專利名稱:一種dsRNA與黃芪多糖的藥物組合及應用的制作方法
技術領域:
本發(fā)明涉及一種應用于養(yǎng)殖動物病毒性感染防治的藥物組合,尤其涉及該組合用
藥物的制備及穩(wěn)定性控制方法。
背景技術:
病毒性感染是引起養(yǎng)殖動物死亡、影響動物養(yǎng)殖經濟效益的重要因素,隨著國家 獸藥質量標準的規(guī)范,取消了大批原地方標準的抗病毒藥物,可選用的抗病毒藥物的短缺 與獸醫(yī)臨床的需求矛盾日益突出。 1967年,美國Merck藥廠的Field等人發(fā)現(xiàn)了酶促合成的雙鏈核酸(double strained RNA,dsRNA)具有誘生干擾素的能力,其中聚肌胞(Polyinosinic-polycytidylic Acid,PIC)的誘生能力最強,它可以剌激機體產生廣譜的內源干擾素,進而激活蛋白激酶和 2',5'-寡聚腺苷酸合成酶、1^蛋白等抗病毒因子,以降解進入細胞的病毒,達到抑制、治療 病毒性感染的目的。 PIC由寡聚肌苷酸與寡聚胞苷酸在合適的條件下按堿基配對的原則聚合而成。研
究表明,PIC分子量的大小、雙鏈的緊密程度及其穩(wěn)定性是決定其誘導干擾素活性高低的重
要影響因素。目前,國內雖然有寡聚肌苷酸及寡聚胞苷酸原料的生產,但尚缺乏對雙鏈配對
的合適條件、穩(wěn)定性影響因素等的系統(tǒng)研究,也未見到其與其他活性物質配伍方面的報道。 聚肌胞與黃芪多糖的藥物配伍比單獨聚肌胞與黃芪多糖的作用更顯注,聚肌胞能
夠誘導機體產生內源性干擾素,從而抑制病毒的增殖,通過非特異性免疫體系建立起抗病
毒狀態(tài);黃芪多糖通過提高動物的特異性免疫力而增強動物的抗病毒能力,兩種藥物通過
組合后,藥效相互協(xié)同,既能夠誘導機體內源性干擾素產生,又能夠誘導機體的細胞免疫應
答從而更好的抵抗病毒的侵襲。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種dsRNA與黃芪多糖的藥物組合及應用,它能提供合成 PIC的適宜工藝參數;提供PIC與黃芪多糖組合的工藝技術;還公開了 dsNRA(PIC)與黃芪 多糖的藥物組合在動物病毒性感染控制的應用。采用將聚肌胞、黃芪多糖添加適當的藥用 輔料按一定工藝制成復方制劑,這些組分之間具有一定的促效與增效作用,具有能夠誘導 動物機體產生干擾素,增強機體免疫力,具有抗病毒作用的合成核酸類化學藥品與中藥提 取物的組合用藥物,以及本組合藥品穩(wěn)定性控制方法和在家禽,家畜和水產動物上的應用。
為了解決背景技術所存在的問題,本發(fā)明是采用以下技術方案它是由黃芪多糖 和dsRNA按一定比例組合而成,黃芪多糖含量范圍20-50mg/ml ;dsRNA (聚肌胞甘酸)含量 范圍l-5mg/ml,分子量范圍200-500bp(瓊脂糖凝膠電泳法)。黃芪多糖和dsRNA的主要 成分按水針劑生產工藝,經配液、過濾、灌封、滅菌、檢驗合格后即得到本藥物組合。注射用
水中加一定量的聚肌苷酸在20°C -e(rc條件下溶解,然后加入等摩爾的聚胞苷酸溶解,保
溫配對15-50分鐘,加入合適量的黃芪多糖,混合均勻,過濾、灌封、滅菌。
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所述的聚肌胞的合成與藥物組合是500ml注射用水中依次加入焦亞硫酸鈉0. 3g、 氯化鈉O. 6g以及適量的磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉等,加熱至20-6(TC,進一步優(yōu)選為 30-5(TC之間的某一特定溫度,加入500mg-2500mg聚胞苷酸攪拌使溶解,保溫10分鐘,然后 加入500mg-2500mg聚肌苷酸攪拌使溶解,保溫配對15-50分鐘。上述溶液中加入黃芪多糖 20-50g,充分攪拌混勻,用注射用水定容至lOOOml,O. 45um微孔濾膜法過濾,灌封,IO(TC流 通蒸汽滅菌30分鐘,燈檢、貼標即得。 所述的聚肌胞為由聚肌苷酸和聚胞苷酸在一定條件下聚合而成的聚合物,為增加 其抗病毒作用和減少其毒性作用要求本聚合產物分子大小為200-500bp,增色效應不得小 于55%。 本發(fā)明是通過注射、口服或者藥浴等途徑,誘導動物機體內源性干擾素水平的升 高以及誘導機體細胞免疫機制,建立起抗病毒狀態(tài),從而有效預防和防治病毒性感染的發(fā) 生和傳播。鑒于藥物劑型的多樣性,本發(fā)明藥物組合選用恰當的藥用輔料,可將藥物制成水 針劑和口服液。 本發(fā)明具有以下有益效果適用于提高畜、禽和水產類動物的免疫力,增強對病毒 病的預防與治療。
圖1是本發(fā)明dsRNA與黃芪多糖的藥物組合對新城疫感染的保護作用示意圖;
圖2是本發(fā)明dsRNA與黃芪多糖的藥物組合對豬瘟病毒感染的保護作用示意圖;
圖3是本發(fā)明dsRNA與黃芪多糖的藥物組合對虹鱒病毒感染的保護作用示意圖。
具體實施例方式
具體實施方式
一 本具體實施方式
采用以下技術方案它是由黃芪多糖和dsRNA 按一定比例組合而成,黃芪多糖含量范圍20-50mg/ml ;dsRNA(聚肌胞甘酸)含量范圍 l-5mg/ml,分子量范圍200-500bp (瓊脂糖凝膠電泳法)。黃芪多糖和dsRNA的主要成分按 水針劑生產工藝,經配液、過濾、灌封、滅菌、檢驗合格后即得到本藥物組合。注射用水中加
一定量的聚肌苷酸在20°C -e(rc條件下溶解,然后加入等摩爾的聚胞苷酸溶解,保溫配對
20-50分鐘,加入合適量的黃芪多糖,混合均勻,過濾、灌封、滅菌。 所述的聚肌胞的合成與藥物組合是500ml注射用水中依次加入焦亞硫酸鈉0. 3g、 氯化鈉O. 6g以及適量的磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉等,加熱至20-6(TC,進一步優(yōu)選為 30-5(TC之間的某一特定溫度,加入500mg聚胞苷酸攪拌使溶解,保溫10分鐘,然后加入 500mg聚肌苷酸攪拌使溶解,保溫配對15-50分鐘。上述溶液中加入黃芪多糖20_50g,充分 攪拌混勻,用注射用水定容至lOOOml,O. 45um微孔濾膜法過濾,灌封,IO(TC流通蒸汽滅菌 30分鐘,燈檢、貼標即得。 所述的聚肌胞為由聚肌苷酸和聚胞苷酸在一定條件下聚合而成的聚合物,為增 加其抗病毒作用和減少其毒性作用要求本聚合產物分子大小為4-16s,增色效應不得小于 55%。 本發(fā)明是通過注射、口服或者藥浴等途徑,誘導動物機體內源性干擾素水平的升 高以及誘導機體細胞免疫機制,建立起抗病毒狀態(tài),從而有效預防和防治病毒性感染的發(fā)
4生和傳播。 本具體實施方式
適用于提高畜、禽和水產類動物的免疫力,增強對病毒病的預防 與治療。
具體實施方式
二 將該藥物組合用注射用水稀釋至含聚肌胞50 ii g/ml 。將160只 試驗用雛雞隨機分為4個試驗組,每組40只。I組空白對照組(生理鹽水組);II組黃 芪多糖藥物對照組(黃芪多糖注射液,按每千克體重20mg) ;III組聚肌胞藥物對照組(聚
肌胞注射液,按每千克體重0.05mg)IV組藥物組合試驗組(每千克體重lml);將以上雛雞
隔離籠養(yǎng),空白對照組與陽性對照組和用藥試驗組在不同雞舍飼養(yǎng),飼養(yǎng)條件保持一致。飼
養(yǎng)至10d,各組進行新城疫疫苗免疫。免疫后21d,將各組按照分組計劃進行藥物處理,12h
后將進行攻毒(攻毒100個單位LD5。的ND強毒),攻毒后24h將各組再按照分組計劃注射
與首次注射劑量相同的藥物觀察,進行觀察,持續(xù)到新城疫潛伏期結束。 實驗結果見圖1。表明dsRNA與黃芪多糖對家禽病毒感染用,而兩者的的藥物組合
相對與兩者單獨用藥對家禽(雞)病毒病的自然感染發(fā)病有明顯的保護率和高的治愈率,
能夠增強疫苗的保護作用,抑制病毒在家禽體內的增殖。 由圖1可見,在疫苗免疫的基礎上再給予一定量的該組合藥物,對免疫失敗或免 疫抑制的雞群能起到一定的保護作用,保護效果較好。
具體實施方式
三將該藥物組合用注射用水稀釋至含聚肌胞50ii g/ml。將40頭試 驗用仔豬隨機均分為4個試驗組進行試驗,每組10頭。分組及試驗方法如下1組空白對 照組(生理鹽水組);II組黃芪多糖藥物對照組(黃芪多糖注射液,按每千克體重20mg); III組聚肌胞藥物對照組(聚肌胞注射液,按每千克體重0. 05mg) IV組藥物組合試驗組 (每千克體重lml);將斷奶仔豬按以上實驗分組隔離飼養(yǎng),飼養(yǎng)條件保持一致。飼養(yǎng)1周 后,各組分別進行豬瘟疫苗(免疫劑量為常規(guī)免疫劑量)免疫。免疫21天,將各組按照分 組計劃進行藥物處理,12小時后進行攻毒(攻毒劑量為100LD5。豬瘟強病毒),攻毒后24小 時給藥組再次注射與首次注射劑量相同的藥液。試驗過程中,每日觀察2次,試驗觀察持續(xù) 到豬瘟潛伏期結束。 實驗結果見圖2。表明dsRNA與黃芪多糖的藥物組合比單獨的聚肌胞注射液和單 獨的黃芪多糖注射液有更好的效果,對豬病毒病的感染發(fā)病有明顯的保護率和較高的治愈 率,能夠抑制病毒在家畜體內的增殖。能夠降低家畜的死亡率。 由圖2表明,dsRNA與黃芪多糖的藥物組合對豬瘟病毒感染具有更好的保護作用, 尤其對免疫失敗的豬感染病毒病能起到一定的保護作用。
具體實施方式
四將120條試驗用虹鱒稚魚隨機均分為4個試驗組進行試驗,每組 30條。I組空白對照組(生理鹽水組);II組黃芪多糖藥物對照組(黃芪多糖注射液, 按推薦劑量給藥);III組聚肌胞藥物對照組(聚肌胞注射液,按每千克體重0.05mg) ;IV 組藥物組合試驗組(每千克體重lml (以聚肌胞計為0. 05mg/kg)),各組以腹腔注射的方 式給藥。 將虹鱒稚魚按以上實驗分組隔離飼養(yǎng),飼養(yǎng)條件保持一致。飼養(yǎng)一周后,各組按計 劃分組給藥,12小時后各組注射1000TCID5。的傳染性胰臟壞死癥病毒,攻毒后24小時后, 按各組方案再次注射與首次注射劑量相同的藥液,觀察結果。 該實驗結果見圖3。表明dsRNA與黃芪多糖的 物組合比單獨使用聚肌胞注射液和單獨使用黃芪多糖注射液在抑制水產魚類病毒病增殖方面更有效。從而達到對水產魚類 病毒病感染的治療與預防作用。 由圖3表明dsRNA與黃芪多糖的藥物組合對魚類病毒感染具有較高的保護作用。
權利要求
一種dsRNA與黃芪多糖的藥物組合及應用,其特征在于它是由黃芪多糖和dsRNA按一定比例組合而成,黃芪多糖含量范圍20-50mg/ml;dsRNA(聚肌胞甘酸)含量范圍1-5mg/ml,分子量范圍200-500bp(瓊脂糖凝膠電泳法)。黃芪多糖和dsRNA的主要成分按水針劑生產工藝,經配液、過濾、灌封、滅菌、檢驗合格后即得到本藥物組合。注射用水中加一定量的聚肌苷酸在20℃-60℃條件下溶解,然后加入等摩爾的聚胞苷酸溶解,保溫配對15-50分鐘,加入合適量的黃芪多糖,混合均勻,過濾、灌封、滅菌。
2. 根據權利要求1所述的一種dsRNA與黃芪多糖的藥物組合及應用,其特征在于所述 的聚肌胞的合成與藥物組合是500ml注射用水中依次加入焦亞硫酸鈉0. 3g、氯化鈉0. 6g以 及適量的磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉等,加熱至20-6(TC,進一步優(yōu)選為30-5(TC之間的某一 特定溫度,加入500mg-2500mg聚胞苷酸攪拌使溶解,保溫10分鐘,然后加入500mg-2500mg 聚肌苷酸攪拌使溶解,保溫配對15-50分鐘。上述溶液中加入黃芪多糖20-50g,充分攪拌混 勻,用注射用水定容至lOOOml,O. 45um微孔濾膜法過濾,灌封,10(TC流通蒸汽滅菌30分鐘, 燈檢、貼標即得。
3. 根據權利要求1所述的一種dsRNA與黃芪多糖的藥物組合及應用,其特征在于所述 的聚肌胞為由聚肌苷酸和聚胞苷酸在一定條件下聚合而成的聚合物,為增加其抗病毒作用 和減少其毒性作用要求本聚合產物分子大小為200-500bp,增色效應不得小于55%。
4. 根據權利要求1所述的一種dsRNA與黃芪多糖的藥物組合及應用,其特征在于鑒于 藥物劑型的多樣性,它通過選用恰當的藥用輔料,可將藥物制成水針劑和口服液。
全文摘要
一種dsRNA與黃芪多糖的藥物組合及應用,它涉及一種應用于養(yǎng)殖動物病毒性感染防治的藥物組合。它是由黃芪多糖和dsRNA按一定比例組合而成,黃芪多糖含量范圍20-50mg/ml;dsRNA(聚肌胞甘酸)含量范圍1-5mg/ml,分子量范圍200-500bp;黃芪多糖和dsRNA的主要成分按水針劑生產工藝,經配液、過濾、灌封、滅菌、檢驗合格后即得到本藥物組合。注射用水中加一定量的聚肌苷酸在20℃-60℃條件下溶解,然后加入等摩爾的聚胞苷酸溶解,保溫配對15-50分鐘,加入合適量的黃芪多糖,混合均勻,過濾、灌封、滅菌,適用于提高畜、禽和水產類動物的免疫力,增強對病毒病的預防與治療。
文檔編號A61P31/12GK101703518SQ20091017709
公開日2010年5月12日 申請日期2009年9月21日 優(yōu)先權日2009年9月21日
發(fā)明者劉宗柱, 劉西鋒, 尹立杰, 段坤 申請人:青島漢河動植物藥業(yè)有限公司