專利名稱：一種口山酮衍生物的制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從海洋內(nèi)生真菌的培養(yǎng)液中提取分離的xanthone衍生物的制備 方法和在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
自從1929年從陸地微生物中制備出青霉素以來，微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物已成為藥 物的豐富來源，絕大多數(shù)臨床應(yīng)用的抗生素都來源于真菌和細(xì)菌。微生物中的活性次級(jí)代 謝產(chǎn)物還有其他的藥用價(jià)值，如抗腫瘤，治療心腦血管疾病，酶抑制劑等。海洋微生物的生 活環(huán)境與陸生微生物相比迥然不同，特別是高壓、高鹽度、貧營養(yǎng)、低溫、低光照、缺氧等特 殊環(huán)境因素決定了海洋微生物發(fā)展出獨(dú)特的代謝方式，也提供了陸生微生物無法提供的活 性次級(jí)代謝產(chǎn)物，海洋微生物被認(rèn)為是高新穎性化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥物先導(dǎo)化合物重要的潛在資 源，人們對從海洋微生物中尋找新的特效藥物寄于極大希望。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從海洋內(nèi)生真菌的培養(yǎng)液中提取分離的xanthone衍 生物的制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，它能滿足現(xiàn)有技術(shù)的上述需求。一種xanthone衍生物的制備方法，其特征在于先在菌種培養(yǎng)基中對海洋內(nèi)生真 菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)，再在發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，將發(fā)酵產(chǎn)生的液體過濾，除掉菌體，得 到的發(fā)酵液用有機(jī)溶劑萃??；所得萃取液濃縮后，進(jìn)行柱層析或薄層層析色譜分離，將所得 洗脫液濃縮，得淡黃色晶體，即為xanthone衍生物。上述的xanthone衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的xanthone衍生物對人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐藥株KBV200細(xì)胞具 有強(qiáng)的抑制活性，可用作抗腫瘤藥物，并且原料可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，應(yīng)用前景廣闊。
具體實(shí)施例方式制備本發(fā)明的化合物時(shí)，采取下述各步驟(1)先在菌種培養(yǎng)基中對海洋內(nèi)生真菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基含有葡萄糖 1.0% (重量百分?jǐn)?shù)，下同)、酵母膏0. 1%、蛋白胨0.2%、瓊脂1.0%、氯化鈉0.3%，其余為 水。使用時(shí)將上述培養(yǎng)基制成試管斜面，上述真菌菌株在30°C下培養(yǎng)5天。所述的菌種培養(yǎng)基含有葡萄糖0. -5.0%、酵母膏0.01% -1%、蛋白胨 0.01% _1%、瓊脂0. -3.0%、氯化鈉0.05% -5%，其余為水。培養(yǎng)溫度為15_35°C，培 養(yǎng)時(shí)間為3-10天。(2)上述培養(yǎng)所得的真菌菌種再在發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，所用的發(fā)酵培養(yǎng) 基含有葡萄糖1.0%、酵母膏0. 1%、蛋白胨0.2%、氯化鈉0.3%，其余為水。真菌菌株于 28°C培養(yǎng)30天。所述的發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖0. -5.0%、酵母膏0.01% -1%、蛋白胨0.01% -1%、氯化鈉0.05% -5%，其余為水。培養(yǎng)溫度為15-35°c，培養(yǎng)時(shí)間為7_40天。(3) xanthone tiL 5-methoxysterigmatocystin 白勺將前一步驟產(chǎn)生的發(fā)酵液體過濾，除去菌體，所得發(fā)酵液用有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃 取5次，將所得萃取液合并濃縮后，進(jìn)行柱層析或薄層層析色譜分離，將所得洗脫液濃縮得 淡黃色晶體，艮口為 5-methoxy sterigmatocy st in ο所述的有機(jī)溶劑乙酸乙酯可改用正丁醇或氯仿或二氯甲烷。本實(shí)施例制得的5-methoxysterigmatocystin的結(jié)構(gòu)式為 本發(fā)明的化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用本發(fā)明制備的化合物的抗腫瘤活性試驗(yàn)將對數(shù)增長期的人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐藥株KBV200腫瘤細(xì)胞分別制備成靶 細(xì)胞懸液。取96孔培養(yǎng)板，每孔加入190 μ L、含有3. OX IO3個(gè)上述靶細(xì)胞的懸液，恒溫培 養(yǎng)24h后，加入IOyL含不同濃度測試樣品的培養(yǎng)基，對照組加等體積的含10%胎牛血清 (FBS)的RPMI-1640培養(yǎng)液。置37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)68h，棄上清液，直接于光學(xué)顯微 鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。然后按10 μ L/孔加入3- (4，5- 二甲基-2-噻唑)-2，5- 二苯基溴化四 唑(MTT)液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄去上清液。加入二甲基亞砜(DMSO) 100 μ L/孔，吹打，使樣品充 分溶解，用酶標(biāo)儀以試驗(yàn)波長為570nm、參比波長為450nm測定光密度OD值。再按殺傷率=(對照孔OD值-藥物孔OD值)/對照孔OD值計(jì)算殺傷率，繪制劑量反應(yīng)回歸曲線，計(jì)算半數(shù)殺傷濃度IC5(I。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的5-methoxysterigmatocystin對人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐藥 株KBV200細(xì)胞具有明顯的抑制活性，其IC5tl值分別為0. 027 μ g/mL和9. 08 μ g/mL,可用作 抗腫瘤藥物，并且原料可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，應(yīng)用前景廣闊。
權(quán)利要求
一種xanthone衍生物的制備方法，其特征在于先在菌種培養(yǎng)基中對海洋內(nèi)生真菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)，再在發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，將發(fā)酵產(chǎn)生的液體過濾，除掉菌體，得到的發(fā)酵液用有機(jī)溶劑萃??；所得萃取液濃縮后，進(jìn)行柱層析或薄層層析色譜分離，將所得洗脫液濃縮，得淡黃色晶體，即為xanthone衍生物。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的菌種培養(yǎng)基含有葡萄糖 0. 1 % -5.0%、酵母膏 0.01 % -1 %、蛋白胨 0.01 % -1 %、瓊脂 0. 1 % -3.0%、氯化鈉 0. 05% -5%，其余為水。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖 0. 1% -5.0%、酵母膏0.01% -1%、蛋白胨0.01% -1%、氯化鈉0. 05% _5%，其余為水。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、正丁醇、氯 仿或二氯甲烷。
5.權(quán)利要求1所述的xanthone衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種xanthone衍生物的制備方法與應(yīng)用，制備時(shí)，先在菌種培養(yǎng)基中對海洋內(nèi)生真菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)，再在發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，將發(fā)酵產(chǎn)生的液體過濾，除掉菌體，得到的發(fā)酵液用有機(jī)溶劑萃取；所得萃取液濃縮后，進(jìn)行柱層析或薄層層析色譜分離，將所得洗脫液濃縮，得淡黃色晶體，即為xanthone衍生物。本發(fā)明的xanthone衍生物對人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐藥株KBV200腫瘤細(xì)胞具有強(qiáng)的抑制活性，可用作抗腫瘤藥物，并且原料可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，應(yīng)用前景廣闊。
文檔編號(hào)A61K31/352GK101921816SQ200910256560
公開日2010年12月22日 申請日期2009年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月24日
發(fā)明者佘志剛, 林永成, 王長云, 邵長倫, 魏美燕 申請人:中國海洋大學(xué)