專利名稱::六味痛風(fēng)散配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
:本發(fā)明涉及一種六味痛風(fēng)散配方,尤其是涉及六味痛風(fēng)散治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的配方。
背景技術(shù):
:痛風(fēng)病是一個(gè)代謝性疾病,其發(fā)病原因比較復(fù)雜,主要是尿酸生成過(guò)多或腎臟排泄尿酸減少引起血中尿酸升高并在關(guān)節(jié)腔內(nèi)沉積形成尿酸結(jié)晶,引起關(guān)節(jié)紅腫疼痛而發(fā)病。傳統(tǒng)的治療方法主要是口服秋水仙堿或別嘌呤,從而達(dá)到強(qiáng)制性抑制尿酸升高和大量排出尿酸,很難從根本上治療痛風(fēng),且長(zhǎng)期服用此類西藥對(duì)身體造成的傷害遠(yuǎn)比治療效果多,常見(jiàn)的有胃潰瘍,胃出血、胃穿孔,骨髓造血系統(tǒng)的抑制,引發(fā)出血癥(血小板減少癥)貧血(紅細(xì)胞減少),肝功能損害,腎功能損害,特別是對(duì)腎功能損害可加重痛風(fēng)后期發(fā)作程度,形成藥物性腎功能損害,痛風(fēng)病發(fā)作加重,更嚴(yán)重的腎損,導(dǎo)致腎功能衰竭,尿毒癥死亡的惡性發(fā)展。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種六味痛風(fēng)散配方,它具有抗炎消腫及鎮(zhèn)痛作用,可以減輕關(guān)節(jié)腫脹、疼痛,改變關(guān)節(jié)周圍組織病理變化,抑制炎癥細(xì)胞因子(匪P-3、IFN-Y),又可以降尿酸、抑制黃嘌呤氧化酶的活性,既可以應(yīng)用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作,又可用于痛風(fēng)間歇期及高尿酸血癥的降尿酸治療。為了解決
背景技術(shù):
所存在的問(wèn)題,本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案它是由虎杖30g、秦皮12g、紅藤30g、土茯苓30g、郁金15g、大黃6g組成;各藥混勻加水煎成含生藥2.2g/ml的溶液經(jīng)高溫消毒后封瓶,配制藥液置4t:冰箱中備用。陽(yáng)性對(duì)照藥秋水仙堿0.5mg/片,用蒸餾水按3mg/100ml配制成懸濁液;醋氯芬酸50mg/片,用蒸餾水按95mg/100ml配制成懸濁液。配制液置4。C冰箱中備用。本發(fā)明具有以下有益效果具有抗炎消腫及鎮(zhèn)痛作用,可以減輕關(guān)節(jié)腫脹、疼痛,改變關(guān)節(jié)周圍組織病理變化,抑制炎癥細(xì)胞因子(匪P-3、IFN-Y),又可以降尿酸、抑制黃嘌呤氧化酶的活性,既可以應(yīng)用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作,又可用于痛風(fēng)間歇期及高尿酸血癥的降尿酸治療。具體實(shí)施例方式本具體實(shí)施方式采用以下技術(shù)方案它是由虎杖30g、秦皮12g、紅藤30g、土茯苓30g、郁金15g、大黃6g組成;各藥混勻加水煎成含生藥2.2g/ml的溶液經(jīng)高溫消毒后封瓶,配制藥液置4t:冰箱中備用。陽(yáng)性對(duì)照藥秋水仙堿0.5mg/片,用蒸餾水按3mg/100ml配制成懸濁液;醋氯芬酸50mg/片,用蒸餾水按95mg/100ml配制成懸濁液。配制液置4。C冰箱中備用。本具體實(shí)施方式具有抗炎消腫及鎮(zhèn)痛作用,可以減輕關(guān)節(jié)腫脹、疼痛,改變關(guān)節(jié)周圍組織病理變化,抑制炎癥細(xì)胞因子(匪P-3、IFN-Y),又可以降尿酸、抑制黃嘌呤氧化酶的活性,既可以應(yīng)用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作,又可用于痛風(fēng)間歇期及高尿酸血癥的降尿酸治療。實(shí)施例實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組將50只Wistar大鼠飼養(yǎng)1周后,按組間均衡一致原則,隨機(jī)分為5組。即正常對(duì)照組10只(A組)、模型組10只(B組)、中藥清肝化濁飲(六味痛風(fēng)散)組10只(C組)、西藥秋水仙堿組10只(D組)、西藥醋氯芬酸組10只(E組)。實(shí)驗(yàn)中,均開(kāi)架分籠飼養(yǎng),每籠5只,自由攝食,自然光照,并定期清潔、消毒。模型制作及給藥方法給藥方法根據(jù)人用藥量與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量的體表面積法換算公式,計(jì)算出每只大鼠每次灌清肝化濁飲11g/kg,秋水仙堿0.3mg/kg,醋氯芬酸9.5mg/kg,每組每只大鼠每日給藥1次,連續(xù)6天,空白組、模型組給等量蒸餾水。模型制作第4天在各鼠右踝關(guān)節(jié)處,按關(guān)節(jié)周徑法測(cè)定各鼠踝關(guān)節(jié)周徑2次,取平均值作為各鼠致炎前正常關(guān)節(jié)周徑;灌胃給藥后30min,立即以碘酒消毒局部,用6號(hào)滅菌注射針在大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè),從45。方向插入至脛跗關(guān)節(jié)腔內(nèi),注射O.2mlMSU混懸液,正常組注入生理鹽水0.2ml,每個(gè)動(dòng)物僅注射1次,標(biāo)本采集末次給藥后24h,斷頭處死大鼠。每組取12只大鼠右踝關(guān)節(jié)組織,用10%福爾馬林液灌注固定,立即送山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院病理科備檢。每組8只取受試關(guān)節(jié),切開(kāi)受試關(guān)節(jié)囊,用lml生理鹽水灌洗關(guān)節(jié)腔,收集關(guān)節(jié)液,然后以銳利刀片切取少量關(guān)節(jié)囊、滑膜等周圍軟組織稱重,加入Ph7.2,0.2mo1L—屮BS緩沖液稀釋,以不銹鋼勻漿器勻漿,一并離心(4000r/minX5min),取上清液,分裝于EPPENDROF管中,于-8(TC冰箱保存待檢測(cè)。檢測(cè)項(xiàng)目及方法一般情況主要觀察大鼠體毛、活動(dòng)、飲食、排便、死亡等情況。步態(tài)變化造模后24h觀察各組各鼠的步態(tài)變化,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)統(tǒng)計(jì),按Coderre等介紹的步態(tài)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[6'7]:0級(jí)正常行走;1級(jí)輕微跛行,受試下肢略有彎曲;11級(jí)中度跛行,受試下肢剛觸及地面;III級(jí)重度跛行,受試下肢離開(kāi)地面,3足著地行走。大鼠關(guān)節(jié)周徑的變化實(shí)驗(yàn)第4天于造模前,用軟皮尺測(cè)量各鼠右踝關(guān)節(jié)最大周徑,在處死動(dòng)物前(即造模后72h),再用軟皮尺在前次相同部位測(cè)量關(guān)節(jié)周徑。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程均由同一個(gè)人操作。比較各組動(dòng)物造模前后關(guān)節(jié)周徑的增大程度,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。受試關(guān)節(jié)以及周圍組織病理學(xué)觀察造模后72h,取下受試大鼠右踝關(guān)節(jié)及其周圍軟組織后,至10X福爾馬林液中固定48h,脫鈣液(EDTA)脫鈣,逐級(jí)乙醇脫水,二甲苯透明、浸蠟,石蠟包埋,常規(guī)切片4um,進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色,光鏡觀察受試關(guān)節(jié)及其周圍軟組織、滑膜上皮、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等情況。測(cè)定動(dòng)物模型受試關(guān)節(jié)周圍組織炎癥細(xì)胞因子含量基質(zhì)金屬蛋白酶-3(匪P-》含量的測(cè)定,操作步驟(l)取出酶標(biāo)板,依照次序?qū)?yīng)分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中;(2)分別標(biāo)記樣品編號(hào),加入50ul樣品于空白微孔中;(3)在樣品孔中加入10ul的生物標(biāo)記液;(4)在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入50ul的酶標(biāo)記溶液;(5)36士2t:孵育反應(yīng)60分鐘;(6)洗板機(jī)清洗5次,每次靜置10-20秒;(7)每孔加入底物A、B液各50ul;(8)36±2°C避光孵育反應(yīng)15分鐘;每孔加入50ul終止液,終止反應(yīng)。結(jié)果判斷(l)儀器值于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的0D值。(2)以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖。(3)根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度范圍。(4)敏感度0.01ng/ml。Y_干擾素(IFN-Y)含量的測(cè)定操作步驟(l)按IFNlELISA試劑盒的要求配制試劑標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本稀釋液(lb)lml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品(la)中,待徹底溶解后,靜置15分鐘混勻(濃度為1000pg/ml)。標(biāo)準(zhǔn)曲線使用以下濃度1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、Opg/ml。生物素化抗體工作液以生物素化抗體稀釋液(2b)稀釋濃縮生物素化抗體(2a)(1:100)。酶結(jié)合物工作液以酶結(jié)合物稀釋液(3b)稀釋濃縮酶結(jié)合物(3a)(1:100)。(2)從已平衡至室溫的密封袋中取出所需板條。(3)除空白孔外,分別將標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ul/孔)加入相應(yīng)孔中,用封板膠紙封住反應(yīng)孔,37t:孵箱孵育90分鐘。(4)除空白孔外,加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,37t:孵箱孵育60分鐘。(5)用自動(dòng)洗板機(jī),注入350ul的洗滌液,注入與吸出間隔1530秒,洗板4次。(6)除空白孔外,加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,37t:孵箱孵育60分鐘。(7)用自動(dòng)洗板機(jī),注入350ul的洗滌液,注入與吸出間隔1530秒,洗板4次。(8)加入顯色劑飾1/孔,避光37t:孵箱孵育1015分鐘。(9)加入終止液飾1/孔,混勻后即刻測(cè)量0045。值(5分鐘內(nèi))??寡滓蜃影准?xì)胞介素-4(IL-4)含量的測(cè)定按IL-4ELISA試劑盒的要求配制,步驟同3.5.2。觀察各組動(dòng)物模型鎮(zhèn)痛情況扭體鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)清潔級(jí)全雌昆明種小鼠40只,體質(zhì)量1822g,飼養(yǎng)環(huán)境溫度2425t:,濕度60%-70%。按抽簽法隨機(jī)分為空白對(duì)照組、清肝化濁飲(清肝定痛散)組、秋水仙堿組及醋氯芬酸組,每組各IO只。采用醋酸扭體法??瞻讓?duì)照組生理鹽水灌胃,西藥秋水仙堿、醋氯芬酸組,六味痛風(fēng)飲組灌胃,均為40ml/kg。灌胃lh后,每組動(dòng)物腹腔注射6g/L醋酸溶液0.2ml/只,觀察注射后20min內(nèi)各鼠的扭體反應(yīng)次數(shù),作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析大鼠一般情況造模前3天,模型組、清肝化濁飲(清肝定痛散)組大鼠皮毛光澤色白,精神佳,活潑好動(dòng),飲食正常,體重增長(zhǎng)正常;醋氯芬酸組及秋水仙堿組大鼠皮毛干枯發(fā)黃,倦怠懶動(dòng),進(jìn)食量少,秋水仙堿組有4只出現(xiàn)便溏,有5只出現(xiàn)體重下降,其余5只體重增長(zhǎng)緩慢。并于給藥后第4天清晨發(fā)現(xiàn)死亡1只。造模后l-6h觀察,模型組大鼠局部關(guān)節(jié)膚溫增高,活動(dòng)明顯減少,攝食及飲水次數(shù)也明顯減少;六味痛風(fēng)飲組大鼠活動(dòng)、攝食、飲水與平素?zé)o明顯差異;秋水仙堿組及醋氯芬酸組與造模前相比無(wú)明顯變化。步態(tài)變化藥物對(duì)步態(tài)變化的影響見(jiàn)表1表1藥物對(duì)步態(tài)變化的影響(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>通過(guò)Ridit分析,模型組與清肝化濁飲組、秋水仙堿組及醋氯芬酸組比較均Ap<0.05,差異有顯著性意義。各治療組之間相比較均P>0.05,沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1顯示,清肝化濁飲組、秋水仙堿組及醋氯芬酸組與模型組比較,均能明顯改善模型大鼠的步態(tài)(均P<0.05),各治療組之間無(wú)明顯差異(P>0.05)。5.3大鼠關(guān)節(jié)周徑的變化造模前后各組受試關(guān)節(jié)周徑變化見(jiàn)表2表2造模前后各組受試關(guān)節(jié)周徑變化(7±S,n=8)組別n造模前(cm)造模后(cm)2.85±0.26空白組82.81±0.18<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注各組動(dòng)物造模前后關(guān)節(jié)周徑均有不同程度的增加,其中,模型組增大最為明顯,均為+P<0.05;造模后,模型組與六味痛風(fēng)飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組組間比較AP<0.05,空白組與模型組造模后組間比較AAP<0.01。由表2可見(jiàn),模型組、清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組造模前后比較均P<0.05,模型組的關(guān)節(jié)周徑增加量高于其他治療組。六味痛風(fēng)飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組與模型組比較均P<0.05,而清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組各組之間兩兩比較均P>0.05,說(shuō)明各治療組之間對(duì)抑制關(guān)節(jié)周徑增大差異無(wú)顯著性意義。由此可知,中藥清肝化濁飲均能抑制關(guān)節(jié)周徑增大,減輕關(guān)節(jié)腫脹,并與西藥具有同樣的效果。受試關(guān)節(jié)及其周圍組織的組織病理改變正常組踝關(guān)節(jié)及其周圍組織結(jié)構(gòu)正常清晰,無(wú)任何組織病理學(xué)改變。痛風(fēng)模型組局部解剖時(shí)發(fā)現(xiàn)有尿酸鹽結(jié)晶沉著于踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)。光鏡下可見(jiàn)明顯的關(guān)節(jié)炎病理改變,脛骨跗骨周圍有明顯的異物肉芽腫形成,表現(xiàn)為異物肉芽腫組織中出現(xiàn)較多的異物多核巨細(xì)胞,新生小血管形成及較多的成纖維細(xì)胞。中藥清肝化濁飲組局部解剖時(shí)有尿酸鹽結(jié)晶沉著于踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)。光鏡下可見(jiàn)關(guān)節(jié)炎病理改變,異物多核巨細(xì)胞較少見(jiàn)到、有新生小血管形成及較少成纖維細(xì)胞;局部軟骨組織亦有破壞。但總體結(jié)構(gòu)上,明顯好于痛風(fēng)模型組,肉芽組織增生明顯減少,有的幾乎已恢復(fù)正常。西藥秋水仙堿組局部解剖時(shí)尿酸鹽結(jié)晶沉著于踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)。光鏡下可見(jiàn)關(guān)節(jié)炎病理改變,異物多核巨細(xì)胞較少見(jiàn)到、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞明顯減少、有新生小血管形成及較少成纖維細(xì)胞。但總體結(jié)構(gòu)上,明顯好于痛風(fēng)模型組,有的幾乎已恢復(fù)正常。西藥醋氯芬酸組局部解剖時(shí)尿酸鹽結(jié)晶沉著于踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)。光鏡下可見(jiàn)關(guān)節(jié)炎病理改變明顯減輕,異物多核巨細(xì)胞較少見(jiàn)到、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞明顯減少、有新生小血管形成及較少成纖維細(xì)胞??傮w結(jié)構(gòu),明顯好于痛風(fēng)模型組,有的幾乎已恢復(fù)正常。動(dòng)物模型受試關(guān)節(jié)周圍組織細(xì)胞因子含量變化各組基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP_3)含量的變化見(jiàn)表3表3各組基質(zhì)金屬蛋白酶_3(MMP_3)比較(7±S,n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注模型組與空白組、清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組組間比較Ap<0.05;清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組之間兩兩比較均A'^P>0.05。由表3可見(jiàn),模型組受試關(guān)節(jié)周圍軟組織匪P-3增高,與空白組比較有差異(P<0.05),說(shuō)明急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)周圍組織有匪P-3增高。清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組與模型組比較,均有差異(P<0.05),模型組的匪P-3明顯高于各中西藥治療組,說(shuō)明清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組均能抑制匪P-3表達(dá)。而清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組之間兩兩比較均P>0.05,說(shuō)明各治療組之間對(duì)匪P-3抑制差異無(wú)顯著性意義。結(jié)果顯示,中藥清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組可以減少炎性關(guān)節(jié)內(nèi)MMP-3含量。各組y-干擾素(IFN-y)含量的變化見(jiàn)表4表4各組Y-干擾素(IFN-Y)比較(I±s,n=8)組別n均值士標(biāo)準(zhǔn)差空白組8179.64±210.49<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注模型組與空白組、清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組組間比較均AP<0.05;六味痛風(fēng)飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組之間兩兩比較均A^P>0.05。由表4可見(jiàn),模型組受試關(guān)節(jié)周圍組織有IFN-y增高,與空白組比較有差異(P<0.05),說(shuō)明急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)內(nèi)IFN-y表達(dá)。清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組與模型組比較,均有差異(P〈0.05),模型組的IFN-y明顯高于各中西藥治療組,說(shuō)明清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組均能抑制IFN-y表達(dá)。而清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組之間兩兩比較均有P>0.05,說(shuō)明各治療組之間對(duì)IFN-y抑制無(wú)顯著性差異。結(jié)果顯示,中藥六味痛風(fēng)飲可以減少炎性關(guān)節(jié)內(nèi)IFN-y含量,并與西藥具有同樣的效果。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注模型組與空白組、清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組組間比較均P>0.05。由表5可見(jiàn),模型組與空白組比較(PX).05),說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)中急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型滑膜炎癥中IL-4含量變化不明顯;清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組受試關(guān)節(jié)周圍組織中IL-4含量雖比模型組升高,但與模型組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);表明本實(shí)驗(yàn)清肝化濁飲抑制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腫脹,可能與IL-4的表達(dá)無(wú)關(guān)。各組動(dòng)物模型的鎮(zhèn)痛作用見(jiàn)表6表6各組動(dòng)物鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)比較(Z±S,n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組與模型組比較均Ap<0.Ol,各用藥組之間相比均P>0.05。由表6可見(jiàn),各用藥組與模型組比較,差異均有非常顯著性意義(P<0.01),提示各用藥組對(duì)醋酸引起的小鼠腹部疼痛均有緩解作用。各用藥組之間相比,沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。由此可見(jiàn),中藥清肝化濁飲與西藥秋水仙堿及醋氯芬酸有同樣鎮(zhèn)痛效果。權(quán)利要求六味痛風(fēng)散配方,其特征在于它是由虎杖30g、秦皮12g、紅藤30g、土茯苓30g、郁金15g、大黃6g組成;各藥混勻加水煎成含生藥2.2g/ml的溶液經(jīng)高溫消毒后封瓶,配制藥液置4℃冰箱中備用;陽(yáng)性對(duì)照藥秋水仙堿0.5mg/片,用蒸餾水按3mg/100ml配制成懸濁液;醋氯芬酸50mg/片,用蒸餾水按95mg/100ml配制成懸濁液。配制液置4℃冰箱中備用。全文摘要六味痛風(fēng)散配方,它涉及六味痛風(fēng)散治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的配方。它是由虎杖30g、秦皮12g、紅藤30g、土茯苓30g、郁金15g、大黃6g組成;各藥混勻加水煎成含生藥2.2g/ml的溶液經(jīng)高溫消毒后封瓶,配制藥液置4℃冰箱中備用;具有抗炎消腫及鎮(zhèn)痛作用,可以減輕關(guān)節(jié)腫脹、疼痛,改變關(guān)節(jié)周圍組織病理變化,抑制炎癥細(xì)胞因子(MMP-3、IFN-γ),又可以降尿酸、抑制黃嘌呤氧化酶的活性,既可以應(yīng)用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作,又可用于痛風(fēng)間歇期及高尿酸血癥的降尿酸治療。文檔編號(hào)A61P19/06GK101716312SQ20091022358公開(kāi)日2010年6月2日申請(qǐng)日期2009年11月24日優(yōu)先權(quán)日2009年11月24日發(fā)明者張茂全,張蓉,朱維平,許寧,趙云昇申請(qǐng)人:青島市第五人民醫(yī)院