專利名稱：用遺傳編碼的非天然氨基酸打破免疫耐受的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域。更具體說(shuō)，本發(fā)明提供通過(guò)給予摻入了一個(gè)或多個(gè)非天 然氨基酸的對(duì)應(yīng)于靶標(biāo)部分(即所述自身部分或外來(lái)部分)的免疫原，在對(duì)象產(chǎn)生對(duì)抗自 身抗原，如TNFa或無(wú)數(shù)其它自身抗原的免疫應(yīng)答，或者產(chǎn)生和提高對(duì)象對(duì)抗外來(lái)(非自 身)抗原的免疫應(yīng)答的組合物和方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的一大挑戰(zhàn)是治療既不引起對(duì)象產(chǎn)生抗體(例如，由于對(duì)象對(duì)自身抗 原的免疫耐受)也不引起強(qiáng)大/強(qiáng)烈抗體應(yīng)答(例如，某些細(xì)菌/病毒感染)的醫(yī)學(xué)病 癥。有大量醫(yī)學(xué)病癥屬于這種類型。例如，產(chǎn)生自或涉及對(duì)象自身蛋白質(zhì)的病癥可包含如 TNFa (參與/涉及克羅恩氏病，內(nèi)毒素休克，腦瘧疾等)，IL 10(參與SLE)等部分。而且， 對(duì)象對(duì)于多種病毒和細(xì)菌感染難以產(chǎn)生強(qiáng)大的抗體，如病毒和細(xì)菌感染，如HIV、CMV、結(jié)核 病和葡萄球菌?？商岢龆喾N不同方案以解決此類免疫應(yīng)答問(wèn)題。例如，此類方案考慮改良的佐 劑/載體，在抗原中引入強(qiáng)T細(xì)胞表位，偶聯(lián)疫苗和組合疫苗。參見(jiàn)例如Baldridge等， 《疫苗佐劑免疫學(xué)和臨床原則》(Vaccine Adjuvants immunological and Clinical Principles.) C. J. Hackett, Harn, D. A. Jr.編·(修馬納出版公司，新澤西州托托瓦)， 235-255 ；Makela 等，Expert Rev Vaccines, 1 (3) :399_410 (2002) ；Dalum 等，Nat Biotechnol. 17 666(1999)以及 Restifo, Curr Opin Immunol 8 658(1996).。其它方案 嘗試用非特異性標(biāo)記的抗原(即，重氮衍生化的抗原)進(jìn)行免疫。參見(jiàn)Weigle，T Exp Med 121 289(1965)。然而，持續(xù)需要更好更廣泛應(yīng)用的方法和組合物以產(chǎn)生或增強(qiáng)對(duì)象對(duì)抗特異性自 身蛋白質(zhì)如TNFa的免疫學(xué)應(yīng)答，和/或?qū)箒?lái)自多種病原體如細(xì)菌、病毒、真菌和/或朊 蛋白病原物的特異性蛋白的免疫應(yīng)答。本發(fā)明提供了這些和其它益處，一旦檢驗(yàn)就會(huì)清楚。發(fā)明概述在產(chǎn)生多種疾病狀態(tài)的疫苗中具有顯著的選擇性誘導(dǎo)對(duì)抗自身蛋白質(zhì)的能力，或增強(qiáng)外源抗原特定表位的免疫原性的能力，所述疾病狀態(tài)包括癌癥、蛋白質(zhì)折疊疾病和感 染性疾病(如細(xì)菌或病毒感染)。本發(fā)明通過(guò)在蛋白質(zhì)中摻入非天然氨基酸產(chǎn)生用于疫苗 接種的非天然免疫原，或者產(chǎn)生用于被動(dòng)免疫的抗體。在本發(fā)明中，加入非天然氨基酸的免 疫原對(duì)應(yīng)接種/免疫對(duì)象的靶標(biāo)部分(如疾病相關(guān)部分)，或者對(duì)應(yīng)對(duì)象體內(nèi)的靶標(biāo)部分 (如疾病相關(guān)部分)。在將具有非天然氨基酸的免疫原給予對(duì)象的實(shí)施方式中，非天然氨基 酸的存在引起對(duì)抗免疫原的免疫應(yīng)答，所述免疫應(yīng)答交叉反應(yīng)對(duì)抗靶標(biāo)(如疾病相關(guān))部 分。在第一方面，本發(fā)明提供了在對(duì)象中產(chǎn)生或增強(qiáng)對(duì)抗靶標(biāo)部分如多肽、糖或兩者 組合的免疫應(yīng)答的方法，如B-細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答和/或T-細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答，所述靶標(biāo)部分在 對(duì)象內(nèi)或能夠在對(duì)象內(nèi)。所述方法包括提供包含一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸的非天然免疫 原，并將非天然免疫原給予對(duì)象。對(duì)象(如人、猴、小鼠、大鼠、豬、奶牛、雞、籠中鳥(niǎo)、鳥(niǎo)舍鳥(niǎo)、 爬行動(dòng)物和/或兩棲動(dòng)物)產(chǎn)生對(duì)抗非天然免疫原的一種或多種抗體，其中所述抗體針對(duì) 靶標(biāo)部分交叉反應(yīng)(因此產(chǎn)生或增強(qiáng)對(duì)抗靶標(biāo)的免疫原性應(yīng)答)。給予對(duì)象以產(chǎn)生或增強(qiáng)免疫應(yīng)答的非天然免疫原對(duì)應(yīng)對(duì)象體內(nèi)至少一個(gè)靶標(biāo)部 分(或?qū)?yīng)能夠在對(duì)象體內(nèi)的至少一個(gè)部分)。在一些實(shí)施方式中，靶標(biāo)部分可包含第一個(gè) 氨基酸序列，非天然免疫原可包含與靶標(biāo)序列相同的第二個(gè)氨基酸序列，除了靶標(biāo)部分序 列的一個(gè)或多個(gè)天然氨基酸被替換為免疫原序列中的一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸?；蛘呋虼?外，靶標(biāo)部分可包含第一氨基酸序列，非天然免疫原可包含與靶標(biāo)部分序列相同的第二氨 基酸序列，除了免疫原序列還包含一個(gè)或多個(gè)另外的非天然氨基酸序列。在各種實(shí)施方式 中，非天然免疫原可包含與其起源的靶標(biāo)部分基本相似的結(jié)構(gòu)，和/或可包含與其起源的 靶標(biāo)基本相似的三級(jí)和/或四級(jí)結(jié)構(gòu)。非天然免疫原中出現(xiàn)的一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸可任意被抗體接近。本方面方法 中產(chǎn)生的一種或多種交叉反應(yīng)抗體可任意對(duì)靶標(biāo)部分上的表位具有特異性，所述表位包含 與非天然免疫原上的對(duì)應(yīng)表位的相同序列。然而，交叉反應(yīng)抗體可任意對(duì)靶標(biāo)部分上的表 位具有特異性，與非天然免疫原的對(duì)應(yīng)表位相比，所述表位包含不同的序列，如任意包含一 個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸的不同序列。在這方面，可通過(guò)多種途徑產(chǎn)生起源于靶標(biāo)部分的非天然免疫原。在優(yōu)選實(shí)施方 式中，使用正交翻譯系統(tǒng)產(chǎn)生非天然免疫原。然而，非天然免疫原可任意在體內(nèi)翻譯系統(tǒng)中 產(chǎn)生(如通過(guò)選擇性壓力摻入)；在體外翻譯系統(tǒng)中產(chǎn)生(如使用非天然氨基酸化學(xué)?；?KWtRNAs)；通過(guò)除翻譯后修飾之外的工藝產(chǎn)生；或通過(guò)對(duì)免疫原中出現(xiàn)的20種天然產(chǎn)生 的經(jīng)典氨基酸之一進(jìn)行化學(xué)修飾之外的工藝產(chǎn)生。摻入非天然免疫原的非天然氨基酸可任意包含除20種天然產(chǎn)生的經(jīng)典氨基酸之 外的任何非天然氨基酸。可摻入的非天然氨基酸還可包括除20種經(jīng)典氨基酸之外的任一 氨基酸，其中所述非天然氨基酸包含如下結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
一種在對(duì)象中產(chǎn)生或增強(qiáng)針對(duì)靶標(biāo)部分的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括提供非天然免疫原，其中非天然免疫原包含一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸；以及將非天然免疫原給予對(duì)象，其中所述對(duì)象產(chǎn)生針對(duì)非天然免疫原的一種或多種抗體，其中所述抗體針對(duì)靶標(biāo)部分產(chǎn)生交叉反應(yīng)；從而產(chǎn)生或增強(qiáng)針對(duì)靶標(biāo)部分的免疫應(yīng)答。
2.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述免疫應(yīng)答包括B-細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答和/或 T-細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答。
3.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述提供非天然免疫原包括在正交翻譯系統(tǒng) 中產(chǎn)生非天然免疫原。
4.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述提供非天然免疫原包括在體外翻譯系統(tǒng) 中產(chǎn)生非天然免疫原。
5.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述非天然免疫原包含20種天然產(chǎn)生的經(jīng)典 氨基酸之一以外的非天然氨基酸。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原通過(guò)除了對(duì)免疫原中20 種天然產(chǎn)生的經(jīng)典氨基酸之一進(jìn)行化學(xué)修飾的工藝產(chǎn)生。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原通過(guò)除了對(duì)免疫原中20 種天然產(chǎn)生的經(jīng)典氨基酸之一進(jìn)行翻譯后修飾的工藝產(chǎn)生。
8.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述對(duì)象選自人、猴、小鼠、大鼠、豬、奶牛、 雞、籠中鳥(niǎo)、鳥(niǎo)舍鳥(niǎo)、爬行動(dòng)物和兩棲動(dòng)物。
9.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含多肽。
10.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含多肽和/或碳水化合物。
11.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是對(duì)象自身部分。
12.如權(quán)利要求11所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是疾病相關(guān)部分。
13.如權(quán)利要求12所述方法，其特征在于，所述自身部分選自以下一種或多種自身免 疫病相關(guān)自身抗原，腫瘤相關(guān)抗原，阿耳茨海默病相關(guān)抗原，淀粉樣蛋白β 40，淀粉樣蛋白 β 42，乳腺癌相關(guān)抗原，卵巢癌相關(guān)抗原，前列腺癌相關(guān)抗原，MAGE, BAGE, RAGE, NY-ES0，譜 系特異性腫瘤相關(guān)抗原，黑色素細(xì)胞-黑色素瘤譜系抗原，MART-1/Melan-A，酪氨酸酶或酪 氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)，酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)2，PSMA, PSA，突變的ras，重排的bcr/abl，Her2/ neu，突變或野生型p53，細(xì)胞色素P450 IBl，N-乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶-V的異常表達(dá)的內(nèi)含 子序列，CA19-9, p53, OCAA, H0XB7, Cal25, PSA, PSMA, STEAP, PCTA-I, Cal5_3，EGF, EGFR, HER-I，CXCR4, G 蛋白偶聯(lián)受體(GCPR)或 CA27-29。
14.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分并非對(duì)象的自身部分。
15.如權(quán)利要求14所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分來(lái)自于細(xì)菌、病毒、真菌、支原 體、原生動(dòng)物、蠕蟲(chóng)、或朊病毒。
16.如權(quán)利要求15所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自于下列一種或多種細(xì) 菌抗原，病毒抗原，真菌抗原，支原體抗原，原生動(dòng)物抗原，蠕蟲(chóng)抗原，朊病毒抗原，HIV抗原， HIVgpl20, HIV gp41, HIV gag, HIV pol, HIV env, HIV tat, HIV nef, HIV rev，杯狀病毒衣 殼抗原，乙型肝炎核心抗原，乙型肝炎表面抗原，丁型肝炎試劑，單純皰疹病毒糖蛋白，水痘 帶狀皰疹病毒糖蛋白，流感病毒血凝素，流感病毒神經(jīng)氨酸酶，流感病毒核蛋白，HPV衣殼蛋白，副流感病毒血凝素/神經(jīng)氨酸酶，脊髓灰質(zhì)炎病毒衣殼多肽，Hep A抗原，牛痘病毒多 肽，狂犬病病毒糖蛋白G，B. burgdorferi的OspA，B型流感嗜血桿菌外膜蛋白，結(jié)核分枝桿 菌脂阿拉伯甘露糖，結(jié)核分枝桿菌mAPG，釀膿鏈球菌M蛋白，肺炎鏈球菌莢膜多糖，鼠疫耶 爾森菌F1，鼠疫耶爾森菌V抗原，惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)孢子體(PfCSP)，惡性瘧原蟲(chóng)孢子體表面蛋 白2 (PfSSP2)，惡性瘧原蟲(chóng)肝臟分級(jí)抗原1羧基末端(PfLSAl c末端)，惡性瘧原蟲(chóng)輸出蛋 白質(zhì) I(PfExp-I)，Pfs48/45，Pfs 28, Pfs 25 或 Pfs 230。
17.如權(quán)利要求15所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自下列一種或多種細(xì)菌， 病毒，真菌，支原體，原生動(dòng)物，蠕蟲(chóng)，朊病毒，放線菌，芽孢桿菌，類桿菌，波氏桿菌，巴爾通 體，包柔氏螺旋體菌，布魯氏菌，彎曲桿菌，二氧化碳噬纖維菌，衣原體，梭菌，棒狀桿菌，考 克斯氏體，潛蚤，腸球菌，埃立克體，大腸桿菌，弗朗西斯氏菌，梭桿菌，血巴爾通氏體，嗜血 桿菌，纏繞桿菌，克雷白氏桿菌，L型細(xì)菌，鉤端螺旋體，李斯特菌，分枝桿菌，支原體，奈瑟氏 菌，新立克次氏體，諾卡氏菌，巴氏桿菌，消化球菌，消化鏈球菌，肺炎球菌，變形桿菌，假單 胞菌，立克次氏體，羅克利馬體，沙門氏菌，痢疾桿菌，金黃色葡萄球菌，鏈球菌，螺旋體，耶 爾森氏菌，腺病毒，甲病毒，杯狀病毒，冠狀病毒，巨細(xì)胞病毒，犬瘟熱病毒，埃博拉病毒，腸 病毒，EB病毒，黃病毒，丙型肝炎病毒，嗜肝DNA病毒，乙型肝炎病毒，δ肝炎病毒，戊型或 己型肝炎病毒，GBV-C,皰疹病毒，單純皰疹病毒，水痘帶狀皰疹病毒，免疫缺陷病毒，艾滋病 毒，傳染性腹膜炎病毒，流感病毒，A型流感病毒，白血病病毒，馬爾堡病毒，正粘病毒，乳頭 瘤病毒，HPV，副流感病毒，副粘病毒，RSV，細(xì)小病毒，瘟病毒，小核糖核酸病毒，脊髓灰質(zhì)炎 病毒，痘病毒，牛痘病毒，狂犬病病毒，呼腸病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒，輪狀病毒，犁頭霉，支頂孢，鏈 格孢，曲霉，一蛙糞霉菌，雙極霉，子囊酵母，念珠菌，假絲酵母，一耳霉，隱球菌，葉枯病菌， 表皮癬菌，外瓶霉，地絲菌，組織胞漿菌，馬杜拉分支菌，馬拉色菌，小孢子菌，小叢梗孢，被 孢霉，毛霉，擬青霉，青霉，單胞瓶霉，瓶霉，綠藻，足腫菌，假小托菌，腐霉，鼻孢子蟲(chóng)，根霉， 線狀擔(dān)子菌，孢子絲菌，匍柄霉，毛癬菌，毛孢子菌，木絲霉，巴貝斯蟲(chóng)，結(jié)腸小袋纖毛蟲(chóng)，孢 子蟲(chóng)，隱孢子蟲(chóng)，艾美蟲(chóng)，腦胞內(nèi)原蟲(chóng)，內(nèi)阿米巴，賈第蟲(chóng)，哈蒙德蟲(chóng)，肝簇蟲(chóng)等孢子球蟲(chóng)，利 什曼蟲(chóng)，微孢子蟲(chóng)，新孢子蟲(chóng)，微孢子蟲(chóng)，五鞭毛蟲(chóng)，瘧原蟲(chóng)，惡性瘧原蟲(chóng)，肺囊蟲(chóng)，肉孢子蟲(chóng)， 血吸蟲(chóng)，泰來(lái)蟲(chóng)，弓形體，錐蟲(chóng)，棘唇蟲(chóng)，貓圓線蟲(chóng)，鉤蟲(chóng)，管圓線蟲(chóng)，蛔蟲(chóng)，布魯格氏絲蟲(chóng)，仰 口線蟲(chóng)，毛細(xì)線蟲(chóng)，夏氏線蟲(chóng)，古柏線蟲(chóng)，環(huán)體線蟲(chóng)，網(wǎng)尾線蟲(chóng)，膨結(jié)蟲(chóng)，棘唇線蟲(chóng)，絳蟲(chóng)，復(fù)孔 絳蟲(chóng)，惡絲蟲(chóng)，龍線蟲(chóng)，蟯蟲(chóng)，類絲蟲(chóng)，血矛線蟲(chóng)，兔唇蛔蟲(chóng)，洛阿多肽，曼森線蟲(chóng)，繆勒線蟲(chóng)， 侏形吸蟲(chóng)，鉤蟲(chóng)，細(xì)頸線蟲(chóng)，結(jié)節(jié)線蟲(chóng)，盤尾蟲(chóng)，后睪吸蟲(chóng)，胃線蟲(chóng)，副絲蟲(chóng)，肺吸蟲(chóng)，副蛔蟲(chóng)， 泡翼線蟲(chóng)，原圓蟲(chóng)，腹腔絲蟲(chóng)，旋尾線蟲(chóng)，宮絳蟲(chóng)，冠絲蟲(chóng)，類圓線蟲(chóng)，圓線蟲(chóng)，吸吮線蟲(chóng)，弓蛔 線蟲(chóng)，弓首蛔蟲(chóng)，旋毛蟲(chóng)，虹膜鉤蟲(chóng)，鞭蟲(chóng)屬，鉤蟲(chóng)，或吳策線蟲(chóng)。
18.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含第一氨基酸序列，所述非 天然免疫原包含第二氨基酸序列，其中所述第二序列與第一序列相同，除了第一序列中的 一個(gè)或多個(gè)天然氨基酸在第二序列中被替換為一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸。
19.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含第一氨基酸序列，并且所 述非天然免疫原包含第二氨基酸序列，其中所述第二氨基酸序列與第一氨基酸序列相同， 除了第二氨基酸序列還包含一個(gè)或多個(gè)另外的非天然氨基酸序列。
20.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述一種或多種交叉反應(yīng)抗體對(duì)于靶標(biāo)部分 的表位具有特異性，其中所述表位與對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位相比，包含相同的序列。
21.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述一種或多種交叉反應(yīng)抗體對(duì)于靶標(biāo)部分 的表位具有特異性，其中所述表位與對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位相比，包含不同的序列。
22.如權(quán)利要求21所述方法，其特征在于，所述對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位上的序列包 含一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸。
23.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸可被抗體接近。
24.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述非天然免疫原包含與靶標(biāo)部分基本相似 的結(jié)構(gòu)。
25.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述非天然免疫原包含與靶標(biāo)部分基本相似 的三級(jí)和/或四級(jí)結(jié)構(gòu)。
26.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述非天然氨基酸是除20種經(jīng)典氨基酸以外 的氨基酸，并且所述非天然氨基酸包含如下結(jié)構(gòu) 其中R是除20種經(jīng)典天然氨基酸中任一種所用側(cè)鏈之外的任何取代基；其中R1是20 種經(jīng)典的天然氨基酸中的一種所用的取代基；其中R2是任何取代基，使R2-R1 —起組成不 同于20種經(jīng)典天然氨基酸中任一種的側(cè)鏈；其中Z是0H，NH2，SH，NH-R'或S-R'；其中R' 是除H之外的任何取代基；并且其中X和Y各自是S或0。
27.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述非天然氨基酸選自對(duì)-硝基苯丙氨酸; 鄰-硝基苯丙氨酸；間-硝基苯丙氨酸；對(duì)-硼羰基Phe ；鄰-硼羰基Phe ；間-硼羰基Phe ； 對(duì)_氨基Phe ；鄰-氨基Phe ；間-氨基Phe ；對(duì)-?；鵓he ；鄰-?；鵓he ；間-?；鵓he ； 對(duì)-OMe Phe ；鄰-OMe Phe ；間-OMePhe ；對(duì)-磺基 Phe ；鄰-磺基 Phe ；間-磺基 Phe ； 5-硝 基His ；3-硝基Tyr ；2-硝基Tyr ；硝基取代的Leu ；硝基取代的His ；硝基取代的Ile ；硝基取代的Trp ；2-硝基Trp ；4-硝基Trp ；5-硝基Trp ；6-硝基Trp ；7-硝基Trp ；3-氨基酪氨 酸，2-氨基酪氨酸，0-磺基酪氨酸，2-硫氧基苯丙氨酸，3-硫氧基氧基苯丙氨酸或?qū)?羧基 苯丙氨酸，鄰_羧基苯丙氨酸和間_羧基苯丙氨酸。
28.如權(quán)利要求12所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是TNFa。
29.如權(quán)利要求28所述方法，其特征在于，所述對(duì)象是小鼠，所述靶標(biāo)部分是mTNFα， 并且所述免疫原是非天然mTNF α。
30.如權(quán)利要求29所述方法，其特征在于，所述非天然mTNFα包含pN02Phe86-mTNF α。
31.如權(quán)利要求29所述方法，其特征在于，所述非天然mTNFα選自=PNO2Phe11-HiTNFa、 PNO2Phe19ITNFa、pN02Phe21_mTNF a、pN02Phe42_mTNF a、pN02Phe49_mTNF a、 pN02Phe104-mTNF α 以及 pN02Phe113_mTNF a。
32.如權(quán)利要求28所述方法，其特征在于，所述對(duì)象是人，所述靶標(biāo)部分是hTNFa，并 且免疫原是hTNF a。
33.如權(quán)利要求28所述方法，其特征在于，所述非天然hTNFα選自=PNO2Phe1LhTNFa、 pN02Phe19-hTNF a、pN02Phe21_hTNF a、pN02Phe42_hTNF a、pN02Phe49_hTNF a、 pN02Phe87-hTNF a、pN02Phe105-hTNF α 以及 pN02Phe114_hTNF a。
34.一種預(yù)防性或治療性處理對(duì)象疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括給予對(duì)象非天然免疫原，所述免疫原包含一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸，并且非天然免疫 原刺激對(duì)象中抗體的產(chǎn)生，其中所述抗體與對(duì)象中的一種或多種靶標(biāo)部分交叉反應(yīng)，或者 針對(duì)對(duì)象體內(nèi)與疾病狀態(tài)相關(guān)的一種或多種靶標(biāo)部分。
35.一種預(yù)防性或治療性處理對(duì)象中疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括產(chǎn)生針對(duì)一種或多種靶標(biāo)部分的抗體，此類產(chǎn)生包括制造針對(duì)非天然免疫原的抗體， 所述非天然免疫原包含一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸，并且所述抗體針對(duì)靶標(biāo)部分交叉反應(yīng)； 并且，將抗體給予對(duì)象。
36.如權(quán)利要求34或35所述方法，其特征在于，所述預(yù)防性或治療性處理包括在對(duì)象 中引起B(yǎng)-細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答和/或T-細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答。
37.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原在正交翻譯系統(tǒng)中產(chǎn)生。
38.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原在體外翻譯系統(tǒng)中產(chǎn)生。
39.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原不包含經(jīng)翻譯后 修飾或化學(xué)修飾的氨基酸。
40.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原包含20種天然產(chǎn) 生的經(jīng)典氨基酸之一以外的非天然氨基酸。
41.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原通過(guò)除了對(duì)免疫 原中20種天然產(chǎn)生的經(jīng)典氨基酸之一進(jìn)行化學(xué)修飾之外的工藝產(chǎn)生。
42.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原通過(guò)除了對(duì)免疫 原中20種天然產(chǎn)生的經(jīng)典氨基酸之一進(jìn)行翻譯后修飾之外的工藝產(chǎn)生。
43.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述疾病狀態(tài)是自身免疫病、癌癥、細(xì)菌感染、病毒感染、真菌感染、支原體感染、朊病毒感染、原生動(dòng)物感染或放線菌感染。
44.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象選自人、猴、小鼠、大鼠、 豬、奶牛、雞、籠中鳥(niǎo)、鳥(niǎo)舍鳥(niǎo)、爬行動(dòng)物和兩棲動(dòng)物。
45.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含多肽。
46.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含多肽和/或碳水 化合物。
47.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是對(duì)象自身部分。
48.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是疾病相關(guān)部分。
49.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自于下列一種或多種 自身免疫病相關(guān)自身抗原、腫瘤相關(guān)抗原、阿耳茨海默病相關(guān)抗原、淀粉樣蛋白β 40、淀 粉樣蛋白β 42、乳腺癌相關(guān)抗原、卵巢癌相關(guān)抗原、前列腺癌相關(guān)抗原、MAGE、BAGE、RAGE、 NY-ES0、譜系特異性腫瘤相關(guān)抗原、黑色素細(xì)胞-黑色素瘤譜系抗原、MART-1/Melan-A、酪 氨酸酶或酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)、酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)2、PSMA、PSA、突變的ras、重排的bcr/ abl、Her2/neu、突變或野生型p53、細(xì)胞色素P4501B1、N_乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶-V的異常表 達(dá)的內(nèi)含子序列、CA19-9、p53、0CAA、H0XB7、Cal25、PSA、PSMA、STEAP、PCTA-I、Cal5-3、EGF、 EGFR、HER-I、CXCR4、G 蛋白偶聯(lián)受體(GCPR)或 CA27-29。
50.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分不是對(duì)象自身部分。
51.如權(quán)利要求50所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分來(lái)自于細(xì)菌，病毒，真菌，支原 體，原生動(dòng)物，蠕蟲(chóng)，或朊病毒。
52.如權(quán)利要求51所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自于下列一種或多種細(xì) 菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、支原體抗原、原生動(dòng)物抗原、蠕蟲(chóng)抗原、朊病毒抗原、 抗原、 HIVgpl20、HIV gp41、HIV gag、HIV pol、HIV env、HIV tat、HIV nef、HIV rev、杯狀病毒 衣殼抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎表面抗原、丁型肝炎試劑、單純皰疹病毒糖蛋白、水 痘帶狀皰疹病毒糖蛋白、流感病毒血凝素、流感病毒神經(jīng)氨酸酶、流感病毒核蛋白、HPV衣殼 蛋白、副流感病毒血凝素/神經(jīng)氨酸酶、脊髓灰質(zhì)炎病毒衣殼多肽、Hep A抗原、牛痘病毒多 肽、狂犬病病毒糖蛋白G、B. burgdorgeri的OspA、B型流感嗜血桿菌外膜蛋白、結(jié)核分枝桿 菌脂阿拉伯甘露糖、結(jié)核分枝桿菌mAPG、釀膿鏈球菌M蛋白、肺炎鏈球菌莢膜多糖、鼠疫耶 爾森菌F1、鼠疫耶爾森菌V抗原、惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)孢子體(PfCSP)、惡性瘧原蟲(chóng)孢子體表面蛋 白2(PfSSP2)、惡性瘧原蟲(chóng)肝臟分級(jí)抗原1羧基末端(PfLSAl c末端)、惡性瘧原蟲(chóng)輸出蛋 白質(zhì) I(PfExp-I)、Pfs48/45、Pfs 28、Pfs 25 或 Pfs 230。
53.如權(quán)利要求51所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自下列一種或多種細(xì) 菌、病毒、真菌、支原體、原生動(dòng)物、蠕蟲(chóng)、朊病毒、放線菌、芽孢桿菌、類桿菌、波氏桿菌、巴爾 通體、包柔氏螺旋體菌、布魯氏菌、彎曲桿菌、二氧化碳噬纖維菌、衣原體、梭菌、棒狀桿菌、 考克斯氏體、潛蚤、腸球菌、埃立克體、大腸桿菌、弗朗西斯氏菌、梭桿菌、血巴爾通氏體、嗜 血桿菌、纏繞桿菌、克雷白氏桿菌、L型細(xì)菌、鉤端螺旋體、李斯特菌、分枝桿菌、支原體、奈瑟 氏菌、新立克次氏體、諾卡氏菌、巴氏桿菌、消化球菌、消化鏈球菌、肺炎球菌、變形桿菌、假 單胞菌、立克次氏體、羅克利馬體、沙門氏菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、螺旋體、 耶爾森氏菌、腺病毒、甲病毒、杯狀病毒、冠狀病毒、巨細(xì)胞病毒、犬瘟熱病毒、埃博拉病毒、 腸病毒、EB病毒、黃病毒、丙型肝炎病毒、嗜肝DNA病毒、乙型肝炎病毒、δ肝炎病毒、戊型或己型肝炎病毒、GBV-C、皰疹病毒、單純皰疹病毒、水痘帶狀皰疹病毒、免疫缺陷病毒、艾滋病 毒、傳染性腹膜炎病毒、流感病毒、A型流感病毒、白血病病毒、馬爾堡病毒、正粘病毒、乳頭 瘤病毒、HPV、副流感病毒、副粘病毒、RSV、細(xì)小病毒、瘟病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質(zhì)炎 病毒、痘病毒、牛痘病毒、狂犬病病毒、呼腸病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、輪狀病毒、犁頭霉、支頂孢、鏈 格孢、曲霉、一蛙糞霉菌、雙極霉、子囊酵母、念珠菌、假絲酵母、一耳霉、隱球菌、葉枯病菌、 表皮癬菌、外瓶霉、地絲菌、組織胞漿菌、馬杜拉分支菌、馬拉色菌、小孢子菌、小叢梗孢、被 孢霉、毛霉、擬青霉、青霉、單胞瓶霉、瓶霉、綠藻、足腫菌、假小托菌、腐霉、鼻孢子蟲(chóng)、根霉、 線狀擔(dān)子菌、孢子絲菌、匍柄霉、毛癬菌、毛孢子菌、木絲霉、巴貝斯蟲(chóng)、結(jié)腸小袋纖毛蟲(chóng)、孢 子蟲(chóng)、隱孢子蟲(chóng)、艾美蟲(chóng)、腦胞內(nèi)原蟲(chóng)、內(nèi)阿米巴、賈第蟲(chóng)、哈蒙德蟲(chóng)、肝簇蟲(chóng)、等孢子球蟲(chóng)、利 什曼蟲(chóng)、微孢子蟲(chóng)、新孢子蟲(chóng)、微孢子蟲(chóng)、五鞭毛蟲(chóng)、瘧原蟲(chóng)、惡性瘧原蟲(chóng)、肺囊蟲(chóng)、肉孢子蟲(chóng)、 血吸蟲(chóng)、泰來(lái)蟲(chóng)、弓形體、錐蟲(chóng)、棘唇蟲(chóng)、貓圓線蟲(chóng)、鉤蟲(chóng)、管圓線蟲(chóng)、蛔蟲(chóng)、布魯格氏絲蟲(chóng)、仰 口線蟲(chóng)、毛細(xì)線蟲(chóng)、夏氏線蟲(chóng)、古柏線蟲(chóng)、環(huán)體線蟲(chóng)、網(wǎng)尾線蟲(chóng)、膨結(jié)蟲(chóng)、棘唇線蟲(chóng)、絳蟲(chóng)、復(fù)孔 絳蟲(chóng)、惡絲蟲(chóng)、龍線蟲(chóng)、蟯蟲(chóng)、類絲蟲(chóng)、血矛線蟲(chóng)、兔唇蛔蟲(chóng)、洛阿多肽、曼森線蟲(chóng)、繆勒線蟲(chóng)、 侏形吸蟲(chóng)、鉤蟲(chóng)、細(xì)頸線蟲(chóng)、結(jié)節(jié)線蟲(chóng)、盤尾蟲(chóng)、后睪吸蟲(chóng)、胃線蟲(chóng)、副絲蟲(chóng)、肺吸蟲(chóng)、副蛔蟲(chóng)、 泡翼線蟲(chóng)、原圓蟲(chóng)、腹腔絲蟲(chóng)、旋尾線蟲(chóng)、宮絳蟲(chóng)、冠絲蟲(chóng)、類圓線蟲(chóng)、圓線蟲(chóng)、吸吮線蟲(chóng)、弓蛔 線蟲(chóng)、弓首蛔蟲(chóng)、旋毛蟲(chóng)、虹膜鉤蟲(chóng)、鞭蟲(chóng)屬、鉤蟲(chóng)、或吳策線蟲(chóng)。
54.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含第一氨基酸序列， 所述非天然免疫原包含第二氨基酸序列，其中所述第二序列與第一序列相同，除了第一序 列中的一個(gè)或多個(gè)天然氨基酸在第二序列中被替換為一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸。
55.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含第一氨基酸序列， 并且所述非天然免疫原包含第二氨基酸序列，其中所述第二氨基酸序列與第一氨基酸序列 相同，除了第二氨基酸序列還包含一個(gè)或多個(gè)另外的非天然氨基酸序列。
56.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述一種或多種交叉反應(yīng)抗體對(duì)于 靶標(biāo)部分的表位具有特異性，其中所述表位與對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位相比，包含相同的 序列。
57.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述一種或多種交叉反應(yīng)抗體對(duì)于 靶標(biāo)部分的表位具有特異性，其中所述表位與對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位相比，包含不同的 序列。
58.如權(quán)利要求57所述方法，其特征在于，所述對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位上的序列包 含一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸。
59.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸可被 抗體接近。
60.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述免疫原包含與靶標(biāo)部分基本相 似的結(jié)構(gòu)。
61.如權(quán)利要求60所述的方法，其特征在于，所述免疫原包含與靶標(biāo)部分基本相似的 三級(jí)和/或四級(jí)結(jié)構(gòu)。
62.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述非天然氨基酸是除20種經(jīng)典氨 基酸以外的氨基酸，并且所述非天然氨基酸包含如下結(jié)構(gòu)IV/CO2H R2——Rl —<NH2 .其中R是除20種經(jīng)典天然氨基酸中任一種所用側(cè)鏈之外的任何取代基；其中R1是20 種經(jīng)典的天然氨基酸中一種所用的取代基；其中R2是任何取代基，使R2-R1 —起組成不同 于20種經(jīng)典天然氨基酸中任一種的側(cè)鏈；其中Z是0H，NH2, SH，NH-R'或S-R'；其中R' 是除H之外的任何取代基；并且其中X和Y各自是S或0。
63.如權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述非天然氨基酸是對(duì)-硝基苯丙氨酸。
64.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述非天然氨基酸選自對(duì)-硝基苯 丙氨酸；鄰-硝基苯丙氨酸；間-硝基苯丙氨酸；對(duì)-硼羰基Phe ；鄰-硼羰基Phe ；間-硼羰 基Phe ；對(duì)-氨基Phe ；鄰-氨基Phe ；間-氨基Phe ；對(duì)-酰基Phe ；鄰-?；鵓he ；間-?；?Phe ；對(duì)-OMe Phe ；鄰-OMe Phe ；間-OMe Phe ；對(duì)-磺基 Phe ；鄰-磺基 Phe ；間-磺基 Phe ； 5-硝基His ;3_硝基Tyr ；2-硝基Tyr ；硝基取代的Leu ；硝基取代的His ；硝基取代的Ile ； 硝基取代的Trp ；2-硝基Trp ；4-硝基Trp ；5-硝基Trp ；6-硝基Trp ；7-硝基Trp ；3-氨基酪 氨酸，2-氨基酪氨酸，0-磺基酪氨酸，2-硫氧基苯丙氨酸，3-硫氧基氧基苯丙氨酸或?qū)?羧 基苯丙氨酸，鄰-羧基苯丙氨酸和間-羧基苯丙氨酸。
65.如權(quán)利要求34或35所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是TNFα。
66.如權(quán)利要求65所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自于下列一種或多種內(nèi) 毒素休克、腦瘧疾、自身免疫病、多器官功能衰竭、多發(fā)性硬化癥、心臟功能障礙、動(dòng)脈粥樣 硬化、缺血再灌注損傷、胰島素抵抗、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、炎性腸病、惡病質(zhì)、感染性休 克、艾滋病、移植物抗宿主病、殺菌肉芽腫、成人呼吸窘迫綜合癥、二氧化硅致肺纖維化。
67.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象是小鼠，所述靶標(biāo)部分是 mTNF α，并且所述免疫原是非天然mTNF α。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其特征在于，所述非天然mTNFa包含PNO2Phe86-HiTNF α。
69.如權(quán)利要求67所述方法，其特征在于，所述非天然mTNFα選自=PNO2Phe11-IiiTNFa、 PNO2Phe19ITNFa、pN02Phe21_mTNF a、pN02Phe42_mTNF a、pN02Phe49_mTNF a、 pN02Phe104-mTNF α 以及 pN02Phe113_mTNF a。
70.如權(quán)利要求65所述方法，其特征在于，所述對(duì)象是人，所述靶標(biāo)部分是hTNFa，并 且免疫原是hTNF a。
71.如權(quán)利要求70所述方法，其特征在于，所述非天然hTNFα選自=PNO2Phe1LhTNFa、 pN02Phe19-hTNF a、pN02Phe21_hTNF a、pN02Phe42_hTNF a、pN02Phe49_hTNF a、 pN02Phe87-hTNF a、pN02Phe105-hTNF α 以及 pN02Phe114_hTNF a。
72.—種生產(chǎn)疫苗的方法，所述方法包括鑒定抗體療法的靶標(biāo)部分，其中所述靶標(biāo)部分不包含非天然氨基酸；提供非天然免疫原，其中所述非天然免疫原包含一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸，并且所述 非天然免疫原與靶標(biāo)部分結(jié)構(gòu)相似，當(dāng)給予對(duì)象時(shí)，對(duì)象產(chǎn)生針對(duì)非天然免疫原的與靶標(biāo) 部分交叉反應(yīng)的抗體；以及，將非天然免疫原與一種或多種藥學(xué)上可接受的佐劑、載體或賦形劑混合，由此產(chǎn)生疫田ο
73.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述提供非天然免疫原包括在正交翻譯系 統(tǒng)中產(chǎn)生非天然免疫原。
74.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述提供非天然免疫原包括在體外翻譯系 統(tǒng)中產(chǎn)生非天然免疫原。
75.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述非天然免疫原包含20種天然產(chǎn)生的經(jīng) 典氨基酸之一以外的非天然氨基酸。
76.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述非天然免疫原通過(guò)除了對(duì)免疫原中20 種天然產(chǎn)生的經(jīng)典氨基酸之一進(jìn)行化學(xué)修飾以外的工藝產(chǎn)生。
77.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述非天然免疫原通過(guò)除了對(duì)免疫原中20 種天然產(chǎn)生的經(jīng)典氨基酸之一進(jìn)行翻譯后修飾以外的工藝產(chǎn)生。
78.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述對(duì)象選自人、猴、小鼠、大鼠、豬、奶牛、 雞、籠中鳥(niǎo)、鳥(niǎo)舍鳥(niǎo)、爬行動(dòng)物和兩棲動(dòng)物。
79.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含多肽。
80.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含多肽和/或碳水化合物。
81.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是對(duì)象自身部分。
82.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是疾病相關(guān)部分。
83.如權(quán)利要求82所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自于下列一種或多種自身 免疫病相關(guān)自身抗原、腫瘤相關(guān)抗原、阿耳茨海默病相關(guān)抗原、淀粉樣蛋白β 40、淀粉樣蛋 白β 42、乳腺癌相關(guān)抗原、卵巢癌相關(guān)抗原、前列腺癌相關(guān)抗原、MAGE、BAGE、RAGE、NY-ESO、 譜系特異性腫瘤相關(guān)抗原、黑色素細(xì)胞-黑色素瘤譜系抗原、MART-1/Melan-A、酪氨酸酶 或酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)、酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)2、PSMA、PSA、突變的ras、重排的bcr/abl、 Her2/neu、突變或野生型p53、細(xì)胞色素P4501B1、N-乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶-V的異常表達(dá) 的內(nèi)含子序列、CA19-9, p53、OCAA, H0XB7、Cal25、PSA、PSMA、STEAP, PCTA-U Cal5_3、EGF,EGFR、HER-I、CXCR4、G 蛋白偶聯(lián)受體(GCPR)或 CA27-29。
84.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分并非對(duì)象的自身部分。
85.如權(quán)利要求84所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分來(lái)自于細(xì)菌，病毒，真菌，支原 體，原生動(dòng)物，蠕蟲(chóng)，或朊病毒。
86.如權(quán)利要求85所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自于下列一種或多種細(xì) 菌抗原，病毒抗原，真菌抗原，支原體抗原，原生動(dòng)物抗原，蠕蟲(chóng)抗原，朊病毒抗原，HIV抗原， HIVgpl20, HIV gp41, HIV gag, HIV pol, HIV env, HIV tat, HIV nef, HIV rev，杯狀病毒衣 殼抗原，乙型肝炎核心抗原，乙型肝炎表面抗原，S肝炎病毒試劑，單純皰疹病毒糖蛋白，水 痘帶狀皰疹病毒糖蛋白，流感病毒血凝素，流感病毒神經(jīng)氨酸酶，流感病毒核蛋白，HPV衣殼 蛋白，副流感病毒血凝素/神經(jīng)氨酸酶，脊髓灰質(zhì)炎病毒衣殼多肽，Hep A抗原，牛痘病毒多 肽，狂犬病病毒糖蛋白G，B. burgdorferi的OspA，B型流感嗜血桿菌外膜蛋白，結(jié)核分枝桿 菌脂阿拉伯甘露糖，結(jié)核分枝桿菌mAPG，釀膿鏈球菌M蛋白，肺炎鏈球菌莢膜多糖，鼠疫耶 爾森菌F1，鼠疫耶爾森菌V抗原，惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)孢子體(PfCSP)，惡性瘧原蟲(chóng)孢子體表面蛋 白2(PfSSP2)，惡性瘧原蟲(chóng)肝臟分級(jí)抗原1羧基末端(PfLSAl c末端)，惡性瘧原蟲(chóng)輸出蛋 白質(zhì) I(PfExp-I)，Pfs48/45，Pfs 28, Pfs 25 或 Pfs 230。
87.如權(quán)利要求85所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分選自下列一種或多種細(xì)菌、 病毒、真菌、支原體、原生動(dòng)物、蠕蟲(chóng)、朊病毒、放線菌、芽孢桿菌、類桿菌、波氏桿菌、巴爾通 體、包柔氏螺旋體菌、布魯氏菌、彎曲桿菌、二氧化碳噬纖維菌、衣原體、梭菌、棒狀桿菌、考 克斯氏體、潛蚤、腸球菌、埃立克體、大腸桿菌、弗朗西斯氏菌、梭桿菌、血巴爾通氏體、嗜血 桿菌、纏繞桿菌、克雷白氏桿菌、L型細(xì)菌、鉤端螺旋體、李斯特菌、分枝桿菌、支原體、奈瑟氏 菌、新立克次氏體、諾卡氏菌、巴氏桿菌、消化球菌、消化鏈球菌、肺炎球菌、變形桿菌、假單 胞菌、立克次氏體、羅克利馬體、沙門氏菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、螺旋體、耶 爾森氏菌、腺病毒、甲病毒、杯狀病毒、冠狀病毒、巨細(xì)胞病毒、犬瘟熱病毒、埃博拉病毒、腸 病毒、EB病毒、黃病毒、丙型肝炎病毒、嗜肝DNA病毒、乙型肝炎病毒、δ肝炎病毒、戊型或 己型肝炎病毒、GBV-C、皰疹病毒、單純皰疹病毒、水痘帶狀皰疹病毒、免疫缺陷病毒、艾滋病 毒、傳染性腹膜炎病毒、流感病毒、A型流感病毒、白血病病毒、馬爾堡病毒、正粘病毒、乳頭 瘤病毒、HPV、副流感病毒、副粘病毒、RSV、細(xì)小病毒、瘟病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質(zhì)炎 病毒、痘病毒、牛痘病毒、狂犬病病毒、呼腸病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、輪狀病毒、犁頭霉、支頂孢、鏈 格孢、曲霉、一蛙糞霉菌、雙極霉、子囊酵母、念珠菌、假絲酵母、一耳霉、隱球菌、葉枯病菌、 表皮癬菌、外瓶霉、地絲菌、組織胞漿菌、馬杜拉分支菌、馬拉色菌、小孢子菌、小叢梗孢、被 孢霉、毛霉、擬青霉、青霉、單胞瓶霉、瓶霉、綠藻、足腫菌、假小托菌、腐霉、鼻孢子蟲(chóng)、根霉、 線狀擔(dān)子菌、孢子絲菌、匍柄霉、毛癬菌、毛孢子菌、木絲霉、巴貝斯蟲(chóng)、結(jié)腸小袋纖毛蟲(chóng)、孢 子蟲(chóng)、隱孢子蟲(chóng)、艾美蟲(chóng)、腦胞內(nèi)原蟲(chóng)、內(nèi)阿米巴、賈第蟲(chóng)、哈蒙德蟲(chóng)、肝簇蟲(chóng)、等孢子球蟲(chóng)、利 什曼蟲(chóng)、微孢子蟲(chóng)、新孢子蟲(chóng)、微孢子蟲(chóng)、五鞭毛蟲(chóng)、瘧原蟲(chóng)、惡性瘧原蟲(chóng)、肺囊蟲(chóng)、肉孢子蟲(chóng)、 血吸蟲(chóng)、泰來(lái)蟲(chóng)、弓形體、錐蟲(chóng)、棘唇蟲(chóng)、貓圓線蟲(chóng)、鉤蟲(chóng)、管圓線蟲(chóng)、蛔蟲(chóng)、布魯格氏絲蟲(chóng)、仰 口線蟲(chóng)、毛細(xì)線蟲(chóng)、夏氏線蟲(chóng)、古柏線蟲(chóng)、環(huán)體線蟲(chóng)、網(wǎng)尾線蟲(chóng)、膨結(jié)蟲(chóng)、棘唇線蟲(chóng)、絳蟲(chóng)、復(fù)孔 絳蟲(chóng)、惡絲蟲(chóng)、龍線蟲(chóng)、蟯蟲(chóng)、類絲蟲(chóng)、血矛線蟲(chóng)、兔唇蛔蟲(chóng)、洛阿多肽、曼森線蟲(chóng)、繆勒線蟲(chóng)、 侏形吸蟲(chóng)、鉤蟲(chóng)、細(xì)頸線蟲(chóng)、結(jié)節(jié)線蟲(chóng)、盤尾蟲(chóng)、后睪吸蟲(chóng)、胃線蟲(chóng)、副絲蟲(chóng)、肺吸蟲(chóng)、副蛔蟲(chóng)、 泡翼線蟲(chóng)、原圓蟲(chóng)、腹腔絲蟲(chóng)、旋尾線蟲(chóng)、宮絳蟲(chóng)、冠絲蟲(chóng)、類圓線蟲(chóng)、圓線蟲(chóng)、吸吮線蟲(chóng)、弓蛔線蟲(chóng)、弓首蛔蟲(chóng)、旋毛蟲(chóng)、虹膜鉤蟲(chóng)、鞭蟲(chóng)屬、鉤蟲(chóng)、或吳策線蟲(chóng)。
88.如權(quán)利要求72所述的方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含第一氨基酸序列，所述 非天然免疫原包含第二氨基酸序列，其中所述第二序列與第一序列相同，除了第一序列中 的一個(gè)或多個(gè)天然氨基酸在第二序列中被替換為一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸。
89.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分包含第一氨基酸序列，并且所 述非天然免疫原包含第二氨基酸序列，其中所述第二氨基酸序列與第一氨基酸序列相同， 除了第二氨基酸序列還包含一個(gè)或多個(gè)另外的非天然氨基酸序列。
90.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述一種或多種交叉反應(yīng)抗體對(duì)于靶標(biāo)部 分的表位具有特異性，其中所述表位與對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位相比，包含相同的序列。
91.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述一種或多種交叉反應(yīng)抗體對(duì)于靶標(biāo)部 分的表位具有特異性，其中所述表位與對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位相比，包含不同的序列。
92.如權(quán)利要求91所述方法，其特征在于，所述對(duì)應(yīng)的非天然免疫原表位上的序列包 含一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸。
93.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸可被抗體接近。
94.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述非天然免疫原包含與靶標(biāo)部分基本相 似的結(jié)構(gòu)。
95.如權(quán)利要求94所述方法，其特征在于，所述非天然免疫原包含與靶標(biāo)部分基本相 似的三級(jí)和/或四級(jí)結(jié)構(gòu)。
96.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述非天然氨基酸是除20種經(jīng)典氨基酸以 外的氨基酸，并且所述非天然氨基酸包含如下結(jié)構(gòu)
97.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述非天然氨基酸選自對(duì)-硝基苯丙氨 酸；鄰-硝基苯丙氨酸；間-硝基苯丙氨酸；對(duì)-硼羰基Phe ；鄰-硼羰基Phe ；間-硼羰基 Phe ；對(duì)-氨基Phe ；鄰-氨基Phe ；間-氨基Phe ；對(duì)-?；鵓he ；鄰-酰基Phe ；間-?；?Phe ；對(duì)-OMe Phe ；鄰-OMe Phe ；間-OMePhe ；對(duì)-磺基 Phe ；鄰-磺基 Phe ；間-磺基 Phe ； 5-硝基His ；3-硝基Tyr ；2-硝基Tyr ；硝基取代的Leu ；硝基取代的His ；硝基取代的Ile ； 硝基取代的Trp ；2-硝基Trp ；4-硝基Trp ；5-硝基Trp ；6-硝基Trp ；7-硝基Trp ；3-氨基酪 氨酸，2-氨基酪氨酸，0-磺基酪氨酸，2-硫氧基苯丙氨酸，3-硫氧基氧基苯丙氨酸或?qū)?羧 基苯丙氨酸，鄰-羧基苯丙氨酸和間-羧基苯丙氨酸。
98.如權(quán)利要求72所述方法，其特征在于，所述靶標(biāo)部分是TNFα。
99.如權(quán)利要求98所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象是小鼠，所述靶標(biāo)部分是 mTNF α，并且所述非免疫原是非天然mTNF α。
100.如權(quán)利要求99所述方法，其特征在于，所述非天然mTNFα包含pN02Phe86-mTNF α。
101.如權(quán)利要求99所述方法，其特征在于，所述非天然mTNFa選自 PNO2Phe11ITNFa、pN02Phe19-mTNF a、pN02Phe21-mTNF a、pN02Phe42-mTNF a、 pN02Phe49-mTNF a、pN02Phe104-mTNF α 以及 pN02Phe113_mTNF a。
102.如權(quán)利要求98所述方法，其特征在于，所述對(duì)象是人，所述靶標(biāo)部分包含hTNFα， 并且免疫原包含hTNF a。
103.如權(quán)利要求102所述方法，其特征在于，所述非天然hTNFa選自 PNO2Phe11-IiTNFa、pN02Phe19_hTNF a、pN02Phe21_hTNF a、pN02Phe42_hTNF a、 pN02Phe49-hTNF a、pN02Phe87_hTNF a、pN02Phe105-hTNF α 以及 pN02Phe114_hTNF a。
104.一種由權(quán)利要求72所述方法產(chǎn)生的疫苗。
105.一種在細(xì)胞種產(chǎn)生非天然TNFa的方法，其中所述非天然TNF α包含 PNO2Phe86-TNF α，所述方法包含在合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，其中所述細(xì)胞包含在86位氨基酸含有至少一個(gè)選擇性密 碼子的核酸，并且所述核酸編碼TNF α ；并且，提供 PNO2Phe ；其中所述細(xì)胞還包含識(shí)別選擇性密碼子的正交-tRNA (Ο-tRNA)；以及，優(yōu)選用PNO2Phe氨?；?tRNA并在選擇者密碼子的作用下將pN02Phe摻入氨基酸86 位，從而產(chǎn)生非天然TNF α的正交氨?；?tRNA合成酶(O-RS)。
106.一種非天然 TNF α，所述 TNF α 包含 pN02Phe86_mTNF a。
107.一種非天然TNF a，所述TNF α包含選自下組的TNF a :pN02Phen-mTNF a、 pN02Phe19-mTNF a、pN02Phe21_mTNF a、pN02Phe42_mTNF a、pN02Phe49_mTNF a、 pN02Phe104-mTNF α 禾口 pN02Phe113_mTNF a 0
108.一種非天然TNF a，所述TNF α包含選自下組的TNF a :pN02Phen-hTNF a、pN02Phe19_hTNF α、pN02Phe21_hTNF α、pN02Phe42_hTNF α、pN02Phe49_hTNF α、 pN02Phe87-hTNF α、pN02Phe105-hTNF α 和 pN02Phe114_hTNF α。
109.—種組合物，其包含權(quán)利要求106、107或108所述的非天然TNFa。
110.一種抗權(quán)利要求106、107或108所述的非天然TNFa的抗體。
111.一種抗權(quán)利要求106、107或108所述的非天然TNFa的抗體，所述抗體能與不含 非天然氨基酸的TNF α發(fā)生交叉反應(yīng)。
112.—種組合物，其包含權(quán)利要求110或111所述的抗體。
113.一種非天然 RBP4，所述 RBP4 包含 pN02Phe43mRBP4。
114.一種組合物，其包含權(quán)利要求113所述的非天然RBP4。
115.一種抗權(quán)利要求113所述的非天然RBP4的抗體，所述抗體能與不含非天然氨基酸 的RBP4發(fā)生交叉反應(yīng)。
116.一種包含權(quán)利要求115所述抗體的組合物。
117.如權(quán)利要求1、34、35或72所述的方法，其特征在于，所述一個(gè)或多個(gè)非天然氨基 酸在免疫原合成期間摻入所述非天然免疫原中。
118.如權(quán)利要求1、34、35或72所述的方法，其特征在于，所述一個(gè)或多個(gè)非天然氨基 酸通過(guò)不同于翻譯后修飾或合成后化學(xué)修飾的方法摻入所述非天然免疫原中。
119.如權(quán)利要求1、34、35或72所述的方法，其特征在于，所述一個(gè)或多個(gè)非天然氨基 酸通過(guò)以下一種或多種方法摻入所述非天然免疫原中正交翻譯；體外翻譯；天然化學(xué)連 接；表達(dá)蛋白質(zhì)連接；或固相合成。
120.如權(quán)利要求1、34、35或72所述的方法，其特征在于，所述非天然免疫原包含經(jīng)糖 基化、硝基芳基修飾、硝化、烷基化、乙?；?、氧化、硫酸化或磷酸化的20種天然產(chǎn)生經(jīng)典氨 基酸中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸。
121.如權(quán)利要求120所述的方法，其特征在于，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸是通過(guò)不同于 翻譯后修飾的方法或不同于化學(xué)修飾的方法糖基化、硝基芳基修飾、硝化、烷基化、乙酰化、 氧化、硫酸化或磷酸化的。
全文摘要
本發(fā)明包括通過(guò)給予具有一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸的靶標(biāo)部分的抗原性形式和/或通過(guò)給予具有一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸的靶標(biāo)部分之一的抗體產(chǎn)生和/或增強(qiáng)對(duì)象對(duì)靶標(biāo)部分如疾病相關(guān)部分的的免疫應(yīng)答的方法和組合物，所述抗體與所述天然靶標(biāo)部分發(fā)生交叉反應(yīng)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101970005SQ200980104563
公開(kāi)日2011年2月9日 申請(qǐng)日期2009年2月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月8日
發(fā)明者J·格魯瓦爾德, P·G·舒爾茨, R·A·勒納, R·佩爾拉, V·V·斯米德?tīng)? 曹夢(mèng)麟 申請(qǐng)人:斯克利普斯研究院