專利名稱：一種來自細(xì)葉鳶尾的提取物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種來自細(xì)葉鳶尾的提取物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
老年癡呆癥(AD)是在老年人群中引起癡呆的一種漸進(jìn)性的神經(jīng)變性疾病。不 同的病理學(xué)信號和漸進(jìn)性的老年斑沉積以及導(dǎo)致神經(jīng)元退化神經(jīng)元纖維纏結(jié)伴隨著認(rèn) 知力和記憶力的衰退。AD的一個(gè)典型特征是跨膜糖蛋白P-淀粉體前身蛋白(PAPP) 水解而來的amyloid-Pp印tide (A |3)(淀粉樣-|3肽鏈(AP))累積。兩種主要的 A P (Alzheimer's P -amyloid)變體分別由40和42個(gè)氨基酸構(gòu)成，他們促進(jìn)前炎癥反應(yīng)， 激活神經(jīng)毒害通路，導(dǎo)致腦細(xì)胞功能異常甚至死亡。有關(guān)研究表明當(dāng)AP以纖絲形式聚合 時(shí)，其在細(xì)胞和體內(nèi)均有神經(jīng)毒害作用。因此，找到可以阻止AP聚集的小分子化合物在 AD治療中變得很有價(jià)值(Ce' line Rivie—re etc, Inhibitoryactivity of stilbenes on Alzheimer's P -amyloid fibrils in vitro， Bioorganic & MedicinalChemistry 15(2007)1160-1167)。 目前對老年癡呆癥的治療主要有四大類藥物，分別為膽堿脂酶抑制劑、抗氧化劑 藥物、激素替代治療藥物及非甾體抗炎藥，但這些藥物在一定程度上都存在風(fēng)險(xiǎn)或限制。目 前篩選研究具有抑制AI3聚集的小分子先導(dǎo)化合物，成為研制治療老年癡呆癥的熱點(diǎn)之 鳶尾科鳶尾屬植物。在我國主要分布在西南、西北和東北地區(qū)。該屬約有300 個(gè)種，廣泛的分布于世界各地，中國約有60個(gè)種及13個(gè)變種，(Mahmood U， KaulVK， Jirovetz L. Alkylated benzoquinones from Iris k咖aonensis. Phytochemistry， 2002,2(61) :923-926. Qin MJ， Xu LS， Tanaka T， et al. A preliminarystudy on thedistribution pattern of isoflavones in rhizomes of Iris from China and its systematicsignificance. Acta Phyto Sinica， 2000， 38 :343-349.)該屬植物已被作為 傳統(tǒng)的民間藥物，用來治療多種疾病，例如，癌癥、炎癥、細(xì)菌和病毒感染。目前，從鳶尾屬 分離得到的化合物具有抗腫瘤、抗氧化、抗瘧原蟲和抗結(jié)核等作用(l.Atta-ur-RahmnM， et al. Anti—inflammatory isoflavonoids from the rhizomes of Iris germanica. Journalof Ethnopharmacology，2003，86 :177_180.2. Bonfils JP et al. Cytotoxicity of iridals，triterpenoids from Iris, on human tumor cell lines A2780 andK562. Planta Med，2001，67 :79-82)。 細(xì)葉鳶尾(Iris tenuifolia)，為鳶尾科鳶尾屬植物，其化學(xué)成分已有一定的報(bào) 道，(l.Kojima，K. ， Gombosurengyin， P. ，Ondogyni，P. ， Begzsurengyin， D. ， Zevgeegyin， 0.， Hatano，K. ，Ogihara，Y. Flavanones from Iris te皿ifolia. Phytochemistry, 1997， 44 (4): 711—714 ;2. M. I. Choudhary， S. Hareem and H. Siddiqui， et al.A benzil andisof lavone from Iris te皿ifolia，Phytochemistry，2008，69， 1880-1885)。我們繼續(xù)研究該植物的化 學(xué)成分，分離、鑒定了一個(gè)新的化合物；生物活性實(shí)驗(yàn)表明該化合物能夠阻止AP聚集，預(yù)示對老年癡呆癥有一定的療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種來自細(xì)葉鳶尾的提取物的制備方法。
本發(fā)明提供的制備方法包括以下步驟 1)取細(xì)葉鳶尾地下部分，用無水甲醇提取，收集提取液，再去除所述提取液的無水 甲醇，得到細(xì)葉鳶尾地下部分總提取物； 2)將步驟1)得到的細(xì)葉鳶尾地下部分總提取物溶于水中，再加入氯仿進(jìn)行氯仿
萃取，收集氯仿相，再去除所述氯仿相中的氯仿，得到本發(fā)明保護(hù)的提取物。 進(jìn)一步，上述步驟l)中，所述提取重復(fù)3次。 上述步驟2)中，氯仿萃取可重復(fù)5次。 上述方法制備的提取物也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。 上述的提取物在制備阻止AI3聚集產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
進(jìn)一步，上述產(chǎn)品可以是藥物。 上述的提取物在制備治療老年癡呆癥的藥物中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍 之內(nèi)。 本發(fā)明的又一 目的在于提供一種治療老年癡呆癥的藥物。 本發(fā)明提供的治療老年癡呆癥的藥物，其活性成分是上述的提取物。 實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明提供的提取物可以阻止AI3聚集(纏結(jié))。因?yàn)锳P聚集是老
年癡呆癥的一個(gè)典型特征，因此本發(fā)明提供的提取物可用來治療老年癡呆癥。


圖1為本發(fā)明中化合物制備流程圖。 圖2為本發(fā)明的提取物使AI3纏結(jié)程度下降的結(jié)果圖，其中aggregates表示未加 樣品的對照組；9為本發(fā)明的提取物，10為水相提取物，圖2的縱坐標(biāo)是將對照組的熒光強(qiáng) 度記作l，其余組的熒光強(qiáng)度與對照組的熒光強(qiáng)度的比為相應(yīng)縱坐標(biāo)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、一種具有抑制淀粉樣蛋白13聚集作用的化合物1的制備
—、化合物1的制備
制備流程如圖l所示。
1)無水甲醇浸泡 取1661g新鮮細(xì)葉鳶尾地下部分，用無水甲醇室溫浸泡處理三次(每次5L無水甲 醇/lkg材料)，三次提取液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收甲醇，得到細(xì)葉鳶尾地下部分的總提取 物241. 8g。
2)氯仿萃取 將步驟1)得到的提取物溶解于300mL蒸餾水，移入1000mL分液漏斗中，加入等體 積的氯仿進(jìn)行萃取，萃取共進(jìn)行5次，合并氯仿萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將氯仿萃取液中的氯 仿回收，得到細(xì)葉鳶尾地下部分的氯仿提取物198. 6g，同時(shí)收集水相提取物23. 2g。該氯仿提取物也即本發(fā)明提供的提取物。 實(shí)驗(yàn)例2、本發(fā)明提供的提取物抑制淀粉樣蛋白|3聚集作用的活性評價(jià)
將實(shí)施例1得到的氯仿提取物和水相提取物進(jìn)行下面的活性分析。
試劑來源AP蛋白(1-40， M = 4329.84)購自瑞士 Bachem公司，硫磺素T(Tht) 購自Sigma公司 活性評價(jià)實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)Ce ' line Rivie—re etc. Inhibitory activity of stilbenes onAlzheimer' s_amyloid fibrils in vitro， Bioorganic & Medicinal Chemistry15 :1160-1167(2007)進(jìn)行，具體步驟如下
1、AP纏結(jié) lmgA P蛋白+2mlPBS (磷酸緩沖液，PH = 7. 4)，得到0. 5mg/ml的A P溶液，加入 EDTA(lmM)促進(jìn)纏結(jié)，在37°C ， 300rmp，孵育72h，在-S(TC冰箱中保存。
2、硫磺素T(Tht)的配制 配成300uM的Tht，備用，在4t:冰箱中保存，熒光測量時(shí)，需要稀釋到3uM。
3、樣品+AP 向tube管中加入20ul濃度為20uM的AP溶液(步驟1保存的AP溶液稀釋成 20uM)和2ul的樣品1或者樣品2，充分混勻，37t:，孵育30分鐘。樣品1是將實(shí)施例1得 到的氯仿提取物溶于二甲基亞砜(匿S0)，形成10ug/ml的溶液；樣品2是將實(shí)施例1得到 的水相提取物溶于二甲基亞砜(匿SO)，形成10ug/ml的溶液。
4、熒光測量 取1500ul的3uM的Tht于新的tube管中，加入15ul步驟3中孵育好的混合物進(jìn)
行熒光測量，激發(fā)波長442nm，測定波長480nm。 統(tǒng)計(jì)方法用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件方差分析，**P < 0. 001 。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示，氯仿提取物的實(shí)驗(yàn)組中AI3的纏結(jié)度顯著下 降，而水相提取物作用微弱，說明本發(fā)明提供的氯仿提取物可以阻止AI3聚集。因?yàn)锳P聚 集是老年癡呆癥的一個(gè)典型特征，因此本發(fā)明提供的提取物可用來治療老年癡呆癥。
權(quán)利要求
一種來自細(xì)葉鳶尾的提取物的制備方法，包括如下的步驟1)取細(xì)葉鳶尾地下部分，用無水甲醇提取，收集提取液，再去除所述提取液的無水甲醇，得到細(xì)葉鳶尾地下部分總提取物；2)將步驟1)得到的細(xì)葉鳶尾地下部分總提取物溶于水中，再加入氯仿進(jìn)行氯仿萃取，收集氯仿相，再去除所述氯仿相中的氯仿，得到來自細(xì)葉鳶尾的提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于所述步驟l)中，所述提取重復(fù)3次。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟2)中，所述氯仿萃取重復(fù)5次。
4. 權(quán)利要求l-3任一所述方法制備的提取物。
5. 權(quán)利要求4所述的提取物在制備阻止AI3聚集產(chǎn)品中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述產(chǎn)品是藥物。
7. 權(quán)利要求4所述的提取物在制備治療老年癡呆癥的藥物中的應(yīng)用。
8. —種治療老年癡呆癥的藥物，其活性成分是權(quán)利要求4所述的提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種來自細(xì)葉鳶尾的提取物及其制備方法與應(yīng)用。該方法包括如下的步驟1)取細(xì)葉鳶尾地下部分，用無水甲醇浸泡，收集提取液，再去除所述提取液的無水甲醇，得到細(xì)葉鳶尾地下部分總提取物；2)將步驟1)得到的細(xì)葉鳶尾地下部分總提取物溶于水中，再加入氯仿進(jìn)行氯仿萃取，收集氯仿相，再去除所述氯仿相中的氯仿，得到本發(fā)明保護(hù)的氯仿提取物。該方法制備的氯仿提取物具有抑制淀粉樣蛋白β聚集作用，預(yù)示對治療老年癡呆癥有一定的作用。
文檔編號A61P25/00GK101716262SQ20091024389
公開日2010年6月2日 申請日期2009年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月24日
發(fā)明者崔艷梅, 張大勇, 王輝, 趙長琦, 韓梅 申請人:北京師范大學(xué)