專利名稱：醫(yī)用納米粒子的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米材料制備領(lǐng)域，特別涉及一種制備醫(yī)用雙功能納米粒子的方法。
背景技術(shù)：
聚酰胺-胺(PAMAM)樹枝狀大分子因其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)而顯示出特殊的性質(zhì)，最 初的研究主要集中在合成上?，F(xiàn)在研究興趣已轉(zhuǎn)向性能和與應(yīng)用上。如在催化、醫(yī)療、微電 子、液晶材料、新納米材料等方面都有許多新的應(yīng)用。目前國(guó)外對(duì)樹枝狀大分子的應(yīng)用潛力 得到了極其廣泛的研究，其中在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究主要集中在基因載體、藥物載體、磁共振造 影劑和硼中子俘獲治療試劑等。樹枝狀大分子新型結(jié)構(gòu)可用作內(nèi)_外受體基質(zhì)(主_客) 相互作用的多功能平臺(tái)。在設(shè)計(jì)新型包裹劑和用作蛋白質(zhì)作用的模型時(shí)可研究?jī)?nèi)受體特 點(diǎn)，而在設(shè)計(jì)人工基因轉(zhuǎn)染材料、磁共振成像造影劑時(shí)，作為外受體已被研究。國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)對(duì) 該領(lǐng)域的研究尚不多見。 聚酰胺-胺(PAMAM)樹枝狀大分子表面大量的氨基官能團(tuán)和內(nèi)部的空腔可與多個(gè) 分子結(jié)合。樹枝狀大分子化學(xué)家通過各種技術(shù)，包括熒光和光學(xué)吸收探針、電子順磁共振 (EPR)技術(shù)以及分子模擬等研究分子的形狀、大小、表面性質(zhì)及小分子在內(nèi)腔和外表面的吸 附行為。研究主要集中在樹狀分子的表面和內(nèi)部空腔與小分子鍵合實(shí)驗(yàn)及其機(jī)理研究上。 Chen等人用熒光光譜法研究了 6. 0GPAMAM樹狀大分子與探針分子5- 二甲胺基-1-萘酚磺 酸(DNS)結(jié)合的機(jī)理。發(fā)現(xiàn)在帶正電荷的樹枝狀大分子與帶負(fù)電的DNS之間是靠靜電作 用結(jié)合的。Kojima等人用PEG修飾樹枝狀大分子，不僅在適當(dāng)條件下可釋放阿霉素和甲氨 蝶呤，而且同時(shí)加強(qiáng)了載體的生物相容性。Zhuo等人合成了具有環(huán)狀核的PAMAM樹狀大分 子，在27oC、 pH為7. 4的磷酸緩沖溶液中成功緩釋出游離的5-氟脲嘧啶。研究表明，聚酰 胺_胺樹狀大分子有希望成為抗癌藥物可控釋放的運(yùn)載體系。 腫瘤是危害全人類的頭號(hào)疾病。腫瘤的早期診斷、早期治療和靶向治療是人們一 直關(guān)注和研究的內(nèi)容。用于細(xì)胞生物學(xué)研究的傳統(tǒng)熒光染料存在很多無法客服的局限性， 如激發(fā)波長(zhǎng)要求嚴(yán)格，熒光效率低，發(fā)射波長(zhǎng)和激發(fā)波長(zhǎng)容易交疊，光穩(wěn)定性差，等等，給生 物學(xué)研究帶來了很多不便。量子點(diǎn)由于其量子尺寸效應(yīng)而具有奇特的性質(zhì)，包括熒光發(fā)射 波長(zhǎng)可控、激發(fā)波譜寬而連續(xù)、熒光強(qiáng)、光穩(wěn)定好、耐光漂白、能實(shí)現(xiàn)一元激發(fā)多元發(fā)射的同 時(shí)多色標(biāo)等獨(dú)特性能，可彌補(bǔ)現(xiàn)有有機(jī)熒光染料的不足，甚至在某些情況下可替代有機(jī)熒 光染料。量子點(diǎn)的獨(dú)特性能將有利于其在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床檢測(cè)上的應(yīng)用，相比傳統(tǒng)熒光試 劑在生物分析方面有著巨大的優(yōu)勢(shì)。 目前，量子點(diǎn)在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用越來越受到重視。最主要是作為生物熒光 探針標(biāo)記物。但現(xiàn)在通常使用的量子點(diǎn)表面都被大量有機(jī)溶劑分子氧化三辛基膦/三辛 基膦(T0P0/T0P)，十八胺(0DA)等包覆而呈疏水性，而生物大分子或者藥物一般是溶解或 分散在水溶劑中的，所以必須進(jìn)行水溶性改進(jìn)。目前的量子點(diǎn)(QDs)的修飾方法大致可以 分為以下幾種(1)通過雙功能分子連接改性。主要是利用Zn、Cd等II族原子與硫原子之 間有效的鍵合作用，用帶有巰基的雙功能分子，如巰基羧酸類、二硫蘇糖醇(DTT)、硫代膽堿等取代QDs表面的有機(jī)分子，以使其從疏水性轉(zhuǎn)變?yōu)橛H水性，然后通過另一端的功能基團(tuán) 可以與生物大分子連接，這種方法簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，但由于使用的是小分子作為連接物，修 飾以后原有的有機(jī)分子對(duì)量子點(diǎn)的保護(hù)和穩(wěn)定性得不到有效的替代，所以穩(wěn)定性不好，熒 光性質(zhì)也大大減弱。(2)通過在量子點(diǎn)(QDs)表面包覆硅或硅烷等進(jìn)行修飾。修飾后的量 子點(diǎn)穩(wěn)定性、水溶性以及進(jìn)一步連接的可操作性都比較理想，但是修飾過程極為煩瑣、周期 長(zhǎng)、重復(fù)性無法保證。(3)將量子點(diǎn)直接包埋入聚合物的空腔或形成的疏水腔。由于采用這 類方法量子點(diǎn)表面的有機(jī)分子沒有損失，所以其性能基本不受影響。但是，這種方法包覆的 量子點(diǎn)的粒徑較大，不利于在生物方面的應(yīng)用。(4)通過雙親性高分子與量子點(diǎn)表面的烷基 鏈?zhǔn)杷饔脤?shí)現(xiàn)包裹，由于這種方法也未破壞量子點(diǎn)表面的有機(jī)分子，其光學(xué)性質(zhì)也基本 不受影響，但使用大量的有機(jī)溶劑，過程復(fù)雜，純化困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服背景技術(shù)存在的問題和缺陷，提供一種制備醫(yī) 用雙功能納米粒子的方法，制備粒徑在lnm 13nm之間的、用于腫瘤早期檢測(cè)和靶向治療 的雙功能納米粒子，該制備方法使量子點(diǎn)的穩(wěn)定性、水溶性、靶向性以及生物相容性得到提 高的同時(shí)，還可以使抗癌藥物定位到腫瘤部位進(jìn)行緩釋，降低毒副作用，所制備的納米粒子 適用于生物標(biāo)記、細(xì)胞成像、腫瘤靶向和顯影、癌癥靶向治療以及對(duì)治療效時(shí)機(jī)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)等 多個(gè)領(lǐng)域。 本發(fā)明制備醫(yī)用雙功能納米粒子的方法，采用連有葉酸和紫杉醇的聚酰胺-胺 (PAMAM)樹枝狀分子對(duì)油溶性量子點(diǎn)進(jìn)行包覆的方法。該方法包括如下步驟用聚乙二醇 修飾聚酰胺_胺、在聚乙二醇上修飾葉酸、用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺_胺包覆量子 點(diǎn)、將抗癌藥夾到聚酰胺_胺內(nèi)或連接到聚酰胺_胺表面； 所述的用聚乙二醇修飾聚酰胺_胺是將聚酰胺_胺溶解在水或甲醇中；在冰鹽 浴的條件下，按聚酰胺-胺與兩側(cè)為氨基的聚乙二醇的摩爾比為l : 1 128，將聚酰胺-胺 溶液滴加到聚乙二醇中，滴加完畢撤掉冰鹽浴，室溫反應(yīng)4 48小時(shí)，產(chǎn)物經(jīng)過透析、旋蒸 后得到兩側(cè)為氨基的聚乙二醇修飾的聚酰胺_胺；通過控制加入兩側(cè)為氨基的聚乙二醇的 量及反應(yīng)條件，合成了一側(cè)連有聚酰胺_胺另一側(cè)為氨基的聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)。
所述的在聚乙二醇上修飾葉酸是，將葉酸和聚酰胺-胺-聚乙二醇溶解在二甲 基亞砜中，所述葉酸的用量與聚酰胺-胺-聚乙二醇中的聚乙二醇等摩爾量；然后加入N， N- 二環(huán)己基碳酰亞胺和4- 二甲氨基吡啶，所述N， N- 二環(huán)己基碳酰亞胺和4- 二甲氨基吡 啶的用量分別與葉酸等摩爾量；室溫反應(yīng)2 24小時(shí)，加入水后，離心，上清液用pH = 6 12的緩沖溶液透析，再用去離子水透析，除去溶劑得到中間產(chǎn)物；按聚酰胺-胺與乙二胺的 摩爾比為l : 2 64，在冰鹽浴的條件下，直接將所述中間產(chǎn)物逐滴加入到乙二胺中，滴加 完畢后，撤掉冰鹽浴，室溫反應(yīng)2 48小時(shí)，反應(yīng)完全后，除去溶劑得到淺黃色固體，經(jīng)過透 析處理后，得到產(chǎn)物表面為氨基的聚酰胺-胺-聚乙二醇-葉酸(PAMAM-PEG-FA);
所述的用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺包覆量子點(diǎn)是，將連有油溶性配體的
量子點(diǎn)溶解在氯仿或四氫呋喃或甲苯中，聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺溶解在甲醇或 水中，將兩種溶液混合，用四甲基氫氧化胺控制pH值在6 14之間，在20 8(TC溫度下反 應(yīng)1 24小時(shí)，冷卻至室溫后，用乙酸乙酯或丙酮洗后，得到的固體溶解在水中，過濾除去溶劑后得到具有靶向檢測(cè)功能的量子點(diǎn)。 經(jīng)過一步配體交換可以把油溶性量子點(diǎn)轉(zhuǎn)變?yōu)樗苄缘?，同時(shí)還達(dá)到了功能化的 目的。該方法制備的量子點(diǎn)應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞膜上表達(dá)有高水平葉酸受體的腫瘤細(xì)胞。在量 子點(diǎn)表面包覆上樹枝狀PAMAM和PEG高分子層，能使量子點(diǎn)更穩(wěn)定的同時(shí)，生物相容性也進(jìn)
一步提咼o 所述的將抗癌藥夾到聚酰胺_胺內(nèi)或連接到聚酰胺_胺表面是，采用非化學(xué)鍵的 方法使抗癌藥夾到聚酰胺-胺的內(nèi)部空腔中，或者采用化學(xué)鍵的方法使抗癌藥連接到聚酰 胺-胺表面； 其中，所述非化學(xué)鍵方法的具體步驟是，在溫度為20 7(TC、攪拌的條件下，按具 有靶向檢測(cè)功能的量子點(diǎn)與抗癌藥的摩爾比為1 : 1 20，將抗癌藥緩慢加入到具有靶向 檢測(cè)功能的量子點(diǎn)的水溶液中，反應(yīng)1 48小時(shí)后，過濾除去未反應(yīng)的抗癌藥，得到納米粒 子的水溶液； 所述化學(xué)鍵方法的具體步驟是，在N， N' -二環(huán)己基碳酰亞胺和4_二甲氨基吡啶 的作用下，抗癌藥與丁二酸按摩爾比為1 : 1，在20 8(TC溫度下反應(yīng)1 48小時(shí)后，得 到羧基化的抗癌藥；再在N，N'-二環(huán)己基碳酰亞胺和4-二甲氨基吡啶的作用下，表面為氨 基的聚乙二醇-葉酸與羧基化的抗癌藥按摩爾比為1 : 1 128，在20 8(TC溫度下反應(yīng) 1 48小時(shí)后，加入一定量的水，過濾除去不溶物，透析處理后得到雙功能的納米配體；將 連有油溶性配體的量子點(diǎn)溶解在氯仿或四氫呋喃或甲苯中，雙功能的納米配體溶解在甲醇 或水中，將兩種溶液混合，用四甲基氫氧化胺控制pH值在6 14之間，在20 8(TC溫度下 反應(yīng)1 24小時(shí)，冷卻至室溫后，用乙酸乙酯或丙酮洗后，得到的固體溶解在水中，過濾除 去溶劑后得到納米粒子的水溶液。 在功能化量子點(diǎn)的基礎(chǔ)上引入抗癌藥，合成了集腫瘤早期檢測(cè)和靶向治療為一體 雙功能納米粒子，使抗癌藥可以直接定位到病灶位置，同時(shí)，還可以通過熒光實(shí)時(shí)跟蹤監(jiān)測(cè) 治療效果，這大大降低了抗癌藥對(duì)正常組織的毒副作用。 所述的量子點(diǎn)包括II-VI和III-V的量子點(diǎn)及其組成的核_殼結(jié)構(gòu)的量子點(diǎn)，是 表面連有三苯基膦或十六胺或十八胺的CdS、 ZnS、 HgS、 GdSe、 ZnSe、 HgSe、 GdTe、 ZnTe、 ZnO、 PbSe、 HgTe、 CaAs、 InP、 InAs、 InCaAs、 CdS/ZnS、 CdS/Ag2S、 CdS/PbS、 CdS/Cd (OH) 2、 CdS/HgS、 CdS/HgS/CdS、 ZnS/CdS、 ZnS/CdS/ZnS、 ZnS/HgS/ZnS/CdS、 CdSe/CdS、 CdSe/ZnS、 CdSe/ZnSe、 CdSe/CuSe、 CdSe/HgTe、 CdSe/HgSe、 CdSe/HgSe/CdSe、 CdTe/HgS、 InAs/InP、 InAs/CdSe、 InAs/ZnSe或氧化鐵磁性納米粒子。 所述的聚酰胺-胺是0. 5 6. 5代的半代樹枝狀聚合物。
所述的聚酰胺-胺的分子直徑在lnm至13nm之間。 所述的抗癌藥是紫杉醇(Taxol)、阿霉素(Dox)或氨甲喋呤(MTX)等常見的抗癌 藥。 所述的聚乙二醇為所有不同分子量的聚乙二醇。 本發(fā)明方法制備的納米粒子具有腫瘤早期檢測(cè)和靶向治療的雙重功能。應(yīng)用于檢 測(cè)細(xì)胞膜上表達(dá)有高水平葉酸受體的腫瘤細(xì)胞以及腫瘤的靶向治療和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)治療的效 果。通過這種有效的方法將葉酸修飾到量子點(diǎn)表面，作為量子點(diǎn)表面靶向功能分子。葉酸 是腫瘤細(xì)胞中代謝旺盛的主要原料之一，它與腫瘤細(xì)胞膜表面的葉酸受體特異性地結(jié)合而進(jìn)入細(xì)胞參與細(xì)胞代謝，腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜表面的葉酸受體水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常細(xì)胞。故葉 酸受體以作為許多治療腫瘤的藥物的靶向功能受體分子。本發(fā)明把葉酸成功地修飾到了量 子點(diǎn)表面，使得這些量子點(diǎn)可以特異性地識(shí)別表達(dá)有高水平葉酸受體的癌細(xì)胞，從而可以 作為熒光探針用于細(xì)胞學(xué)研究。 同時(shí)，把樹枝狀聚酰胺_胺(PAMAM)和聚乙二醇(PEG)修飾到量子點(diǎn)表面，在量 子點(diǎn)表面形成比較致密的水溶性高分子層，能更好的保護(hù)量子點(diǎn)，由于樹枝狀聚酰胺-胺 (PAMAM)較大空間位阻，能避免環(huán)境介質(zhì)滲入而造成量子點(diǎn)的發(fā)光性能的破壞(如光降解、 光漂白以及Cd離子的滲出而產(chǎn)生毒性)，可以很大程度地提高量子點(diǎn)的穩(wěn)定性。這種方法 制備的水溶性量子點(diǎn)產(chǎn)物具有非常優(yōu)異的熒光性質(zhì)，基本維持了原有油溶性量子點(diǎn)的光學(xué) 性質(zhì)，水溶液的穩(wěn)定性長(zhǎng)達(dá)十個(gè)月。而且樹枝狀聚酰胺-胺(PAMAM)和聚乙二醇(PEG)都 有很好的生物相容性和很小的毒性，使其在生物學(xué)上的應(yīng)用提供了可行性。
除此之外，這種制備方法使量子點(diǎn)的穩(wěn)定性、水溶性、靶向性以及生物相容性得到 提高的同時(shí)，還把抗癌藥夾入到聚酰胺-胺(PAMAM)的內(nèi)部空腔中，或者將抗癌藥連接到聚 酰胺-胺(PAMAM)表面，使藥物直接定位到腫瘤部位進(jìn)行緩釋，大大降低了藥物對(duì)正常組織 的毒副作用。同時(shí)，可以通過熒光對(duì)抗癌藥的治療效果進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。本方法制備的雙功 能納米粒子可以廣泛用于生物標(biāo)記、細(xì)胞成像、腫瘤靶向和顯影、癌癥靶向治療以及對(duì)治療 效果的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)等多個(gè)生物分析領(lǐng)域。而且本方法制備的用于腫瘤早期檢測(cè)和靶向治療的 雙功能納米粒子粒徑為納米級(jí)，且粒徑分布較窄。


圖1是本發(fā)明樹枝狀配體PAMAM-PEG-FA的合成路線示意圖； 圖2是本發(fā)明樹枝狀配體PAMAM-PEG-FA-Taxol的合成路線示意圖； 圖3是本發(fā)明雙功能納米粒子的非化學(xué)鍵合成路線示意圖； 圖4是本發(fā)明雙功能納米粒子的化學(xué)鍵合成路線示意圖； 圖5是本發(fā)明應(yīng)用于免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞表面的葉酸受體的實(shí)施例示意 圖； 圖6是本發(fā)明應(yīng)用于免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞表面葉酸受體的效果圖之一 ； 圖7是本發(fā)明應(yīng)用于免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞表面葉酸受體的效果圖之二。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 :聚酰胺-胺型樹枝狀分子(PAMAM)的合成1 聚酰胺-胺(PAMAM)樹枝狀分子的合成采用發(fā)散法，即分子由核心部分開始向外
生長(zhǎng)。根據(jù)樹木分枝的規(guī)律將預(yù)先制備好的單體按發(fā)射狀的順序、分支的枝梢再分枝，依次
重復(fù)組合起來。以乙二胺為起始物，在甲醇中通過與過量的甲基丙烯酸甲酯發(fā)生麥克爾加
成反應(yīng)，得到0. 5代的樹枝狀聚酰胺_胺(PAMAM)分子，然后用0. 5代的樹枝狀聚酰胺_胺
(PAMAM)與過量的乙二胺發(fā)生氨解反應(yīng)，得到l.O代的樹枝狀聚酰胺-胺(PAMAM)，重復(fù)以
上兩步反應(yīng)，就可以得到更高代數(shù)的樹枝狀分子。 實(shí)施例2 :聚酰胺-胺型樹枝狀分子(PAMAM)的合成2 樹枝狀分子聚酰胺_胺(PAMAM) 合成采用收斂法，即采用將預(yù)先合成好的樹枝狀低聚物依次連接在核心分子上的合成策略。該種方法與上面提到的發(fā)散法正好相反，其 合成步驟是先合成一個(gè)一個(gè)的小分支，然后這些小分支兩兩相連，發(fā)展成較大的"枝"，最后 兩個(gè)(或多個(gè))對(duì)稱的大"枝"連在一起形成樹枝狀大分子。
實(shí)施例3 :用聚乙二醇修飾聚酰胺_胺(PAMAM-PEG-NH2) 1 將2.5代樹枝狀聚酰胺-胺(PAMAM)溶解在甲醇中，在冰鹽浴條件下，按聚酰 胺-胺(PAMAM)和兩側(cè)為氨基的聚乙二醇(PEG)的摩爾比為1 : l，將聚酰胺-胺(PAMAM) 逐滴加入到聚乙二醇(NH2-PEG-NH2)中，滴加完畢后，撤掉冰鹽浴，室溫反應(yīng)2小時(shí)后，透 析、旋蒸得到產(chǎn)物聚酰胺_胺_聚乙二醇；(PAMAM-PEG-NH2)。
實(shí)施例4 :用聚乙二醇修飾聚酰胺_胺(PAMAM-PEG-NH2) 2 將4.5代樹枝狀聚酰胺-胺(PAMAM)溶解在甲醇中，在冰鹽浴條件下，按聚酰 胺-胺(PAMAM)和兩側(cè)為氨基的聚乙二醇(PEG)的摩爾比為1 : 40，將聚酰胺-胺(PAMAM) 逐滴加入到聚乙二醇(NH2-PEG-NH2)中，滴加完畢后，撤掉冰鹽浴，室溫反應(yīng)12小時(shí)后，透 析、旋蒸得到產(chǎn)物聚酰胺_胺_聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)。
實(shí)施例5 :用聚乙二醇修飾聚酰胺_胺(PAMAM-PEG-NH2) 3 將6. 5代樹枝狀聚酰胺_胺(PAMAM)溶解在甲醇中，在冰鹽浴條件下，按聚酰 胺-胺(PAMAM)和兩側(cè)為氨基的聚乙二醇(PEG)的摩爾比為l : 128，將聚酰胺-胺(PAMAM) 逐滴加入到NH2-PEG-NH2中，滴加完畢后，撤掉冰鹽浴，室溫反應(yīng)48小時(shí)后，透析、旋蒸得到 產(chǎn)物聚酰胺_胺_聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)。
實(shí)施例6 :在聚乙二醇上修飾葉酸(PAMAM-PEG-FA) 1 參見圖l，將葉酸和聚酰胺_胺_聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)溶解在二甲基亞砜 (DMS0)中，所述葉酸的用量與聚酰胺-胺-聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)中的聚乙二醇(PEG) 等摩爾量；然后加入N， N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)，所述N， N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的用量分別與葉酸等摩爾量；室溫 反應(yīng)2小時(shí)，加入水后，離心，上清液用pH = 6的緩沖溶液透析，再用去離子水透析，除去溶 劑得到中間產(chǎn)物。按聚酰胺-胺(PAMAM)與乙二胺(EDA)的摩爾比為1 : 2，在冰鹽浴的條 件下，直接將所述中間產(chǎn)物逐滴加入到乙二胺(EDA)中，滴加完畢后，撤掉冰鹽浴，室溫反 應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)完全后，除去溶劑得到淺黃色固體，經(jīng)過透析處理后，得到產(chǎn)物表面為氨基 的聚酰胺_胺_聚乙二醇_葉酸(PAMAM-PEG-FA)。
實(shí)施例7 :在聚乙二醇上修飾葉酸(PAMAM-PEG-FA) 2 參見圖l，將葉酸和聚酰胺_胺_聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)溶解在二甲基亞砜 (DMS0)中，所述葉酸的用量與聚酰胺-胺-聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)中的聚乙二醇(PEG) 等摩爾量；然后加入N， N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)，所述N， N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的用量分別與葉酸等摩爾量；室溫 反應(yīng)4小時(shí)，加入水后，離心，上清液用pH = 8的緩沖溶液透析，再用去離子水透析，除去溶 劑得到中間產(chǎn)物。按聚酰胺-胺(PAMAM)與乙二胺(EDA)的摩爾比為1 : 8，在冰鹽浴的條 件下，直接將所述中間產(chǎn)物逐滴加入到乙二胺(EDA)中，滴加完畢后，撤掉冰鹽浴，室溫反 應(yīng)6小時(shí)，反應(yīng)完全后，除去溶劑得到淺黃色固體，經(jīng)過透析處理后，得到產(chǎn)物表面為氨基 的聚酰胺_胺_聚乙二醇_葉酸(PAMAM-PEG-FA)。
實(shí)施例8 :在聚乙二醇上修飾葉酸(PAMAM-PEG-FA) 3
參見圖l，將葉酸和聚酰胺_胺_聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)溶解在二甲基亞砜 (DMS0)中，所述葉酸的用量與聚酰胺-胺-聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)中的聚乙二醇(PEG) 等摩爾量；然后加入N， N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)，所述N， N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的用量分別與葉酸等摩爾量；室溫 反應(yīng)8小時(shí)，加入水后，離心，上清液用pH = 10的緩沖溶液透析，再用去離子水透析，除去 溶劑得到中間產(chǎn)物。按聚酰胺-胺(PAMAM)與乙二胺(EDA)的摩爾比為1 : 24，在冰鹽浴 的條件下，直接將所述中間產(chǎn)物逐滴加入到乙二胺(EDA)中，滴加完畢后，撤掉冰鹽浴，室 溫反應(yīng)12小時(shí)，反應(yīng)完全后，除去溶劑得到淺黃色固體，經(jīng)過透析處理后，得到產(chǎn)物表面為 氨基的聚酰胺_胺_聚乙二醇_葉酸(PAMAM-PEG-FA)。
實(shí)施例9 :在聚乙二醇上修飾葉酸(PAMAM-PEG-FA) 4 參見圖l，將葉酸和聚酰胺_胺_聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)溶解在二甲基亞砜 (DMSO)中，所述葉酸的用量與聚酰胺-胺-聚乙二醇(PAMAM-PEG-NH2)中的聚乙二醇(PEG) 等摩爾量；然后加入N， N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)，所述N， N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的用量分別與葉酸等摩爾量；室溫 反應(yīng)24小時(shí)，加入水后，離心，上清液用pH = 12的緩沖溶液透析，再用去離子水透析，除去 溶劑得到中間產(chǎn)物。按聚酰胺-胺(PAMAM)與乙二胺(EDA)的摩爾比為1 : 64，在冰鹽浴 的條件下，直接將所述中間產(chǎn)物逐滴加入到乙二胺(EDA)中，滴加完畢后，撤掉冰鹽浴，室 溫反應(yīng)48小時(shí)，反應(yīng)完全后，除去溶劑得到淺黃色固體，經(jīng)過透析處理后，得到產(chǎn)物表面為 氨基的聚酰胺_胺_聚乙二醇_葉酸(PAMAM-PEG-FA)。 實(shí)施例10 :用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺包覆量子點(diǎn) (QDs-PA應(yīng)-PEG-FA) 1 將表面連有氧化三辛基膦(TOPO)的CdS油溶性量子點(diǎn)溶解在四氫呋喃中， PAMAM-PEG-FA溶解在水中，將兩種溶液混合，用四甲基氫氧化胺控制pH = 6，在30°C反應(yīng)2 小時(shí)，冷卻至室溫后，用乙酸乙酯洗后，得到的固體溶解在水中，過濾，除去溶劑后得到目標(biāo) 產(chǎn)物QDs-PAMAM-PEG-FA。 實(shí)施例11 :用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺_胺包覆量子點(diǎn) (QDs-PAMAM-PEG-FA)2 將表面連有十八胺的CdSe/ZnS油溶性量子點(diǎn)溶解在氯仿中，PAMAM_PEG_FA溶 解在甲醇中，將兩種溶液混合，用四甲基氫氧化胺控制pH = 10，在4(TC反應(yīng)4小時(shí)，冷 卻至室溫后，用乙酸乙酯洗后，得到的固體溶解在水中，過濾，除去溶劑后得到目標(biāo)產(chǎn)物 QDs-PA應(yīng)-PEG-FA。 實(shí)施例12 :用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺包覆量子點(diǎn) (QDs-PAMAM-PEG-FA)3 將表面連有十八胺的CdS/ZnS油溶性量子點(diǎn)溶解在甲苯中，PAMAM_PEG_FA溶 解在甲醇中，將兩種溶液混合，用四甲基氫氧化胺控制pH = 8，在6(TC反應(yīng)8小時(shí)，冷 卻至室溫后，用乙酸乙酯洗后，得到的固體溶解在水中，過濾，除去溶劑后得到目標(biāo)產(chǎn)物 QDs-PAMAM-PEG-FA。 實(shí)施例13 :用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺包覆量子點(diǎn) (QDs-PAMAM-PEG-FA)4
將表面連有十六胺的HgS油溶性量子點(diǎn)溶解在氯仿中，PAMAM-PEG-FA溶解 在水中，將兩種溶液混合，用四甲基氫氧化胺控制pH = 9，在70 °C反應(yīng)24小時(shí)，冷卻 至室溫后，用乙酸乙酯洗后，得到的固體溶解在水中，過濾，除去溶劑后得到目標(biāo)產(chǎn)物 QDs-PA應(yīng)-PEG-FA。 實(shí)施例14 :用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺包覆量子點(diǎn) (QDs-PA應(yīng)-PEG-FA) 5 用其它表面連有氧化三辛基膦(T0P0)或十八胺或十六胺的CdS， ZnS， HgS， GdSe， ZnSe， HgSe， GdTe， ZnTe， ZnO， PbSe， HgTe， CaAs， InP， InAs， InCaAs， CdS/ZnS， CdS/Ag2S， CdS/ PbS， CdS/Cd(OH)2， CdS/HgS， CdS/HgS/CdS， ZnS/CdS， ZnS/CdS/ZnS， ZnS/HgS/ZnS/CdS， CdSe/ CdS， CdSe/ZnS， CdSe/ZnSe， CdSe/CuSe， CdSe/HgTe， CdSe/HgSe， CdSe/HgSe/CdSe， CdTe/HgS， InAs/InP， InAs/CdSe， InAs/ZnSe或氧化鐵磁性納米粒子，替代實(shí)施例10-13中表面連有氧 化三辛基膦(TOPO)的CdS油溶性量子點(diǎn)、表面連有十八胺的CdSe/ZnS油溶性量子點(diǎn)、表面 連有十八胺的CdS/ZnS油溶性量子點(diǎn)或表面連有十六胺的HgS油溶性量子點(diǎn)，均可得到目 標(biāo)產(chǎn)物QDs-PA應(yīng)-PEG-FA。 實(shí)施例15 :將抗癌藥夾到聚酰胺_胺內(nèi)部空腔(QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol) 1
參見圖2與圖3，在溫度為2(TC、攪拌的條件下，按QDs-PAMAM-PEG-FA與紫杉醇 (Taxol)的摩爾比為l : l，將紫杉醇(Taxol)緩慢加入到QDs-PAMAM-PEG-FA的水溶液中， 反應(yīng)2小時(shí)后，過濾除去未反應(yīng)的紫杉醇(Taxol)，得到集檢測(cè)和靶向治療為一體的雙功能 納米粒子QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol的水溶液。 實(shí)施例16 :將抗癌藥夾到聚酰胺_胺內(nèi)部空腔(QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol) 2
參見圖2與圖3，在溫度為4(TC、攪拌的條件下，按QDs-PAMAM-PEG-FA與紫杉醇 (Taxol)的摩爾比為1 : IO，將紫杉醇(Taxol)緩慢加入到QDs-PAMAM-PEG-FA的水溶液 中，反應(yīng)12小時(shí)后，過濾除去未反應(yīng)的紫杉醇(Taxol)，得到集檢測(cè)和靶向治療為一體的雙 功能納米粒子QDs-PAMAM-PEG-FA-紫杉醇(Taxol)的水溶液。 實(shí)施例17 :將抗癌藥夾到聚酰胺_胺內(nèi)部空腔(QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol) 3 參見圖2與圖3，在溫度為7(TC、攪拌的條件下，按QDs-PAMAM-PEG-FA與紫杉醇
(Taxol)的摩爾比為1 : 20，將紫杉醇(Taxol)緩慢加入到QDs-PAMAM-PEG-FA的水溶液
中，反應(yīng)48小時(shí)后，過濾除去未反應(yīng)的紫杉醇(Taxol)，得到集檢測(cè)和靶向治療為一體的雙
功能納米粒子QDs-PAMAM-PEG-FA-紫杉醇(Taxol)的水溶液。 實(shí)施例18 :將抗癌藥連接到聚酰胺_胺表面(PAMAM-PEG-FA-Taxol) 1 參見圖2與圖4，在N'N- 二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4_ 二甲氨基吡啶(DMAP)的
作用下，抗癌藥紫杉醇(Taxol)與丁二酸(SA)按摩爾比l : 1，在2(TC溫度下反應(yīng)4小時(shí)
后，得到羧基化的紫杉醇(Taxol-SA);再在N' N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基
吡啶(DMAP)的作用下，表面為氨基的聚酰胺_胺_聚乙二醇_葉酸(PAMAM-PEG-FA)與羧
基化的紫杉醇(Taxol-SA)按摩爾比為1 : 1，在2(TC溫度下反應(yīng)4小時(shí)后，加入一定量的
水，過濾除去不溶物，透析處理后得到雙功能的納米配體(PAMAM-PEG-FA-Taxol)。 實(shí)施例19 :將抗癌藥連接到聚酰胺_胺表面(PAMAM-PEG-FA-Taxol) 2 參見圖2與圖4，在N'N- 二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4_ 二甲氨基吡啶(DMAP)的
作用下，抗癌藥紫杉醇(Taxol)與丁二酸(SA)按摩爾比1 : 1，在4(TC溫度下反應(yīng)8小時(shí)后，得到羧基化的紫杉醇(Taxol-SA);再在N' N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基 吡啶(DMAP)的作用下，表面為氨基的聚酰胺_胺_聚乙二醇_葉酸(PAMAM-PEG-FA)與羧 基化的紫杉醇(Taxol-SA)按摩爾比為1 : 5，在4(TC溫度下反應(yīng)8小時(shí)后，加入一定量的 水，過濾除去不溶物，透析處理后得到雙功能的納米配體(PAMAM-PEG-FA-Taxol)。
實(shí)施例20 :將抗癌藥連接到聚酰胺_胺表面(PAMAM-PEG-FA-Taxol) 3
參見圖2與圖4，在N'N- 二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4_ 二甲氨基吡啶(DMAP)的 作用下，抗癌藥紫杉醇(Taxol)與丁二酸(SA)按摩爾比1 : 1，在6(TC溫度下反應(yīng)48小時(shí) 后，得到羧基化的紫杉醇(Taxol-SA);再在N' N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基 吡啶(DMAP)的作用下，表面為氨基的聚酰胺-胺-聚乙二醇-葉酸(PAMAM-PEG-FA)與羧 基化的紫杉醇(Taxol-SA)按摩爾比為1 : 20，在6(TC溫度下反應(yīng)48小時(shí)后，加入一定量 的水，過濾除去不溶物，透析處理后得到雙功能的納米配體(PAMAM-PEG-FA-Taxol)。
實(shí)施例21 :將抗癌藥連接到聚酰胺_胺表面(PAMAM-PEG-FA-Taxol) 4
參見圖2與圖4，在N'N- 二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4_ 二甲氨基吡啶(DMAP)的 作用下，抗癌藥紫杉醇(Taxol)與丁二酸(SA)按摩爾比1 : 1，在8(TC溫度下反應(yīng)24小時(shí) 后，得到羧基化的紫杉醇(Taxol-SA);再在N' N-二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)和4-二甲氨基 吡啶(DMAP)的作用下，表面為氨基的聚酰胺_胺_聚乙二醇_葉酸(PAMAM-PEG-FA)與羧 基化的紫杉醇(Taxol-SA)按摩爾比為1 : 128，在8(TC溫度下反應(yīng)24小時(shí)后，加入一定量 的水，過濾除去不溶物，透析處理后得到雙功能的納米配體(PAMAM-PEG-FA-Taxol)。
實(shí)施例22 :將抗癌藥連接到聚酰胺_胺表面(QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol) 5
參見圖2與圖4，將表面連有十八胺的CdSe/CdS油溶性量子點(diǎn)溶解在甲苯中， 雙功能的納米配體(PAMAM-PEG-FA-Taxol)溶解在甲醇中，將兩種溶液混合，用四甲基氫 氧化胺控制pH = 6，在2(TC溫度下反應(yīng)1小時(shí)，冷卻至室溫后，用乙酸乙酯洗后，得到 的固體溶解在水中，過濾，除去溶劑后得到集檢測(cè)和靶向治療為一體的雙功能納米粒子 QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol。 實(shí)施例23 :將抗癌藥連接到聚酰胺_胺表面(QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol) 6
參見圖2與圖4，將表面連有氧化三辛基膦(T0P0)的CdTe油溶性量子點(diǎn)溶解在 氯仿中，雙功能的納米配體(PAMAM-PEG-FA-Taxol)溶解在甲醇中，將兩種溶液混合，用四 甲基氫氧化胺控制PH = 9，在4(TC溫度下反應(yīng)4小時(shí)，冷卻至室溫后，用乙酸乙酯洗后，得 到的固體溶解在水中，過濾，除去溶劑后得到集檢測(cè)和靶向治療為一體的雙功能納米粒子 QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol。 實(shí)施例24 :將抗癌藥連接到聚酰胺_胺表面(QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol) 7
參見圖2與圖4，將表面連有十六胺的ZnS油溶性量子點(diǎn)溶解在四氫呋喃中， 雙功能的納米配體(PAMAM-PEG-FA-Taxol)溶解在水中，將兩種溶液混合，用四甲基氫氧 化胺控制pH = 12，在8(TC溫度下反應(yīng)24小時(shí)，冷卻至室溫后，用乙酸乙酯洗后，得到
的固體溶解在水中，過濾，除去溶劑后得到集檢測(cè)和靶向治療為一體的雙功能納米粒子 QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol。 實(shí)施例25 :將抗癌藥連接到聚酰胺_胺表面(QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol) 8
參見圖2與圖4，用其它表面連有氧化三辛基膦(T0P0)或十八胺或十六胺的CdS， ZnS， HgS， GdSe， ZnSe， HgSe， GdTe， ZnTe， Zn0， PbSe， HgTe， CaAs， InP， InAs， InCaAs， CdS/ZnS， CdS/Ag2S， CdS/PbS， CdS/Cd(0H)2， CdS/HgS， CdS/HgS/CdS， ZnS/CdS， ZnS/CdS/ZnS， ZnS/HgS/ZnS/CdS， CdSe/CdS， CdSe/ZnS， CdSe/ZnSe， CdSe/CuSe， CdSe/HgTe， CdSe/HgSe， CdSe/HgSe/CdSe， CdTe/HgS， InAs/InP， InAs/CdSe， InAs/ZnSe或氧化鐵磁性納米粒子， 替代實(shí)施例22-24中表面連有十八胺的CdSe/CdS油溶性量子點(diǎn)、表面連有氧化三辛基膦 (T0P0)的CdTe油溶性量子點(diǎn)或表面連有十六胺的ZnS油溶性量子點(diǎn)，均可得到目標(biāo)產(chǎn)物 QDs-PA應(yīng)-PEG-FA-Taxol 。 實(shí)施例26 :具有耙向檢測(cè)功能的量子點(diǎn)(QDs-PAMAM-PEG-FA)對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng) 參見圖5，利用常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)方法，選擇Hela細(xì)胞或SK0V3細(xì)胞等表達(dá)有高水平
葉酸受體(FR)的腫瘤細(xì)胞與具有靶向檢測(cè)功能的量子點(diǎn)(QDs-PAMAM-PEG-FA)共同培養(yǎng)，
然后用激光共聚顯微鏡觀測(cè)，證明了腫瘤細(xì)胞對(duì)量子點(diǎn)的特異性吸收。 實(shí)施例27 :集檢測(cè)和靶向治療為 一 體的雙功能納米粒子
(QDs-PA應(yīng)-PEG-FA-Taxol)對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng) 參見圖6與圖7，利用常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)方法，選擇Hela細(xì)胞或SK0V3細(xì)胞等表 達(dá)有高水平葉酸受體(FR)的腫瘤細(xì)胞與集檢測(cè)和靶向治療為一體的雙功能納米粒子 (QDs-PAMAM-PEG-FA-Taxol)共同培養(yǎng)，然后用激光共聚顯微鏡觀測(cè)，證明了腫瘤細(xì)胞對(duì)量 子點(diǎn)的特異性吸收；并且可以通過熒光實(shí)時(shí)檢測(cè)抗癌藥紫杉醇(Taxol)對(duì)腫瘤細(xì)胞的治療 效果。
權(quán)利要求
一種醫(yī)用納米粒子的制備方法，其特征在于包括如下步驟用聚乙二醇修飾聚酰胺-胺、在聚乙二醇上修飾葉酸、用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺包覆量子點(diǎn)、將抗癌藥夾到聚酰胺-胺內(nèi)或連接到聚酰胺-胺表面；所述的用聚乙二醇修飾聚酰胺-胺是將聚酰胺-胺溶解在水或甲醇中；在冰鹽浴的條件下，按聚酰胺-胺與兩側(cè)為氨基的聚乙二醇的摩爾比為1∶1～128，將聚酰胺-胺溶液滴加到聚乙二醇中，滴加完畢撤掉冰鹽浴，室溫反應(yīng)4～48小時(shí)，產(chǎn)物經(jīng)過透析、旋蒸后得到聚酰胺-胺-聚乙二醇；所述的在聚乙二醇上修飾葉酸是將葉酸和聚酰胺-胺-聚乙二醇溶解在二甲基亞砜中，所述葉酸的用量與聚酰胺-胺-聚乙二醇中的聚乙二醇等摩爾量；然后加入N，N-二環(huán)己基碳酰亞胺和4-二甲氨基吡啶，所述N，N-二環(huán)己基碳酰亞胺和4-二甲氨基吡啶的用量分別與葉酸等摩爾量；室溫反應(yīng)2～24小時(shí)，加入水后，離心，上清液用pH＝6～12的緩沖溶液透析，再用去離子水透析，除去溶劑得到中間產(chǎn)物；按聚酰胺-胺與乙二胺的摩爾比為1∶2～64，在冰鹽浴的條件下，直接將所述中間產(chǎn)物逐滴加入到乙二胺中，滴加完畢后，撤掉冰鹽浴，室溫反應(yīng)2～48小時(shí)，反應(yīng)完全后，除去溶劑得到淺黃色固體，經(jīng)過透析處理后，得到產(chǎn)物表面為氨基的聚酰胺-胺-聚乙二醇-葉酸。所述的用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺包覆量子點(diǎn)是，將量子點(diǎn)溶解在氯仿或四氫呋喃或甲苯中，聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺溶解在甲醇或水中，將兩種溶液混合，控制pH值在6～14之間，在20～80℃溫度下反應(yīng)1～24小時(shí)，冷卻至室溫后，用乙酸乙酯或丙酮洗后，得到的固體溶解在水中，過濾除去溶劑后得到量子點(diǎn)；所述的將抗癌藥夾到聚酰胺-胺內(nèi)或連接到聚酰胺-胺表面是，采用非化學(xué)鍵的方法將抗癌藥夾到聚酰胺-胺的內(nèi)部空腔中，或者采用化學(xué)鍵的方法將抗癌藥連接到聚酰胺-胺表面。
2. 按照權(quán)利要求l所述的醫(yī)用納米粒子的制備方法，其特征在于所述的非化學(xué)鍵方法的具體步驟是，在溫度為20 7(TC、攪拌的條件下，按量子點(diǎn)與抗癌藥的摩爾比為1 : 1 20，將抗癌藥加入到量子點(diǎn)的水溶液中，反應(yīng)1 48小時(shí)后，過濾，得到納米粒子的水溶液。
3. 按照權(quán)利要求1所述的醫(yī)用納米粒子的制備方法，其特征在于所述的化學(xué)鍵方法的具體步驟是，按聚乙二醇-葉酸與羧基化的抗癌藥的摩爾比為l : 1 128，在20 8(TC溫度下反應(yīng)1 48小時(shí)后，加入水，過濾，透析后得到納米配體；將量子點(diǎn)溶解在氯仿或四氫呋喃或甲苯中，納米配體溶解在甲醇或水中，將兩種溶液混合，控制pH值在6 14之間，在20 8(TC溫度下反應(yīng)1 24小時(shí)，冷卻至室溫后，用乙酸乙酯或丙酮洗后，得到的固體溶解在水中，過濾后得到納米粒子的水溶液。
4. 按照權(quán)利要求1、2或3所述的醫(yī)用納米粒子的制備方法，其特征在于所述的量子點(diǎn)包括II-VI和III-V的量子點(diǎn)及其組成的核_殼結(jié)構(gòu)的量子點(diǎn)，是表面連有三苯基膦或十六胺或十八胺的CdS、 ZnS、 HgS、 GdSe 、 ZnSe 、 HgSe 、 GdTe 、 ZnTe 、 ZnO、 PbSe 、 HgTe 、 CaAs 、 InP、InAs、 InCaAs、 CdS/ZnS、 CdS/Ag2S、 CdS/PbS、 CdS/Cd (OH) 2、 CdS/HgS、 CdS/HgS/CdS、 ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、 ZnS/HgS/ZnS/CdS、 CdSe/CdS、 CdSe/ZnS、 CdSe/ZnSe、 CdSe/CuSe、 CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、 CdSe/HgSe/CdSe、 CdTe/HgS、 InAs/InP、 InAs/CdSe、 InAs/ZnSe或氧化鐵磁性納米粒子。
5. 按照權(quán)利要求l所述的醫(yī)用納米粒子的制備方法，其特征在于所述的聚酰胺-胺是0. 5-6. 5代的半代樹枝狀聚合物。
6. 按照權(quán)利要求1、2或3所述的醫(yī)用納米粒子的制備方法，其特征在于所述的抗癌 藥是紫杉醇、阿霉素或甲氨喋呤。
7. 按照權(quán)利要求1或5所述的醫(yī)用納米粒子的制備方法，其特征在于所述的聚酰 胺_胺的分子直徑在lnm至13nm之間。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種醫(yī)用納米粒子的制備方法，屬于納米材料制備領(lǐng)域。該方法包括如下步驟用聚乙二醇修飾聚酰胺-胺、在聚乙二醇上修飾葉酸、用聚乙二醇和葉酸修飾的聚酰胺-胺包覆量子點(diǎn)以及將抗癌藥夾到聚酰胺-胺內(nèi)或連接到聚酰胺-胺表面。采用聚酰胺-胺包覆油溶性量子點(diǎn)作為核殼結(jié)構(gòu)的納米配體，再將葉酸和聚乙二醇修飾到其表面，利用腫瘤細(xì)胞表面的葉酸受體與葉酸的特殊親和力，將其定位到腫瘤細(xì)胞表面。同時(shí)，由于PAMAM的特殊結(jié)構(gòu)特征，可以在其內(nèi)部空腔中夾入抗癌藥或者在其表面連接上抗癌藥，大大降低了藥物對(duì)正常組織的毒副作用。并且提高了量子點(diǎn)的穩(wěn)定性和水溶性。
文檔編號(hào)A61K47/34GK101695476SQ20091021775
公開日2010年4月21日 申請(qǐng)日期2009年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日
發(fā)明者李亞鵬, 王靜媛, 趙義麗 申請(qǐng)人:吉林大學(xué);