專利名稱：包含喜樹堿類抗腫瘤藥物的熱敏脂質(zhì)體制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種載抗癌藥物熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，
確切而言涉及包含喜樹堿類抗腫瘤藥物的熱敏脂質(zhì)體制劑。
背景技術(shù)：
無論是在國外還是國內(nèi)，腫瘤都仍然是一類常見且嚴(yán)重威脅人們生命和生活質(zhì)量 的主要疾病之一。正是基于這樣的認(rèn)識(shí)，各國政府、研究機(jī)構(gòu)和制藥公司長期來一直對(duì)腫瘤 研究和抗腫瘤藥物開發(fā)予以高度重視和巨額投資，其結(jié)果使腫瘤治療不斷進(jìn)步。藥物療法 在腫瘤治療或綜合治療、延長腫瘤患者生命和提高他們的生活質(zhì)量方法具有積極的和不可 替代的作用。抗腫瘤藥物目前在臨床上有著廣泛應(yīng)用，但其副作用較大。
喜樹堿或其衍生物是DNA合成抑制劑，用于多種癌癥疾病的治療。喜樹堿或其衍 生物以拓?fù)洚悩?gòu)酶為作用部位，耙抑制DNA的合成而發(fā)揮抗癌作用的藥物，適用于不同生 長速度的腫瘤，細(xì)胞毒性強(qiáng)，對(duì)于胃癌、肝癌、骨癌、白血病、膀胱癌等多種惡性腫瘤的治療 效果明顯。目前市場上喜樹堿類藥物的品種有喜樹堿、鹽酸伊立替康、鹽酸拓?fù)涮婵怠?_羥 基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、10-羥基喜樹堿、硝基喜樹堿、7-(|3-三甲基甲硅烷基)乙基喜樹 堿、7-(叔丁氧基)亞氨甲基喜樹堿、SN-38、9-NC等，主要通過靜脈、口服、噴霧等方式給藥。
現(xiàn)有技術(shù)制備的喜樹堿或其衍生物制劑，在臨床使用中存在半衰期短、生物利用 度低并且毒副作用明顯等缺點(diǎn)，特別是喜樹堿、羥基喜樹堿、SN-38等具有水難溶性、脂難溶 性特點(diǎn)，在制備過程中多選用高pH值的堿性溶劑體系，使活性成份大大降低，活性結(jié)構(gòu)不 穩(wěn)定，而且靶向性也差，從而導(dǎo)致抗癌活性受到限制，降低了治療指數(shù)及安全指數(shù)。為解決 上述技術(shù)缺陷，人們采用了用脂質(zhì)體包封喜樹堿及其衍生物，提高藥物的溶解度，增強(qiáng)藥物 靶向性，提高生物利用度以及降低毒副作用。 脂質(zhì)體是磷脂分散在水中時(shí)形成的脂質(zhì)雙分子層，其內(nèi)部為水相的閉合囊泡，又 稱人工生物膜。自1965年被英國Bangham發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體并首創(chuàng)制備后，它作為生物膜的模型 和藥物載體被廣泛用于實(shí)驗(yàn)研究，并向臨床發(fā)展。據(jù)實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用的需要，可以改變脂質(zhì) 體的脂質(zhì)成分提高脂質(zhì)體的靶向性脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物載體已試用于臨床并取得了較 滿意的療效。 脂質(zhì)體作為藥物載體具有靶向性和淋巴定向性，可以控制藥物釋放，降低藥物毒 性，提高藥物的穩(wěn)定性，改變藥物體內(nèi)分布等。普通脂質(zhì)體雖然能夠改善抗癌藥物的療效， 但由于其易被肝臟、脾臟內(nèi)的巨噬細(xì)胞攝取而迅速消除，藥物在體內(nèi)滯留時(shí)間短。采用特殊 的磷脂等作為膜材可使脂質(zhì)體膜在特定溫度下僅僅釋放極少量的藥物，而在適宜溫度以上 時(shí)發(fā)生相變，從而大量釋放藥物，即具有熱敏性質(zhì)，因此可以通過熱療的方式增加藥物在腫 瘤局部的釋放，從而增加了藥物的靶向性，大大提高了療效，減小了藥物用量，降低了全身 毒副作用，因此對(duì)于腫瘤的治療具有非常重要的意義。另外，普通脂質(zhì)體的表面進(jìn)一步用親 水性的聚乙二醇(PEG)等進(jìn)行修飾，可制成長循環(huán)脂質(zhì)體，既可以降低RES對(duì)其攝取，同時(shí) 可以通過延長其在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間以增加腫瘤組織的攝取。若將脂質(zhì)體的長循環(huán)特點(diǎn)與熱敏特點(diǎn)結(jié)合起來，則不僅可以延長藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，同時(shí)增加藥物在腫瘤部位的靶向 作用，大大降低藥物的毒副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種包含喜樹堿類藥物的熱敏脂質(zhì)體。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是采用類脂制備，處方中加入相變調(diào)節(jié) 劑以達(dá)到熱敏的目的，另外還可以同時(shí)添加長循環(huán)材料，以使該脂質(zhì)體同時(shí)具有熱敏和長 循環(huán)的雙重特性。
發(fā)明概述 本發(fā)明第一方面提供了一種喜樹堿類抗腫瘤藥物的熱敏脂質(zhì)體制劑，該制劑包
含喜樹堿類抗腫瘤藥物、普通類脂、相變調(diào)節(jié)劑和任選的長循環(huán)材料，其中相變調(diào)節(jié)劑占 脂質(zhì)重量的6-100 % ，優(yōu)選10-100 % ，優(yōu)選20-100 % ，優(yōu)選30-100 % ，優(yōu)選40-100 % ，優(yōu)選 50-100 % ，優(yōu)選60-100 % ;長循環(huán)材料占脂質(zhì)重量的0-40 % ，優(yōu)選0-30 % ，優(yōu)選0-20 % ， 優(yōu)選1-20%，優(yōu)選5-20%，優(yōu)選8-18%，優(yōu)選10-15% ;喜樹堿類藥物與脂質(zhì)的重量比為
i : o. 5 i : ioo。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中包含喜樹堿類抗腫瘤藥物、 普通類脂、相變調(diào)節(jié)劑和長循環(huán)材料。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其熱敏溫度范圍為35°C 50°C， 優(yōu)選為39°C 42°C。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其特征在于粒徑分布范圍是 10nm 900nm，優(yōu)選是50 300nm。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物 選自伊立替康、拓?fù)涮婵?、喜樹堿、9-羥基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、10-羥基喜樹堿、硝基喜 樹堿、7-(P-三甲基甲硅烷基)乙基喜樹堿、7-(叔丁氧基)亞氨甲基喜樹堿、SN-38和9-NC 以及它們的藥用鹽。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的普通類脂選自卵磷 脂、豆磷脂、腦磷脂、蛋磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)、二棕櫚酰-DL-a-磷脂酰膽堿(DPPC)、二肉豆 蔻酰卵磷脂(DMPC)、氫化蛋黃磷脂、氫化大豆磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰甘 油、磷脂酸、二鯨蠟磷酸酯(DCP)、DLPC、DSPC、DSPG以及其中兩種或更多種的混合物。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的相變調(diào)節(jié)劑選自 DPPC、 MSPC、 DSPG、 DSPA、 DLPC、 DMPC、 MPPC、 MLPC、聚己內(nèi)酯、聚乙交酯丙交酯、聚乳酸、聚氧 乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪酸醚或聚氧乙烯甲基蓖麻油醚以及其中兩種或更多種的混 合物。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的長循環(huán)材料選自各種
分子量的聚乙二醇(PEG)、吐溫、芐澤、PEG化磷脂、PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、PEG化聚
己內(nèi)酯、PEG化聚乙交酯丙交酯、PEG化聚乳酸、伯洛沙姆188、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙
烯脂肪酸醚、聚氧乙烯甲基蓖麻油醚以及其中兩種或更多種的混合物。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其還可以包含荷電材料、分散介質(zhì)及凍干保護(hù)劑。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的荷電材料選自十八胺、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇和它們的混合物。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的分散介質(zhì)選自磷酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、硫酸銨溶液、5%葡萄糖水溶液、9%蔗糖水溶液和檸檬酸緩沖液。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的凍干保護(hù)劑選自葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇、右旋糖酐和它們的混合物。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其被制成注射液、凍干粉針劑、大輸液或噴霧劑劑型。 本發(fā)明第二方面提供了一種藥物組合物，其包含治療有效量的本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的熱敏脂質(zhì)體制劑，以及藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。
發(fā)明詳述 下面更進(jìn)一步地描述本發(fā)明。本發(fā)明所引述的所有文獻(xiàn)，它們的全部內(nèi)容通過引用并入本文，并且如果這些文獻(xiàn)所表達(dá)的含義與本發(fā)明不一致時(shí)，以本發(fā)明的表述為準(zhǔn)。此外，本發(fā)明使用的各種術(shù)語和短語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義，即便如此，本發(fā)明仍然希望在此對(duì)這些術(shù)語和短語作更詳盡的說明和解釋，提及的術(shù)語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準(zhǔn)。 本發(fā)明提出了一種供注射用喜樹堿類藥物的熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，其特征在于該脂質(zhì)體為含喜樹堿類抗腫瘤藥物的、具有在適宜溫度以上發(fā)生相變而可以快速釋放藥物的熱敏特點(diǎn)；該制劑主要由喜樹堿類抗腫瘤藥物、普通類脂(在本發(fā)明中亦可稱為脂質(zhì))、相變調(diào)節(jié)劑、任選的長循環(huán)材料以及任選的其他添加劑組成，其中喜樹堿類藥物與脂質(zhì)的比
例為i : o. 5 i : ioo ;優(yōu)選地，其中喜樹堿類藥物與脂質(zhì)的比例為i : 5 i : 95 ;優(yōu)
選地，其中喜樹堿類藥物與脂質(zhì)的比例為i : io i : 90;優(yōu)選地，其中喜樹堿類藥物與
脂質(zhì)的比例為i : 15 i : 85 ;更優(yōu)選地，其中喜樹堿類藥物與脂質(zhì)的比例為i : o.5
i : ioo ;更優(yōu)選地，其中喜樹堿類藥物與脂質(zhì)的比例為i : 20 i : 60。 所述的喜樹堿類藥物的熱敏脂質(zhì)體，其特征在于所述熱敏脂質(zhì)體包括單純的熱敏
脂質(zhì)體和長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體，當(dāng)制劑組成中長循環(huán)材料的含量為零時(shí)即為單純的熱敏脂質(zhì)
體，當(dāng)其中含有長循環(huán)材料時(shí)即為長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體。 所述的喜樹堿類藥物的熱敏脂質(zhì)體，其特征在于所述熱敏脂質(zhì)體的熱敏溫度范圍為35。C 50°C ，優(yōu)選36°C 48°C ，優(yōu)選36°C 45°C ，優(yōu)選37°C 42°C ，優(yōu)選39°C 42°C 。粒徑分布范圍是10nm 900nm，優(yōu)選是20 800nm，優(yōu)選是30 500nm，優(yōu)選為50 300nm。
所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物主要指具有明顯抗腫瘤活性的喜樹堿及其衍生物，喜樹堿的活性衍生物包括水溶性衍生物和水難溶性衍生物，水溶性衍生物如伊立替康、拓?fù)涮婵?，水難溶性衍生物如喜樹堿、9_羥基喜樹堿、9_氨基喜樹堿、10-羥基喜樹堿、硝基喜樹堿、7-(P-三甲基甲硅烷基)乙基喜樹堿、7-(叔丁氧基)亞氨甲基喜樹堿、SN-38、9-NC以及它們的藥用鹽。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物選自io-羥基喜樹堿、伊立替康、拓?fù)涮婵?、SN-38、9-NC或其藥用鹽。 所述的普通類脂主要包括磷脂和膽固醇，其中磷脂可以是天然、合成、半合成磷脂或其混合物，如卵磷脂、豆磷脂、腦磷脂、蛋磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)、二棕櫚酰-DL-a-磷脂酰膽堿(DPPC)、二肉豆蔻酰卵磷脂(DMPC)、氫化蛋黃磷脂、氫化大豆磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、磷脂酸、二鯨蠟磷酸酯(DCP) 、 DLPC、 DSPC、 DSPG或其兩種或兩種以上的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的普通類脂為磷脂酰膽堿。 所述的相變調(diào)節(jié)劑包括具有不同相變溫度的磷脂(如DPPC、 MSPC、 DSPG、 DSPA、DLPC、DMPC、MPPC、MLPC等)、高分子材料(如聚己內(nèi)酯、聚乙交酯丙交酯、聚乳酸、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪酸醚或聚氧乙烯甲基蓖麻油醚)或其中的幾種。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的相變調(diào)節(jié)劑相變調(diào)節(jié)劑為MSPC。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的相變調(diào)節(jié)劑相變調(diào)節(jié)劑為DSPG。 所述的長循環(huán)材料包括聚乙二醇(PEG，其分子量可以為200-20000 ，優(yōu)選400-10000，優(yōu)選600-6000，例如600-2000，例如2000-4000，例如4000-6000)、吐*益、節(jié)澤、PEG化磷脂、PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(例如DSPE-PEG2000) 、 PEG化聚己內(nèi)酯、PEG化聚乙交酯丙交酯、PEG化聚乳酸、伯洛沙姆188、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪酸醚和聚氧乙烯甲基蓖麻油醚其中之一或任何組合形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的長循環(huán)材料為PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(例如DSPE-PEG2000)。 所述的其他添加劑包括荷電材料、分散介質(zhì)及凍干保護(hù)劑。荷電材料可以是帶正電荷的材料，如十八胺，也可以是帶負(fù)電荷的材料，如磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇；分散介質(zhì)可以是磷酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、硫酸銨溶液、5%葡萄糖水溶液、9%蔗糖水溶液或檸檬酸緩沖液；凍干保護(hù)劑選自葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇或右旋糖酐中的一種或幾種；其他添加劑還可以是氯化鈉、甘油、甘氨酸、維生素E、丁基羥基甲苯中的一種或多種。 根據(jù)本發(fā)明，所述的熱敏脂質(zhì)體制劑包封率為60% _100%，優(yōu)選為80% 100%。根據(jù)本發(fā)明，所述的熱敏脂質(zhì)體制劑中的藥物含量為0. 2-20mg/ml，優(yōu)選0. 5-10mg/ml，優(yōu)選l_5mg/ml ，優(yōu)選2mg/ml ，優(yōu)選。 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的熱敏脂質(zhì)體制劑包含
磷脂酰膽堿 1600重量份， DSPE-PEG2000 200重量份， MSPC 200重量份， 10-羥基喜樹堿 30重量份。 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的熱敏脂質(zhì)體制劑包含
磷脂酰膽堿 900重量份， MSPC 100重量份， 10-羥基喜樹堿 20重量份。 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的熱敏脂質(zhì)體制劑包含 磷脂酰膽堿 1400重量份， DSPE-PEG2000 200重量份， MSPC 200重量份， EPC 200重量份， 鹽酸伊立替康30重量份。
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在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的熱敏脂質(zhì)體制劑包含
磷脂酰膽堿1500重量份，
DSPE-PEG2000 200重量份，
MSPC 200重量份，
DSPG 100重量份，
鹽酸拓?fù)涮婵?80重量份。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的熱敏脂質(zhì)體制劑包含
磷脂酰膽堿 600重量份，
DSPE-PEG2000 100重量份，
CH 200重量份，
DSPG 100重量份，
SN-38 50重量份。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的熱敏脂質(zhì)體制劑包含
磷脂酰膽堿 1600重量份，
DSPE-PEG2000 200重量份，
DSPG 200重量份，
9-NC 20重量份。 根據(jù)本發(fā)明，所述的熱敏脂質(zhì)體的制備方法包括薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、空白脂 質(zhì)體載藥法、復(fù)乳法、乙醇注入法、載體沉積法、主動(dòng)載藥法(pH梯度法和硫酸銨梯度法)、 凍干水化法、噴霧干燥法、凍融循環(huán)法、超聲法、高壓均質(zhì)法或其中的兩種或兩種以上的方法。 所述的熱敏脂質(zhì)體可以制成注射液、凍干粉針劑、大輸液或噴霧劑。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，采用熱敏材料制備脂質(zhì)體，和腫瘤熱療相結(jié)合，可以增加藥物 在靶區(qū)的釋放，提高療效，還可以減少藥物在全身循環(huán)系統(tǒng)的分布，從而降低總的用藥量， 同時(shí)降低全身毒副作用。若將熱敏脂質(zhì)體的表面用長循環(huán)材料修飾，可以減少血漿蛋白的 調(diào)理化作用，降低網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)脂質(zhì)體的識(shí)別，從而延長其在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，因此這種 長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體兼具有延長在體內(nèi)的存留時(shí)間同時(shí)具有被動(dòng)靶向至腫瘤組織和增加在 腫瘤組織釋放的特點(diǎn)。將所述脂質(zhì)體是制成注射給藥的藥物制劑形式，并可進(jìn)一步制備成 治療各種疾病的靶向給藥高效低毒的新劑型。 本發(fā)明提供的熱敏脂質(zhì)體制劑的特征是，該類脂質(zhì)體具有熱敏性，在腫瘤組織局 部加熱時(shí)可使該脂質(zhì)體被動(dòng)靶向至該腫瘤部位，并在該腫瘤部位大量釋放藥物，提高療效， 降低全身的毒副作用。 本申請將喜樹堿類抗腫瘤藥物制成以熱敏脂質(zhì)體為載體的劑型，不僅將更有利于 改變其傳遞和釋放方式，還可以提高療效，減少毒副作用。目前未見同類報(bào)道。


圖1為實(shí)施例 一 的脂質(zhì)體制劑的粒徑分布圖。圖中，縱坐標(biāo)"cumulative distribution"表示"累禾只分布，，，"density distribution"表示"密度分布，，，橫座標(biāo) "particle size"表示" 度"；圖2、3和6中也具有相同含義。
圖2為實(shí)施例二的脂質(zhì)體制劑的粒徑分布圖。
圖3為實(shí)施例三的脂質(zhì)體制劑的粒徑分布圖。 圖4為實(shí)施例五的脂質(zhì)體制劑的差示掃描量熱分析圖。圖中，縱坐標(biāo)"heat flow"
表示"熱流"，橫座標(biāo)"temperature"表示"溫度"。 圖5為實(shí)施例五的脂質(zhì)體制劑的釋放度研究結(jié)果圖。 圖6為實(shí)施例六的脂質(zhì)體制劑的粒徑分布圖。
具體實(shí)施例方式
下面通過具體的實(shí)施例或試驗(yàn)例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但是，應(yīng)當(dāng)理解為，這些實(shí)施 例或試驗(yàn)例僅僅是用于更詳細(xì)具體地說明之用，而不應(yīng)理解為用于以任何形式限制本發(fā) 明。 本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖 然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此 作盡可能詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚，在下文中，如果未特別說明，本發(fā)明所用材料和 操作方法是本領(lǐng)域公知的。 棚列一、10-羊碟雄堿皿f跡鍾月旨i1H本先ll誦燃
麵,扁去: 稱取磷脂酰膽堿1. 6g、DSPE-PEG2000 0. 2g、MSPC 0. 2g、 10-羥基喜樹堿30mg于茄 形瓶中，加入5ml氯仿甲醇(3 : 1)溶液溶解后，置水浴加熱真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑， 在燒瓶壁上形成磷脂薄膜，加入預(yù)熱至5(TC的磷酸緩沖液20ml水化，減壓脫氣，探頭超聲 或均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，將粒徑減小至納米級(jí)，采用葡聚糖凝膠柱去除未包封藥物即得。經(jīng)激光粒徑 掃描儀測定其粒徑分布如圖1。包封率為93%，藥物含量為1. 5mg/ml。
實(shí)施例二、10-M某喜樹堿的熱敏fl旨質(zhì)體制劑的制備
逆相蒸發(fā)法: 稱取磷脂酰膽堿0. 9g、MSPC 0. lg于燒杯中，加入2ml氯仿溶解，再加入2mg/ml的 10-羥基喜樹堿的氫氧化鈉水溶液10ml探頭超聲成乳，旋蒸去除有機(jī)溶劑，旋蒸過程中緩 慢滴加磷酸鹽緩沖液至終體積為20ml，最后減壓脫氣，探頭超聲或均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，將粒徑減小 至納米級(jí)，采用葡聚糖凝膠柱去除未包封藥物。經(jīng)激光粒徑掃描儀測定其粒徑分布如圖2。
實(shí)施例三、鹽酸伊立替康的長循環(huán)熱敏fl旨質(zhì)體的制備
主動(dòng)載藥法 硫酸銨梯度法稱取磷脂酰膽堿1. 4g、 DSPE-PEG2000 :0. 2g、 MSPC :0. 2g、 EPC : 0. 2g于茄形瓶，加5ml氯仿微熱至完全溶解，蒸成薄膜，用20ml硫酸銨溶液水化，探頭超 聲至有乳光，制備空白脂質(zhì)體溶液，將空白脂質(zhì)溶液均質(zhì)后過濾膜，整粒后除去外相水中的 鹽，除鹽后的空白脂質(zhì)體加入30mg鹽酸伊立替康，水浴孵化既得，微柱離心法去除未包封 的藥物。經(jīng)激光粒徑掃描儀測定其粒徑分布如圖3。包封率為95%，藥物含量為1. 5mg/ml。
實(shí)施例四、鹽酸fc撲替康的長循環(huán)熱敏fl旨質(zhì)體的制備
凍融循環(huán)法 稱取磷脂酰膽堿1. 5g、DSPE-PEG2000 :0. 2g、MSPC :0. 2g、DSPG :0. lg，溶于5ml氯 仿后旋蒸成薄膜，加入20ml含4mg/ml鹽酸拓?fù)涮婵档?%蔗糖水溶液水化，并經(jīng)探頭超聲或均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，將粒徑減小至納米級(jí)，置于-2(TC冷凍，室溫或5(TC融化，為一個(gè)凍融循環(huán)， 一般為3-4個(gè)循環(huán)，最后一次冷凍后，4t:融化，透析去除未包封藥物。 實(shí)施例五、SN-38的長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的制備
主動(dòng)載藥法: pH梯度法稱取磷脂酰膽堿0. 6g、 DSPE-PEG2000 :0. lg、 CH :0. 2g、 DSPG :0. lg于 茄形瓶，加5ml氯仿微熱至完全溶解，蒸成薄膜，用pH4. 0磷酸鹽緩沖液10ml水化，探頭超 聲至有乳光，稱取50mg藥物溶于10ml 0. lmol/L氫氧化鈉溶液，和上述脂質(zhì)體混勻，并將 外相用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為7. O，此為內(nèi)酸外堿型；外酸內(nèi)堿型則反之，用pH7. 0的緩沖液水 化，外相調(diào)節(jié)pH為4. 0。將制備的脂質(zhì)體進(jìn)行差示掃描量熱分析，以測定脂質(zhì)體膜的相變溫 度，結(jié)果如圖4 ;將樣品分別在不同溫度下進(jìn)行釋放度研究，采用超濾法測定不同時(shí)間點(diǎn)的 累積釋放度，研究結(jié)果如圖5。 輔齢、9-NC白術(shù)跡雄月旨制本白勺燃
乙醇灃入法稱取磷脂酰膽堿1. 6g、DSPE-PEG2000 :0. 2g、DSPG :0. 2g處方量磷脂、9-NC 20mg，
加入乙醇5ml，稍加熱并超聲使溶解，將其以50uL/次注入20ml預(yù)熱至5(TC的磷酸鹽緩沖
溶液中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去處大部分的乙醇，最后減壓脫氣，過均質(zhì)機(jī)減小粒徑，采用葡聚糖凝膠
柱去除未包封藥物。經(jīng)激光粒徑掃描儀測定其粒徑分布如圖6。 棚列七'、雄堿孝靴勿,跡雄月旨細(xì)奸謝齊l隨 將實(shí)施例一制備的喜樹堿類藥物的長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體懸液20ml，加入3g乳糖，溶
解后用O. 22ym微孔濾膜過濾除菌后置于安瓶瓶中，預(yù)凍12h后經(jīng)冷凍干燥，充氮?dú)夥饪诤?br> 得到脂質(zhì)體的凍干粉針劑。 實(shí)施例八、喜樹堿長循環(huán)熱敏fl旨質(zhì)體體內(nèi)熱敏釋藥件能比較 取9只雌性小鼠(20±2g)，隨機(jī)分為3組，每組3只(喜樹堿注射液組、喜樹堿長 循環(huán)脂質(zhì)體組(參考實(shí)施例一制備，但不加入相變調(diào)節(jié)劑)、實(shí)施例一制備的喜樹堿長循環(huán) 熱敏脂質(zhì)體組，各組主成分均為io-羥基喜樹堿)，編號(hào)，稱重。小鼠麻醉后置于42士0.5t: 水浴裝置上， 一條腿伸入水浴中，其余部分在隔板上，水浴加熱15min后，3組分別尾靜脈注 射喜樹堿注射液、喜樹堿長循環(huán)脂質(zhì)體和喜樹堿長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體，給藥劑量為2. 0mg/kg。 保持水浴30min后，頸椎脫臼處死，每只小鼠取兩條后腿肌肉，稱重，未加熱腿作為自身對(duì) 照。樣品處理后HPLC測定，結(jié)果概述于下表。
組別注射液長循環(huán)脂質(zhì)體長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體
Adrug/Aref%Adrug/Aref%Adrug/Aref%A<jrug/Aref%A(jrug/Aref >^
(加熱腿)(未加熱腿)(加熱腿)(未加熱腿)(力口熱腿)(未加熱腿)
14.94.55.95.511.54.6
24.54.44.84.912.35.2
34.65.05.24.811.24.9
9
由上述結(jié)果可以看出，相對(duì)注射液和長循環(huán)脂質(zhì)體而言，熱敏長循環(huán)脂質(zhì)體遞送 至加熱腿的藥物量顯著增加。 輔纖雄堿長f跡雄月旨i1H本,，輔 在雌性昆明小鼠(體重18 22g)小鼠右前肢背部皮下注射Lewis肺癌細(xì)胞懸液， 建立移植瘤模型。將荷瘤小鼠隨機(jī)分組成4組(生理鹽水組、喜樹堿注射液組、喜樹堿長循 環(huán)脂質(zhì)體組(參考實(shí)施例一制備，但不加入相變調(diào)節(jié)劑)、實(shí)施例一制備的喜樹堿長循環(huán)熱 敏脂質(zhì)體組，各組主成分均為10-羥基喜樹堿)，10只/組，每三天尾靜脈給藥一次，治療3 次，給藥劑量為2. 5mg/kg。給藥前小鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉，給藥后將小鼠的腫瘤 部位置于42±0. 5t:水浴上加熱30min。第3次治療2天后處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤組織，稱重， 計(jì)算抑瘤率，結(jié)果如下表所示。
組別瘤重(g)抑瘤率(％ )
對(duì)照(生理鹽水)1. 0380
注射液0. 59242. 95
長循環(huán)脂質(zhì)體組0. 48753. 05
長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體組0. 26974. 07 由結(jié)果可見，熱敏長循環(huán)脂質(zhì)體治療組比普通注射液組和長循環(huán)脂質(zhì)體組具有更 高的抑瘤率。
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權(quán)利要求
一種喜樹堿類抗腫瘤藥物的熱敏脂質(zhì)體制劑，該制劑包含喜樹堿類抗腫瘤藥物、普通類脂、相變調(diào)節(jié)劑和任選的長循環(huán)材料，其中相變調(diào)節(jié)劑占脂質(zhì)重量的6-100％，優(yōu)選10-100％，優(yōu)選20-100％，優(yōu)選30-100％，優(yōu)選40-100％，優(yōu)選50-100％，優(yōu)選60-100％；長循環(huán)材料占脂質(zhì)重量的0-40％，優(yōu)選0-30％，優(yōu)選0-20％，優(yōu)選5-20％，優(yōu)選8-18％，優(yōu)選10-15％；喜樹堿類藥物與脂質(zhì)的重量比為1∶0.5～1∶100。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的熱敏脂質(zhì)體制劑，其熱敏溫度范圍為35°C 5(TC，優(yōu)選為39°C 42°C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其特征在于粒徑分布范圍是10nm 900nm，優(yōu)選是50 300nm。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物選自 伊立替康、拓?fù)涮婵?、喜樹堿、9-羥基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、10-羥基喜樹堿、硝基喜樹堿、 7-(p-三甲基甲硅烷基)乙基喜樹堿、7-(叔丁氧基)亞氨甲基喜樹堿、SN-38和9-NC以 及它們的藥用鹽。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的普通類脂選自卵磷脂、豆 磷脂、腦磷脂、蛋磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂 酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS) 、二棕櫚酰-DL-a -磷脂酰膽堿(DPPC) 、二肉豆蔻酰卵磷脂 (DMPC)、氫化蛋黃磷脂、氫化大豆磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、磷脂酸、二 鯨蠟磷酸酯(DCP) 、 DLPC、 DSPC、 DSPG以及其中兩種或更多種的混合物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l-5任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的相變調(diào)節(jié)劑選自DPPC、 MSPC、 DSPG、 DSPA、 DLPC、 DMPC、 MPPC、 MLPC、聚己內(nèi)酯、聚乙交酯丙交酯、聚乳酸、聚氧乙烯脂 肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪酸醚或聚氧乙烯甲基蓖麻油醚以及其中兩種或更多種的混合物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l-6任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的長循環(huán)材料選自聚乙二醇 (PEG)、吐溫、芐澤、PEG化磷脂、PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、PEG化聚己內(nèi)酯、PEG化聚乙 交酯丙交酯、PEG化聚乳酸、伯洛沙姆188、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪酸醚、聚氧 乙烯甲基蓖麻油醚以及其中兩種或更多種的混合物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l-7任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，其還可以包含荷電材料、分散介質(zhì)及 凍干保護(hù)劑。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8的熱敏脂質(zhì)體制劑，其中所述的荷電材料選自十八胺、磷脂酸、磷脂 酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇和它們的混合物；所述的分散介質(zhì)選自磷酸鹽緩沖液、 乙酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、硫酸銨溶液、5%葡萄糖水溶液、9%蔗糖水溶液和檸檬酸緩沖 液；和/或所述的凍干保護(hù)劑選自葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇、右旋糖酐和 它們的混合物。
10. —種藥物組合物，其包含治療有效量的權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的熱敏脂質(zhì)體制劑，以 及藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含喜樹堿類抗腫瘤藥物的熱敏脂質(zhì)體制劑。其中包含喜樹堿類抗腫瘤藥物、普通類脂、相變調(diào)節(jié)劑和任選的長循環(huán)材料，其中相變調(diào)節(jié)劑占脂質(zhì)重量的6-100％，長循環(huán)材料占脂質(zhì)重量的0-40％，喜樹堿類藥物與脂質(zhì)的重量比為1∶0.5～1∶100。該脂質(zhì)體制劑的特征是該類脂質(zhì)體具有熱敏性，在腫瘤組織局部加熱時(shí)可使該脂質(zhì)體被動(dòng)靶向至該腫瘤部位，并在該腫瘤部位大量釋放藥物，提高療效，降低全身的毒副作用。本發(fā)明中的喜樹堿類抗腫瘤藥物可包括水溶性衍生物如伊立替康、拓?fù)涮婵岛退蝗苄匝苌缌u基喜樹堿、SN-38、9-NC等。
文檔編號(hào)A61K9/127GK101744767SQ200910252138
公開日2010年6月23日 申請日期2009年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月5日
發(fā)明者梅興國 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所