專利名稱：一種治療子宮頸癌的組合藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，確切地說是一種治療子宮頸癌的組合藥物。
二背景技術：
子宮頸癌在發(fā)展中國家依然是女性生殖道發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，發(fā)病呈年輕
化和上升化趨勢。全球每年發(fā)病達47萬，我國新發(fā)病例約在11萬以上，每年有2 3萬婦 女死于子宮頸癌。子宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個相對緩慢的過程，從子宮頸上皮內瘤變(CIN)
I、 II、 ni級到宮頸原位癌、浸潤癌，其間歷經10余年時間。傳統(tǒng)的子宮頸癌治療方法主 要有三種手術治療、放療、化療，但這三種主要治療方法均存在一定的局限性。對于lb-lla 期患者主要采用手術治療，但由于無法將微小轉移癌灶完全切除而成為術后復發(fā)的根源。lla 期以上患者由于無法實施手術而采用放療，雖然可控制腫瘤的發(fā)展，但有相當多的患者不能 耐受不良反應而放棄治療?；熥鳛樾g前及術后的輔助治療手段，同樣也有副作用大、耐藥、 費用昂貴等缺點。誘導腫瘤細胞向正常細胞分化已經成為全球許多腫瘤學者的共識。因此， 尋求療效明確，尤其能阻斷CIN進展、誘導微小轉移灶癌細胞分化，副作用輕微、價格低 廉的治療藥物具有重要的社會價值和經濟價值。
丙戊酸鈉(sodium valproate, VPA)是一種傳統(tǒng)的抗癲癇藥物，毒副作用輕微，長期使 用患者耐受性好，其在抗癲癇有效治療濃度時表現出很強的組蛋白脫乙?；敢种苿?br> (HDACI)活性，多種實驗發(fā)現VPA直接下調HDAC的活性，從而抑制組蛋白的脫乙酰化， 進而通過誘導細胞周期停滯、凋亡和分化而抑制腫瘤細胞的生長增殖。因其對腫瘤細胞有選 擇性細胞毒性，而對正常造血細胞無嚴重毒性，且與多種化療藥物有協(xié)同抗腫瘤作用。2006 年美國FDA證實其有抗腫瘤效果。已有實驗室研究報道VPA具有抑制宮頸癌細胞株HeLa 細胞增殖及誘導細胞調亡的作用，動物實驗顯示VPA可維持或縮小HeLa細胞裸鼠體內成瘤 的體積，且延長荷瘤鼠的生存時間。但目前研究證實單一使用VPA治療腫瘤的效果是有限 的。
維甲酸(retinoic acid， RA)屬于維生素甲類化合物家族，基本結構或生物活性類似 于維生素A，由環(huán)已烯、側鏈及極性基團三部分組成.因為羧基方向不同而分為兩種異構體， 即全反式維甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)和順式維甲酸(cis-RA)。 ATRA具有廣泛的
生物活性，可以誘導腫瘤細胞凋亡，抑制多種腫瘤細胞的增殖及誘導腫瘤細胞的分化等。該 藥主要應用于血液系統(tǒng)腫瘤治療。臨床資料顯示，單一使用ATRA療效也十分有限。
三、 發(fā)明內容本發(fā)明旨在提供一種治療子宮頸癌的藥物，所要解決的技術問題通過藥物組合的協(xié)同效 應以提高療效。
本發(fā)明的技術方案是將丙戊酸鈉(VPA)和全反式維甲酸(ATRA)按以下重量百分比混合加
工得到的制劑
丙戊酸鈉 85 95% 全反式維甲酸 5 15%。
優(yōu)選的重量百分比為
丙戊酸鈉 90%
全反式維甲酸 10%。 所述的制劑是藥劑學上允許的任何一種劑型，包括口服制劑或外用制劑或陰道栓劑等。 所述的口服制劑為片劑、顆粒劑、膠囊、丸劑、漿劑、散劑、粉末劑、沖劑、膏劑、液 劑等。
所述的外用制劑為噴霧劑或涂劑等。 優(yōu)選陰道栓劑。
研究表明，本組合藥物使用劑量成人600 720mg/天，其中VPA550 650mg/天， ATRA55 65呢/天?？诜苿┟刻? 3次，噴霧劑和涂劑每天數次，陰道栓劑每晚塞一粒于 陰道后穹。
本發(fā)明將VPA和ATRA有機地組合在一起，充分利用兩者具有的誘導腫瘤細胞凋亡、分 化、周期抑制作用，實驗表明，兩者組合后有協(xié)同效應，具體表現為其抗腫瘤作用均較各自 的療效好；并且對癌前病變及微小 移灶內的癌細胞均發(fā)揮作用，彌補了現有治療手段的不 足；另外，兩種藥物副作用輕微，價格低廉，加工簡單，使用方便，具有當前抗腫瘤藥物不 能比擬的優(yōu)勢。 一

圖l VPA、 ATRA及兩者聯合對子宮頸癌HeLa細胞株增殖的抑制作用 圖2 VPA、 ATRA及兩者聯合對子宮頸癌SiHa細胞株增殖的抑制作用 圖3 VPA、 ATRA及兩者聯合對子宮頸癌CaSki細胞株增殖的抑制作用 圖4 VPA、 ATRA及兩者聯合對荷瘤鼠的治療作用 圖5 VPA、 ATRA及兩者聯合治療荷瘤鼠腫瘤體積變化
四具體實施方式
(一) 制劑加工 非限定實施例如下 1、片劑
取VPA和ATRA和輔料糊精、乙醇、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、和硬脂酸鎂用濕法 制粒壓片法加工片劑，使每片含VPA100mg、 ATRA10mg。 口服兩次，每次三片。
2、 膠囊劑
取VPA和ATRA用倍量稀釋法，同干淀粉、乳糖、滑石粉、十二烷基硫酸鈉等混合 均勻后灌2#膠囊，每粒含VPAO. lg、 ATRA10mg。 口服三次，每次兩粒。
3、 噴霧劑
取VPA和ATRA同三甲基硅油、纖維素衍生物、有機溶劑、拋射劑和水加工噴霧劑、 每ml中含VPAO. 6g、 ATRA60mg。
4、 涂劑
取VPA和ATRA同纖維素衍生物、有機溶劑和水加工涂劑、每克涂劑中含VPAlg、 ATRAO. lg。
5、 陰道栓劑
取甘油明膠、聚乙二醇、硬脂酸酯和水熔融制備基質，待冷卻至55 6(TC時加入 VPA和ATRA攪拌均勻，注入模具中成型，每粒栓劑含VPAO. 6g、 ATRA60mg。
(二) 實驗研究
1.體外細胞抑制實驗
a、 細胞培養(yǎng)子宮頸癌Hela、 Siha、 Caski細胞株培養(yǎng)采用含10%新生牛血清、100U /ml青霉素、100U/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，在37°C 5%。02飽和濕度下培養(yǎng)。 每48h換液傳代1次。
b、 MTT實驗檢測細胞生長抑制率取對數生長期宮頸癌Hela、 Siha、 Caski細胞， 消化制成細胞懸液，按細胞濃度為lxl()S/L,接種于96孔板。37°C、 5%C02，飽和濕度培 養(yǎng)24h后，加入不同濃度藥物VPA(lmM、 3mM) 、 ATRA (0.25mg/mL)、順鈾(lug/ml、 10ug/ml)，并設不加藥物的對照組，每組做3個復孔，分別測24 h、 48 h、 72h、 96h后 的細胞增殖抑制率。計算公式為增殖抑制率=(1 一實驗組吸光度值/對照組吸光度 值)xlOOX。每次實驗設3復孔，實驗重復3次。
c、 實驗結果48h時各實驗組的細胞抑制率分別為VPA 1%， ATRA 30%， VPA+ATRA 56%，順鉑組41%。 VPA聯合ATRA抑制細胞生長作用比單一用藥效果顯著；VPA聯合 ATRA抑制細胞生長作用比化療藥物順鉑效果顯著。2、動物實驗
a、 荷瘤鼠動物模型的建立收集細胞生長狀態(tài)良好的Hela細胞，5X1()6個細胞接種于 裸鼠背部皮下。隨機將動物分為對照組、VPA組、ATRA組、VPA和ATRA聯合組、順 鉑組，每組5只鼠。
b、 藥物治療待腫瘤長至100mmS大小時開始給藥；VPA、 RA采用灌胃方式給藥，劑 量分別為300mg/Kg.d， 60mg/Kg.d;順鉑采用尾靜脈注射給藥，劑量為2mg/Kg， 一周兩 次。對照組以純的飲用水作對照。治療時間為4周。
c、 每2d測量一次腫瘤大小，按照公式腫瘤體積=(長X寬2) /2計算腫瘤體積。
d、 實驗結果治療前腫瘤的體積為34士llmm3，連續(xù)治療4W后各組腫瘤平均體積分別 為對照組3155. 3mm3 ， VPA 1936. 7 mm3， ATRA2103mm3， VPA+ATRA357. 3 mm3， 順鈾組1349.9mm3。上述結果表明，與對照組比較VPA聯合ATRA顯著抑制腫瘤生長， 效果明顯優(yōu)于VPA、 ATRA和順鉑的單一用藥。
權利要求
1、一種治療子宮頸癌的組合藥物，其特征在于由以下重量百分比的丙戊酸鈉和全反式維甲酸加工的制劑丙戊酸鈉 85～95％全反式維甲酸 5～10％。
2、 根據權利要求1所述的組合藥物，其特征在于丙戊酸鈉 90% 全反式維甲酸 10%。
3、 根據權利要求1或2所述的組合藥物，其特征在于所述的制劑包括藥劑學上允許的口服制劑或外用制劑或陰道栓劑。
4、根據權利要求3所述的組合藥物，其特征在于所述的制劑是陰道栓劑。
全文摘要
一種治療子宮頸組合藥物，由85～95％丙戊酸鈉和5～15％全反式維甲酸混合加工的制劑，包括藥劑學上允許的口服制劑或外用制劑或陰道栓劑。經體外細胞抑制實驗表明，本組合藥物抑制率56％，高于順鉑組的41％、ATRA組的30％和VPA組的1％；經動物實驗表明，本組合藥物抑制腫瘤生長的效果明顯優(yōu)于VPA組和口服鉑組單一用藥的效果。
文檔編號A61K31/203GK101632652SQ20091014462
公開日2010年1月27日 申請日期2009年8月24日 優(yōu)先權日2009年8月24日
發(fā)明者馮定慶, 斌 凌, 巧 劉, 然 劉, 穎 周, 曹振平, 朱園園, 敏 李, 李彩榮 申請人:安徽省立醫(yī)院