專利名稱：：一種治療肝纖維化或肝硬化失代償早期的藥物組合物及制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療肝纖維化和肝硬化失代償早期的藥物組合物，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：各種原因引起的慢性肝炎使肝細(xì)胞發(fā)生炎癥壞死，炎癥及壞死時剌激肝臟內(nèi)纖維結(jié)締組織異常增生，此病理過程稱為肝纖維化(h印aticfibrosis)，重者進(jìn)而使肝小葉結(jié)構(gòu)改建，假小葉及結(jié)節(jié)形成發(fā)展為肝硬化，引起門脈高壓癥及肝功能衰竭等嚴(yán)重后果。纖維化是肝臟對慢性損傷的一種修復(fù)反應(yīng)，是慢性肝病共有的病理改變，其特征是以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,ECM)在肝內(nèi)過多沉積。肝臟炎癥激活肝星狀細(xì)胞(h印aticstellatecell,HSC)導(dǎo)致膠原生成、沉積形成肝纖維化，進(jìn)一步發(fā)展到肝硬化。肝纖維化是慢性肝炎發(fā)展到肝硬化的必經(jīng)階段，一般認(rèn)為肝硬化為不可逆階段，肝纖維化為一動態(tài)過程，屬可逆性病變，阻止或延緩肝纖維化的發(fā)生是慢性肝病的治療目標(biāo)之一。目前最有效的抗肝纖維化的措施就是積極有效地根除或控制慢性肝病的始發(fā)因素，對原發(fā)病的有效治療本質(zhì)上就是阻止細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積或是促進(jìn)其降解。肝纖維化的藥物治療主要集中在控制肝臟炎癥；抑制HSC激活和增殖以及降解肝臟ECM，目前療效確切、副作用少的抗纖維化西藥很少，大多還處在實(shí)驗(yàn)研究階段。如抑制或減輕炎癥反應(yīng)類藥物熊脫氧膽酸、解熱抗炎藥甲苯吡啶酮、馬洛替酯、白介素-l受體拮抗劑、重組白介素-10(—種強(qiáng)抗炎和抗纖維化因子)；抑制肝星狀細(xì)胞(HSC)激活藥物抗氧化劑(包括a-胡蘿卜素，維生素E)、水飛薊素、Y型干擾素(IFN)、維甲酸(ATRA);促進(jìn)肝臟細(xì)胞再生類藥物支鏈氨基酸。由于西藥抗肝纖維化治療的種種限制，自20世紀(jì)70年代開始，國內(nèi)外學(xué)者致力于中醫(yī)藥抗肝纖維化的研究，中醫(yī)藥理論有其獨(dú)特的辨證論治理論體系和豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，中醫(yī)藥治療肝纖維化已有確切的療效。肝纖維化歸屬于中醫(yī)理論癥瘕積聚、脅痛等范疇，其病理過程的發(fā)展是一個動態(tài)過程，中醫(yī)病機(jī)也是一個動態(tài)演變過程。目前認(rèn)為肝纖維化的病機(jī)有以下幾類氣虛兼血瘀證、痰濕血瘀證、肝郁脾虛證、血瘀熱結(jié)證、氣陰兩虛瘀熱互結(jié)之證，在藥物方面，如丹參、三七、甘草、桃仁及其提取物，五仁醇(五味子提取物)等在實(shí)驗(yàn)研究中證實(shí)具有明顯抗肝纖維化作用，許多中藥或其中的有效部分或有效成分已用于臨床，并取得了較好的療效，呈現(xiàn)廣闊的應(yīng)用前景。如甘草甜素、氧化苦參堿、漢防己甲素、大黃素、?；撬?、丹參單體IH76423及丹酚酸、己酮可可堿(pentoxifylline)、冬蟲夏草、水飛薊素(Silymarin)等。中藥復(fù)方是中醫(yī)治療疾病的重要特點(diǎn)之一，其多成分可能是其多靶點(diǎn)、多途徑、多層次藥理作用的基礎(chǔ)，迄今報道有代表性的復(fù)方有強(qiáng)肝軟堅(jiān)湯(由黃芪、白術(shù)、茯苓、生地、當(dāng)歸、白芍、丹參、郁金、牡丹皮、梔子、鱉甲、茵陳等組成)；桃仁提取物合人工蟲草菌絲扶正化瘀319方(肝平膠囊)；復(fù)方861合劑(由黃芪丹參、雞血藤等10味藥物組成)；復(fù)方鱉甲軟肝片(由鱉甲、赤芍、三七及冬蟲夏草等11味中藥組成)；傳統(tǒng)中藥大黃蟲丸等。此外，還有基因治療藥物，其成分是特定的核苷酸序列。如雙環(huán)醇由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制北京協(xié)和藥廠獨(dú)家生產(chǎn)的國家一類抗肝炎新藥雙環(huán)醇(百賽諾)。治療肝硬化的中藥報道較多，如申請?zhí)?00810228585.7，發(fā)明名稱治療脂肪肝的中藥，該發(fā)明涉及一種治療脂肪肝的中藥，它是由下列重量份數(shù)配比的組分組成黃芪50-80、女貞子20-30、柏子仁10-15、酸麥仁10-15、砂仁18_20、柴胡15-18、郁金15-18、山豆根8-10、大黃8-10、番瀉葉10-15、萊菔子15-20、五味子12-15、決明子30_40、枸杞子15-25、覆盆子15-20、金櫻子15-20、山茱萸15_20、桑椹20_30、桑螵蛸10-15、三棱18-20、莪術(shù)18-20、赤芍15-18、澤瀉15-20、野菊花15-20、金銀花10-15、杜仲15_20、黃吝15-20、茵陳10-15、金錢草30-40、夏枯草15-20。本發(fā)明能夠減少或消除脂肪肝給患者帶來的痛苦，治療效果好，無毒副作用，并且有效預(yù)防肝硬化、肝癌的發(fā)生。申請?zhí)?00510010596.4，發(fā)明名稱治療肝硬化腹水的中藥配方，治療肝硬化腹水的中藥配方是由荊三棱10-15克、莪術(shù)10-15克、郁金10-15克、茵陳30-35克、板藍(lán)根15-20克、柴胡10-15克、白芍10-15克、玄參10-15克、郁李仁10-15克、宣木瓜10-15克、腹皮10-15克、甘草5-10克、蒼術(shù)10-15克、大黃5-10克、陳皮10-15克，各味藥在市場均有售，易購買且價格低，常規(guī)方法煎煮，方便易操作，治療效果好，不反彈。申請?zhí)?1117623.7，發(fā)明名稱乙肝康復(fù)顆粒，一種治療乙肝的純中藥制劑"乙肝康復(fù)顆粒"該藥物是以人參、黃芪、貫仲、蚤休、半枝蓮、板藍(lán)根、赤芍、丹皮、茵陳、茯苓、丹參、牛膝、大黃、別甲、三棱、莪術(shù)、龜板、枸杞、白芍、柴胡、血竭、三七、白術(shù)、冬蟲草、組合而成。按照特定工藝制備而成的藥劑，本發(fā)明藥物組合物的優(yōu)選重量比是人參100，黃芪100，貫仲100，蚤休100，半枝蓮100，板藍(lán)根100，赤芍50，丹皮50，茵陳50，茯苳50，丹參50，牛膝50，大黃50，別甲50，三棱50，莪術(shù)50，龜板50，枸杞50，白芍50，柴胡50，血竭50，三七50，白術(shù)50，冬蟲草50(重量份)，該藥治療乙肝，具有殺滅乙肝病毒，調(diào)整免疫功能，扶正固本，抗肝纖維化，逆轉(zhuǎn)肝纖維化和阻止延緩其向肝硬化發(fā)展，并且具有扶正不留邪，祛邪而不傷正，不但有扶正固本，活血化瘀，清熱解毒之功，還有增強(qiáng)肝臟血流量，促進(jìn)受損肝細(xì)胞恢復(fù)的作用。申請?zhí)?9109172.8，發(fā)明名稱治療肝硬化腹水藥丸的制備方法，該發(fā)明涉及的是一套兩種治療肝硬化腹水及腹水消退后的肝硬化康復(fù)藥丸的制備方法，他針對病因機(jī)理和藥理，選用中藥黑丑、面裹煨甘遂、醋炒芫花、醋炒大戟、大黃、陳皮、青皮、檳榔、琥珀、冬蟲夏草、穿山甲制、鱉甲制、龜板制、桃仁、丹參、枳殼灼、三棱、莪術(shù)、丹皮、炒青皮，合理組方成加減車舟丸和蟲草軟肝丸內(nèi)服中成藥丸。目前尚無文獻(xiàn)報道僅僅由大黃、三棱、莪術(shù)三味原料藥制備成制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種治療肝硬化的藥物組合物。本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明提供了一種治療肝硬化的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料藥制備而成大黃5-15份、三棱5-15份、莪術(shù)5-15份。進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述重量配比的原料藥制備而成大黃15份、三棱10份、莪術(shù)10份。本發(fā)明藥物是由大黃、三棱、莪術(shù)的水或有機(jī)溶劑提取物為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。其中，所述的制劑是片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑或口服液。本發(fā)明還提供了一種制備所述的藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、取下述重量配比的原料藥大黃5-15份、三棱5-15份、莪術(shù)5_15份b、取大黃，加水或3080%乙醇，煎煮提取，濾過，濾液濃縮，得清膏；C、三棱、莪術(shù)加水蒸餾，收集揮發(fā)油；所得的水煎液濃縮，得清膏；d、將b、c步驟制備的清膏、揮發(fā)油混合，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而藥學(xué)上常用的制劑。本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療肝硬化的藥物中的用途。其中，所述的藥物是用于改善肝硬化失代償早期的危急癥狀。本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備治療肝纖維化的藥物中的用途。本發(fā)明藥物原料性辛溫，力俊猛，破血消積，適用于肝硬化失代償期早期，臨床主要以肝功能減退和門脈高壓為主要表現(xiàn)，濁毒亢盛，正氣尚能耐受攻伐者。原料組方中莪術(shù)行氣破血、消積散結(jié)，《醫(yī)學(xué)心悟》謂之"治積聚諸氣，為最要之藥"，《羅氏會約醫(yī)鏡》"能血中之氣，治一切有形之血積"；三棱辛開苦泄，既能破血逐瘀，又能行氣散結(jié)，為治療氣滯血瘀日久，積于體內(nèi)而成癥瘕積聚的要藥，《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》謂之"雖堅(jiān)如鐵石，亦能徐徐消除"大黃瀉毒消瘀，推陳出新，《神農(nóng)本草經(jīng)》謂之"下瘀血、血閉、寒熱、破癥瘕積聚，……，推陳致新，通利水谷，……"。三者合用，氣滯消、瘀血去、濁毒除，達(dá)到治療的目的。現(xiàn)代研究表明，莪術(shù)對多種癌細(xì)胞有直接的破壞作用，也能促進(jìn)宿主特異性免疫增強(qiáng)；此外能抑制血小板聚集、抑制血栓形成、改善局部微循環(huán)，降低轉(zhuǎn)氨酶等作用；三棱能使血栓形成時間延長、血栓長度縮短，抑制血小板聚集，延長凝血酶時間；大黃有利膽降壓止血的作用，也能降低肝臟轉(zhuǎn)氨酶作用，具有顯著的保肝作用。三者藥理作用相互補(bǔ)充，既能直接的抑制或破壞導(dǎo)致肝硬化的病原，也能顯著改善肝硬化失代償早期的臨床表現(xiàn)，使門脈高壓降低，轉(zhuǎn)氨酶降低，保護(hù)肝功能。本發(fā)明藥物中諸原料藥合用，破血消積為主，旨在救急，即能夠直接針對病因施治，也能快速改善肝硬化失代償早期的危急癥狀，保護(hù)肝功能，祛瘀生新，寓補(bǔ)于瀉，共奏化濁解毒，破氣消瘀，保肝之功，具有協(xié)同增效作用，用于治療肝纖維化或肝硬化失代償早期諸癥。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用技術(shù)手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想的前提下，還可以作出其他多種形式的修改、替換和變更。以下通過實(shí)施例的形式的具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明的上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明藥物片劑制備方法處方大黃15g三棱10g莪術(shù)10g制法一大黃藥材飲片，以水為提取溶媒，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1小時，第三次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏，備用。另取三棱、莪術(shù)藥材飲片，以水為溶媒，加8倍量水，共水蒸餾，收集揮發(fā)油，水煎液濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏。合并上述清膏，加輔料適量，混勻，真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制粒，將揮發(fā)油以乙醇溶解，噴入顆粒，6(TC干燥，整粒，壓制成片，包薄膜衣即得。制法二大黃藥材飲片，以60%(V/V)濃度乙醇為提取溶媒，提取三次，每次1小時，合并提取液，回收乙醇，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏，備用。另取三棱、莪術(shù)藥材，以水為溶媒，加8倍量水，共水蒸餾，收集揮發(fā)油，水煎液濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(5(TC)的清膏。合并上述清膏，加輔料適量，混勻，真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制粒，將揮發(fā)油以乙醇溶解，噴入顆粒，6(TC干燥，整粒，壓制成片，包薄膜衣即得。實(shí)施例2本發(fā)明藥物膠囊劑制備方法處方大黃50g三棱150g莪術(shù)150g制法一大黃藥材飲片，以水為提取溶媒，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1小時，第三次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏，備用。另取三棱、莪術(shù)藥材飲片，以水為溶媒，加8倍量水，共水蒸餾，收集揮發(fā)油，水煎液濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏。合并上述清膏，加輔料適量，混勻，真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制粒，將揮發(fā)油以乙醇溶解，噴入顆粒，6(TC干燥，整粒，裝膠囊。制法二大黃藥材飲片，以30%(V/V)濃度乙醇為提取溶媒，提取三次，每次1小時，合并提取液，回收乙醇，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏，備用。另取三棱、莪術(shù)藥材，以水為溶媒，加8倍量水，共水蒸餾，收集揮發(fā)油，水煎液濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(5(TC)的清膏。合并上述清膏，加輔料適量，混勻，真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制粒，將揮發(fā)油以乙醇溶解，噴入顆粒，6(TC干燥，整粒，裝膠囊即得。實(shí)施例3本發(fā)明藥物顆粒劑制備方法處方大黃150g三棱50g莪術(shù)50g制法一大黃藥材飲片，以水為提取溶媒，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1小時，第三次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏，備用。另取三棱、莪術(shù)藥材飲片，以水為溶媒，加8倍量水，共水蒸餾，收集揮發(fā)油，水煎液濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏。合并上述清膏，加輔料適量，混勻，真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制粒，將揮發(fā)油以乙醇溶解，噴入顆粒，6(TC干燥，整粒，分裝即得。制法二大黃藥材飲片，以80%(V/V)濃度乙醇為提取溶媒，提取三次，每次1小時，合并提取液，回收乙醇，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏，備用。另取三棱、莪術(shù)藥材，以水為溶媒，加8倍量水，共水蒸餾，收集揮發(fā)油，水煎液濾過，濾液濃縮至相對密度為1.381.40(50°C)的清膏。合并上述清膏，加輔料適量，混勻，真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制粒，將揮發(fā)油以乙醇溶解，噴入顆粒，6(TC干燥，整粒，分裝即得。以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物顆?？垢卫w維化作用的試驗(yàn)透明質(zhì)酸(HA)為基質(zhì)成分之一，由間質(zhì)細(xì)胞合成，可較準(zhǔn)確靈敏地反映肝內(nèi)已生成的纖維量及肝細(xì)胞受損狀況，是肝纖維化和肝硬變的敏感指標(biāo)。在急肝、慢遷肝時輕度升高；慢活肝時顯著升高；肝硬化時極度升高。透明質(zhì)酸水平與血清膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、Y-球蛋白呈正相關(guān)，與血清白蛋白、凝血酶原時間呈負(fù)相關(guān)，故血清透明質(zhì)酸水平也是反映肝損害嚴(yán)重程度、判斷有無活動性肝纖維化的定量指標(biāo)。肝病時合成HA明顯增多，同時肝細(xì)胞受損，對血中的HA攝取及降解障礙，血清HA隨著肝病的發(fā)展而逐漸增高；同時又隨著病情的好轉(zhuǎn)而逐漸下降。故選擇HA作為考核指標(biāo)來進(jìn)行大黃、三棱和莪術(shù)三味中藥配伍配比比例篩選。1實(shí)驗(yàn)材料1.1動物KM小鼠，體重18-22g，SPF級，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供，動物合格證號川實(shí)動管質(zhì)SCXK(川)2004-16。小鼠在室溫22-24t:，明暗周期12h/12h條件下飼養(yǎng)，除給藥、造模及試驗(yàn)程序外均自由飲水?dāng)z食。實(shí)驗(yàn)場地為國家中醫(yī)藥管理局成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理三級實(shí)驗(yàn)室，編號TCM-2009-315。1.2藥物大黃、莪術(shù)、三棱均購自成都同仁堂藥店，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室王光志博士鑒定，均為藥典正品，按照不同的劑量配伍配比比例，常規(guī)方法制備成100%標(biāo)準(zhǔn)煎液備用。秋水仙堿(購自昆明制藥集團(tuán)股份有限公司)lmg溶于lOOmL蒸餾水中，冰箱保存?zhèn)溆谩?.3試劑和儀器四氯化碳(CCL4)，分析純，天津樂凡科技公司提供，批號20060122;橄欖油，化學(xué)純，北京化工廠生產(chǎn)，批號810711。透明質(zhì)酸(HA)和IV型膠原(IV-C)肝纖維化ELISA試劑盒，購自上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司。1.4主要儀器MultiskanMK3型酶標(biāo)，Thermo公司產(chǎn)品；LRH-150S型恒溫恒濕培養(yǎng)箱，廣東省醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；Wellwash4MK2型洗板機(jī)，Thermo公司產(chǎn)品；Biofugestratus型臺式高速冷凍離心機(jī)，德國Heraeus公司產(chǎn)品。2實(shí)驗(yàn)方法2.1、藥物配比的正交設(shè)計選L9(33)正交設(shè)計表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，見表1.表1大黃、莪術(shù)和三棱配比比例(g)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.1模型制備20%CCL4橄欖油溶液以0.05Ml/10g體重給小鼠皮下注射，1次/周，連續(xù)6周。2.2分組與給藥120只小鼠隨機(jī)分成12組，10只/組，即正常對照組(A)、模型組(B)、lmg/kg的秋水仙堿陽性對照組(C)和大黃三棱莪術(shù)不同配比劑量組(DL)。正常對照組動物以生理鹽水灌胃，僅皮下注射橄欖油溶液；模型組和藥物組動物皮下注射20%CCL4橄欖油溶液(0.05ml/10g體重)，1次/周，連續(xù)6周。造模當(dāng)日即開始給予藥物，模型組動物以生理鹽水灌胃，給藥體積為10ml/kg，1次/d，連續(xù)6周2.3標(biāo)本采集與觀測指標(biāo)末次給藥后lh剖殺動物，剖殺前24h禁食不禁水，剖殺時先以乙醚吸人麻醉后摘眼球用毛細(xì)玻管眼眶取血供生化檢測。采用ELISA法測定血清HA和IV-C水平。2.4統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)采用"均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差"(X±SD)表示，運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。3結(jié)果3.1各組小鼠血清肝纖維化指標(biāo)HA和IV-C含量變化與正常對照組比較，模型對照組小鼠血清HA和IV-C含量均顯著顯升，有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(p<o.oi)。與模型對照組比較，大黃三棱莪術(shù)不同配比方組和陽性藥對照組血清HA和IV-C含量均明顯下降，有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2表2大黃三棱莪術(shù)不同配伍比例對小視血清肝纖維化指標(biāo)HA的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與模型對照組比較，*P<0.05;**P<0.013.2大黃三棱莪術(shù)劑量配伍比例方差分析表3大黃三棱莪術(shù)劑量配伍比例方差分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>4、結(jié)論以血清透明質(zhì)酸含量為考察指標(biāo)，由表中極差大小顯示，各影響因素作用主次為A>B>C;方差分析結(jié)果表明A因素有顯著性意義(P<0.05)，即大黃用量為主要影響因素，B和C因素?zé)o顯著性意義(P>0.05)，即莪術(shù)和三棱用量影響較小，考慮以A3B3C2為佳，但考慮到B因素即莪術(shù)用量沒有顯著性差異，其用量可以選擇次優(yōu)水平，即B2，同時，考慮到莪術(shù)三棱臨床一般都是作為藥對出現(xiàn)，因此，最終確定A3B2C2為最佳配伍，即大黃莪術(shù)三棱的最終重量配伍比例為15:10:10。試驗(yàn)例2本發(fā)明藥物顆粒對肝硬化的防治作用臨床觀察證實(shí)，本發(fā)明藥物對肝硬化失代償期早期具有較好的療效。本研究從實(shí)驗(yàn)角度就本發(fā)明藥物顆粒治療肝纖維化藥效學(xué)作用進(jìn)行了探討，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。1、實(shí)驗(yàn)材料1.1動物健康SD大鼠，SPF級，雌雄各半，180±20g，(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所，實(shí)驗(yàn)動物合格證號為SCXK(川)2004-16)。均在恒溫恒濕的動物室飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1.2藥物本發(fā)明藥物顆粒方由熟大黃15g、三棱10g、莪術(shù)10g三味中藥組成，以上述比例藥物制備的浸膏粉為實(shí)驗(yàn)藥物，由我校制劑教研室制備，每克相當(dāng)于原生藥7克。實(shí)驗(yàn)時用蒸餾水將其配制成所需濃度的混懸液。復(fù)方鱉甲軟肝片，內(nèi)蒙古福瑞制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號20060610。實(shí)驗(yàn)時用蒸餾水將其配制成所需濃度的混懸液。1.3試齊U丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒(批號20061101)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒(批號20061101)，均購自南京建成生物工程研究所；總膽紅素(Tbil)試劑盒、白蛋白/總蛋白(A/G)試劑盒(批號20061203)，均購自北京中生生物工程高技術(shù)公司；III型前膠原(PCIII)放免藥盒(批號20061103)、IV型膠原(VI-C)放免藥盒(批號20061103)、透明質(zhì)酸(HA)放免藥盒(批號20061103)、層黏連蛋白(LN))放免藥盒(批號20061103)，購白天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司。1.4主要儀器722型分光光度計，上海第三分析儀器廠產(chǎn)品；Biofugestratus型臺式高速冷凍離心機(jī)，德國Heraeus公司產(chǎn)品；GC1500型Y射線免疫計數(shù)器，成都中宇儀器有限公司產(chǎn)2實(shí)驗(yàn)方法2.1模型制備70只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)lw，其中60只造模，10只作為正常對照。造模方法參考文獻(xiàn)造模，50只造模大鼠首次皮下注射40%四氯化碳(CC14)花生油溶液0.5ml/100g體重，以后每周2次皮下注射0.3ml/100g體重，共9周。造模開始前2周均以20%豬油、0.5%膽固醇、79.5%玉米面混合飼料(由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所加工)喂養(yǎng)，第39周以0.5%膽固醇和99.5%玉米面混合飼料(由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所加工)喂養(yǎng)。整個造模期間以30%乙醇作為飲料讓大鼠自由飲用。正常組則以正常飼料和純凈水喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)9周末確認(rèn)造模成功后予以分組給藥治療。2.2分組與給藥造模結(jié)束后，將造模成功大鼠隨機(jī)抽取50只，并隨機(jī)分為5組，即正常對照組、模型對照組、復(fù)方鱉甲軟肝片對照組、本發(fā)明藥物顆粒高、中、低劑量組，每組IO只，雌雄各半。各組大鼠給藥相應(yīng)的藥物，給藥劑量見表4，給藥體積為10ml/kg，l次/d灌胃，連續(xù)給藥4周。2.3標(biāo)本制備末次給藥禁食12h后用10%水合氯醛(0.2ml/kg體重)麻醉大鼠，腹主動脈取血，3500r/min離心5min，分離血清，密封，_201:凍存待檢。檢測時將凍存的血清放置于37t:恒溫水浴箱解凍，分別依據(jù)試劑盒要求采用比色法，測定ALT、AST、Alb、TP。IV-C、LN采用液相平衡競爭放射免疫分析法，HA、PCI11采用競爭法。2.4統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)采用"均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差"(X士SD)表示，運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。3結(jié)果3.1各組血清ALT、AST活性和Alb、TP含量的變化與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清ALT、AST活性和Tbil含量均顯著升高，A/G比例顯著降低，有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較，本發(fā)明藥物顆粒高、中、低劑量組和對照組血清ALT、AST活性和Tbil含量明顯下降，A/G比例明顯升高，有明顯的著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表4。表4大鼠血清ALT、AST活性和Tbil、A/G含量變化比較(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與模型對照組比較，*P<0.05;**P<0.01;微P<0.0013.1各組大鼠血清肝纖維化指標(biāo)含量變化與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清PCIII、HA、IV-C、LN含量均顯著顯升，有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P〈0.001)。與模型對照組比較，本發(fā)明藥物顆粒高、中、低劑量組和陽性藥對照組血清PCIII、HA、IV-C、LN含量均明顯下降，有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。見表5表5大鼠血清肝纖維化指標(biāo)比較(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與模型對照組比較，*P<0.05;**P<0.01;微P<0.0014、結(jié)論本發(fā)明藥物顆粒能降低肝硬化大鼠血清中HA、LN、PCHI、IV-C的含量，從而減輕細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在肝內(nèi)的沉積，同時通過降低血清轉(zhuǎn)氨酶活性和總膽紅素水平，升高白蛋白/總蛋白比例來改善肝功能，提示本發(fā)明藥物顆粒具有顯著的抗肝臟纖維化、逆轉(zhuǎn)肝硬化的作用。試驗(yàn)例3本發(fā)明藥物顆粒對匿N肝硬化模型大鼠門靜脈壓力的影響1實(shí)驗(yàn)材料1.1動物健康SD大鼠，SPF級，全雄，200士20g，(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所，實(shí)驗(yàn)動物合格證號為SCXK(川)2004-16)。均在恒溫恒濕的動物室飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1.2藥物本發(fā)明藥物顆粒方由熟大黃15g、三棱10g、莪術(shù)10g三味中藥組成，以上述比例藥物制備的浸膏粉為實(shí)驗(yàn)藥物，由我校制劑教研室制備，每克相當(dāng)于原生藥7克。實(shí)驗(yàn)時用蒸餾水將其配制成所需濃度的混懸液。復(fù)方鱉甲軟肝片，內(nèi)蒙古福瑞制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號20060610。實(shí)驗(yàn)時用蒸餾水將其配制成所需濃度的混懸液。1.3試劑與儀器二甲基亞硝胺(dimethylnitrosamine，DMN)，東京化成工業(yè)株式會社產(chǎn)品；PowerLab生理數(shù)據(jù)處理和分析系統(tǒng)(澳大利亞ADI公司產(chǎn)品膜狀內(nèi)翳剪(蘇州醫(yī)療器械總廠).[cmo]2實(shí)驗(yàn)方法2.1模型制備造模大鼠按2Ml/kg的劑量ip5g/LD麗，首次注射劑量為全劑量的2/3，連續(xù)注射3d后停藥4d，共4wk，第4周最后兩次分別按全量的2/3，1/2注射；所有造模大鼠均采用此法造模，正常組ip等量的生理鹽水。2.2分組與給藥取SPF級SD大鼠50只，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、本發(fā)明藥物顆粒高、中、低劑量組，每組10只。造模結(jié)束后，除正常對照組和模型對照組每天給予等量的飲用水外，本發(fā)明藥物顆粒各組大鼠給藥相應(yīng)的藥物，給藥劑量見表6，給藥體積為10ml/kg，1次/d灌胃，連續(xù)給藥4周。2.3大鼠門靜脈壓力的測定以20g/L戊巴比妥鈉按2ml/kg劑量麻醉大鼠，將麻醉好的大鼠置于保溫毯上，溫度維持在37t:左右，固定好四肢，沿大鼠腹壁正中線剪開長約2cm的"一"字形小口，打開腹腔，暴露門靜脈主干，分離出腸系膜上靜脈，結(jié)扎遠(yuǎn)離門靜脈的一端，然后用膜狀內(nèi)翳剪于靜脈血管上剪開一"v"形小缺口，插入PE-10管至門靜脈正中，固定后接通壓力換能器測定門靜脈壓力并記錄之。2.4肝組織ET-1和Hyp的測定門靜脈壓力測定完之后，無菌取肝組織待測肝組織內(nèi)皮素-l(endothelin-l，ET-1)和肝組織羥脯氨酸(hydroxyproline，Hyp)。肝組織Hyp測定采用Jamall氏法測定，肝組織ETol測定采用放免法測定。2.5統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)采用"均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差"(X±SD)表示，運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。3結(jié)果3.1門靜脈壓力的變化經(jīng)DW^造模以后，模型組大鼠門靜脈壓力顯著升高，與正常組比較，升高幅度達(dá)到了9mmHg，為正常組的2.56倍；本發(fā)明藥物顆粒治療4周后，大鼠門靜脈壓力顯著下降，高、中、低劑量組分別下降了34.95%、46.71%和37.27%，與模型組比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，見表6。3.2肝組織Hyp含量的變化與正常組比較，模型組肝組織Hyp含量顯著升高，本發(fā)明藥物顆粒治療4周后，各組大鼠肝組織Hyp含量均較模型組明顯降低，見表6。3.3肝組織ET-1含量的變化與空白對照組比較，模型組肝組織中ET-1含量明顯增高，本發(fā)明藥物顆粒治療4周后，肝組織中ET-1含量顯著下降，與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)意義，見表6。表6各組大鼠門靜脈壓和肝組織Hyp、ET-1含量的變化(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注與模型對照組比較，*P<0.05;**P<0.01;微P<0.0014、結(jié)論在肝硬化失代償早期，肝硬化門靜脈壓力較高，近年來研究發(fā)現(xiàn)活化的肝星狀細(xì)胞造成肝竇毛細(xì)血管化以及在內(nèi)皮細(xì)胞作用下的細(xì)胞收縮是肝硬化門靜脈高壓的重要病理生理機(jī)制。而肝組織Hyp的含量與肝纖維化程度呈正相關(guān)；肝硬化時大鼠門靜脈壓力升高與肝組織ET-1含量的增高呈正相關(guān)。本發(fā)明藥物顆粒能降低DMN肝硬化門靜脈壓力，降低肝組織中Hyp和ET-1含量。提示本發(fā)明藥物顆?？梢酝ㄟ^抗肝纖維化而顯著降低肝硬化模型大鼠升高的肝組織ET-1含量和門靜脈壓力。本發(fā)明藥物對肝硬化失代償早期的的危急癥狀有顯著改善作用。綜上所述，本發(fā)明藥物用于治療肝纖維化和肝硬化，也適用于肝硬化失代償期早期諸癥，三個原料藥大黃、三棱、莪術(shù)配伍使用，具有協(xié)同增效作用。權(quán)利要求一種治療肝纖維化或肝硬化失代償早期的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料藥制備而成的制劑大黃5-15份、三棱5-15份、莪術(shù)5-15份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝纖維化或肝硬化失代償早期的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料藥制備而成的制劑大黃15份、三棱10份、莪術(shù)10份。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于它是由大黃、三棱、莪術(shù)的水或有機(jī)溶劑提取物為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于所述的制劑是片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑或口服液。5.—種制備權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、取下述重量配比的原料藥大黃5-15份、三棱5-15份、莪術(shù)5-15份；b、取大黃，加水或30%80%乙醇，煎煮提取，濾過，濾液濃縮，得清膏；c、三棱、莪術(shù)加水蒸餾，收集揮發(fā)油；所得的水煎液濃縮，得清膏；d、將b、c步驟制備的清膏、揮發(fā)油混合，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。6.權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備治療肝硬化的藥物中的用途。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述的藥物是用于改善肝硬化失代償早期的危急癥狀。8.權(quán)利要求l-4任意一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備治療肝纖維化的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供了一種治療肝纖維化或肝硬化失代償早期的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料藥制備而成的制劑大黃5-15份、三棱5-15份、莪術(shù)5-15份。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明藥物中諸原料藥合用，破血消積為主，旨在救急，既能夠直接針對病因施治，也能快速改善肝硬化失代償早期的危急癥狀，保護(hù)肝功能，祛瘀生新，寓補(bǔ)于瀉，共奏化濁解毒，破氣消瘀，保肝之功，具有協(xié)同增效作用，用于治療肝纖維化或肝硬化失代償早期諸癥。文檔編號A61K36/88GK101698085SQ20091016793公開日2010年4月28日申請日期2009年10月19日優(yōu)先權(quán)日2009年10月19日發(fā)明者徐世軍,王曙賓申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué)