專利名稱：抑制BCL11B表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種siRNA，特別涉及一種抑制BCL11B表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血液腫瘤是發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，每年全國約有IO萬初發(fā)病人，嚴(yán)重危害人們、尤其是青少年的健康，T細(xì)胞腫瘤是血液腫瘤的一種主要類型，主要由于T細(xì)胞惡性克隆增殖而形成，包括多種類型的T細(xì)胞白血病和淋巴瘤，多數(shù)惡性程度高，治療效果差，預(yù)后不良。臨床治療上一直存在難治療、耐藥和易復(fù)發(fā)等難題，因此尋找更有效和特異的治療方案一直是研究者的一個(gè)重要目標(biāo)。隨著對腫瘤細(xì)胞的分子特點(diǎn)的逐漸明確，不斷發(fā)現(xiàn)腫瘤T細(xì)胞特異的分子，設(shè)計(jì)和研制有效的靶向治療藥物，成為提高T細(xì)胞腫瘤治療效果的一個(gè)重要手段。 BCL11B(B細(xì)胞淋巴瘤/白血病11B)基因是近期發(fā)現(xiàn)的一個(gè)BCL家族的新成員，在T細(xì)胞發(fā)育、分化和增殖中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。BCL11B表達(dá)異常、基因突變及基因斷裂和重排與T細(xì)胞腫瘤發(fā)生有一定關(guān)系，在T細(xì)胞——急性淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)中，多見涉及BCL11B基因位點(diǎn)的一些染色體異位，引起了其表達(dá)水平在白血病T細(xì)胞中明顯升高。
近年來，利用RNA干擾技術(shù)，將化學(xué)合成的小干擾RNA(small interferingRNA，siRNA)轉(zhuǎn)導(dǎo)至特定的細(xì)胞，沉默相關(guān)基因的表達(dá)，是研究基因功能最有效的手段之一，也是靶向基因治療最有吸引力的方法之一。選擇特異性的靶基因合成有效的siRNA，并且選擇合
適轉(zhuǎn)染方式，使其在宿主細(xì)胞中高效作用，是實(shí)施這一靶向治療措施的重點(diǎn)。
有效的靶向治療是目前國內(nèi)外不斷在尋找的輔助治療方法，靶向針對BCL11B基因的siRNA序列對于開發(fā)新的抗T細(xì)胞腫瘤基因藥物和提高T細(xì)胞腫瘤的治療效果有重要的意義，具有很大的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的在于提供一種能高效抑制BCL11B表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935。 本發(fā)明的另一 目的在于提供上述siRNA-935的應(yīng)用。 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種抑制BCL1 IB表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935，序列如下所示 正義鏈5， -GCACAACAUGCAAGCAGCCCUUCAA-3，
反義鏈5 ， -UUGAAGGGCUGCUUGCAUGUUGUGC-3 ，。 所述抑制BCL11B表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935應(yīng)用于抑制BCL11B基因的表達(dá)。 所述抑制BCL11B表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935應(yīng)用于制備治療T細(xì)胞腫瘤的藥物。
所述T細(xì)胞腫瘤為T細(xì)胞白血病。 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果 1、本發(fā)明的抑制BCLllB表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935能高效抑制 BCLllB基因的表達(dá)，mRNA的下調(diào)程度達(dá)到3 8倍，蛋白表達(dá)的抑制率達(dá)到54. 08%，如圖 4和圖5所示。 2、本發(fā)明的抑制BCLllB表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935能有效抑制腫瘤 性T細(xì)胞的增殖，如圖6和7所示。 3、本發(fā)明的siRNA-935序列對于開發(fā)新的抗T細(xì)胞腫瘤基因藥物和提高T細(xì)胞腫 瘤的治療效果有重要的意義，其具有很大的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。


圖1是實(shí)施例1中通過熒光顯微鏡光觀察Molt-4細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率圖，其中 A為轉(zhuǎn)染Alexa Red Oligo白光圖(200X); B為轉(zhuǎn)染Alexa Red Oligo熒光圖(200X); C為對照組白光圖(200X); D為對照組熒光圖(200 X)。 圖2是實(shí)施例1中通過流式細(xì)胞儀檢測Molt-4細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率圖，其中 A為轉(zhuǎn)染Alexa Red Oligo的散點(diǎn)圖； B為轉(zhuǎn)染Alexa Red Oligo的柱形圖； C為對照組的散點(diǎn)圖； D為對照組的柱形圖。 圖3是實(shí)施例2確定實(shí)時(shí)定量PCR條件的效果圖，其中 A是內(nèi)參基因|3 2m標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增圖； B是目的基因BCL1 IB標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增圖。 圖4是實(shí)施例2的實(shí)驗(yàn)組和對照組的實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果圖。 圖5是實(shí)施例2的實(shí)驗(yàn)組和對照組的Western Blot圖，其中 A為48h后BCLllB蛋白水平變化圖； B為72h后BCLllB蛋白水平變化圖。 圖6是通過A皿exin V/PI雙染流式細(xì)胞圖儀得到的實(shí)驗(yàn)組和對照組的凋亡圖。 圖7是通過流式細(xì)胞儀得到的實(shí)驗(yàn)組和對照組的Bcl-2蛋白表達(dá)圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。 實(shí)施例1 siRNA的合成和轉(zhuǎn)染T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株(Molt-4)(購自中科院上海細(xì)胞
所)細(xì)胞條件的穩(wěn)定，具體步驟如下
(1)設(shè)計(jì)和得到siRNA在GenBank(http:〃blast. ncbi. nlm. nih. gov/Blast. cgi)里查找B(XllB
4基因序列(ACCESSION NM_138576)，然后根據(jù)Invitrogen公司(www. invitrogen. com)提供的StealthTMRNAi設(shè)計(jì)法貝U，在線設(shè)計(jì)針對BCL11B的siRNA。本發(fā)明所 涉及的抑制BCL1 IB表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935是從BCL1 IB基因序列 935bp開始的25nt siRNA，其正義鏈序列為5， -GCACAACAUGCAAGCAGCCCUUCAA-3，;反 義鏈序列為5' -UUGAAGGGCUGCUUGCAUGUUGUGC-3'。同時(shí)設(shè)計(jì)與目的基因序列無同 源性的麗-silencing scrambled control (SC)對照25nt siRNA，其正義鏈序列為 5， -CCAAAGGACGAGAGCAGGUUCAUAA-3';反義鏈序列為5， -UUAUGAACCUGCUCUCGUCCUUUGG-3 ，。 上述siRNA均由美國Invitrogen公司化學(xué)合成。
(2)準(zhǔn)備處于對數(shù)生長期的Molt-4細(xì)胞 將Molt-4細(xì)胞接種于含體積分?jǐn)?shù)10%新生牛血清、100U/mL青霉素和100U/mL鏈 霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中，在含體積百分?jǐn)?shù)5% C02的培養(yǎng)箱37t:連續(xù)培養(yǎng)，2 3天傳代 一次，得到處于對數(shù)生長期的Molt-4細(xì)胞。
(3)測試Molt-4細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率 A、收集2. 5Xl(f個(gè)步驟(2)制備的處于對數(shù)生長期的Molt_4細(xì)胞，200g離心 10min，完全去除上清； B、用100 ii 1預(yù)熱至室溫的Nucleofector Solution和Supplement混合液 (Amaxa，德國)懸浮細(xì)胞； C、加入100nM Alexa Red Oligo (Invitrogen,美國)，混勻后加入核轉(zhuǎn)杯(Amaxa， 德國)，啟動(dòng)Molt-4特異性程序C-005，同時(shí)設(shè)置對照組，為與轉(zhuǎn)染AlexaRed Oligo的步驟 相同，但是沒有加入Alexa Red Oligo; D、程序完成后立刻用核轉(zhuǎn)染試劑盒(Amaxa，德國)里配套的移液器將轉(zhuǎn)染后的細(xì) 胞液接種于培養(yǎng)瓶中，終體積為5ml ; E、放入培養(yǎng)箱10小時(shí)后利用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測熒光值，分析轉(zhuǎn)染效率。 通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測的結(jié)果分別如圖1和圖2(其中圖2的A和B圖 中P3和P2分別是散點(diǎn)圖和柱形圖的陽性細(xì)胞，而C和D圖是對照組細(xì)胞的本底。)所示， 可見通過上述轉(zhuǎn)染方法的轉(zhuǎn)染效率穩(wěn)定在39. 98±5. 47%。
實(shí)施例2 將siRNA-935轉(zhuǎn)染Molt-4細(xì)胞后，檢測BCL11B基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)， 明確其干擾效應(yīng)。 (1)實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)組為轉(zhuǎn)染siRNA-935，對照組分別為無關(guān)序列對照組(SC)、轉(zhuǎn) 染條件對照組(MOCK)和空白對照組(NC)，實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1步驟(2)，各組的siRNA量 均為3 g。轉(zhuǎn)染條件對照組是除了不加siRNA，其余處理?xiàng)l件同實(shí)驗(yàn)組；空白對照組是沒有 任何處理的細(xì)胞。 (2)熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測分別收集各組轉(zhuǎn)染后24h、48h和72h的細(xì)胞，按常規(guī) 方法提取RNA合成cDNA。熒光實(shí)時(shí)定量PCR總反應(yīng)體積為25 y 1，包括dATP、dCTP和dGTP 各0. lmmol/L， dUTP 0. 2mmol/L，0. 75UAmpliTaq Gold聚合酶，O. 25U尿嘧啶糖基酶(UNG)， 1XPCR緩沖液，4. 5,l/LMgCl2，以及O. 5iimol/L上、下游引物，0. 1 ii mol/L的6FAM-TAMRA 探針和2iU cDNA或標(biāo)準(zhǔn)品。應(yīng)用于熒光實(shí)時(shí)定量PCR的引物和探針具體序列見表1。在50°C 、2min， 95°C 、5min變性后，共進(jìn)行45循環(huán)擴(kuò)增，每一循環(huán)包括95°C 、 15s和64°C 、 lmin。根據(jù)樣本中的！^m拷貝數(shù)，計(jì)算100000個(gè)！^m拷貝中所含BCLllB拷貝數(shù)。計(jì)算公式為n= 100000 XBCL1 IB/P2m。 P 2m和BCL11B標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增曲線圖見圖3，兩條曲線均擬合良好，相關(guān)系數(shù)分別為0. 998和0. 999。繼續(xù)分析各實(shí)驗(yàn)組BCLllB拷貝數(shù)，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后24h、48h和72h，與各對照組相比，siRNA-935組BCLllB的mRNA表達(dá)水平均明顯下調(diào)，下調(diào)倍數(shù)約為3 8倍不等(表2，圖4)。
表1應(yīng)用于實(shí)時(shí)定量PCR的引物和探針序列
引物和探針序列功能
5'-CACCCCCGACGAAGATGACCAC-3'上游引物
5'-CGGCCCGGGCTCCAGGTAGATG-3'下游引物
5'-6FAM-TCACCCACGAAAGGCATCTGTCCCAAGCA-TAMRA-3'探針
5'-CTCGCGCTACTCTCTCTTTCT-3'上游引物
5'-TACATGTCTCGATCCCACTTAACTAT-3'下游引物
5'-6FAM-CTCACGTCATCCAGCAGAGAATGGAAAGTCA—TAMRA-3'探針表2 :實(shí)時(shí)定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后BCL11B基因mRNA水平變化(BCL11B
cipies/105P2m copies)
間
組別\ 24h 48h 72h
siRNA-93563.37±13.9062.79±15.1575.56±1.54
SC181.08±59.75144.48±28.81221.90±31.88
MOCK358.50±3楊129.03±19.23411.24±338.48
NC508.63±123.55508.63±123.55508.63±123.55 (3)蛋白水平檢測分別收集轉(zhuǎn)染后48h和72h的細(xì)胞，應(yīng)用蛋白裂解液試劑盒，提取總蛋白，Western blot ECL發(fā)光法及Image quantition灰度分析軟件檢測、分析轉(zhuǎn)染后各組BCLllB蛋白水平的表達(dá)情況。具體方法如下 A、收集各組不同時(shí)間段的細(xì)胞，數(shù)目為1X106個(gè)，用RIPA蛋白提取試劑盒(申能博彩，上海)提取總蛋白； B、 SDS-PAGE電泳將各組樣品按常規(guī)方法定量并變性后加樣于10%的SDS-PAGE膠中(每孔加樣量約為30 ii g)，恒壓60V 30min后改為80V 45min ; C、轉(zhuǎn)膜將切好的NC膜(Invitrogen，美國)和脫脂棉預(yù)先泡在轉(zhuǎn)膜液中15 30min，用半干轉(zhuǎn)儀(Bio-Rad，美國)按照安全蓋+電轉(zhuǎn)蓋+脫脂棉+SDS-PAGE膠+NC膜+脫脂棉+電機(jī)板的順序從上向下排列，恒壓15V 15min ; D、封膜用3X的Blocking Reagent (封閉試劑)封膜lh后用Washing Buffer(洗滌緩沖液)洗滌2次，每次5min ;
E、一抗、二抗的孵育將NC膜按所需要的蛋白分子量大小(!3-actin為42kD， BCLl IB蛋白為96kD)和預(yù)染Marker的位置剪成兩條，分別放入1 : 500的小鼠抗人 P-actin—抗(武漢博士德公司)和1 : 5000的兔抗人BCL11B—抗(Bethyl，美國)4°C 過夜，或37°C lh后用Washing Buffer洗滌3次，每次5min。再分別放入1 : 500的羊抗 小鼠和羊抗兔二抗(eBioscience，美國)37t:孵育lh，用WashingBuffer洗滌3次，每次 5min ; F、ECL顯色通過ECL顯色試劑盒(碧云天，上海)顯色，經(jīng)顯影、定影后觀察內(nèi) 參P-actin和目的蛋白BCL11B的表達(dá)量，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整曝光時(shí)間。最后通過Image quantition灰度分析軟件檢測、分析轉(zhuǎn)染后各組BCL11B蛋白水平的表達(dá)情況。
Western blot結(jié)果(見圖5)顯示，與各對照組相比，轉(zhuǎn)染后48h、72h， siRNA-935 組BCL11B蛋白水平表達(dá)均明顯下調(diào)，其中以48h作用較好，與SC組相比，抑制率達(dá)到了 54. 08%，即本發(fā)明提供的抑制BCL11B表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935能有效下調(diào) Molt-4細(xì)胞中BCL11B基因的表達(dá)。
實(shí)施例3 此實(shí)施例表明了 siRNA-935下調(diào)Molt-4細(xì)胞BCLllB表達(dá)后所產(chǎn)生的生物學(xué)效
應(yīng)。包括形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞增殖、凋亡和周期的變化及作用前后相關(guān)基因表達(dá)譜的變化特點(diǎn)等。 (1)形態(tài)學(xué)變化各組取約1 X 104個(gè)細(xì)胞，按常規(guī)方法進(jìn)行Hoechst 33258 (碧云 天，上海)，核染色，染色后用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果顯示siRNA-935組細(xì)胞呈明顯 的凋亡細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白，而其余各對照 組細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色。 (2) CCK-8法檢測細(xì)胞增殖情況轉(zhuǎn)染結(jié)束立即取各組細(xì)胞約1 X 104，每組平行取 3孔，放入培養(yǎng)箱中72h后加入10 iU的CCK-8溶液(同仁化學(xué)研究所，日本)，再37。C孵 育lh，于450nm處檢測各組0D值，計(jì)算抑制率。結(jié)果顯示，與各對照組相比，siRNA-935組 可以明顯抑制細(xì)胞的增殖(表3)。 表3 :CCK-8法檢測轉(zhuǎn)染72h后對Molt_4細(xì)胞增殖的影響
分組OD抑制率(％)
siRNA-935*0.3616±0.017056.82±3.92%SC0.5179±0.014136.36±2.66%
MOCK0.662U0.034017.67±1.53%
NC0.7955±0.03360.00±0.00% * : P < 0. 05 siRNA-935 VS 其余各組 (3)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況轉(zhuǎn)染72h后取各組細(xì)胞約IX 105個(gè)，用預(yù)冷的 PBS洗滌細(xì)胞2次，1ml結(jié)合緩沖液洗細(xì)胞2次，離心去上清，加入200 y 1結(jié)合緩沖液，重懸 細(xì)胞后，分別加入10 yl A皿exin V和5 PI溶液，輕輕混勻，避光反應(yīng)30min，立即上機(jī) 檢測，Winmdi軟件分析結(jié)果。結(jié)果顯示，與各對照組相比，siRNA-935組細(xì)胞早期和中晚期 凋亡均明顯增加(圖6)。
(4)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化情況轉(zhuǎn)染72h后取各組細(xì)胞約1 X 105個(gè)，用 4t:預(yù)冷的70%乙醇固定24h，隨后用PBS洗滌細(xì)胞，去除固定液，加lg/L的RNaseA200 y 1， 100mg/L的碘化丙錠800 ill ，置4t:冰箱內(nèi)，30min后在流式細(xì)胞儀測定DNA含量的變化。結(jié) 果顯示，與各對照組相比，siRNA-935組細(xì)胞未見明顯細(xì)胞周期變化(表4)。此結(jié)果說明了 抑制BCLllB基因的表達(dá)對Molt-4細(xì)胞周期沒有影響，提示本發(fā)明的siRNA-935主要是通 過促進(jìn)細(xì)胞凋亡，而非調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的周期，將其生長增殖阻滯在某一階段，從而發(fā)揮抗白 血病細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。 表4 :流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞周期情況
組別G1/G0%(G2+M)%S%
siRNA-93562.40±17.820.95±1.0636.70±16.83
SC48.75±5.160.80±1.1350.45±6.29
MOCK50.45±8.133.60±4.5345.90±12.73
NC47.60±3.393.60±1.8448.85±L63 (5)基因芯片檢測siRNA-935作用前后相關(guān)基因表達(dá)譜的變化特點(diǎn)收集轉(zhuǎn)染后 24h各組細(xì)胞，常規(guī)方法提取RNA，送上海生物芯片公司進(jìn)行全基因組基因檢測，Affymetrix U133 plus 2. 0基因表達(dá)譜芯片檢測顯示多見與凋亡相關(guān)基因TNF受體家族和與T細(xì)胞活 化或分化相關(guān)基因等的表達(dá)下調(diào)。 (6)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白含量轉(zhuǎn)染72h后取各組細(xì)胞約lXl()5個(gè)， 加入Bcl-2 —抗作用20min后用PBS洗滌再加入二抗置于暗處20min再用PBS洗，流式備 檢。結(jié)果顯示，與各對照組相比，siRNA-935組細(xì)胞Bcl-2蛋白明顯下調(diào)(圖7) 。 Bcl_2是 一種與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因，能夠抑制細(xì)胞凋亡。此結(jié)果證明了抑制BCLllB表達(dá)出現(xiàn)的細(xì) 胞凋亡的確是由于抗凋亡基因表達(dá)量的減少。 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明了本發(fā)明提供的抑制BCLllB表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的 siRNA-935具有明顯的抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能。 上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的
限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，
均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。 SEQUENCE LISTING 〈110>暨南大學(xué) 〈120〉抑制BCLllB表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935及應(yīng)用
〈130>1
〈160>4 〈170>PatentIn version 3. 2
〈210>1
〈211>25
〈212>RNA 〈213>artificial sequence
8〈220〉〈223>siRNA-935的正義鏈〈400〉1gc3c肪caug caagcagccc皿c朋〈210>2〈211>25<212>RNA〈213〉artificial sequence〈220〉〈223>siRNA-935的反義鏈〈400>2uugaagggcu gc皿gcaugu ugugc〈210〉3〈211〉25<212>RNA〈213>artificial sequence〈220〉〈223〉SC組的siRNA的正義鏈〈400〉3cc朋3ggacg 3gagcagg皿caima〈210>4〈211〉25〈212〉薩〈213>artificial sequence〈220〉<223>SC組的siRNA的反義鏈〈400〉4uuaugaaccu gcucucgucc u皿gg
9
權(quán)利要求
一種抑制BCL11B表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935，其特征在于所述siRNA-935序列如下正義鏈5’-GCACAACAUGCAAGCAGCCCUUCAA-3’反義鏈5’-UUGAAGGGCUGCUUGCAUGUUGUGC-3’。
2. 權(quán)利要求l所述抑制BCLllB表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935的應(yīng)用，其特征 在于所述siRNA-935用于抑制BCLllB基因的表達(dá)或用于制備治療T細(xì)胞腫瘤的藥物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述T細(xì)胞腫瘤為T細(xì)胞白血病。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種能高效抑制BCL11B表達(dá)和腫瘤性T細(xì)胞增殖的siRNA-935及應(yīng)用。所述的siRNA-935序列的正義鏈為5’-GCACAACAUGCAAGCAGCCCUUCAA-3’；反義鏈為5’-UUGAAGGGCUGCUUGCAUGUUGUGC-3’。所述的siRNA-935能高效抑制BCL11B基因的表達(dá)，mRNA的下調(diào)程度達(dá)到3～8倍，蛋白表達(dá)的抑制率達(dá)到54.08％，同時(shí)所述的siRNA-935能有效抑制腫瘤性T細(xì)胞的增殖。本發(fā)明所述的siRNA-935對于開發(fā)新的抗T細(xì)胞腫瘤基因藥物和提高T細(xì)胞腫瘤的治療效果有重要的意義，具有很大的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
文檔編號A61P35/00GK101696413SQ200910193248
公開日2010年4月21日 申請日期2009年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月23日
發(fā)明者李揚(yáng)秋, 楊力建, 陳少華, 陳思, 黃欣 申請人:暨南大學(xué);