專利名稱：粉末狀蛋白質(zhì)組合物及其制備方法
粉末狀蛋白質(zhì)組合物及其制備方法相關申請本申請要求于2008年1月15日提交的美國臨時專利申請?zhí)?1/021，298的優(yōu)先 權利益，所述美國臨時專利申請?zhí)柛髯缘膬?nèi)容在此整體引入本文作為參考。
背景技術：
藥物蛋白質(zhì)制劑的基本原理是必須克服一定的不穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)的降解途徑可以 分成2個不同類別，涉及化學不穩(wěn)定性和物理不穩(wěn)定性?；瘜W不穩(wěn)定性導致通過鍵形成或 切割的蛋白質(zhì)修飾?；瘜W不穩(wěn)定性問題的例子包括脫酰胺、外消旋化、水解、氧化、β消除和 二硫鍵交換。另一方面，物理不穩(wěn)定性不導致蛋白質(zhì)中的共價改變。相反，它們涉及蛋白質(zhì) 的高級結構(二級及以上)中的改變。這些包括變性、與表面吸附、聚集和沉淀。Manning 等人，Pharm. Res. 6,903 (1989)。在通過Watson和Crick (1953)的DNA結構發(fā)現(xiàn)以及隨后的人類基因組測序計劃 完成后，對蛋白質(zhì)化學作用的興趣增長得非?？焖?。在疾病、組織或發(fā)育中基因及其蛋白質(zhì) Zfe 白勺另白勺。Nextgeneration pharmaceutical, Issue 6 (GDS publishing Ltd.，2006)。在介于其間的數(shù)十年期間，基于蛋白質(zhì)的藥物數(shù)目增加得非?？焖?。今天，特 定蛋白質(zhì)或肽可以得到分離或合成、修飾且遞送用于減輕或治愈特定病癥和疾病。關于基 于蛋白質(zhì)的藥物的主要應用途徑仍是液體制劑的靜脈內(nèi)注射，但其他途徑也已進行測試且 使用。已付出諸多努力以將蛋白質(zhì)溶液轉(zhuǎn)變成固體形式。粉末狀組合物提供許多優(yōu)點， 例如通過涉及少得多的空間和重量可以貯藏或轉(zhuǎn)運更大量的蛋白質(zhì)，并且能量消耗低于在 貯藏和運送過程中使液體制劑冷卻所需的能量消耗。粉末狀組合物還促進新的遞送途徑， 例如吸入(Tzannis等人，國際公開號WO 2005067898)、或無針注射(Burkoth，The Drug Delivery Companies Report 76-78(2001))。幾種方法已用于由蛋白質(zhì)水溶液產(chǎn)生粉 末，其中有噴霧干燥、噴霧-冷凍干燥、冷凍干燥、或由超臨界流體或(部分)有機溶液沉 淀。winters 等人，Journal of Pharm. Sci. 85(6) :586_594 (1996)。與非常昂貴且費時的 冷凍干燥形成對比，噴霧干燥是產(chǎn)生蛋白質(zhì)裝載固體的有效的、高效的方法，這提供了開發(fā) 關于生物藥物(biopharmaceuticals)的新遞送形式例如吸入的機會。Maa等人，Pharm. Res. 16(2) 249-254(1999)。使純蛋白質(zhì)溶液噴霧干燥有引起部分失活的風險，這自動導致較低品質(zhì)的藥劑。 失活可以例如通過過程相關的物理應力引起，所述物理應力是由于高溫、剪切應力和大相 界面(液體/氣體)例如變性或聚集，或通過化學反應例如水解或氧化引起。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于使包括蛋白質(zhì)和賦形劑的蛋白質(zhì)制劑噴霧干燥的方法。具體而 言，本發(fā)明的方法和組合物基于其中使包含目的蛋白質(zhì)和賦形劑的溶液噴霧干燥的噴霧干 燥過程。本發(fā)明的制劑具有超過標準溶液和冷凍干燥制劑的許多優(yōu)點。特別地，本發(fā)明的 噴霧干燥方法使過程相關的降解降到最低，并且增加在環(huán)境溫度下的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性(例
5如，與冷凍干燥組合物相比較)。此外，噴霧干燥制劑也更易于運輸，并且用于制造高濃度制 劑、改善蛋白質(zhì)的生物利用率、和開發(fā)局部釋放(例如，肺遞送)和持續(xù)釋放(例如，脂質(zhì)體 和(D，L-丙交酯-乙交酯共聚物)PLGA包被的小球體)制劑。本發(fā)明的方法和組合物可以用于提供包括任何目的蛋白質(zhì)和賦形劑的穩(wěn)定的粉 末狀組合物或制劑。在一個方面，本發(fā)明的方法和組合物用于抗體及其片段，包括用于體內(nèi) 和體外目的的那些。在進一步的實施方案中，抗體片段是免疫球蛋白G(IgG)片段。此外，制備蛋白質(zhì)和肽制劑所必需的多步純化和濃縮過程通常引入組合物中的變 異性，從而使得制劑的精確組成可能在批次到批次之間變動。聯(lián)邦法令要求不管制造場所 或批號，藥物組合物在其制劑中高度一致。本發(fā)明的方法可以用于生成賦形劑以精確量加 入其中的蛋白質(zhì)的粉末狀制劑，從而允許生成具有賦形劑的精確濃度的蛋白質(zhì)制劑。在一個方面，本發(fā)明提供了用于制備蛋白質(zhì)或肽粉末的方法，其包括使包含超過 約50mg/mL蛋白質(zhì)或肽和至少一種賦形劑的溶液噴霧干燥，從而制備蛋白質(zhì)或肽粉末。在 一些實施方案中，溶液包括超過約lOOmg/mL蛋白質(zhì)或肽。蛋白質(zhì)還可以是雙重可變結合結 構域(DVD)結合蛋白質(zhì)。在一些實施方案中，該方法包括制備抗體粉末，其包括使包含超過約50mg/mL抗 體或其抗原結合部分和至少一種賦形劑的溶液噴霧干燥，從而制備抗體粉末。在一些實 施方案中，溶液包括超過約lOOmg/mL抗體或其抗原結合部分。抗體或其抗原結合部分可 以是免疫球蛋白G(IgG)，例如MAK 195F、阿達木單抗(Adalimumab)、ABT-325、ABT-308或 ABT-147。在一些實施方案中，粉末在環(huán)境溫度和濕度下穩(wěn)定至少3個月和/或在40°C下穩(wěn) 定至少3個月。賦形劑可以包括例如海藻糖、蔗糖、山梨糖醇、聚乙二醇、至少一種氨基酸、組氨 酸、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸或其混合物。在一些實施方案中，溶液包括約0.27 1.0至約 2.8 1.0、約 0.27 1.0 至約 1.4 1.0、約 0.27 1. 0 至約 0. 7 1. 0 的賦形劑蛋 白質(zhì)比、或約0.7 1.0的比。在一些實施方案中，溶液包括約20至約30mM賦形劑、或約 25mM賦形劑。在一些實施方案中，該方法包括用約100°C至約180°C的入口空氣溫度(Tin)和約 6o°c至約iio°c的出口空氣溫度(T。ut)的噴霧干燥。在特定實施方案中，該方法包括用約 130°C的Tin和約80°C的T。ut的噴霧干燥。該方法可以包括例如使溶液霧化以形成溶液小 滴，用氣體使小滴干燥以形成粉末，并且從氣體中回收粉末。該方法可以包括用壓力噴嘴霧 化器使溶液霧化和/或用旋風分離器(cyclone)從氣體中分離且回收抗體粉末。該方法還可以包括使抗體粉末包埋在藥學上可接受的載體中。藥學上可接受的載 體可以是對于腸胃外、經(jīng)口、經(jīng)腸和/或局部施用可接受的。藥學上可接受的載體可以包括 液體例如水。在另一個方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本文描述的任何一種方法制備的藥物制劑，其包 括有效量的抗體或其抗原結合部分。在另外一個方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本文描述的任何一 種方法制備的藥物制劑，其包括有效量的蛋白質(zhì)或肽。在另外一個方面，本發(fā)明提供了包括蛋白質(zhì)或肽和賦形劑的穩(wěn)定的粉末狀組合 物，其中所述組合物包括小于約6%的殘留水分，在一些實施方案中，小于約4%或3%的殘 留水分。蛋白質(zhì)或肽可以包括抗體或其抗原結合部分，例如IgG抗體或其抗原結合部分，例如MAK 195F、阿達木單抗、ABT-325、ABT-308或ABT-147。蛋白質(zhì)還可以是雙重可變結合結 構域(DVD)結合蛋白質(zhì)。在一些實施方案中，粉末狀組合物在環(huán)境溫度和濕度下穩(wěn)定至少3個月和/或在 40°C下穩(wěn)定至少3個月。在一些實施方案中，蛋白質(zhì)或肽、或抗體或其抗原結合部分，保留 其生物活性。賦形劑可以包括海藻糖、蔗糖、山梨糖醇、聚乙二醇、至少一種氨基酸、組氨酸、 丙氨酸、精氨酸、甘氨酸或其混合物。組合物可以具有約0.27 1.0至約2. 8 1.0、約 0.27 1.0至約1.4 1.0、約0.27 1.0至約0.7 1.0、或約0.7 1的賦形劑(例如， 海藻糖和/或蔗糖)與抗體或其抗原結合部分的質(zhì)量比。組合物可以具有約0.27 1.0至 約 2. 8 1.0、約 0.27 1.0 至約 1.4 1.0、約 0.27 1. 0 至約 0. 7 1.0、約 0.7 1 或約0.35 1的賦形劑(例如，山梨糖醇)與抗體或其抗原結合部分的質(zhì)量比。在另外一個方面，本發(fā)明提供了制造藥物組合物的方法，其包括使有效量的本發(fā) 明的穩(wěn)定的粉末狀組合物與藥學上可接受的載體例如液體例如水混合。在一些實施方案 中，藥物組合物適合于腸胃外、經(jīng)口、經(jīng)腸或局部施用。該方法可以進一步包括在顯著高于 環(huán)境溫度的溫度下加工穩(wěn)定的粉末狀組合物(例如，熔體擠出)，而不顯著影響粉末狀組合 物的穩(wěn)定性。在特定實施方案中，該方法包括例如用聚合物例如PLGA包被粉末狀組合物，以形 成持續(xù)釋放或延遲釋放的藥物組合物。另外或可替代地，該方法可以包括用腸溶衣包被。在 一些實施方案中，蛋白質(zhì)、肽、抗體或其抗原結合部分的活性通過賦形劑針對經(jīng)由有機溶劑 的沉淀、變性或氧化進行保護，所述有機溶劑例如PEG 400、乙醇、DMSO、NMP或冰乙酸。目前，幾乎所有公司都使用冷凍的大量藥物(bulk drug)組合物，并且面臨問題例 如凍融條件的再現(xiàn)性、賦形劑在大量藥物物質(zhì)內(nèi)出乎意料的結晶、緩沖液在冷凍過程中的 PH改變、和由于解凍例如在約37°C溫度下的2升容器的長滯后時間。使用噴霧干燥的大量 藥物組合物可以避免這些問題。此外，噴霧干燥的大量藥物組合物在最終藥物產(chǎn)品組合物 的配料過程中非常便于處理，并且允許制造廣泛的濃度范圍。此外，其中僅添加水的噴霧干 燥的藥物組合物可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)配料，并且因此降低藥物產(chǎn)品制造過程中的風險同時增加輸 出能力。此外，與單克隆抗體(mAb)片段相比較，全長/完全抗體可能更不易于物理降解。 另外，隨著蛋白質(zhì)濃度增加直至100mg/mL，一般存在很少的物理或化學降解中的增加或無 增加。因為更高濃度的溶液將增加過程的效率，所以lOOmg/mL蛋白質(zhì)濃度的使用將是有利 的。附圖簡述通過參考與附圖結合的下述詳述，可以更充分地理解本文公開的方法和組合物的 這些及其他特征和優(yōu)點，其中

圖1描述了如在實施例中使用的BUchi噴霧干燥器B-191 ；圖2描述了不同山梨糖醇-MAK混合物的得率和Tg ；圖3描述了不同山梨糖醇-MAK混合物的聚集、結晶度和含水量；圖4提供了山梨糖醇-MAK混合物3000x的掃描電鏡術(SEM)圖像 (a)25mM(b) IOOmM ；圖5描述了不同海藻糖-MAK混合物的得率和Tg ；
圖6描述了不同海藻糖-MAK混合物的聚集、結晶度和含水量；圖7提供了海藻糖混合物(3000x)的SEM圖像(a) IOmM海藻糖；(b) IOOmM海藻糖 和(c)純海藻糖噴霧干燥的；圖8描述了不同蔗糖-MAK混合物的得率和Tg ；圖9描述了不同蔗糖-MAK混合物的聚集、結晶度和含水量；圖10描述了關于噴霧干燥的MAK 195F制劑的尺寸排阻層析(SEC)物理穩(wěn)定性數(shù) 據(jù)(A)山梨糖醇、海藻糖和蔗糖對蛋白質(zhì)聚集量的作用和(B)穩(wěn)定劑濃度對蛋白質(zhì)聚集量 的作用；和圖11描述了加工和3個月貯藏(A)對溶于200mM海藻糖溶液的噴霧干燥的高濃 度MAK 195F、阿達木單抗和ABT-325物理穩(wěn)定性的作用和(B)對其化學穩(wěn)定性的作用。發(fā)明詳述I.定義為了使本發(fā)明可以更容易理解，首先定義了特定術語。如本文所使用的，術語“酸性組分”指具有酸性pH即小于7. 0的試劑，包括溶液。 酸性組分的例子包括磷酸、鹽酸、乙酸、檸檬酸、草酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、蘋果酸、乙醇酸 和延胡索酸。如本文所使用的，術語“抗氧化劑”意指這樣的試劑，其抑制氧化或充當抗氧化劑 增效劑，并且因此用于預防通過氧化過程的制劑變質(zhì)。此種化合物包括例如但不限于，α生 育酚(維生素Ε)、抗壞血酸、棕櫚酸抗壞血酸酯、檸檬酸、丁化羥基苯甲醚、丁化羥基甲苯、 依地酸(EDTA，依地酸鹽)及其鹽、氫亞磷酸(hydrophosphorous acid)、蘋果酸、一硫代甘 油、丙酸、桔酸丙酯、甲硫氨酸、抗壞血酸鈉、檸檬酸鈉、硫化鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、偏亞 硫酸氫鈉和本領域普通技術人員已知的其他化合物。除非本文另有說明，否則術語“組合物”和“制劑”可互換使用。術語“賦形劑”指可以加入制劑中的試劑，以提供所需一致性例如改變堆積性能 (bulk property)，改善穩(wěn)定性和/或調(diào)整重量摩爾滲透壓濃度。常用賦形劑的例子包括但 不限于，穩(wěn)定劑、糖、多元醇、氨基酸、表面活性劑、螯合劑和聚合物。如本文所使用的，術語“藥物”就組合物例如水制劑而言時，是對于治療疾病或病 癥有用的那種。術語“蛋白質(zhì)”意欲包括關于其鏈長足以產(chǎn)生更高水平的二級和/或三級和/或四 級結構的氨基酸序列。這與不具有此種結構的“肽”或其他小分子量分子區(qū)分。在本文使 用的定義內(nèi)包括的蛋白質(zhì)的例子包括治療蛋白質(zhì)。“治療活性蛋白質(zhì)”或“治療蛋白質(zhì)”指 可以用于治療目的的蛋白質(zhì)，即用于治療受試者中的病癥。應當指出盡管治療蛋白質(zhì)可以 用于治療目的，但本發(fā)明并不限于此種用途，因為蛋白質(zhì)還可以用于體外研究。在優(yōu)選實施 方案中，治療蛋白質(zhì)是融合蛋白或抗體或其抗原結合部分。在一個實施方案中，本發(fā)明的方 法和組合物包括至少2種不同的蛋白質(zhì)，其定義為具有不同氨基酸序列的2種蛋白質(zhì)。另 外的不同蛋白質(zhì)不包括蛋白質(zhì)的降解產(chǎn)物。術語“蛋白質(zhì)粉末”指包括根據(jù)本發(fā)明的噴霧干燥法制備的蛋白質(zhì)的組合物?！翱?體粉末”指包括本發(fā)明的噴霧干燥法制備的抗體或其抗原結合部分的組合物。術語“藥物制劑”指這樣的制劑，其處于此種形式，以便允許活性成分的生物活性
8是有效的，并且因此可以施用于受試者用于治療用途。術語“溶液”指至少一種賦形劑或蛋白質(zhì)或肽在液體內(nèi)的混合物。溶液可以包括 在液體內(nèi)溶解的蛋白質(zhì)分子、膠態(tài)溶解的蛋白質(zhì)分子、分散的蛋白質(zhì)聚集物或晶體或沉淀 物或懸浮液，或其組合。“穩(wěn)定的”組合物是其中蛋白質(zhì)在加工過程中和/或在貯藏后例如基本上保留其物 理穩(wěn)定性和/或化學穩(wěn)定性和/或生物活性的組合物。用于測量蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的各種分析 技術是本領域可用的，并且在例如P印tide and Protein Drug Delivery，247-301，Vincent Lee編輯,MarcelDekker, Inc. ,New York,N. Y. ,Pubs. (1991)禾口 Jones,A. Adv. DrugDelivery Rev. 10:29-90(1993)中綜述。在一個實施方案中，蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性根據(jù)溶液中的單體蛋白 質(zhì)百分比進行測定，具有低百分比的降解的(例如，斷裂的)和/或聚集的蛋白質(zhì)。例如， 包括穩(wěn)定蛋白質(zhì)的水組合物可以包括至少95%單體蛋白質(zhì)。可替代地，本發(fā)明的水組合物 可以包括不超過5%聚集物和/或降解的蛋白質(zhì)。術語“穩(wěn)定劑”指改善或以其他方式增強穩(wěn)定性的賦形劑。穩(wěn)定劑包括但不限 于α-硫辛酸，α-生育酚，棕櫚酸抗壞血酸酯，苯甲醇，亞硫酸氫鹽，硼，丁化羥基苯甲醚 (ΒΗΑ)，丁化羥基甲苯(BHT)，抗壞血酸及其酯，類胡蘿卜素，檸檬酸鈣，乙酰-L-肉堿，螯合 劑，軟骨素，硫酸軟骨素，檸檬酸，輔酶Q-10，EDTA(乙二胺四乙酸；依地酸二鈉)，異抗壞血 酸，延胡索酸，桔酸烷基酯，葡糖胺(殼聚糖、透明質(zhì)酸鈉)，蘋果酸，偏亞硫酸氫鹽，桔酸丙 酯，亞硫酸氫鈉，偏亞硫酸氫鈉，亞硫酸鈉，亞硫酸鉀，酒石酸，硫代硫酸鹽，硫甘油，生育酚 及其酯，例如生育酚乙酸酯、生育酚琥珀酸酯、生育三烯酚(tocotrienal)、d-α-生育酚乙 酸酯，維生素C及其酯，維生素E及其酯，例如維生素E乙酸酯，及其組合。如本文所使用的，術語“張力調(diào)節(jié)劑”意指可以用于調(diào)整液體制劑的張力的一種或 多種化合物。合適的張力調(diào)節(jié)劑包括甘油、乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、氯化鈉、硫酸鎂、氯化 鎂、硫酸鈉、山梨糖醇、海藻糖、蔗糖、棉子糖、麥芽糖和本領域普通技術人員已知的其他。在 一個實施方案中，液體制劑的張力接近血液或血漿的張力。如本文所提及的，術語“抗體”包括完整抗體及其任何抗原結合片段(即“抗原結 合部分”)或單鏈?！翱贵w”指一般包括通過二硫鍵互聯(lián)的至少2條重(H)鏈和2條輕(L) 鏈的糖蛋白，或其抗原結合部分。術語“抗體”還包括其分離的天然存在的變體。每條重鏈 由重鏈可變區(qū)(本文縮寫為Vh)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)由3個結構域CH1、CH2和Ch3 組成。每條輕鏈由輕鏈可變區(qū)(本文縮寫為VJ和輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)由1個結 構域Q組成。V1^nt區(qū)可以進一步再分成高變區(qū)，稱為互補性決定區(qū)(CDR)，點綴著更保守 的稱為構架區(qū)(FR)的區(qū)域。每個Vh和\由3個CDRs和4個FRs組成，從氨基末端到羧基 末端以下述順次排列FR1、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重和輕鏈的可變區(qū)包含與抗 原相互作用的結合結構域?？贵w的恒定區(qū)可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合， 所述宿主組織或因子包括免疫系統(tǒng)的各種細胞(例如，效應細胞)和經(jīng)典補體系統(tǒng)的第一 種組分(Clq)。如本文所使用的，術語抗體的“抗原結合部分”(或簡單地“抗體部分”)指保留與 抗原(例如，TNFa、IL-12、IL-13)特異性結合的能力的一個或多個抗體片段?？贵w的抗原 結合功能可以通過全長抗體的片段來執(zhí)行。在術語抗體的“抗原結合部分”內(nèi)包括的結合 片段的例子包括(i)Fab片段，由^11、(^和011結構域組成的單價片段；出汗妯')2片段，包括在鉸鏈區(qū)由二硫鍵連接的2個Fab片段的二價片段；(iii)由Vh和Cm結構域組成 的Fd片段；(iv)由抗體單臂的\和Vh結構域組成的Fv片段，(ν)由Vh或\結構域組成的 dAb 片段(ward 等人，(1989)Nature 341 :544_546)；禾口 (vi)分離的互補性決定區(qū)(CDR)。 此外，盡管Fv片段的2個結構域\和Vh由單獨的基因編碼，但它們可以使用重組方法通過 合成接頭進行連接，所述合成接頭使得它們能夠制備為單條蛋白質(zhì)鏈，其中\(zhòng)和Vh區(qū)配對 以形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv)；參見例如，Bird等人(1988) Science242 :423_426 ； 和 Huston 等人(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA85 :5879_5883)。此種單鏈抗體也意欲包 括在術語抗體的“抗原結合部分”內(nèi)。這些抗體片段使用本領域技術人員已知的常規(guī)技術 獲得，并且片段與完整抗體相同的方式就效用進行篩選。在本發(fā)明的一個實施方案中，抗體 片段選自Fab、FcUFd'、單鏈FV(scFV)、scFVa和結構域抗體(dAb)。再進一步地，抗體或其抗原結合部分可以是通過抗體或抗體部分與一種或多種其 他蛋白質(zhì)或肽的共價或非共價結合形成的較大的免疫粘附分子的部分。這些其他蛋白質(zhì)或 肽可以具有這樣的功能性，其允許純化抗體或其抗原結合部分，或允許其與彼此或其他分 子結合。因此，此種免疫粘附分子的例子包括鏈霉抗生物素蛋白核心區(qū)的使用，以制備四聚
(scFv) ^ψ (Kipriyanov^A (1995)HumanAntibodies and Hybridomas 6 93-101)，和半胱氨酸殘基、標記肽和C末端聚組氨酸標記的使用，以制備二價和生物素化 的 scFv 分子(Ki priyanov 等人(1994)Mol. Immunol. 31 1047-1058)。抗體部分例如 Fab 和F(ab' )2片段可以使用常規(guī)技術由完整抗體進行制備，例如分別地完整抗體的木瓜蛋 白酶或胃蛋白酶消化。此外，抗體、抗體部分和免疫粘附分子可以使用標準重組DNA技術獲 得。當2個抗體結構域?qū)儆谛纬申P聯(lián)對或組的結構家族或者衍生自此種家族且保留 這個特征時，它們是“互補的”。例如，抗體的Vh結構域和\結構域是互補的；結構 域不是互補的，并且2個\結構域不是互補的?；パa結構域可以在免疫球蛋白超家族的其 他成員中發(fā)現(xiàn)，例如T細胞受體的V α和νβ (或γ和δ)結構域。術語“結構域”指不依賴于蛋白質(zhì)的其余部分保留其三級結構的折疊蛋白質(zhì)的結 構。一般地，結構域負責離散的蛋白質(zhì)功能性質(zhì)，并且在許多情況下可以添加、去除或轉(zhuǎn)移 給其他蛋白質(zhì)，而不喪失蛋白質(zhì)和/或結構域的剩余部分的功能。單抗體可變結構域意指 包括抗體可變結構域的序列特征的折疊的多肽結構域。它因此包括完整抗體可變結構域和 修飾的可變結構域，例如其中一個或多個環(huán)已用并非抗體可變結構域特有的序列替換，或 已截短或包括N或C末端延長的抗體可變結構域，以及保留全長結構域的至少部分結合活 性和特異性的可變結構域的折疊片段。本發(fā)明的可變結構域可以組合以形成結構域組；例如互補結構域可以組合，例如 八結構域與Vh結構域組合。非互補結構域也可以組合。結構域可以以許多方式組合，涉及 通過共價或非共價方式的結構域連接。“dAb”或“結構域抗體”指特異性結合抗原的單抗體可變結構域(Vh或多肽。如本文所使用的，術語“抗原結合區(qū)”或“抗原結合部位”指抗體分子或其抗原結 合部分的一個或多個部分，其包含與抗原相互作用的氨基酸殘基，并且賦予抗體其對于抗 原的特異性和/或親和力。術語“表位”意指在一個或多個抗體的抗原結合區(qū)處能夠由抗體識別且由抗體結
10合的任何分子的部分。在本發(fā)明的背景中，第一個和第二個“表位”應理解為并不相同且不 由單個單特異性抗體或其抗原結合部分結合的表位。短語“重組抗體”指通過重組方法制備、表達、生成或分離的抗體，例如使用轉(zhuǎn)染到 宿主細胞內(nèi)的重組表達載體表達的抗體，從重組、組合抗體文庫中分離的抗體，從對于人免 疫球蛋白基因是轉(zhuǎn)基因的動物(例如，小鼠)中分離的抗體(參見例如，Taylor等人(1992) Nucl. AcidsRes. 20 :6287_6295)，或通過任何其他方式制備、表達、生成或分離的抗體，所述 任何其他方式涉及特定免疫球蛋白基因序列(例如，人免疫球蛋白基因序列)剪接至其他 DNA序列。重組抗體的例子包括嵌合、⑶R嫁接和人源化抗體。術語“人抗體”指具有相應于或衍生自人種系免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)的 抗體，如由例如Kabat等人描述的(參見Kabat，等人(1991) Sequences of Proteins of Immunologicallnterest,第 5 版，U. S. Department of Health and Human Services, NIH
發(fā)明者G·李, H-J·克勞澤, M·西德勒, M·阿德勒, P·拉斯納 申請人:雅培股份有限兩合公司