專利名稱：翼首草總皂苷有效部位提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
翼首草總皂苷有效部位提取物及其制備方法和應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及翼首草總皂苷有效部位提取物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
翼首草為藏醫(yī)常用藥材，廣泛應(yīng)用于藏藥制劑，如十二味翼首散、潔白丸、二十五 味甘子丸、二十五味驢血丸、二十六味余甘子丸、九味青鵬散、石榴普安散、清肺止咳丸等。 藏醫(yī)認(rèn)為翼首草性寒、味苦、有小毒，具有清熱解毒、祛風(fēng)濕、止痛的作用，可用于治療瘟毒、 痹證、痢疾、關(guān)節(jié)炎等癥。目前，有關(guān)翼首草研究與應(yīng)用的報(bào)道較少，與其相關(guān)的文獻(xiàn)有
文獻(xiàn)[1]一種藥物組合物及其制備方法和用途，專利號(hào)200310104142. 4 ；
文獻(xiàn)[2] :Two triterpenoid saponins from Pteroccephalus bretschneidri. Phytochemistry, 1993, 32 (6) :1539;
文 獻(xiàn)[3] :Triterpenoid saponins from Pteroccephalus hookeri. Phytochemistry,1993, 32(6) :1535;
文獻(xiàn)W]匙葉翼首花的化學(xué)成分.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1999，12 (1) :35-37 ；
文獻(xiàn)[5]匙葉翼首花的化學(xué)成分·云南植物研究，1995，17(1) =108-110 ；
文獻(xiàn)W]藏藥翼首草化學(xué)成分的研究，成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2002年25卷3期；
文獻(xiàn)[7]翼首草的抗炎作用與急毒實(shí)驗(yàn)研究，北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2004年27卷 2期
文獻(xiàn)[8]藏藥翼首草抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用與機(jī)理研究，成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士 學(xué)位論文，2002年
上述文獻(xiàn)1中公開了一種藥物組合物的制備，其中君藥翼首草僅僅涉及了乙醇加 熱回流提取的簡(jiǎn)單處理，文獻(xiàn)2-5涉及到基于實(shí)驗(yàn)室條件下，通過化學(xué)方法和波譜分析共 得到16種三萜皂苷類成分，文獻(xiàn)6中張藝等首次從翼首草中分離得到rivularicin，文獻(xiàn)7 中涉及到翼首草總皂苷抗炎鎮(zhèn)痛的藥效學(xué)研究。文獻(xiàn)8中涉及到翼首草抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 (RA)作用與機(jī)理的探討。綜上所述，目前尚未見對(duì)于翼首草總皂苷有效部位的提取純化研 究及其在抗腫瘤方面的藥效學(xué)研究報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供翼首草總皂苷有效部位提取物，同時(shí)，提供上 述有效部位提取物的制備方法及其應(yīng)用。
本發(fā)明以翼首草總皂苷的含量為指標(biāo)，提供了總皂苷含量高、質(zhì)量可控、穩(wěn)定、藥 效顯著的翼首草總皂苷提取物。本發(fā)明所述的翼首草總皂苷有效部位提取物，其主要成分 為齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷，其總皂苷的含量在50-90%。通過下述方法和步驟制得
(1)提取
翼首草根粉碎后，用50% -95%含水乙醇加熱回流提取，將提取液濃縮備用；
(2)純化
將上述所得的濃縮液進(jìn)行大孔樹脂吸附，用水淋洗除去雜質(zhì)，再用40% -95% C1-C5的低級(jí)醇洗脫，將洗脫液濃縮至稠浸膏后真空干燥或除去低級(jí)醇后噴霧干燥，得提取 物。
具體而言，本發(fā)明通過下述步驟制備翼首草總皂苷有效部位提取物
將粉碎后的翼首草根用50% -95%含水乙醇熱提3次，每次溶媒用量約為生藥量 的5-12倍，每次提取時(shí)間1- ；提取液濃縮后進(jìn)行大孔樹脂吸附，本發(fā)明中，所述的大孔樹 脂為聚苯乙烯型多孔性吸附樹脂，優(yōu)選AB-8、X-5、HPD-100型大孔樹脂等，用水淋洗除去雜 質(zhì)，再用40% -95% C1-C5的低級(jí)醇洗脫，本發(fā)明中，采用的低級(jí)醇為甲醇、乙醇、或丙醇等 C1-C5醇類，將洗脫液濃縮至稠浸膏后真空干燥或除去低級(jí)醇后噴霧干燥，得本發(fā)明的翼首 草總皂苷有效部位提取物，經(jīng)含量測(cè)定，其總皂苷含量為50-90%。
本發(fā)明中，對(duì)上述所得翼首草總皂苷有效部位提取物進(jìn)行含量測(cè)定
以齊墩果酸為對(duì)照品，采用比色法測(cè)定翼首草提取物中總皂苷的含量。結(jié)果顯示， 所述翼首草提取物中其主要成分為齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷，總皂苷的含量在50-90%，達(dá) 到有效部位的要求。
為進(jìn)一步說明本發(fā)明提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，對(duì)所制得的提取物 進(jìn)行了體外抑制人腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明中，優(yōu)選人消化系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞SMMC-7721， SGC-7901，BGC-823，GAS進(jìn)行增殖實(shí)驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提取物在體外能顯著抑制人 胃癌(SGC-7901、BGC-823、GAS)、肝癌(SMMC-7721)等人消化系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞的增殖。
本發(fā)明的制備方法其提純工藝經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、適用于工業(yè)化大生產(chǎn)，所得提取物具有 顯著的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。
具體實(shí)施方式
通過下面給出的本發(fā)明的具體實(shí)施例可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明，但它們不是 對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例1
稱取粉碎后的翼首草根60g，用80 %乙醇浸漬1 后熱提3次，每次溶媒用量 5-12倍，每次提取時(shí)間為60min，合并3次提取液，濃縮至60ml，用25%乙醇稀釋至120ml， 以1. 5BV/h的流速通過50mlAB-8型大孔樹脂，依次用200ml水洗脫除去雜質(zhì)，再用200ml 60 %乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至稠浸膏，真空干燥4h，得本發(fā)明的翼首草總皂苷有效部 位提取物，重2. 98g，總皂苷含量80 %。
實(shí)施例2
稱取粉碎后的翼首草根60g，用70%乙醇浸漬12h后熱提3次，每次溶媒用量5_12 倍，每次提取時(shí)間為90min，合并3次提取液，濃縮至60ml，用25%乙醇稀釋至120ml，以 4BV/h的流速通過50mlX-5型大孔樹脂，依次用250ml水洗脫除去雜質(zhì)，再用250ml 70%乙 醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至稠浸膏，真空干燥4h，得本發(fā)明的翼首草總皂苷有效部位提取 物，重2. 65g，總皂苷含量65%。
實(shí)施例3
稱取粉碎后的翼首草根60g，用80%乙醇浸漬1 后熱提3次，每次溶媒用量5_12倍，每次提取時(shí)間為120min，合并3次提取液，濃縮至60ml，用25%乙醇稀釋至120ml， 以0. 75BV/h的流速通過50ml HPD-100型大孔樹脂，依次用300ml水洗脫除去雜質(zhì)，再用 250ml80%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至稠浸膏，真空干燥4h，得本發(fā)明的翼首草總皂苷有 效部位提取物，重2. 8g，總皂苷含量60%。
實(shí)施例4
體外抑制人腫瘤細(xì)胞SMMC-7721，SGC-7901，BGC-823，GAS增殖實(shí)驗(yàn)，將融合為 單層生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞，用0. 25%胰蛋白酶消化，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為5Xl(McellS/mL， 接種于96孔板，90 μ L/well,同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和空白對(duì)照組(只加培養(yǎng)液，不 加細(xì)胞和藥物)，置于37°C、5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，實(shí)驗(yàn)組分別加入6種濃度的受 試樣品(0. 3-100 μ g/ml)，使用液10 μ L，陽性對(duì)照組加入3種濃度的5-氟尿嘧啶(5_Fu) (1-100 μ g/ml)使用液10 μ L，陰性對(duì)照和空白對(duì)照組均加入10 μ L PBS,繼續(xù)培養(yǎng)。分別 于4 后，每孔加入10 μ L的ΜΤΤ，繼續(xù)置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，4h后終止培養(yǎng)，吸去孔內(nèi)培養(yǎng)上清 液，每孔加入150 μ L的DMS0，微量振蕩儀震蕩lOmin，用酶標(biāo)檢測(cè)儀檢測(cè)并記錄490nm處OD 值。
抑制細(xì)胞率=(陰性對(duì)照OD值-用藥組OD值)/陰性對(duì)照OD值X 100 %。
用SPSS13. O統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算各樣品的IC50值，結(jié)果顯示，本發(fā)明提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞 增殖有明顯的抑制作用。
表1是本發(fā)明提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。
表 權(quán)利要求
1.翼首草總皂苷有效部位提取物，其特征在于，所述的提取物其主要成分為齊墩果烷 型五環(huán)三萜皂苷，其總皂苷的含量為50-90%。
2.權(quán)利要求1的翼首草總皂苷有效部位提取物的制備方法，其特征在于，包括下述步驟(1)提取翼首草根粉碎后，用50% -95%含水乙醇加熱回流提取，將提取液濃縮備用；(2)純化將步驟(1)所得濃縮液進(jìn)行大孔樹脂吸附，用水淋洗除去雜質(zhì)，再用40% -95% C1-C5 的低級(jí)醇洗脫，將洗脫液濃縮至稠浸膏后真空干燥或除去低級(jí)醇后噴霧干燥，得提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟( 的大孔樹脂為聚苯乙烯型多 孔性吸附樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的大孔樹脂選自AB-8、X-5或 HPD-100型大孔樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟O)的低級(jí)醇選自甲醇、乙醇或丙醇。
6.權(quán)利要求1的翼首草總皂苷有效部位提取物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中所述的腫瘤是人消化系統(tǒng)腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及翼首草總皂苷有效部位提取物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明以翼首草總皂苷的含量為指標(biāo)，提供了總皂苷含量高、質(zhì)量可控、穩(wěn)定、藥效顯著的翼首草總皂苷提取物。本發(fā)明的翼首草總皂苷有效部位提取物，其主要成分為齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷，總皂苷含量50％-90％。本發(fā)明的制備方法提純工藝經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。所得的提取物具有顯著的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。
文檔編號(hào)A61K36/185GK102028722SQ200910196870
公開日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2009年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月30日
發(fā)明者尹勝利, 崔文霞, 朱國(guó)福, 雷旭東 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)