專利名稱：：酪蛋白納米粒子的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于諸如生命科學(xué)或醫(yī)學(xué)診斷之類的領(lǐng)域中的納米粒子。更具體而言，本發(fā)明涉及一種酪蛋白納米粒子。
背景技術(shù)：
：已經(jīng)預(yù)期細(xì)粒材料廣泛地用于生物技術(shù)。特別是，近年來已經(jīng)活躍地對由納米技術(shù)的推進(jìn)而開發(fā)出的納米粒子材料在生物技術(shù)或醫(yī)療中的應(yīng)用進(jìn)行了研究。已經(jīng)報道了許多研究結(jié)果。納米粒子在早期在藥物遞送系統(tǒng)(DDS)領(lǐng)域中受到強(qiáng)烈預(yù)期并且極其有希望作為藥物或基因的載體。特別是，已經(jīng)活躍地進(jìn)行使用聚合物膠束的研究。在大多數(shù)情況下，AB-或ABA-型嵌段共聚物由于它們結(jié)構(gòu)的簡單性而被使用。聚合物膠束的特征在于其大的藥物容量、高的水溶性、高的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、非積聚性、小的粒子大小(100nm以下)和功能分離性。鑒于此，進(jìn)行了意欲靶向靶位和疏水性藥物增溶的研究。近年來，化妝品已經(jīng)具體化了包括納米技術(shù)在內(nèi)的各種新技術(shù)，因此實現(xiàn)了功能性和使用性的改善以及與其它公司產(chǎn)品的區(qū)分。對于化妝品而言，已經(jīng)需要對皮膚的更明顯作用。由于皮膚通常含有作為阻擋層的角質(zhì)層，因此藥物的皮膚透過性低。為了在皮膚上發(fā)揮充分的效果，對活性成分的皮膚滲透性的改善是必不可少的。許多成分，即使對皮膚具有高的效果，也難以將其制備成制劑，因為它們具有差的貯存穩(wěn)定性并且容易引起皮膚剌激。已經(jīng)尋求意欲改善經(jīng)皮吸收性和貯存穩(wěn)定性、減少皮膚剌激等的各種膠囊開發(fā)以解決這些問題。目前對于超細(xì)乳化或各種原料如脂質(zhì)體進(jìn)行了研究(例如，M.Nishida，香料雜志(FragranceJournal)，11月出版，17(2005))。但是，在乳化中使用的表面活性劑出現(xiàn)安全問題。此外，與共價鍵相比，具有離子配合物的結(jié)構(gòu)形成產(chǎn)生的穩(wěn)定性差。預(yù)期聚合物材料的使用顯著地改善貯存穩(wěn)定性和體內(nèi)粒子穩(wěn)定性。但是，大多數(shù)研究使用通過乳液聚合等制備的合成聚合物。盡管與低分子量物質(zhì)相比，合成聚合物中的毒性得到降低，但是預(yù)期其仍具有一定程度的毒性。因此，需要一種更安全的載體。天然聚合物具有與合成聚合物相同的高結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，并且具有比合成聚合物的安全性高得多的安全性。因此，天然聚合物同時具有作為DDS載體的優(yōu)點。但是，與合成聚合物相比，天然聚合物的難點在于制備粒子的方法。可以將噴霧干燥、冷凍干燥和噴射研磨用作用于制備天然聚合物粒子的方法。但是，在大多數(shù)情況下，粒子大小是微米大小并且難以控制。在這樣的天然聚合物中，酪蛋白是牛奶中含有的水不溶性蛋白。由于其疏水性部分暴露于外部環(huán)境，酪蛋白容易形成聚集體。10至100個酪蛋白分子聚集并且形成約20nm的遜膠束。此外，100至1000個酪蛋白分子聚集并且形成90至150nm的酪蛋白膠束。酪蛋白膠束進(jìn)一步聚集并且形成約500nm的膠束締合體。酪蛋白膠束具有寬的大小分布，并且其在用鈉、鉀等的鹽補(bǔ)充時或在酸性pH放置時聚集。在用于制備酪蛋白遜膠束的常規(guī)方法中，使用pH6.5以上的堿性溶液制備出酪蛋白遜膠束。因此，如果將pH降低至低于酪蛋白等電點的pH值，盡管其是兩親性蛋白，但是發(fā)生沉淀和聚集。因此，不能保持這種酪蛋白遜膠束的狀態(tài)，并且不能制備帶正電荷的納米粒子，結(jié)果不能將陰離子化合物結(jié)合到納米粒子或不能保持在粒子表面(日本農(nóng)業(yè)化學(xué)協(xié)會雜志(JournaloftheagriculturalchemicalsocietyofJapan)，第16巻，第9期，1087-1092(1987)，日本農(nóng)業(yè)化學(xué)協(xié)會雜志(JournaloftheagriculturalchemicalsocietyofJ即an)，第49巻，第8期，417-424(1975)，JournalofDairyResearch，53，547-555(1986)和國際公布W02007/114262(富士膠片)。在日本專利公布(Kokai)5-146258A(1993)中，酪蛋白例外地溶解于酸性溶液中。但是，這是意在分餾酪蛋白，因此不意在使用遜膠束。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的上述問題。S卩，本發(fā)明的一個目的在于提供一種正電性納米粒子及其制備方法，所述的正電性納米粒子可以在沒有使用表面活性劑或合成聚合物的情況下制備，其大小可以控制，其在酸性條件下是穩(wěn)定性，并且其中含有活性物質(zhì)。作為致力于實現(xiàn)上述目的的深入細(xì)致研究的結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過將酪蛋白加入到酸性溶液中，然后將溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±pH0.5以上的pH值，可以制備其中l(wèi)電勢為正的酪蛋白粒子，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明提供一種酪蛋白粒子，其中l(wèi)電勢為正的。優(yōu)選所述酪蛋白粒子的平均粒子直徑以粒子大小計為10nm以上至小于300nm。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種酪蛋白粒子，其平均粒子直徑為lOnm以上至小于300nm，其是由下列步驟(a)和(b)制備的:(a)將酪蛋白混合到pH為0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；禾口(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±PH0.5以上的pH值的步驟。優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明所述的酪蛋白粒子包含在其粒子中和/或在其粒子表面上的活性物質(zhì)。優(yōu)選所述活性物質(zhì)是離子物質(zhì)或脂溶性物質(zhì)。優(yōu)選所述活性物質(zhì)是陰離子物質(zhì)。本發(fā)明進(jìn)一步提供根據(jù)本發(fā)明所述的酪蛋白粒子，其是由下列步驟(a)、(b)和(c)制備的:(a)將酪蛋白混合到pH為0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±PH0.5以上的pH值的步驟；禾口(c)將至少一種類型的活性物質(zhì)加入到在上面的步驟(a)或(b)中得到的溶液中。優(yōu)選所述活性物質(zhì)是化妝品成分、功能食品成分或藥物成分。優(yōu)選所述化妝品成分是保濕劑、亮膚劑、頭發(fā)生長剌激劑、頭發(fā)修復(fù)劑、頭發(fā)生長劑、抗白發(fā)劑、染發(fā)劑、處理劑、抗老化劑、抗氧化劑、膠原蛋白合成促進(jìn)劑、抗皺劑、抗粉剌劑、維生素、紫外吸收劑、芳香劑、著色劑、止汗劑、冷卻劑、升溫劑、黑色素產(chǎn)生抑制劑、黑素細(xì)胞活化劑、清潔劑或減輕體重劑；所述功能食品成分是維生素、礦物質(zhì)、抗氧化劑、抗緊張劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、氨基酸、類胡羅卜素或水果或蔬菜提取物；并且所述藥物成分是頭發(fā)生長剌激劑、頭發(fā)修復(fù)劑、頭發(fā)生長劑、抗生素、抗癌劑、抗炎藥、抗過敏劑、激素劑、抗血栓劑、免疫抑制劑、用于皮膚疾病的治療劑、抗真菌劑、核酸劑、麻醉劑、退熱劑、止痛劑、止癢劑、抗水腫劑、止咳化痰劑、抗癲癇劑、抗帕金森病劑、鎮(zhèn)靜催眠藥、抗焦慮劑、回蘇藥、精神神經(jīng)功能病用藥、肌肉松弛藥、抗抑郁劑、復(fù)合感冒藥、自主神經(jīng)系統(tǒng)劑、解痙藥、發(fā)汗劑、止汗劑、強(qiáng)心劑、用于心律不齊的治療劑、抗心律失常藥、血管緊張藥、血管擴(kuò)張劑、降血壓劑、抗糖尿病劑、用于高脂血癥的治療劑、呼吸興奮劑、鎮(zhèn)咳藥、維生素、用于寄生蟲皮膚病的藥劑、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定調(diào)節(jié)劑、多肽、激素、角化不全抑制劑、疫苗或皮膚柔軟劑。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種分散材料，其包含在分散介質(zhì)中的根據(jù)本發(fā)明所述的酪蛋白粒子。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種用于制備根據(jù)本發(fā)明所述的酪蛋白粒子的方法，該方法包括將酪蛋白分散在PH低于所述酪蛋白的等電點的溶液中。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪蛋白粒子的方法，該方法包括下列步驟(a)和(b):(a)將酪蛋白混合到pH為0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；禾口(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±PH0.5以上的pH值的步驟。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求4所述的酪蛋白粒子的方法，該方法包括下列步驟(a)、(b)和(c):(a)將酪蛋白混合到pH0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±PH0.5以上的pH值的步驟；禾口(c)將至少一種類型的活性物質(zhì)加入到在上面的步驟(a)或(b)中得到的溶液中的步驟。根據(jù)本發(fā)明，可以制提供一種正電性納米粒子，其可以在沒有使用表面活性劑或合成聚合物的情況下制備，其大小可以控制，其在酸性條件下是穩(wěn)定的，并且其中含有活性物質(zhì)。具體實施例方式以下，將更具體地描述本發(fā)明。本發(fā)明的酪蛋白粒子是特征在于其具有正l電勢的粒子。優(yōu)選其平均粒子直徑按粒子大小計為10nm以上至小于300nm。本發(fā)明中，可以制備具有需要大小的酪蛋白納米粒子。此外，利用脂溶性活性物質(zhì)和酪蛋白疏水性部分的相互作用，可以將活性物質(zhì)結(jié)合入酪蛋白納米粒子中。此外，這些粒子在水溶液中穩(wěn)定地存在。這樣的脂溶性物質(zhì)的ClogP值優(yōu)選大于O，更優(yōu)選為1以上，并且進(jìn)一步優(yōu)選為3以上。此外，通過將酪蛋白與離子化合物、離子多糖或不同類型的離子蛋白混合以制備混合粒子，酪蛋白能夠在其中含有離子活性物質(zhì)。即，根據(jù)本發(fā)明，可以在不使用表面活性劑或合成聚合物的情況下，制備其中含有高度安全的活性物質(zhì)的納米粒子。本發(fā)明的酪蛋白納米粒子具有正電荷，并且其l電勢為正的。l電勢起著評價粒子的分散和/或聚集性能、相互作用和表面改性的指示劑的作用。可以由已知方法測量I電勢。本發(fā)明的酪蛋白納米粒子的《電勢是正的，并且其優(yōu)選為3至30(mV)。本發(fā)明的酪蛋白納米粒子的平均粒子大小通常為10nm以上至小于300nm，優(yōu)選為10至lOOnm，并且更優(yōu)選為10至50nm。本發(fā)明的酪蛋白納米粒子優(yōu)選包含至少一種活性物質(zhì)?；钚晕镔|(zhì)的量沒有特別限制。以酪蛋白的重量計，酪蛋白納米粒子通常包含酪蛋白的O.OOl至lOO倍的量的活性物質(zhì)。不特別限制本發(fā)明中使用的酪蛋白的來源，并且酪蛋白可以衍生自牛奶或豆類。作為這樣的酪蛋白，可以使用a-酪蛋白、P-酪蛋白、Y-酪蛋白、K-酪蛋白以及它們的混合物。也可以使用基因重組酪蛋白。本發(fā)明的酪蛋白可以優(yōu)選以酪蛋白鈉鹽的形式使用。酪蛋白可以單獨使用或組合兩種以上類型使用。用于制備本發(fā)明的酪蛋白納米粒子的方法的一個實例是包括以下步驟的方法(a)將酪蛋白混合到pH為0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；和(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±pH0.5以上的pH值的步驟。上述步驟(b)還可以通過將在上面的步驟(a)中得到的溶液傾倒入pH為3.5至12的水介質(zhì)中進(jìn)行。當(dāng)將活性物質(zhì)結(jié)合入粒子中或保持在粒子表面上時，可以將至少一種類型的活性物質(zhì)加入到在上面的步驟(a)或(b)中得到的溶液中。適宜時，可以設(shè)置酸性水介質(zhì)的溫度，并且該溫度通常為ot:至8(TC，并且優(yōu)選為25t:至70°C。本文中使用的這樣的酸性水介質(zhì)的具體實例包括使用有機(jī)酸或無機(jī)酸的水溶液，所述的有機(jī)酸如檸檬酸，抗壞血酸，葡糖酸，羧酸，酒石酸，琥珀酸，乙酸，鄰苯二甲酸，三氟乙酸，嗎啉代甲磺酸，2-[4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸，乳酸，丙二酸，馬來酸，蘋果酸，葡糖醛酸和粘酸；并且所述無機(jī)酸如鹽酸，高氯酸和碳酸。這樣的水溶液的PH是pH0.5以上至小于pH7。由于如果pH接近于酪蛋白的等電點，則發(fā)生聚集和沉淀，因此優(yōu)選pH為pH0.5以上至小于pH6，并且更優(yōu)選pH0.5以上至pH4以下。作為酸，優(yōu)選使用有機(jī)酸。更優(yōu)選使用檸檬酸、蘋果酸和酒石酸。本發(fā)明中，將酪蛋白混合到PH0.5以上的酸性水介質(zhì)中時的溫度優(yōu)選為0t:至8(rC，并且更優(yōu)選為1(TC至6(TC。進(jìn)一步優(yōu)選其為2(TC至40。C。在將酪蛋白混合在溶液中之后，作為在攪拌的同時提高酸性水介質(zhì)溶液的pH的方法，優(yōu)選向溶液中滴加堿，因為它簡單。但是，不特別限制這樣方法的類型，只要它滿足溶解度、溫度和攪拌狀態(tài)即可。適宜時，可以確定攪拌速度?？梢詫⑵湓O(shè)置在通常100rpm至3，OOOrpm，并且優(yōu)選200rpm至2，OOOrpm。滴加到溶液中的堿的實例包括但不限于使用無機(jī)堿的水溶液和使用有機(jī)堿的水溶液，所述無機(jī)堿如磷酸鈉，磷酸鉀，氫氧化鈣，氫氧化鈉，氫氧化鉀和氫氧化鎂，并且所述有機(jī)堿如三(羥基甲基)氨基甲烷和氨。優(yōu)選無機(jī)堿。更優(yōu)選氫氧化鈉和氫氧化鉀。在將酪蛋白混合到酸性水介質(zhì)溶液，然后在攪拌的同時提高溶液pH的這樣的方法中，在溫度升高后的優(yōu)選pH是等于酪蛋白的等電點±pH0.5以上，優(yōu)選士pH4以下，并且更優(yōu)選±PH3以下的pH值。優(yōu)選使用注射器進(jìn)行包括將酪蛋白混合到酸性水介質(zhì)溶液并且將得到的溶液注射到pH3.5至12的水介質(zhì)中的方法，原因在于其操作的簡單性。但是，不特別限制該方法，只要其滿足注射速率、溶解度、溫度和攪拌狀態(tài)即可。通常，可以以lmL/min至100mL/min的注射速率注射溶液?？梢赃m宜地確定酸性水介質(zhì)的溫度。可以通常將該溫度確定在(TC至8(TC，并且優(yōu)選在25t:至7(rC?？梢赃m宜地確定水介質(zhì)的溫度?？梢酝ǔ⒃摐囟却_定在Ot:至80°C，并且優(yōu)選在25t:至60°C?？梢赃m宜地設(shè)置攪拌速度，并且其可以通常為lOOrpm至3000rpm，并且優(yōu)選為200rpm至2000rpm?？梢詫⒂袡C(jī)酸或堿或無機(jī)酸或堿的水溶液或緩沖溶液用作本發(fā)明中的水介質(zhì)。這樣的水介質(zhì)的具體實例包括但不限于使用有機(jī)酸、有機(jī)堿、無機(jī)酸和無機(jī)堿的溶液，所述的有機(jī)酸如檸檬酸，抗壞血酸，葡糖酸，羧酸，酒石酸，琥珀酸，乙酸，鄰苯二甲酸，三氟乙酸，嗎啉代甲磺酸，2-[4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸，丙二酸，馬來酸，蘋果酸，葡糖醛酸和粘酸；所述有機(jī)堿如三(羥基甲基)氨基甲烷和氨；所述無機(jī)酸如鹽酸，高氯酸和碳酸；并且所述無機(jī)堿如磷酸鈉，磷酸鉀，氫氧化鈣，氫氧化鈉，氫氧化鉀和氫氧化鎂。本發(fā)明中使用的水介質(zhì)的濃度優(yōu)選為約5mM至約500mM，并且更優(yōu)選為約5mM至約200mM。本發(fā)明的酪蛋白粒子優(yōu)選包含在其粒子中和/或在其粒子表面上的活性物質(zhì)。本發(fā)明中使用的活性物質(zhì)的類型可以選自例如化妝品成分、功能品成分和藥物成分。本發(fā)明的酪蛋白納米粒子的特征在于，可以將陰離子物質(zhì)結(jié)合于其中或可以保持在表面上。因此，在下述成分中，更優(yōu)選陰離子化合物?；瘖y品成分的實例包括保濕劑、亮膚劑、頭發(fā)生長剌激劑、頭發(fā)修復(fù)劑、頭發(fā)生長齊U、抗白發(fā)齊U、抗老化齊U、抗氧化齊U、膠原蛋白合成促進(jìn)齊U、抗皺齊U、抗粉剌齊U、維生素、紫外吸收劑、芳香劑、著色劑、止汗劑、冷卻劑、升溫劑、黑色素產(chǎn)生抑制劑、黑素細(xì)胞活化劑、清潔劑和減輕體重劑。功能食品成分的實例包括維生素、礦物質(zhì)、抗氧化齊U、抗緊張齊IJ、營養(yǎng)補(bǔ)充齊IJ、氨基酸、類胡羅卜素和水果與蔬菜提取物。藥物成分的實例包括頭發(fā)生長剌激劑、頭發(fā)修復(fù)劑、頭發(fā)生長劑、抗生素、抗癌劑、抗炎藥、抗過敏劑、激素劑、抗血栓劑、免疫抑制劑、用于皮膚疾病的治療劑、抗真菌劑、核酸齊U、麻醉齊U、退熱齊U、止痛齊U、止癢齊U、抗水腫齊iJ、止咳化痰齊iJ、抗癲癇齊iJ、抗帕金森病齊iJ、鎮(zhèn)靜催眠藥、抗焦慮劑、回蘇藥、精神神經(jīng)功能病用藥、肌肉松弛藥、抗抑郁劑、復(fù)合感冒藥、自主神經(jīng)系統(tǒng)齊u、解痙藥、發(fā)汗齊u、止汗齊u、強(qiáng)心劑、用于心律不齊的治療齊u、抗心律失常藥、血管緊張藥、血管擴(kuò)張劑、降血壓劑、抗糖尿病劑、用于高脂血癥的治療劑、呼吸興奮劑、鎮(zhèn)咳藥、維生素、用于寄生蟲皮膚病的藥劑、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定調(diào)節(jié)劑、多肽、激素、角化不全抑制劑、疫苗和皮膚柔軟劑。上述活性物質(zhì)可以單獨使用或組合其兩種以上使用。下面列出本發(fā)明中使用的保濕劑的具體實例。但是，在本發(fā)明中，保濕劑不限于這些化合物。它包括透明質(zhì)酸，神經(jīng)酰胺，Lipidure，異黃酮，氨基酸和膠原蛋白。上述保濕劑可以單獨使用或組合其兩種以上使用。下面列出本發(fā)明中使用的亮膚劑的具體實例。但是，在本發(fā)明中，亮膚劑不限于這些化合物。它包括維生素C衍生物，對苯二酚類，熊果苷，Ruciriol和鞣花酸。上述亮膚劑可以單獨使用或組合其兩種以上類型使用。下面列出本發(fā)明中使用的抗老化劑和抗氧化劑的具體實例。但是，在本發(fā)明中，抗老化劑和抗氧化劑不限于這些化合物。它包括胡蘿卜素，維生素A酸，維生素A，維生素C衍生物，激動素，蝦青素，維A酸，維生素E及其衍生物，芝麻素，a-硫辛酸，輔酶Q10和類黃酮。上述抗老化劑和抗氧化劑可以單獨使用或組合其兩種以上類型使用。下面列出本發(fā)明中使用的抗粉剌劑的具體實例。但是，在本發(fā)明中，抗粉剌劑不限于這些化合物。它包括水楊酸，間苯二酚，維生素A酸，那氟沙星，氨基糖苷類抗生素，四環(huán)素抗生素和林可霉素抗生素。上述抗粉剌劑可以單獨使用或組合其兩種以上使用。下面列出本發(fā)明中使用的抗癌劑的具體實例。但是，在本發(fā)明中，抗癌劑不限于這些化合物。它包括但不限于氟化嘧啶基抗代謝藥(例如，5-氟尿嘧啶(5FU)，替加氟，去氧氟尿苷和卡培他濱)；抗生素(例如，絲裂霉素(匪C)和阿霉素(DXR));嘌呤抗代謝藥(例如，葉酸抗代謝藥(如甲氨蝶呤)和巰嘌呤)；維生素A的活性代謝物(例如，抗代謝藥(如羥基脲)，維A酸和他米巴羅汀)；分子靶向藥物(例如，曲妥單抗和甲磺酸依馬替尼)；鉑制劑(例如，順鉑(Briplatin)或順鉑(Randa)(CDDP)，伯爾定(CBDC)，奧沙利鉑(Elplat)(0xa)和奈達(dá)鉑)；植物生物堿藥物(例如，托泊替康(Topotecin)或鹽酸依立替康(CPT)，泰素(PTX)，泰索帝(DTX)和依托泊苷)；烷基化劑(例如，白消安，環(huán)磷酰胺和異環(huán)磷酰胺(ifomide));抗雄激素藥(例如，比卡魯胺和氟他胺)；雌激素藥(例如，磷雌酚，醋酸氯地孕酮和磷酸雌莫司汀)；LH-RH藥(例如，亮丙瑞林和諾雷德)；抗雌激素藥(例如，檸檬酸他莫昔芬和檸檬酸托瑞米芬)；芳香酶抑制藥(例如，鹽酸法倔唑，阿那曲唑和依西美坦)；黃體激素藥(例如，醋酸甲羥孕酮)；和BCG。上述抗癌劑可以單獨使用或組合其兩種以上類型使用。下面列出本發(fā)明中使用的抗過敏劑的具體實例。但是，在本發(fā)明中，抗過敏劑不限于這些化合物。它包括介體釋放抑制劑如色甘酸鈉和曲尼司特；組胺Hl拮抗劑如富馬酸酮替酚和鹽酸氮罩斯?。谎ㄋ匾种苿┤琨}酸奧扎格雷；白三烯拮抗劑如普侖司特；和甲磺司特。上述抗過敏劑可以單獨使用或組合其兩種以上類型使用。下面列出本發(fā)明中使用的免疫抑制劑的具體實例。但是，在本發(fā)明中，免疫抑制劑不限于這些化合物。它包括雷帕霉素，他克莫司，環(huán)孢霉素，潑尼松龍，甲基潑尼松龍，麥考酚酸莫酯，硫唑嘌呤和咪唑立賓。上述免疫抑制劑可以單獨使用或組合其兩種以上類型使用。本發(fā)明中使用的頭發(fā)生長成分的類型沒有特別限制。例如，這樣的頭發(fā)生長成分可以選自化妝品成分和藥物成分。在本發(fā)明蛋白納米粒子中含有的頭發(fā)生長成分的具體實例包括甘草次酸或其衍生物；甘草酸或其衍生物；扁柏酚；維生素E或其衍生物；維生素C衍生物；6_芐基氨基嘌呤；煙酰胺；煙酸芐酯；煙酸維生素E;煙酸P_丁氧基酯；異丙基甲基酚；十五烷酸或其衍生物；千金藤堿；非那雄胺；t-黃烷酮；抗氧化劑如類胡羅卜素或激動素；炔雌醇；泛醇；泛?；一?；米諾地爾或其類似物；卡普氯銨；和腺苷。上述頭發(fā)生長成分可以單獨使用或組合其兩種以上類型使用。本發(fā)明中，可以使用與所述活性物質(zhì)相互作用的離子化合物和添加劑。上述離子化合物和添加劑各自優(yōu)選具有與活性物質(zhì)的電荷相反的電荷。相對于活性物質(zhì)的分子量，離子化合物和添加劑各自優(yōu)選以0.1至10當(dāng)量添加。與所述活性物質(zhì)相互作用的離子化合物和添加劑可以是陽離子化合物或陰離子化合物。所述化合物優(yōu)選在其分子中具有疏水性部分和親水性部分。疏水性部分優(yōu)選具有共軛結(jié)構(gòu)、環(huán)狀結(jié)構(gòu)、長鏈烷基結(jié)構(gòu)和長鏈亞烷基結(jié)構(gòu)中的一個以上的結(jié)構(gòu)。更優(yōu)選它具有類固醇結(jié)構(gòu)，或苯甲酰基、聯(lián)苯或苯基結(jié)構(gòu)。下面給出與所述活性物質(zhì)相互作用的上述離子化合物和添加劑的具體實例。但是，離子化合物和添加劑不限于此。特別是，下面列出陰離子化合物硫酸月桂基酯及其鹽，硫酸肉豆蔻基酯及其鹽，硫酸鯨蠟基酯及其鹽，磷酸月桂基酯及其鹽，甲苯磺酸及其鹽，甲苯甲酸及其鹽，二甲基苯甲酸及其鹽，乙?；交撬峒捌潲}，苯甲酸及其鹽，聯(lián)苯甲酸及其鹽，苯甲?；郊姿峒捌潲}，膽酸及其鹽，甘氨膽酸及其鹽，?；悄懰峒捌潲}，鵝去氧膽酸及其鹽，豬膽酸及其鹽，熊去氧膽酸及其鹽，鯉留醇(cyprinol)及其鹽，去氧膽酸及其鹽，石膽酸及其鹽，豬去氧膽酸及其鹽，甘草亭酸及其鹽，及甲酸膽固醇及其鹽。在本說明書中，在其中將至少一種活性物質(zhì)加入到在上面的上述步驟(a)或(b)中得到的溶液的情況下，可以加入通過將所述活性物質(zhì)溶解于水中或可與水至少10重量％混溶的有機(jī)溶劑中而制備的溶液。下面列出在本發(fā)明中使用的可與水至少10重量％混溶的有機(jī)溶劑的具體實例。但是，在本發(fā)明中，有機(jī)溶劑不限于這些化合物。優(yōu)選的實例包括高級醇和多元醇如乙醇、異丙醇、丙二醇、丁二醇、乙二醇和甘油，并且水溶性有機(jī)溶劑如丙酮和THF。本發(fā)明中，可以將活性物質(zhì)以其中含有活性物質(zhì)的水性脂質(zhì)體分散液的形式加入。下面列出本發(fā)明中使用的用于形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)的具體實例。但是，在本發(fā)明中，脂質(zhì)不限于這些化合物。它包括蛋黃卵磷脂，大豆卵磷脂，蛋黃磷脂酰膽堿，二棕櫚?；字Ｄ憠A和二肉豆蔻?；字Ｄ憠A。除了上述化合物外，脂質(zhì)體還可以包含磷脂酰絲氨酸，磷脂酰乙醇胺和膽固醇。向本發(fā)明的酪蛋白粒子中，可以加入選自環(huán)糊精，脂質(zhì)，不同類型的蛋白，陽離子或陰離子多糖和陽離子或陰離子蛋白中的一種以上的成分。下面列出在本發(fā)明中使用的環(huán)糊精的具體實例。但是，在本發(fā)明中，環(huán)糊精不限于這些化合物。它包括a_環(huán)糊精，13-環(huán)糊精，Y-環(huán)糊精，2，6_二-0-甲基_a_環(huán)糊精，2，6-二-0-甲基-13-環(huán)糊精，葡糖苷酸基葡糖基-13-環(huán)糊精，七(2，6-二-0-甲基)-13-環(huán)糊精，2-羥基乙基-13-環(huán)糊精，羥基丙基_13_環(huán)糊精，6-0-a-麥芽糖基(maltosyl)-a-環(huán)糊精，甲基_P_環(huán)糊精，2，3，6-三-0-甲基-13-環(huán)糊精和6-0-a_D_葡糖基-a-環(huán)糊精。下面列出在本發(fā)明中使用的脂質(zhì)的具體實例。但是，在本發(fā)明中，脂質(zhì)不限于這些化合物。它包括磷脂酰膽堿(卵磷脂)，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰絲氨酸，磷脂酰肌醇，磷脂酰甘油，二磷脂酰甘油，鞘氨醇，神經(jīng)酰胺，油酸，亞油酸，亞麻酸，棕櫚酸，肉豆蔻酸，硬脂酸，大豆油，橄欖油和角鯊?fù)椤２惶貏e限制在本發(fā)明中使用的不同類型的蛋白的種類。優(yōu)選使用分子量為約10，000至1，000，000的蛋白。不特別限制蛋白的來源。優(yōu)選使用衍生自人類的蛋白。下面列出蛋白的具體實例。但是，在本發(fā)明中，蛋白不限于這些化合物。本文中可以使用的這樣不同類型的蛋白的實例包括膠原蛋白，明膠，清蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白，纖維蛋白，纖維蛋白原，球蛋白，絲心蛋白，昆布氨酸(laminin)，纖維結(jié)合蛋白和玻連蛋白。此外，不特別限制蛋白的來源，并且可以使用牛、豬、魚和基因重組蛋白中的任何一種。它們中，優(yōu)選明膠和清蛋白。本發(fā)明中使用的陰離子多糖是具有酸性極性基團(tuán)如羧基、硫酸基或磷酸基的多糖。下面列出其具體實例。但是，在本發(fā)明中，陰離子多糖不限于這些化合物。它包括硫酸軟骨素，硫酸葡聚糖，羧甲基葡聚糖，藻酸，果膠，角叉菜膠，巖藻聚糖，瓊脂膠，紫菜聚糖(porphyran)，剌梧桐樹膠，吉蘭膠，黃原膠和透明質(zhì)酸。本發(fā)明中使用的陽離子多糖是具有堿性極性基團(tuán)如胺基的多糖。下面列出其具體實例。但是，在本發(fā)明中，陽離子多糖不限于這些化合物。它包括包含葡糖胺(例如，幾丁質(zhì)和殼聚糖)或半乳糖胺作為構(gòu)成單糖的那些。本發(fā)明中使用的陰離子蛋白包括等電點比生理pH更堿性的蛋白和脂蛋白。下面列出其具體實例。但是，在本發(fā)明中，陰離子蛋白不限于這些化合物。它包括聚谷氨酸，聚天門冬氨酸，細(xì)胞色素C，核糖核酸酶，胰蛋白酶原，糜蛋白酶原和a-糜蛋白酶。本發(fā)明中使用的陽離子蛋白包括等電點比生理pH更酸性的蛋白和脂蛋白。下面列出其具體實例。但是，在本發(fā)明中，陽離子蛋白不限于這些化合物。它包括聚賴氨酸，聚精氨酸，組蛋白，魚精蛋白和卵清蛋白。本發(fā)明的酪蛋白納米粒子優(yōu)選在其中包含活性物質(zhì)?？梢詫钚晕镔|(zhì)的這樣的酪蛋白納米粒子給予至對于使用受影響的部分。具體而言，可以將本發(fā)明的酪蛋白納米粒子用作藥物遞送劑。本發(fā)明中，不特別限制藥物遞送劑的用法。例如，將藥物遞送劑用作透皮劑、局部治療劑、口服治療齊U、化妝品、補(bǔ)充劑等。本發(fā)明中，藥物遞送劑優(yōu)選包含001%至50重量％的所述蛋白納米粒子，并且更優(yōu)選包含0.1%至10重量％的所述蛋白納米粒子。相對于總量，在藥物遞送劑中含有的乙醇的量優(yōu)選為20%以下，并且更優(yōu)選為10%以下。本發(fā)明中，藥物遞送劑可以包含添加劑。不特別限制這樣的添加劑的類型。這樣的添加劑的實例包括保濕劑，軟化劑，經(jīng)皮吸收促進(jìn)劑，防腐劑，著色劑，芳香劑和pH調(diào)節(jié)劑?？梢栽诒景l(fā)明中使用的保濕劑的具體實例包括但不限于瓊脂，雙甘油，二硬脂二銨鋰蒙脫石(distearyldimoni咖hectorite)，丁二醇，聚乙二醇，丙二醇，透明質(zhì)酸鈉，己二醇，薏苡仁提取物和凡士林。可以在本發(fā)明中使用的軟化劑的具體實例包括但不限于甘油，礦物油和潤膚劑成分(例如異硬脂酸異丙酯，聚異硬脂酸甘油酯，異壬酸異十三烷基酯，異壬酸辛酯，油酸，油酸甘油酯，可可脂，混合脂肪酸甘油三酯，琥珀酸二辛酯，蔗糖乙酸硬脂酸酯，環(huán)戊烷硅氧烷，蔗糖二硬脂酸酯，棕櫚酸辛酯，羥基硬脂酸辛酯，山崳酸二十烷酯，蔗糖多山崳酸酯，聚甲基倍半硅氧烷，肉豆蔻醇，肉豆蔻酸鯨蠟酯，肉豆蔻酸肉豆蔻酯和月桂酸己酯?？梢栽诒景l(fā)明中使用的經(jīng)皮吸收促進(jìn)劑的具體實例包括但不限于乙醇，肉豆蔻酸異丙醇，檸檬酸，角鯊?fù)?，油酸，薄荷腦，N-甲基-2-吡咯烷酮，己二酸二乙酯，己二酸二異丙酯，癸二酸二乙酯，癸二酸二異丙酯，棕櫚酸異丙酯，油酸異丙酯，油酸辛基十二烷基酯，異硬脂醇，2_辛基十二烷醇，尿素，植物油和動物油?？梢栽诒景l(fā)明中使用的防腐劑的具體實例包括但不限于苯甲酸，苯甲酸鈉，羥苯乙酯，山梨酸鉀，山梨酸鈉，山梨酸，脫氫醋酸鈉和羥基苯甲酸甲酯。可以在本發(fā)明中使用的著色劑的具體實例包括但不限于高嶺土，胭脂紅，群青11藍(lán)，氧化鉻和氧化鐵。可以在本發(fā)明中使用的芳香劑的具體實例包括但不限于麝香，金合歡油，茴香油，依蘭油，肉桂油，茉莉油，甜橙油，留蘭香油，香葉油，百里香油，橙花油，薄荷油，日本扁柏油，茴香油，歐薄荷油，香檸檬油，白檸檬油，薰衣草油，檸檬油，檸檬草油，玫瑰油，玫瑰木油，茴香醛，香葉醇，檸檬醛，靈貓酮，麝香酮，檸檬烯和香草醛?？梢栽诒景l(fā)明中使用的pH調(diào)節(jié)劑的具體實例包括但不限于檸檬酸鈉，乙酸鈉，氫氧化鈉，氫氧化鉀和磷酸。給予本發(fā)明酪蛋白納米粒子的優(yōu)選方法包括經(jīng)皮和跨粘膜(transmucosal)吸收。本發(fā)明中可以采用的這樣的給予方法的具體實例包括但不限于外部液體制劑，泥敷劑，涂擦劑，清潔劑，浴用制劑，消毒劑，軟膏，凝膠，乳膏，糊劑，泥罨劑，膏藥，受傷表面包敷劑，受傷表面包敷紗布，止血劑，粘合劑，粘合帶，經(jīng)皮吸收型粘合帶，受傷表面保護(hù)劑，氣溶膠，洗劑，滋補(bǔ)劑，搽劑，乳劑，混懸液，飽和劑，酊劑，粉劑，泡沫劑，化妝品洗劑，按摩乳，營養(yǎng)霜，面膜，片式外皮制劑，皮膚粘合型化妝產(chǎn)品，唇膏，化妝粉底(makeupbase)，粉底化妝品，香波，護(hù)發(fā)素，爽身皂，皂，浴用形式，跨甲劑(transnailagent)，鼻粘膜劑，口粘膜劑，直腸粘膜劑，陰道粘膜劑，眼粘膜劑和肺粘膜劑。根據(jù)患者的體重、疾病的狀況等，可以適宜地設(shè)定本發(fā)明酪蛋白納米粒子的劑量。通常，每次給藥給予約20iig至100mg/kg。優(yōu)選每次給藥給予約20iig至50mg/kg。在下列實施例中更具體地描述本發(fā)明。但是，這些實施例不意在限制本發(fā)明的范圍。實施例實施例1:將100mg的酪蛋白(衍生自牛奶，由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.制造；等電點4.3)混合到10ml的50mM檸檬酸溶液(pH1.9)中。將NaOH加入到混合溶液中，使得pH能夠穩(wěn)定地保持在pH3。使用光散射光度計(Nano-ZS;由MalvemInstrumentsLtd.制造)測量上述粒子的平均粒子直徑。結(jié)果，測得其為22nm，并且測得《電勢為16mV(表1)。此外，證實粒子在4t:穩(wěn)定地分散了10天。實施例2和3以與實施例1相同的方式制備酪蛋白納米粒子，不同之后在于，將加入NaOH后的最終pH設(shè)置在pH2.1(實施例2)或pH3.9(實施例3)。然后，測量粒子大小(nm)和《電勢(mV)。結(jié)果示于表l中。比較例1至5以與實施例1相同的方式制備酪蛋白納米粒子，不同之后在于，將加入NaOH后的最終pH設(shè)置在pH5.0(比較例1)，pH6.5(比較例2)，pH7.0(比較例3)，pH7.9(比較例4)或pH10.0(比較例5)。然后，測量粒子大小(nm)禾P《電勢(mV)。結(jié)果示于表1中。表1:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>在表1中所示的比較例1至5中，粒子具有負(fù)l電勢，因此不能實現(xiàn)本發(fā)明的目的。盡管然后將比較例l至5的粒子的pH轉(zhuǎn)化至pH3，但是它們沒有被再分散。因而，清楚的是，當(dāng)利用酪蛋白納米粒子的陽離子性質(zhì)時，需要在酸性范圍內(nèi)制備納米粒子。在實施例3中，發(fā)生聚集和/或沉淀。實施例4:使用蘋果酸代替實施例1中的檸檬酸制備酪蛋白納米粒子，并且得到pH2.4的分散溶液。使用光散射光度計(Nano-ZS;由MalvemInstrumentsLtd.制造)測量上述粒子的平均粒子直徑。結(jié)果，測得其為38nm，并且測得《電勢為24mV。此外，證實粒子在4t:穩(wěn)定地分散了10天。實施例5:使用酒石酸代替實施例1中的檸檬酸制備酪蛋白納米粒子，并且得到pH2.4的分散溶液。使用光散射光度計(Nano-ZS;由MalvemInstrumentsLtd.制造)測量上述粒子的平均粒子直徑。結(jié)果，測得其為llnm，并且測得《電勢為23mV。此外，證實粒子在4t:穩(wěn)定地分散了10天。實施例6:以與實施例1中相同的方式制備酪蛋白納米粒子，不同之處在于將實施例1中使用的酪蛋白的量改變?yōu)?00mg。得到pH2.6的分散溶液。使用光散射光度計(Nano-ZS;由MalvemInstrumentsLtd.制造)測量上述粒子的平均粒子直徑。結(jié)果，測得其為26nm，并且測得《電勢為18mV。比較例6將100mg的酪蛋白(衍生自牛奶，由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.制造)混合到10ml的50mM磷酸緩沖液(pH10)中。在攪拌的同時，將鹽酸加入到混合溶液中，使得PH被調(diào)節(jié)至pH4。結(jié)果溶液變渾濁并且聚集。比較例7將lOOmg的酪蛋白(衍生自牛奶，由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.制造)混合到10ml的50mM磷酸緩沖液(pH10)中。在攪拌的同時，將鹽酸加入到混合溶液中，使得pH被調(diào)節(jié)至pH2。結(jié)果溶液變渾濁并且聚集。1權(quán)利要求一種酪蛋白粒子，其中ξ電勢為正的。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪蛋白粒子，按粒子大小計，其平均粒子直徑為10nm以上至小于300nm。3.—種酪蛋白粒子，其平均粒子直徑為10nm以上至小于300nm，其是由下列步驟(a)和(b)制備的:(a)將酪蛋白混合到pH為0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；禾口(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±PH0.5以上的pH值的步驟。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪蛋白粒子，其包含在其粒子中和/或在其粒子表面上的活性物質(zhì)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酪蛋白粒子，其中所述活性物質(zhì)是離子物質(zhì)或脂溶性物質(zhì)。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酪蛋白粒子，其中所述活性物質(zhì)是陰離子物質(zhì)。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酪蛋白粒子，其是由下列步驟(a)、(b)和(c)制備的(a)將酪蛋白混合到pH為0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±PH0.5以上的pH值的步驟；禾口(c)將至少一種類型的活性物質(zhì)加入到在上面的步驟(a)或(b)中得到的溶液中的步驟。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酪蛋白粒子，其中所述活性物質(zhì)是化妝品成分、功能食品成分或藥物成分。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的酪蛋白粒子，其中所述化妝品成分是保濕劑、亮膚劑、頭發(fā)生長剌激劑、頭發(fā)修復(fù)劑、頭發(fā)生長劑、抗白發(fā)劑、染發(fā)劑、處理劑、抗老化劑、抗氧化劑、膠原蛋白合成促進(jìn)劑、抗皺劑、抗粉剌劑、維生素、紫外吸收劑、芳香劑、著色劑、止汗劑、冷卻劑、升溫劑、黑色素產(chǎn)生抑制劑、黑素細(xì)胞活化劑、清潔劑或減輕體重劑；所述功能食品成分是維生素、礦物質(zhì)、抗氧化劑、抗緊張劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、氨基酸、類胡羅卜素或水果或蔬菜提取物；并且所述藥物成分是頭發(fā)生長剌激劑、頭發(fā)修復(fù)劑、頭發(fā)生長劑、抗生素、抗癌劑、抗炎藥、抗過敏劑、激素劑、抗血栓劑、免疫抑制劑、用于皮膚疾病的治療劑、抗真菌劑、核酸劑、麻醉齊U、退熱齊U、止痛齊U、止癢齊U、抗水腫齊iJ、止咳化痰齊iJ、抗癲癇齊iJ、抗帕金森病齊iJ、鎮(zhèn)靜催眠藥、抗焦慮劑、回蘇藥、精神神經(jīng)功能病用藥、肌肉松弛藥、抗抑郁齊U、復(fù)合感冒藥、自主神經(jīng)系統(tǒng)劑、解痙藥、發(fā)汗劑、止汗劑、強(qiáng)心劑、用于心律不齊的治療劑、抗心律失常藥、血管緊張藥、血管擴(kuò)張劑、降血壓劑、抗糖尿病劑、用于高脂血癥的治療劑、呼吸興奮劑、鎮(zhèn)咳藥、維生素、用于寄生蟲皮膚病的藥劑、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定調(diào)節(jié)劑、多肽、激素、角化不全抑制劑、疫苗或皮膚柔軟劑。10.—種分散材料，其包含在分散介質(zhì)中的根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪蛋白粒子。11.一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求1所述的酪蛋白粒子的方法，該方法包括將酪蛋白分散在pH低于所述酪蛋白的等電點的溶液中。12.—種用于制備根據(jù)權(quán)利要求l所述的酪蛋白粒子的方法，該方法包括下列步驟(a)和(b):(a)將酪蛋白混合到pH0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；禾口(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±PH0.5以上的pH值的步驟。13.—種用于制備根據(jù)權(quán)利要求4所述的酪蛋白粒子的方法，該方法包括下列步驟(a)、(b)和(c):(a)將酪蛋白混合到pH0.5以上至小于pH7的酸性水介質(zhì)中的步驟；(b)在攪拌在上面的步驟(a)中得到的溶液的同時，將所述溶液的pH增加到離開所述酪蛋白的等電點±PH0.5以上的pH值的步驟；禾口(c)將至少一種類型的活性物質(zhì)加入到在上面的步驟(a)或(b)中得到的溶液中的步驟。全文摘要本發(fā)明的一個目的在于提供一種正電性納米粒子及其制備方法，所述的正電性納米粒子可以在沒有使用表面活性劑或合成聚合物的情況下制備，其大小可以控制，其在酸性條件下是穩(wěn)定的，并且其中含有活性物質(zhì)。本發(fā)明提供酪蛋白粒子，其中ξ電勢為正的。文檔編號A61K8/64GK101745115SQ20091025313公開日2010年6月23日申請日期2009年12月4日優(yōu)先權(quán)日2008年12月5日發(fā)明者金澤克彥申請人:富士膠片株式會社