專利名稱：：一種治療大腸癌的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療大腸癌的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：大腸癌是較常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率列為惡性腫瘤的46位，盡管治療措施不斷改進(jìn)，其整體治療水平卻仍然徘徊在20世紀(jì)70年代水平，治療手段主要有手術(shù)、放療、化療、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)治療等。由于大腸癌早期無明顯的臨床癥狀，如出現(xiàn)癥狀和體征.多數(shù)已屬中晚期.失去手術(shù)機(jī)會(huì)。中晚期腫瘤患者一般采用放化療，患者多因體質(zhì)或放化療之毒副作用，而難以承受。術(shù)后5年生存率在50%55%之間，屬于較低水平。目前也有很多采用中醫(yī)辨證施治的方法治療大腸癌炎的報(bào)道，如中國(guó)專利申請(qǐng)CN1209337A(981141280.5)公開了"一種抬療大腸癌藥"處方為鹿角12g、鱉甲膠12g、薏苡仁30g、敗醬草15g、三七6g、紫香蘑60g、制麥麩30g、人參10g、當(dāng)歸12g。服用3-6個(gè)月，本品對(duì)不同階段的大腸癌、均可改善癥狀、增進(jìn)食欲，睡眠良好、體重增加、精神樂觀。如中國(guó)專利申請(qǐng)CN101264221A(200810105831.X)公開了"一種治療大腸癌的中藥組合物及其制備方法"其原料為歸尾5-15份、槐花20-30份、黃芩10-20份、紅花15-20份、香附10-15份、甘草20-25份、馬齒莧10-15份、防風(fēng)20-30份、五靈脂10-20份、山藥15-25份、桔梗5-10份、白術(shù)15-25份、五味子10-25份、知母15-20份；該藥物具有清熱利濕、行氣活血、化瘀解毒、溫補(bǔ)脾腎等作用，用于大腸癌引起的腹部陣痛、便中夾血、面色蒼白、少氣乏力等癥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種用于治療大腸癌的藥物組合物。該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑鴉膽子5-11份、喜樹果5-11份、薏苡仁和/或紅藤8-16份、莪術(shù)8-16份、人參和/或黨參5-16份。經(jīng)發(fā)明人長(zhǎng)期臨床總結(jié)，以鴉膽子8份、喜樹果8份、薏苡仁12份、莪術(shù)12份、人參8份治療效果最明確。其中喜樹果為珙桐科植物喜樹CamptothecaacuminateDecne的果實(shí)。應(yīng)用時(shí)，可將原料藥直接粉碎后制成散劑，或?qū)⒎鬯楹蟮姆勰┭b膠囊制成膠囊劑；或?qū)⒎鬯楹蟮姆勰┘尤肟山邮艿妮o料壓制成片劑。本發(fā)明藥物組合具有清熱解毒、活血散結(jié)、益氣扶正等功效，在長(zhǎng)期臨床觀察和系列實(shí)驗(yàn)研究中顯示了良好的抗癌效應(yīng)，尤其對(duì)大腸癌治療效果明確。主治大腸癌(癌)毒瘀內(nèi)阻，兼氣虛者，癥見腹痛，痛點(diǎn)固定，剌痛拒按，腹部包塊，腹脹，乏力，納差，舌質(zhì)紫暗或有瘀點(diǎn)、瘀斑，舌苔白而膩，脈細(xì)澀。用于大腸癌或大腸癌術(shù)后辯證屬(癌)毒瘀內(nèi)阻，兼體虛者。本發(fā)明所解決的第二個(gè)技術(shù)問題是提供該藥物組合物的制備方法，其步驟如下A、原料采用乙醇或水提取，收集提取液，備用；B、將步驟A所得提取液按照藥劑學(xué)常規(guī)方法制劑。其中，步驟A中提取條件為以6-10倍量的乙醇或水提取1-3次，每次1-2.5小時(shí)。若采用乙醇提取，乙醇濃度為65-95%。(乙醇百分比表示2(TC時(shí)容量的比例。)步驟B中處理提取液的方法為a、濃縮提取液，得濃縮液；b、加濃縮液3-6倍量水，靜置，過濾；c、濾液濃縮，加防腐劑，調(diào)pH至6-7。若提取液是以乙醇提取，可先揮至無醇味再行濃縮，為節(jié)約成本，也可以回收其中的乙醇至提取液無醇味再行濃縮。提取液經(jīng)過上述處理再加入藥學(xué)上可接受的輔料制備成具體的劑型，如顆粒劑、膠囊劑、片劑或口服液等劑型。該方法根據(jù)原料藥的特性，采用合理的方法提取其中的主要活性成分，使得治療效果更穩(wěn)定、可控。圖1為本發(fā)明藥物工藝流程圖。具體實(shí)施例方式以下通過對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施方式的描述說明但不限制本發(fā)明。本發(fā)明藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑鴉膽子5-11份、喜樹果5-11份、薏苡仁和/或紅藤8-16份、莪術(shù)8-16份、人參和/或黨參5-11份。在該用量范圍內(nèi)浮動(dòng)均可以實(shí)現(xiàn)清熱解毒、活血散結(jié)、益氣扶正的作用，可用于治療大腸癌，或用于大腸癌術(shù)后辯證屬(癌)毒瘀內(nèi)阻，兼體虛者。經(jīng)發(fā)明人長(zhǎng)期確定鴉膽子8份、喜樹果8份、薏苡仁12份、莪術(shù)12份、人參8份的治療效果更明確、更穩(wěn)定。為了便于服用，可將上述藥物組合物加入藥學(xué)上可接受的輔料制成常用制劑，如顆粒劑、片劑、膠囊劑或口服液等。如可將原料藥直接粉碎后制成散劑，或?qū)⒎鬯楹蟮姆勰┭b膠囊制成膠囊劑；或?qū)⒎鬯楹蟮姆勰┘尤肟山邮艿妮o料壓制成片劑。也可以將原料提取后獲得藥效成分更穩(wěn)定，更明確的提取物，并采用常規(guī)制劑技術(shù)制成散劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑或口服液、水煎劑、丸劑等劑型。提取工藝可采用如下工藝以65-95%乙醇提取原料，為提取完全，可以6-10倍量的乙醇提取1-3次，每次1-2.5小時(shí)。得到提取液后，將提取液揮至無醇味，濃縮得濃縮液；b、加濃縮液3-6倍量水，靜置，過濾；c、濾液濃縮，加防腐劑，調(diào)pH至6-7，再加入藥學(xué)上可接受的輔料進(jìn)行制劑。以下通過藥學(xué)實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明藥物組合物的有益效果。發(fā)明人對(duì)本發(fā)明藥物組合物的抗大腸癌作用及其機(jī)制進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)該藥物組合物對(duì)人大腸癌HT-29裸鼠移植瘤具有確切的抑瘤效果，可抑制人大腸癌HT-29移植瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，能抑制腫瘤血管生成，有抗腫瘤浸潤(rùn)侵襲的潛在作用，其機(jī)制可能與其改善人大腸癌HT-29移植瘤細(xì)胞及細(xì)胞核形態(tài)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞重新分化逆轉(zhuǎn)，降低腫瘤組織FLK-1、VEGF、TGF-P1、匪P-2、uPA的表達(dá)水平，促進(jìn)腫瘤組織Caspase-3、TIMP-2的表達(dá)，增大Bax/Bcl-2的含量相對(duì)比值，促進(jìn)腫瘤組織Endostatin、TMP的表達(dá)以及降低FLK-1、VEGF、匪P的表達(dá)有關(guān)，其中以Endostatin、FLK-l的影響較大。CFK臨床常規(guī)使用，基本無毒。實(shí)驗(yàn)資料如下下述藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)是采用如下配比的原料藥鴉膽子800g、喜樹果800g、薏苡仁1200g、莪術(shù)1200g、人參800g，按照?qǐng)D1所示流程制備而得的稠浸膏，每g稠浸膏含生藥8.96g。成品放于4t:冰箱保存。該稠浸膏以下簡(jiǎn)稱腸復(fù)康。實(shí)驗(yàn)一、對(duì)人大腸癌HT-29抑瘤效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究1、實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BALB/c-皿/nu裸小鼠，雌雄各半，46周齡，體重1822g，由四川省抗菌素研究所動(dòng)物房提供(合格證川實(shí)動(dòng)管第90號(hào))，在SPF條件下飼養(yǎng)。1.2實(shí)驗(yàn)瘤株人大腸癌HT-29細(xì)胞株，由四川大學(xué)華西醫(yī)院移植免疫室提供。1.3實(shí)驗(yàn)用藥1.3.1受試藥物腸復(fù)康，每g稠浸膏含生藥8.96g。1.3.2陽性對(duì)照藥注射用5-氟脲嘧啶(5Fu)，江蘇南通制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)011210。甲酰四氫葉酸f丐(CF)，山西普德藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20020101。1.4主要試劑與儀器1.4.1細(xì)胞培養(yǎng)材料T-25培養(yǎng)瓶，含20%NBC(小牛血清)的DMEN培養(yǎng)基，0.25%TN(胰蛋白酶)。1.4.3主要儀器ES-J系列電子分析天平(沈陽龍騰電子稱量?jī)x器有限公司，電熱恒溫水浴箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠)。2、實(shí)驗(yàn)方法2.l瘤株復(fù)蘇及傳代復(fù)蘇從細(xì)胞庫(kù)中取出人大腸癌HT-29冷凍細(xì)胞，37t:下溶解，將細(xì)胞懸液加入5ml培養(yǎng)基內(nèi)，1000rpm離心，510min后棄上清夜，將細(xì)胞置于20%NBS-DMEM培養(yǎng)基中，接種于T-25培養(yǎng)瓶。傳代待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶后，棄培養(yǎng)基，用0.25%TN消化，當(dāng)細(xì)胞變圓，間距變大時(shí)，用含小牛血清的培養(yǎng)基終止消化，離心冼滌，在按1傳23瓶比例接種。2.2動(dòng)物造模將含5X106癌細(xì)胞的懸液0.5ml分別于兩只裸鼠腹背側(cè)部皮下注射，SPF條件下飼養(yǎng)，所有飲用水、飼料及籠具均經(jīng)無菌消毒處理。待腫瘤長(zhǎng)至直徑O.51.Ocm，斷頸處死裸鼠，無菌剝離瘤體，浸入生理鹽水中，剪成1.Omm左右直徑碎塊，用16號(hào)套管針于40只裸鼠腹背側(cè)部各移植23塊。2.3實(shí)驗(yàn)分組及給藥裸鼠接種后第6天，隨機(jī)分成如下5組并給藥空白對(duì)照組生理鹽水0.2ml，灌胃。陽性對(duì)照組5Fu25mg/Kg，CF2mg/Kg，腹腔注射。腸復(fù)康低量組腸復(fù)康4.48g/Kg，灌胃。腸復(fù)康中量組腸復(fù)康8.96g/Kg，灌胃。腸復(fù)康高量組腸復(fù)康17.92g/Kg，灌胃。5Fu、CF用生理鹽水各配成0.2ml注射，每天給藥1次，共5天后停藥，停藥后第29天起重復(fù)注射5天。腸復(fù)康浸膏各劑量均用生理鹽水配成0.2ml使用，每天給藥1次，每給藥6天后停l天，共8周。腸復(fù)康低、中、高劑藥量均表示含生藥劑量，各相當(dāng)于成人臨床用藥量的5倍、10倍、20倍。2.4瘤重、抑瘤率檢測(cè)移植分組后第60天(即末次給藥后第2天)，處死裸鼠，剝離瘤體后稱重(W)，計(jì)算抑瘤率(I):1=(對(duì)照組W-治療組W)/對(duì)照組WX100X。3、統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料均以X士SD表示。所有指標(biāo)分析經(jīng)SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理。組間比較采用LSD(方差齊)或Tamhane(方差不齊)。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1—般狀況觀察裸鼠接種2周內(nèi)，癌體基本成橢圓形，2周后逐漸不規(guī)則，表面凹凸不平。空白組瘤體生長(zhǎng)較快，腸復(fù)康高劑量組生長(zhǎng)最慢。特別在后期，空白組裸鼠顯得尤為消廋。飲食、活動(dòng)方面各組無明顯差異，僅每次腸復(fù)康灌胃lh內(nèi)，裸鼠擁擠少動(dòng)，其后恢復(fù)正常。實(shí)驗(yàn)過程中，除空白組和5Fu+CF組外，各組均有一只裸鼠因灌胃不當(dāng)死亡。4.2各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤的抑瘤作用，見表1。表1各組裸鼠移植瘤瘤重及抑瘤率比較組別鼠數(shù)(只)瘤重(g)抑瘤率(%)空白對(duì)照組81.0213±。.2339——腸復(fù)康髙量組0.3471±0.0699AA'▲66.01腸復(fù)康中量組0.5386±0.1107AA47.26腸復(fù)康低量組0.6829±0.232633.135Fu+CF組80.6875±0.286032.68注A與空白組比較P<0.01，a與5Fu+CF組比較P<0.05。從表l可見，腸復(fù)康浸膏抑瘤作用與劑量呈正相關(guān)趨勢(shì)，其中低劑量組抑瘤率33.13%，高劑量組抑瘤率達(dá)66.01%，高于5Fu+CF組抑瘤率32.68%。腸復(fù)康高劑量組移植瘤瘤重顯著小于空白對(duì)照組和5Fu+CF組(P<0.01、P<0.05)。結(jié)果顯示腸復(fù)康對(duì)人大腸癌具有良好的抑瘤效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)二、對(duì)人大腸癌HT-29移植瘤病理形態(tài)的影響1實(shí)驗(yàn)材料1.1瘤體取實(shí)驗(yàn)一中空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組、腸復(fù)康各劑量組共37只人大腸癌HT-29裸鼠移植瘤瘤體。1.3儀器LDZ4-0.8自動(dòng)平衡微型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)TS-12G自動(dòng)脫水機(jī)(湖北省醫(yī)用電子儀器廠)BMG-III型病理組織包埋冷凍臺(tái)(常州郊區(qū)中威電子儀器廠)病理組織漂烘處理儀(常州郊區(qū)中威電子儀器廠)BH-20LYMPUS光學(xué)顯微鏡Mias-2000圖象分析系統(tǒng)(四川大學(xué))2實(shí)驗(yàn)方法2.1腫瘤病理形態(tài)學(xué)檢查瘤體取下后立即用10%中性福爾馬林固定48小時(shí)，梯度酒精系列脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片35um，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。2.2腫瘤細(xì)胞核形態(tài)定量檢測(cè)切片經(jīng)HE染色。200倍光鏡下選取癌細(xì)胞均勻豐富的5個(gè)視野，由Mias-2000圖像系統(tǒng)每個(gè)視野采集30個(gè)癌細(xì)胞核的形態(tài)圖像，并分析處理結(jié)果。3統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料均以X±SD表示。所有指標(biāo)分析經(jīng)SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理。組間比較采用LSD(方差齊)或Tamhane(方差不齊)。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤病理形態(tài)的影響鏡下見空白組移植瘤中心有不同程度的壞死，癌細(xì)胞豐富，中等大小，呈卵圓形、梭形、三角形及不規(guī)則形，胞漿較少，呈淡藍(lán)色，大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)有一個(gè)核，部分細(xì)胞內(nèi)有兩個(gè)及以上的核，核中等，呈卵圓形、梭形、三角形及不規(guī)則形，核膜厚，染色質(zhì)豐富，染色深，核仁明顯且大，有l(wèi)-3個(gè)，核分裂多見；5Fu+CF組癌組織中心壞死程度減輕，癌細(xì)胞中等偏大，呈卵圓形、梭形、三角形，胞漿有所增多，淡紅色，細(xì)胞內(nèi)多核減少，核中等偏大，呈卵圓形、梭形、三角形，核膜較厚，染色質(zhì)較豐富，染色較深，核仁明顯較大，有1-2個(gè)，核分裂較多見；腸復(fù)康組癌組織中心壞死程度減輕，高劑量組更為明顯，癌細(xì)胞較大，呈圓形、卵圓形，少許呈梭形，胞漿較豐富，呈淡紅色，細(xì)胞內(nèi)幾乎只有一個(gè)核，核偏大，呈圓形、卵圓形，少許呈梭形，核膜變薄，染色質(zhì)少，染色淺，幾乎呈空泡狀，核仁較明顯、較大，大多數(shù)只有1核仁，核分裂可見。4.2各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤細(xì)胞核形態(tài)定量的影響，見表2。表2各組移植瘤細(xì)胞核形態(tài)定量比較組另lj鼠數(shù)(只)形狀因子梭仁面積/梭面積(％)空白對(duì)照組80.8783±0.0102111.82±4.183腸復(fù)康高量組70.8985±0.01754A7.50±1.108Ai腸復(fù)康中量組70.8811±0.013237.086±1.085aA腸復(fù)康低量組70.8788±0.015709.100±1.633A注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01。由表2可知，腸復(fù)康各組腫瘤細(xì)胞核形狀因子隨劑量遞增，高劑量組明顯大于空白組(P<0.05)，提示腸復(fù)康可改善人大腸癌細(xì)胞核形態(tài)，使之規(guī)則。從核仁面積/核面積變化來看，腸復(fù)康各組均較空白組減小，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05、P<0.01)。實(shí)驗(yàn)三、抗人大腸癌HT-29細(xì)胞增殖作用及機(jī)理研究1實(shí)驗(yàn)材料1.1瘤體取實(shí)驗(yàn)一中空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組、腸復(fù)康各劑量組共37只人大腸癌HT-29裸鼠移植瘤瘤體。1.2試劑Ki-67、FLK-l、TGF-P:單抗及VEGF多抗均購(gòu)自SANTACRUZ公司。[OO94]1.3儀器BH-20LYMPUS光學(xué)顯微鏡，Mias-2000圖像分析系統(tǒng)(四川大學(xué))。2實(shí)驗(yàn)方法2.1免疫組化染色瘤體取下經(jīng)福爾馬林固定、梯度酒精脫水、石蠟包埋后，分別行Ki-67、FLK-1、TGF-Pi單抗及VEGF多抗的免疫組化染色。具體操作按試劑盒說明進(jìn)行，主要染色過程如下1)切片脫蠟至水，用PBS液(0.01mol/L，pH值7.4)沖洗3次X5min。2)3%11202室溫孵育IO分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，室溫下孵育10min。3)蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘。4)10%的正常山羊血清(PBS稀釋)封閉，室溫孵育IO分鐘。傾去血清，勿洗，滴加1:100比例稀釋的一抗(Ki-67、FLK-1、TGF-P!及VEGF抗體)，37。C孵育1小時(shí)。5)PBS沖洗，5分鐘X3次。6)滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液，37t:或室溫孵育30分鐘。7)PBS沖洗，5分鐘X3次。8)滴加第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37t:孵育30分鐘。9)PBS沖洗，5分鐘X3次。10)顯色劑顯色(DAB或AEC)。11)自來水充分沖洗，蘇木精復(fù)染，封片。2.2指標(biāo)檢測(cè)Ki-67陽性細(xì)胞數(shù)200倍光鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)視野陽性細(xì)胞數(shù)，求取每個(gè)視野平均數(shù)。VEGF、FLK-1、TGF-P:染色面積和積分光密度(IOD):200倍視野下，選取每張切片中VEGF、FLK-1、TGF-P!著色最明顯的10個(gè)視野，以Mias-2000圖象系統(tǒng)采集圖像并半定量檢測(cè)3種染色陽性物質(zhì)的面積和積分光密度，求取每視野的平均值，表示以上3種物質(zhì)的3統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料均以X士SD表示。所有指標(biāo)分析經(jīng)SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理。組間比較采用LSD(方差齊)或Tamhane(方差不齊)。并行多元線性回歸分析。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.l各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤Ki-67表達(dá)的影響見表3。表3各組裸鼠移植瘤Ki-67表達(dá)計(jì)數(shù)比較組另lj鼠數(shù)(只)Ki-67值(個(gè)/200f)空白對(duì)照組815.4750^2.3002腸復(fù)康高量組77.6714±1.9500A"腸復(fù)康中量組712.1714±1.9268A腸復(fù)康低量組714.9714±4.41125Fu+CF組89.4000±3.8781AA注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01，*與5Fu+CF組比較P>0.05。由表3所示，增殖細(xì)胞核抗原Ki-67計(jì)數(shù)以空白組最多，陽性物質(zhì)著色于癌細(xì)胞核內(nèi)，并主要存在于有核分裂的細(xì)胞內(nèi)，各用藥組Ki-67表達(dá)均有所減少，其中腸復(fù)康高劑量組Ki-67計(jì)數(shù)最少，雖與5Fu+CF組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但已顯著少于空白對(duì)照組(P<0.01)。提示腸復(fù)康可抑制人大腸癌細(xì)胞增殖，高劑量作用更明顯。4.2各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤VEGF表達(dá)的影響，見表4。表4各組移植瘤VEGF表達(dá)比較組別鼠數(shù)(只)面積總和積分光密度總和空白對(duì)照組859634.50±20747.6411278482±1692359.15腸復(fù)康髙量組735096.00±15380.2"7569071.5±3165135.2f。腸復(fù)康中量組739463.29士12595.2"8550176.90士22S1582.00。腸復(fù)康低量組742786士23784.329311415.3士265739LS3注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01。由表4所示，VEGF主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞漿，內(nèi)皮細(xì)胞也有部分表達(dá)。腸復(fù)康各劑量組移植瘤VEGF的表達(dá)均小于空白組，高劑量組染色面積和積分光密度最小，與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，提示腸復(fù)康可抑制大腸癌表達(dá)VEGF，高劑量作用較明顯。4.3各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤FLK-1表達(dá)的影響，見表5。表5各組移植瘤FLK-1表達(dá)比較組別鼠數(shù)(只〕面積總和(,"積分光密度總和空白對(duì)照組81259.75士693.69272155.00±142215.52腸復(fù)康高量組7593.57±280.57。181718.57±83510.75。腸復(fù)康中量組7755.14±321.55213406.。?！?3292.25腸復(fù)康低量組71064.14士504.29263288.29±110116.88注A與空白組比較P<0.05。鏡下可見VEGFR(FLK-1)陽性細(xì)胞呈局灶性分布，主要散在于腫瘤的邊緣，而FLK-l陽性物質(zhì)主要位于細(xì)胞膜，部分見于胞漿內(nèi)。由表5可知，腸復(fù)康各用藥組FLK-1表達(dá)量均較空白對(duì)照組減少，其中腸復(fù)康高劑量組FLK-l最少，與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。提示腸復(fù)康浸膏可抑制人大腸癌FLK-l的表達(dá)。4.4各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤TGF-P工表達(dá)的影響，見表6。表6各組移植瘤TGF-13i表達(dá)比較組另lj鼠數(shù)(只)面積總和(,2)枳分光密度總和空白對(duì)照組8105368.13±20664.8626733549.00±4274956.49腸復(fù)康高量組77574.14±W19949543.00±5423030.74。腸復(fù)康中量組14±32754.00。。16497203.00±6686150.34。。腸復(fù)康低量組768223.14±14032.5嚴(yán)16916500.00±2976686.68"注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01。由表6可知，腸復(fù)康各劑量組裸鼠移植瘤TGF-P工表達(dá)均較少，從TGF-P工染色面積和積分光密度比較看，腸復(fù)康各劑量組均明顯少于空白組并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05、P<0.01)，其中以中劑量組減少更為顯著。提示腸復(fù)康浸膏可抑制人大腸癌TGF-13工的生成。綜合以上指標(biāo)，對(duì)空白對(duì)照組、腸復(fù)康各劑量組移植瘤Ki-67陽性細(xì)胞數(shù)(Y)和VEGF、FLK-1、TGF-Pi表達(dá)水平(積分光密度X"X2、X3)行多元線性回歸分析，呈顯著正相關(guān)(r=0.291，P=0.033)，回歸方程為Y=4.499+3.892X10—l^l.632X10—5X2+4.318X10—8X3，XpX^Xg的標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)分別為0.258、0.438、0.067。實(shí)驗(yàn)四、誘導(dǎo)人大腸癌HT-29細(xì)胞凋亡及機(jī)理研究[one]l實(shí)驗(yàn)材料1.l瘤體取實(shí)驗(yàn)一中空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組、腸復(fù)康各劑量組共37只人大腸癌HT-29裸鼠移植瘤瘤體。1.2免疫組化試劑盒Caspase-3、Bax、Bcl_2單抗均購(gòu)自SANTACRUZ公司。1.3儀器Mias-2000圖像分析系統(tǒng)(四川大學(xué))，其余材料同實(shí)驗(yàn)一。2實(shí)驗(yàn)方法2.l免疫組化染色瘤體取下后經(jīng)福爾馬林固定、梯度酒精脫水、石蠟包埋，常規(guī)切片35um，分別行Caspase-3、Bax、Bcl-2單抗的免疫組化染色。具體操作按照各試劑盒說明及參照實(shí)驗(yàn)三免疫組化染色過程進(jìn)行。2.2凋亡細(xì)胞數(shù)檢測(cè)參照文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)方法。細(xì)胞凋亡的判斷標(biāo)準(zhǔn)在HE切片上，典型凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征為細(xì)胞固縮，圓形或橢圓形，或胞漿向外突出，失去與鄰近細(xì)胞的連接，核固縮，胞漿呈強(qiáng)酸性。細(xì)胞凋亡的另一種形式是凋亡小體，其形態(tài)學(xué)特征為圓形或橢圓形小體，胞漿均勻紅染，內(nèi)含或不含核碎片。細(xì)胞凋亡的定量檢測(cè)選擇細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)清晰的HE染色組織切片，隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野(40X)癌組織中凋亡細(xì)胞和凋亡小體數(shù)，取1個(gè)視野平均數(shù)為凋亡細(xì)胞數(shù)。2.3免疫組化指標(biāo)檢測(cè)200倍視野下，選取每張切片中Caspase-3、Bax、Bcl-2單抗著色最明顯的10個(gè)視野，以Mias-2000圖象系統(tǒng)采集圖像并半定量檢測(cè)3種染色陽性物質(zhì)的面積和積分光密度，求取每視野的平均值，表示以上3種物質(zhì)的含量。3統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料均以X±SD表示。所有指標(biāo)分析經(jīng)SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理。組間比較采用LSD(方差齊)或Tamhane(方差不齊)。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.l各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響，見表7。表7各組移植瘤凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注AA與空白組比較P<0.01，"與5Fu+CF組比較P<0.01，*與空白組比較P>0.05。由表7所示，各用藥組凋亡細(xì)胞數(shù)都比空白組增多，其中腸復(fù)康中、高劑量組移植瘤凋亡細(xì)胞數(shù)顯著多于與空白組和5Fu+CF組(P均<0.01)，5Fu+CF組移植瘤凋亡細(xì)胞數(shù)與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示腸復(fù)康具有促進(jìn)人大腸癌細(xì)胞凋亡的作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01。鏡下Caspase-3呈棕黃色，主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞漿。由表8可知，腸復(fù)康各劑量組移植瘤Caspase-3表達(dá)量均較空白對(duì)照組多，其中低劑量組移植瘤Caspase-3含量最多，染色面積及積分光密度均顯著大于空白對(duì)照組(P<0.01)。提示腸復(fù)康浸膏具有促進(jìn)人大腸癌Caspase-3表達(dá)的作用，低劑量作用較強(qiáng)。4.3各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤Bax、Bcl-2表達(dá)的影響，見表9。表9各組移植瘤Bax、Bcl-2表達(dá)比較<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01。鏡下Bax、Bcl-2兩者陽性部位主要在細(xì)胞漿，呈棕黃色。由表9所示，腸復(fù)康各用藥組移植瘤Bax、Bcl-2含量均較空白組增多。從各組Bax/Bcl-2值比較看，腸復(fù)康各劑量組均大于空白組，尤以高劑量組移植瘤Bax/Bcl-2比值最大，與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。提示腸復(fù)康浸膏可促進(jìn)人大腸癌Bax、Bcl-2的表達(dá)，但對(duì)Bax作用更強(qiáng)，具有增大Bax/Bcl-2比值的作用。實(shí)驗(yàn)五、抗人大腸癌HT-29移植瘤血管生成及機(jī)理研究l實(shí)驗(yàn)材料1.1瘤體取實(shí)驗(yàn)一中空白對(duì)照組、腸復(fù)康各劑量組29只人大腸癌HT-29裸鼠移植瘤瘤體。1.2免疫組化試劑CD34、endostatin、匪P-2單抗及VEGF多抗均購(gòu)自SANTACRUZ公司1.3儀器Mias-2000圖像分析系統(tǒng)(四川大學(xué))，其余材料同實(shí)驗(yàn)一。2實(shí)驗(yàn)方法2.l免疫組化染色瘤體取下后經(jīng)福爾馬林固定、梯度酒精脫水、石蠟包埋，常規(guī)切片35um，分別行CD34、endostatin、匪P-2單抗及VEGF多抗的免疫組化染色。具體操作按照各試劑盒說明及參照《實(shí)驗(yàn)三》免疫組化染色過程進(jìn)行。2.2微血管密度MVD檢測(cè)先用100倍光鏡掃視整個(gè)切片，尋找血管高密度區(qū)，即"熱點(diǎn)"，再在200倍光鏡下計(jì)數(shù)3個(gè)視野被CD34抗體染成棕黃色的血管環(huán)(條)數(shù)目，取其1個(gè)視野平均數(shù)。2.3免疫組化指標(biāo)檢測(cè)200倍視野下，選取每張切片中VEGF、FLK-l、Endostatin、匪P、TIMP-2著色最明顯的10個(gè)視野，以Mias-2000圖象系統(tǒng)采集圖像并半定量檢測(cè)5種染色陽性物質(zhì)的面積和積分光密度，求取每視野的平均值，表示以上5種物質(zhì)的含量。3統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料以X士SD表示。所有指標(biāo)分析經(jīng)SPSSll.O統(tǒng)計(jì)軟件處理。組間比較采用LSD(方差齊)或Tamhane(方差不齊)。并行相關(guān)性分析和多元線性回歸分析。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤MVD的影響，見表10。表10各組移植瘤MVD值比較組別鼠數(shù)(只)MVD值(條/200f)空白對(duì)照組816.5625±3.2557腸復(fù)康高量組6.3571±1.9355AA腸復(fù)康中量組10.2857±2.7297aa腸復(fù)康低量組15.(W±2.7077注AA與空白組比較P<0.01.由表10可知，空白組移植瘤血管生成最多，微血管密度MVD最大，鏡下觀察新生血管基底膜不完整。腸復(fù)康各劑量組移植瘤血管數(shù)減少，中、高劑量組移植瘤MVD顯著小于空白組(P均〈0.01)。提示腸復(fù)康浸膏具有抗人大腸癌血管生成的作用，高劑量作用更明顯。4.2各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤VEGF、FLK-1表達(dá)的影響，見表11。表11各組移植瘤VEGF、FLK-1表達(dá)比較組另IJ鼠數(shù)(只)VEGF積分光密度總和FLK-1積分光密度總和空白對(duì)照組811278482±1692359.15272155.00±142215.52腸復(fù)康高量組77569071.6±3165135.181718.57±83510.75。腸復(fù)康中量組8550176.90±2261582.00。213406.00±73292.25腸復(fù)康低量組79311415.3±2657391.632632肌29±110116.88注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01。由表11所示，VEGF、FLK-1主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞漿，內(nèi)皮細(xì)胞也有部分表達(dá)。腸復(fù)康各劑量組移植瘤VEGF、FLK-1的表達(dá)均小于空白組，高劑量組染色積分光密度均為最小，與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01、P<0.05)，提示腸復(fù)康可抑制大腸癌表達(dá)VEGF及FLK-1的作用，高劑量作用較明顯。分別行MVD與VEGF、FLK-1(積分光密度)的相關(guān)性分析得知，MVD值與二者含量均呈正相關(guān)，r值分別為0.332、0.498，P值分別為0.039、0.003。4.3各用藥組對(duì)裸鼠移植瘤Endostatin表達(dá)的影響，見表12。表12各組移植瘤Endostatin表達(dá)比較ir^~~鼠數(shù)〔只〕面枳總和(,2)積分光密度總和空白對(duì)照組腸復(fù)康中量組腸復(fù)康低量組810577.50±4863.09302415160±1344409.10757242.14±20183.31。。14426018.00±5006211.10。729765.43±11537.67。8253112.40±3121462.44。714719.14±3,.9141413肌10±1010836.97注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01。(方差不齊)鏡下Endostatin主要在腫瘤細(xì)胞胞漿表達(dá)，呈棕黃色。如表12所示，腸復(fù)康高劑量組移植瘤Endostatin含量最多，染色面積和積分光密度最大，與空白組比較有顯著差異(P<0.01)，腸復(fù)康中劑量組也明顯促進(jìn)移植瘤Endostatin表達(dá)，其染色面積和積分光密度均明顯大于空白組(P<0.05)。行MVD與Endostatin積分光密度相關(guān)性分析可知，二者呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.675，P<0.001。4.4各組用藥對(duì)人大腸癌匪P-2、TMP-2表達(dá)的影響，見表13。表13各組裸鼠移植瘤匪P-2、TIMP-2表達(dá)比較iF^~~鼠數(shù)〔只)MMP-2積分光密度總禾口~~mff-2積分光密度總和空白對(duì)照組腸復(fù)康高量組腸復(fù)康中量組85844860.10±2135055.692812157.80±903736.9373905419.3±1794321.90。5234876.30±1849324.15。74949959.70±1727808.797993188.30±2420398.10。。75460012.00±1452003.357395046.30±2394216.15。。注A與空白組比較P<0.05。由表13可知，匪P-2表達(dá)以空白組移植瘤最多，腸復(fù)康各組均減少，其中高劑量組匪P-2染色積分光密度明顯小于空白組(P<0.05)。TIMP-2含量以腸復(fù)康用藥組移植瘤較多，低、中劑量組移植瘤TIMP-2染色積分光密度顯著大于空白組(P<0.01)。提示腸復(fù)康對(duì)人大腸癌移植瘤匪P-2、TIMP-2的調(diào)節(jié)作用相反，抑制前者表達(dá)，促進(jìn)后者表達(dá)。行MVD與匪P-2、TMP-2(積分光密度)相關(guān)性分析得知，MVD值與匪P-2含量呈正相關(guān)，r=0.347，P=0.033，但MVD值與TIMP-2含量無明顯直線相關(guān)性(r=-0.086，P=0.329)。綜合以上指標(biāo)，對(duì)空白對(duì)照組、腸復(fù)康各劑量組移植瘤MVD值(Y)和VEGF、FLK-1、Endostatin、匪P-2表達(dá)水平(積分光密度X^X^X^Xj行多元線性回歸分析，呈顯著正相關(guān)(r=0.545，P=0.001)，回歸方程為Y=9.664+7.298X10—404X10—%_4.33X10—%+3.686X10—XX丄、X2、X3、X4的標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)分別為0.041、0.320、-0.478、0.141。實(shí)驗(yàn)六、對(duì)人大腸癌HT-29侵襲轉(zhuǎn)移的影響1實(shí)驗(yàn)材料1.1瘤體取實(shí)驗(yàn)一中空白對(duì)照組、腸復(fù)康浸膏各劑量組共29只人大腸癌HT-29裸鼠移植瘤瘤體。1.2免疫組化試劑盒匪P-2、TIMP、UPA單抗均購(gòu)自SANTACRUZ公司。1.3儀器Mias-2000圖像分析系統(tǒng)(四川大學(xué))，其余材料同實(shí)驗(yàn)一。2實(shí)驗(yàn)方法2.1免疫組化染色瘤體取下后經(jīng)福爾馬林固定、梯度酒精脫水、石蠟包埋，常規(guī)切片35um，分別行匪P-2、TIMP、UPA單抗的免疫組化染色。具體操作按照各試劑盒說明及參照《實(shí)驗(yàn)三》免疫組化染色過程進(jìn)行。2.2指標(biāo)檢測(cè)200倍視野下，選取每張切片中匪P-2、TIMP、UPA著色最明顯的10個(gè)視野，以Mias-2000圖象系統(tǒng)采集圖像并半定量檢測(cè)3種染色陽性物質(zhì)的面積和積分光密度，求取每視野的平均值，表示以上3種物質(zhì)的含量。3統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料均以X士SD表示。所有指標(biāo)分析經(jīng)SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理。組間比較采用LSD(方差齊)或Tamhane(方差不齊)。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1各組用藥對(duì)裸鼠移植瘤匪P-2表達(dá)的影響，見表14。表14各組裸鼠移植瘤匪P-2表達(dá)比較組別鼠數(shù)〔只)面積總和〔,2)積分光密度總和空白對(duì)照組腸復(fù)康中量組825453.13±9977.615844860.10±2135055.69716973.57±7507.623905419.3±1794321.90。721385.86±7714.674949959.70±1727808.79723399.71±6401.035460012.00±1452003.35注:A與空白組比較P<0.05。由表14可知，匪P-2表達(dá)以空白組最多，腸復(fù)康各組均有所減少，其中高劑量組匪P-2表達(dá)最少，其染色積分光密度與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。提示腸復(fù)康具有抑制人大腸癌匪P-2表達(dá)的作用，高劑量作用較強(qiáng)。4.2各組用藥對(duì)裸鼠移植瘤TIMP-2表達(dá)的影響，見表15。表15各組移植瘤TMP-2表達(dá)比較組另IJ鼠數(shù)(只)面積總和(,2)積分光密度總和空白對(duì)照組89528.375±3003.342812157.80±903736.93腸復(fù)康高量組175%.57±6472.46。5234876.30±1849324.15。腸復(fù)康中量組26910.14±89%.62。。7993188.30±2420398.W腸復(fù)康低量組723887.43±脫l.21。。7395046.30±2394216.lf注A與空白組比較P<0.05，AA與空白組比較P<0.01。由表15可知，腸復(fù)康各劑量組移植瘤TMP-2表達(dá)量均明顯多于空白對(duì)照組，中、低劑量組TIMP染色面積及積分光密度均顯著多于空白組，P<0.01。提示腸復(fù)康具有促進(jìn)人大腸癌TIMP表達(dá)的作用，低、中劑量作用顯著。4.3各組用藥對(duì)裸鼠移植瘤UPA表達(dá)的影響，見表16。表16各組移植瘤uPA表達(dá)比較<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表16可知，UPA表達(dá)以空白組移植瘤最多，腸復(fù)康各組均有所減少，中劑』UPA表達(dá)最少，其染色面積及積分光密度均明顯小于空白對(duì)照組(P<0.05、P<0.01)。提示腸復(fù)康具有抑制人大腸癌移植瘤UPA表達(dá)的作用。實(shí)驗(yàn)七、腸復(fù)康浸膏的安全性初步研究發(fā)明人將上述稠浸膏制成膠囊劑長(zhǎng)期應(yīng)用于臨床，無明顯毒副作用，因其含有"有毒"成分鴉膽子、喜樹果，故通過毒性試驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)荷瘤裸鼠的血液學(xué)毒性。1急性毒性試驗(yàn)1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1藥品腸復(fù)康，以生理鹽水配成最大濃度的懸濁液，相當(dāng)于3.36g/ml。所需低濃度液用生理鹽水實(shí)驗(yàn)時(shí)調(diào)配。以上均指生藥含量。1.1.2動(dòng)物昆明種小鼠20只，雌雄各半，體重20士2g，由我校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)川實(shí)動(dòng)管第6號(hào))，并在該實(shí)驗(yàn)室觀察和喂養(yǎng)。1.2實(shí)驗(yàn)方法灌胃給藥法。本實(shí)驗(yàn)中將20只小鼠禁食(不禁水)12小時(shí)后，于24小時(shí)內(nèi)以3.36g/ml灌胃2次，每次灌胃0.8ml。按常規(guī)飼養(yǎng)，觀察10天后處死。1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果灌胃后10分鐘，所有小鼠開始出現(xiàn)少動(dòng)、畏縮、閉目、不進(jìn)食，2小時(shí)后逐漸恢復(fù)正常。觀察10天內(nèi)，除前期有大便略溏外，無死亡和其它異常癥狀。處死小鼠后肉眼觀察重要器官(心肝脾肺腎等)未見異常。小鼠灌胃總劑量為268.8g/Kg/日，即最大耐受量大于268.8g/Kg/日，相當(dāng)于60Kg體重成人臨床每日用量的300倍。2血液學(xué)毒性實(shí)驗(yàn)2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1動(dòng)物采用實(shí)驗(yàn)一中造模BALB/c-皿/nu裸小鼠，取其空白對(duì)照組和腸復(fù)康低、中、高劑量組共32只，雌雄各半，體重20±2g。2.1.2藥物具體用法同實(shí)驗(yàn)一，腸復(fù)康浸膏低、中、高劑量分別為60Kg體重成年人臨床每日用藥的5、10、20倍。空白對(duì)照組采用生理鹽水給藥。2.1.3儀器F-820血球儀(Sysmex公司)，其余材料同實(shí)驗(yàn)一。2.2實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)驗(yàn)一，灌胃給藥8周后對(duì)29只荷瘤裸小鼠摘除眼球取血約160.5lml，行血常規(guī)檢查。2.3統(tǒng)計(jì)方法數(shù)據(jù)均以X士SD表示。所有指標(biāo)分析經(jīng)SPSSll.O統(tǒng)計(jì)軟件包處理。組間比較采用LSD(方差齊)或Tamhane(方差不齊)。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見表17。表17腸復(fù)康浸膏對(duì)荷瘤裸小鼠血常規(guī)的影響血紅蛋白紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板組另寸〔g/L)〔xl。i2/L)(xl09/L)〔xlOl)~空白組~~153.50±14.7210.23±0.856.34±2.76740.63±439.35^+—s,腸復(fù)康咼量組146.00±7.429.77±0.605.96±0.871150.00±145.16腸復(fù)康中量組149.00±20.7011.14±2.796.37±1.341214.14±248.80腸復(fù)康低量組131.57±16.549.48±1.046.77±2.041112.00±401.29A與空白組比較P<0.05。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析表明，荷瘤小鼠血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞各項(xiàng)組間比較無明顯差異(P>0.05)，血小板比較(方差不齊)，各組間亦無明顯差異，P>0.05。提示腸復(fù)康浸膏常規(guī)使用無明顯血液學(xué)毒性。臨床應(yīng)用發(fā)明人采用鴉膽子800g、喜樹果800g、薏苡仁1200g、莪術(shù)1200g、人參800g，按照?qǐng)Dl所示流程制備而得的稠浸膏制成膠囊劑，每粒膠囊劑含生藥8.96g。將上述膠囊劑應(yīng)用于臨床治療中晚期大腸癌55例(治療組)，并與應(yīng)用5-Fu(5-氟尿嘧啶)化療的55例患者對(duì)照(對(duì)照組)，兩組間性別、年齡、病程及治療前臨床、病理分型及中醫(yī)癥狀表現(xiàn)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，無明顯差異，具可比性。1、治療方法治療組口服腸復(fù)康膠囊劑，每次4粒.1日3次，對(duì)照組5-氟尿嘧啶(5-FU)0.75g/日，靜滴，共5天，每21天重復(fù)。以上2組患者同時(shí)觀察3個(gè)月。2、臨床療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(1)完全緩解(CR):腫瘤完全消失并持續(xù)4周以上，無病灶出現(xiàn)；(2)部分緩解(PR):腫瘤兩徑乘積減少50%以上并持續(xù)4周以上，無新病灶出現(xiàn)；(3)無變化(NC):腫瘤兩徑乘積減少50%以下或增大25%以上持續(xù)4周以上，無新病灶出現(xiàn)；(4)惡化(PD):腫瘤兩徑乘積增大25%以上或有新病灶出現(xiàn)。其中，CR和PR表示為有效(OR)。3、中醫(yī)證候癥狀評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)按治療前后癥狀積分值的變化評(píng)定療效，分為(1)臨床痊愈治療后癥狀消失，積分降至零；(2)顯效部分癥狀消失，積分降低2/3以上；(3)有效癥狀好轉(zhuǎn)，積分降低1/32/3;(4)無效無明顯改善，積分不變或降低不足1/3。4、生存質(zhì)量評(píng)定以Farnofsky評(píng)分評(píng)定；腫瘤標(biāo)記物CEA檢測(cè)采用ELISA法檢測(cè)；T細(xì)胞亞群測(cè)定采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)。5、治療結(jié)果(1)臨床療效治療組完全緩解0例，部分緩解12例(占21.8%)，無變化38例(占69.1%)，惡化5例(占9.1%)，總有效率為21.8%;對(duì)照組完全緩解0例，部分緩解10例(占18.2%)，無變化31例(占56.4%)，惡化14例(占25.4%).總有效率為18.2%。(2)中醫(yī)證候癥狀療效治療組對(duì)乏力、納差、腹痛、便血、瀉泄等癥狀的改善作用明顯優(yōu)于對(duì)照組，而對(duì)里急后重、消瘦等癥狀的改善作用不明顯。(3)生存質(zhì)量評(píng)分比較治療組治療前51.25士9.21，治療后68.37士11.65;對(duì)照組治療前52.44±10.17，治療后44.28±8.52。兩組治療前生存質(zhì)量評(píng)分無明顯差異，治療后治療組FamOfskv評(píng)分明顯升高，與治療前比較有顯著性差異(P<0.001);而對(duì)照組與治療前比較明顯下降(P<0.05)。表明腸復(fù)康能夠提高腫瘤患者的生存質(zhì)量，從而達(dá)到提高療效之目的。(4)腫瘤標(biāo)記物CEA治療前后的比較治療組治療前147.88±89.27(22)，治療后99.33±57.82(22);對(duì)照組治療前152.62±102.38(17)，治療后130.53±69.43(17)。2組腫瘤標(biāo)記物CEA有一定程度下降，但與治療前比較無明顯差異(P>0.05)。(5)T細(xì)胞亞群變化比較治療組治療前CD3(%)57.89±6.25，CD4(%)35.54±8.37，CD8(%)31.36±5.86，CD4/CD81.16±1.03;治療后CD3(%)63.38±7.67，CD4(%)42.77±7.01，CD8(%)26.75±6.95，CD4/CD81.75±0.48。對(duì)照組治療前〇03(%)61.96±7.11，CD4(%)34.84±8.3，CD8(%)29.79±6.85，CD4/CD81.31±0.66;治療后CD3(%)58.61±9.01，CD4(%)32.21±7.69，CD8(%)29.79±8.24，CD4/CD81.27±0.53。綜上，治療組與對(duì)照組臨床療效相近(P>0.05)，有效率分別是21.8%和18.2%;治療組患者臨床癥狀明顯改善，體力指數(shù)(Farnofsky評(píng)分)明顯升高，綜上表明該藥物組合物治療大腸癌療效確切。發(fā)明人在應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn)人參與黨參，薏苡仁與紅藤是可以互為代用的，出于對(duì)腫瘤患者經(jīng)濟(jì)上的考慮，采用黨參替代人參，以及采用紅藤替代薏苡仁的治療效果是一樣的。因此，本發(fā)明藥物組合物通常以鴉膽子5-11份、喜樹果5-11份、薏苡仁8-16份、莪術(shù)8-16份、人參5-16份為原料藥，但是從成本考慮，可以采用紅藤替換薏苡仁，采用黨參替代人參；或者也可以將紅藤與薏苡仁混合使用，將黨參與人參混合使用，均不影響治療效果，但是為了保證將黨參替換為人參時(shí)，最好加倍使用，即若重量配比為鴉膽子8份、喜樹果8份、薏苡仁和/或紅藤12份、莪術(shù)12份、人參8份時(shí)，采用黨參替換，則使用如下重量配比或鴉膽子8份、喜樹果8份、薏苡仁和/或紅藤12份、莪術(shù)12份、黨參16份。權(quán)利要求治療大腸癌的藥物組合物，其特征在于它是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑鴉膽子5-11份、喜樹果5-11份、薏苡仁和/或紅藤8-16份、莪術(shù)8-16份、人參和/或黨參5-16份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療大腸癌的藥物組合物，其特征在于它是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑鴉膽子8份、喜樹果8份、薏苡仁和/或紅藤12份、莪術(shù)12份、人參和/或黨參8份；或鴉膽子8份、喜樹果8份、薏苡仁和/或紅藤12份、莪術(shù)12份、黨參16份。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療大腸癌的藥物組合物，其特征在于所述的制劑為散劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液、水煎劑或丸劑。4.一種治療大腸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于其步驟如下A、原料采用乙醇或水提取，收集提取液，備用；B、將步驟A所得提取液按照藥劑學(xué)常規(guī)方法制劑。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療大腸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟A中采用提取條件為以6-10倍量的乙醇或水提取1-3次，每次1-2.5小時(shí)。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的治療大腸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟A中采用乙醇提取時(shí)，乙醇濃度為65-95%。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療大腸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟B中處理提取液的方法為a、濃縮提取液，得濃縮液；b、加濃縮液3-6倍量水，靜置，過濾；c、濾液濃縮，加防腐劑，調(diào)pH至6-7。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療大腸癌的藥物組合物及其制備方法。本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種全新的藥物組合物用于治療大腸癌，鴉膽子5-11份、喜樹果5-11份、薏苡仁和/或紅藤8-16份、莪術(shù)8-16份、人參和/或黨參5-16份。本發(fā)明藥物組合具有清熱解毒、活血散結(jié)、益氣扶正等功效，在長(zhǎng)期臨床觀察和系列實(shí)驗(yàn)研究中顯示了良好的抗癌效應(yīng)，尤其對(duì)大腸癌治療效果明確。該藥物組合物主治大腸癌(癌)毒瘀內(nèi)阻，兼氣虛者，癥見腹痛，痛點(diǎn)固定，刺痛拒按，腹部包塊，腹脹，乏力，納差，舌質(zhì)紫暗或有瘀點(diǎn)、瘀斑，舌苔白而膩，脈細(xì)澀。用于大腸癌或大腸癌術(shù)后辯證屬(癌)毒瘀內(nèi)阻，兼體虛者。文檔編號(hào)A61K36/9066GK101700394SQ20091031058公開日2010年5月5日申請(qǐng)日期2009年11月27日優(yōu)先權(quán)日2009年11月27日發(fā)明者何成詩(shī),劉碧清,楊彥申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)