專利名稱：寡肽化合物及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新型試劑、藥物組合物及其在治療中的應用，特別是希望或有利于 減少或防止細胞增生或生長的任意治療(例如在快速增生性疾病或者事實上任何需要或 響應細胞抑制治療的病況的治療中)。本發(fā)明基于增生性細胞核抗原(PCNA)和參與 DNA修復、維護和細胞周期調控的各種蛋白的新型相互作用的鑒定以及隨后對負責所述 相互作用的新型五肽基序(稱為APIM)的鑒定。因此，更具體而言，本發(fā)明涉及包含所 述基序并且能夠與PCNA相互作用的肽及其模擬物、包含所述試劑的藥物組合物、以及 所述試劑在治療特別是涉及如上所述的減少或防止細胞增生的治療中的應用。本發(fā)明還 提供治療方法，所述方法包括包含PCNA相互作用基序的試劑的使用(優(yōu)選與細胞抑制劑 (cytostatic agent)聯(lián)合使用)。
背景技術：
人類和動物細胞暴露于各種導致DNA損傷的因素，例如反應性氧物質、紫外 光、X射線和內源性或外源性細胞抑制劑。細胞抑制劑是例如通過損傷DNA或通過干擾細胞復制機制來抑制或壓制細胞生 長和/或增殖(增生/復制)的試劑。烷基化劑是一類細胞抑制劑，其中的一些用于臨 床目的或用于研究目的。烷基化劑通過改變N或O原子的堿基來導致DNA損傷。這類損傷取決于試劑 的類型，很多試劑導致特異性DNA修飾。DNA損傷包括可能導致復制過程中編碼錯誤 和/或復制阻斷然后雙鏈斷裂或跨損傷合成的烷基化加合和鏈間交聯(lián)。人類和動物細胞具有各種DNA修復系統(tǒng)，包括堿基切除修復、核苷酸切除修復 和錯配修復。一個例子是人類DNA氧化性脫甲基酶hABH2，其通過氧化性脫甲基化而 將3-甲基胞嘧啶(3meC)轉化為胞嘧啶和將1_甲基腺嘌呤(ImeA)轉化為腺嘌呤。DNA修復和經(jīng)細胞周期調控的DNA復制之間的密切配合對于基因組完整性是關 鍵的。重要的是，在損傷存在的情況下，DNA修復停止，直到所述損傷修復為止，否則 會產(chǎn)生變異并繁衍。已知同時參與DNA復制和DNA修復的一種蛋白是增生性細胞核抗 原(PCNA)。PCNA是滑動夾(sliding clamp)蛋白家族的成員，其從細菌到高級真核動物在功 能性上得到保留，并且它的主要功能是提供具有基因組復制所需的高持續(xù)合成性的復制 性聚合酶。在活的S期細胞中，以綠色熒光蛋白(GFP)標記的PCNA形成呈現(xiàn)出復制位 點的明確位點(foci)。因此它能夠用作S期標記。參與細胞過程(例如DNA修復、染色質裝配、后成重構和染色質重構、姐妹染 色單體粘連、細胞周期控制和存活)很多蛋白位于含有超過十二個復制叉的所謂復制工 廠中。這些蛋白中有很多蛋白通過保守PCNA相互作用肽序列(稱為PIP盒(QxxL/1/ MxxF/DF/Y)，其中χ可以是任意氨基酸)與PCNA相互作用。使用肽展示文庫確認了 一種稱為KAx盒的替代性PCNA結合基序，但是該基序對體內PCNA相互作用的重要性
8還沒有得到證實。各種蛋白與PCNA相互作用，并且這些蛋白中的一些蛋白包括hABH2已經(jīng)顯示 出與PCNA共同位于復制位點中。然而，共定位本身并沒有意味著共定位蛋白之間的有 任何直接或間接的相互作用。實際上，hABH2中PCNA結合基序(例如PIP盒或KAx 盒)缺失說明hABH2不與PCNA相互作用。

發(fā)明內容
在導致本發(fā)明的工作中，本發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)，各種蛋白通過一種新型PCNA 相互作用基序與PCNA相互作用。在作為這些蛋白之一的hABH2中，該基序位于N末 端。本發(fā)明人確定該基序與PCNA的相互作用是必要和充分的(參見實施例1)。如下文實施例中所更為詳細的說明，為了探討該PCNA相互作用基序在烷基 化損傷的DNA修復中的功能，將表達包含該基序的重組肽的細胞系暴露于各種劑量的 MMS (甲磺酸甲酯)中，所述MMS是導致形成3-甲基胞嘧啶和1-甲基腺嘌呤的SN2烷 基化劑。發(fā)現(xiàn)包含該基序的重組肽的表達使細胞對MMS導致的DNA損傷敏感，表明包 含該基序的重組肽競爭性抑制PCNA與hABH2之間的相互作用。還測試了包括導致其他類型DNA損傷的BCNU、替莫唑胺(TZM)和絲裂霉素 c(MMC)在內的其他試劑，令人非常驚訝的是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)包含該基序的重組肽也使 細胞對由這些試劑導致的損傷敏感。這是完全沒有預料到的，因為BCNU是O6-氯乙 基化劑，其主要導致鏈間交聯(lián)以及一些單堿基環(huán)加合物(1，N(6)乙醛腺嘌呤)，據(jù)報道 TZM是O6G甲基化劑，而MMC導致通過CpG中的鳥嘌呤的N-烷基化而引起鏈間交聯(lián)， 并且hABH2沒有修復這些類型的DNA損傷。相反，存在其它修復這類損傷的酶，例如 由TZM導致的損傷直接為O6-甲基鳥嘌呤-DNA轉移酶(MGMT)所修復。這些發(fā)現(xiàn)表 明包含該基序的重組肽并非僅抑制hABH2與PCNA之間的相互作用，而可能涉及到其他 蛋白，即其他蛋白可能通過該新型基序與PCNA相互作用。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，除了在來自ABH2敲除小鼠(即不具有ABH2的小鼠)的細胞 系觀察到的以外，包含該基序的重組肽的表達還增加了細胞抑制劑(具有MMS特異性) 的細胞毒性效應，進一步表明包含該基序的重組肽具有更寬泛的效果，很可能抑制除了 hABH2之外的其他蛋白。這些令人驚訝的發(fā)現(xiàn)使得本發(fā)明人提出包含PCNA結合基序的肽的治療應用。本發(fā)明的所述新型PCNA結合基序(稱為APIM)已經(jīng)得到表征并且定義如下X1X2X3X3' X1- (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而X3和X3,獨立選 自不帶電荷的氨基酸組，優(yōu)選非極性氨基酸。能夠與PNCA相互作用的肽(或寡肽化合物)可能含有或包含這種肽(或序列) 基序。因此，本文公開了一種能夠與PNCA相互作用并包含這種基序的寡肽化合物，該 寡肽化合物可以代表本發(fā)明的某些方面。例如，在一個實施方式中，本發(fā)明可以提供了一種寡肽化合物，所述寡肽化合 物能夠與PCNA相互作用并且包含基序X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1, 獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而獨立選自不帶電荷的氨基酸
9組，優(yōu)選非極性氨基酸，其中所述寡肽化合物的進一步特征在于以下至少一個⑴所述寡肽化合物包含至少11個氨基酸或等效亞基；GDx2F是苯丙氨酸；(iii)所述寡肽化合物包含至少一個D-氨基酸；(iv)所述寡肽化合物包含至少一條信號序列，S卩，將所述寡肽化合物導向特定 位置的序列，例如導向細胞中的序列(例如將所述寡肽化合物導入細胞的細胞穿透序列) 和/或導入特定細胞腔室的序列(例如將所述寡肽化合物導入核中的核定位信號)；和(iv)所述寡肽化合物包含基序[K/R]-F-[LIV]-[LIV]_[K/R] (SEQ ID NO 27)。具體而言，在這個實施方式中，所述寡肽化合物包含核定位信號序列。在另一 個實施方式中，所述寡肽化合物包含細胞穿透序列(細胞穿透肽)。在另外一個實施方式 中，所述寡肽化合物包含細胞穿透序列和核定位序列。因此可見，在此類實施方式中，本發(fā)明的化合物可以采取含有(即包含)包含如 上所限定的PCNA相互作用基序和至少一個信號序列的寡肽化合物的構建體形式。因此 可見，在這個方面，本發(fā)明提供了一種構建體，所述構建體包含能夠與PCNA相互作用 并且包含基序X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)以及至少一條信號序列的構建體，其中X1 和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不帶電荷的氨 基酸組且優(yōu)選非極性氨基酸。如上所述，已經(jīng)確定本發(fā)明的新型基序介導含有所述基序的寡肽化合物(例如 肽)或蛋白與PCNA的相互作用。所述相互作用可以直接或間接地參與該基序與PCNA的直接結合，或者該基 序可以間接結合，例如結合可以由其他分子介導。因此，述及“PCNA相互作用”或
“PCNA結合”可以包括任意形式的相互作用，并且包括直接和間接結合。本文中任意述及“基序”的情況應當理解為是指此處所限定的X1X2X3X3, X1,。優(yōu)選的是，XjPX1,獨立選自賴氨酸(K)、精氨酸(R)、組氨酸(H)、鳥氨酸 (Om)、甲基賴氨酸(MeK)和乙?；嚢彼?AcK)，更優(yōu)選的是K、R和H，或者K和 R。X2優(yōu)選為芳香族氨基酸，更優(yōu)選的是，X2選自苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)、酪 氨酸(Y)、叔丁基甘氨酸、環(huán)己基丙氨酸、叔丁基苯丙氨酸、聯(lián)苯基丙氨酸和三叔丁基 色氨酸(在某些實施方式中，該列表可能排除F)，具體而言為F、W和Y，或者W和 Y，F(xiàn)和Y，或者F和W，或者在一些具體實施方式
中，X2可以是F、或W或Y。X3和X3,優(yōu)選為脂肪族氨基酸，并且可以例如獨立選自亮氨酸(L)、異亮氨酸 ⑴、纈氨酸(V)、丙氨酸(A)、甲硫氨酸(M)和正亮氨酸(Nor)。優(yōu)選的是，X3和X3,不同時為A，更優(yōu)選的是，X3和X3,選自L、I、V和M， 進一步優(yōu)選選自L、I和V。在某些實施方式中，所述基序與PCNA的結合在X2為W或Y時可以得到改善。 因此，在一個實施方式中，X2不是F。在其他一些實施方式中，如上所述，X2可以是 F。因此，本發(fā)明可以提供一種寡肽化合物，所述寡肽化合物包含基序[K/R]_[F/ Y/W]-[L/I/V/A/M]-[L/I/V/A/M]-[K/R](SEQ ID NO 28)，其中所述寡肽化合物能夠與PCNA相互作用。在另一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-[Y/W]-[L/I/V/A/M]-[L/I/V/A/M]-[K/R] (SEQ ID NO 29)。在另一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-[F/Y/W]-[L/I/V/A]-[L/I/V/A]-[K/R] (SEQ ID NO 30)；在另一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-[Y/W]-[L/I/V/A]-[L/I/V/A]-[K/R] (SEQ ID NO 31)；在另一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-[F/W]-[L/I/V/A/M]-[L/I/V/A/M]-[K/R] (SEQ ID NO 32)；在另一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-[F/W]-[L/I/V/A]-[L/I/V/A]-[K/R] (SEQ ID NO 33)；在另一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-[F/W]-[L/I/V]-[L/I/V]-[K/R] (SEQ ID NO 34)；在另一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-[F/Y/W]-[L/I/V]-[L/I/V]-[K/R] (SEQ ID NO 35)；在又一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-[Y/W]-[L/I/V]-[L/I/V]-[K/R] (SEQ ID NO 36)；或在又一個實施方式中，所述基序限定如下[K/R]-F-[L/I/V]-[L/I/V]-[K/R] (SEQ ID NO 37)。所述寡肽化合物優(yōu)選為經(jīng)分離的化合物。在一個優(yōu)選的實施方式中，所述化合物具有或包含序列RFLVK(SEQ ID NO: 2)。在其他優(yōu)選實施方式中，所述寡肽化合物具有或包含選自以下序列的序 列KFLLR (SEQ ID NO 3)、KYLLR (SEQ ID NO 4)、KWLLR (SEQ ID NO
5)、KYILR (SEQ ID NO 6)、KYVLR (SEQ ID NO 7)
RYLLR (SEQ ID NO RYVLR (SEQ ID NO RWLMR (SEQ ID NO RWLVK (SEQ ID NO RWIVK (SEQ ID NO RYVVK (SEQ ID NO
.RFLLR (SEQ ID NO 8)、 RYILR (SEQ ID NO 11)、 RYLVR (SEQ ID NO 14) RYVIR (SEQ ID NO 17)、 RWLIK (SEQ ID NO 20)、 RWAVK (SEQ ID NO 23)、
9)、RWLLR (SEQ ID NO 10)、 12)、RFLIR (SEQ ID NO 13). 15)、RYVLR (SEQ ID NO 16)、 18)、RYLVK (SEQ ID NO 19)、 21)、RWVVK (SEQ ID NO 22)、
24)、RYLIK (SEQ ID NO 25)或 RYLMK (SEQ ID NO 26)。這
些具體序列通過舉例方式列出，但是它們并非旨在限定本發(fā)明的范圍。在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明寡肽化合物還包含將所述基序靶向特定細胞 類型、有助于該化合物進入細胞、和/或將所述化合物定位于特定的胞內腔室(優(yōu)選為細 胞核)的信號序列。因此，所述信號序列可以被看作是任何起到將所述寡肽化合物定位或換言之導 向、轉運或運輸?shù)饺魏嗡栉恢?例如，任何所需的細胞位置或亞細胞位置)的作用的序 列。在一些優(yōu)選的實施方式中，所需位置是細胞(即細胞內部)和/或細胞核。因此，所述信號序列可以是起到將所述寡肽化合物運輸?shù)郊毎谢蛘呖缭郊毎?膜(即進入細胞內部)的作用的序列。因此，所述信號序列可以是一條所謂的“細胞穿
11透”序列(或者更具體地稱為“細胞穿透肽”)，在本領域中也稱為蛋白轉導域(PTD) 或蛋白轉導序列。因此，如上所述，本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式是一種構建體，所述構建體包 含G)包含如本文所限定的APIM基序(即PCNA相互作用基序)的寡肽化合物，和(ii) 細胞穿透序列(更具體而言是細胞穿透肽)。細胞穿透肽(CPP)技術在近10年發(fā)展很快，已知有很多細胞穿透肽并且在很 多文獻中有描述，實際上，許多此類肽可以商購獲得。細胞穿透肽在尺寸、序列和電荷 上、實際上是在它們的作用機制(對于一些肽目前還未知，而對于其它肽目前還沒有充 分闡明)上可以有很大變化，但是都具有跨越細胞質膜并將所連接或聯(lián)合的部分(所謂的
“貨物”)輸送到細胞質中、甚至在一些情況中輸送至細胞核中的共同能力。因此，CPP 是基于肽的輸送載體。CPP可以衍生自天然存在的能夠轉運跨越細胞膜的蛋白(例如果蠅同源異型框蛋 白觸足蛋白(Anteraiapedia)(—種轉錄因子))、病毒蛋白(例如HIV-I轉錄因子TAT以及 來自HSV-I的衣殼蛋白VP22)，或者它們可以源自合成，例如來自嵌合蛋白或合成多肽 (例如多精氨酸)。如上所述，負責轉導效應的機制不是單一的，因此CPP的設計可以 基于不同的結構和序列。細胞穿透肽可以參閱Jarver等，2006，Biochimica et Biophysica Actal758,第260-263頁，并且下表2列出了各種代表性肽。US 6,645,501進一步描述了 各種可以使用的細胞穿透肽。表2
CPP序列參考文獻Antp分類穿透素RQIKIWFQNRRMKWKK (SEQ ID NO: 38)Boltoii (2000) Eur. L Neuro. 12:287
1權利要求
1.一種在治療中使用的寡肽化合物或核酸分子，所述寡肽化合物包含PCNA相互作 用基序，所述核酸分子包含編碼所述寡肽化合物的序列，其中，所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3' Xi' (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組；并且其中所述寡肽化合物的進一步特征在于以下至少一個(i)所述寡肽化合物包含至少一個信號序列；(ii)所述PCNA 相互作用基序是[K/R]-F-[LIV]-[LIV]_[K/R] (SEQ ID N0.27)。
2.—種在希望抑制細胞生長的病癥或病況的治療或者涉及細胞抑制治療的治療中使 用的寡肽化合物或核酸分子，所述寡肽化合物包含PCNA相互作用基序，所述核酸分子 包含編碼所述寡肽化合物的序列，其中，所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3' Xi' (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組；并且其中所述寡肽化合物的進一步特征在于以下至少一個(i)所述寡肽化合物包含至少一個信號序列；(ii)所述PCNA 相互作用基序是[K/R]-F-[LIV]-[LIV]_[K/R] (SEQ ID N0.27)。
3.—種寡肽化合物或核酸分子在藥物制備中的應用，所述寡肽化合物包含PCNA相 互作用基序，所述核酸分子包含編碼所述寡肽化合物的序列，所述藥物用于希望抑制細 胞生長的病癥或病況的治療中或者用于涉及細胞抑制治療的治療中，其中，所述PCNA 相互作用基序是X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸 組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不帶電荷的氨基酸組；并且其中所述寡肽化合物的進一步特征在于以下至少一個(i)所述寡肽化合物包含至少一個信號序列；(ii)所述PCNA 相互作用基序是[K/R]-F-[LIV]-[LIV]_[K/R] (SEQ ID N0.27)。
4.一種希望抑制細胞生長的病癥或病況的治療方法或涉及細胞抑制治療的治療方 法，所述方法包括對需要治療的受試對象施用寡肽化合物或核酸分子，所述寡肽化合物 包含PCNA相互作用基序，所述核酸分子包含編碼所述寡肽化合物的序列，其中，所述 PCNA相互作用基序是X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨 基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不帶電荷的氨基酸組；并且其中所述寡肽化合物的進一步特征在于以下至少一個ω所述寡肽化合物包含至少一個信號序列；(ii)所述 PCNA 相互作用基序是[K/R]-F-[LIV]-[LIV]_[K/R] (SEQ ID N0.27)。
5.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含寡肽化合物或核酸分子和至少一種藥用可 接受的載劑或賦形劑，所述寡肽化合物包含PCNA相互作用基序，所述核酸分子包含編 碼所述寡肽化合物的序列，其中PCNA結合基序是X1X2X3X3' Xi' (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不帶電荷的氨基酸組；并且其中所述寡肽化合物的進一步特征在于以下至少一個ω所述寡肽化合物包含至少一個信號序列；(ii)所述 PCNA 相互作用基序是[K/R]-F-[LIV]-[LIV]_[K/R] (SEQ ID N0.27)。
6.如權利要求5所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物以適合于以下施用方式的形 式提供口服、腸胃外、局部、直腸、生殖器、皮下、經(jīng)尿道、經(jīng)皮、鼻內、腹腔內、 肌內和/或靜脈內施用和/或吸入施用。
7.如權利要求1 6中任一項所述的寡肽化合物、應用、方法或藥物組合物，其中所 述寡肽化合物為進一步包含核定位信號序列和/或細胞穿透信號序列的構建體形式。
8.如權利要求7所述的寡肽化合物、應用、方法或藥物組合物，其中所述構建體包含 核定位信號序列和細胞穿透信號序列。
9.一種檢測、診斷或監(jiān)測希望抑制細胞生長的病癥或病況的方法，所述方法包括檢 測含有PCNA相互作用基序的蛋白的表達水平和/或位置，其中所述蛋白的異常水平和/ 或位置指征所述病癥或病況，其中，所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO: 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組。
10.一種試劑盒，所述試劑盒包含(i)寡肽化合物或核酸分子，所述寡肽化合物包含PCNA相互作用基序，所述核 酸分子包含編碼所述PCNA相互作用基序的序列，其中所述PCNA相互作用基序是 X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組；和(ii)細胞抑制劑。
11.一種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含作為聯(lián)合制劑的如下物質(i)寡肽化合物或核酸分子，所述寡肽化合物包含PCNA相互作用基序，所述核 酸分子包含編碼所述PCNA相互作用基序的序列，其中所述PCNA相互作用基序是 X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組；和(ii)細胞抑制劑，所述聯(lián)合制劑同時、依次或分開用于希望抑制細胞生長的病癥或病況的治療或涉及 細胞抑制治療的治療。
12.—種寡肽化合物或核酸分子，所述寡肽化合物或核酸分子與細胞抑制劑在希望抑 制細胞生長的病癥或病況的治療或涉及細胞抑制治療的治療中聯(lián)合使用，所述寡肽化合 物包含PCNA相互作用基序，所述核酸分子包含編碼所述PCNA相互作用基序的序列， 其中所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組。
13.一種寡肽化合物或核酸分子，所述寡肽化合物或核酸分子在放射性治療、優(yōu)選為 希望抑制細胞生長的病癥或病癥的治療或涉及放射性治療的治療中用作敏化劑，所述寡 肽化合物包含PCNA相互作用基序，所述核酸分子包含編碼所述PCNA相互作用基序的 序列，其中所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組。
14.一種體外分析方法，所述方法包括對細胞或細胞培養(yǎng)物施用寡肽化合物或核酸分 子，所述寡肽化合物包含PCNA相互作用基序，所述核酸分子包含編碼所述PCNA相互 作用基序的序列，其中所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組。
15.一種脂質體，所述脂質體包含(i)寡肽化合物，所述寡肽化合物包含PCNA相互作用基序；和/或(ii)核酸分子，所述核酸分子包含編碼所述PCNA相互作用基序的序列；其中所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組。
16.如權利要求1 15中任一項所述的寡肽化合物、應用、方法、藥物組合物、試劑 盒、產(chǎn)品或脂質體，其中所述核酸分子包含在載體中。
17.—種能夠與PCNA相互作用的寡肽化合物，所述化合物包含基序 X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨 基酸，而X3和X3,獨立選自不帶電荷的氨基酸組，其中所述寡肽化合物的進一步特征在 于以下至少一個ω所述寡肽化合物包含至少一個信號序列；(ii)所述 PCNA 相互作用基序是[K/R]-F-[LIV]-[LIV]_[K/R] (SEQ ID N0.27)，并且所述寡肽化合物包含至少11個氨基酸或等效亞基。
18.—種核酸分子，所述核酸分子編碼具有或包含PCNA相互作用基序的肽，所述 PCNA相互作用基序的序列為X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中X1和X1,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組；并且其中所述肽的進一步特征在于以下至少一個(i)所述肽包含至少一個信號序列；(ii)所述PCNA 相互作用基序是[K/R]-F-[LIV]-[LIV]_[K/R] (SEQ ID N0.27)。
19.一種載體，所述載體包含權利要求18所述的核酸分子。
20.如權利要求1 19中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、治療方 法、藥物組合物、診斷方法、試劑盒、產(chǎn)品、體外方法或脂質體，其中，X2是芳香族氨 基酸和/或X3和X3,是脂肪族氨基酸。
21.如權利要求1 20中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、治療方 法、藥物組合物、診斷方法、試劑盒、產(chǎn)品、體外方法或脂質體，其中獨立選自賴氨酸(K)、精氨酸(R)、組氨酸(H)、鳥氨酸(Orn)、甲基賴氨 酸(MeK)和乙?；嚢彼?AcK)；和/或X2選自苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)、叔丁基甘氨酸、環(huán)己基丙氨酸、叔 丁基苯丙氨酸、聯(lián)苯基丙氨酸和三叔丁基色氨酸；和/或獨立選自亮氨酸(L)、異亮氨酸⑴、纈氨酸(V)、丙氨酸(A)、甲硫氨酸 (M)和正亮氨酸(Nor)。
22.如權利要求1 21中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、治療方 法、藥物組合物、診斷方法、試劑盒、產(chǎn)品、體外方法或脂質體，其中，X2不是F。
23.如權利要求1 22中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、治療方 法、藥物組合物、診斷方法、試劑盒、產(chǎn)品、體外方法或脂質體，其中，所述PCNA相 互作用基序是[K/R]-[F/Y/W]-[L/I/V/A/M]-[L/I/V/A/M]-[K/R] (SEQ ID N0.28)； [K/R]-[Y/W]-[L/I/V/A/M]-[L/I/V/A/M]-[K/R] (SEQ ID N0.29)； [K/R]-[F/Y/W]-[L/I/V/A]-[L/V/A]-[K/R] (SEQ ID N0.30)； [K/R]-[Y/W]-[L/I/V/A]-[L/I/V/A]-[K/R] (SEQ ID N0.31)； [K/R]-[F/W]-[L/I/V/A/M]-[L/I/V/A/M]-[K/R] (SEQ ID N0.32)； [K/R]-[F/W]-[L/I/V/A]-[L/I/V/A]-[K/R] (SEQ ID N0.33)； [K/R]-[F/W]-[L/I/V]-[L/I/V]-[K/R] (SEQ ID N0.34)； [K/R]-[F/Y/W]-[L/I/V]-[L/I/V]-[K/R] (SEQ ID N0.35)； [K/R]-[Y/W]-[L/I/V]-[L/I/V]-[K/R] (SEQ ID N0.36)；或 [K/R]-F-[L/I/V]-[L/I/V]-[K/R] (SEQ ID N0.37)。
24.如權利要求1 23中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、治療方 法或藥物組合物，其中，所述PCNA相互作用基序具有如SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25 或 26所示的序列。
25.如權利要求1 6以及9 24中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、 應用、方法、藥物組合物、試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述寡肽化合物包含信號序 列。
26.如權利要求25所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方法、藥物組合物、 試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述信號序列是核定位信號序列和/或細胞穿透信號序 列。
27.如權利要求7、8或26中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方 法、藥物組合物、試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述細胞穿透信號序列是HIV-TAT或 穿透素或其片段或衍生物。
28.如權利要求1 27中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方法、 藥物組合物、試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述寡肽化合物和/或核酸分子與細胞抑 制劑聯(lián)合、同時、分開或依次使用。
29.如權利要求1 28中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方法、 藥物組合物、試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述寡肽化合物是融合蛋白或適體的一部分。
30.如權利要求1 29中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方法、 藥物組合物、試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述寡肽化合物包含至少1、2、3、4或5 個D-氨基酸、至少1、2、3、4或5個非編碼氨基酸、至少1、2、3、4或5個二氨基酸 和/或至少1、2、3、4或5個β-氨基酸。
31.如權利要求1 30中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方法、 藥物組合物、試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述寡肽化合物包含至少5個并且不超過 200個亞基。
32.如權利要求1 31中任一項所述的核酸分子，其中，所述核酸分子包含至少15個 核苷酸并且不超過 800、700、650、600、550、500、450、400、350、300、250、200、 150、100或50個核苷酸。
33.如權利要求10 16或20 32中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、 應用、方法、藥物組合物、試劑盒或產(chǎn)品，其中，所述細胞抑制劑選自放線菌素D、 BCNU(卡莫司汀)、卡鉬、CCNU、喜樹堿(CPT)、斑蝥素、順鉬、環(huán)磷酰胺、阿糖胞 苷、達卡巴嗪、柔紅霉素、多烯紫杉醇、阿霉素、DTIC、表阿霉素、依托泊苷、吉非 替尼、吉西他濱、異環(huán)磷酰胺、伊立替康、伊屋諾霉素、美法侖、甲氨蝶呤、絲裂霉素 C(MMC)、米托蒽醌、巰基嘌呤、奧沙利鉬、紫杉醇(他克唑)、PARP-I抑制劑、泰 索帝、替莫唑胺(TZM)、替尼泊甙、托泊替康、曲奧舒凡、長春瑞濱、長春新堿、長春 堿、5-氮胞苷、5，6-二氫-5-氮雜胞苷和5-氟尿嘧啶。
34.如權利要求10 16或20 32中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、 應用、方法、藥物組合物、試劑盒或產(chǎn)品，其中，所述細胞抑制劑是烷基化劑。
35.權利要求1 34中任一項所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方法、藥 物組合物、試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其用于快速增生性病癥的治療或骨髓細胞清除術。
36.如權利要求35所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方法、藥物組合物、 試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述快速增生性病癥選自惡性、惡化前或非惡性的贅生 性疾病、炎癥、自身免疫性病癥、血液病、皮膚病、病毒誘導性快速增生性病癥、骨髓 異變病癥或骨髓增生性病癥。
37.如權利要求36所述的寡肽化合物、核酸分子、載體、應用、方法、藥物組合物、 試劑盒、產(chǎn)品或脂質體，其中，所述快速增生性病癥選自癌癥、良性腫瘤、銀屑病關節(jié) 炎、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸道疾病、銀屑病、瑞特綜合征、毛發(fā)紅糠疹、角質化病癥 的快速增生性變型、再狹窄、糖尿病性腎病、甲狀腺增生、格雷夫氏病、良性前列腺增 生、李-氟諾門提綜合征、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、周圍性血管疾病、原位宮頸癌、家族 性結腸息肉病、口腔粘膜白斑病、組織細胞增多病、瘢痕疙瘩、血管瘤、快速增生性動 脈狹窄、炎性關節(jié)炎、表皮角化病、包括關節(jié)炎、疣和EBV誘導性疾病在內的丘疹鱗屑 性出疹、瘢痕形成、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE ；狼瘡)、重癥肌無力、非惡性 增生、肉芽腫、MGUS (重要性未知的單克隆丙種球蛋白病)、贅生性腦膜炎、真性紅細 胞增多癥、硬化性黏液水腫、疹性黏蛋白沉積癥、淀粉樣變性和韋格納肉芽腫。
38.一種用于診斷希望抑制細胞生長的病癥或病況的試劑盒，所述試劑盒包含對 PCNA相互作用基序具有特異性的抗體及其用于診斷所述病癥或病況的使用說明書以及可選的檢測底物，其中，所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3, X1, (SEQ ID NO 1)，其中,獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而X3和X3,獨立選自不 帶電荷的氨基酸組。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種在治療中使用的寡肽化合物或核酸分子，所述寡肽化合物包含PCNA相互作用基序，所述核酸分子包含編碼所述寡肽化合物的序列，其中，所述PCNA相互作用基序是X1X2X3X3′X1′(SEQ ID NO1)，其中X1和X1′獨立選自堿性氨基酸組，X2是親脂性氨基酸，而X3和X3′獨立選自不帶電荷的氨基酸組；并且其中所述寡肽化合物的進一步特征在于以下至少一個(i)所述寡肽化合物包含至少一個信號序列；(ii)所述PCNA相互作用基序是[K/R]-F-[LIV]-[LIV]-[K/R](SEQ ID NO.27)。特別是，所述治療可以是其中希望抑制細胞生長的病癥或病況(例如快速增生性病癥)的治療，或者涉及細胞抑制治療(例如骨髓細胞清除)的治療。在某些方面，本發(fā)明的化合物就其性質可以用作細胞抑制劑。在本發(fā)明的其他方面，包含所述基序的寡肽化合物可以與細胞抑制劑聯(lián)合使用，或者與放射性治療聯(lián)合使用。
文檔編號A61K38/17GK102015758SQ200980114258
公開日2011年4月13日 申請日期2009年2月20日 優(yōu)先權日2008年2月22日
發(fā)明者佩爾·阿恩·阿斯, 瑪麗特·奧特雷, 艾瑪?shù)蓝　し破?申請人:Apim治療學公司