專利名稱：：含有冰片、麝香的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物組合物，具體地說，是根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論研制的含有冰片和麝香以及天然植物提取物或單體的藥用組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：冰片、麝香同為芳香開窮類中藥的常用代表藥物。冰片分為天然冰片與合成冰片兩大類。其中，龍腦冰片主要為右旋龍腦，是冰片中的正品，艾片主要為左旋龍腦，而合成冰片除含有龍腦外還含有大量的龍腦的差向異構(gòu)體異龍腦。麝香也分為天然與人工合成兩類，目前由于法規(guī)的限制，藥物中絕大多數(shù)使用的是人工麝香，主要成分為麝香酮、雄甾酮、麝香-l等糖蛋白、膽固醇等(劉養(yǎng)鳳，中醫(yī)藥學(xué)報(bào)2003年，31(6):55-58;何曉靜，華西藥學(xué)雜志2005年，20(4):323-325;山東醫(yī)藥工業(yè)2002年，21(D:26-27;時(shí)針國(guó)醫(yī)國(guó)藥2004年，15(4)4248-249;中藥新藥與臨床藥理2000年，11(4):208-255)。與冰片不同的是，麝香還具有較強(qiáng)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮和抑制雙向性作用、耐缺氧作用、心血管活性、抗炎作用等藥理活性。目前，冰片和/或麝香在臨床上的應(yīng)用(尤其是心腦血管病)極為廣泛，例如復(fù)方丹參類、冠心蘇合丸、安宮牛黃丸、華佗再造丸、醒腦靜等均含有冰片和/或麝香。在這類傳統(tǒng)成方中，多利用了冰片"芳香走竄、引藥上行"、"獨(dú)行則勢(shì)弱、佐使則有功"之功效，作為"藥引"來增加其他藥物的治療效果，同時(shí)又利用了麝香"芳香走竄、開竅醒腦(透過血腦屏障)"的功效，產(chǎn)生"歸經(jīng)入腦"效果。多年來，許多學(xué)者基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論，對(duì)冰片和麝香的藥效學(xué)、藥物動(dòng)力學(xué)及安全性等方面做了廣泛工作，取得了許多新進(jìn)展。憑借這些研究進(jìn)展，學(xué)者們嘗試著將冰片和/或麝香與其他活性成分組合，以期獲得更佳的療效。例如，ZL03110967.5、ZL200310105455.1、趙紅梅等(吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)2004年，30(3):393_395)、林甲宜等(中成藥2004年26巻增刊13-16)、聶有智等(山東中醫(yī)雜志1998年17巻(9):404-405)、李向新(現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志2004年13巻19期2541-2542)、張莉等(沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)2002年19巻1期:41-42)、余尚貞等(廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)2004年21巻5期382-384、薛亞鳳等(吉林中醫(yī)藥2001年6期34)、陳蘇等(江西中醫(yī)藥1999年30巻5期9-10)，以及成方麝香安心寧、醒腦靜注射液等，廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病的治療，均取得了一定的成果。然而，上述復(fù)方遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床上的需求。這是因?yàn)橐环矫?，已有的?fù)方通常是按"辨證論治"的原則組成的，這對(duì)于致病機(jī)理復(fù)雜、伴有不同類別并發(fā)癥的疾病，已有的含冰片和麝香復(fù)方制劑難以多方位奏效。更為關(guān)鍵的是，這些大復(fù)方藥物組合成分過于復(fù)雜，各成分間的相互作用不明，不符合現(xiàn)代藥物的發(fā)展潮流，很難保證質(zhì)量的均一性。在前期工作中，我們?cè)?jīng)對(duì)"冰片+芍藥"進(jìn)行了細(xì)致的研究，發(fā)現(xiàn)了有益的效果例如，芍藥與冰片的組合可以明顯增強(qiáng)冰片固有的藥理作用，同時(shí)還降低了冰片的毒性。令人出人意料的是，當(dāng)將冰片或芍藥分別與其他活性成分(例如丹參)組合時(shí)，"冰片+丹參"或"芍藥+丹參"的組合，均不具有"冰片+芍藥+丹參"組合的效果。這表明，上述有益效果并非僅僅來源于冰片，即并非單純地利用了傳統(tǒng)復(fù)方中冰片"芳香走竄、引藥上行"、"獨(dú)行則勢(shì)弱、佐使則有功"之功效，而是來源于"冰片+芍藥"這一基礎(chǔ)組合。這一發(fā)現(xiàn)，也在一定程度上驗(yàn)證了這樣的推論，即復(fù)方制劑的物質(zhì)基礎(chǔ)不僅是每種藥物有效成分的總和，而且包括復(fù)方制劑過程中各成分的相互作用，這種相互作用既可能包括簡(jiǎn)單的物理變化也可能包括復(fù)雜的化學(xué)變化，各種成分的相互作用可以改變各種成分的溶出性質(zhì)和聚集狀態(tài)，甚至可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)后產(chǎn)生新的物質(zhì)。換言之，復(fù)方效用是特定效應(yīng)條件下復(fù)方化學(xué)組分相互關(guān)系的綜合表現(xiàn)，一些所謂的活性成分離開復(fù)方條件則可能無明顯作用?？紤]到上述推論，有關(guān)"冰片+芍藥"的研究結(jié)果可能代表著某種研究趨勢(shì)。同時(shí)，這種研究結(jié)果也是誘人的，它提醒著學(xué)者們極有可能還存在著類似的其他組合。本申請(qǐng)?jiān)噲D對(duì)含有冰片、麝香、芍藥和"活血化瘀"類藥物的組合進(jìn)行研究，以期通過它們之間的加合、甚至協(xié)同作用來減少用藥量，從而在確保(甚至提高)療效的同時(shí)進(jìn)一步降低不良反應(yīng)?？梢灶A(yù)期的是，本領(lǐng)域?qū)@種安全有效的天然藥物(組合)有著迫切的需求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人在這方面進(jìn)行了深入的探索，并取得了諸多喜人的結(jié)果。在本發(fā)明人先前的試驗(yàn)中，已經(jīng)表明，芍藥與冰片、麝香的組合可以明顯增強(qiáng)冰片和麝香固有的藥理作用，比如抗腦缺血再灌注損傷作用、抗炎性反應(yīng)作用等。并且三者的組合還降低了冰片的毒性，這對(duì)于進(jìn)一步促進(jìn)冰片的廣泛應(yīng)用具有現(xiàn)實(shí)意義。同時(shí)，當(dāng)在上述芍藥與冰片、麝香組合中加入具有血管活性的燈盞花時(shí)，可以具備更為全面的治療效果。于是，我們進(jìn)一步進(jìn)行了芍藥、冰片、麝香與其他血管活性藥物組合的試驗(yàn)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，組合物同樣具備更好的效果。因此，本發(fā)明的目的在于提供具有協(xié)同增效和/或減毒作用的"冰片+麝香+芍藥+組分d"組合，用于治療和/或預(yù)防心腦血管、老年癡呆癥、腦細(xì)胞保護(hù)、糖尿病等疾病。在本發(fā)明藥物組合物中，可以選擇芍藥、麝香、冰片藥味直接粉碎成粉入藥，也可以相當(dāng)于上述天然藥物材生藥量的提取物或其他形式入藥。因此，本發(fā)明藥物組合物的活性組分包括藥材原粉、脂或水溶性提取物(或有效部位)、或有效成分、或單體，或者采用現(xiàn)有技術(shù)中已有的其他制品形式。例如，所述活性組分包括a.皿是指龍腦香樹脂的加工品或菊科植物艾納香葉提取的結(jié)晶，或以樟腦、松節(jié)油等為原料，經(jīng)化學(xué)方法合成的精制品。包括龍腦冰片(右旋龍腦)、艾片(左旋龍腦)、合成冰片(含有龍腦及異龍腦)。b.皿是指天然或人工麝香，或含有麝香酮、雄甾酮、和/或麝香-l等糖蛋白、膽固醇等的麝香提取物，或麝香酮單體。c.芍藥是指芍藥(白芍、赤芍、川赤芍)的干燥根粉末，含有芍藥總苷類化合物(優(yōu)選為芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷)的提取物，或芍藥苷單體。另外，研究表明，同時(shí)含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥新苷、丹皮酚、丹皮酚原苷、丹皮酚苷、芍藥苷元等的有效部位也是有益的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，本發(fā)明芍藥苷類的來源并不局限于芍藥，含有芍藥苷類的其他植物(例如牡丹皮)也可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，其提取和制備方法為已知技術(shù)，在此不作贅述。在上述組合中，冰片的含量不低于lwt%。所述活性組分d選自以下dl-d6中的一種dl.，是指主要含有丹酚酸*和/或丹參酮*的丹參提取物；或丹參水溶性提取物，主要含有以丹酚酸A、丹酚酸B、原兒茶醛、丹參素為代表的酚酸類成分(總酚酸含量40%、優(yōu)選60%以上)，或丹參酚酸單體或其藥用鹽(例如鎂鹽)，或丹參酚酸單體的混合物；或丹參脂溶性提取物，主要含有丹參酮(丹參酮含量50%、優(yōu)選80%以上，例如丹參酮1、丹參酮IL、丹參酮1Ie、隱丹參酮、二氫丹參酮I等)，或丹參酮單體或其藥用鹽(例如磺酸鈉鹽)，或丹參酮單體的混合物；或d2.:是指銀杏提取物(例如低級(jí)醇、丙酮、乙酸乙酯的銀杏葉提取物)，主要含有銀杏內(nèi)酯*和/或銀杏黃酮*作為活性成分的銀杏提取物(例如標(biāo)準(zhǔn)提取物Egb)，或銀杏黃酮單體和銀杏內(nèi)酯單體，或銀杏內(nèi)酯單體，或銀杏黃酮單體。其中，所述銀杏內(nèi)酯是指含有各種銀杏萜類內(nèi)酯物質(zhì)(二萜內(nèi)酯A、B、C、M、J，倍半內(nèi)酯等)的混合物；"銀杏內(nèi)酯單體"是指上述萜類內(nèi)酯中各種內(nèi)酯類物質(zhì)的單體和/或其衍生物、或其化學(xué)修飾物、類似物。所述銀杏黃酮是指含有各種銀杏黃酮物質(zhì)(銀杏黃酮及其苷、總黃酮醇及其苷、雙黃酮、兒茶素等)的混合物；"銀杏黃酮單體"是指上述黃酮中各種黃酮類物質(zhì)的單體和/或其衍生物、或其化學(xué)修飾物、類似物；或d3.皿是指含有紅花總黃色素(例如紅花黃色素〃、B，含量50X以上)的紅花提取物，(羥基)紅花黃色素單體，或者這些單體的混合物；或d4.，是指含有大豆黃酮、大豆黃酮苷、葛根素*、二葡萄糖大豆苷、甲氧基葛根素、7-木糖-葛根素、二乙?；?葛根素、芒柄花素等多種異黃酮類的葛根提取物，或葛根總黃酮，或葛根素單體及其衍生物，或大豆黃酮、或大豆異黃酮單體，或者這些單體的混合物；或(15.，是指含有川芎嗪*、川芎酚、阿魏酸*、揮發(fā)油等的川芎提取物，或川芎嗪?jiǎn)误w或者川芎嗪衍生物(例如鹽酸川芎嗪)，或阿魏酸/鈉及其衍生物(例如阿魏酸川芎嗪)，或者這些單體的混合物；或d6.A#:是指主要含有人參總皂苷*的人參提取物，或人參皂苷單體；含有人參皂苷的其他植物(例如三七等)也可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。從表面上看，上述組分dl-d6似乎是不同的，但是從化學(xué)構(gòu)成上來分析，這些植物中已知的主要藥理活性成分可歸類為具有"活血化瘀"作用的兩大類成分黃酮、酚酸。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論的角度而言，上述植物中的黃酮類成分基本都具有擴(kuò)張血管、改善組織缺血、抗氧化、改善血液流變學(xué)等藥理功效；而酚酸類則具有更多樣性的作用，如抗炎性反應(yīng)、內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)等藥理功效。例如，以葛根素、丹參、銀杏葉、三七皂苷、川芎嗪、或紅花入藥而得的成藥，在臨床上也均以冠心病、腦卒中、糖尿病和/或老年癡呆為主要適應(yīng)癥。這充分證明，這些植物提取物在藥理功效和主要活性成分的化學(xué)構(gòu)成上具高度的"相似性"，這已為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。同樣地，獲得上述提取物或單體也屬于常規(guī)技術(shù)。當(dāng)我們?cè)噲D從現(xiàn)有技術(shù)中探尋這種"冰片+麝香+芍藥+組分d"為基礎(chǔ)的藥物結(jié)合的依據(jù)時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)迄今為止的已有技術(shù)沒有提供科學(xué)依據(jù)，甚至于沒有類似的暗示。在本發(fā)明藥物組合物中，各組分的含量為組分a，l-15、優(yōu)選2-10、更優(yōu)選5_10重量份；禾口組分b，5-65、優(yōu)選10-50、更優(yōu)選15-45重量份；禾口組分c，以芍藥苷計(jì)，為5-100、優(yōu)選10-80、更優(yōu)選20-60重量份；禾口組分d，以標(biāo)有符號(hào)*的成分計(jì)，為5-100、優(yōu)選10-80、更優(yōu)選20_60重量份。另外，在上下文中，"芍藥苷+麝香酮+冰片+丹參素5:2:3:i"，表示這四種活性組分的重量配比為5:2:3:i。下面的試驗(yàn)將證實(shí)按照本發(fā)明描述的具有上述定義之"冰片"、麝香、"芍藥"與組分d的組合，具有本發(fā)明所述的有益效果。鑒于現(xiàn)有技術(shù)中業(yè)已存在著相當(dāng)成熟且有效的制備/提純上述定義組分的技術(shù)，在此不作重點(diǎn)描述。例如，可以采用現(xiàn)代提取和分離技術(shù)，以提高活性物質(zhì)的純度、盡量除去不需要的雜質(zhì)，例如中國(guó)專利申請(qǐng)ZL200410096958、ZL200410041752、ZL011103787、ZL021109737、ZL021332983、ZL031131263、ZL02156681X、ZL011301309、ZL2004100413049、ZL00120986、ZL2003101134541、ZL021179239、ZL02149694、ZL92108623、Z固113019、ZL02153750X、ZL03117754、ZL03141616、JP2000247890A、GB2317613A、中藥材2000年23(6):316-6、延邊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)1995年18巻(1):73-78)等。可針對(duì)上述組分的理化特性和體內(nèi)吸收特點(diǎn)，采用標(biāo)準(zhǔn)制劑技術(shù)，加入藥用輔料制成適宜口服或非腸道給藥劑型，類似技術(shù)也已相當(dāng)成熟有效，例如口崩片(ZL2003101133322、ZL200310123852、ZL03102405、ZL200410016510、ZL200410041256)、緩控制劑(ZL011333332、ZL011387106、ZL02116223、ZL200310110709、ZL01117620、ZL02109758、ZL02116795、ZL02129313、ZL02134118、ZL03100021、ZL03133897)、環(huán)糊精包合物(ZL01141436、ZL02108778、ZL200310125175、中國(guó)藥學(xué)雜志2002年37巻(9):673-75)、固體分散物(ZL001194313)、注射劑(ZL001215329、ZL031399428、ZL031573150、ZL2003101241702、ZL021337241、ZL95104038、ZL97101107、ZL02155001、ZL021332983、ZL031279953、ZL03141614、ZL03113037、ZL2003101210259、ZL200410013845)、粉針(ZL200410037717、ZL031323820、ZL021446008、ZL200410002103、ZL03131959.9、ZL200410013937、ZL2003101210259、ZL200410000912)、滴丸(ZL200310107292、ZL03136485、ZL01133515、ZL03135325、ZL200310119222)、分散片(ZL03125462、ZL03112974、ZL02153445)、微或納米制劑(ZL021378630、ZL00119579)、含磷脂制劑(ZL001278126、ZL031320627、ZL01139971、ZL03128337、中國(guó)中藥雜志2005年30巻4期260-263)。本發(fā)明藥物組合物，由10-90wt.%的活性組分和90-lOwt.%的藥用輔料組成，可用于治療昏迷、高熱、心腦血管疾病、老年癡呆癥、腦細(xì)胞保護(hù)，以及用于治療和預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥、預(yù)防心腦血管疾病的復(fù)發(fā)。上述藥物組合物克服了已有藥物存在的作用單一、服藥量大等缺點(diǎn)，代表了天然藥物治療和預(yù)防上述疾病的新趨勢(shì)。藥理藥效學(xué)試驗(yàn)研究—.基礎(chǔ)研究1.協(xié)同抗炎作用1.1對(duì)急性滲出性炎癥(二甲苯所致小鼠耳腫脹)的影響61.1.1材料本發(fā)明藥物組合A(芍藥提取物+麝香+冰片+丹參提取物5:i:i:2)，分為15、30、50mg/kg組；本發(fā)明藥物組合B(芍藥苷+麝香酮+冰片+丹參素5:2:3:1)，分為io、is、30mg/kg組;本發(fā)明藥物組合c(芍藥提取物+麝香+冰片+銀杏提取物2:5:3:io)，分為15、30、50mg/kg組;本發(fā)明藥物組合D(芍藥苷+麝香+冰片+銀杏黃酮3:i:8:2)，分為10、20、40mg/kg組；空白對(duì)照組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥相當(dāng)于同樣用藥量的芍藥提取物；10%麝香組；芍藥提取物+麝香5:1，30mg/kg組；阿司匹林0.2g/kg組；丹參素2mg/kg組；銀杏黃酮組20mg/kg。1.1.2方法與結(jié)果ICR小鼠，體重21-23g，按體重隨機(jī)均分組，每組10只，連續(xù)灌胃給藥4天(0.4ml/20g)，空白對(duì)照組給相同體積的蒸餾水。于末次給藥lh后，將60iU二甲苯均勻涂于每鼠右耳兩面，40min后將小鼠頸椎脫臼處死，用直徑8mm鞏膜穿孔器取下左右耳片稱重，求出兩耳重量差、計(jì)算腫脹率，t檢驗(yàn)比較組間差異，結(jié)果見表1。表1對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(X士SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>芍藥提取物+麝香3069.27±26.51本發(fā)明組合物A(高)本發(fā)明組合物A(中)本發(fā)明組合物A(低)50301567.23±29.8369.37±28.32**91.66±30.36本發(fā)明組合物B(高)本發(fā)明組合物B(中)本發(fā)明組合物B(低)30151066.61±30.2168.37±22.89**89.98±24,06本發(fā)明組合物C(高)本發(fā)明組合物C(中)本發(fā)明組合物c(低)50301562.87±31.02**A#'65.56±25.18**#A77.87±22.67*本發(fā)明組合物D(高)本發(fā)明組合物D(中)本發(fā)明組合物D(低)40201063.45±29.31"A#'66.09±27.09"#A80.25±26.76*注腫脹率=[(右耳重-左耳重)/左耳重]X100X;與空白對(duì)照組比較:*P<0.05，**P<0.01;與芍藥組比較AP<0.05，△△P<0.01;與麝香組比較，#P<0.05。與丹參素或銀杏黃酮比較~P<0.011.2對(duì)二甲苯致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響1.2.1材料本發(fā)明藥物組合物A(芍藥提取物+麝香+冰片+60X(紅花黃色素)紅花提取物12:2:3:20)，分為10、20、40mg/kg組；本發(fā)明藥物組合物B(芍藥提取物+麝香+冰片+60X(葛根素)葛根提取物2:2:3:12)，分為10、30、50mg/kg組陽(yáng)性對(duì)照藥相當(dāng)于同樣藥量的芍藥提取物；10%麝香組；芍藥提取物+冰片10:1，30mg/kg組；阿司匹林O.2g/kg組；60%(紅花黃色素)紅花提取物組15mg/kg;60%(葛根素)葛根提取物15mg/kg。1.2.2方法與結(jié)果參照《中藥藥理研究方法學(xué)》制作動(dòng)物炎癥模型，結(jié)果見下表2:表2對(duì)二甲苯所致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響(文士SD，n=10)組別OD值8<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與芍藥提取物比較，△P<0.05，△△P<0.01;與麝香比較，#P<0.05，##P<0.01。與紅花提取物或葛根提取物比較'P<0.01結(jié)果表明本發(fā)明組合物對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹和對(duì)二甲苯所致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性有明顯的抑制作用，具有抑制炎癥早期毛細(xì)血管通透性增高的作用，與對(duì)照組相比具有顯著性差異，與同等劑量的單組分提取物組相比，也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，高中劑量組與空白對(duì)照組比較P<0.05-0.01，同時(shí)也做了其他抗炎實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，本發(fā)明組合物在抑制蛋清所致大鼠足跎腫脹中也顯示了顯著的效果，而且效果明顯優(yōu)于芍藥提取物、麝香組和單組分提取物組，提示本發(fā)明組合物在其單用各自具有抗炎作用的基礎(chǔ)上，一定比例的配伍合用更可以促進(jìn)芍藥/冰片/麝香或其他單味藥的抗炎作用，起到協(xié)同抗炎的作用。2提高藥物活性成分在體內(nèi)的吸收2.1材料本發(fā)明藥物組合物芍藥苷+麝香酮+冰片+葛根素6:4:3:i;空白對(duì)照組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥相當(dāng)于同樣用藥量的單組分的芍藥苷、麝香酮、冰片以及葛根素。2.2方法與結(jié)果將大鼠分為單用芍藥苷、麝香酮組、冰片葛根素組和本發(fā)明藥物組合物組，給藥后(分別以口服和靜脈注射兩種方式給藥)不同時(shí)間點(diǎn)，用氣相色譜法測(cè)定血藥濃度，實(shí)驗(yàn)表明，麝香酮和冰片能夠很快地被吸收，從而提高其血藥濃度，口服給藥在5-6分鐘能夠透過血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，靜脈給藥可以在2分鐘左右透過血腦屏障；同樣的方法(氣相色譜法)，測(cè)定芍藥苷和葛根素的血藥濃度，也證明了麝香酮和冰片能促進(jìn)藥物(芍藥苷和葛根素)吸收；同時(shí)對(duì)三者在l-5:1-5:l-5的比例范圍內(nèi)重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，結(jié)果均證實(shí)了麝香酮與芍藥苷和冰片合用提高藥物吸收的作用。二.心腦血管方面的藥理作用1.對(duì)全腦缺血再灌注大鼠腦組織氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響1.1材料本發(fā)明藥物組合物A(芍藥苷+麝香+冰片+川芎嗪l:2:3:6，40mg/kg灌胃)；本發(fā)明藥物組合物B(芍藥苷+麝香+冰片+川芎嗪5:3:1:1，40mg/kg灌胃)；陽(yáng)性對(duì)照藥芍藥苷10mg/kg、麝香酮+冰片混懸液12mg/kg、川芎嗪20mg/kg;1.2方法造模前每天分兩次給藥，連續(xù)3天，于第4天上午給藥30分鐘后進(jìn)行手術(shù)。按照標(biāo)準(zhǔn)方法造模，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，再灌注6h，斷頭處死，取大腦迅速置于冰盤上取右側(cè)腦自額極至枕葉分為A、B、C、D等分，取C、D腦片稱重，按照l(shuí)ml/50mg加入甲醇勻漿，離心收集上清液，蒸去甲醇，再加入80%乙醇，超聲波處理，離心，收集上清液用于檢測(cè)腦組織氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)中大部分神經(jīng)遞質(zhì)是氨基酸類，包括Y-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、天門冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)，生理情況下，Glu、Asp對(duì)神經(jīng)元有極強(qiáng)的興奮作用，GABA、Gly神經(jīng)元行使作用，為重要的抑制性氨基酸。分析方法反相HPLC，峰面積外標(biāo)法，然后統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。1.3結(jié)果見下表3。表3各組全腦缺血再灌注大鼠腦組織氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量(ymol/g)GluAspGABAGly假手術(shù)組3.77±0.913.67±1.0110.69±3.402.61±0.58模型組5.59±0.93**5.79±0.96**10.95±4.003.41±0.62*芍藥苷5.22±1.13**4.19±0.97AA15.65±3.12*厶4.11±0.59"A川芎嗪4.57±1.09**4.21±0.88AA14.67±3.02'A4.19±0.61**A麝香酮+冰片5.18±1.06**4.20±0.56AA16.71±3.44*A4.12±0.66**A本發(fā)明組合物A4.23土0.86*厶厶#4.00±0.65AAA19.39±3.11*AAflA4.20±0.56**AA本發(fā)明組合物B4.19±0.77*AAS4.01±0.62AAA18.89±4.03*AA#A4.19±0.32**AA與假手術(shù)比較Jp<0.05**p<0.01;與模型組比較，Ap<0.05，AAP<0.01;與麝香+冰片組比較，#P<0.05;與川芎嗪比較~P<0.051.4結(jié)論本發(fā)明藥物組合物各組、芍藥苷注射液、麝香酮+冰片注射液和川芎嗪，在大鼠腦組織缺血45分鐘，再灌注6小時(shí)后(Glu、Asp明顯升高)，對(duì)Asp有一定程度的降低，本發(fā)明組合物組最明顯；而芍藥苷注射液、麝香酮+冰片注射液和川芎嗪對(duì)Glu降低不明顯，本發(fā)明藥物組合物兩組均可以降低Glu，與對(duì)照藥組相比具有顯著性差異；GABA和Gly的升高也是本發(fā)明組合物組最明顯，與芍藥苷、麝香酮+冰片組和川芎嗪比較，組間具有顯著性差異，可能是芍藥苷和麝香提取物(麝香酮)以及冰片的作用機(jī)制不同而共同帶來的有益效10果，說明本發(fā)明組合物的組合通過降低缺血區(qū)腦組織中的Asp，提高了GABA和Gly的含量以對(duì)抗興奮性氨基酸的毒性，從而保護(hù)腦缺血后繼發(fā)神經(jīng)元的損傷，這些雖然是芳香開竅藥(麝香酮和冰片)的藥用機(jī)理之一，但本發(fā)明組合物無疑提高了藥效，發(fā)揮了協(xié)同的作用。2.對(duì)防止血管成形術(shù)后再狹窄血管成形術(shù)后再狹窄(RS)，屬于血瘀證范疇，其發(fā)病率高，血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)的異常增殖，是RS的中藥病理特征，因此抑制VSMCs異常增殖成為世界性心血管研究預(yù)防RS的重要手段。2.1材料本發(fā)明藥物組合物A(芍藥苷+麝香+冰片+人參總皂苷3:2:6:2，6、12mg/kg注射);本發(fā)明藥物組合物B(芍藥苷+麝香+冰片+銀杏內(nèi)酯1:6:2:l，4、8mg/kg注射)；本發(fā)明藥物組合物c(芍藥苷+麝香+冰片+丹參酮io:i:2:i，5、i0mg/kg注射)；本發(fā)明藥物組合物D(芍藥苷+麝香+冰片+葛根素1:2:1:10，6、12mg/kg注射)；空白對(duì)照組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥芍藥苷注射液、麝香酮注射液、銀杏內(nèi)酯lmg/kg;丹參酮lmg/kg;葛根素6mg/kg;人參總皂苷各8mg/kg;2.2方法血管平滑肌細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定，參照文獻(xiàn)(PiperHM編輯，CellCultureTechinquesinHeartandVesselResearch.Springer—Verlag-Germany.1990:280)。培養(yǎng)貼壁細(xì)胞，再換成DMEM(含青霉素100U/ml，鏈霉素100iig/ml)繼續(xù)培養(yǎng)使細(xì)胞生長(zhǎng)同步，最后隨機(jī)加入藥物，各濃度用DMEM稀釋至10iU/孔。3H-TdR摻入實(shí)驗(yàn)置換每孔1ml的DMEM，加入luCi的3H_TdR，測(cè)定各孔的CPM值。細(xì)胞存活率=貼壁細(xì)胞/總細(xì)胞數(shù)(貼壁細(xì)胞+不貼壁細(xì)胞)2.3結(jié)果本實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)法分析，各組藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響與對(duì)平滑肌細(xì)胞3H-TdR摻入基本一致，并且測(cè)得細(xì)胞存活率沒有明顯影響，均在90%以上。本發(fā)明藥物組合物各組、芍藥苷注射液和麝香酮注射液對(duì)血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)的異常增殖均具有抑制作用，但本發(fā)明藥物組合物各組最強(qiáng)，與芍藥苷和麝香酮比較，組間具有顯著性差異，可能是芍藥苷和麝香提取物(麝香酮)以及冰片的作用機(jī)制不同而共同帶來的有益效果。三.促醒作用1.材料小鼠昆明種，體重19-21g，雌雄各半。試藥丹參酮+芍藥注射液(自制)；紅花提取物注射液(自制)；葛根提取物(自制)；麝香酮注射液(自制)；安鈉咖注射用原料(上海第十四制藥廠)；本發(fā)明組合物A(芍藥+麝香+冰片+川芎提取物，重量比2:i:i:5)組；本發(fā)明組合物8(芍藥+麝香+冰片+人參提取物5:i:3:i)。2.方法與結(jié)果小鼠隨機(jī)分組，分別尾靜脈注射氯化鈉注射液、安鈉咖生理鹽水溶液、丹參酮+芍藥注射液、紅花提取物注射液、葛根提取物；麝香酮注射液等試藥，每天一次，連續(xù)給藥2天，于末次給藥后15min，腹腔注射戊巴比妥鈉生理鹽水溶液(3mg/ml)0.3ml/20g，記錄小鼠翻正反射消失至恢復(fù)的時(shí)間，計(jì)算各組均值和標(biāo)準(zhǔn)差，進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果見表4。表4對(duì)小鼠的促醒作用(文士SD，n=10)組別劑量睡眠時(shí)間(分鐘)生理鹽水組一29.9±6.3麝香酮組10mg/kg20.1±4.8*A#紅花組15mg/kg26.8±5.7葛根提取物20mg/kg28.9±6.9丹參酮+芍藥組20tng/kg26.1±5.5安鈉咖組2mg/kg11.5±4.3**AA##本發(fā)明組合物A20mg/kg15.2±4.1"A#本發(fā)明組合物B20mg/kg16.1±4.7**A#與空白對(duì)照組比較,P〈0.05，**P<0.01;與紅花和葛根提取物AP<0.05，△△P<0.01;與丹參酮+芍藥比較#P<0.05，##P<0.01。3.結(jié)論與對(duì)照組相比，本發(fā)明組合物A、B兩組、對(duì)照藥安鈉咖組均表現(xiàn)出促醒的作用，而紅花和葛根提取物組則無明顯粗性作用。與丹參酮+冰片+芍藥比較，本組合物兩組呈現(xiàn)顯著性差異，表明本發(fā)明組合物具有良好的促醒藥理活性。四.糖尿病方面的藥理作用1.材料本發(fā)明藥物組合物芍藥+麝香+冰片+丹參提取物組(重量比5:i:2:4)正常對(duì)照組生理鹽水；糖尿病組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥芍藥苷組；芍藥+麝香(重量比2:1)組，80mg/kg灌胃；芍藥+麝香+冰片(重量比2:1:2)組，80mg/kg灌胃；丹參提取物組；降糖靈片；2.方法與結(jié)果糖尿病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒍?jí)SD大鼠按照150mg/kg體重尾靜脈注射四氧嘧啶液，在四氧嘧啶液作用下，大鼠的胰島P細(xì)胞受到損傷，造成胰島素發(fā)生障礙，3天后尾靜脈采血測(cè)空腹血糖，血糖值大于11.Ommol/L的為糖尿病大鼠。每日一次，連續(xù)4周，之后，尾靜脈采血測(cè)空腹血糖(FBG)和血清Ins。表5對(duì)糖尿病大鼠的FBG和血清Ins的影響n=1512<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>與糖尿病組比較*P<0.05**P<0.01;與芍藥苷比較，△P<0.05，△△P<0.01。上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明組合物明顯降低了四氧嘧啶糖尿病的血糖，并對(duì)血清Ins水平影響不明顯，這表明芍藥、麝香、冰片聯(lián)合用藥及本發(fā)明組合物對(duì)四氧嘧啶糖尿病大鼠產(chǎn)生了較強(qiáng)的降血糖作用，以本發(fā)明組合物作用最強(qiáng)，且降血糖作用不是通過提高胰島素水平實(shí)現(xiàn)的。五.對(duì)高血脂癥大鼠的抗氧化作用1.材料本發(fā)明組合物芍藥+麝香+冰片+銀杏提取物1:2:3:5，50mg/kg灌胃；正常對(duì)照組生理鹽水；高血脂組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥芍藥苷(50mg/kg);VE(50mg/kg);10%冰片；銀杏提取物(20mg/kg)。2.方法與結(jié)果建立高血脂模型，與正常組比較高脂模型血清和肝臟的LPO明顯升高，而SOD活性明顯降低。藥物灌胃，處理動(dòng)物，按照試劑盒說明書操作，測(cè)LPO和S0D，結(jié)果見表6:表6對(duì)高血脂大鼠血清和肝臟LPO和SOD的影響(nmol/L)n=10—.———、，組別血清LPO血清SOD肝臟LPO肝臟SOD高血脂組8.99±2.00概9±56.76.91±1.187.59±1.19VE組6.54±1.23**440.1±28.95.61±1.13*8.87±1.27*芍藥苷7.89±1.17451.6±40.1*5.89±1.378.73±1.18*冰片8.57±1.29427.1±30.36.31±1.367.72±1.26銀杏提取物6.98±1.16"AA458.9±26.1*A5.22土1.1廣9.24±1.03"本發(fā)明組合物組6.32±1.19"AA461.9±28.7*厶5.15±1.06**.承*9.52±1.15與高血脂組比較JP<0.05，**P<0.01;與芍藥苷比較，AP<0.05，AAP<0.01。獵實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明組合物的抗氧化活性顯著優(yōu)于單獨(dú)施用的芍藥苷、冰片。上述結(jié)果還證明麝香經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明具有增強(qiáng)中樞耐缺氧的能力和作用，而且經(jīng)證實(shí)，麝香的增強(qiáng)中樞耐缺氧的能力是對(duì)中樞系統(tǒng)的直接作用而非間接影響，因此中醫(yī)上稱其芳香開竅，用麝香既治中風(fēng)昏迷又治驚癇，但未證明其有明顯的抗氧化作用，本申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)證明其與芍藥和冰片合用，抗氧化活性顯著優(yōu)于單用芍藥，說明在對(duì)高血脂抗氧化方面，三者存在增強(qiáng)協(xié)同作用。本發(fā)明組合物的伍用則沒有發(fā)現(xiàn)毒副作用，沒有帶來的不良副作用。另外，還從保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、減少腦組織丙二醛(MDA)和NO生成等方面，考察了本發(fā)明組合物的抗氧化作用，結(jié)果證明本發(fā)明組合物對(duì)腦組織MDA有明顯的抑制作用，降低了腦組織中升高的NO，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞也顯示了保護(hù)作用。制劑實(shí)施例實(shí)施例l片劑取赤芍，粉碎成粗粉，加80-90%乙醇回流提取三次，合并提取液，減壓濃縮后用正丁醇提取三次，每次600ml，合并正丁醇提取液，減壓濃縮至無正丁醇味，加水400ml，加熱溶解，濾過，濾液噴霧干燥，得提取物I備用；天然冰片0.5g粉碎成細(xì)粉，與6g提取物I、3g麝香和丹參的C02超臨界萃取物15g(乙醇為夾帶劑)混勻，加入輔料(總重的5%)低取代羥丙基纖維素、硬脂酸鎂、淀粉、微晶纖維素，按照標(biāo)準(zhǔn)制粒和壓片工藝制備。實(shí)施例2片劑取葛根總黃酮提取物13g、天然冰片2g粉碎成細(xì)粉，與10g提取物I和15g麝香混勻，加入低取代羥丙基纖維素、硬脂酸鎂、淀粉、微晶纖維素，按照標(biāo)準(zhǔn)制粒和壓片工藝制備1000粒。實(shí)施例3軟膠囊劑取芍藥苷2g、冰片環(huán)糊精包合物25g(含冰片2.5g)、麝香的C02超臨界萃取物4g、銀杏內(nèi)酯0.5g，與甘油混勻，制丸1000粒，即得軟膠囊劑。實(shí)施例4滴丸取赤芍，粉碎成粗粉后用水提取，將水提液上大孔吸附樹脂柱，用水、70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮后濾去沉淀物，濾液噴霧干燥，得提取物II備用；取天然冰片3.5g粉碎成細(xì)粉，與15g提取物11、20g鹽酸)11芎嗪、麝香水蒸汽提取14物20g混勻，得III;取木糖醇和紅藻膠混和均勻，加入上述方法制備的III，充分混合，混合物加熱熔融，攪拌均勻并保溫，于約6(TC下滴入0°C的甲基硅油中，制成10000粒滴丸，將滴丸瀝盡并擦盡冷卻液，待干燥后分裝。實(shí)施例5口腔崩解片取芍藥提取物10g、人參皂苷提取物(總皂苷含量不低于60X)50g、冰片和麝香水蒸汽提取物的環(huán)糊精包合物20g(含冰片2g、麝香2g)、阿斯巴甜、檸檬香精、和硬脂酸鎂，混合過IOO目篩。加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素，混合均勻后過100目篩，壓片，共制成1000片。實(shí)施例6緩釋片劑取芍藥苷18g、紅花黃色素提取物(總黃色素含量不低于50%)100g、冰片和麝香水蒸汽提取物的環(huán)糊精包合物30g(含冰片3g、麝香5g)，均勻混合，加入乳糖、微晶纖維素、羥丙甲基基纖維素、聚乙烯吡咯、硬質(zhì)酸鎂，按照標(biāo)準(zhǔn)制粒和壓片工藝制備1000片。實(shí)施例7凍干針劑取銀杏總黃酮25g、適量有機(jī)堿，加注射用水約至900ml，攪拌使溶解，調(diào)節(jié)pH值后，加入芍藥苷15g至溶解，混合均勻，過濾，得IV備用；取人工麝香的超臨界二氧化碳萃取物(含麝香總大環(huán)酮30%以上)12g、冰片4g，加入聚山梨酯80，均勻混合，再加入羥丙基_13_環(huán)糊精，超聲攪拌包合2小時(shí)后，得HP-P-CD包合物V。取IV3g、V，加凍干賦形甘露醇，加注射用水至全量，加入活性炭，吸附，脫炭過濾；所得濾液繼續(xù)用0.22iim微孔濾膜過濾，分裝，冷凍干燥。實(shí)施例8注射用乳劑取麝香的水蒸汽提取物約6g，加入1，2-丙二醇、甘油，加熱使澄清，另取芍藥苷10g、丹參素lg加入，繼續(xù)攪拌加熱至6(TC并保持恒定，得水相。取冰片12g、乳化劑磷脂，加適量無水乙醇使溶解，然后加精制豆油、VE、膽酸，攪拌加熱至6(TC并保持恒定，得油相。恒溫?cái)嚢柘聦⑺嗑徛渭拥接拖嘀?，滴加完畢后加同溫的蒸餾水定容，繼續(xù)攪拌約15min得初乳。過0.80iim濾膜后，勻化，過0.22iim濾膜，然后灌裝、充氮?dú)?、封口、滅菌。?quán)利要求一種藥物組合物，由10-90wt.％的活性組分和90-10wt.％的藥用輔料組成，所述活性組分為a.冰片，1-15重量份；和b.麝香，或含有麝香酮、雄甾酮和麝香-1的麝香提取物，或麝香酮單體，5-65重量份；和c.芍藥干燥根粉末，或含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的芍藥提取物，或芍藥苷單體，5-100重量份；和含有川芎嗪、川芎酚、阿魏酸、揮發(fā)油的川芎提取物，或川芎嗪?jiǎn)误w，或阿魏酸鈉。2.如權(quán)利要求l的藥物組合物，所述芍藥提取物中還含有羥基芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥新苷。3.如權(quán)利要求1的藥物組合物，所述活性組分為a.冰片，2-10重量份；禾口b.含有麝香酮、雄甾酮和麝香-1的麝香提取物，10-50重量份；禾口c.含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的芍藥提取物，10-80重量份；禾口d.10-80重量份，其為含有川芎嗪、阿魏酸的川芎提取物。4.如權(quán)利要求1的藥物組合物，其中組分a為5-10重量份，組分b為15-45重量組分，c為20-60重量份，和組分d為20-60重量份。5.如權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述活性組分為a.冰片b.麝香酮單體；禾口c.芍藥苷單體；禾口d.川芎嗪?jiǎn)误w。全文摘要本發(fā)明涉及藥物組合物，具體地說，是根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論研制的含有天然植物提取物或單體的藥用組合物及其制備方法和應(yīng)用，所述藥物主要含有冰片和麝香、芍藥，用于治療昏迷、心腦血管疾病、老年癡呆癥、腦細(xì)胞保護(hù)、糖尿病等疾病。文檔編號(hào)A61K36/71GK101766703SQ20091021075公開日2010年7月7日申請(qǐng)日期2006年3月27日優(yōu)先權(quán)日2006年3月27日發(fā)明者林艷和申請(qǐng)人:深圳市生物谷科技有限公司