專利名稱：膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)療領(lǐng)域，特別涉及醫(yī)療領(lǐng)域中的尿路上皮腫瘤的動物建模技術(shù)。
背景技術(shù)：
為了更好地探索人類疾病的發(fā)病機制，尋找預(yù)防及治療方法，實驗動物醫(yī)學(xué)已愈 來愈受到人們的關(guān)注。由于實驗動物有許多自發(fā)或誘發(fā)性疾病，能局部或全部地反映人類 類似疾病過程與特點，因此可用于研究相關(guān)的人類疾病。如突變系SHR大鼠，其自發(fā)性高血 壓的變化與人類相似，并伴有高血壓性心血管病變，如腦血栓、梗死等癥狀。貓是弓形蟲的 宿主，是弓形蟲研究中是一個很好的材料。同時，在研究白化病、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥等方 面，也較為理想。非人靈長類實驗動物，可感染其他動物不可復(fù)制的人類傳染病，如脊髓灰 質(zhì)炎、腦炎、肝炎、麻疹、痢疾、瘧疾等。因此，可作為研究這些疾病發(fā)生、發(fā)展過程及疫苗研 制的理想動物。目前，為了能更好地實現(xiàn)對人體膀胱腫瘤的研究，需要在實驗動物上模擬人患膀 胱腫瘤的模型。而將人腫瘤細(xì)胞接種于動物皮下或腹腔的造模方法不能模擬腫瘤在原位器 官中的生長狀態(tài)。其他的在活體膀胱原位制作浸潤性膀胱腫瘤的方法主要有以下2種1.采用手術(shù)為裸小鼠接種人膀胱尿路上皮腫瘤細(xì)胞該方法為手術(shù)切開膀胱，再 將腫瘤細(xì)胞接種至膀胱。2.采用經(jīng)尿道為裸小鼠接種人膀胱尿路上皮腫瘤細(xì)胞該方法為經(jīng)尿道穿刺膀 胱壁，接種腫瘤細(xì)胞。然而，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用第一種方法不但操作復(fù)雜，會招致動物傷口感 染，而且裸小鼠費用昂貴；而第二種方法并非直視下接種，因小鼠膀胱小而薄，極易穿破膀 胱，操作難度大，失敗率極高，而且同樣存在裸小鼠費用昂貴的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法，使得尿 路上皮腫瘤能自發(fā)性地生長在實驗動物的原位器官上，從而得到模擬人患膀胱腫瘤的理想 模型。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的實施方式提供了一種膀胱原位的尿路上皮腫瘤動 物模型建立方法，包含以下步驟對實驗動物的膀胱灌注化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲；通過控制N-甲基亞硝基脲的膀胱灌注量和實驗動物的生長時間獲得在膀胱原位 的不同分期的尿路上皮腫瘤。本發(fā)明實施方式與現(xiàn)有技術(shù)相比，主要區(qū)別及其效果在于用化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲灌注實驗動物的膀胱進(jìn)而誘發(fā)膀胱自發(fā)性生長的 尿路上皮腫瘤，通過控制N-甲基亞硝基脲的膀胱灌注量和實驗動物的生長時間可獲得在 膀胱原位的不同分期的尿路上皮腫瘤。由于腫瘤是自發(fā)性生長于膀胱，區(qū)別于腹腔或皮下移植的腫瘤，因而更接近人患膀胱腫瘤時器官的病理生理狀態(tài)，最接近人的患病狀態(tài)，是模 擬人患膀胱腫瘤的理想模型。適合對在體器官腫瘤的研究，例如(1)可以觀察藥物、區(qū)域 熱療等方法治療后腫瘤及機體的病理改變、病理生理改變。(2)適合針對腫瘤在盆腔局部浸 潤以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況的研究。進(jìn)一步地，通過給予插尿管，灌注致癌劑，即可誘發(fā)膀胱自發(fā)性生長的尿路上皮腫 瘤，不但操作簡單，而且成功率高。進(jìn)一步地，實驗動物為雌性大鼠。由于鼠的基因組和人類在相當(dāng)程度上同源系，因 此是最好的實驗動物之一。而選用雌性大鼠不但成本低，可以保證研究所需動物數(shù)量，從而 獲得比較多的動物模型數(shù)量，而且更便于尿道插管，避免了雄性大鼠因有陰莖骨阻礙導(dǎo)致 尿道插管困難，損傷尿道而導(dǎo)致尿道出血、感染、狹窄。進(jìn)一步地，為每只所述雌性大鼠灌注aiig的所述N-甲基亞硝基脲，隔周灌注一次， 灌注4次，之后繼續(xù)飼養(yǎng)1周，在第8周即可獲得淺表性尿路上皮腫瘤。經(jīng)實驗證明，通過 該方法獲得淺表性尿路上皮腫瘤的成功率為100%。進(jìn)一步地，為每只所述雌性大鼠灌注aiig的所述N-甲基亞硝基脲，隔周灌注一次， 灌注6次，之后繼續(xù)飼養(yǎng)4周，在第16周即可獲得浸潤性尿路上皮腫瘤。經(jīng)實驗證明，通過 該方法獲得浸潤性尿路上皮腫瘤的成功率為100%。


圖1是根據(jù)本發(fā)明第一實施方式的膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法 流程圖。
具體實施例方式在以下的敘述中，為了使讀者更好地理解本申請而提出了許多技術(shù)細(xì)節(jié)。但是，本 領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解，即使沒有這些技術(shù)細(xì)節(jié)和基于以下各實施方式的種種變化 和修改，也可以實現(xiàn)本申請各權(quán)利要求所要求保護(hù)的技術(shù)方案。為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明的實施 方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。本發(fā)明第一實施方式涉及一種膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法，具體 流程如圖1所示。在步驟110中，選擇實驗動物。在本實施方式中，選擇6周齡的雌性大鼠(如近交 系F344大鼠、Wistar大鼠、SD大鼠均可)，體重(150±8)g。接著，在步驟120中，配制化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲的溶液。具體地說，將-20 V 冷凍保存的N-甲基亞硝基脲(N-methyl-nitroso-urea，簡稱“MNU”)置于4°C放置12小 時，使用時將M NU溶解于50mM枸櫞酸緩沖液(PH 6.0)配成濃度為(10mg/ml)的MNU 溶液。接著，在步驟130中，對雌性大鼠的膀胱灌注化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲。通過 控制N-甲基亞硝基脲的膀胱灌注量和實驗動物的生長時間獲得在膀胱原位的不同分期的 尿路上皮腫瘤。在本實施方式中，以獲得的尿路上皮腫瘤為浸潤性尿路上皮腫瘤為例進(jìn)行 具體說明。
首先，進(jìn)行1.2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(30mg/kg)。然后，仰臥位固定四肢， 尿道口周圍以絡(luò)合碘消毒，選用硬膜外麻醉用導(dǎo)管IOcm長，石蠟油潤滑后以鈍頭插入尿道 3cm進(jìn)入膀胱，用Iml皮試注射器抽出膀胱內(nèi)尿液，大鼠膀胱容量約為0. :3ml，導(dǎo)尿后給予每 只大鼠膀胱灌注MNU 0. 2ml (即每只大鼠每次灌注^iigMNU)，隔周灌注一次，灌注6次 (即每只大鼠一共灌注iangM NU)之后繼續(xù)飼養(yǎng)4周，即第16周即可得到浸潤性尿路上皮 腫瘤，不但操作簡單，而且經(jīng)實驗證明，采用該方法獲得的在原位器官(即膀胱)發(fā)生的浸 潤性尿路上皮腫瘤的成功率為100%。在本實施方式中，由于腫瘤是自發(fā)性生長于膀胱，區(qū)別于腹腔或皮下移植的腫瘤， 因而更接近人患膀胱腫瘤時器官的病理生理狀態(tài)，最接近人的患病狀態(tài)，是模擬人患膀胱 腫瘤的理想模型。適合對在體器官腫瘤的研究，例如(1)可以觀察藥物、區(qū)域熱療等方法 治療后腫瘤及機體的病理改變、病理生理改變。(2)適合針對腫瘤在盆腔局部浸潤以及遠(yuǎn)處 轉(zhuǎn)移情況的研究。而且，由于本實施方式中采用雌性大鼠作為實驗動物，不但成本低，可以保證研究 所需動物數(shù)量，從而獲得比較多的動物模型數(shù)量，而且更便于尿道插管，避免了雄性大鼠因 有陰莖骨阻礙導(dǎo)致尿道插管困難，損傷尿道而導(dǎo)致尿道出血、感染、狹窄。此外，可以理解，也可以選用其他類型的雌性大鼠，甚至也可以其他類型的實驗 鼠，如雄性大鼠、裸小鼠等等。雖然在成本或操作簡易度上不如選用雌性大鼠，但也可以基 本達(dá)到實驗?zāi)康?。另外，本實施方式中灌注的化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲為濃度為的N-甲基 亞硝基脲溶液。但在實際應(yīng)用中，也可以通過其他方法配置N-甲基亞硝基脲溶液，所配置 的N-甲基亞硝基脲溶液也可以是0.8%、1. 2%等其他濃度，只需適當(dāng)調(diào)整灌注的溶液量， 保證每只大鼠每次灌注^IigMNU即可。本發(fā)明第二實施方式涉及一種膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法。第二 實施方式與第一實施方式基本相同，區(qū)別主要在于在第一實施方式中，通過控制N-甲基亞硝基脲的膀胱灌注量和實驗動物的生長 時間的方式，獲得的是浸潤性尿路上皮腫瘤。然而在本第二實施方式中，通過控制N-甲基 亞硝基脲的膀胱灌注量和實驗動物的生長時間的方式，獲得的是淺表性尿路上皮腫瘤。具體地說，采用與第一實施方式中類似的方法，為每只雌性大鼠灌注2mg濃度為 的N-甲基亞硝基脲的溶液，隔周灌注一次。與第一實施方式不同的是，在第一實施方式中灌注6次，而在本實施方式中只需灌注4次(即每只大鼠一共灌注8mgM NU)，之后繼續(xù)飼 養(yǎng)1周，在第8周即可獲得淺表性尿路上皮腫瘤。經(jīng)實驗證明，通過該方法獲得淺表性尿路 上皮腫瘤的成功率為100%。由此可見，本實施方式不但操作簡單，而且通過控制MNU膀胱灌注量及動物的生 長時間，獲得在原位器官(即膀胱)發(fā)生的淺表性尿路上皮腫瘤的成功率也極高。雖然通過參照本發(fā)明的某些優(yōu)選實施方式，已經(jīng)對本發(fā)明進(jìn)行了圖示和描述，但 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對其作各種改變，而不偏離本發(fā) 明的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.一種膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法，其特征在于，包含以下步驟對實驗動物的膀胱灌注化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲；通過控制所述N-甲基亞硝基脲的膀胱灌注量和所述實驗動物的生長時間獲得在膀胱 原位的不同分期的尿路上皮腫瘤。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法，其特征在于， 所述不同分期的尿路上皮腫瘤為淺表性尿路上皮腫瘤和浸潤性尿路上皮腫瘤。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法，其特征在于， 所述實驗動物為雌性大鼠。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法，其特征在于， 通過以下控制所述N-甲基亞硝基脲的膀胱灌注量和所述實驗動物的生長時間的方式，獲 得淺表性尿路上皮腫瘤為每只所述雌性大鼠灌注ang的所述N-甲基亞硝基脲，隔周灌注一次，灌注4次，之后 繼續(xù)飼養(yǎng)1周，在第8周即可獲得淺表性尿路上皮腫瘤。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法，其特征在于， 通過以下控制所述N-甲基亞硝基脲的膀胱灌注量和所述實驗動物的生長時間的方式，獲 得浸潤性尿路上皮腫瘤為每只所述雌性大鼠灌注ang的所述N-甲基亞硝基脲，隔周灌注一次，灌注6次，之后 繼續(xù)飼養(yǎng)4周，在第16周即可獲得浸潤性尿路上皮腫瘤。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法，其特征在于， 所述雌性大鼠為近交系F344大鼠、Wistar大鼠或SD大鼠。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法， 其特征在于，在對實驗動物的膀胱灌注化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲之前，還包含以下步 驟將-20°C冷凍保存的N-甲基亞硝基脲置于4°C放置12小時，使用時將N-甲基亞硝基 脲溶解于50mM枸櫞酸緩沖液，配成濃度為1 %的N-甲基亞硝基脲溶液，其中所述枸櫞酸緩 沖液的氫離子濃度指數(shù)PH值為6. 0 ；所述灌注的化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲為所述濃度為的N-甲基亞硝基脲溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法， 其特征在于，在所述對實驗動物的膀胱灌注化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲的步驟中，包含以 下子步驟對所述實驗動物插尿管，通過所插的尿管灌注所述N-甲基亞硝基脲。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)療領(lǐng)域，公開了一種膀胱原位的尿路上皮腫瘤動物模型建立方法。本發(fā)明中，用化學(xué)致癌劑N-甲基亞硝基脲灌注實驗動物的膀胱進(jìn)而誘發(fā)膀胱自發(fā)性生長的尿路上皮腫瘤，通過控制N-甲基亞硝基脲的膀胱灌注量和實驗動物的生長時間可獲得在膀胱原位的不同分期的尿路上皮腫瘤。由于腫瘤是自發(fā)性生長于膀胱，區(qū)別于腹腔或皮下移植的腫瘤，因而更接近人患膀胱腫瘤時器官的病理生理狀態(tài)，最接近人的患病狀態(tài)，是模擬人患膀胱腫瘤的理想模型。
文檔編號A61K49/00GK102038961SQ200910201608
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月12日
發(fā)明者劉紅耀, 張旭, 米振國 申請人:劉紅耀, 張旭, 米振國