專利名稱：麻疹-人乳頭瘤組合疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及針對麻疹和人乳頭瘤病毒(HPV)的組合疫苗。特別地，本發(fā)明涉及含 有異源核酸的重組麻疹病毒載體，所述異源核酸編碼一種或多種源自于HPV的抗原，優(yōu)選 HPV 16型(以及任選地18型、6型和11型)的主要衣殼抗原Li、次要衣殼抗原L2、早期基 因E6及早期基因E7癌蛋白。在第一個(gè)實(shí)施方案中，產(chǎn)生表達(dá)HPV抗原(優(yōu)選Ll和/或L2)的預(yù)防性疫苗，以使 其在哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)中可誘導(dǎo)強(qiáng)的長效免疫應(yīng)答，以提供針對HPV和MV感染的保護(hù)。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，產(chǎn)生表達(dá)E6和E7蛋白(以及任選地Ll和I^)的治療性疫苗，以使 其誘導(dǎo)強(qiáng)免疫應(yīng)答，該免疫應(yīng)答可以在早期或晚期階段解決持久的HPV感染，包括HPV誘導(dǎo) 的宮頸癌。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合疫苗易于大規(guī)模生產(chǎn)，并能夠以低成本分發(fā)。
背景技術(shù)：
人乳頭瘤病毒誘導(dǎo)的綜合征每年世界范圍內(nèi)約有五十萬新增宮頸癌登記病例(特別是在發(fā)展中國家中)，是 婦女死亡的第二大誘因。人乳頭瘤病毒(HPV)是宮頸癌的首要致病因子，在超過95%的此 類癌癥中可發(fā)現(xiàn)HPV的DNA(I)。自1998年以來，預(yù)防和治療的策略主要依賴于結(jié)構(gòu)化篩選 程序來檢測并消除侵襲前(pre-invasive)的疾病。不過，HPV檢測的使用受到社會(huì)問題的 限制，目前的主要障礙是其高成本。因此，開發(fā)預(yù)防HPV感染的疫苗代表了預(yù)防宮頸癌的重 要機(jī)會(huì)，同時(shí)治療性免疫將會(huì)在惡變前及惡性疾病的治療中很有價(jià)值。HPV屬于可感染扁平上皮的一個(gè)雙鏈小DNA病毒大家族。(近來對乳頭瘤病毒 的全面綜述見 Howley PM 和 Lowy DIU2007)，在 Fields Virology 第 5 版中)，Knipe， D.M.和Howley主編，P.M. Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia PA 19106,USA, 2299-2354頁。迄今為至，已經(jīng)描述了超過100種基因型，其中至少35種類型感染生殖道。 盡管多數(shù)HPV類型產(chǎn)生良性病變，但一小部分基因型與扁平上皮內(nèi)高度病變和宮頸癌強(qiáng)相 關(guān)。這一部分已被鑒定為“高風(fēng)險(xiǎn)”，估計(jì)HPV-16可解釋約60%的宮頸癌，而HPV-18可解釋 另外的 10% -20% ο 其他高風(fēng)險(xiǎn)類型包括 31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 和 73 型。 低風(fēng)險(xiǎn)HPV (如HPV-6和HPV-11)導(dǎo)致良性生殖器疣(90 %的良性尖銳濕疣為HPV6或11陽 性)?？上畛Ｒ姼唢L(fēng)險(xiǎn)類型的16/18型二價(jià)疫苗也能夠應(yīng)對低風(fēng)險(xiǎn)類型。理想的疫苗 將通過使用來自不同類型的抗原和/或含有保守區(qū)的抗原來保護(hù)機(jī)體抵御其他HPV類型。HPV基因組編碼八種蛋白。晚期Ll和L2基因編碼衣殼蛋白；早期蛋白El和E2 負(fù)責(zé)病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，E4涉及病毒從被感染細(xì)胞中的釋放。高風(fēng)險(xiǎn)型HPV病毒DNA在宿主 基因組中的整合導(dǎo)致失去El或E2介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄控制，并因此導(dǎo)致負(fù)責(zé)惡性轉(zhuǎn)化過程的E6和 E7蛋白的過表達(dá)O)。來自高風(fēng)險(xiǎn)亞型的結(jié)構(gòu)蛋白Ll代表了預(yù)防性疫苗的最佳靶標(biāo)。另 一方面，E6和E7是顯而易見的治療性靶標(biāo)。實(shí)際上有幾種預(yù)防性HPV疫苗制劑基于來自HPV16和18型(在一些情況下還有 其他類型)的主要病毒衣殼蛋白Li，其作為單體，或是作為病毒狀顆粒(VLP) (W094/00152、W094/20137.W093/02184 和 W094/05792)。VLP 可額外包含 L2 蛋白，例如 W093/00436 中所 述以L2為基礎(chǔ)的疫苗。這些疫苗具有高免疫原性并且看來是安全的，但是其高成本使得無 法在風(fēng)險(xiǎn)人群中一般性普及，并且其HPV類型特異性代表了另一種局限性。因此，仍然需要 開發(fā)針對HPV的其他改良疫苗，它們應(yīng)該是廉價(jià)的。此外，用抗原進(jìn)行的疫苗接種主要誘導(dǎo) 抗體特異性應(yīng)答，它對已產(chǎn)生的HPV感染及相關(guān)疾病益處甚微或者沒有益處。治療性疫苗的開發(fā)不僅依賴于中和抗體的產(chǎn)生，還主要依賴于特異性細(xì)胞免疫應(yīng) 答的誘導(dǎo)，而這正是清除已產(chǎn)生感染的關(guān)鍵因素。因此，治療性疫苗需要包括一些源自于 早期HPV蛋白而非晚期蛋白的抗原決定簇。高風(fēng)險(xiǎn)HPV類型的早期基因(E6和E7)編碼 主要轉(zhuǎn)化蛋白。這些基因能夠使上皮細(xì)胞永生化，被認(rèn)為在致癌過程的啟動(dòng)中起作用。這 些早期基因的蛋白產(chǎn)物干擾腫瘤抑制基因的正常功能。HPV E6能夠與p53相互作用，導(dǎo)致 其機(jī)能障礙，從而損害其在DNA發(fā)生錯(cuò)誤時(shí)阻斷細(xì)胞周期的能力。E6還使端粒酶長度保持 在其臨界點(diǎn)之上，保護(hù)細(xì)胞不發(fā)生凋亡。HPVE7與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(pRb)結(jié)合，激活啟 動(dòng)細(xì)胞周期的基因，導(dǎo)致組織增殖。E6和E7蛋白代表了優(yōu)良的靶標(biāo)，已經(jīng)描述了基于E6 的多種HPV治療性疫苗的方法。近年來，已經(jīng)描述了許多基于肽/蛋白或遺傳免疫的策略 用于誘導(dǎo)HPV特異性CTL活性。關(guān)于針對HPV之疫苗開發(fā)進(jìn)展的綜述見參考文獻(xiàn)(3)。已 使用已知主要促進(jìn)細(xì)胞應(yīng)答的DNA疫苗(編碼HPV蛋白的質(zhì)粒DNA)進(jìn)行了嘗試。盡管事 實(shí)上DNA疫苗在小鼠模型中工作良好，但大量臨床試驗(yàn)卻未能提供在人類中作用原理的證 據(jù)。與基于肽的方法相關(guān)的主要缺點(diǎn)包括MHC多態(tài)性問題以及誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受而非T細(xì) 胞活化的風(fēng)險(xiǎn)。由于誘導(dǎo)了特異性T細(xì)胞耐受，用腫瘤特異性肽進(jìn)行的疫苗接種已顯示導(dǎo) 致腫瘤過度生長的增強(qiáng)。用更大的蛋白進(jìn)行免疫可克服這些問題，但需要高效的體內(nèi)表 達(dá)系統(tǒng)和/或安全的佐劑以引發(fā)高效的細(xì)胞免疫應(yīng)答。涉及重組病毒載體疫苗的方法尚 在開發(fā)中(Poxvirus, Adenovirus, Alphavirus, Poliovirus e Herpes Virus)。例如在 US2007269409 (W02004044176)中對基于腺病毒的疫苗進(jìn)行了描述，其編碼HPV的E6或E7 蛋白?；谙俨《镜囊呙缒軌虍a(chǎn)生長效免疫，但是，HPV DNA在宿主基因組中的整合仍有可 能發(fā)生，并可能成為安全性方面的限制。鑒于上述不足，使用麻疹病毒作為載體來表達(dá)HPV 抗原代表了開發(fā)預(yù)防性組合HPV-麻疹疫苗以及作為治療性HPV疫苗的創(chuàng)新策略?；诼?疹病毒的免疫載體麻疹病毒(MV)是副粘病毒科(Paramyxoviridae)的一員。MV的非區(qū)段基因組具 有反信使極性，導(dǎo)致純化的基因組RNA在體內(nèi)或體外均不翻譯，不具有感染性。已對非區(qū)段 (-)鏈RNA病毒的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制及其作為病毒顆粒的裝配進(jìn)行了研究和報(bào)道。麻疹病毒的 轉(zhuǎn)錄與復(fù)制不牽涉感染細(xì)胞的核，而是發(fā)生在所述感染細(xì)胞的胞質(zhì)中。麻疹病毒基因組包 括編碼來自六個(gè)基因(命名為N、P、M、F、H和L)的六個(gè)主要結(jié)構(gòu)蛋白以及來自P基因的另外 兩個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白的基因。MV是導(dǎo)致幼兒急性發(fā)熱疾病的主要原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO) 估計(jì)，每年有一百萬幼兒死于麻疹。這一高死亡主要發(fā)生在發(fā)展中國家，但近些年內(nèi)工業(yè)化 國家比如美國也再次受到了麻疹流行的侵襲，主要是由于免疫計(jì)劃堅(jiān)持得不徹底(5)。目 前，正在使用幾種減毒的活MV疫苗毒株(包括ktiwarz、Moraten和Edmonston-hgreb毒 株)，它們幾乎都通過在非人細(xì)胞中多次傳代而來自于最初的Edmonston菌株(6)。MV疫 苗被證明是迄今為止開發(fā)的最安全、最穩(wěn)定及有效的人類疫苗之一。該疫苗在許多國家大 規(guī)模生產(chǎn)，并通過WHO的擴(kuò)大免疫規(guī)劃(Extended Program on Immunization,EPI)以低成本分發(fā)，在單次注射后誘導(dǎo)終身免疫G，7)，加強(qiáng)也是有效的。保護(hù)由抗體以及CD4和CD8T 細(xì)胞同時(shí)介導(dǎo)。已顯示抗體和⑶8細(xì)胞的持久性高達(dá)疫苗接種后25年(7)。Martin Billeter及其同事建立了一種創(chuàng)新而有效的反向遺傳學(xué)方法，從源自于 Edmonston毒株MV的克隆脫氧核糖核酸(cDNA)產(chǎn)生非區(qū)段性負(fù)鏈RNA病毒，如8和WO 97/06270中所述，組裝麻疹病毒的反基因組ρ (+) MVEZ的方案示于

圖1。首先，這些技術(shù)允 許定點(diǎn)誘變，使得能夠?qū)@些病毒生物學(xué)情況的多個(gè)方面獲得重要的深入了解。同時(shí)，插入 了外源編碼序列，從而a)允許通過標(biāo)記基因的表達(dá)對病毒的體內(nèi)復(fù)制進(jìn)行定位，b)開發(fā)針 對麻疹及其他病原體的候選多價(jià)疫苗，和c)創(chuàng)造候選溶瘤細(xì)胞病毒。對于RNA病毒而言意 想不到的顯著的重組體遺傳穩(wěn)定性以及可插入遺傳材料的高負(fù)載能力(超過61Λ)都從實(shí) 驗(yàn)上支持了這些病毒的載體用途。已知的優(yōu)點(diǎn)也有利地在考慮之內(nèi)，比如所述載體與DNA 病毒相比的小基因組尺寸、減毒MV作為已明確證明具有高安全性及效力之疫苗的豐富臨 床經(jīng)驗(yàn)，以及每劑疫苗的低生產(chǎn)成本。重組麻疹病毒的核苷酸序列必須包含復(fù)制子，其帶有的核苷酸總數(shù)為6的倍數(shù)。 “6倍數(shù)規(guī)則(rule of six) ”表述為這一事實(shí)，即存在于重組cDNA中的核苷酸總數(shù)最終為 六的倍數(shù)的核苷酸總數(shù)，該規(guī)則允許麻疹病毒的基因組RNA高效復(fù)制。將異源DNA克隆到MV載體的額外轉(zhuǎn)錄單元(Additional Transcription Unit, ATU)中，所述ATU插入到對應(yīng)于麻疹病毒反基因組RNA的cDNA中。所述ATU的定位可以在 所述cDNA上變化但其總是定位于將使其從麻疹病毒表達(dá)梯度中受益的位點(diǎn)中。因此，適 于克隆異源DNA序列的ATU或任何插入位點(diǎn)可散布在cDNA中，插入位點(diǎn)(尤其是ATU)的 優(yōu)選實(shí)施方案存在于序列的N端部分，尤其是在麻疹病毒L基因上游的區(qū)域中，有利地在所 述病毒M基因的上游，更優(yōu)選所述病毒N基因的上游。重組麻疹病毒的有利免疫學(xué)特性可以展示于動(dòng)物模型中，所述模型選自對麻疹病 毒易感的動(dòng)物，其中測定針對異源抗原和/或針對麻疹病毒的體液和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答。在 此類適于用作表征免疫應(yīng)答之模型的動(dòng)物中，本領(lǐng)域技術(shù)人員特別地可利用表達(dá)⑶46特 異MV受體的轉(zhuǎn)基因小鼠，或猴子。該技術(shù)允許生產(chǎn)適合于用作組合MV疫苗的含有并穩(wěn)定表達(dá)外源基因的拯救病 毒。作為構(gòu)思證據(jù)，MV已被用于表達(dá)源自SIV、HIV、乙型肝炎、腮腺炎、西尼羅河(WN)病毒 和SARSCoV(9-U)的抗原。在多數(shù)此類研究中，表達(dá)異源抗原的重組MV看來在轉(zhuǎn)基因小鼠 模型中誘導(dǎo)了特異性體液中和抗體(13)，并顯示出誘導(dǎo)針對某些蛋白的細(xì)胞免疫應(yīng)答(9， 11)。目前，基于MV的任何候選重組疫苗的臨床試驗(yàn)僅處于計(jì)劃階段，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持這一 假說MV組合疫苗應(yīng)該在引發(fā)針對其它病原體的長持久性免疫保護(hù)方面與針對載體病毒 本身一樣有效。實(shí)際上，就表達(dá)WNV gpE的MV來說，已記載在猴體內(nèi)有長達(dá)六個(gè)月的完全 保護(hù)(14)，并且表達(dá)登革熱抗原的MV誘導(dǎo)了中和抗體的長期產(chǎn)生(15)。此外，在轉(zhuǎn)基因小 鼠和恒河猴中，重組拯救MV能夠在存在對MV的已有免疫時(shí)誘導(dǎo)針對異源抗原的特異性抗 體應(yīng)答(9，11，16)?；畹恼戎亟MMV免疫易于在大多數(shù)國家大規(guī)模生產(chǎn)，并能夠以低成本分發(fā)。就安 全性而言，MV復(fù)制僅在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)生，排除了整合到宿主DNA中的可能。這些特性使得重組 拯救MV疫苗成為用于HPV抗原多價(jià)疫苗接種載體的富有吸引力的候選。然而，成年人(甚 至已經(jīng)MV免疫過的個(gè)體)也可受益于MV重組免疫，因?yàn)楸景l(fā)明重組形式MV病毒的再施用可導(dǎo)致抗MV抗體的加強(qiáng)(11)。迄今為至，尚未開發(fā)出方法來產(chǎn)生能誘導(dǎo)MV免疫與HPV免疫之組合的疫苗。本發(fā)明特別涉及重組麻疹病毒的制備，所述病毒帶有編碼源自HPV之抗原的異源 核酸。發(fā)明詳述本發(fā)明的目的在于從能夠包含穩(wěn)定整合核苷酸序列的重組麻疹載體生產(chǎn)麻 疹-HPV組合疫苗，所述核苷酸序列編碼來自不同HPV類型的Li、L2、E6和/或E7蛋白。本發(fā)明包括重組MV-HPV病毒的拯救(rescue)，所述病毒能夠在易感的轉(zhuǎn)基因小 鼠、猴和人宿主中感染、復(fù)制并表達(dá)L1、L2、E6或E7蛋白。 此外，本發(fā)明包括多價(jià)重組麻疹-HPV載體的構(gòu)建，其中兩種不同抗原被同時(shí)克隆 并表達(dá)在同一載體內(nèi)，賦予針對這兩者的免疫。另外，本發(fā)明涉及不同重組麻疹-HPV病毒的組合，其各自帶有并表達(dá)來自于不同 HPV類型的基因，以在宿主中引發(fā)針對不同HPV類型的免疫應(yīng)答。此外，本發(fā)明包括含有此種重組病毒的疫苗的生產(chǎn)方法。此外，本發(fā)明還涉及白介素或白介素-2作為佐劑用于提高組合疫苗的應(yīng)答的用 途。最后，本發(fā)明涉及疫苗，其能夠在人中誘導(dǎo)針對HPV和麻疹病毒的強(qiáng)效且終身的 免疫應(yīng)答，以預(yù)防感染和/或治療與感染相關(guān)的疾病。表 權(quán)利要求
1.能夠引發(fā)針對麻疹和HPV兩者的免疫應(yīng)答并提供針對它們的保護(hù)的麻疹-HPV組合 疫苗，其包含表達(dá)HPV抗原的重組麻疹疫苗病毒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的麻疹-HPV組合疫苗，其中所述重組麻疹疫苗病毒表達(dá)一種或不同 種HPV抗原的至少一種Ll蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的麻疹-HPV組合疫苗，其中所述Ll蛋白選自HPV16-L1、HPV18-L1 以及 HPV6-L1 和 HPVl I-Ll。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的麻疹-HPV組合疫苗，其中所述重組麻疹疫苗病毒表達(dá)一種或不同 種HPV抗原的至少一種L2蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的麻疹-HPV組合疫苗，其中所述L2蛋白選自HPV16-L2、HPV18-L2、 HPV6-L2 和 HPVl1-L2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的麻疹-HPV組合疫苗，其中所述重組麻疹疫苗病毒表達(dá)一種或不同 種HPV抗原的至少一種E6或E7蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的麻疹-HPV組合疫苗，其中所述E6蛋白選自HPV16-E6、HPV18-E6 和 HPV6-E6。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的麻疹-HPV組合疫苗，其中所述E7蛋白選自HPV16-E7、HPV18-E7 和 HPV6-E7。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的麻疹HPV組合疫苗，其中所述HPV抗原由哺乳動(dòng)物表 達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的麻疹-HPV組合疫苗，其中所述哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)為^3T-3-46 細(xì)胞。
11.載體，其包含不同HPV類型及麻疹之抗原的核苷酸序列。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的載體，其中所述載體包含選自圖fe-51中所述的核苷酸序列。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的載體，其中所述載體還包含選自圖如和4b中所述的核苷酸序列。
14.根據(jù)權(quán)利要求11的載體，其中所述抗原選自HPV-16、HPV-18、HPV-6和HPV-Il的 Ll或L2或E6或E7蛋白。
15.根據(jù)權(quán)利要求11的載體，其中Ll的序列被克隆到麻疹病毒序列的P和M蛋白之間 或H和L蛋白之間。
16.含有權(quán)利要求11所述載體的宿主。
17.根據(jù)權(quán)利要求20的宿主，其選自大腸桿菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。
18.根據(jù)權(quán)利要求1的組合疫苗，其中重組麻疹病毒來源于衍生自EdmostonZagreb的 疫苗株。
19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合疫苗，其包含重組麻疹病毒，該重組麻疹病毒中 插入了編碼完整HPV16-L1、HPV18-L1以及HPV6-L1和HPV11-L1的核酸序列。
20.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合疫苗，其包含重組麻疹病毒，該重組麻疹病毒中 插入了編碼 HPV16-L2、HPV18-L2、HPV6-L2 和 HPVl 1-L2 的核酸序列。
21.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合疫苗，其包含重組麻疹病毒，該重組麻疹病毒中 插入了編碼HPV16-E6、HPV18-E6和HPV6-E6的核酸序列。
22.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合疫苗，其包含重組麻疹病毒，該重組麻疹病毒中插入了編碼HPV16-E7、HPV18-E7和HPV6-E7的核酸序列。
23.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合疫苗，其包含重組麻疹病毒，該重組麻疹病毒 中插入 了編碼 HPV16-L1 或 HPV18-L1 或 HPV6-L1 或 HPVl 1-L1 或 HPV16-L2 或 HPV18-L2 或 HPV6-L2 或 HPVl 1-L2 或 HPV16-E6 或 HPV18-E6 或 HPV6-E6 或 HPV16-E7 或 HPV18-E7 或 HPV6-E7或其任意組合的核酸序列。
24.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其中所述重組麻疹病毒中插入了同時(shí)編碼兩 種或三種上述HPV抗原的至少兩種或三種核酸序列。
25.根據(jù)權(quán)利要求1的疫苗，其中所述重組麻疹病毒包含如圖fe至51所述的編碼序列。
26.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其中所述重組麻疹病毒除編碼HPV抗原外，還 編碼具有佐劑特性的蛋白。
27.根據(jù)權(quán)利要求25的疫苗，其中所述佐劑為白介素，優(yōu)選為白介素2。
28.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其中所述疫苗基本由至少一種所述重組麻 疹-HPV病毒或兩種至若干種這些病毒的混合物組成。
29.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其中所述重組麻疹HPV病毒或者兩種至若干 種這些病毒的混合物中不含有缺損干擾顆粒(DI)。
30.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其中偶然產(chǎn)生的DI顆粒已通過空斑純化消除。
31.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其中偶然產(chǎn)生的DI顆粒已通過終點(diǎn)稀釋法消除。
32.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其中偶然產(chǎn)生的DI顆粒已通過物理方法消除。
33.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其中所述物理方法為離心。
34.根據(jù)前述權(quán)利要求的疫苗，其作為組合疫苗的組分，其中其他組分為風(fēng)疹、腮腺炎、 水痘或另一減毒活疫苗病毒，所述病毒為為天然減毒的或重組的，單獨(dú)的或組合的。
35.根據(jù)前述權(quán)利要求的疫苗，所述疫苗與用于腸胃外給藥的合適穩(wěn)定劑和山梨醇混合。
36.根據(jù)前述權(quán)利要求的疫苗，所述疫苗與適于鼻內(nèi)給藥的合適穩(wěn)定劑和/或佐劑混合。
37.根據(jù)前述權(quán)利要求的疫苗，所述疫苗與適于吸入給藥的合適穩(wěn)定劑和/或佐劑混合。
38.根據(jù)前述權(quán)利要求的疫苗，所述疫苗與適于口服給藥的合適穩(wěn)定劑和/或佐劑混合。
39.根據(jù)前述權(quán)利要求的疫苗，所述疫苗與適于任何栓劑制劑的合適穩(wěn)定劑和/或佐 劑混合。
40.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，所述疫苗與適于經(jīng)皮給藥的合適穩(wěn)定劑和/ 或佐劑混合。
41.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其包含重組麻疹病毒，所述重組麻疹病毒帶有 實(shí)施例中所報(bào)告具體序列所述的編碼序列。
全文摘要
本發(fā)明涉及針對麻疹和人乳頭瘤病毒(HPV)的組合疫苗。特別地，本發(fā)明涉及含有異源核酸的重組麻疹病毒載體，所述異源核酸編碼一種或多種源自于HPV的抗原，優(yōu)選HPV 16型(以及任選地18型、6型和11型)的主要衣殼抗原L1、次要衣殼抗原L2、早期基因E6及早期基因E7癌蛋白。在第一個(gè)實(shí)施方案中，產(chǎn)生表達(dá)HPV抗原(優(yōu)選L1和/或L2)的預(yù)防性疫苗，以使其在哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)中可誘導(dǎo)強(qiáng)的長效免疫應(yīng)答，以提供針對HPV和MV感染的保護(hù)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，產(chǎn)生表達(dá)E6和E7蛋白(以及任選地L1和L2)的治療性疫苗，以使其誘導(dǎo)強(qiáng)免疫應(yīng)答，該免疫應(yīng)答可以在早期或晚期階段解決持久的HPV感染，包括HPV誘導(dǎo)的宮頸癌。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合疫苗易于大規(guī)模生產(chǎn)，并能夠以低成本分發(fā)。
文檔編號A61K39/12GK102099053SQ200980119406
公開日2011年6月15日 申請日期2009年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月26日
發(fā)明者弗蘭切斯卡·斯庫代里, 朱塞平娜·坎塔雷拉, 桑吉夫·K·門迪雷塔, 維維亞娜·詹尼諾, 賴因哈德·格呂克, 阿加塔·法齊奧, 馬丁·比耶泰 申請人:卡迪拉保健有限公司