專利名稱：：吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于對(duì)藥材進(jìn)行質(zhì)量控制的
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：我國(guó)傳統(tǒng)的中藥及其制劑大多缺乏嚴(yán)密的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和科學(xué)的檢測(cè)手段，難以有效的控制其內(nèi)在質(zhì)量，不能保證用藥的安全、有效，也不符合國(guó)際醫(yī)藥市場(chǎng)的要求，嚴(yán)重制約了我國(guó)中藥行業(yè)的發(fā)展。加強(qiáng)中藥材質(zhì)量控制研究是中藥規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化的關(guān)鍵問題。只有對(duì)中藥材進(jìn)行科學(xué)的質(zhì)量控制，才能保證中藥質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)中藥的"安全、有效、穩(wěn)定、可控"。吉祥草為百合科吉祥草屬植物吉祥草Reineckiacarnea(Andr.)Kunth的干燥全草；喜溫暖、濕潤(rùn)、半陰的環(huán)境，對(duì)土壤要求不嚴(yán)格，以排水良好肥沃壤土為宜；原產(chǎn)于中國(guó)長(zhǎng)江流域以南各省及西南地區(qū)，日本也有分布。全年可采，洗凈，鮮用或切段曬干。別名小青膽、小葉萬年青、玉帶草、觀音草等。吉祥草為常用中藥材，也是常用苗藥。性味功能與主治甘，平；潤(rùn)肺止咳，祛風(fēng)，接骨。用于肺結(jié)核，咳嗽咯血，慢性支氣管炎，哮喘，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；外用治跌打損傷，骨折等。以吉祥草作為君藥的各種藥劑在臨床上已取得較好療效。吉祥草藥材成分復(fù)雜，主要包括以下幾類糖類、皂苷、生物堿、木脂素、留類化合物、揮發(fā)油和有機(jī)酸類。近年來國(guó)內(nèi)外有關(guān)于吉祥草化學(xué)成分研究的報(bào)道，但有關(guān)于吉祥草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究文獻(xiàn)報(bào)道很少，僅在《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版中以吉祥草對(duì)照藥材為對(duì)照進(jìn)行了薄層色譜鑒別研究，另有其氯仿提取部位的薄層鑒別研究報(bào)道。因此，為了使吉祥草的臨床應(yīng)用更加安全、有效、科學(xué)、合理，必須加強(qiáng)其質(zhì)量控制。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法。本發(fā)明建立了以凱提皂苷元和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷兩個(gè)有效成分為對(duì)照的吉祥草薄層色譜鑒別方法和總皂苷的含量測(cè)定方法，完善了吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，彌補(bǔ)了現(xiàn)有質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)的不足，使吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)更為科學(xué)、合理。本發(fā)明所述質(zhì)量檢測(cè)方法包括性狀、鑒別、含量測(cè)定項(xiàng)目中的部分或全部，所述鑒別是對(duì)凱提皂苷元和/或剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄層色譜鑒別，含量測(cè)定是用紫外分光光度法對(duì)藥材中所含總皂苷的含量測(cè)定。其中，凱提皂苷元的鑒別方法是以凱提皂苷元對(duì)照品為對(duì)照、以氯仿乙酸乙酯甲醇:水=12:35:2.53.o:o.8i.2為展開劑的薄層色譜法；剴提s-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷的鑒別方法是以剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品為對(duì)照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:ii.5的下層為展開劑的薄層色譜法。具體的鑒別方法為(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用2040mL水溶解后，加入活性炭O.20.7g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.51.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25uL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾干，噴以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用2060mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)觢5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含O.51.Omg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下層為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾干，噴以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)?？傇碥盏暮繙y(cè)定方法是以凱提皂苷元對(duì)照品為對(duì)照的紫外分光光度法。具體的總皂苷含量測(cè)定方法為照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過2060目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合并提取液，濾過，揮干；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至2550mL，即得供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.100.50mg/mL的溶液，即得；測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，于608(TC水浴恒溫加熱1030分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸48mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在440460nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。本發(fā)明所述質(zhì)量檢測(cè)方法包括以下項(xiàng)目性狀干燥全草呈黃褐色，根莖細(xì)長(zhǎng)，節(jié)明顯，節(jié)上有殘留的膜質(zhì)鱗葉，并有少數(shù)彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮；鑒別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次O.51.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用2040mL水溶解后，加入活性炭O.20.7g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.51.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25uL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和io30min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾干，噴以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用2060mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)觢5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含O.51.Omg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下層為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾干9，噴以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過2060目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合并提取液，濾過，揮干；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至2550mL，即得供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.100.50mg/mL的溶液，即得；測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，于608(TC水浴恒溫加熱1030分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸48mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在440460nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。優(yōu)選的質(zhì)量檢測(cè)方法包括以下項(xiàng)目性狀干燥全草呈黃褐色，根莖細(xì)長(zhǎng)，節(jié)明顯，節(jié)上有殘留的膜質(zhì)鱗葉，并有少數(shù)彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮；鑒別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合并濾液，濃縮近干，用40mL水溶解后，加入活性炭0.3g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和15min后，以氯仿:乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i為展開劑，上行展開，展距iocm;取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合并濾液，濃縮近干，用40mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和i5min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下層為展開劑，上行展開，展距10cm;取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過40目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合并提取液，濾過，揮干；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至25mL，即得供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.13mg/mL的溶液，即得；測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒溫加熱15分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在453nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，吉祥草的留體皂苷及留體皂苷元對(duì)環(huán)腺苷酸磷酸二酯酶的活性有抑制作用。因此，本發(fā)明人經(jīng)過一系列的試驗(yàn)研究，采用凱提皂苷元和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷兩個(gè)有效成分作為指標(biāo)，首次建立了以有效成分進(jìn)行吉祥草薄層色譜鑒別的方法，并對(duì)io批來自不同產(chǎn)地的吉祥草藥材進(jìn)行了鑒別，具有很好的實(shí)際意義，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升奠定了基礎(chǔ)。以下是吉祥草薄層色譜鑒別的實(shí)驗(yàn)研究過程1.儀器與材料1.1儀器GF254自制硅膠板；賽多利斯BP211型電子天平(德國(guó))；雙巢展開缸1.2材料凱提皂苷元和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷(自制)通過波譜解析技術(shù)(IR、4-NMR、13C-NMR、MS)分析，鑒定其結(jié)構(gòu)；吉祥草藥材(產(chǎn)地貴州扎佐、貴陽、平鎮(zhèn)、六枝、孟關(guān)、牛郎關(guān)；廣西；云南澤通；云南昆明)經(jīng)貴州師范大學(xué)天然藥物質(zhì)量控制研究中心的陳華國(guó)老師鑒定為吉祥草(Reineckiacarnea(Andr.)kunth)的全草；氯仿、甲醇、乙酸乙酯為分析純；水為蒸溜水；自制5%硫酸乙醇溶液。2.方法與結(jié)果2.1凱提皂苷元的鑒別將陰干后的吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次(各lh)，濾過，合并濾液，將濾液濃縮近干，用40mL水溶解后，加入活性炭0.3g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取3次(各20ml)，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液。精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含O.8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2UL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和15min后，以氯仿-乙酸乙酉g-甲醇-水(1.5:4:2.7:1)為展開劑，上行展開，展距約10cm。取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試液和凱提皂苷元呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。2.2剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷的鑒別將陰干后的吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，和并濾液，將濾液濃縮近干，用40mL水溶解，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，用石油醚萃取3次(20mL，10mL，10mL)，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取3次(各20ml)，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液。精密稱取剴提5-0-6-D-吡口南葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和15min后，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2.4:1.2)的下層為展開劑，上行展開，展距約10cm。取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試液和剴提5-o-e-D-吡口南葡萄糖皂苷呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。3.討論3.1由于吉祥草中皂苷類化合物結(jié)構(gòu)十分相似，在進(jìn)行對(duì)照品薄層鑒別時(shí)，很難將所需化合物與其他雜質(zhì)分開，干擾成分多，且硫酸顯色的背景干擾大。因此對(duì)其薄層鑒別帶來了很大的困難，本實(shí)驗(yàn)通過大量的薄層條件和樣品的前處理方法的摸索試驗(yàn)，得出了薄層效果較好，重復(fù)性好的薄層條件，S卩樣品的前處理方法分別考察了三種不同的提取條件(1)甲醇水浴回流提取后，先后用石油醚，水飽和的正丁醇萃?。?2)先用氯仿回流提取后，再用水飽和的正丁醇提取；(3)先用乙醇回流提取后，再先后用石油醚、水飽和的正丁醇萃??；試驗(yàn)結(jié)果表明方法(1)效果最佳。但由于吉祥草藥材的色素較重，在考察凱提皂苷元的薄層鑒別時(shí)，干擾嚴(yán)重，所以在方法(1)的基礎(chǔ)上，甲醇水浴回流提取，濾液揮干，用蒸餾水溶解后加入3%的活性碳脫色，其效果較好。同時(shí)考察了多種展開系統(tǒng)，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2.4:1.2)下層和氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(i.5:4:2.7:i)為展開系統(tǒng)，分別鑒別吉祥草中的剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷和凱提皂苷元，薄層效果較好3.2實(shí)驗(yàn)對(duì)10批不同產(chǎn)地的吉祥草樣品進(jìn)行了鑒別，結(jié)果表明吉祥草藥材因不同產(chǎn)地和不同時(shí)間采集導(dǎo)致其質(zhì)量有所不同。3.3本法操作簡(jiǎn)便，方法穩(wěn)定，專屬性強(qiáng)，薄層色譜鑒別斑點(diǎn)清晰，可有效鑒別吉祥草藥材并可作為其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。為了驗(yàn)證吉祥草藥材中總皂苷含量測(cè)定方法的合理性，發(fā)明人對(duì)該方法也進(jìn)行了試驗(yàn)研究和篩選，具體如下1、對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，甲醇溶解制成濃度為0.13mg/mL的凱提皂苷元溶液，即得。2、檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇準(zhǔn)確量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液，精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒溫加熱15分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比，按照分光光度法在400800nm波長(zhǎng)內(nèi)測(cè)定吸收光譜，由于其在453nm處有最大吸收，空白溶液無干擾，故選擇453nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。3、供試品溶液的制備3.1提取方法的選擇方法一取吉祥草藥材粉末約1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流2h，濾過，揮干。加水20mL溶解，用石油醚萃取3次(15mL/次)，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至25mL，搖勻，即得供試品溶液一。方法二取吉祥草藥材粉末約1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入正丁醇40mL水浴回流2h，濾過，揮干，用甲醇定容至25mL，搖勻，即得供試品溶液二。方法三取吉祥草藥材粉末約1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入甲醇40mL水浴回流2h，濾過，揮干。加水20mL溶解，用石油醚萃取3次(15mL/次)，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至25mL，搖勻，即得供試品溶液三。方法四取吉祥草藥材粉末約1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入甲醇40mL水浴回流2h，濾過，揮干。用2mol/L鹽酸水溶液20mL溶解殘?jiān)?，水浴回?小時(shí)后，水層再用水飽和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至25mL，搖勻，即得供試品溶液四。分別精密吸取上述供試品溶液一、二、三、四及參比溶液各50uL，分別置于10ml具塞反應(yīng)瓶中，置水浴中揮干溶劑，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒溫加熱15分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5mL，搖勻。在453nm最大吸收處測(cè)定含量，結(jié)果見表l:表l各種提取方法試驗(yàn)結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表1可知，采用80%乙醇作為提取溶劑(即方法一)的效果最好。3.2提取次數(shù)考察按4.l項(xiàng)下的方法一，取吉祥草藥材3份(批號(hào)20040301)，每份lg，進(jìn)行水浴回流提取，分別提取1次、2次、3次，每次2小時(shí)，結(jié)果見表2:表2提取次數(shù)考察結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由上表可知，提取3次便可完全提取出樣品中的總皂苷。3.3提取時(shí)間考察按4.l項(xiàng)下的方法一，取吉祥草藥材3份(批號(hào)20040301)，每份lg，進(jìn)行水浴回流提取，提取時(shí)間分別為0.5小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)，結(jié)果見表3:表3提取時(shí)間考察結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由上表可知，提取2小時(shí)即可完全提取出吉祥草藥材中的總皂苷，故提取時(shí)間確定為2/、時(shí)。4、顯色反應(yīng)條件的選擇4.l反應(yīng)原理番草瞎~CH0+HO"4.2顯色反應(yīng)試劑的選擇本實(shí)驗(yàn)對(duì)常用顯色劑香草醛冰醋酸-硫酸、高氯酸和香草醛冰醋酸-高氯酸-冰醋酸進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)高氯酸不能對(duì)其顯色，只有加入香草醛的顯色劑才能使其在波長(zhǎng)400800nm范圍內(nèi)有吸收光譜。其中以香草醛冰醋酸-高氯酸-冰醋酸顯色法測(cè)定吸光度時(shí)比色穩(wěn)定性較好4.3顯色反應(yīng)條件(濃度、溫度、時(shí)間)的選擇吸光度隨香草醛的濃度增加而增加，5%以下變化幅度較大，考慮到香草醛在空氣中易被氧化，濃度不宜過大，故選5%作為合適濃度。高氯酸用量在O.lmL0.3mL之間較穩(wěn)定，而后吸光度隨高氯酸用量的增加而下降，高氯酸用量過多反而對(duì)顯色反應(yīng)不利，所以本實(shí)驗(yàn)選擇高氯酸的用量為O.lmL。加熱溫度在607(TC間變化較小，加熱到9(TC時(shí)吸光度突然降低，對(duì)照品結(jié)構(gòu)在此溫度下可能被破壞，從而導(dǎo)致其吸光度降低，所以選取加熱溫度為607(TC。吸光度隨加熱時(shí)間的增加而增加，在1525min間較穩(wěn)定，所以選取加熱時(shí)間為15min。5、線性關(guān)系考察精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、lml于具塞試管中，揮干溶劑，精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lml，密塞，于7(TC水浴恒溫加熱15分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，以甲醇同法制備空白，按照分光光度法在453nm波長(zhǎng)內(nèi)測(cè)定吸收光譜。以凱提皂苷元的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)回歸分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程Y4.0027+0.0078x相關(guān)系數(shù)^0.9996，結(jié)果表明凱提皂苷元對(duì)照品在26136ug范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。6、精密度試驗(yàn)6.1儀器精密度試驗(yàn)取濃度為O.13mg/mL的對(duì)照品溶液，按上述方法顯色，于453nm波長(zhǎng)處重復(fù)測(cè)定5次，吸光度平均值為O.574，RSD為0.3"/。，表明儀器精密度良好，結(jié)果如下表4精密度試驗(yàn)結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>結(jié)果表明凱提皂苷元對(duì)照品的吸光度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%，說明本試驗(yàn)精密度良好6.2重復(fù)性試驗(yàn)分別精密稱取吉祥草樣品6份，按前法處理，制得供試品溶液，測(cè)定樣品中總皂苷含量。平均總皂苷含量28.91mgg—、RSD=1.3%(n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。測(cè)定結(jié)果如下表5重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表取樣量m/g1.0021.0021.0011.0021.0011.002平均值rr/呢RSD(%)總皂苷含量m/mg29.22428.6628.哪29.2441.3百分含量％2.9172.9112.8632.8832.m2.9192.咖結(jié)果表明吉祥草中總皂苷的含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%，說明本試驗(yàn)重現(xiàn)性良好。7、準(zhǔn)確度試驗(yàn)準(zhǔn)確稱取一定量已知總皂苷含量的吉祥草樣品6份，每份0.5g，加入一定量的凱提皂苷元對(duì)照品，按供試品溶液的制備和測(cè)定步驟進(jìn)行，計(jì)算得回收率，求相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果表明，此方法具有較好的加樣回收率，準(zhǔn)確度良好，結(jié)果見表6:表6回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果序號(hào)藥材量藥材中總皂苷含量加入量總測(cè)得量回收率平均值RSDm/gm/mgm/mgm/mg(%)(%)(%)10.則14.1417.00020.862100.120.則14.1417.00020.832犯.630.50214.1757.,20.83597.31.640.50214.17514.00027.66250.50314.18614.00027.87195.260.50014.m14.00027.35296.370.50114.14116.00030.62897.880.50014.m16.00030.32796.590.50014.m16.00030.51297.58、穩(wěn)定性試驗(yàn)被測(cè)溶液的穩(wěn)定性考察精密吸取供試品溶液50uL，按上述方法顯色，于453nm波長(zhǎng)處每隔5min測(cè)定其吸光度，結(jié)果表明樣品溶液的RSD為1.2X，樣品溶液顯色后在30min內(nèi)穩(wěn)定性良好。測(cè)定結(jié)果如下表7溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表顯色吋間5min10min15min20min25min30minA0.4590.4570.4530.4520.柳0.4451.2結(jié)果表明吉祥草藥材總皂苷吸光度相對(duì)偏差小于2%，說明顯色后在室溫下30分鐘內(nèi)測(cè)定具有良好的穩(wěn)定性。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明建立了以凱提皂苷元和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷兩個(gè)有效成分為對(duì)照的吉祥草薄層色譜鑒別方法和總皂苷的含量測(cè)定方法，完善了吉祥草藥材的質(zhì)16量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，彌補(bǔ)了現(xiàn)有質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)的不足，使吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)更為科學(xué)、合理；本發(fā)明所述鑒別項(xiàng)目的可操作性強(qiáng)，簡(jiǎn)便易行，方法穩(wěn)定，專屬性強(qiáng)，薄層色譜斑點(diǎn)清晰；所述含量測(cè)定方法的精密度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好，測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確；采用這些檢測(cè)方法可有效控制吉祥草藥材的質(zhì)量，從而確保其臨床應(yīng)用的安全性和有效性。具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。本發(fā)明的實(shí)施例l:吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法包括以下項(xiàng)目性狀干燥全草呈黃褐色，根莖細(xì)長(zhǎng)，節(jié)明顯，節(jié)上有殘留的膜質(zhì)鱗葉，并有少數(shù)彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮。鑒別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合并濾液，濃縮近干，用40mL水溶解后，加入活性炭0.3g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含O.8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和15min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i為展開劑，上行展開，展距iocm;取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合并濾液，濃縮近干，用40mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和i5min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下層為展開劑，上行展開，展距10cm;取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過40目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合并提取液，濾過，揮干；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至25mL，即得供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.13mg/mL的溶液，即得。測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒溫加熱15分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在453nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。本發(fā)明的實(shí)施例2:吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法可以僅含以下項(xiàng)目鑒別將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇50mL水浴回流3次，每次O.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用30mL水溶解后，加入活性炭0.5g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取2次，每次25ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5uL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和25min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4.5:3:i為展開劑，上行展開，展距8cm;取出，晾干，噴以3%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過50目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入70X乙醇50mL水浴回流4次，每次l.5h，合并提取液，濾過，揮干；加水25mL溶解，用石油醚萃取4次，每次20mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取5次，每次20mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至50mL，即得供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.20mg/mL的溶液，即得。測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入7。/。香草醛冰醋酸溶液0.40ml，高氯酸0.40mL，密塞，于75。C水浴恒溫加熱20分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸7mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在460nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。本發(fā)明的實(shí)施例3:吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法可以僅含以下項(xiàng)目鑒別將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇50mL水浴回流3次，每次O.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用30mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取4次，第l、2次各15mL，第3、4次各10mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取2次，每次15ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和20min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1:3:2:i的下層為展開劑，上行展開，展距8cm;取出，晾干，噴以3%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過30目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入90X乙醇30mL水浴回流5次，每次lh，合并提取液，濾過，揮干；加水15mL溶解，用石油醚萃取5次，每次10mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取3次，每次25mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至40mL，即得供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.35mg/mL的溶液，即得。測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入3%香草醛冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸O.30mL，密塞，于65。C水浴恒溫加熱25分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸4mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在440nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。本發(fā)明的實(shí)施例4:吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法可以含以下項(xiàng)目性狀干燥全草呈黃褐色，根莖細(xì)長(zhǎng)，節(jié)明顯，節(jié)上有殘留的膜質(zhì)鱗葉，并有少數(shù)彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮。鑒別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇70mL水浴回流1.5h，濾過，濾液濃縮近干，用20mL水溶解后，加入活性炭0.2g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取4次，每次15ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和20min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1:3:2.5:0.8為展開劑，上行展開，展距12cm;取出，晾干，噴以6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇70mL水浴回流1.5h，濾過，濾液濃縮近干，用50mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取2次，每次20mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取4次，每次10ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和25min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=3:5:3:i.5的下層為展開劑，上行展開，展距i2cm;取出，晾干，噴以6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。20權(quán)利要求1.一種吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，所述質(zhì)量檢測(cè)方法包括性狀、鑒別、含量測(cè)定項(xiàng)目中的部分或全部，其特征在于所述鑒別是對(duì)凱提皂苷元和/或剴提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄層色譜鑒別，含量測(cè)定是用紫外分光光度法對(duì)藥材中所含總皂苷的含量測(cè)定。2.按照權(quán)利要求l所述吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于凱提皂苷元的鑒別方法是以凱提皂苷元對(duì)照品為對(duì)照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑的薄層色譜法；剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷的鑒別方法是以剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品為對(duì)照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:ii.5的下層為展開劑的薄層色譜法。3.按照權(quán)利要求1或2所述吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:具體的鑒別方法為(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用2040mL水溶解后，加入活性炭O.20.7g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.51.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾干，噴以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用2060mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)觢5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含O.51.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下層為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾干，噴以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。4.按照權(quán)利要求l所述吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于總皂苷的含量測(cè)定方法是以凱提皂苷元對(duì)照品為對(duì)照的紫外分光光度法。5.按照權(quán)利要求1或4所述吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:具體的總皂苷含量測(cè)定方法為照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過2060目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合并提取液，濾過，揮干；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至2550mL，即得供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.100.50mg/mL的溶液，即得；測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，于608(TC水浴恒溫加熱1030分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸48mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在440460nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。6.按照權(quán)利要求l、2或4所述吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述質(zhì)量檢測(cè)方法包括以下項(xiàng)目性狀干燥全草呈黃褐色，根莖細(xì)長(zhǎng)，節(jié)明顯，節(jié)上有殘留的膜質(zhì)鱗葉，并有少數(shù)彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮；鑒別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次O.51.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用2040mL水溶解后，加入活性炭O.20.7g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.51.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾干，噴以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合并濾液，濃縮近干，用2060mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)觢5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含O.51.Omg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下層為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾干，噴以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過2060目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合并提取液，濾過，揮干；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至2550mL，即得供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.100.50mg/mL的溶液，即得；測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，于608(TC水浴恒溫加熱1030分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸48mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在440460nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。7.按照權(quán)利要求6所述吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述質(zhì)量檢測(cè)方法包括以下項(xiàng)目性狀干燥全草呈黃褐色，根莖細(xì)長(zhǎng)，節(jié)明顯，節(jié)上有殘留的膜質(zhì)鱗葉，并有少數(shù)彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮；鑒別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合并濾液，濃縮近干，用40mL水溶解后，加入活性炭0.3g，加熱，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含O.8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2uL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和15min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i為展開劑，上行展開，展距iocm;取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合并濾液，濃縮近干，用40mL水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2yL點(diǎn)樣于預(yù)制硅膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預(yù)飽和i5min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下層為展開劑，上行展開，展距10cm;取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對(duì)照品呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的制備取吉祥草藥材，粉碎，過40目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合并提取液，濾過，揮干；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，揮干，用甲醇定容至25mL，即得供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的凱提皂苷元對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成濃度為O.13mg/mL的溶液，即得；測(cè)定法分別精密量取凱提皂苷元對(duì)照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮干溶劑，精密加入5y。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒溫加熱15分鐘，取出后立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5mL，搖勻，以甲醇同法制備空白作參比；按照分光光度法在453nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，空白溶液無干擾；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應(yīng)不低于2%。全文摘要本發(fā)明公開了一種吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法，所述質(zhì)量檢測(cè)方法包括性狀、鑒別、含量測(cè)定項(xiàng)目中的部分或全部，所述鑒別是對(duì)凱提皂苷元和/或剴提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄層色譜鑒別，含量測(cè)定是用紫外分光光度法對(duì)藥材中所含總皂苷的含量測(cè)定。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明建立了以凱提皂苷元和剴提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷兩個(gè)有效成分為對(duì)照的吉祥草薄層色譜鑒別方法和總皂苷的含量測(cè)定方法，完善了吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，彌補(bǔ)了現(xiàn)有質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)的不足，使吉祥草藥材的質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)更為科學(xué)、合理；采用本發(fā)明所述檢測(cè)方法可有效控制吉祥草藥材的質(zhì)量，從而確保其臨床應(yīng)用的安全性和有效性。文檔編號(hào)A61P11/06GK101549084SQ20091030286公開日2009年10月7日申請(qǐng)日期2009年6月3日優(yōu)先權(quán)日2009年6月3日發(fā)明者海劉,欣周,周嬋媛,陳華國(guó)申請(qǐng)人:貴州師范大學(xué)