專利名稱：咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的用途和包含其的產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的用途，和包含咖啡綠原酸衍生的脫羧 酚酸的產(chǎn)品，特別是咖啡提取物，以及制備這些產(chǎn)品的方法。背景已有研究顯示咖啡和咖啡活性化合物例如咖啡因和二萜(例如咖啡醇和咖啡豆 醇)可誘導(dǎo)解毒酶(例如谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶)(Cavin C.等人，1998.The coffee-specific diterpenes cafestol and kahweol protect againstaflatoxin Bl—induced genotoxicity trough a dual mechanism.Carcinogenesis 19, 1369-1375 ； Cavin, C.等人，2003.Coffeediterpenes prevent benzo[a]pyrene genotoxicity in rat and humanculture systems.Biochemical Biophysical Research Communication 306, 488-495 ； Huber, W.等人.2002a.Enhancement of the chemoprotectiveenzymes glucuronosyl transferase and glutathione transferase inspecific organs of the rat by the coffee components kahweol andcafestol.Archive of Toxicology 76, 209-217)。 在5天消耗800ml咖啡的人中進(jìn)一步證明了咖啡可以提高GST活性(Steinkellner， H.等人.2005.Coffee consumption induces GSTP in plasma and protectslymphocytes against (+/_)-anti_benzo[a]pyrene-7, 8_dihydrodiol-9, 10—epoxide inducedDNA—damage results of controlled human intervention trials.Mut.Res.591264-275)。已知這種抗氧化活性可以對抗“氧化應(yīng)激”，通過降低可能與例如癌癥、心臟 疾病、退行性腦疾病和衰老相關(guān)的有害自由基。阿爾茨海默病(AD)為一種進(jìn)行性神經(jīng)變性疾病，最常見的形式為癡呆，其癥狀 為例如記憶力喪失、意識混亂、情緒波動和認(rèn)知功能減退。其特征是腦內(nèi)細(xì)胞外淀粉樣 斑塊和神經(jīng)元內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)，其中主要組成部分是一種被稱為淀粉樣β蛋白(Αβ) 的39-42殘基肽的纖維狀聚集。目前認(rèn)為Αβ原纖維的形成在AD病原學(xué)中發(fā)揮主要 作用。已有研究顯示幾種致病AD突變，可導(dǎo)致Αβ、特別是突變體Αβ42水平的提 高。因此認(rèn)為淀粉樣原纖維的形成是AD中疾病惡化和神經(jīng)變性的原因。通過體外研 究已經(jīng)證明Αβ原纖維的形成通過復(fù)雜的多步驟機(jī)制發(fā)生，其中涉及離散的可溶性寡聚 中間體ADDLS或稱初原纖維(PF)，其在原纖維形成后消失。這提示PF可能為AD的 致病種群。在人和動物中許多其他疾病涉及蛋白質(zhì)聚集，例如黃斑變性、牛海綿狀腦病 (BSE)、克-雅氏病(Creutzfeldt-Jakobdisease)和糖尿病。為提高食物和飲料產(chǎn)品的健康效益，希望能夠生產(chǎn)具有提高的抗氧化活性以及 其他有益生物學(xué)活性的產(chǎn)品，并尋找抗氧化和其他有益生物學(xué)活性化合物的天然來源， 以用于增強(qiáng)食物和飲料產(chǎn)品的特性以及用于例如化妝品和醫(yī)藥產(chǎn)品。發(fā)明概述發(fā)明者目前發(fā)現(xiàn)咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸具有抗氧化和抗炎癥特性，并可有 效抑制和/或延緩淀粉樣β肽的聚集，所述脫羧酚酸可從咖啡提取物中制備，得到具有 增強(qiáng)的抗氧化和抗炎癥特性的咖啡提取物。相應(yīng)的，本發(fā)明涉及制備包含咖啡綠原酸衍 生的脫羧酚酸的咖啡提取物的方法，所述方法包含a)用水和/或蒸汽提取咖啡豆以制備咖啡提取物；和b)處理咖啡提取物，將提取物中存在的綠原酸水解為酚酸，并將得到 的酚酸脫羧。在另一個方面本發(fā)明涉及包含咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的咖啡提取物， 一種制備食物或飲料產(chǎn)品的方法，包含咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的食物或飲料產(chǎn)品， 以及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的用途。附圖簡述

圖1顯示了 4-乙烯基兒茶酚降低和/或阻斷淀粉樣β肽單體到淀粉樣原纖維形 成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。白色棒為對照；淺灰色棒為1 0.5(摩爾比率)比率的Αβ42和4-乙 烯基兒茶酚；深灰色棒為1 2 (摩爾比率)比率的A β 42和4-乙烯基兒茶酚。圖2顯示了 4-乙烯基兒茶酚降低和/或阻斷淀粉樣β肽初原纖維到淀粉樣原纖 維形成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。白色棒為對照；淺灰色棒為1 0.5(摩爾比率)比率的Αβ42和 4-乙烯基兒茶酚；深灰色棒為1 2 (摩爾比率)比率的A β 42和4-乙烯基兒茶酚。發(fā)明詳述綠原酸是由反式桂皮酸和奎尼酸形成的酯家族。綠原酸天然存在于咖啡中，主 要為奎尼酸的單或二酯形式，在不同位置上連接酚基團(tuán)(例如咖啡的、阿魏酸的、香豆 的和甲氧基肉桂的)。綠原酸經(jīng)水解可生成酚化合物例如咖啡酸和阿魏酸。這些酚化合 物可通過脫羧進(jìn)一步轉(zhuǎn)化。本發(fā)明涉及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸?？Х染G原酸的意 思是一種或多種在咖啡中天然發(fā)現(xiàn)的綠原酸，所述綠原酸包含真正來自咖啡的或其他來 源的酚基團(tuán)。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，咖啡綠原酸真正來自咖啡。自然存在于咖啡 中的綠原酸為例如咖啡?？崴?CQA)(例如3_、4-或5-咖啡?？崴?和二酯，阿 魏?？崴?FQA)(例如3_、4-或5-阿魏?？崴?和二酯，和二甲氧基肉桂?？崴?(DMCQA)(例如3_、4-或5- 二甲氧基肉桂?？崴?和二酯?？Х染G原酸可水解生成酚酸，例如CQA可水解生成咖啡酸(CA)，F(xiàn)QA可水解 生成阿魏酸(FA)，DMCQA可水解生成二甲氧基肉桂酸(DMCA)?？Х染G原酸水解生 成的酚酸可進(jìn)一步脫羧生成咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸；例如CA可脫羧生成4-乙烯基 兒茶酚，F(xiàn)A可脫羧生成4-乙烯基愈創(chuàng)木酚，DMCA可脫羧生成4-乙烯基藜蘆醚。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸為4-乙烯基兒茶酚或 其甲氧基衍生物。4-乙烯基兒茶酚的甲氧基衍生物為例如4-乙烯基愈創(chuàng)木酚和4-乙烯 基藜蘆醚。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸選自4-乙烯 基兒茶酚、4-乙烯基愈創(chuàng)木酚、4-乙烯基藜蘆醚和其混合物。本發(fā)明涉及包含咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的咖啡提取物，所述咖啡提取物可 包含一或多種咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸。本發(fā)明的咖啡提取物可為烘焙咖啡豆、生咖 啡豆或兩者的提取物。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，咖啡提取物包含至少0.1毫克總重的4-乙烯基兒 茶酚、4-乙烯基愈創(chuàng)木酚和4-乙烯基藜蘆醚每克干物質(zhì)，例如至少1、至少2、至少5或 至少20毫克每克干物質(zhì)。在另一個實(shí)施方案中，咖啡提取物包含至少0.1毫克4-乙烯基 兒茶酚每克干物質(zhì)，例如至少1、至少2、至少5或至少20毫克每克干物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的方法，咖啡綠原酸衍生的綠原酸可轉(zhuǎn)化為脫羧酚酸，通過將綠原 酸水解為酚酸并將得到的酚酸脫羧，如上述。水解和脫羧反應(yīng)可單獨(dú)進(jìn)行或可在時間上重疊進(jìn)行。
可通過任意合適的方法對綠原酸進(jìn)行轉(zhuǎn)化。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所 述轉(zhuǎn)化通過一或多種能夠在咖啡中轉(zhuǎn)化綠原酸的微生物進(jìn)行?？梢澡b定能夠轉(zhuǎn)化綠原 酸的微生物，例如在此申請的實(shí)施例中所公開的。合適的微生物可為酵母，例如面 包酵母；真菌，例如曲霉屬(Aspergillus)；或細(xì)菌，例如乳酸細(xì)菌，例如乳酸桿菌屬 (Lactobacillus)，例如約氏乳桿菌(L.johnsonii) (CNCM 1-1225)。在本發(fā)明的一個實(shí)施方 案中，能夠轉(zhuǎn)化綠原酸的微生物為乳酸細(xì)菌。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，使用2或 多種微生物轉(zhuǎn)化綠原酸，例如一或多種能夠?qū)⒕G原酸水解為酚酸的微生物，和一或多種 能夠?qū)⒎铀崦擊鹊奈⑸铩＞G原酸的轉(zhuǎn)化可通過下述方法進(jìn)行將咖啡提取物和能夠轉(zhuǎn)化綠原酸的微生 物，在適于特異微生物生長的條件下孵育必需的時間以得到需要的綠原酸轉(zhuǎn)化。技術(shù)人 員可容易的決定特異的條件，例如通過參考此處包含的實(shí)施例。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，通過一或多種合適的微生物使用非復(fù)制型微生 物(例如裂解的微生物細(xì)胞)進(jìn)行綠原酸的轉(zhuǎn)化。通過將咖啡提取物和裂解細(xì)胞在合適 的條件下孵育，細(xì)胞裂解液中存在的酶可轉(zhuǎn)化綠原酸。合適的細(xì)胞可為例如上述微生物 的細(xì)胞。制備細(xì)胞裂解液的合適方法是本領(lǐng)域所公知的。微生物的量和轉(zhuǎn)化條件應(yīng)為合適的以獲得需要的綠原酸轉(zhuǎn)化，并可由技術(shù)人員 通過常規(guī)方法決定，例如使用此處實(shí)施例中公開的方法。在另一個實(shí)施方案中，通過使用一或多種能夠轉(zhuǎn)化綠原酸的酶進(jìn)行綠原酸的轉(zhuǎn) 化。在一個實(shí)施方案中使用了至少2種酶，至少1種能夠?qū)⒕G原酸水解生成酚酸的酶， 和至少1種能夠?qū)⒌玫降姆铀崦擊鹊拿?。合適的水解綠原酸的酶為例如酯酶，例如來自 日本曲霉(Aspergillusjaponicus) (Kikkoman，Japan)的綠原酸酯酶。合適的將酚酸脫羧 的酶為例如脫羧酶(EC 4.1丄X)，例如丙酮酸脫羧酶(EC 4丄1.1)。可通過酶促反應(yīng)的傳 統(tǒng)方法進(jìn)行酶促轉(zhuǎn)化，例如通過在適于需要的酶活性條件下在咖啡提取物中溶解或懸浮 酶?？赏ㄟ^例如在轉(zhuǎn)化完成后加熱將酶失活。待使用的酶也可固化，例如在膜上或在惰 性載體上，待處理的咖啡提取物可通過膜或載體循環(huán)直至獲得期望的轉(zhuǎn)化程度。當(dāng)使用 2種或多種酶時，可以同時使用，或相繼進(jìn)行處理，例如如果酶之間的最適條件不同。待使用的酶量和條件應(yīng)該適于獲得期望的綠原酸水解和酚酸脫羧，并可由技術(shù) 人員通過常規(guī)方法決定。待提取的用于制備咖啡提取物的咖啡豆可為整個或磨碎的。在本發(fā)明的一個實(shí) 施方案中咖啡豆為生咖啡豆。在另一個實(shí)施方案中，生咖啡豆和烘焙咖啡豆一起被提 取，即在相同的提取體系同時提取生的和烘焙咖啡豆，得到混合的提取物?？稍谔崛∏?從豆中汽提(Strip)最具揮發(fā)性的香氣成分，例如如果待使用的提取物是用于制備純可溶 咖啡。用于汽提揮發(fā)性香氣成分的方法是本領(lǐng)域所熟知的，例如見EP 1078576。待提取的咖啡豆可通過任何合適的方法提取，所述方法可得到包含綠原酸的提 取物。用水和/或蒸汽提取咖啡豆(的方法)是本領(lǐng)域所熟知的，例如見EP 0916267。提 取可經(jīng)歷濃縮步驟，并在轉(zhuǎn)化綠原酸的處理前經(jīng)干燥，例如通過噴霧干燥或冷凍干燥。 如果提取物已經(jīng)干燥，如果需要可重懸(提取物)以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化綠原酸的處理。在綠原酸轉(zhuǎn) 化之前、同時或之后，咖啡提取物可經(jīng)歷任意合適的處理以去除不需要的提取物組分， 例如以提高在最終處理的提取物中的脫羧酚酸濃度。
可在提取之后或期間進(jìn)行轉(zhuǎn)化綠原酸的提取物處理。在轉(zhuǎn)化綠原酸的處理之 前、期間或之后，可將提取物從提取的咖啡豆中分離。在一個實(shí)施方案中，提取物在轉(zhuǎn) 化綠原酸的處理之后保持與提取的咖啡豆分離，即在轉(zhuǎn)化綠原酸的處理之后，提取物不 與提取的咖啡豆接觸。可通過任意合適的方法從提取的咖啡豆中分離提取物，例如過濾 或離心?？煽紤]提取物的期望用途進(jìn)行實(shí)際和經(jīng)濟(jì)可行的必要的分離。因此不一定為 100%完全的分離，例如在分離后咖啡豆中小部分不溶解物質(zhì)可能仍在提取物中。本發(fā)明還涉及生產(chǎn)食物或飲料產(chǎn)品的方法，其中使用本發(fā)明的咖啡提取物作為 所述食物或飲料產(chǎn)品的成分。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提取物從提取的咖啡豆中分 離使用，即咖啡豆的不溶解物質(zhì)基本上通過此處描述的分離去除，并不用于食物或飲料 產(chǎn)品的制備。食物或飲料產(chǎn)品可為任意本領(lǐng)域公知的食物或飲料產(chǎn)品。在一個優(yōu)選的實(shí) 施方案中，食物或飲料產(chǎn)品為咖啡飲料；純可溶咖啡；軟飲料；膳食補(bǔ)充劑；乳產(chǎn)品； 谷類產(chǎn)品；水果或蔬菜汁產(chǎn)品；或糖食產(chǎn)品，例如巧克力產(chǎn)品，例如巧克力飲料?？扇?咖啡產(chǎn)品可通過濃縮和干燥本發(fā)明的提取物制備。在干燥前，提取物可與未經(jīng)綠原酸轉(zhuǎn) 化處理的咖啡提取物混合，例如烘焙咖啡、生咖啡或兩者的提取物。從咖啡提取物中制 備可溶咖啡產(chǎn)品的方法是本領(lǐng)域所熟知的。當(dāng)提取物用于咖啡產(chǎn)品的制備時，待提取的 咖啡豆可能在提取前經(jīng)歷汽提以去除揮發(fā)性香氣，例如EP-A-1078576所描述的。在水 解綠原酸的處理之后，例如在干燥后，揮發(fā)性香氣可再加入提取物以制備芳香化的可溶 咖啡產(chǎn)品。由本發(fā)明的咖啡提取物制備的可溶咖啡產(chǎn)品可就這樣出售，或可例如與奶精 (creamer)和/或甜味劑混合后出售，以制備包含奶精和/或甜味劑的咖啡飲料，例如卡 布奇諾或咖啡拿鐵。在一個實(shí)施方案中本發(fā)明涉及包含至少0.1毫克4-乙烯基兒茶酚和/或其甲氧基 衍生物每克干物質(zhì)，例如至少1、至少2、至少5或至少20毫克每克干物質(zhì)的食物或飲料
產(chǎn)品。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的咖啡提取物用作食物或飲料產(chǎn)品的成分時，其可在所述食物或 飲料產(chǎn)品制備過程中的任意合適步驟加入以獲得預(yù)期效果?？梢砸垣@得預(yù)期效果的任意 合適量加入提取物，例如抗氧化效果或抗炎癥效果。在另一個實(shí)施方案中本發(fā)明涉及包含咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的食物或飲料 產(chǎn)品。食物或飲料產(chǎn)品可為本領(lǐng)域所公知的任意食物或飲料產(chǎn)品。在一個優(yōu)選的實(shí)施方 案中，食物或飲料產(chǎn)品為咖啡飲料；純可溶咖啡；軟飲料；膳食補(bǔ)充劑；乳產(chǎn)品；谷類 產(chǎn)品；水果或蔬菜汁產(chǎn)品；或糖食產(chǎn)品，例如巧克力產(chǎn)品，例如巧克力飲料。可通過例 如此處公開的方法制備所述食物或飲料產(chǎn)品。咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的用途本發(fā)明還涉及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的用途。根據(jù)本發(fā)明的待使用的脫羧 酚酸可通過任意合適的方法制備，例如通過咖啡酸的脫羧，并可為任意合適的形式，例 如純化的化合物。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的待使用的脫羧酚酸為包含 此處公開的脫羧酚酸的咖啡提取物的形式。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，脫羧酚酸部 分或完全的從本發(fā)明的咖啡提取物中分離。根據(jù)本發(fā)明的待使用的脫羧酚酸可通過任意 合適的方法對人或動物施用，例如口服、靜脈內(nèi)或皮膚局部施用。如果經(jīng)口服施用，所 述脫羧酚酸可為例如本發(fā)明的食物或飲料產(chǎn)品的形式。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的食物或飲料產(chǎn)品在出售時帶有標(biāo)簽，指示根據(jù)本發(fā)明的用途。在一個實(shí)施方案中本發(fā)明涉及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于制備食物或飲料 產(chǎn)品的用途。所述食物或飲料產(chǎn)品可為本領(lǐng)域所公知的任意食物或飲料產(chǎn)品。在一個 優(yōu)選的實(shí)施方案中，食物或飲料產(chǎn)品為咖啡飲料；純可溶咖啡；軟飲料；膳食補(bǔ)充劑； 乳產(chǎn)品；谷類產(chǎn)品；水果或蔬菜汁產(chǎn)品；或糖食產(chǎn)品，例如巧克力產(chǎn)品，例如巧克力飲 料。當(dāng)脫羧酚酸用于制備食物或飲料產(chǎn)品時，其可在所述食物或飲料產(chǎn)品制備過程中的 任意合適步驟加入。在一個實(shí)施方案中本發(fā)明涉及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸作為抗氧化劑的用 途，例如作為產(chǎn)品例如食物或飲料產(chǎn)品的成分，其中需要抗氧化劑特性以例如避免產(chǎn)品 組分在貯藏時被氧化?？寡趸瘎V泛應(yīng)用于許多產(chǎn)品中，咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸可 以與傳統(tǒng)氧化劑類似的方式使用。技術(shù)人員通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)可容易的決定獲得預(yù)期抗氧化 效果的必需量。在另一個實(shí)施方案中本發(fā)明涉及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于在人或動物體 內(nèi)增強(qiáng)抗氧化和/或抗炎癥能力的用途，例如通過誘導(dǎo)解毒酶例如谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶 (GST)和通過提高介導(dǎo)的基因表達(dá)途徑。已有報導(dǎo)，Nrf2活性相關(guān)基因的提高可 增強(qiáng)解毒和刺激對氧化應(yīng)激的內(nèi)源防御。這些作用可通過例如對人或動物口服施用或皮 膚局部應(yīng)用脫羧酚酸獲得。在另一個實(shí)施方案中本發(fā)明涉及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于在人或動物中 降低炎癥的用途，例如通過降低前列腺素E2水平，通過例如對人或動物口服施用咖啡綠 原酸衍生的脫羧酚酸。許多健康問題和疾病與氧化應(yīng)激和炎癥相關(guān)?？Х染G原酸衍生的脫羧酚酸可 用于治療或預(yù)防這些問題或疾病。相關(guān)問題和疾病有例如皮膚疾病，例如由紫外線輻 射造成的光損傷、特應(yīng)性皮炎、濕疹、刮治術(shù)、搔癢、過敏癥狀、腦功能障礙(brain disorder)、炎癥、肥胖和癌癥，例如皮膚癌和肺癌。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸作為抗糖尿病劑使用， 例如通過降低血糖水平，和/或提高瘦蛋白、胰島素和/或C-肽的血液水平；作為骨重 構(gòu)劑使用，例如通過提高骨礦物質(zhì)密度，和/或通過提高雌激素和/或孕酮和/或堿性磷 酸酶活性的血清水平；作為抗轉(zhuǎn)移劑使用，例如具有抗血管生成作用；和/或用于腦保 護(hù)。這些作用可通過例如對人或動物的口服施用獲得。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于制劑的制備， 所述制劑用于治療或預(yù)防皮膚疾病、糖尿病、腦功能障礙、炎癥、肥胖、癌癥；神經(jīng)變 性疾病、認(rèn)知功能減退、輕度認(rèn)知功能障礙、癡呆、情緒障礙、抑郁、睡眠障礙、涉及 蛋白質(zhì)聚集的疾病、阿爾茨海默病(包括AD的常見病癥、癡呆、輕度認(rèn)知功能障礙和認(rèn) 知功能減退例如睡眠障礙、情緒不穩(wěn)、抑郁和緊張)、黃斑變性或糖尿病。制劑可以任意 合適的形式用于例如口服施用或皮膚局部施用，例如以下列形式食物或飲料產(chǎn)品、營 養(yǎng)補(bǔ)充劑、片劑、洗液或化妝品。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中制劑為藥物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的食品、飲料產(chǎn)品、食物補(bǔ)充劑或?qū)櫸锸称返姆侵委熡?途，用于在人或動物中治療和/或預(yù)防皮膚疾病，例如紫外線輻射造成的光損傷、特應(yīng) 性皮炎、濕疹、刮治術(shù)、搔癢、過敏癥狀、炎癥、肥胖和癌癥，例如皮膚癌和肺癌；認(rèn)知功能減退、情緒障礙和/或睡眠問題；用于腦保護(hù)；和/或用于改善認(rèn)知能力、免疫 反應(yīng)和/或腸屏障(gut barrier)功能。認(rèn)知能力可通過例如學(xué)習(xí)的能力和速度、解決智 力問題的能力和速度、形成和回憶記憶的能力、反應(yīng)時間等等表達(dá)。認(rèn)知功能減退可自 我表現(xiàn)為例如記憶力減退、健忘、遺忘詞語或姓名問題(word or name-findingproblem)、 記憶力、專注、計(jì)劃或組織能力、執(zhí)行復(fù)雜任務(wù)的能力，和/或認(rèn)知能力的減退，可能 例如由年齡、壓力、疾病或其他原因?qū)е?。認(rèn)知被理解為例如理解、推理、做決定、計(jì) 劃、學(xué)習(xí)、記憶、聯(lián)想、概念形成、語言、注意力、感知、行為、解決問題和心智圖像 (mental images)的心理過程。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及改善認(rèn)知能力和治療或預(yù)防以下疾病的方 法皮膚疾病例如紫外線輻射造成的光損傷、特應(yīng)性皮炎、濕疹、刮治術(shù)、搔癢、過敏 癥狀；炎癥；肥胖；癌癥，例如皮膚癌和肺癌；神經(jīng)變性疾??；認(rèn)知功能減退；輕度 認(rèn)知功能損害；癡呆；涉及蛋白質(zhì)聚集的疾病；阿爾茨海默??；黃斑變性或糖尿病；所 述方法包含對人或動物施用包含有效劑量的咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的食品、飲料產(chǎn) 品或?qū)櫸锸称?。所述食品、飲料產(chǎn)品或?qū)櫸锸称房砂殡S藥物施用以提高藥物的效力和/ 或降低藥物的劑量。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或預(yù)防以下疾病的方法皮膚疾病例如 紫外線輻射造成的光損傷、特應(yīng)性皮炎、濕疹、刮治術(shù)、搔癢、過敏癥狀；炎癥；肥 胖；癌癥，例如皮膚癌和肺癌；神經(jīng)變性疾??；認(rèn)知功能減退；輕度認(rèn)知功能損害；癡 呆；涉及蛋白質(zhì)聚集的疾病；阿爾茨海默??；黃斑變性；或糖尿病；所述方法包含對有 需要的人或動物施用有效量的包含咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的藥物。所述食品、飲料 產(chǎn)品或?qū)櫸锸称房砂殡S藥物施用以提高藥物的效力和/或降低藥物的劑量。
實(shí)施例實(shí)施例1用約氏乳桿菌(Lactobacillusjohnsonii) (CNCM 1-1225)的噴霧干燥制品處理生咖
啡提取物將30mg干燥的生咖啡提取物溶解于Iml磷酸緩沖液(50mM，pH 7.0)或Iml 水中。將IOmg約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii) (CNCM 1-1225)的噴霧干燥制品 (3.3E9cfu/g)加入此溶液。將混合物置于37°C孵育，在不同反應(yīng)時間取出樣品。在離心 (3000g, 5min)和過濾(0.45 μ m 孔徑注射器濾器，Millipore SLHA 025BS)后，用 HPLC 分析樣品。HPLC 分析咖啡提取物樣品稀釋至1 % w/w,并用RP-HPLC分析，使用CC 250/4Nucleosil 1005-C18 柱(Macherey-Nagel)。洗脫劑體系為 Millipore 水、0.1 % TFA 和 CH3CN,以 lmL/min的流速。所述方法允許同時測定CQA、FQA, di_CQA、咖啡酸(CA)、阿魏 酸(FA)和4-乙烯基兒茶酚(在325nm的吸光度)，使用外標(biāo)校準(zhǔn)曲線。結(jié)果以時間為 零時(to)的參考的相對值表示。抗氧化劑應(yīng)答元件(ARE)熒光素酶實(shí)驗(yàn)將包含8個拷貝大鼠谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶A2(GSTA2)中存在的ARE的pGL-8xARE和包含新霉素選擇標(biāo)記的質(zhì)粒pcDNA3.1 —同穩(wěn)定轉(zhuǎn)染進(jìn)人MCF7細(xì)胞 (Wang 等人.，Cancer Res.66, 10983-10994，2006)。ARE(抗氧化劑應(yīng)答元件)為轉(zhuǎn) 錄因子的結(jié)合位點(diǎn)，Nrf2調(diào)節(jié)涉及解毒和對抗氧化應(yīng)激的內(nèi)源防御基因。質(zhì)粒 pGL-8xARE在8個NrG結(jié)合位點(diǎn)下游包含可監(jiān)控Nrf2活性的熒光素酶基因。將AREc 32細(xì)胞接種于96孔微滴定板中，使用DMEM生長培養(yǎng)基。在用4-乙烯基兒茶酚處理 24h以后測定螢火蟲熒光素酶活性。前列腺素E2形成實(shí)驗(yàn)用4-乙烯基兒茶酚處理人結(jié)腸HT-29細(xì)胞15h后，將細(xì)胞與促炎劑 TNF-α (10ng/ml)共同孵育6h。使用競爭酶免疫測定(EIA)對HT-29細(xì)胞中產(chǎn)生的PGE2 進(jìn)行分析(Cavin 等人.，BBRC 327，742-49，2005)。結(jié)果在2種不同的生Robusta咖啡豆提取物經(jīng)孵育或發(fā)酵制備的發(fā)酵后的咖啡提取物 的HPLC分析中觀察到一個未知峰。所述化合物通過LC-MS-ToF和NMR組合鑒定為 4-乙烯基兒茶酚。生咖啡提取物經(jīng)上述方法處理并用HPLC分析。結(jié)果顯示于表1。表1.用約氏乳桿菌處理生咖啡提取物特定時間后的組成。除了以HPLC信號區(qū) 域表示4-乙烯基兒茶酚的量以外，其他物質(zhì)的量以未處理的提取物量的％表示，在未處 理的提取物中未檢測到4-乙烯基兒茶酚。
權(quán)利要求
1.制備包含咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的咖啡提取物的方法，所述方法包含a)用水和/或蒸汽提取咖啡豆以制備咖啡提取物；和b)處理咖啡提取物，將提取物中存在的綠原酸水解為酚酸，并將得到的酚酸脫羧。
2.權(quán)利要求1的方法，其中步驟b中綠原酸的水解和酚酸的脫羧通過微生物進(jìn)行。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述微生物為乳酸菌。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中待提取的咖啡豆為生咖啡豆。
5.每克干物質(zhì)包含至少0.1毫克4-乙烯基兒茶酚和/或其甲氧基衍生物的咖啡提取物。
6.權(quán)利要求5的咖啡提取物，其中所述甲氧基衍生物為4-乙烯基愈創(chuàng)木酚、4-乙烯 基藜蘆醚或其混合物。
7.權(quán)利要求5或6中任一項(xiàng)的咖啡提取物，其為生咖啡豆提取物。
8.制備食物或飲料產(chǎn)品的方法，其中使用根據(jù)權(quán)利要求5或6中任一項(xiàng)的咖啡提取物 作為所述食物或飲料產(chǎn)品的成分。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述食物或飲料產(chǎn)品為咖啡飲料；純可溶咖啡；軟飲 料；膳食補(bǔ)充劑；乳產(chǎn)品；谷類產(chǎn)品；水果或蔬菜汁產(chǎn)品；或糖食產(chǎn)品。
10.每克干物質(zhì)包含至少0.1毫克4-乙烯基兒茶酚和/或其甲氧基衍生物的食物或飲 料廣品。
11.咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸作為抗氧化劑的用途。
12.咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于制備藥物的用途。
13.咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于制備制劑的用途，所述制劑用于治療或預(yù)防皮膚 疾病、糖尿病、腦功能障礙、炎癥、肥胖、癌癥、神經(jīng)變性疾病、認(rèn)知功能減退、輕度 認(rèn)知功能損害、癡呆、情緒障礙、抑郁、睡眠障礙、涉及蛋白質(zhì)聚集的疾病、阿爾茨海 默病、黃斑變性或糖尿病。
14.權(quán)利要求13的用途，其中所述制劑為食物或飲料產(chǎn)品。
15.咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于促進(jìn)骨重構(gòu)的用途。
16.咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于提高人或動物的體內(nèi)抗氧化能力和/或腦保護(hù)的 用途。
17.咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸用于制備食物或飲料產(chǎn)品的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的用途，和包含咖啡綠原酸衍生的脫羧酚酸的產(chǎn)品，特別是咖啡提取物，以及制備這些產(chǎn)品的方法?？Х劝G原酸，根據(jù)本發(fā)明這些綠原酸可轉(zhuǎn)化為脫羧酚酸。得到的脫羧酚酸具有抗氧化和/或抗炎癥特性，其可用作食物或飲料產(chǎn)品的成分和用于治療某些健康情況。
文檔編號A61K36/74GK102014648SQ200980115501
公開日2011年4月13日 申請日期2009年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月30日
發(fā)明者C·卡萬, K·克雷亨比爾, N·佩奇, R·貝爾-賴?yán)? T·W·拉布 申請人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司