專利名稱：：3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1h-吡唑-5(4h)-酮的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-妣唑-5(4H)-酮和/或其互變異構(gòu)體在治療和/或預(yù)防腦血管病的新用途，特別是治療和/或預(yù)防缺血性腦血管病的新用途，特別是治療和/或預(yù)防腦梗塞的新用途。
背景技術(shù)：
：腦血管病是一組嚴(yán)重危害人類健康的疾病，目前已成為人類致殘和死亡的重要原因之一。腦血管病(cerebrovasculardisease,CVD)是指由于腦血管異常導(dǎo)致的腦部病變。腦卒中(stroke)—般指急性腦血管疾病。腦血管病可簡(jiǎn)單分為兩類，一類是由于血液流動(dòng)的減少或斷流造成的缺血性腦血管病，另一類是由于血管破裂造成出血性腦血管病。缺血性腦血管病主要是腦梗塞(包括腦血栓形成和腦栓塞)，除了腦梗塞以外，還有一種在24小時(shí)內(nèi)可以完全恢復(fù)，不留任何后遺癥的缺血性腦血管病，被稱為短暫性腦缺血發(fā)作或一過(guò)性腦缺血發(fā)作，醫(yī)生習(xí)慣簡(jiǎn)稱為TIA，也叫作小中風(fēng)。出血性腦血管病也分為兩類，一類是血管破裂，血液流人腦實(shí)質(zhì)內(nèi)，稱為腦出血或腦溢血。另一類是血管破裂，血液流人包繞腦周圍的蛛網(wǎng)膜下腔，稱為蛛網(wǎng)膜下腔出血，醫(yī)生簡(jiǎn)稱SAH。3-甲基-4-(2-氧代丙基)-l-苯基-lH-吡唑-5(4H)-酮，其結(jié)構(gòu)式分子式C13H14N202;分子量230.263-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮存在異構(gòu)現(xiàn)象，它的互變異構(gòu)體有3-甲基-4-(2-氧代丙基)-5-羥基-1-苯基-1H-吡唑，其結(jié)構(gòu)式及互變異構(gòu)體4-(2-羥基-1-丙烯基)-3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮，4其結(jié)構(gòu)式及互變異構(gòu)體4-(2-羥基-1-丙烯基)-3-甲基-5-羥基-1-苯基-1H-吡唑，其結(jié)構(gòu)式上述四種結(jié)構(gòu)中，以3-甲基-4-(2-氧代丙基)-l-苯基-lH-吡唑-5(4H)-酮和3-甲基-4-(2-氧代丙基)-5-羥基-1-苯基-1H-吡唑較為常見。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，一種具有如下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>的3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮在治療和/或預(yù)防腦血管病的藥物中的應(yīng)用中具有明顯的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明還提供一種上述化合物的具有如下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>的互變異構(gòu)體3-甲基-4-(2-氧代丙基)-5-羥基-l-苯基-lH-吡唑在治療和或預(yù)防腦血管病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供一種上述化合物的具如下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>的互變異構(gòu)體4-(2-羥基-1-丙烯基)_3-甲基-5-羥基_1_苯基_1H_吡唑在治療和/或預(yù)防腦血管病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述腦血管病優(yōu)選缺血性腦血管病，進(jìn)一步優(yōu)選腦梗塞。本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其特征在于包括3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其特征在于包括3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮、3-甲基-4-(2-氧代丙基)_5_羥基-1-苯基_1H_吡唑混合的組合物及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其特征在于包括3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮、3-甲基-4-(2-氧代丙基)_5_羥基-1-苯基_1H_吡唑、4_(2-羥基-1-丙烯基)_3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)_酮、4-(2-羥基-1-丙烯基)_3_甲基_5-羥基-1-苯基-1H-吡唑混合的組合物及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)_酮和/或其互變異構(gòu)體能改善大鼠神經(jīng)缺陷癥狀，縮小梗死面積，降低腦含水量，減輕腦損傷程度。特別是與上市藥品依達(dá)拉奉相比，在減小梗塞面積，減輕腦損傷、降低腦含水量方面具有一定改善的趨勢(shì)。且對(duì)神經(jīng)缺陷癥狀的改善與依達(dá)拉奉相當(dāng)。具體實(shí)施例方式下屬實(shí)施例舉例說(shuō)明本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。為方便起見，以XS130指代3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮。實(shí)施例1取XS130固體2g，加入200g的丙二醇溶液中，攪拌使完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶解并至1000ml，5ml安瓿灌裝。實(shí)施例21材料與方法1.ISprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，體重240_280g，清潔級(jí)。1.2藥品與試劑實(shí)施例1的XS130注射液(2mg/ml)，臨用前稀釋至所需濃度。市售依達(dá)拉奉注射液。1.3方法1.3.1腦缺血模型的制備采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法制備大腦中動(dòng)脈阻塞(Middlecerebralartery，MCA0)腦缺血再灌注模型。動(dòng)物用10%水合三氯乙醛(3.5ml/kg)麻醉后，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎并剪斷頸外動(dòng)脈，結(jié)扎翼腭動(dòng)脈。夾閉頸總動(dòng)脈近心端，從頸外動(dòng)脈的結(jié)扎線的遠(yuǎn)端作一切口，插入外徑為0.285mm的尼龍線，進(jìn)過(guò)頸總動(dòng)脈分叉進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，然后徐徐插入至有輕微阻力為止(自分叉處約20mm)，阻斷大腦中動(dòng)脈的所有血供，用激光多普勒腦血流儀監(jiān)測(cè)腦血流，右側(cè)腦缺血2.Oh后，輕輕拔出尼龍線，恢復(fù)血供進(jìn)行再灌注，縫合頭皮，消毒。假手術(shù)組僅分離血管，不插入尼龍線。1.3.2動(dòng)物分組與給藥本試驗(yàn)觀察XS130對(duì)腦缺血損傷的藥效學(xué)試驗(yàn)，設(shè)1.5mg/kg(劑量組1)和0.75mg/kg(劑量組2)2個(gè)劑量組，模型組給大鼠尾靜脈注射等體積的溶劑，假手術(shù)組給大鼠尾靜脈注射等體積的溶劑，陽(yáng)性藥對(duì)照組以依達(dá)拉奉注射液作為陽(yáng)性對(duì)照，采用文獻(xiàn)報(bào)道的劑量1.5mg/kg，共5組，動(dòng)物按機(jī)率均等單盲分配至各組。1.3.3神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)價(jià)采用改良Bederson5分制法進(jìn)行神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)價(jià)。采用單盲法評(píng)價(jià)腦外傷后大鼠的神經(jīng)缺陷癥狀。1.3.4腦梗死面積和腦損傷測(cè)定動(dòng)物麻醉后，斷頭取腦，去除嗅球、小腦和低位腦干，用生理鹽水沖洗大腦表面血跡，吸去表面殘留水跡，于-S(TC放置7min，取出后立即于視交叉平面垂直向下作冠狀切面，并向后每隔2mm切一片，將腦片置于用PBS(O.2mol/L，pH7.47.8)新鮮配制的TTC溶液中于37t:溫育90min，正常腦組織染成深紅色，缺血腦組織則呈蒼白色，用生理鹽水沖洗后，迅速將腦片從前向后按順序排成一排，吸干表面殘留水跡，拍照，分離左右腦組織分別稱重，表示為W^和Wp向左右腦組織中各加入新鮮配置的提取液(DMSO:乙醇l:1)15毫升，于25t:，避光溫育24小時(shí)，充分提取生成的紅色物質(zhì)甲月替，至腦片呈白色。(1)用圖像分析軟件對(duì)照片進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，圈定右側(cè)缺血面積(白色區(qū)域)和右側(cè)總面積，用如下公式計(jì)算腦梗死面積的百分比缺血總面積腦梗死面積％=100x-右側(cè)總面積(2)將左右側(cè)腦組織的提取物于485nm處分別測(cè)定其吸光度(提取物100iU+提取液1900ia)，測(cè)定四次，取其均值，表示為A力和Ap用如下公式計(jì)算腦損傷程度的百分1左7^A右比腦損傷％=ioox(i-&x^)1.3.5死亡率剔除手術(shù)失敗和腦出血的動(dòng)物后，記錄各組的動(dòng)物死亡率。1.3.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析定量資料表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差。腦梗死面積、腦損傷程度、神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)分采用單因素方差分析，Scheffe—s檢驗(yàn)測(cè)定兩組間的差異顯著性。動(dòng)物死亡率用X2檢驗(yàn)測(cè)定組間的差異顯著性。將差異P<0.05定義為差異顯著。2結(jié)果2.1對(duì)神經(jīng)缺陷癥狀的影響神經(jīng)缺陷癥狀嚴(yán)重程度的評(píng)分見表l，模型組與假手術(shù)組比較均有顯著性差異(F5,35=10.42，P<0.OOl)，表明腦缺血再灌注導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)缺陷癥狀；XS130劑量組1(F5,35=10.42，P=0.015)、劑量組2(F5,35=10.42，P=0.039)和依達(dá)拉奉組(F5,35=10.42，P=0.039)與模型組比較，神經(jīng)缺陷癥狀均明顯減輕。結(jié)果表明，XS130能改善腦缺血再灌注動(dòng)物的神經(jīng)缺陷癥狀，且與依達(dá)拉奉作用相當(dāng)。表1.XS130對(duì)神經(jīng)缺陷癥狀的影響組別總動(dòng)物數(shù)手術(shù)失敗死亡n劑量神經(jīng)缺陷評(píng)分(只)(只)(只)(只)(呢/kg)模型組100-2.8±1.07'假手術(shù)組6006-0.0±0.00依達(dá)拉奉組9201.51.4±0.79**XS130劑量組102081.51.3±0.46#XS130劑量組2103070.751.4士0.53*#X±SD，*P<0.05，與假手術(shù)比較;#P<0.05，與模型組比較。2.2對(duì)腦梗死面積的影響各組腦梗死面積見表2，模型組與假手術(shù)組比較有顯著性差異(F5,35=5.95，P=0.001)，表明腦缺血再灌注導(dǎo)致明顯的腦梗死；XS130劑量組1與模型組比較，梗死面積顯著縮小(F5,35=5.95，P=0.034)，與依達(dá)拉奉組相比，梗塞范圍具有減小的趨勢(shì)。表2.XS130對(duì)腦梗死面積的影響組另lj總動(dòng)物數(shù)手術(shù)失敗死亡n劑量面積統(tǒng)計(jì)結(jié)果(只)(只)(只)(只)(mg/kg)(%)模型組10307-31.3±11.24*'假手術(shù)組6006-0.0±0.00依達(dá)拉奉組92071.518.6士11.74XS130劑量組1102081.5)0.0±7.00ftXS130劑量組2103070.7511.4±11.69X±SD，*P<0.05，與假手術(shù)比較;#P<0.05，與模型組比較。2.3對(duì)腦損傷的影響各組腦損傷見表3，模型組與假手術(shù)組比較有顯著性差異(F5,35=5.39，P=0.004)，表明腦缺血再灌注導(dǎo)致明顯的腦損傷；XS130劑量組1與模型組比較，腦損傷程度明顯減輕(F5,35=5.39，P二0.010)，與依達(dá)拉奉組相比，腦損傷具有減輕的趨勢(shì)。結(jié)果表明腦缺血再灌注后給予TR進(jìn)行急性治療，能顯著減輕腦損傷程度。表3.XS130對(duì)腦損傷的影響組另lj總動(dòng)物數(shù)手術(shù)失敗死亡n劑量腦損傷(只)(只)(只)(只)(mg/kg)a)模型組1007-35.5±17.95*假手術(shù)組6006-0.0±3.32依達(dá)拉奉組92071.517.2±16.06XS130劑量組1102081.55.1±7.98#XS130劑量組2103070.7511.7±17.46X±SD，*P<0.05，與假手術(shù)比較;#P<0.05，與模型組比較。2.4對(duì)死亡率的影響各組動(dòng)物的死亡率表4，各組間動(dòng)物死亡率無(wú)顯著差異，表明XS130對(duì)腦缺血?jiǎng)游锏乃劳雎薀o(wú)顯著影響。表4.XS130對(duì)死亡率的影響組另u總動(dòng)物數(shù)手術(shù)失敗死亡N劑量死亡數(shù)/N(只)(只)(只)(只)(mg/kg)模型組1007-0/7假手術(shù)組6006-0/6依達(dá)拉奉組9071.50/7XS130劑呈組1102081.50/8XS130劑量組2103070.750/7實(shí)施例31材料與方法1.ISprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，體重240_280g，清潔級(jí)。1.2藥品與試劑實(shí)施例1的XS130注射液(2mg/ml)，臨用前稀釋至所需濃度。市售依達(dá)拉奉注射液。1.3方法1.3.1腦缺血模型的制備采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法制備大腦中動(dòng)脈阻塞(Middlecerebralartery，MCAO)腦缺血再灌注模型。動(dòng)物用10%水合三氯乙醛(3.5ml/kg)麻醉9后，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎并剪斷頸外動(dòng)脈，結(jié)扎翼腭動(dòng)脈。夾閉頸總動(dòng)脈近心端，從頸外動(dòng)脈的結(jié)扎線的遠(yuǎn)端作一切口，插入外徑為0.285mm的尼龍線，進(jìn)過(guò)頸總動(dòng)脈分叉進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，然后徐徐插入至有輕微阻力為止(自分叉處約20mm)，阻斷大腦中動(dòng)脈的所有血供，用激光多普勒腦血流儀監(jiān)測(cè)腦血流，右側(cè)腦缺血2.Oh后，輕輕拔出尼龍線，恢復(fù)血供進(jìn)行再灌注，縫合頭皮，消毒。假手術(shù)組僅分離血管，不插入尼龍線。1.3.2動(dòng)物分組與給藥本試驗(yàn)觀察XS130對(duì)腦缺血損傷的藥效學(xué)試驗(yàn)，設(shè)3.Omg/kg(劑量組1)和1.5mg/kg(劑量組2)2個(gè)劑量組，模型組給大鼠尾靜脈注射等體積的溶劑，假手術(shù)組給大鼠尾靜脈注射等體積的溶劑，陽(yáng)性藥對(duì)照組以依達(dá)拉奉注射液作為陽(yáng)性對(duì)照，采用文獻(xiàn)報(bào)道的劑量1.5mg/kg，共5組，在手術(shù)過(guò)程中，凡麻醉、手術(shù)等出現(xiàn)異常情況的動(dòng)物均被剔除。腦缺血模型后，將動(dòng)物按機(jī)率均等單盲分配至各組。1.3.3神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)價(jià)采用改良Bederson5分制法進(jìn)行神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)價(jià)。采用單盲法評(píng)價(jià)腦外傷后大鼠的神經(jīng)缺陷癥狀。1.3.4腦含水量測(cè)定動(dòng)物用10%水合氯醛麻醉，斷頭取腦，去除嗅球、小腦和低位腦干，用生理鹽水沖洗大腦表面血跡，吸去表面殘留水跡，迅速分離左右大腦，分別稱濕重，得左側(cè)濕重(W左濕重)和右側(cè)濕重(W右濕重)。將腦組織放置表面皿中，于6(TC烘干，多次稱量至連續(xù)兩次(間隔>0.5小時(shí))稱量差值小于0.0005g，得左側(cè)干重(W￡Ti)和右側(cè)干重(W;e，i)。腦含水量按如下公式計(jì)算對(duì)照側(cè)腦含水量(％)損傷側(cè)腦含水量(％)腦含水量變化值(％)=損傷側(cè)腦含水量(％)-對(duì)照側(cè)腦含水量(％)1.3.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析定量資料表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差。神經(jīng)缺陷癥狀評(píng)分、腦含水量變化值均采用單因素方差分析，Scheffe—s檢驗(yàn)測(cè)定兩組間的差異顯著性。動(dòng)物死亡率用X2檢驗(yàn)測(cè)定組間的差異顯著性。將差異P〈0.05定義為差異顯著。2結(jié)果2.1對(duì)神經(jīng)缺陷癥狀的影響神經(jīng)缺陷癥狀嚴(yán)重程度的評(píng)分見表5，模型組與假手術(shù)組比較均有顯著性差異(F5,4。=12.39，P<0.001)，表明腦缺血再灌注導(dǎo)致明顯的神經(jīng)缺陷癥狀；XS130劑量組2與模型組比較神經(jīng)缺陷癥狀明顯減輕(F5,4。=12.39，P=0.004)。結(jié)果表明，XS130能改善腦缺血再灌注動(dòng)物的神經(jīng)缺陷癥狀，且與依達(dá)拉奉作用相當(dāng)。表5.XS130對(duì)神經(jīng)缺陷癥狀的影響"ii總動(dòng)物數(shù)手術(shù)失敗'死~~^~~^神經(jīng)缺陷評(píng)分_^_^_(只)(只)(mg/kg)_模型組10118-2.8±0.46*10^F左:濕重-^F左化ffi^F右濕軍-^F右-p審100<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>X士SD，卞<0.05，與假手術(shù)比較；SP<0.05，與模型組比較。2.2對(duì)腦含水量的影響各組腦含水量見表6，模型組與假手術(shù)組比較有顯著性差異(F5,4。=12.29，P<0.001)，表明腦缺血再灌注導(dǎo)致嚴(yán)重的腦水腫；XS130劑量組2與模型組比較腦含水量明顯減少(F5,4。=12.29，P二0.006)，與依達(dá)拉奉組相比，腦水腫具有減輕的趨勢(shì)。結(jié)果表明，XS130能減輕腦水腫。表6.XS130對(duì)腦含水量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>X士SD，卞<0.05，與假手術(shù)比較；SP<0.05，與模型組比較。2.3對(duì)死亡率的影響各組動(dòng)物的死亡率表7，各組間動(dòng)物死亡率無(wú)顯著差異，表明XS130對(duì)腦缺血?jiǎng)游锏乃劳雎薀o(wú)顯著影響。表7.XS130對(duì)死亡率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權(quán)利要求一種具有如下結(jié)構(gòu)的3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮在治療和/或預(yù)防腦血管病的藥物中的應(yīng)用。F2009102630423C00011.tif2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于權(quán)利要求1所述化合物的具有如下結(jié)構(gòu)的互變異構(gòu)體3-甲基-4-(2-氧代丙基)_5-羥基-1-苯基-1H-吡唑。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于權(quán)利要求1所述化合物的具有如下結(jié)構(gòu)的互變異構(gòu)體4-(2-羥基-1-丙烯基)-3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于權(quán)利要求1所述化合物的具有如下結(jié)構(gòu)的互變異構(gòu)體4-(2-羥基-1-丙烯基)-3-甲基-5-羥基-1-苯基-1H-吡唑。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述腦血管病為缺血性腦血管病。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述缺血性腦血管病為腦梗塞。7.—種藥物組合物，其特征在于包括3-甲基-4-(2-氧代丙基)-l-苯基-1H-吡5(4H)-酮及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。8.—種藥物組合物，其特征在于包括3-甲基-4-(2-氧代丙基)-l-苯基-1H-吡唑_5(4H)-酮、3-甲基-4-(2-氧代丙基)-5-羥基-1-苯基_1H_吡唑混合的組合物及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。9.一種藥物組合物，其特征在于包括3-甲基-4-(2-氧代丙基)-l-苯基-1H-吡唑唑-5(4H)-酮、3-甲基-4-(2-氧代丙基)-5-羥基-1-苯基-IH-吡唑、4_(2_羥基-1-丙烯基)-3_甲基-l-苯基-lH-吡唑_5(411)-酮、4-(2-羥基-1-丙烯基)-3-甲基_5_羥基-1-苯基-1H-吡唑混合的組合物及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。10.權(quán)利要求79中任一項(xiàng)所述的藥物組合物在治療和/或預(yù)防腦血管病藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮和/或其互變異構(gòu)體在治療和/或預(yù)防腦血管病的新用途，特別是治療和/或預(yù)防缺血性腦血管病的新用途，特別是治療和/或預(yù)防腦梗塞的新用途。本發(fā)明還涉及包括3-甲基-4-(2-氧代丙基)-1-苯基-1H-吡唑-5(4H)-酮和/或其互變異構(gòu)體的藥物組合物。文檔編號(hào)A61P9/00GK101721408SQ20091026304公開日2010年6月9日申請(qǐng)日期2009年12月15日優(yōu)先權(quán)日2009年12月15日發(fā)明者劉偉,唐峰,張斐,張浩波,王致軒,許向陽(yáng)申請(qǐng)人:江蘇先聲藥物研究有限公司