專利名稱：微粒膜組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及伸縮性、柔軟性優(yōu)異，具有充分強度，且透氣性和水分蒸發(fā)性優(yōu)異的、 包含交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的膜組合物，用于形成該包含交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒膜的膜組合物的二 劑式皮膚外用劑，以及通過利用該膜組合物和二劑式皮膚外用劑來修復皮膚上的凹凸的化 妝方法。
背景技術(shù)：
雖然已經(jīng)開發(fā)出用于提高人的美觀的多種化妝品或化妝方法，但是由于現(xiàn)有的化 妝品或化妝方法難以修復皮膚上的顯著凹凸，例如深的皺紋或外傷、燒傷引起的瘢痕，因此 嘗試通過在皮膚上形成膜來修復美容上的缺陷。例如，在特開平11-349442公報中，公開了包含半透明球狀粉體、水和硅酮的遮蓋 皺紋、毛孔的化妝品。然而，雖然認為該化妝品可以修復淺的皺紋等小凹凸，但是由于該化 妝組合物未交聯(lián)，對于手接觸等強力沒有充分的強度，因此認為不能修復深的皺紋、瘢痕等 大的凹凸。此外，在特開2000-16919公報中，公開了包括含有硅酮化糖化合物、硅酮油、粉末 的外用劑在內(nèi)的、用于修復皮膚上的凹凸的外用劑。然而，該外用劑組合物未交聯(lián)，對于手 接觸等強力沒有充分的強度，而且伸縮性和柔軟性也不充分。專利文獻1 特開平11-349442公報專利文獻2 特開2000-16919公報

發(fā)明內(nèi)容
對于象面部那樣的皮膚容易變形、容易動的部分，為了追隨其變形，包覆組合物需 要伸縮性和柔軟性。然而，上述文獻中所公開的由高分子水溶液配制而成的膜組合物不能 充分追隨這樣的變形。此外，在用于面部等手等常常接觸的部位的情況下，該膜需要對這樣 的物理力具有充分的強度。此外，為了修復深的皺紋或外傷、燒傷引起的瘢痕等大的皮膚變 形，需要形成厚膜，此外，為了保持健康的皮膚狀態(tài)，膜需要具有優(yōu)異的透氣性和水分蒸發(fā) 性。本發(fā)明提供膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒通過谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶被交聯(lián)而具有 改善了的伸縮性和柔軟性，而且透氣性和水分蒸發(fā)性優(yōu)異的、用于修復凹凸表面特別是皮 膚上的凹凸表面的有效膜組合物，用于形成該膜組合物的二劑式皮膚外用劑，以及通過利 用該膜組合物和二劑式皮膚外用劑來修復皮膚上的凹凸的化妝方法。用于解決上述課題的 本發(fā)明的具體方式如下。1. 一種膜組合物，是包含交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的膜組合物，其特征在于，該交聯(lián)性蛋 白質(zhì)微粒通過谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶彼此交聯(lián)。2.上述膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒是乳膠粒子。3.上述膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)的乳膠粒子是油包水型乳膠粒子。4.上述膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)是明膠、膠原蛋白或酪蛋白。5.上述膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的粒徑為1 30μπι。6.上述膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分的比例為 1 20質(zhì)量％。7.上述膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分的比例為 5 15質(zhì)量％。8.上述膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分的比例為 8 12質(zhì)量％。9.上述膜組合物，其特征在于，用于使所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼此交聯(lián)的谷氨酰 胺轉(zhuǎn)胺酶的量相對于Ig交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分為1 20U。10.上述膜組合物，其特征在于，用于使所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼此交聯(lián)的谷氨酰 胺轉(zhuǎn)胺酶的量相對于Ig交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分為1. 5 10U。11.上述膜組合物，其特征在于，用于使所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼此交聯(lián)的谷氨酰 胺轉(zhuǎn)胺酶的量相對于Ig交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分為5 10U。12.上述膜組合物，是用于修復凹凸表面的。13.上述膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒還包含陰離子性聚合物成 分。14.上述膜組合物，其特征在于，所述陰離子性聚合物是聚谷氨酸。15.上述膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的陰離子性聚合物成分的比例為 0. 01 0. 5質(zhì)量％。16.上述膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒還包含多元醇成分。17.上述膜組合物，其特征在于，所述多元醇成分是甘油。18.上述膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的多元醇成分的比例為1 50質(zhì)量％。19. 一種二劑式皮膚外用劑，是通過使交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼此交聯(lián)而在皮膚表面 上形成膜的二劑式皮膚外用劑，其特征在于，包含含有交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的第1劑、和含有 谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的第2劑。20.上述二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述第1劑中含有的交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒 是乳膠粒子。21.上述二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述第1劑中含有的交聯(lián)性蛋白質(zhì)的乳 膠粒子是油包水型乳膠粒子。22.上述二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述第1劑中的微粒還包含陰離子性聚 合物成分。23.上述二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述陰離子性聚合物是聚谷氨酸。24.上述二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述第1劑中的微粒還包含多元醇成 分。25.上述二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述多元醇成分是甘油。26. 一種化妝方法，是用于修復皮膚表面的凹凸的化妝方法，其特征在于，包括下述步驟在皮膚表面上的所需部位施用含有交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的第1劑和含有谷氨酰胺轉(zhuǎn) 胺酶的第2劑的混合物，或通過在皮膚表面上的所需部位分別施用該第1劑和第2劑從而 將它們混合，再使在該部位上的第1劑和第2劑的混合物干燥，由此在皮膚表面上形成該交 聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼此交聯(lián)而成的膜。27.上述化妝方法，其特征在于，所述第1劑中含有的交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒是乳膠粒子。28.上述化妝方法，其特征在于，所述第1劑中含有的交聯(lián)性蛋白質(zhì)的乳膠粒子是 油包水型乳膠粒子。29.上述化妝方法，其特征在于，所述第1劑中的微粒還包含陰離子性聚合物成 分。30.上述化妝方法，其特征在于，所述陰離子性聚合物是聚谷氨酸。31.上述化妝方法，其特征在于，所述第1劑中的微粒還包含多元醇成分。32.上述化妝方法，其特征在于，所述多元醇成分是甘油。


圖1是顯示通過油包水乳化法配制的明膠粒子膜的伸縮性和柔軟性的照片。圖2是顯示微粒組裝體A、塊狀凝膠A、微粒組裝體C、塊狀凝膠C中的亞甲基藍的 吸附 釋放的時間變化的圖。圖3是顯示微粒組裝體A、B和C中的應(yīng)力-變形曲線的圖。圖4是顯示與對照樣品(氯化鈉水溶液、和氯化鈉+甘油水溶液)進行比較的各 微粒(微粒A、B和C)分散液的水分蒸發(fā)速度的圖。圖5是顯示微粒組裝體的表面形狀隨著干燥而變化的環(huán)境控制型電子顯微鏡 (ESEM)照片。圖6是將醫(yī)用包裝紙上的各塊狀凝膠與微粒組裝體隨著干燥產(chǎn)生的收縮進行比 較的照片。
具體實施例方式本說明書中所使用的“交聯(lián)性蛋白質(zhì)”的術(shù)語是指具有高交聯(lián)能力的可凝膠化的 蛋白質(zhì)，特別優(yōu)選為可以通過谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶交聯(lián)的蛋白質(zhì)。作為這樣的交聯(lián)性蛋白質(zhì)的 實例，可列舉例如明膠、膠原蛋白或酪蛋白。本說明書中所使用的“微粒”的術(shù)語旨在包括上述交聯(lián)性蛋白質(zhì)的交聯(lián)粒子和非 交聯(lián)粒子兩者。這里所謂的交聯(lián)粒子，是指通過交聯(lián)在溶劑中發(fā)生凝膠化而得到的粒子，而 所謂的非交聯(lián)粒子，是指未通過交聯(lián)在溶劑中發(fā)生凝膠化的乳膠粒子。在本發(fā)明的某方式中，提供包含交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的膜組合物。該交聯(lián)性蛋白質(zhì) 微粒優(yōu)選為乳膠粒子。此外，該交聯(lián)性蛋白質(zhì)的乳膠粒子優(yōu)選為油包水型乳膠粒子。該油 包水型乳膠粒子具有以連續(xù)相(外相)作為油分，并以分散相(內(nèi)相)作為交聯(lián)性蛋白質(zhì) 的水溶液的膠束結(jié)構(gòu)。上述交聯(lián)性蛋白質(zhì)的油包水型乳膠粒子形成過程如下將交聯(lián)性蛋白質(zhì)，例如明 膠、膠原蛋白或酪蛋白的水溶液添加至分散體系(油分)中，再根據(jù)需要通過機械裝置，例
6如超聲波、螺旋槳攪拌器、槳式混合機、均質(zhì)混合機、膠體磨添加表面活性劑。在本發(fā)明中，用于形成上述乳液的油分對人體無害即可，可以是本領(lǐng)域中用于形 成油包水型乳液的常用的任何油分，可列舉例如異十二烷、異十六烷、鏈狀聚硅氧烷、環(huán)狀 聚硅氧烷、改性聚硅氧烷、角鯊烷、肉豆蔻酸異丙酯、辛酸鯨蠟基酯、十六烷酸異丙酯、三辛 酸甘油酯、四(2-乙基己酸)季戊四醇酯、己二酸二異丁酯、癸二酸二(2-乙基己酯)、橄欖 油、霍霍巴油、胚芽油等。特別優(yōu)選十甲基環(huán)五硅氧烷。交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒，例如乳膠粒子的粒徑為0. 1 100 μ m，優(yōu)選為0. 1 80 μ m，
更優(yōu)選為1 30 μ m。微粒的粒徑可以通過本領(lǐng)域中的常用方法例如激光光散射法、庫爾特 粒度分析計數(shù)法等使用例如PAR-IIIs (PH0T0NC0RRELATER)(大塚電子株式會社)來測定。向上述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒例如乳膠粒子中添加谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶，并在合適條件 下，例如在室溫 45°C，優(yōu)選為30 40°C，最優(yōu)選為體溫下使它們進行反應(yīng)例如5分鐘 1 小時，優(yōu)選5 30分鐘，來使該微粒進行交聯(lián)聚合，由此形成包含交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的膜。 認為由于由此獲得的包含微粒的凝膠膜在蛋白質(zhì)的微細粒子間具有大量間隙，因此與塊狀 凝膠相比，具有優(yōu)異的透氣性和水分蒸發(fā)性。此外，可以通過粒子間的交聯(lián)獲得適用于皮膚 的充分的伸縮性、柔軟性和強度。谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶廣泛存在于自然界中，是依賴于鈣和硫醇的?；D(zhuǎn)移酶家族。該 谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶是用于催化形成有肽鍵的谷氨酰胺殘基的Y-羧酰胺基與特定蛋白質(zhì)中 存在的賴氨酸的ε _氨基等多種化合物的伯氨基形成酰胺鍵、通過引入胺使蛋白質(zhì)進行翻 譯后修飾或使蛋白質(zhì)進行交聯(lián)聚合而廣泛使用的酶。本發(fā)明中使用的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶，對于其來源沒有特別的限制，可以是例如微生 物來源的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶、哺乳類來源的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶、魚類來源的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶、或 它們的衍生物等。這些谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶可以商購，例如可以以7 ” r 4 〃的商品名從味O 素株式會社購入。本發(fā)明的膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分的比例對膜組合物的硬度，即伸縮性、 柔軟性和強度等有影響。適用于皮膚的適當膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分的比例為1 20質(zhì)量％，優(yōu)選為5 15質(zhì)量％，更優(yōu)選為8 12質(zhì)量％。此外，上述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的交聯(lián)化中所添加的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的量對蛋白質(zhì) 成分的交聯(lián)程度有影響。用于形成適當交聯(lián)的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的量相對于Ig交聯(lián)性蛋白 質(zhì)成分為1 20U，優(yōu)選相對于Ig交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分為1. 5 10U，更優(yōu)選相對于Ig交聯(lián) 性蛋白質(zhì)成分為5 10U。在本說明書中，作為酶量的單位使用的“U(單位)”表示酶活性量，IU是指在最佳 條件下每分鐘可以使Iymol的基質(zhì)(在本發(fā)明中是交聯(lián)性蛋白質(zhì)，例如明膠、膠原蛋白或 酪蛋白等)發(fā)生變化。雖然上述微粒是以交聯(lián)性蛋白質(zhì)作為主成分，但是在配制交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的過 程中，可以通過向水性膨潤溶劑(例如氯化鈉水溶液)中添加交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分和陰離子 性聚合物，來用該陰離子性聚合物置換微粒的交聯(lián)性蛋白質(zhì)聚合物組成的一部分。由于陰 離子性聚合物在其側(cè)鏈中具有羧基等，因此還可以通過賦予該官能團的特性來進一步改善 本發(fā)明的微粒膜組合物的性質(zhì)。作為被改善的性質(zhì)，可列舉具有陰離子性聚合物的相反電 位的物質(zhì)(例如，陽離子性染料)的保持量的增加、通過濃度梯度來抑制凝膠內(nèi)包物質(zhì)的釋放、膜組合物的柔軟性的增強、對彎曲的耐破損性的增強、對拉伸的追隨性的提高、以及通 過來自陰離子性聚合物的離子基團的排斥使凝膠的膨潤性提高等。陰離子性聚合物(在通過靜態(tài)光散射法進行測定的情況下，該聚合物的分子量為 1萬 1000萬，優(yōu)選為10萬 500萬，最優(yōu)選為50萬 100萬)只要是對人體無害就沒 有限制，但是優(yōu)選為聚谷氨酸、聚天冬氨酸等陰離子性聚氨基酸，瓊脂、透明質(zhì)酸、硫酸軟骨 素、琥珀酰葡聚糖、阿拉伯樹膠、黃原膠、羧甲基纖維素等陰離子性多糖類，聚丙烯酸等，特 別優(yōu)選聚谷氨酸。上述膜組合物中的陰離子性聚合物成分的比例為0. 01 0. 5質(zhì)量％，優(yōu)選為 0. 1 0. 5質(zhì)量％，更優(yōu)選為約0. 2 0. 4質(zhì)量％。此外，在交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的配制中，通過向交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的水性膨潤溶劑 (例如氯化鈉水溶液)中添加多元醇，可以使交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒中含有多元醇成分作為膨 潤溶劑。由于通常多元醇與水的親和性高，因此即使微粒的膨潤溶劑的蒸發(fā)達到平衡，也可 以不蒸發(fā)而殘存在微粒內(nèi)。由此，通過使交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒中含有多元醇成分，可以抑制膜 組合物的水分蒸發(fā)性，從而可以改善本發(fā)明的膜組合物的保水性。對上述多元醇沒有限制，可以是在本領(lǐng)域中作為保濕劑而常用的任何多元醇，可 列舉例如甘油、木糖醇、二甘油、二丙二醇、山梨糖醇、DL-吡咯烷酮羧酸鈉、丙二醇、丁二醇、 聚乙二醇、聚甘油、聚氧乙烯甲基糖苷、麥芽糖醇、甘露糖醇、聚乙烯醇等。優(yōu)選為甘油。上述膜組合物中的多元醇成分的比例為1 50質(zhì)量％，優(yōu)選為3 30質(zhì)量％，更 優(yōu)選為約5 15質(zhì)量％。由此獲得的膜組合物可以適用于修復凹凸表面，例如皮膚上的凹凸，例如，燒傷引 起的瘢痕瘤痕、植皮痕、手術(shù)痕、深的皺紋、深的傷痕、痤瘡痕、大毛孔、小皺紋等。因此，可以 通過在皮膚表面的凹凸部位施用本發(fā)明的膜組合物來修復凹凸表面、改善美觀。本發(fā)明的 膜組合物可以追隨皮膚的活動，且介由粒子彼此之間形成的間隙確保透氣性和水分的蒸發(fā) 性，因此可以保持健康的肌膚狀態(tài)。因此，本發(fā)明的膜組合物可以以用于修復特別是皮膚上 的凹凸表面的膜的形式提供，例如，也可以以一次性使用的形式提供。在本說明書中，“膜組合物”和“組裝體”共同以相同含義而被使用，是指無論其厚 度、大小等如何，交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒間彼此通過谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶進行交聯(lián)而成的集合體。在本發(fā)明的其它方式中，提供用于通過使交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒，優(yōu)選乳膠粒子彼此 進行交聯(lián)而在皮膚表面上形成膜的二劑式皮膚外用劑。該二劑式皮膚外用劑包含含有交聯(lián) 性蛋白質(zhì)微粒，優(yōu)選乳膠粒子的第1劑，和含有谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的第2劑。在第1劑中，交 聯(lián)性蛋白質(zhì)成分以約1 20質(zhì)量％，優(yōu)選為3 10質(zhì)量％，更優(yōu)選為3 5質(zhì)量％的比例 進行配合。此外，上述第1劑中的微粒還可以包含陰離子性聚合物成分和/或多元醇成分。 這些成分的優(yōu)選具體例和濃度如上所述。當施用時，在第2劑中配合谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶，使其 量相對于Ig交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分為約1 20U，優(yōu)選為2. 5 10U，更優(yōu)選為5 10U。上述第1劑和/或第2劑都可以配制成在皮膚上容易涂布的劑型，例如可以配制 成化妝水劑、乳液劑、乳膏劑、軟膏劑、硬膏劑等。為了以上述劑型配制上述第1劑，可以使交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒，例如乳膠粒子溶解 在溶劑中。作為用于第1劑的溶劑，可列舉例如鏈狀聚硅氧烷、環(huán)狀聚硅氧烷、改性聚硅氧 烷、角鯊烷、肉豆蔻酸異丙酯、辛酸鯨蠟基酯、十六烷酸異丙酯、三辛酸甘油酯、四(2-乙基己酸)季戊四醇酯、己二酸二異丁酯、癸二酸二(2-乙基己酯)、橄欖油、霍霍巴油、胚芽油 等。上述第2劑也可以通過使谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的結(jié)晶體溶解在溶劑中進行配制。作為用于 第2劑的溶劑，可以使用例如滅菌水、緩沖溶液等。在上述第1劑和/或第2劑的配制中，在不破壞本發(fā)明效果的范圍內(nèi)，可以任意地 配合本領(lǐng)域中常用的賦形劑、香料、油脂類、表面活性劑、防腐劑、螯合劑、水溶性高分子、增 粘劑、粉末成分、紫外線防御劑、保濕劑、藥效成分、抗氧化劑、PH調(diào)節(jié)劑、洗滌劑、干燥劑、乳 化劑等。上述二劑式皮膚外用劑優(yōu)選以包含上述第1劑和第2劑的套裝的形式被提供。該 套裝中，優(yōu)選包含寫明該第1劑和第2劑的用法的說明書。此外，在其它方式中，提供用于修復皮膚表面的凹凸的化妝方法。在該化妝方法 中，將含有交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒，優(yōu)選乳膠粒子的第1劑和含有谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的第2劑進 行混合，將該混合物施用在皮膚上的所需部位，例如皮膚，例如，面部上的凹凸、燒傷引起的 瘢痕瘤痕、植皮痕、手術(shù)痕、深的皺紋、深的傷痕、痤瘡痕、大毛孔、小皺紋等，或者將第1劑 和第2劑分別施用在上述所需部位并在施用部位上進行混合，然后在最佳條件下，例如室 溫 45°C，優(yōu)選為30 40°C，最優(yōu)選為體溫下使第1劑和第2劑的混合物進行反應(yīng)(干燥) 例如5分鐘 1小時，優(yōu)選為5 30分鐘，從而在皮膚表面上形成該交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼此 交聯(lián)而成的膜，由此可以修復皮膚表面的凹凸。通過這樣的化妝方法來修復皮膚表面的凹 凸不僅可以提高美觀，而且可以提供追隨皮膚的活動，且透氣性和水分的蒸發(fā)性優(yōu)異的膜。[實施例1]通過W/0乳化法配制明膠粒子的方法非交聯(lián)明膠粒子的配制將9ml的5%明膠(GSB，株式會社二 ？ )(牛皮·牛骨來源的明膠，膠質(zhì)強度 260 290g，粘度3. 0 4. OmPa)水溶液加入到21ml的十甲基環(huán)五硅氧烷中，以超聲波進 行分散從而獲得W/0型乳液。用滴管回收沉降的粒子，從而獲得非交聯(lián)明膠粒子。通過W/0乳化法使明膠粒子成膜向Iml的上述非交聯(lián)明膠粒子中添加3U的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(味◎素株式會社) (分子量3萬8千)并進行混合，然后在作為皮膚代替物的聚氨酯海綿上開孔，該孔為直徑 約2cm、厚度約3mm大小，從這里滴加該混合物，然后展開。此后，在相對濕度65%、40°C下 使其反應(yīng)1小時，從而獲得凝膠粒子膜。明膠微粒膜組合物的變形性如圖1所示，在將施用了本發(fā)明的交聯(lián)性蛋白質(zhì)的乳膠粒子膜的聚氨酯進行拉伸 的情況下和進行彎曲的情況下，該膜組合物均追隨這些活動。因此，證實本發(fā)明的微粒膜具 有高的伸縮性和柔軟性，即使對皮膚的變形也可以充分追隨。[實施例2]微粒組裝體A和塊狀凝膠A的配制(10質(zhì)量％明膠)向通過與實施例1同樣的W/0乳化法配制的10質(zhì)量％明膠的非交聯(lián)乳膠粒子中 添加相對于1克明膠為IOU的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶，使乳膠粒子內(nèi)部進行交聯(lián)，從而獲得分散在 IOmM氯化鈉水溶液中并達到膨潤平衡的交聯(lián)明膠粒子(微粒A)?；厥赵摻宦?lián)明膠粒子，再 添加谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶使粒子間進行交聯(lián)，從而獲得微粒組裝體(微粒組裝體A)。另一方面，
9通過通用方法配制10質(zhì)量％明膠的塊狀凝膠，將其浸漬在IOmM氯化鈉水溶液中并使其達 到膨潤平衡(塊狀凝膠A)。通過向膨潤溶劑中添加甘油來配制微粒組裝體B和塊狀凝膠8(10質(zhì)量％明膠+10 質(zhì)量％甘油)向通過與實施例1同樣的W/0乳化法配制的10質(zhì)量％明膠的非交聯(lián)乳膠粒子中 添加相對于1克明膠為IOU的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶，使乳膠粒子內(nèi)部進行交聯(lián)，然后將其分散在 含有10質(zhì)量％甘油(和光純藥工業(yè)社)的IOmM氯化鈉水溶液中并使其達到膨潤平衡，從而 獲得交聯(lián)明膠粒子(微粒B)?；厥赵摻宦?lián)明膠粒子，再添加谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶使粒子間進行 交聯(lián)，從而獲得微粒組裝體(微粒組裝體B)。另一方面，通過通用方法將含有10質(zhì)量％明 膠的塊狀凝膠浸漬在含有10質(zhì)量％甘油的IOmM氯化鈉水溶液中并使其達到膨潤平衡(塊 狀凝膠B)。通過向明膠溶液中添加聚谷氨酸(PGA)來配制微粒組裝體C和塊狀凝膠C (9. 7質(zhì) 量％明膠+0. 3質(zhì)量％聚谷氨酸)在與實施例1同樣的W/0乳化法中，通過向明膠溶液中進一步添加聚谷氨酸(分 子量約800，000)來配制由9. 7質(zhì)量％明膠和0. 3質(zhì)量％聚谷氨酸構(gòu)成的非交聯(lián)乳膠粒 子，然后添加相對于1克明膠為IOU的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶使乳膠粒子內(nèi)部進行交聯(lián)。將其分 散在IOmM氯化鈉水溶液中并使其達到膨潤平衡，從而獲得交聯(lián)明膠粒子(微粒C)?；厥赵?交聯(lián)明膠粒子，再添加谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶使粒子間進行交聯(lián)，從而獲得微粒組裝體(微粒組 裝體C)。另一方面，通過通用方法配制由質(zhì)量％明膠9. 7和0. 3質(zhì)量％ PGA構(gòu)成的塊狀凝 膠，將其浸漬在IOmM氯化鈉水溶液中并使其達到膨潤平衡(塊狀凝膠C)。測定上述微粒組裝體(A和C)和塊狀凝膠(A和C)相對于pH的膨潤度，以縱軸為 膨潤度、以橫軸為PH繪制曲線并進行比較。證實微粒組裝體和塊狀凝膠在含有聚谷氨酸的 情況下膨潤曲線均向低PH側(cè)遷移，微粒組裝體與塊狀凝膠顯示同樣的膨潤行為。此外，如 果測定微粒(A和C)相對于pH的Z電位，則在含有聚谷氨酸的情況下，該曲線向低pH側(cè)遷 移，因此證實組裝化后也可以保持微粒的性質(zhì)。此外，對凝膠的膨潤收縮的鹽濃度響應(yīng)性進 行了評價，結(jié)果證實微粒和微粒組裝體顯示出相應(yīng)的響應(yīng)性。[實施例3]染料的吸附·釋放行為 在pH6下將膨潤平衡狀態(tài)的凝膠(18 X 18 X 2mm)以規(guī)定濃度浸漬在含有56 μ M陽 離子性亞甲基藍二 三水合物(MB)(純正化學工業(yè)社)的溶液(離子強度為0. 01，每次測 定為15mL)中，將該時刻作為0時間。一邊經(jīng)時緩慢攪拌攪拌器一邊測定吸光度(620nm，東 乂 一(株)制MPR A4i酶標儀(7 4夕π > —卜〗J 一夕··一))，從總添加濃度中減去外液 濃度來計算出凝膠內(nèi)部內(nèi)包的MB量。然后，將吸附有MB的凝膠浸漬在不包含MB的ρΗ2的 溶液中，同樣地進行吸光度測定，計算凝膠內(nèi)部內(nèi)包的MB量。 由圖2可知，微粒組裝體A與塊狀凝膠A相比，顯示出迅速的響應(yīng)性。另一方面， 對明膠引入了 PGA的凝膠(微粒組裝體C、塊狀凝膠C)與僅含明膠的凝膠(微粒組裝體Α、 塊狀凝膠Α)相比，MB的吸附量增加。此外，對明膠引入了 PGA的凝膠(微粒組裝體C、塊狀 凝膠C)與僅含明膠的凝膠(微粒組裝體Α、塊狀凝膠Α)在氨基含量方面幾乎沒有差異，因 此在使PH值從6變?yōu)?的體系中，釋放行為沒有大的差異，但是在與吸附條件相同的ρΗ6下釋放的體系中，抑制了由于濃度梯度而釋放MB。雖然考慮到對于通常的明膠凝膠而言，即 使在與MB之間有靜電引力作用的條件下，濃度梯度也是主要的染料釋放的驅(qū)動力，但是認 為這是由于通過在凝膠中引入PGA而使由靜電引力吸附的MB保留在凝膠內(nèi)部的作用增加， 因此可抑制由于濃度梯度而釋放染料的緣故。[實施例4]凝膠的力學特性使用FUDOH流變儀NRM_2010J-CW((株)> 才〒？々制)對實施例2中配制的各 凝膠測定應(yīng)力_變形。測定條件是，柱塞直徑3. 015mm(塊狀凝膠測定)、10. 05mm(微凝膠 組裝體測定)，樣品尺寸直徑ISmmX高度IOmm的圓柱形，制成膨潤狀態(tài)的凝膠，使柱塞進 入樣品中以測定斷裂強度。變形作為(柱塞進入長度/樣品的起始厚度)XlOO (%)來計 算。結(jié)果是，對明膠引入了 PGA的凝膠(微粒組裝體C、塊狀凝膠C)與其它凝膠相比強度減 少、柔軟性增加(圖3)。認為這是由于具有高離子性的PGA分子鏈與明膠鏈交織纏繞，從而 降低明膠鏈彼此的分子間相互作用的緣故。認為這是由于具有高離子性的PGA分子鏈的靜 電排斥力阻礙酶反應(yīng)，粒子間的交聯(lián)也比微凝膠組裝體A更稀少的緣故，而且，柔軟性的增 加是由于微凝膠的膨潤度高的緣故。[實施例5]凝膠的彎曲·拉伸追隨性在聚氨酯海綿上與實施例2所配制的各微粒組裝體同樣地配制微粒組裝體，通過 使聚氨酯海綿的形狀變形來研究附著在海綿上的各微粒組裝體在彎曲·拉伸中的追隨性。 結(jié)果是，明膠中引入了 PGA的微粒組裝體(微粒組裝體C)與僅包含明膠的微粒組裝體(微 粒組裝體A)相比，顯示優(yōu)異的彎曲·拉伸追隨性。[實施例6]凝膠的水分蒸發(fā)性通過經(jīng)時測定10 μ 1對照樣品(氯化鈉水溶液和氯化鈉+甘油水溶液)和實施例 2中配制的各微粒的1. 2質(zhì)量％分散液的重量(在溫度為22°C、相對濕度為45%的恒溫恒 濕室中)，來評價各溶液的水分蒸發(fā)性。結(jié)果是，分散在含有10質(zhì)量％甘油的IOmM氯化鈉 水溶液中并達到膨潤平衡的微粒(微粒B)與其它微粒相比，顯著抑制了水分蒸發(fā)(圖4)。[實施例7]凝膠表面形狀隨著干燥的變化通過環(huán)境控制型電子顯微鏡(ESEM)!ΕΙ Quanta 200((株)二二 X m” 制，撮影倍率XI，000)來評價實施例2中配制的各凝膠的干燥前后的表面形狀。可知， 僅含明膠和含有PGA的微粒組裝體在干燥后球形形狀完全破裂，粒子間空隙消失，但是含 有甘油的組裝體在干燥后也保持清楚的粒子形狀(圖5)。此外，通過使用超深形狀測定顯 微鏡((株)KEYENCE制，超深形狀測定顯微鏡VK-8500)測定線粗糙度，可以用數(shù)值來評價 凝膠粒子的膨潤率。所謂線粗糙度，是指以微米為單位顯示樣品表面的高度方向的凹凸距 離中央基準線的平均寬度的值。作為測定方法，將所制造的組裝體直接在膨潤狀態(tài)下夾在 載玻片上進行測定，或者將其在室內(nèi)干燥一夜后進行測定。線粗糙度是指算術(shù)平均粗糙度 (Ra)，根據(jù)JIS B 0601-1994的定義計算出。測定值作為10點測定的平均值表示?？芍?在將干燥后的各微粒組裝體的線粗糙度進行比較的情況下，含有甘油的微粒組裝體的數(shù)值高，因此可通過在膨潤溶劑中添加甘油來改善凝膠的保濕性，抑制因干燥導致的微粒組裝 體的表面形狀的變化。[實施例8]隨著干燥而收縮的評價將18 X 18 X Imm的實施例2中配制的各凝膠放置在醫(yī)用包裝紙上，使其在相對濕 度為43%下干燥一夜。通過被凝膠的干燥所牽拉的醫(yī)用包裝紙的變形來評價凝膠隨著干燥 產(chǎn)生的收縮。結(jié)果是，微粒組裝體與塊狀凝膠相比，隨著干燥產(chǎn)生的收縮顯著減少(圖6)。 認為這是由于塊狀凝膠的構(gòu)成聚合物交織纏繞成一體，與此相反，微粒組裝體是微米級粒 子的集合體，因此1個微粒的干燥收縮對周圍微粒的影響較小，作為全體的變形較小的緣 故。
權(quán)利要求
一種膜組合物，是包含交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的膜組合物，其特征在于，該交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒通過谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶彼此交聯(lián)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒是乳膠粒子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)的乳膠粒子是油 包水型乳膠粒子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3的任一項所述的膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)是明 膠、膠原蛋白或酪蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4的任一項所述的膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒 的粒徑為1 30 μ m。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5的任一項所述的膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的交聯(lián) 性蛋白質(zhì)成分的比例為1 20質(zhì)量％。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)成 分的比例為5 15質(zhì)量％。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)成 分的比例為8 12質(zhì)量％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8的任一項所述的膜組合物，其特征在于，用于使所述交聯(lián)性蛋白 質(zhì)微粒彼此交聯(lián)的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的量相對于Ig交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分為1 20U。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的膜組合物，其特征在于，用于使所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼此 交聯(lián)的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的量相對于Ig交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分為1. 5 10U。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的膜組合物，其特征在于，用于使所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼 此交聯(lián)的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的量相對于Ig交聯(lián)性蛋白質(zhì)成分為5 10U。
12.根據(jù)權(quán)利要求1 11的任一項所述的膜組合物，是用于修復凹凸表面的。
13.根據(jù)權(quán)利要求1 12的任一項所述的膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微 粒還包含陰離子性聚合物成分。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的膜組合物，其特征在于，所述陰離子性聚合物是聚谷氨酸。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的陰離子性 聚合物成分的比例為0. 01 0. 5質(zhì)量％。
16.根據(jù)權(quán)利要求1 15的任一項所述的膜組合物，其特征在于，所述交聯(lián)性蛋白質(zhì)微 粒還包含多元醇成分。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的膜組合物，其特征在于，所述多元醇成分是甘油。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的膜組合物，其特征在于，所述膜組合物中的多元醇成 分的比例為1 50質(zhì)量％。
19.一種二劑式皮膚外用劑，是通過使交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒彼此交聯(lián)而在皮膚表面上形 成膜的二劑式皮膚外用劑，其特征在于，包含含有交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的第1劑、和含有谷氨 酰胺轉(zhuǎn)胺酶的第2劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述第1劑中含有的交聯(lián) 性蛋白質(zhì)微粒是乳膠粒子。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述第1劑中含有的交聯(lián) 性蛋白質(zhì)的乳膠粒子是油包水型乳膠粒子。
22.根據(jù)權(quán)利要求19 21的任一項所述的二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述第1 劑中的微粒還包含陰離子性聚合物成分。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述陰離子性聚合物是聚谷氨酸。
24.根據(jù)權(quán)利要求19 23的任一項所述的二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述第1 劑中的微粒還包含多元醇成分。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的二劑式皮膚外用劑，其特征在于，所述多元醇成分是甘油。
26.一種化妝方法，是用于修復皮膚表面的凹凸的化妝方法，其特征在于，包括下述步 驟在皮膚表面上的所需部位施用含有交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒的第1劑和含有谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶 的第2劑的混合物，或通過在皮膚表面上的所需部位分別施用該第1劑和第2劑從而將它 們混合，再使在該部位上的第1劑和第2劑的混合物干燥，由此在皮膚表面上形成該交聯(lián)性 蛋白質(zhì)微粒彼此交聯(lián)而成的膜。
27.根據(jù)權(quán)利要求16所述的化妝方法，其特征在于，所述第1劑中含有的交聯(lián)性蛋白質(zhì) 微粒是乳膠粒子。
28.根據(jù)權(quán)利要求17所述的化妝方法，其特征在于，所述第1劑中含有的交聯(lián)性蛋白質(zhì) 的乳膠粒子是油包水型乳膠粒子。
29.根據(jù)權(quán)利要求26 28的任一項所述的化妝方法，其特征在于，所述第1劑中的微 粒還包含陰離子性聚合物成分。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的化妝方法，其特征在于，所述陰離子性聚合物是聚谷氨酸。
31.根據(jù)權(quán)利要求26 30的任一項所述的化妝方法，其特征在于，所述第1劑中的微 粒還包含多元醇成分。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的化妝方法，其特征在于，所述多元醇成分是甘油。
全文摘要
本發(fā)明提供用于修復皮膚表面的凹凸的有效膜組合物，膜組合物中的交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒通過谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶被交聯(lián)而具有伸縮性和柔軟性，進而通過使該交聯(lián)性蛋白質(zhì)微粒成膜而具有優(yōu)異的透氣性和水分蒸發(fā)性。
文檔編號A61K8/66GK101917962SQ200980101600
公開日2010年12月15日 申請日期2009年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月15日
發(fā)明者八木克彥, 岡隆史, 川口春馬, 森雄一郎, 須藤亞希子 申請人:株式會社資生堂;學校法人慶應(yīng)義塾