專(zhuān)利名稱(chēng)：大麻素類(lèi)的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及CBD單獨(dú)或與另一大麻素(carmabinoid)組合在制備用于控制受試者 膽固醇水平的藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑中的用途。還涉及THCV單獨(dú)或與另一大麻素組合在制備用 于增加受試者能量消耗的藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑中的用途。此外，CBD單獨(dú)或與另一大麻素組合 或者THCV單獨(dú)或與另一大麻素組合可用作處理或治療I型或II型糖尿病、肥胖癥、血脂障 礙、相關(guān)代謝性障礙和心血管疾病的部分方法。
背景技術(shù)：
代謝性障礙影響世界范圍內(nèi)數(shù)百萬(wàn)的受害者，并且造成對(duì)整個(gè)社會(huì)的健康的負(fù)面 影響增加。糖尿病是一種血液糖(葡萄糖)代謝的疾病。血中葡萄糖水平正常由激素胰島素 來(lái)控制。攝糖餐后血糖水平增加刺激胰島產(chǎn)生胰島素。胰島素結(jié)合肌肉、脂肪和肝細(xì)胞，并 刺激它們活化攝取葡萄糖，這樣減少了血液的水平。胰島素還通過(guò)肝臟減少葡萄糖生成。糖尿病顯著引起血液中高水平的糖。糖尿病是根據(jù)禁食血漿葡萄糖試驗(yàn)或口服葡 萄糖耐量試驗(yàn)基于血糖水平鑒別的。高血糖本身可引起癥狀，并且經(jīng)過(guò)更長(zhǎng)的時(shí)間會(huì)造成 對(duì)眼、腎、神經(jīng)的損傷。這會(huì)導(dǎo)致一系列的嚴(yán)重并發(fā)癥，例如失明、腎衰竭、心血管疾病、腳潰 瘍和壞疽，其會(huì)迫使人截肢。存在有兩種主要類(lèi)型的糖尿病· I型胰島素依賴(lài)型(又稱(chēng)為幼發(fā)型)糖尿病；和· II型非胰島素依賴(lài)型(又稱(chēng)為成年型)糖尿病患I型糖尿病的個(gè)體具有一種自身免疫反應(yīng)，它會(huì)破壞產(chǎn)生胰島素的胰臟β細(xì) 胞，從而身體中存在的胰島素不足。這種形式的糖尿病通常是40歲以前發(fā)生，通過(guò)每天注 射胰島素并結(jié)合控制食物攝取來(lái)治療。I型糖尿病的起因是自然界中的環(huán)境和遺傳，盡管尚不十分清楚是什么環(huán)境因素。在II型糖尿病中，胰島素由身體產(chǎn)生，但是細(xì)胞不能對(duì)胰島素產(chǎn)生應(yīng)答，并且不 能從血液中攝取足夠的葡萄糖。這種形式的糖尿病有時(shí)稱(chēng)為"胰島素-耐受型"糖尿病。II型糖尿病通常可通過(guò)控制飲食來(lái)成功的治療，但是在有些情況下藥物或胰島素 亦是需要的。II型糖尿病患者最初產(chǎn)生足夠量的胰島素，但是由于他們持續(xù)有高血糖水平， 胰臟逐漸地不能應(yīng)答并且胰島素產(chǎn)生減少。當(dāng)其發(fā)生時(shí)患者需要用高劑量注射胰島素來(lái)治 療。在英國(guó)和其它發(fā)達(dá)國(guó)家，II型糖尿病的發(fā)生率逐漸增加，并且這與這些國(guó)家肥胖 癥發(fā)生率逐漸增加有關(guān)。在英國(guó)目前II型糖尿病的發(fā)病率為約1百萬(wàn)，而I型糖尿病的發(fā)病率為約 400，000。世界范圍內(nèi)II型糖尿病的發(fā)病率到2010年估計(jì)達(dá)到215百萬(wàn)。II型糖尿病通常在40歲以后發(fā)生，但是在肥胖的青少年和年輕成人中有逐漸增加的向更早發(fā)病的傾向。肥胖癥定義為具有30或更大的體重指數(shù)(BMI)。正常BMI認(rèn)為在18至24. 9的范 圍內(nèi)。據(jù)估計(jì)，在英國(guó)有一半的婦女和三分之二的男人具有大于25的BMI，這使得他們 超重或肥胖。已知超重或肥胖會(huì)增加其它疾病包括II型糖尿病、心臟病、高血壓和骨關(guān)節(jié)炎的 風(fēng)險(xiǎn)。有許多與糖尿病和肥胖癥有關(guān)的代謝性障礙，并且它們通常稱(chēng)為“代謝綜合征”。 代謝綜合征亦稱(chēng)為胰島素耐受綜合征或X綜合征，并且這些術(shù)語(yǔ)指通常一起發(fā)生于患者中 的一群障礙。發(fā)生的這些障礙包括如下高或升高的血壓；腹部肥胖癥，其中脂肪有存于腹部 周?chē)膬A向；胰島素耐受糖尿病或葡萄糖不耐受、心血管疾?。粍?dòng)脈粥樣化性血脂障礙，其 中高甘油三酯、低HDL膽固醇和高LDL膽固醇導(dǎo)致動(dòng)脈壁中斑塊形成；促炎癥反應(yīng)狀態(tài)，例 如血中C-反應(yīng)性蛋白升高；以及血栓前(pro-thrombic)狀態(tài)，其中在血中有高纖維蛋白素 原或纖溶酶原活化因子抑制劑。已知患有代謝綜合征的人冠心病和其它與動(dòng)脈壁中斑塊形成相關(guān)的疾病的風(fēng)險(xiǎn) 增加。此類(lèi)疾病包括中風(fēng)和外周血管性疾病。患有代謝綜合征的人還有高的罹患II型糖 尿病的風(fēng)險(xiǎn)。代謝綜合征的發(fā)生率總的來(lái)說(shuō)逐漸增加，并且目前估計(jì)超過(guò)50百萬(wàn)美國(guó)患有代 謝綜合征。代謝綜合征的潛在風(fēng)險(xiǎn)因子似乎是腹部肥胖癥和胰島素耐受或II型糖尿病，其 中身體不能有效使用胰島素。其它一般性的風(fēng)險(xiǎn)因子包括身體不活動(dòng)、衰老、激素失衡和遺傳傾向。獲得性因子 例如過(guò)量體脂肪可引起代謝性障礙例如胰島素耐受。代謝綜合征通常診斷為其中存在下列標(biāo)準(zhǔn)中的三種或更多種的個(gè)體腰圍增加 (男性等于或大于102cm，女性等于或大于88cm)；甘油三酯升高(等于或大于150mg/dL)； HDL “優(yōu)良”膽固醇減少(男性低于40mg/dL，女性低于50mg/dL)；血壓升高(等于或大于 135/85mm Hg)；禁食葡萄糖升高(等于或大于100mg/dL)。臨床治療代謝綜合征的主要目標(biāo)是降低心血管疾病和II型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。這些 疾病的風(fēng)險(xiǎn)通過(guò)降低LDL膽固醇、降低血壓和降低血糖水平而大大減小。此外，HDL膽固醇 水平增加會(huì)減小代謝綜合征的風(fēng)險(xiǎn)。目前，沒(méi)有能夠減少或治療代謝綜合征的有用治療法。因?yàn)榇蠖鄶?shù)疾病的臨床治 療是通過(guò)生活方式的治療處置。大麻作為醫(yī)藥的應(yīng)用早已知曉，并且在19世紀(jì)大麻制品被推薦作為催眠鎮(zhèn)靜劑， 其可用于治療癔癥、精神錯(cuò)亂、癲癇癥、神經(jīng)性失眠癥、偏頭痛、疼痛和痛經(jīng)。大麻素類(lèi)是一組已知在細(xì)胞中激活大麻素受體的化學(xué)物質(zhì)。這些在大麻植物中發(fā) 現(xiàn)的化學(xué)物質(zhì)還在人類(lèi)和其它動(dòng)物中內(nèi)源性生成，并且稱(chēng)為內(nèi)源性大麻素類(lèi)。合成大麻素 類(lèi)是與植物大麻素類(lèi)或內(nèi)源性大麻素類(lèi)具有相同結(jié)構(gòu)的人工制備的化學(xué)物質(zhì)。申請(qǐng)人:在其共同未決申請(qǐng)W02006/054057中已發(fā)現(xiàn)，大麻素四氫次大麻酚(Tetrahydrocannabivarin，THCV)對(duì)CB1和CB2大麻素受體充當(dāng)中性拮抗劑作用。這暗示此 大麻素在治療已知與CB1受體的激動(dòng)作用有關(guān)的疾病中的用途。這些疾病和病癥包括如下 肥胖癥；精神分裂癥；癲癇癥或認(rèn)知障礙例如阿耳茨海默?。还钦系K；食欲過(guò)盛；與II型糖 尿病(非胰島素依賴(lài)性糖尿病)有關(guān)的肥胖癥；以及在藥物、酒精或尼古丁濫用或依賴(lài)性的 治療中。最近，申請(qǐng)人在其共同未決申請(qǐng)GB2438682中公開(kāi)了大麻素大麻二酚 (cannabidiol, CBD)大麻素受體拮抗劑的性質(zhì)。該大麻素CBD充當(dāng)CB1和CB2大麻素受體 的反相激動(dòng)劑的作用。另外，申請(qǐng)WO 05/077348中描述了大麻二酚在預(yù)防或治療糖尿病和/或胰島炎中 的用途。申請(qǐng)人:通過(guò)直接試驗(yàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，某些大麻素類(lèi)能夠增加能量消耗；降低總膽固醇 水平以及增加HDL膽固醇水平。此外，這些來(lái)自各種糖尿病模型的數(shù)據(jù)顯示出對(duì)血漿胰島 素、瘦蛋白(1印tin)和脂肪連接蛋白水平的期望的效果。這些激素是糖尿病的發(fā)展和治療 特別相關(guān)的，特別是在肥胖個(gè)體中。因此這些大麻素類(lèi)在治療糖尿病、肥胖癥和相關(guān)代謝性 障礙的應(yīng)用中可能是非常有用的。大麻素THCV是一種經(jīng)典的植物大麻素，其結(jié)構(gòu)上與THC相關(guān)性在于不是THC的 3-戊基側(cè)鏈，該THCV分子具有3-丙基側(cè)鏈。大麻素CBD是再另一種經(jīng)典的植物大麻素，已 知其是非神經(jīng)活性的。以前CBD已顯示在治療炎癥、惡心和焦慮中是有用的。申請(qǐng)人:早先提出了兩種大麻素類(lèi)THCV和CBD的配方，如在申請(qǐng)人的共同未決申請(qǐng) GB0713175.8(未公開(kāi))中描述的。據(jù)信THCV和CBD的組合將提供更好的治療選項(xiàng)，原因是 兩種大麻素類(lèi)在具有對(duì)大麻素受體的作用方面不同。在此申請(qǐng)中，公開(kāi)了以下的比例混合 物(i) 一種或多種用作CB1和/或CB2受體的反相激動(dòng)劑的化合物；和(ii) 一種或多種用 作CB1和/或CB2受體的中性拮抗劑的化合物。據(jù)認(rèn)為T(mén)HCV直接對(duì)大麻素受體起作用，并且結(jié)合引起中性拮抗劑作用。這意味 著，該受體本身阻斷與激動(dòng)劑例如內(nèi)源性大麻素的結(jié)合；當(dāng)然，該受體的背景張力效應(yīng)增強(qiáng) 子(tone)仍然未受影響到。當(dāng)提供THCV作為單獨(dú)的藥物配方時(shí)，該未受影響的背景張力 效應(yīng)增強(qiáng)子意味著拮抗劑可用于治療的一些疾病和病癥可能不能完全緩解，因?yàn)樵摫尘皬?力效應(yīng)增強(qiáng)子可能仍然會(huì)引起對(duì)身體的影響。相反，據(jù)認(rèn)為CBD作為反相激動(dòng)劑，其表示該受體的背景張力效應(yīng)增強(qiáng)子是關(guān)閉 的。然而，據(jù)認(rèn)為CBD在與大麻素受體本身分離的位置結(jié)合，并由此使激動(dòng)劑與受體結(jié)合。在另一份申請(qǐng)人的共同未決申請(qǐng)GB0800390. 7(未公開(kāi))中，申請(qǐng)人描述了一種或 多種大麻素類(lèi)與抗精神病藥物組合的應(yīng)用。許多抗精神病藥物的用戶(hù)經(jīng)歷的副作用包括糖 尿病和其它相關(guān)代謝性障礙。與大麻素類(lèi)如何能夠預(yù)防或治療這些副作用的一部分相關(guān)的 數(shù)據(jù)使得申請(qǐng)人相信，一種或多種大麻素類(lèi)可用于與抗精神病藥物組合以緩解代謝相關(guān)的 副作用。用于治療肥胖癥的藥物可分為三類(lèi)減少食物攝取的那些；改變代謝的那些；和 增加產(chǎn)熱作用的那些。作用于去甲腎上腺素能受體、血清素受體、多巴胺受體和組胺受體 的單胺類(lèi)可減少食物攝取。許多肽類(lèi)亦影響食物攝取。去甲腎上腺素能藥物芬特明、安非 拉酮、馬吲哚、芐非他明和苯甲曲秦僅被批準(zhǔn)用于短期使用。西布曲明(一種去甲腎上腺素-血清素重吸收抑制劑)被批準(zhǔn)用于長(zhǎng)期使用。奧利司他抑制胰脂肪酶并且可阻斷食入 30%脂肪飲食的受試者中30%的三?；视退狻Ｒ呀?jīng)測(cè)試的僅有產(chǎn)熱性藥物組合是麻黃 堿和咖啡因，但是這種治療法未被管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)。在臨床試驗(yàn)中，可調(diào)節(jié)肽攝取系統(tǒng)的其它 藥物正在開(kāi)發(fā)。藥物利莫那班通過(guò)降低食欲產(chǎn)生其主要作用。發(fā)明_既述根據(jù)本發(fā)明第一方面，提供了 CBD單獨(dú)或與另一大麻素組合在制備用于控制受試 者膽固醇水平的藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑中的用途。優(yōu)選地，所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑是用于降低血漿膽固醇總量。優(yōu)選地，所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑是用于增加HDL膽固醇相對(duì)于總膽固醇的百分?jǐn)?shù)。更優(yōu)選地，所述其它大麻素是THCV。提及THCV和CBD、THCV_和CBD-類(lèi)化合物或其衍生物，特別是關(guān)于治療用途時(shí)，應(yīng) 理解還包括此類(lèi)化合物的藥學(xué)可接受的鹽。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受的鹽"是指從藥學(xué)可接受的 非毒性堿或酸(包括無(wú)機(jī)堿或酸以及有機(jī)堿或酸)制備的鹽或酯，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員充 分理解的。許多適宜的無(wú)機(jī)或有機(jī)堿式鹽是本領(lǐng)域已知的。本發(fā)明范圍還延及保持期望活性的THCV或CBD的衍生物。保持與起始物質(zhì)基本上 相同的活性或者更優(yōu)選地顯示出改善的活性的衍生物可以根據(jù)醫(yī)藥化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)原理來(lái)制備， 它們是本領(lǐng)域公知的。此類(lèi)衍生物可顯示出比起始物質(zhì)更低程度的活性，只為它們保持有 治療有效的足夠活性。衍生物可以在其它藥物活性劑期望的性質(zhì)方面顯示出改善，例如，溶 解度改善、毒性降低、吸收增加。優(yōu)選地，所述CBD是呈得自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物的形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述來(lái)自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物是通過(guò) 用超臨界或亞臨界CO2萃取制備的。或者，所述來(lái)自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物是通過(guò)如下制備的 使植物材料與熱氣體在一定溫度下接觸，該溫度大于100°c足以使該植物材料中的一種或 多種大麻素類(lèi)揮發(fā)以形成蒸氣，再使該蒸氣濃縮以形成提取物。優(yōu)選地，所述來(lái)自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物是植物藥品。更優(yōu)選地，所述來(lái)自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物包括存在于植物 中的天然存在的大麻素類(lèi)的全部或部分。更優(yōu)選地，存在于含大麻的植物提取物中的全部或顯著量的任意THC已被除去。或者所述CBD或任意其它大麻素是基本上純凈的或分離的形式?；蛘咚鯟BD或任意其它大麻素是呈合成的形式。優(yōu)選地，所述CBD是以有效產(chǎn)生血漿膽固醇總量減少的劑量存在的。優(yōu)選地，所述CBD的有效劑量是0. lmg/kg至5. Omg/kg。更優(yōu)選地，當(dāng)THCV存在時(shí)，其存在量為0. 3mg/kg至30. Omg/kg。優(yōu)選地，所述膽固醇水平是以處理或治療I或II型糖尿病、肥胖癥、血脂障礙(包 括動(dòng)脈粥樣化性血脂障礙)、相關(guān)代謝性障礙和心血管疾病的部分方法控制的。優(yōu)選地，所述CBD和THCV是呈預(yù)定的重量比。優(yōu)選地，所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑是與一種或多種用于治療下列疾病的其它藥物組合 使用的糖尿病、肥胖癥、血脂障礙(包括動(dòng)脈粥樣化性血脂障礙)、相關(guān)代謝性障礙或心血
7管疾病。更優(yōu)選地，所述一種或其它藥物是減少胰島素耐受性或增加分泌或此二者組合的 藥物。根據(jù)本發(fā)明第二方面，提供了 THCV單獨(dú)或與另一大麻素組合在制備用于增加受 試者能量消耗的藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑中的用途。優(yōu)選地，所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑被包裝成供長(zhǎng)期使用。更優(yōu)選地，所述長(zhǎng)期是至少10天。優(yōu)選地，所述其它大麻素是CBD。優(yōu)選地，所述THCV是呈得自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物的形式。更優(yōu)選地，所述得自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物是植物藥品。更優(yōu)選地，所述來(lái)自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物包含全部或部分 植物中天然存在的大麻素類(lèi)。再更優(yōu)選地，存在于含大麻的植物提取物中的全部或顯著量的任意THC已被除去。或者，所述THCV或任意其它大麻素是基本上純凈的或分離的形式。大麻素的"基本上純凈的"的制品定義為具有色譜純度(期望的大麻素的)大于 90 %，更優(yōu)選大于95 %，更優(yōu)選大于96 %，更優(yōu)選大于97 %，更優(yōu)選大于98 %，更優(yōu)選大于 99%和最優(yōu)選大于99. 5%的制品，其由HPLC圖的面積歸一化確定。優(yōu)選地，用于本發(fā)明的所述基本上純凈的大麻素基本上無(wú)任何其它天然存在的或 合成的大麻素類(lèi)，包括天然存在于大麻植物中的大麻素類(lèi)。在此上下文中，“基本上無(wú)" 表示除了目標(biāo)大麻素沒(méi)有大麻素類(lèi)可通過(guò)HPLC檢測(cè)到。特別是在THCV的情況下，已知大麻素THCV是在大麻植物中與THC —起產(chǎn)生。THC 的精神活性副作用是不希望的，特別是當(dāng)該THCV用于藥物制劑中時(shí)，并且當(dāng)此植物提取物 用于本發(fā)明制劑時(shí)可選擇處理以除去其它大麻素類(lèi)例如THC?；蛘?，所述THCV或任意其它大麻素是合成的形式。優(yōu)選地，所述THCV是以有效產(chǎn)生受試者的能量消耗增加的劑量存在的。優(yōu)選地，所述THCV的有效劑量為0. 3mg/kg至30. Omg/kg。優(yōu)選地，當(dāng)存在CBD時(shí)，所述CBD的劑量為0. lmg/kg至5. Omg/kg。優(yōu)選地，所述能量消耗增加形成處理或治療I型或II型糖尿病、肥胖癥、血脂障礙 (包括動(dòng)脈粥樣化性血脂障礙)、相關(guān)代謝性障礙和心血管疾病的部分方法。更優(yōu)選地，所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑調(diào)節(jié)瘦蛋白和/或脂肪連接蛋白的一種或多種的 水平。優(yōu)選地，所述CBD和THCV是呈預(yù)定的重量比。優(yōu)選地，所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑是與一種或多種用于治療下列疾病的其它藥物組合 使用的糖尿病、肥胖癥、血脂障礙(包括動(dòng)脈粥樣化性血脂障礙)、相關(guān)代謝性障礙或心血
管疾病。更優(yōu)選地，所述THCV是用于治療肥胖癥并且所述其它藥物是用于減少食物攝取 或改變代謝。本發(fā)明第三方面，提供了控制受試者膽固醇水平的方法，其包括給有需要的受試者施用有效量的單獨(dú)或與另一大麻素組合的CBD。本發(fā)明第四方面，提供了增加受試者能量消耗的方法，其包括給有需要的受試者 施用有效量的單獨(dú)或與另一大麻素組合的THCV。本文公開(kāi)的是描述大麻素類(lèi)THCV和/或CBD單獨(dú)或者與各種糖尿病模型組合的 應(yīng)用的數(shù)據(jù)。這些數(shù)據(jù)顯示了體脂肪百分?jǐn)?shù)減少、能量消耗增加、總膽固醇水平減少以及 HDLC優(yōu)良")膽固醇水平增加。此外，這些數(shù)據(jù)顯示對(duì)血漿胰島素、瘦蛋白和脂肪連接蛋 白水平的期望的作用。此外，本文首次公開(kāi)了 CBD用作PPAR γ配體。因此，這種作用機(jī)制支持了 CBD單 獨(dú)用于預(yù)防或治療糖尿病、肥胖癥和相關(guān)代謝性障礙的數(shù)據(jù)。僅通過(guò)實(shí)施例的方式進(jìn)一步描述了本發(fā)明的某些方面，參見(jiàn)附圖，其中

圖1 (a至e)顯示了供試品與對(duì)照相比的24小時(shí)能量消耗；圖2 (a至e)顯示了對(duì)食物的產(chǎn)熱應(yīng)答_3小時(shí)能量消耗；圖3顯示了對(duì)食物的產(chǎn)熱應(yīng)答；圖4顯示了血漿膽固醇水平；圖5顯示了 HDL膽固醇水平；圖6顯示了 HDL膽固醇水平百分?jǐn)?shù)；和圖7顯示了肝臟甘油三酯濃度。具體說(shuō)明以下實(shí)施例1和2描述了大麻素類(lèi)THCV和CBD在一系列試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械挠猛尽?shí) 施例3描述了使用大麻素類(lèi)THCV和CBD的組合以及不同動(dòng)物模型進(jìn)行類(lèi)似試驗(yàn)得到的數(shù) 據(jù)。實(shí)施例4公開(kāi)了 CBD作為PPARy配體的作用機(jī)制。下面是用于引起藥物對(duì)包括I型或II型糖尿病、肥胖癥、血脂障礙、相關(guān)代謝性障 礙和心血管疾病的疾病作用的試驗(yàn)組(battery)。a)體重在研究期間所有小鼠的體重每周測(cè)定兩次。b)食物攝取食物攝取是考慮籠子底部食物浪費(fèi)通過(guò)重量差別測(cè)定的。c)耗水量的測(cè)定在治療期間，通過(guò)水瓶的重量差別，對(duì)每只動(dòng)物每天計(jì)算水?dāng)z 取量。d) 口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT):使葡萄糖溶解于水中(3g/10ml)，再以3g/kg的 速率口服給予小鼠。在施用葡萄糖之后的_30、0、30、60、90、120和180分鐘取血樣(20 μ 1) 用于葡萄糖濃度的分析。還在-30分鐘時(shí)取血樣用于胰島素分析。e)血糖分析對(duì)于各單個(gè)樣品取雙份20μ1血樣并置于96-孔分析板中。向每 孔中加入180 μ 1份的葡萄糖氧化酶試劑。將樣品混合，然后放置約30分鐘。然后使用 SpectraMax-250和SoftMax Pro軟件對(duì)樣品進(jìn)行自動(dòng)分析。f)血漿制備收集血液以用于測(cè)定i)血漿胰島素、ii)膽固醇、iii)游離脂肪酸 或iv)甘油三酯濃度。i.血漿胰島素分析使用96-孔微量分析板，與小鼠胰島素標(biāo)準(zhǔn)相比較用5 μ 1的 血漿測(cè)定血漿胰島素。ii.血漿膽固醇分析向各樣品中加入200 μ 1無(wú)限膽固醇液體穩(wěn)定試劑。將樣品 混合，孵育5分鐘，然后在500和660nm的雙波長(zhǎng)處讀數(shù)。
iii.血漿游離脂肪酸在96-孔分析板中測(cè)定5 μ 1血漿樣品，向其中加入0. 2ml 的試劑NEFA C。iv.血漿甘油三酯s分析向各孔中分入200 μ 1份的甘油三酯試劑。將樣品混合， 然后放置約45分鐘，然后測(cè)定。g)體脂肪的測(cè)定利用雙能X線(xiàn)吸收法(DEXA)測(cè)定全身體脂肪，該方法在兩個(gè)X 線(xiàn)能處測(cè)定身體組織吸收的差異。與標(biāo)準(zhǔn)校正比較通過(guò)它們的密度分辨組織類(lèi)型。使用專(zhuān) 用軟件以對(duì)骨和脂肪定量。使小鼠輕輕麻醇，在此非侵襲性技術(shù)期間足夠使它們保持安靜。h)能量消耗測(cè)定能量消耗是用小鼠在它們的住籠中通過(guò)開(kāi)路間接測(cè)熱法測(cè)定的。對(duì)于24h能量消 耗研究，小鼠給予其分配的治療物，然后開(kāi)始測(cè)定。對(duì)于食物的產(chǎn)熱效應(yīng)的測(cè)定，小鼠口服 給予compIan(Complan Foods Ltd.，能量為18%蛋白質(zhì)、53%碳水化合物、29%脂肪)IOg kg—1 = 185kJ kg—1，i)血漿瘦蛋白瘦蛋白在調(diào)節(jié)能量攝取和能量消耗中發(fā)揮關(guān)鍵作用，包括降低食 欲和增加代謝。血漿瘦蛋白是在飼食小鼠中使用CrystalChem Elisa分析法測(cè)定的，j)血漿脂肪連接蛋白脂肪連接蛋白通過(guò)腦部分發(fā)揮一些它的體重減輕的作用。 這類(lèi)似于瘦蛋白的作用，但是兩種激素實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)作用，并且可具有累加效應(yīng)。血漿脂肪連接 蛋白是在過(guò)夜禁食小鼠中使用96-孔B-Bridge Elisa分析法測(cè)定的。k)血漿HDL-膽固醇血漿HDL-膽固醇是在禁食小鼠中使用來(lái)自Trinity Biotech的試劑盒測(cè)定的。l)24h血糖特征測(cè)定它是為了保證檢測(cè)血糖白天控制的變化。由此在整個(gè)連續(xù) 24h期間在三個(gè)每小時(shí)的間隔獲得血樣。m)血漿血紅蛋白Ακ:使用Ak分析樣品(10 μ 1)。其使用微光學(xué)檢測(cè)方法，該方法 在自含式單一應(yīng)用監(jiān)測(cè)器中結(jié)合有微電子學(xué)、光學(xué)和干燥試劑化學(xué)法HbAre與結(jié)合于藍(lán)色 微粒的抗HbAre抗體結(jié)合，并通過(guò)618ηΜ處的藍(lán)色反射測(cè)定濃度。對(duì)于總血紅蛋白，鐵氰化 物使血紅蛋白轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白，并從565ηΜ的橙-棕色反射測(cè)定濃度。η)胰臟胰島素將冷凍的胰臟稱(chēng)重，并在液氮中在小容量pecel中搗碎。然后在 4°C下將該勻漿物提取過(guò)夜，再在2000g下離心5min。ο)胰島組織學(xué)使用Leica RM2125旋轉(zhuǎn)切片機(jī)切取4 μ M切片，轉(zhuǎn)移到荷正電的 載玻片中，再在42 °C下干燥過(guò)夜。使用蘇木精-伊紅染劑評(píng)價(jià)形態(tài)學(xué)。ρ)肝糖原離心(3000xg達(dá)15min)之后，使用葡萄糖氧化酶方法分析等份上清液 (10 μ 1)。結(jié)果表示為葡萄糖基單位/g肝臟。q)肝臟甘油三酯在41下，使15-301^肝臟樣品在50(^1甲醇中使用Ribolyser 細(xì)胞破碎器勻漿。加入Iml氯仿，使試管渦旋，再在4°C下放置2h，每30min渦旋。加入 200 μ 1的0. 9%氯化鈉，在徹底渦旋后，使該混合物以300xg離心5min。取500 μ 1份的氯 仿相，通過(guò)蒸發(fā)除去氯仿。使殘余物溶解于200μ 1乙醇中，再測(cè)定甘油三酯含量。對(duì)照動(dòng)物和治療動(dòng)物之間任何差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性是使用ANOVA檢驗(yàn)確定的。 與單獨(dú)給予溶媒組所得數(shù)據(jù)比較的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性表示為*ρ < 0. 05、**ρ < 0. 01或
< 0. 001。這些試驗(yàn)的關(guān)鍵結(jié)果在以下實(shí)施例1至3中加以突出。
10
實(shí)施例1 糖尿病、吧胖癥和相關(guān)代謝件障礙中四氫次大麻酚的作用CB1受體拮抗劑被檢測(cè)為潛在的抗肥胖劑，并且化合物利莫那班在許多歐洲國(guó)家 上市。利莫那班在人和嚙齒動(dòng)物模型中顯示出抗肥胖癥作用。在嚙齒動(dòng)物模型中，利莫 那班在開(kāi)始的幾天減少食物攝取，但是長(zhǎng)期的抗肥胖癥作用似乎大大與食物攝取減少無(wú) 關(guān)?？磥?lái)長(zhǎng)期抗肥胖癥作用更加與能量消耗增加有關(guān)，其可能通過(guò)增加從脂肪組織中釋放 脂肪連接蛋白來(lái)介導(dǎo)。四氫次大麻酚(THCV)是一種具有3-丙基而非3-戊基側(cè)鏈的Δ 9_四氫大麻酚的 類(lèi)似物，四氫次大麻酚是對(duì)CB1受體具有顯著活性的天然產(chǎn)物。設(shè)計(jì)本文描述的實(shí)施例，以 在飲食誘導(dǎo)的肥胖(DIO)小鼠模型中檢測(cè)以植物的(亦稱(chēng)為基于大麻的植物提取物，其還 含有THC)以及以純物質(zhì)的THCV的潛能。以高脂肪飲食喂養(yǎng)約12周的C57B1/6小鼠是一種標(biāo)準(zhǔn)模型，用于評(píng)價(jià)有可能影響 代謝性疾病包括肥胖癥、II型糖尿病和血脂障礙的藥物。因此將測(cè)定潛在的抗肥胖效果和 對(duì)糖尿病和血脂障礙參數(shù)的效果。方法動(dòng)物給予SDS飲食829100，其特別地含有0. 2%膽固醇，以及12小時(shí)光循環(huán)(在 07:00 燈亮)。
選擇70只小鼠，它們對(duì)該飲食顯示出良好的體重增加，并將它們置于籠子中，每 籠4只小鼠。在幾天休息并適應(yīng)新環(huán)境和住籠以后，按如下進(jìn)行急性食物攝取研究A 對(duì)照B lmg. kg-1 p. ο. THCV (植物的)C 3mg. kg-1 p. ο. THCV (植物的)D lOmg.kg-1 p. ο. THCV(植物的)E 30mg. kg-1 p. ο. THCV (植物的)將小鼠分成三組，每個(gè)研究組4只小鼠。在臨熄燈前(19:00)給藥化合物(19:00)，并在2h、4h和24h測(cè)定食物攝取。然后按如下進(jìn)行慢性給藥研究A 對(duì)照B 利莫那班(10mg. kg-1 ρ. ο.)C AM 251 (lOmg. kg-1 p. ο.)D 植物的 THCV(0. 3mg. kg-1 p. ο.)E 植物的 THCV (3mg. kg-1 p. o.)F 植物的 THCV(30mg. kg-1 p. o.)G 純 THCV (0. 3mg. kg-1 p. o.)一旦急性研究完畢，將小鼠分組成5只小鼠的兩組，用于慢性給藥研究。通過(guò)口服 強(qiáng)飼法每天于09:00-10:00給藥。在整個(gè)研究中進(jìn)行如下測(cè)定每天攝取食物和水0149]每周兩次體重
0150]第3、4和5天24小時(shí)能量消耗，給藥后立即開(kāi)始
0151]第7或8天口服葡萄糖耐量(葡萄糖負(fù)荷Sg. kg—1)，在5h_禁
0152]食小鼠中于_30、0、30、60、90、120測(cè)定葡萄
0153]糖，并于-30測(cè)定胰島素
0154]第10、11和12天24小時(shí)能量消耗，給藥后立即開(kāi)始。
0155]第15、16和17天對(duì)混合飲食的產(chǎn)熱應(yīng)答，小鼠禁食2h，然后給藥
οι 56]小鼠在 60min 之后給予 lOg. kg—1 Complan 飲食(口
0157]服)，給予Complan飲食4h之后測(cè)定能量消耗
0158]第21天5h_禁食小鼠的口服葡萄糖耐量(重復(fù)第7天研究
0159]第28天麻醉小鼠通過(guò)Dexa掃描(Dexascan)的身體組成，
0160]測(cè)定鼻_肛門(mén)長(zhǎng)度，來(lái)自飼食小鼠的血樣用于葡
0161]萄糖、乳酸鹽、胰島素、甘油三酯、總膽固醇、
0162]HDL-膽固醇、瘦蛋白
0163]第29天禁食過(guò)夜
0164]第30天用于葡萄糖、游離脂肪酸、胰島素和脂肪連接蛋
0165]白的血樣小鼠給藥，給藥后2_3h取血樣用于藥
0166]物水平
0167]第30天結(jié)束
0168]關(guān)鍵結(jié)果對(duì)24h能量消耗的影響(第10-12天)在給藥后最初12h，與對(duì)照相比，利莫那班顯示出在能量消耗方面的少量增加。在 整個(gè)24小時(shí)期間高劑量30mg kg—1的THCV-BDS增加能量消耗，但是0. 3和3. Omg kg—1的較 低劑量效果較小。純THCV(O^mgkg-1)具有相似水平的對(duì)利莫那班的作用。表1與圖la) 至e) —起描述了這些結(jié)果。表1 在第10-12天的能量消耗
權(quán)利要求
CBD單獨(dú)或與另一大麻素組合在制備用于控制受試者膽固醇水平的藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑是用于降低血漿膽固醇總量。
3.權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑是用于增加HDL膽固醇相對(duì)于總膽固 醇的百分?jǐn)?shù)。
4.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述其它大麻素是THCV。
5.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述CBD是呈得自至少一種大麻植物的含大麻素 的植物提取物的形式。
6.權(quán)利要求5的用途，其中所述來(lái)自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物是植 物藥品。
7.權(quán)利要求5或權(quán)利要求6的用途，其中所述來(lái)自至少一種大麻植物的含大麻素的植 物提取物包括存在于植物中的天然存在的大麻素類(lèi)的全部或部分。
8.權(quán)利要求7的用途，其中存在于含大麻的植物提取物中的全部或顯著量的任意THC 已被除去。
9.權(quán)利要求1的用途，其中所述CBD或任何其它大麻素是基本上純凈的或分離的形式。
10.權(quán)利要求1的用途，其中所述CBD或任何其它大麻素是合成的形式。
11.權(quán)利要求2的用途，其中所述CBD是以有效產(chǎn)生血漿膽固醇總量減少的劑量存在的。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述CBD的有效劑量是0.lmg/kg至5. Omg/kg。
13.當(dāng)從屬于權(quán)利要求4時(shí)權(quán)利要求12的用途，其中所述THCV是以0.3mg/kg至 30. Omg/kg的量存在的。
14.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述膽固醇水平是以處理或治療I或II型糖尿 病、肥胖癥、血脂障礙(包括動(dòng)脈粥樣化性血脂障礙)、相關(guān)代謝性障礙和心血管疾病的部 分方法控制的。
15.權(quán)利要求4的用途，其中所述CBD和THCV是呈預(yù)定的重量比。
16.權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑是與一種或多種用于治療下列疾病 的其它藥物組合使用的糖尿病、肥胖癥、血脂障礙(包括動(dòng)脈粥樣化性血脂障礙)、相關(guān)代 謝性障礙或心血管疾病。
17.權(quán)利要求16的用途，其中所述一種或其它藥物是減少胰島素耐受性或增加分泌或 此二者組合的藥物。
18.THCV單獨(dú)或與另一大麻素組合在制備用于增加受試者能量消耗的藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑 中的用途。
19.權(quán)利要求18的用途，其中所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑被包裝成供長(zhǎng)期使用。
20.權(quán)利要求19的用途，其中所述長(zhǎng)期是至少10天。
21.權(quán)利要求18至20任一項(xiàng)的用途，其中所述其它大麻素是CBD。
22.權(quán)利要求18至21任一項(xiàng)的用途，其中所述THCV是呈得自至少一種大麻植物的含 大麻素的植物提取物的形式。
23.權(quán)利要求22的用途，其中所述得自至少一種大麻植物的含大麻素的植物提取物是 植物藥品。
24.權(quán)利要求22或權(quán)利要求23的用途，其中所述來(lái)自至少一種大麻植物的含大麻素的 植物提取物包含全部或部分植物中天然存在的大麻素類(lèi)。
25.權(quán)利要求24的用途，其中存在于含大麻的植物提取物中的全部或顯著量的任意 THC已被除去。
26.權(quán)利要求18的用途，其中所述THCV或任何其它大麻素是基本上純凈的或分離的形式。
27.權(quán)利要求18的用途，其中所述THCV或任何其它大麻素是合成的形式。
28.權(quán)利要求18的用途，其中所述THCV是以有效產(chǎn)生受試者的能量消耗增加的劑量存 在的。
29.權(quán)利要求18的用途，其中所述THCV的有效劑量為0.3mg/kg至30. Omg/kg。
30.當(dāng)從屬于權(quán)利要求21時(shí)權(quán)利要求29的用途，其中所述CBD的劑量為0.lmg/kg至 5.0mg/kgo
31.權(quán)利要求18至30任一項(xiàng)的用途，其中所述能量消耗增加形成處理或治療I型或 II型糖尿病、肥胖癥、血脂障礙(包括動(dòng)脈粥樣化性血脂障礙)、相關(guān)代謝性障礙和心血管 疾病的部分方法。
32.權(quán)利要求31的用途，其中所述藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑調(diào)節(jié)瘦蛋白和/或脂肪連接蛋白的 一種或多種的水平。
33.權(quán)利要求21的用途，其中所述CBD和THCV是呈預(yù)定的重量比。
34.權(quán)利要求18的用途，其中藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑是與一種或多種用于治療下列疾病的其 它藥物組合使用的糖尿病、肥胖癥、血脂障礙(包括動(dòng)脈粥樣化性血脂障礙)、相關(guān)代謝性 障礙或心血管疾病。
35.權(quán)利要求34的用途，其中所述THCV是用于治療肥胖癥并且所述其它藥物是用于減 少食物攝取或改變代謝。
36.控制受試者膽固醇水平的方法，其包括給有需要的受試者施用有效量的單獨(dú)或與 另一大麻素組合的CBD。
37.增加受試者能量消耗的方法，其包括給有需要的受試者施用有效量的單獨(dú)或與另 一大麻素組合的THCV。
全文摘要
本發(fā)明涉及CBD單獨(dú)或與另一大麻素組合在制備用于控制受試者膽固醇水平的藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑中的用途。還還涉及THCV單獨(dú)或與另一大麻素組合在制備用于增加受試者能量消耗的藥物或營(yíng)養(yǎng)制劑中的用途。此外，CBD單獨(dú)或與另一大麻素組合或者THCV單獨(dú)或與另一大麻素組合是用作處理或治療I型或II型糖尿病、肥胖癥、血脂障礙、相關(guān)代謝性障礙和心血管疾病的部分方法。
文檔編號(hào)A61K31/05GK101977596SQ200980110347
公開(kāi)日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2009年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月21日
發(fā)明者G·蓋伊, M·A·考索恩, S·奧薩利文, S·賴(lài)特 申請(qǐng)人:Gw藥品有限公司