡率，從尾部靜脈抽取血樣，血清化學(xué)組成和CBC送IDEXX獸醫(yī)服務(wù)處(WestSacramentoCA)測定。數(shù)據(jù)記錄為平均值士SE，括號(hào)內(nèi)數(shù)字為動(dòng)物數(shù).用單向偏差分析(ANOVA,SIGMASTAT)和Student-Newman-Keuls方法比較四組樣本在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的數(shù)據(jù)，P《0.05表示相差顯著，如圖13所示，用化合物處理可預(yù)防缺血再灌注損傷引起的早期死亡.此外，在第3天和第7天，腎IRI顯著提髙了血清脲氮(BUN),而用化合物治療則使IRI引起的BUN增加程度明顯下降，其中BUN是腎功能好壞的一個(gè)量度(圖14A),此外，在第3、7和14天，腎IRI能顯著提高血清膽固酵，而用化合物治療則完全制止了IRI引起的血清膽固酵的增加(圖14B),盡管原因尚在探索之中，腎膽固醇上升是腎缺血再灌注損傷的自然反映，(Zagcr等(2001)AmJPathol159:743-752:Appel(W91)Kidneyhit39:169-183;Abdel-Gayoum等(1999)HumExpToxicol18:454-459)實(shí)施例9:對(duì)慢性創(chuàng)傷中肉芽組織形成的促進(jìn)治療慢性創(chuàng)傷的能力采用Morris等(1997，PlastReconstrSurg100:674-681)和Marcus等(2000,PlastReconstrSurg105:1591-1599)介紹的兔子皮質(zhì)增生結(jié)疤模型研究。簡單說來，對(duì)雌性新西蘭白兔(n-12;3-6個(gè)月大)實(shí)施麻醉，通過除去軟骨膜，在每只耳朵的腹惻表面造成4個(gè)7mm長的皮膚浪瘍創(chuàng)傷。治療創(chuàng)傷，并用TEGADERM半封閉聚氣酯紗布(3MHealthCare,St,PaulMN)包扎。第1周，局部涂敷0.5%或l外(w/v)混合在0.5%(w/v)CARBOPOL971PNF水溶膠(pH6.5;NoveonInc.，aevelandOH)中的化合物V前體藥物[pV],以治療創(chuàng)傷，每天一次.進(jìn)行體外測試時(shí)，發(fā)現(xiàn)凝膠在2小時(shí)內(nèi)釋放50。/。的藥物，在4小時(shí)內(nèi)釋放95%的藥物。在治療的耳朵要么接受低劑量治理(0.5%化合物)，要么接受高劑量治療(1%化合物)，而對(duì)照耳朵只接受凝膠，在受傷時(shí)包扎的紗布上開一個(gè)洞，治療用的藥物從洞中送入，避免每天揭紗布引起傷口周圍區(qū)域感染。然后在洞上蓋一小塊紗布，防止傷口干燥。太干或受感染的傷口要排除在研究之外.受傷7天和12天后，打開并切開傷口，用蘇木精薯紅沾染，以測定肉芽組織的形成和傷口長皮的情況。不熟悉治療方法的觀察者借助帶刻度的目鏡十字線收集創(chuàng)傷拍療定量參數(shù)。用Student的t-實(shí)驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，比較治療和未治療樣本。P<0.05表示相差顯著.對(duì)創(chuàng)傷測定了肉芽組織的形成和傷口長皮的情況測定了對(duì)缺血和低氧敏感的創(chuàng)傷抬療參數(shù)(Corral等(1999)ArchSurg134:200-205;Ahn和Mustoe(19卯)AnnPlastSurg24:17-23)。如圖15A所示，經(jīng)過治療的創(chuàng)傷與未經(jīng)治療的創(chuàng)傷相比，可以觀察到肉芽組織區(qū)域的增加。從圖15B中可以看出，經(jīng)過治療與未經(jīng)過治療的動(dòng)物中，峰-峰距離沒有區(qū)別，峰-峰值是肉芽組織覆蓋傷口的指標(biāo)，因此，可用本發(fā)明方法增加傷口中血管和肉芽組織的形成，如慢性創(chuàng)傷和潰瘍。實(shí)施例10<篩選實(shí)驗(yàn)?zāi)芤种艸IF專一性脯氨酰羥化酶活性，從而穩(wěn)定HIFot的化合物可利用下述實(shí)驗(yàn)方法鑒定和表征.從包含4mg/mlBSA、0.1MTrisHC1(pH7.2)、2mM抗壞血酸鹽、抑一硫酸亞鐵、0.2111142-酮戊二酸、600單位/ml過氧化氫酶以及任選lOO(iMHIFa肽的反應(yīng)混合物中取出50fil等分液，與50ilHeLa細(xì)胞萃取物或純化HIF脯氨敢羥化酶混合，在37"C培養(yǎng)L5小時(shí)，然后加入50jil鏈霉胍珠，在4t和攪拌下培養(yǎng)所得混合物l小時(shí)。將混合物轉(zhuǎn)移到試管中，低速離心，使珠子形成小球。用0.5-1加120111\!181:&117.2)洗滌珠子3次，用5^1溶于20mMTrisHC1(pH72)中的2mM生物素將肽從珠子中洗提出來。離心試管，使樹脂形成小球，除去40-50nl上清液，加入等量乙酰腈.或者，使肽附著到甲氧基香豆素上，它是對(duì)pH不敏感的熒光團(tuán)。所述熒光團(tuán)可提供靈敏度和專一性，從而促進(jìn)對(duì)粗細(xì)胞液的檢測。用于篩選實(shí)驗(yàn)的示例性HIF肽可包含[甲氧基香豆素]-DLDLEALAPYIPADDDFQL-酰胺(SEQIDNO:5)。然后用反相HPLC通過C18色譜柱分離非羥基化和羥基化肽，并用214nmUV檢測。本領(lǐng)域技術(shù)人員從前面的介紹中不難理解，除了這雖所描述的實(shí)施方式外,可以對(duì)本發(fā)明作各種修改，這些修改包含在本發(fā)明附屬權(quán)利要求范圍之內(nèi)。這里引用的所有文獻(xiàn)都以其整體內(nèi)容作為參考。序列表110120130140141V.古恩澤勒-普卡爾(Guenzler-Pukall,Volkmar〉T.B.尼矢(Neff,ThomasB.)Q.王(Wang,Qingjian)M.阿蘭德(Arend,Michael)L.A.弗利平(Flippin,LeeA.)A.梅萊克霍夫(Melekhov,Alexey)低氧誘導(dǎo)因子(HIF)a的穩(wěn)定化FP0S00PCTPCT/US02/388672002-12-06150>US60/337,082151>2001-12-06150>USSO/359,683151>2002-02-25150>US60/349,659151>2002-01-16150>USSO/386,488151>2002-06-05ISO170Patentlnversion3.221021121221340020DNA小鼠(Musmusculus)gttgcaaggcgaggcagctt20<210><211><212><213><400>tgacgatgat<210><211><212><:213><400>taggcaicggc<210><211><212:><213><400>cggcggcttt221DNA小鼠(Musmusculus)2ggcatggtggt22DNA大鼠(Rattusnorvegicus)gactaccatcga423DNA大鼠(Rattusnorvegicus)4ggtgactctagat212223<210>5<211>19<212>PRT<213>人工的<220><223>合成肽<400>5AspLeuAspLeuGluAlaLeuAlaProTyrlieProAlaAspAspAsp151015PheGinLeu權(quán)利要求1.一種能抑制HIF發(fā)生羥基化反應(yīng)的化合物的用途，用于制備穩(wěn)定治療對(duì)象的低氧誘導(dǎo)因子的α亞基(HIF-α)的藥物，其特征在于，所述化合物選自雜環(huán)羧酰胺或一由雜環(huán)羧酰胺衍生的生理學(xué)上有活性的藥用鹽或前藥。2.—種能抑制HIF發(fā)生羥基化反應(yīng)的化合物的用途，用于制備穩(wěn)定治療對(duì)象的低氧誘導(dǎo)因子的a亞基(HIF-a)的藥物，其特征在于，所述化合物選自吡啶羧酰胺或一由吡啶羧酰胺衍生的生理學(xué)上有活性的藥用鹽或前藥。3.如權(quán)利要求2所述的用途，其中所述吡啶羧酰胺是一吡啶-2-羧酰胺。4.如權(quán)利要求2所述的用途，其中所述吡啶羧酰胺是一吡啶-2-羰基-氨基-乙酸。5.如權(quán)利要求2所述的用途，其中所述吡啶羧酰胺選自下述化學(xué)式(I)A是l，2-亞芳基，1，3-亞芳基，1，4-亞芳基；或(C1-C4)-亞烴基，(任選為一或二個(gè)鹵素，氰基，硝基，三氟甲基取代)，(Cl-C6)-垸基，(C1-C6)-羥烷基，(C1-C6)-烷氧基，-0-[CH2]x-CfH(2f+l-g)Halg，(C1-C6)-氟垸氧基，(Cl-C8)-氟烯氧基，(C1-C8)-氟炔氧基，-0CF2C1，-0-CF2-CHFC1;(Cl-C6)-烷基巰基，(Cl-C6)-烷基亞硫?；?C1-C6)-烴基磺酰基，(Cl-C6)-烴基羰基，(CI-C6)-烷氧基羰基，氨基甲酰，N-(C1-C4)-垸基氨基甲?；?，N，N-二-(C1-C4)-垸基氨基甲酰基，(C1-C6)-烷基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)垸基，苯基，苯甲基，苯氧基，芐氧基，苯胺基，N-甲基苯胺基，苯氫硫基，苯磺酰基，苯亞硫?；?，氨磺?；琋-(Cl-C4)-垸基氨磺?；琋,N-二-(Cl-C4)-垸基氨磺?；?或以一(C6-C12)-芳氧基代替，(C7-C11)-芳烷氧基，(C6-C12)-芳香基，(C7-C11)-芳垸基自由基(在芳基部分中具有1-5個(gè)相同的或不同的取代基，所述取代基選自鹵素，氰基，硝基，三氟甲基)，(Cl-C6)-烷基，(Cl-C6)-烷氧基，-0-[CH2]x-CfH(2f+l-g)Halg，-0CF2C1,-0-CF2-CHFC1，(CI-C6)-烷基巰基，(C1-C6)-烷基亞硫酰基，(Cl-C6)-烴基磺?；?Cl-C6)-烴基羰基，(Cl-C6)-烷氧基羰基，氨基甲酰，N-(C1-C4)-烷基氨基甲酰基，N，N-二-(C1-C4)-垸基氨基甲?；?，(Cl-C6)-垸基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基，氨磺?；?，N-(C1-C4)-垸基氨磺酰基，N，N-二-(C1-C4)-烷基氨磺?；?或者A為-CR5R6，R5和R6各自獨(dú)立地選自氫，(Cl-C6)-烷基，(C3-C7)-環(huán)烷基，芳香基，或者a氨基酸的a-碳原子的取代基，其中氨基酸是天然L-氨基酸或其D型異構(gòu)體；B是-C02H，-NH2,-NHS02CF3，四唑基，咪唑基，3-羥異惡唑基，-CONHCOR'''，-CONHSOR'''，C0NHS02R'''，其中R'''是芳香基，雜芳基，(C3-C7)-環(huán)烷基，或(C1-C4)-烷基，任選地被(C6-C12)-芳香基單替代，雜芳基，0H,SH,(Cl-C4)-垸基，(Cl-C4)-烷氧基，(C1-C4)-硫代垸基，(CI-C4)-亞磺?；?，(Cl-C4)-磺?；?，CF3，Cl,Br，F(xiàn)，I，N02,-C00H，(C2-C5)-烷氧基羰基，NH2，單-(CI-C4-烷基)-氨基，二-(C1-C4-烷基)-氨基，或(Cl-C4)-全氟代烷基;或者B是C02-G羧基而其中G是一酒精G-0H的自由基，而其中G選自(Cl-C20)-烷基，(C3-C8)環(huán)垸基，(C2-C20)-烯基，(C3-C8)-環(huán)烯基，視黃基，(C2-C20)-炔基，(C4-C20)-鏈多烯基，其中所述烯基，環(huán)烯基，炔基，和鏈多烯基包含一個(gè)或更多的多鍵；(C6-C16)-碳環(huán)芳基，(C7-C16)-碳環(huán)芳垸基，雜芳基，或雜芳烷基，其中一雜芳基或一雜芳烷基的雜芳基部分包含5或6環(huán)原子；和其中G的自由基定義是可以替代自一或更多羥基，鹵素，氰基，三氟甲基，硝基，羧基，(Cl-C12)-垸基，(C3-C8)-環(huán)垸基，(C5-C8)-環(huán)烯基，(C6-C12)-芳香基，(C7-C16)-芳烷基，(C2-C12)-烯基，(C2-C12)-炔基，(Cl-C12)-垸氧基，(C1-C12)-垸氧基(C1-C12)-烷基，(Cl-C12)-烷氧基-(C1-C12)-垸氧基，(C6-C12)-芳氧基，(C7-C16)-芳烷氧基，(Cl-C8)-羥院基，-0-[CH2]x-CfH(2f+l-g)-Fg，-0CF2C1，-0CF2-CHFC1，(CI-C12)-烴基羰基，(C3-C8)-環(huán)烴基羰基，(C6-C12)-芳基羰基，(C7-C16)-芳烷基羰基，肉桂酰，(C2-C12)-烯基羰基，(C2-C12)-炔基羰基，(Cl-C12)-烷氧基羰基，(C1-C12)-垸氧基(C1-C12)-垸氧基羰基，(C6-C12)-芳氧基羰基，(C7-C16)-芳烷氧基羰基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基羰基，(C2-C12)-烯氧基羰基，(C2-C12)-炔氧基羰基，酰氧基，(Cl-C12)-垸氧基羰基氧基，(C1-C12)-烷氧基(Cl-C12)-烷氧基羰基氧基，(C6-C12)-芳氧基羰基氧基，(C7-C16)芳烷氧基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)垸氧基羰基氧基，(C2-C12)-烯氧基羰基氧基，(C2-C12)-炔氧基羰基氧基，氨基甲酰，N-(Cl-C12)-烷基氨基甲?；?，N.N-二-(Cl-C12)-烷基氨基甲?；琋-(C3-C8)-環(huán)垸基-氨基甲酰，N-(C6-C16)-芳基氨基甲酰，N-(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰，N-(C1-C10)-垸基-N-(C6-C16)_芳基氨基甲酰，N-(C1-C10)-烷基-N-(C7-C16)-芳垸基氨基甲酰，N-((C1-C10)-烷氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-((C6-C12)-芳氧基(C1-C10)烷基)-氨基甲酰，N-((C7-C16)-芳垸氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-(C1-C10)-垸基-N-((C1-C10)-烷氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-(C1-C10)-烷基-N-((C6-C16)-芳氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-(CI-C10)-垸基-N-((C7-C16)-芳烷氧基(C1-C10)-垸基)-氨基甲酰，氨基甲酰氧基，N-(Cl-C12)-垸基氨基甲酰氧基，N.N-二-(Cl-C12)-烷基氨基甲酰氧基，N-(C3-C8)-環(huán)垸基氨基甲酰氧基，N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基，N-(C7-C16)-芳氧基氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-垸基-N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基，N(C1-C10)-烷基-N-(C7-C16)-芳氧基氨基甲酰氧基，N-((C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基，N-((C6-C12)-芳氧基(CI-C10)-垸基)-氨基甲酰氧基，N-((C7-C16)-芳垸氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-烷基-N-((C1-ClO)-垸氧基(Cl-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-垸基-N-((C6-C12)-芳氧基(C1-C10)-垸基)-氨基甲酰氧基，N-(Cl-C10)-垸基-N-((C7-C16)-芳烷氧基(Cl-C10)-垸基)-氨基甲酰氧基，氨基，(Cl-C12)-烷基氨基，二-(Cl-C12)-烷基氨基，(C3-C8)-環(huán)垸基氨基，(C2-C12)-烯基氨基，(C2-C12)-炔基氨基，N-(C6-C12)-芳基氨基，N-(C-Cll)-芳垸基氨基，N-烷基-芳垸基氨基，N-烷基-芳基氨基，(Cl-C12)-垸氧基氨基，(Cl-C12)-垸氧基-N-(Cl-C10)-烷基氨基，(Cl-C12)-烷基羰基氨基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰基氨基，(C6-C12)芳基羰基氨基，(C7-C16)-芳垸基羰基氨基，(C1-C12)-烴基羰基-N-(C1-C10)-烷基氨基，(C3-C8)-環(huán)烴基羰基-N-(CI-C10)-烷基氨基，(C6-ci2)-芳基羰基-N-(ci-cio)垸基氨基，0:7-(:11)-芳烷基羰基^-(C1-C10)-垸基氨基，(C1-C12)-垸基羰基氨基(C1-C8)-垸基，(C3-C8)-環(huán)垸基羰基氨基(C1-C8)垸基，(C6-C12)-芳基羰基氨基(Cl-C8)-烷基，(C7-C12)-芳垸基羰基氨基(C1-C8)-垸基，胺基(C1-C10)-垸基，N-(Cl-C10)垸基氨基(C1-C10)-烷基，N.N-二-(C1-C10)-烷基氨基(C1-C10)-烷基，(C3-C8)環(huán)烷基氨基(Cl-C10)-烷基，(C1-C12)-烷基巰基，(Cl-C12)-烷基亞硫?；?，(Cl-C12)-烴基磺?；?C6-C16)-芳基巰基，(C6-C16)-芳基亞硫酰基，(C6-C12)-芳基硫?；?，(C7-C16)-芳垸基巰基，(C7-C16)-芳垸基亞硫?；?C7-C16)-芳垸基硫?；?，氨磺?；?，N-(Cl-C10)-烷基氨磺?；?，N.N-di(Cl-C10)-烷基氨磺?；?，(C3-C8)-環(huán)烷基氨磺酰基，N-(C6_C12)-垸基氨磺?；琋-(C7-C16)-芳烷基氨磺?；琋-(C1-C10)-垸基-N-(C6-C12)-芳基氨磺?；?，N-(Cl-C10)-垸基-N-(C7-C16)-芳垸基氨磺酰基，(CI-C10)-烷基磺酰胺基，N-((C1-C10)-烷基)-(Cl-C10)-烷基磺酰胺基，(C7-C16)-芳烷基磺酰胺基，或N-((C1-C10)-垸基-(C7-C16)-芳烷基磺酰胺基;其中芳基或包含一芳基部份的自由基，可選自芳基上替代自以1-5個(gè)相同的或不同的羥基，鹵素，氰基，三氟甲基，硝基，羧基，(C1-C12)-烷基，(C3-C8)-環(huán)垸基，(C6-C12)-芳香基，(C7-C16)-芳垸基，(Cl-C12)-烷氧基，(C1-C12)-烷氧基(C1-C12)垸基，(Cl-C12)-垸氧基(C1C12)垸氧基，(C6-C12)-芳氧基，(C7-C16)-芳垸氧基，(Cl-C8)-羥垸基，(CI-C12)-烴基羰基，(C3-C8)-環(huán)烷基-羰基，(C6-C12)-芳基羰基，(c7-ci6)芳烷基羰基，(ci-ci2)-垸氧基羰基，((:1-(:12)-烷氧基((;1-C12)-烷氧基羰基，(C6-C12)-芳氧基羰基，(C7-C16)-芳烷氧基羰基，(C3-C8)-環(huán)垸氧基羰基，(C2-C12)-烯氧基羰基，(C2-C12)-炔氧基羰基，(Cl-C12)-垸基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰基氧基，(C6-C12)-芳基羰基氧基，(C7-C16)-芳垸基羰基氧基，肉桂酰氧基，(C2-C12)-烯基羰基氧基，(C2-C12)-炔基羰基氧基，(Cl-C12)-烷氧基羰基氧基，(Q-C12)-垸氧基(Cl-C12)-烷氧基羰基氧基，(C6-C12)-芳氧基羰基氧基，(C7-C16)-芳烷氧基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基羰基氧基，(C2-C12)-烯氧基羰基氧基，(C2-C12)-炔氧基羰基氧基，氨基甲酰，N-(Cl-C12)-烷基氨基甲?；?，N.N-二-(Cl-C12)-烷基氨基甲?；?，N-(C3-C8)-環(huán)垸基氨基甲酰基，N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰，N-(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰，N-(CI-CIO)-垸基-N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰，N-(C1-C10)-烷基-N-(C7-C16)-芳垸基氨基甲酰，N-((C1-C10)-烷氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-((C6-C12)-芳氧基(Cl-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-((C7-C16)-芳烷氧基(Cl-C10)-垸基)-氨基甲酰，N-(C1-C10)-垸基-N-((C1-C10)-烷氧基(C1-C10)_垸基)-氨基甲酰，N-(Q-C10)-烷基-N-((C6-C12)_芳氧基(CI-C10)-垸基)-氨基甲酰，N-(Cl-C10)-垸基-N-((C7-C16)-芳烷氧基(C1-C10)-垸基)-氨基甲酰，氨基甲酰氧基，N-(Cl-C12)-垸基氨基甲酰氧基，N.N-二-(Cl-C12)-烷基氨基甲酰氧基，N-(C3-C8)-環(huán)烷基氨基甲酰氧基，N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基，N-(C7-C16)-芳氧基氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-烷基-N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基，N(CI-C10)-垸基-N-(C7-C16)-芳氧基氨基甲酰氧基，N-((Cl-C10)-垸基)-氨基甲酰氧基，N-((C6-C12)-芳氧基(CI-C10)-垸基)-氨基甲酰氧基，N-((C7-C16)-芳烷氧基(Cl-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基，N-(Cl-C10)-烷基-N-((C1-C10)-垸氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基，N-(Cl-C10)-烷基-N-((C6-C12)-芳氧基(Cl-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-垸基-N-((C7-C16)-芳烷氧基(C1-C10)-垸基)-氨基甲酰氧基，氨基，(Cl-C12)-垸基氨基，二-(Cl-C12)-烷基氨基，(C3-C8)-環(huán)烷基氨基，(C3-C12)-烯基氨基，(C3-C12)-炔基氨基，N-(C6-C12)-芳基氨基，N-(C7-C11)-芳烷基氨基，N-垸基芳垸基氨基，N-垸基芳基氨基，(C1-C12)-垸氧基氨基，(CI-C12)-烷氧基-N-(Cl-C10)-垸基氨基，(Cl-C12)-烷基羰基氨基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰基氨基，(C6-C12)-芳基羰基氨基，(C7-C16)-烷基羰基氨基，(Cl-C12)-烴基羰基-N-(C1-C10)-垸基氨基，(C3-C8)-環(huán)烴基羰基-N-(C1-C10)-烷基氨基，(C6-C12)-芳基羰基-N-(C1-C10)-烷基氨基，(C7-C11)-芳烷基羰基-N-(Cl-C10)-垸基氨基，(Cl-C12)-烷基羰基氨基(C1-C8)-垸基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰基氨基(CI-C8)-烷基，(C6-C12)-芳基羰基氨基(CI-C8)-垸基，(C7-C16)-芳垸基羰基氨基(C1-C8)-垸基，胺基(C1-C10)-垸基，N-(C1-C10)-烷基氨基(CI-C10)烷基，N.N-二-(Cl-C10)-烷基氨基(C1-C10)-垸基，(C3-C8)-環(huán)烷基氨基(C1-C10)-烷基，(Cl-C12)-烷基巰基，(C1-C12)-垸基亞硫?；?，(Cl-C12)-烴基磺酰基，(C6-C12)-芳基巰基，(C6-C12)-芳基亞硫?；?C6-C12)-芳基硫?；?C7-C16)-芳烷基巰基，(C7-C16)-芳烷基亞硫酰基，或(C7-C16)-芳烷基硫?；?；X是O;Q是O，S，NR'，或一化學(xué)鍵；其中，如果Q是化學(xué)鍵，則R4是鹵素，腈，或三氟甲基；或者，如果Q是O，S，或NR'，則R4是氫，(Cl-C10)-烷基，(C2-C10)-烯基，(C2-C10)-炔基，其中烯基或炔基自由基包含一個(gè)或二個(gè)C-C多鍵；具有化學(xué)式-[CH2]x-CfH(2f+l-g)-Fg的未取代氟垸基，(C1-C8)-烷氧基(C1-C6)-垸基，(C1-C6)-垸氧基-(C1-C4)-烷氧基(C1-C4)-烷基，芳基，雜芳基，(C7-Cll)-芳烷基，或具有化學(xué)式的基團(tuán)Z-[CH2]v-w-[CH2]t-E(Z)其中，E是雜芳基，(C3-C8)-環(huán)垸基或具有式F所示化學(xué)式的苯基(F)R7，R8，R9，R10和Rll可以相同或不同，可以是氫，鹵素，氰基，硝基，三氟甲基，(C1-C6)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基，-0_[CH2]X-CfH(2f+l-g)-Fg，-0CF2-Cl，-0-CF2-CHFC1，(CI-C6)-烷基巰基，(C1-C6)-羥烷基，(Cl-C6)-烷氧基-(C1-C6)-垸氧基，(Cl-C6)-烷氧基(Cl-CW-烷基，(Cl-C6)-垸基亞硫?；?Cl-C6)-烴基磺?；?Cl-C6)-烴基羰基，(Cl-C8)-烷氧基羰基，氨基甲酰，N-(Cl-C8)-垸基氨基甲?；?，N，N-二-(Cl-C8)-垸基氨基甲?；?，或(C7-Cll)-芳烷基氨基甲酰，任選為以下基團(tuán)所取代，即氟，氯，溴，三氟甲基，(Cl-C6)-垸氧基，N-(C3-C8)-環(huán)烷基氨基甲酰基，N-(C3-C8)-環(huán)垸基(Cl-C4)-烷基氨基甲酰基，(Cl-C6)-烷基羰基氧基，苯基，苯甲基，苯氧基，芐氧基，NRYRZ其中NRYRZ，其中Ry和Rz獨(dú)立選自氫，(Cl-C12)-烷基，(Cl-C8)-烷氧基(C1-C8)-烷基，(C7-C12)-芳垸氧基(C1-C8)-烷基，(C6-C12)-芳氧基(C1-C8)-烷基，(C3-C10)-環(huán)烷基，(C3-C12)-烯基，(C3-C12)-炔基，(C6-C12)-芳香基，(C7-Cll)-芳烷基，(Cl-C12)-烷氧基，(C7-C12)芳烷氧基，(C1-C12)-烴基羰基，(C3-C8)-環(huán)烴基羰基，(C6-C12)芳基羰基，(C7-C16)-芳烷基羰基；或者Ry和Rz都是-[CH2]h，其中CH2可為0，S，N-(Cl-C4)-烷基羰基亞胺基，或N-(C1-C4)-垸氧基羰基亞胺基；苯氫硫基，苯磺?；?，苯亞硫酰基，氨磺?；琋-(C1-C8)-烷基氨磺?；騈，N-二-(Cl-C8)-烷基氨磺?；?；或者R7和R8，R8和R9，R9和R10，或R10和R11均選自-[CH2]n-或-CH=CH-CH=CH—，其中CH2任選為0，S，S0，S02,或NRY;n是3，4或5;如果E是雜芳基，則所述基團(tuán)可含1-3個(gè)為R7-Rll所定義的取代基，或者如果E是環(huán)烷基，則所述基團(tuán)可含一個(gè)為R7-Rll所定義的取代基；或者當(dāng)Q是NR'，R4是R"，其中R'和IT可以相同或不同，具體可以是氫，(C6-C12)-芳香基，(C7-Cll)-芳烷基，(Cl-C8)-烷基，(Cl-C8)-垸氧基(Cl-C8)-烷基，(C7-C12)-芳烷氧基(Cl-C8)-烷基，(C6-C12)-芳氧基(C1-C8)-烷基，(C1-C10)-烴基羰基，任選取代的(C7-C16)-芳烷基羰基，(C6-C12)-芳基羰基;或R'和R〃均為-[CH2]h，其中CH2為0，S，N-酰亞氨基或N-(C1-C10)-烷氧基羰基亞氨基，h是3-7.Y是CR3;Rl，R2和R3可以相同或不同，具體為氫，羥基，鹵素，氰基，三氟甲基，硝基，羧基，(C卜C20)-垸基，(C3-C8)-環(huán)烷基，(C3-C8)環(huán)垸基(C1-C12)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基，(C3-C8)-環(huán)院基(C1-C12)-垸氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基氧基(Cl-C12)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基氧基(Cl-C12)-烷氧基，(C3-C8)-環(huán)垸基(Cl-C8)-垸基(Cl-C6)-烷氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基(Cl-C8)-垸氧基(Cl-C6)-垸基，(C3-C8)-環(huán)烷基氧基(Cl-C8)-烷氧基(C1-C6)-垸基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基(C1-C8)-烷氧基(CI-C8)-烷氧基，(C6-C12)-芳香基，(C7-C16)-芳烷基，(C7-C16)-芳烯基，(C7-C16)-芳炔基，(C2-C20)-烯基，(C2-C20)-炔基，(Cl-C20)-烷氧基，(C2-C20)-烯氧基，(C2-C20)-炔氧基，視黃氧基，(C1-C20)-垸氧基(C1-C12)-烷基，(Cl-C12)-烷氧基(Cl-C12)-烷氧基，(C1-C12)-垸氧基(C1-C8)-垸氧基(C1-C8)-垸基，(C6-C12)-芳氧基，(C7-C16)-芳烷氧基，(C6-C12)-芳氧基(Cl-C6)-垸氧基，(C7-C16)-芳烷氧基(C1-C6)-烷氧基，(Cl-C16)-羥烷基，(C6-C16)-芳氧基(Cl-C8)-垸基，(C7-C16)-芳垸氧基(Cl-C8)-垸基，(C6-C12)-芳氧基(C1-C8)-烷氧基(Cl-C6)-烷基，(C7-C12)-芳烷氧基(Cl-C8)-垸氧基(C1-C6)-垸基，(C2-C20)-烯基氧基(C1-C6)-垸基，(C2-C20)-炔基氧基(C1-C6)-垸基，視黃基氧基(C1-C6)-烷基，-0-[CH2]xCfH(2f+l-g)Fg，-0CF2C1，-0CF2-CHFC1，(CI-C20)-烴基羰基，(C3-C8)-環(huán)烴基羰基，(C6-C12)-芳基羰基，(C7-C16)-芳垸基羰基，肉桂酰，(C2-C20)-烯基羰基，(C2-C20)-炔基羰基，(Cl-C20)-垸氧基羰基，(C1-C12)-垸氧基(C1-C12)-烷氧基羰基，(C6-C12)-芳氧基羰基，(C7-C16)-芳垸氧基羰基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基羰基，(C2-C20)-烯氧基羰基，視黃基氧基羰基，(C2-C20)-炔氧基羰基，(C6-C12)-芳氧基(C1-C6)-烷氧基羰基，(C7-C16)-芳垸氧基(C1-C6)-垸氧基羰基，(C3-C8)-環(huán)烷基(Cl-C6)-烷氧基羰基，(C3-C8)-環(huán)垸氧基(C1-C6)-垸氧基羰基，(Cl-C12)-烷基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰基氧基，(C6-C12)-芳基羰基氧基，(C7-C16)-芳垸基羰基氧基，肉桂酰氧基，(C2-C12)-烯基羰基氧基，(C2-C12)-炔基羰基氧基，(Cl-C12)-垸氧基羰基氧基，(Cl-C12)-垸氧基(Cl-C12)-垸氧基羰基氧基，(C6-C12)-芳氧基羰基氧基，(C7-C16)-芳烷氧基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)垸氧基羰基氧基，(C2-C12)-烯氧基羰基氧基，(C2-C12)-炔氧基羰基氧基，氨基甲酰，N-(Cl-C12)-垸基氨基甲?；?，N，N-二-(Cl-C12)-烷基氨基甲?；琋-(C3-C8)-環(huán)烷基氨基甲?；琋，N-雙環(huán)(C3-C8)-烷基氨基甲?；?，N-(C1-C10)-烷基-N-(C3-C8)-環(huán)垸基氨基甲?；琋-((C3-C8)-環(huán)烷基(Cl-C6)-垸基)-氨基甲酰，N-(Cl-C6)-垸基-N-((C3-C8)-環(huán)垸基(CI-C6)-垸基)-氨基甲酰，N-(+)-脫氫樅酸基氨基甲酰，N-(CI-C6)-烷基-N-(+)-脫氫樅酸基氨基甲酰，N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰，N-(C7-C16)-芳垸基氨基甲酰，N-(Cl-C10)-垸基-N-(C6-C16)-芳基氨基甲酰，N-(Cl-ClO)-烷基-N-(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰，N-((C1-C18)-烷氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-((C6-C16)-芳氧基(C1-C10)-垸基)-氨基甲酰，N-((C7-C16)-芳烷氧基(Cl-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-(Cl-C10)-烷基-N-((Cl-C10)-烷氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-(C1-C10)-烷基-N-((C6-C12)-芳氧基(Cl-C10)-烷基)-氨基甲酰，N-(C1-C10)-垸基-N-((C7-C16)-芳烷氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰；C0N(CH2)h，其中CH2可為0，S，N-(CI-C8)-烷基亞氨基，N-(C3-C8)-環(huán)烷基亞氨基，N-(C3-C8)-環(huán)烷基(C1-C4)-烷基亞氨基，N-(C6-C12)-芳亞氨基，N-(C7-C16)-芳垸亞氨基，N-(Cl-C4)-垸氧基(C1-C6)-烷基亞氨基，h是3-7;具有化學(xué)式R的氨基甲酰氧基Rx和Rv各自獨(dú)立地選自氫，(C1-C6)-烷基，(C3-C7)-環(huán)烷基，芳基或a-氨基酸的a碳原子的取代基，其中氨基酸是屬于天然L-氨基酸或其D-型異構(gòu)體，s是1-5,T是OH，或膨R林,R*，R林和R林+可以相同或不同，選自于氫，(C6-C12)-芳香基，(C7-C11)-芳垸基，(C1-C8)-垸基，(C3-C8)-環(huán)烷基，(+)-脫氫樅酸基，(Cl-C8)-烷氧基(Cl-C8)-烷基，(C7-C12)-芳烷氧基(Cl-C8)-烷基，(C6-C12)-芳氧基(C1-C8)-烷基，(Cl-C10)-烷醇基，任選取代(C7-C16)-芳垸醇基，任選取代(C6-C12)-芳醇基;或者W和R林均為-[CH2]h，其中CH2可為0，S，SO，S02，N-酰亞氨，N-(CI-C10)-垸氧基羰基亞胺基，N-(C1-C8)-垸基亞氨基，N-(C3-C8)-環(huán)烷基亞氨基，N-(C3-C8)-環(huán)烷基(C1-C4)-垸基亞氨基，N-(C6-C12)-芳亞氨基，N-(C7-C16)-芳烷亞氨基，N-(C1-C4)-烷氧基(C1-C6)-烷基亞氨基，h是3-7;氨基甲酰氧基，N-(C1-C12)-垸基氨基甲酰氧基，N，N-二-(C1-C12)-垸基氨基甲酰氧基，N-(C3-C8)-環(huán)垸基氨基甲酰氧基，N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基，N-(C7-cl6)-芳氧基氨基甲酰氧基，N-(Cl-C10)-烷基-N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-烷基-N-(C7-C16)-芳氧基氨基甲酰氧基，N-((C1-C10)-垸基)-氨基甲酰氧基，N-((C6-C12)-芳氧基(C1-CIO)-垸基)-氨基甲酰氧基，N-((C7-C16)-芳垸氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-烷基-N-((C1-C10)-烷氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-烷基-N-((C6-C12)-芳氧基(CI-CIO)-垸基)-氨基甲酰氧基，N-(CI-C10)-烷基-N-((C7-C16)-芳烷氧基(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基氨基，(C1-C12)-烷基氨基，二-(Cl-C12)-垸基氨基，(C3-C8)-環(huán)垸基氨基，(C3-C12)-烯基氨基，(C3-C12)-炔基氨基，N-(C6-C12)-芳基氨基，N-(C7-Cll)-芳垸基氨基，N-垸基-芳垸基氨基，N-烷基-芳基氨基，(CI-C12)-烷氧基氨基，(CI-C12)-垸氧基-N-(Cl-C10)-烷基氨基，(Cl-C12)-烷醇基氨基，(C3-C8)-環(huán)垸醇基氨基，(C6-C12)-芳醇基氨基，(C7-C16)-芳烷醇基氨基，(Cl-C12)-烷醇基-N-(Cl-C10)-烷基氨基，(C3-C8)-環(huán)烷醇基-N-(C1-C10)-烷基氨基，(C6-C12)-芳醇基-N-(C1-C10)-烷基氨基，(C7-Cll)-芳烷醇基-N-(C1-C10)-垸基氨基，(Cl-C12)-烷醇基氨基(C1-C8)-烷基，(C3-C8)-環(huán)垸醇基氨基(C1-C8)-烷基，(C6-C12)-芳醇基氮基(Cl-C8)-烷基，(C7-C16)-芳烷醇基氨基(Cl-C8)-烷基，胺基(Cl-C10)-烷基，N-(C1-C10)-垸基氨基(C1-C10)-烷基，N，N-二-(Cl-C10)-垸基氨基(C1-C10)-垸基，(C3-C8)-環(huán)垸基氨基(Cl-C10)-垸基，(Cl-C20)-烷基巰基，(Cl-C20)-烷基亞硫酰基，(Cl-C20)-烴基磺?；?C6-C12)-芳基巰基，(C6-C12)-芳基亞硫酰基，(C6-C12)-芳基硫?；?，(C7-C16)-芳垸基巰基，(C7-C16)-芳垸基亞硫酰基，(C7-C16)-芳烷基硫?；?，(C1-C12)-垸基巰基(Cl-C6)-烷基，(Cl-C12)-烷基亞硫?；?Cl-C6)-烷基，(C1-C12)-烷基硫酰基(Cl-C6)-烷基，(C6-C12)-芳基巰基(Cl-C6)-烷基，(C6-C12)-芳基亞硫?；?CI-C6)-烷基，(C6-C12)-芳基硫?；?Cl-C6)-垸基，(C7-C16)-芳垸基巰基(Cl-C6)-烷基，(C7-C16)-芳烷基亞硫?；?C卜C6)-垸基，(C7-C16)-芳烷基硫?；?Cl-C6)-烷基，氨磺?；琋-(Cl-C10)-烷基氨磺?；琋，N-二-(Cl-C10)-烷基氨磺酰基，(C3-C8)-環(huán)烷基氨磺?；?，N-(C6-C12)-芳基氨磺?；琋-(C7-C16)-芳烷基氨磺?；琋-(C1-C10)-烷基-N-(C6-C12)-芳基氨磺?；?，N-(C1-C10)-烷基-N-(C7-C16)-芳垸基氨磺酰基，(C1-C10)-垸基磺酰胺基，N-((C1-C10)-烷基)-(Cl-C10)-垸基磺酰胺基，(C7-C16)-芳烷基磺酰胺基，和N-((C1-C10)-烷基-(C7-C16)-芳垸基磺酰胺基；其中芳基自由基可為1-5可代分子選自羥基，鹵素，氰基，三氟甲基，硝基，羧基，(C2-C16)-垸基，(C3-C8)-環(huán)烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基(C1-C12)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基(Cl-C12)-烷氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基氧基(Cl-C12)-烷基，(C3-C8)-環(huán)垸基氧基(C1-C12)-垸氧基，(C3-C8)-環(huán)垸基(Cl-C8)-烷基-(Cl-C6)-垸氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基(C1-C8)-烷氧基(Cl-C6)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基氧基(C1-C8)-烷氧基(Cl-C6)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基(C1-C8)-烷氧基(C1-C8)-垸氧基，(C6-C12)-芳香基，(C7-C16)-芳垸基，(C2-C16)-烯基，(C2-C12)-炔基，(C1-C16)-垸氧基，(C1-C16)-烯氧基，(Cl-C12)-烷氧基(Cl-C12)-垸基，(C1-C12)-垸氧基(C1-C12)-垸氧基，(Cl-C12)-垸氧基(Cl-C8)-烷氧基(Cl-C8)-烷基，(C6-C12)-芳氧基，(C7-C16)-芳烷氧基，(C6-C12)-芳氧基(Cl-C6)-烷氧基，(C7-C16)-芳烷氧基(Cl-C6)-烷氧基，(Cl-C8)-羥烷基，(C6-C16)-芳氧基(C1-C8)-垸基，(C7-C16)-芳垸氧基(Cl-C8)-垸基，(C6-C12)-芳氧基(C1-C8)-垸氧基(C1-C6)-垸基，(C7-C12)-芳烷氧基(Cl-C8)_烷氧基(CI-C6)_烷基，-0-[CH2]xCfH(2f+1-g)Fg，-0CF2C1，-0CF2-CHFC1，(CI-C12)-烴基羰基，(C3-C8)-環(huán)烴基羰基，(C6-C12)-芳基羰基，(C7-C16)-芳垸基羰基，(Cl-C12)-垸氧基羰基，(Cl-C12)-垸氧基(Cl-C12)-垸氧基羰基，(C6-C12)-芳氧基羰基，(C7-C16)-芳烷氧基羰基，(C3-C8)-環(huán)垸氧基羰基，(C2-C12)-烯氧基羰基，(C2-C12)-炔氧基羰基，(C6-C12)-芳氧基(C1-C6)-垸氧基羰基，(C7-C16)-芳垸氧基(Cl-C6)-垸氧基羰基，(C3-C8)-環(huán)垸基(CI-C6)-垸氧基羰基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基(Cl-C6)-烷氧基羰基，(Cl-C12)-垸基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰基氧基，(C6-C12)-芳基羰基氧基，(C7-C16)-芳垸基羰基氧基，肉桂酰氧基，(C2-C12)-烯基羰基氧基，(C2-C12)-炔基羰基氧基，(Cl-C12)-烷氧基羰基氧基，(C1-C12)-烷氧基(C1-C12)-垸氧基羰基氧基，(C6-C12)-芳氧基羰基氧基，(C7-C16)-芳垸氧基羰基氧基，(C3-C8)-環(huán)烷氧基羰基氧基，(C2-C12)-烯氧基羰基氧基，(C2-C12)-炔氧基羰基氧基，氨基甲酰，N-(C1-C12)-垸基氨基甲?；琋，N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲?；?，N-(C3-C8)-環(huán)垸基氨基甲酰基，N，N-雙環(huán)(C3-C8)-垸基氨基甲?；?，N-(Cl-C10)-烷基-N-(C3-C8)-環(huán)垸基氨基甲酰基，N-((C3-C8)-環(huán)垸基(C1-C6)-垸基)氨基甲酰，N-(Cl-C6)-烷基-N-((C3-C8)-環(huán)垸基(C1-C6)-烷基)氨基甲酰，N-(+)-脫氫樅酸基氨基甲酰，N-(Cl-C6)-烷基-N-(+)-脫氫樅酸基氨基甲酰，N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰，N-(C7-C16)-芳垸基氨基甲酰，N-(C1-C10)-烷基-N-(C6-C16)-芳基氨基甲酰，N-(CI-CIO)-烷基-N-(C7-C16)-芳垸基氨基甲酰，N-((C1-C16)-烷氧基(C1-C10)-垸基)氨基甲酰，N-((C6-C16)-芳氧基(C1-C10)-垸基)氨基甲酰，N-((C7-C16)-芳烷氧基(Cl-C10)-烷基)氨基甲酰，N-(Cl-C10)-烷基-N-((CI-C10)-垸氧基(CI-CIO)-烷基)氨基甲酰，N-(CI-CIO)-垸基-N-((C6-C12)-芳氧基(C1-C10)-垸基)氨基甲酰，N-(C1-C10)-院基-N-((C7-C16)-芳垸氧基(Cl-C10)-烷基)-氨基甲酰，C0N(CH2)h，其中CH2可取代自0，S，N-(Cl-C8)-烷基亞氨基，N-(C3-C8)-環(huán)烷基亞氨基，N-(C3-C8)-環(huán)烷基(C1-C4)-垸基亞氨基，N-(C6-C12)-芳亞氨基,N-(C7-C16)-芳垸亞氨基，N-(Cl-C4)-垸氧基(Cl-C6)-烷基亞氨基，h是3-7;氨基甲酰氧基，N-(C1-C12)-垸基氨基甲酰氧基，N,N-二-(Cl-C12)-烷基氨基甲酰氧基，N-(C3-C8)-環(huán)垸基氨基甲酰氧基，N-(C6-C16)-芳基氨基甲酰氧基，N-(C7-C16)-芳氧基氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-烷基-N-(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基，N-(Cl-C10)-垸基-N-(C7-C16)-芳氧基氨基甲酰氧基，N-((Cl-C10)-烷基)氨基甲酰氧基，N-((C6-C12)-芳氧基(C1-C10)-垸基)氨基甲酰氧基，N-((C7-C16)-芳烷氧基(C1-C10)-烷基)氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-烷基-N-((C1-C10)-烷氧基(C1-C10)-垸基)氨基甲酰氧基，N-(C1-C10)-垸基-N-((C6-C12)-芳氧基(Cl-C10)-垸基)氨基甲酰氧基，N-(Cl-C10)-烷基-N-((C7-C16)-芳烷氧基(C1-C10)-垸基)氨基甲酰氧基，氨基，(Cl-C12)-烷基氨基，二-(C1-C12)-烷基氨基，(C3-C8)-環(huán)烷基氨基，(C3-C12)-烯基氨基，(C3-C12)-炔基氨基，N-(C6-C12)-芳基氨基，N-(C7-Cll)-芳烷基氨基，N-烷基-芳垸基氨基，N-烷基-芳基氨基，(Cl-C12)-烷氧基氨基，(Cl-C12)-垸氧基-N-(Cl-C10)-垸基氨基，(CI-C12)-垸醇基氨基，(C3-C8)-環(huán)垸醇基氨基，(C6-C12)-芳醇基氨基，(C7-C16)-芳垸醇基氨基，(Cl-C12)-烷酰基-N-(Cl-C10)-垸基氨基，(C3-C8)-環(huán)烷?；?N-(C1-C10)-垸基氨基，(C6-C12)-芳?；?N-(C1-C10)-烷基氨基，(C7-Cll)-芳垸酰基-N-(Cl-C10)-垸基氨基，(Cl-C12)-烷醇基氨基(C1-C8)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷醇基氨基(Cl-C8)-垸基，(C6-C12)-芳醇基氨基(Cl-C8)-烷基，(C7-C16)-芳烷醇基氨基(Cl-C8)-垸基，胺基(Cl-C10)-烷基，N-(C1-C10)-烷基氨基(Cl-C10)-垸基，N，N-二-(Cl-C10)-烷基氨基(C1-C10)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基氨基(C1-C10)-烷基，(C1-C12)-垸基巰基，(CI-C12)-垸基亞硫酰基，(Cl-C12)-烴基磺?；?C6-C16)-芳基巰基，(C6-C16)-芳基亞硫?；?C6-C16)-芳基硫?；?，(C7-C16)-芳烷基巰基，(C7-C16)-芳烷基亞硫?；?C7-C16)-芳烷基硫?；换蛘逺1與R2，或R2與R3形成鏈[CH2]0，可以是飽和鏈，也可以是含C=C雙鍵的不飽和鏈，其中1或2個(gè)CH2任選地被0,S，S0，S02，或NR'取代，其中R'是，(C6-C12)-芳香基，(C1-C8)-垸基，(CI-C8)-烷氧基-(C1-C8)-烷基，(C7-C12)-芳垸氧基(Cl-C8)-烷基，(C6-C12)-芳氧基(C1-C8)-烷基，(Cl-C10)-烷?；?，或任選取代(C7-C16)-環(huán)烷?；蛉芜x取代(C6-C12)-芳?；?o是3，4或5;或者R1與R2，或R2與R3同包含它們的吡啶或噠嗪，形成5，6，7，8-四氫異喹啉環(huán)，5，6，7，8-四氫喹啉環(huán)或5，6，7，8-四氫肉啉環(huán)；或者Rl與R2，或R2與R3形成5元或6元碳環(huán)或芳雜環(huán)；或者上述化合物衍生的生理活性鹽或前藥。生物6.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述化合物抑制2-酮戊二酸雙加氧酶的活性。7.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述化合物抑制HIF脯氨酰羥化酶的活性。8.如權(quán)利要求7所述的用途，其中所述HIF脯氨酰羥化酶選自EGLN1，EGLN2，EGLN3和它們的任何片段或亞基。9.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述化合物抑制FIH-1或它的任何片段或亞基的酶活性。10.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述治療對(duì)象是哺乳動(dòng)物。11.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述治療對(duì)象是人。12.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述HIF-a選自HIF-la，HIF-2a，HIF-3ct和它們的任何片段。13.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述HIF-a內(nèi)生于治療對(duì)象上。14.如權(quán)利要求l-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述化合物用于制備治療、預(yù)防或預(yù)治療在治療對(duì)象中與HIF有關(guān)的疾病的藥物。15.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述與HIF有關(guān)的疾病與低氧有關(guān)。16.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述與HIF有關(guān)的疾病與局部缺血有關(guān)。17.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述與HIF有關(guān)的疾病是肺部疾病。18.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述與HIF有關(guān)的疾病是心臟病。19.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述與HIF有關(guān)的疾病是神經(jīng)疾病。20.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述與HIF有關(guān)的疾病與局部缺血事件有關(guān)。21.如權(quán)利要求20所述的用途，其中所述局部缺血事件是急性。22.如權(quán)利要求21所述的用途，其中所述局部缺血事件與手術(shù)、器官移植、梗塞、創(chuàng)傷或損傷有關(guān)。23.如權(quán)利要求20所述的用途，其中所述局部缺血事件是慢性。24.如權(quán)利要求23所述的用途，其中所述局部缺血事件和選自高血壓、糖尿病、閉合動(dòng)脈疾病、慢性靜脈功能不足、肢端動(dòng)脈痙攣癥、硬化、充血性心力衰竭和系統(tǒng)硬化癥的病癥有關(guān)。25.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物包括第二種化合物。26.如權(quán)利要求25所述的用途，其中所述第二種化合物能抑制2-酮戊二酸雙加氧酶的活性。27.如權(quán)利要求25所述的用途，其中所述化合物能抑制第一種2-酮戊二酸雙加氧酶的活性.而所述第二種化合物能抑制第二種2-酮戊二酸雙加氧酶的活性。28.如權(quán)利要求25所述的用途，其中所述第二種化合物選自ACE抑制劑(ACEI)、血管緊縮素II受體阻斷劑(ARB)、利尿劑、地高辛、抑胃酶氨酸或肉堿。29.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述化合物能通過專門抑制HIF-a中至少一種氨基酸殘基發(fā)生羥基化反應(yīng)來穩(wěn)定HIF-cc。30.如權(quán)利要求29所述的用途，其中所述氨基酸殘基選自脯氨酸和天冬酰胺。31.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的化合物用于制備增加治療對(duì)象中血管生成因子的表達(dá)的藥物的用途。32.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的化合物用于制備増加治療對(duì)象中糖酵解因子的表達(dá)的藥物的用途。33.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的化合物用于制備増加治療對(duì)象中與氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)的因子的表達(dá)的藥物的用途。34.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的化合物用于制備治療治療對(duì)象中與缺血再灌注損傷有關(guān)的疾病的藥物的用途。35.如權(quán)利要求l-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述化合物以口服劑的形式提供。36.如權(quán)利要求l-5任一項(xiàng)所述的用途，其中所述化合物以皮透藥劑的形式提供。全文摘要本發(fā)明涉及低氧誘導(dǎo)因子(HIF)的α亞基的穩(wěn)定化方法。本發(fā)明還涉及預(yù)防、預(yù)治療或治療與HIF有關(guān)的疾病的方法，包括缺血性和低氧性疾病。還提供了用于這些方法的化合物。文檔編號(hào)A61K45/00GK101664553SQ200910139448公開日2010年3月10日申請日期2002年12月6日優(yōu)先權(quán)日2001年12月6日發(fā)明者L·A·弗利平,M·P·阿蘭德,Q·王,T·B·尼夫,V·古恩澤勒-普卡爾申請人:法布羅根股份有限公司