專利名稱：秦艽藥材的鑒別方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種常用中藥材秦艽的薄層鑒別方法，屬于中藥材質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
秦艽是一種常用的中藥材，具有祛風(fēng)濕、舒筋骨、清濕熱、止痹痛的功效，用于風(fēng)濕 痹痛、筋骨拘孿及手足不遂等癥狀。秦艽始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，其后《唐.新修本 草》等歷代本草均有論述?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》(2005年版一部)規(guī)定秦艽為龍膽科植 物秦充Gentiana macrophyllia Pall.、麻花秦充Gentiana straminea Maxim.、粗著秦充 Gentianacrassicaulis Duthie ex Burk.或小秦充Gentiana dahurica Fisch.的干燥根。
由于秦艽藥材主要來(lái)自野生，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，價(jià)格穩(wěn)步上漲，過(guò)度采挖已使法定正品秦艽藥材
日益供不應(yīng)求。因利益驅(qū)動(dòng)，市場(chǎng)還有以龍膽科滇黃芩屬的黃秦艽Veratrilla baillonii Franch.、唇形科的紅秦艽Salvia przewalskii、毛茛科烏頭屬植物Aconitum spp.等植物 的根來(lái)偽充秦艽，具有極大的用藥安全隱患。 秦艽的偽品與正品的性狀十分相似，雖然有經(jīng)驗(yàn)的專家能夠根據(jù)性狀鑒別真?zhèn)危?但對(duì)一般的藥工和醫(yī)生則做不到?，F(xiàn)版中國(guó)藥典一部中涉及秦艽的鑒別，沒(méi)有薄層法鑒別， 而是采用試管反應(yīng)鑒別生物堿的方法，而大量的研究表明秦艽藥材本身并不存在生物堿， 因而這種方法缺乏科學(xué)性和合理性；其中的根據(jù)藥材橫斷面在紫外燈下顯示熒光顏色的鑒 別，也缺乏專屬性。 從化學(xué)成分看，秦艽和其同屬(龍膽屬Gentiana)的另一味中藥龍膽，均含有相似 的苦苷類成分，如龍膽苦苷(gentiopicroside)。有文獻(xiàn)以龍膽苦苷等苦苷類成分為對(duì)照品 進(jìn)行秦艽藥材薄層色譜方法鑒別，與現(xiàn)版中國(guó)藥典一部中龍膽的鑒別類似，缺乏專屬性。況 且，根據(jù)我們的研究，以上藥材市場(chǎng)流通的秦艽偽品之一一黃秦艽也含有較高含量的龍膽 苦苷，以龍膽苦苷為對(duì)照品進(jìn)行薄層色譜鑒別也不能鑒別真?zhèn)巍?br>
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)以上的問(wèn)題，本發(fā)明旨在提供了一種專屬性強(qiáng)的秦艽藥材的鑒別方法。
本發(fā)明所述的秦艽藥材的鑒別方法是以櫟癭酸(roburic acid)為對(duì)照品，采用薄 層色譜法進(jìn)行定性鑒別。 本發(fā)明所述的秦艽藥材的鑒別方法由以下步驟組成 (a)供試品溶液制備取秦艽藥材粉末0. 5g，加甲醇10ml，超聲處理15分鐘，濾 過(guò)，濾液作為供試品溶液； (b)對(duì)照品溶液制備取櫟癭酸對(duì)照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作 為對(duì)照品溶液； (c)薄層色譜法鑒別吸取上述供試品溶液2 5 ii 1、對(duì)照品溶液1 P 1，分別點(diǎn)于 同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(30 80 : 1 : 0.5)或以三氯甲烷為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，放到105t:烘箱或以電風(fēng)吹熱風(fēng)吹至顯色
適當(dāng)，在自然光或紫外光燈(366nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上， 顯相同顏色的斑點(diǎn)。 其中步驟(a)與(b)沒(méi)有先后順序。
秦艽藥材薄層色譜鑒別研究 供試品溶液制備考察了秦艽藥材粉末的粒度，過(guò)二號(hào)篩、三號(hào)篩、四號(hào)篩的粉末 均沒(méi)有顯著差別。故優(yōu)選用過(guò)三號(hào)篩的粉末，以便與現(xiàn)版中國(guó)藥典一部中秦艽含量測(cè)定時(shí) 的粉末粒度一致?？疾炝颂崛∪軇缂状?、80%甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷和丙
酮(i : 1)、三氯甲烷和甲醇(1 : 1)、80%乙醇，表明甲醇較好。以甲醇為溶劑，考察了提
取方法，如冷浸(6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí))、回流(1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí))、超聲處理(15分 鐘、30分鐘、45分鐘)，發(fā)現(xiàn)以超聲處理15分鐘處理簡(jiǎn)單和節(jié)約時(shí)間。試用了兩種功率和頻 率的超聲提取儀，結(jié)果均能檢出，沒(méi)有差別。 對(duì)照品櫟癭酸(C3。H4802)為我們從秦艽藥材中提取分離得到，結(jié)構(gòu)經(jīng)過(guò)光譜法和 色譜法鑒定并與文獻(xiàn)比對(duì)，純度^ 95%。 薄層板考察了不同的薄層板，如國(guó)產(chǎn)預(yù)制板(煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所，煙臺(tái)匯友 硅膠開(kāi)發(fā)有限公司)、進(jìn)口預(yù)制板但N板、Merck板)和自制板(硅膠為青島海洋化工廠生 產(chǎn))，均能較好檢測(cè)到。為達(dá)到較好的重現(xiàn)性，最好選用預(yù)制板，尤其是性價(jià)比較好的MN板。
點(diǎn)樣和展開(kāi)點(diǎn)樣量，對(duì)照品溶液試用了 liU，供試品溶液試用了 2iU，3iU， 5yl。展開(kāi)劑考察了三氯甲烷，三氯甲烷-甲醇-甲酸(80 : 1 : 0.5)，三氯甲烷-甲醇-甲
酸(50 : i : o. 5)，三氯甲烷-甲醇-甲酸(30 : i : o. s)，石油醚-乙酸乙酯(4 : i)，
二氯甲烷等。薄層板在具展開(kāi)劑的展開(kāi)缸中，考察預(yù)飽和15分鐘、30分鐘和45分鐘。上行
展開(kāi)，展距6 8cm。表明樣品點(diǎn)樣量2 5 ii 1，展開(kāi)劑選用三氯甲烷_(kāi)甲醇_甲酸系統(tǒng)，
尤其是三氯甲烷-甲醇-甲酸(50 : 1 : 0.5)，預(yù)飽和30分鐘時(shí)，斑點(diǎn)的分離度、比移值均
較好；展開(kāi)劑選用單一的三氯甲烷時(shí)，展開(kāi)系統(tǒng)簡(jiǎn)化，只是比移值稍低。 顯色櫟癭酸為三鵬類化合物，噴以10%硫酸乙醇，以電吹風(fēng)熱風(fēng)吹或在105t:的
烘箱顯色適當(dāng)，在自然光或紫外燈光(366nm)下觀察，供試品色譜中，與對(duì)照品相應(yīng)位置處
顯示相同顏色的斑點(diǎn)。 溫度和濕度影響考察了不同的室溫條件(空調(diào)控制18°C，22°C，25°C，30°C )，相 對(duì)濕度條件(除濕機(jī)控制40 % ， 50 % ， 60 % ， 70 % )，表明溫度在18 22°C ，相對(duì)濕度在40 50%的環(huán)境較理想。這是因?yàn)?，展開(kāi)系統(tǒng)的極性偏小，在相對(duì)濕度較大和溫度較高的環(huán)境， 均不利于展開(kāi)。 由于采用了以上技術(shù)方案，與現(xiàn)有秦艽藥材鑒別技術(shù)相比，本發(fā)明所述的秦艽藥 材的鑒別方法不僅準(zhǔn)確性高，而且專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)單、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)?？蓪⑵?列入法定標(biāo)準(zhǔn)，作為秦艽藥材專屬性鑒別方法。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說(shuō)明，但不表明對(duì)本發(fā)明進(jìn)行任何限制。
實(shí)施例1 : 取秦艽樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)0. 5g，置具塞錐形瓶中，加甲醇10ml，超聲處理15分，頻率40KHZ)，濾過(guò)，濾液作供試品溶液。另取櫟癭酸對(duì)照品適量，加三氯甲 烷制成每1ml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一 部附錄VI B)試驗(yàn)。用全自動(dòng)點(diǎn)樣儀(Automatic TLC Sampler-4)帶狀點(diǎn)樣，分別取上述 供試品溶液3 1和對(duì)照品溶液1 P 1，點(diǎn)在同一 MN高效薄層板上。以三氯甲烷_(kāi)甲醇_甲 酸(50 : 1 : 0.5)為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)至6cm，取出，揮干。將薄層板均勻噴以10%硫酸乙 醇，放入溫度在105t:的烘箱中顯色適當(dāng)，在自然光下和紫外光燈(366nm)下檢視。供試品 色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，即為秦艽藥材。
實(shí)施例2 : 取秦艽樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)0. 5g，置具塞錐形瓶中，加甲醇10ml，超聲處理15分 鐘(功率300W，頻率20KHZ)，濾過(guò)，濾液作供試品溶液。另取櫟癭酸對(duì)照品適量，加三氯甲 烷制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一 部附錄VI B)試驗(yàn)。以點(diǎn)樣毛細(xì)管分別吸取上述供試品溶液5ia和對(duì)照品溶液liU，點(diǎn)在
同一國(guó)產(chǎn)預(yù)制薄層板上。以三氯甲烷-甲醇-甲酸(so : i : 0.5)為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)至
8cm，取出，揮干。將薄層板均勻噴以10%硫酸乙醇，放入溫度在105t:的烘箱中顯色適當(dāng)， 在自然光下和紫外光燈(366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相 同顏色斑點(diǎn)，即為秦艽藥材。
實(shí)施例3 : 取秦艽樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)0. 5g，置具塞錐形瓶中，加甲醇10ml，超聲處理15分 鐘(功率250W，頻率40KHZ)，濾過(guò)，濾液作供試品溶液。另取櫟癭酸對(duì)照品適量，加三氯甲 烷制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一 部附錄VI B)試驗(yàn)。以點(diǎn)樣毛細(xì)管分別吸取上述供試品溶液5 ii 1和對(duì)照品溶液1 P 1，點(diǎn)在 自制薄層板上。以三氯甲烷-甲醇-甲酸(30 : 1 : 0.5)為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)至8cm，取 出，揮干。將薄層板均勻噴以10%硫酸乙醇，以電吹風(fēng)熱風(fēng)吹至顯色適當(dāng)，在自然光下和紫 外光燈(366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，即 為秦艽藥材。
實(shí)施例4 : 取樣品(秦艽正品秦艽、麻花秦艽、粗莖秦艽、小秦艽；秦艽偽品黃秦艽、紅秦 艽、烏頭屬某種；龍膽正品龍膽和堅(jiān)龍膽)粉末(過(guò)三號(hào)篩)O. 5g，置具塞錐形瓶中，加甲 醇10ml，超聲處理15分鐘(功率250W，頻率40KHZ)，濾過(guò)，濾液作供試品溶液。另取櫟癭 酸對(duì)照品適量，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法 (《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)。用半自動(dòng)點(diǎn)樣儀(Camag Autosampler 3) 帶狀點(diǎn)樣，分別取上述供試品溶液2 ii 1和對(duì)照品溶液1 P 1，點(diǎn)在同一Merck高效薄層板上。 將薄層板放入預(yù)先用展開(kāi)劑為三氯甲烷飽和30分鐘的展開(kāi)缸中，上行展開(kāi)至6cm，取出，揮 干。將薄層板均勻噴以10%硫酸乙醇，放入溫度在1051:的烘箱中顯色適當(dāng)，在自然光下和 紫外光燈(366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)的 即為秦艽藥材；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，沒(méi)有斑點(diǎn)或有不同顏色斑點(diǎn)的即為龍膽藥材 或秦艽偽品。 以上實(shí)施例中，各試劑均為分析純，櫟癭酸純度^ 95%。
權(quán)利要求
秦艽藥材的鑒別方法，其特征是以櫟癭酸為對(duì)照品，采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別。
2. 按照權(quán)利1的鑒別方法，其特征在于包括如下步驟(a) 供試品溶液制備取秦艽藥材粉末0. 5g，加甲醇10ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，濾 液作為供試品溶液；(b) 對(duì)照品溶液制備取櫟癭酸對(duì)照品，加三氯甲烷制成每1ml含lmg的溶液，作為對(duì) 照品溶液；(c) 薄層色譜法鑒別吸取上述供試品溶液2 5ia、對(duì)照品溶液liU，分別點(diǎn)于同一 硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(30 80 : 1 : 0.5)或以三氯甲烷為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，放到105t:烘箱或電風(fēng)吹以熱風(fēng)吹至顯色適當(dāng)，在自然光或紫外光燈(366nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同 顏色的斑點(diǎn)；其中步驟(a)與(b)沒(méi)有先后順序。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種常用藥材的定性鑒別方法。本發(fā)明所述的秦艽藥材的鑒別方法是以櫟癭酸為對(duì)照品，采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別。本發(fā)明所述的秦艽藥材的鑒別方法由以下步驟組成(a)供試品溶液制備；(b)對(duì)照品溶液制備；(c)薄層色譜法鑒別。其中步驟(a)和(b)沒(méi)有先后順序。本發(fā)明所述的秦艽藥材的鑒別方法選擇櫟癭酸為對(duì)照品，薄層鑒別專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、成本低廉?？蓪⑵淞腥敕ǘ?biāo)準(zhǔn)，作為秦艽藥材專屬性鑒別方法。
文檔編號(hào)A61K125/00GK101732404SQ20091024787
公開(kāi)日2010年6月16日 申請(qǐng)日期2009年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月31日
發(fā)明者侴桂新, 俞麗, 吳立宏, 王崢濤 申請(qǐng)人:上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心