專(zhuān)利名稱(chēng)：Hancornia speciosa的提取物及其藥物組合物的制作方法
Hancornia spec iosa的提取物及其藥物組合物本發(fā)明描述了獲自Hancornia speciosa Gomes(EHS)葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物，這種植物在巴西通常稱(chēng)為“曼加巴(mangaba)”，并描述了富含甲基肌醇、蘆丁和奎寧酸的級(jí)分，認(rèn)為這些物質(zhì)的活性是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(下文中稱(chēng)為ACE)抑制劑、血管舒張、抗高血壓和抗氧化劑。特別地，本發(fā)明涉及從前述植物物種的葉子獲得富含對(duì)映異構(gòu)體L-(+)_甲基肌醇、蘆丁和奎寧酸的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分，該級(jí)分含有ACE抑制、血管舒張、抗高血壓和抗氧化的活性本發(fā)明還包括含有源自物種Hancornia speciosa Gomes的富含環(huán)多醇和類(lèi)黃酮的提取物或級(jí)分的藥物制劑，以及所述制劑用于治療心血管疾病的用途，這些疾病如但不限于，動(dòng)脈高壓、動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄和心臟或大腦缺血。已經(jīng)對(duì)在此所述的級(jí)分和物質(zhì)進(jìn)行了測(cè)試并顯示出具有ACE抑制、血管內(nèi)皮相關(guān)和無(wú)關(guān)的血管舒張、降血壓和抗氧化活性。已經(jīng)顯示出上述級(jí)分和物質(zhì)能夠在高血壓動(dòng)物模型中降低動(dòng)脈壓?，F(xiàn)有技術(shù)的狀況在歷史上，藥用植物構(gòu)成了發(fā)現(xiàn)和發(fā)展現(xiàn)代治療中所用藥品的有效來(lái)源 (World Health Organization(世界衛(wèi)生組織)· TraditionalMedicine Strategy(傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)策略)2002-2005. Geneva :World HealthOrganization,2002. 74 p. ；NEWMAN, D. J. ；CRAGG, G. Μ. ；SNADER, K. Μ. Natural Products as Sources of New Drugs over thePeriod 1981-2002 (在1981-2002期間作為新藥來(lái)源的天然產(chǎn)物).J. Nat. Prod.， v. 66, p. 1022-1037,2003 ；BUTLER, Μ. S.Natural products todrugs :natural product derived compounds in clinical trials (藥物的天然產(chǎn)物臨床試驗(yàn)中天然產(chǎn)物衍生的化合物)· Nat. Prod. Rep.，v. 22，p. 162-195，2005 ；CHIN, Y. W. ；BALUNAS Μ. J. ；CHAI, H. B.； KINGH0RN, A. D. Drug Discovery From Natural Sources (天然來(lái)源的藥物研發(fā))，AAPS J.，v. 8，η. 2, ρ.Ε23-Ε253，2006)。目前總共有122種來(lái)自植物的天然產(chǎn)物用作藥物，其中 80%涉及種族藥理學(xué)使用(FABRICANT, D. S. =FARNSffORTH, N. R. The value of plantsused in traditional medicine for drug discovery(傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中所用植物用于藥物研發(fā)的價(jià)值),Environ. Health Perspect. , v. 109,p.6-75,2001)。在1940-2002期間，140種藥物得到批準(zhǔn)用于癌癥治療，其中20種(14. 3% )是天然產(chǎn)物，31種(22. 1% )源自天然產(chǎn)物，28種(20% )是基于天然原型全部或部分合成的產(chǎn)物，41種(29. 3% )是基于隨機(jī)合成的產(chǎn)物。在1981至2002之間批準(zhǔn)的75種新的抗高血壓藥物的情況中，1種(1.3%)源自天然產(chǎn)物，48種(60.8%)基于天然產(chǎn)物得到合成， 26 種(32. 9% )是基于隨機(jī)合成的產(chǎn)物(NEWMAN，D. J. ；CRAGG, G. Μ. ；SNADER, K. Μ. Natural Products as Sources of NewDrugs over the Period 1981-2002 (在 1981-2002 期間作為新藥來(lái)源的天然產(chǎn)物).J. Nat. Prod.，v. 66, p. 1022-1037，2003)。盡管事實(shí)是從天然產(chǎn)物新衍生的化合物的數(shù)量在2004年有所下降，而恰在那年在美國(guó)有幾種這樣的藥物注冊(cè)用于 III 期臨床試驗(yàn)(BUTLER，M. S. Natural products to drugs natural product derived compounds inclinical trials (藥物的天然產(chǎn)物臨床試驗(yàn)中天然產(chǎn)物衍生的化合物).Nat. Prod. R印.,v. 22,p. 162-195，2005)。因此，可以聲稱(chēng)天然產(chǎn)物為有前景的研發(fā)新藥物的來(lái)源。巴西具有豐富的生物多樣性，其分布在不同的生物群落中，包括Mata
(大西洋熱帶雨林)、Floresta XwiZZ^i/CiZ (亞馬遜熱帶雨林)、Caatinga(熱帶灌叢林)、Pantanal (溫帶沼澤草地(floodedgrassland)) > Floresta de Araucaria(巴西松林)和Cerrado (熱帶草地和大草原)。后者位于巴西中心平原區(qū)，包括以下的幾個(gè)州 MinasGerais、Mato Grosso、Mato Grosso do Sul、Goids、Tocantins、SSo Paulo、Paranci、 Maranh3o和Piaui，并且是巴西第二大生物群落，具有大約2X106Km2。Cerrado具有草本植被，樹(shù)木和灌木分散其中。其富鐃的植物群包括成千上萬(wàn)的屬于數(shù)百個(gè)屬和科的維管植物種。幾種cerrado植物在傳統(tǒng)上用于醫(yī)學(xué)目的。因此，Cerrado是生物活性植物化學(xué)的潛在來(lái)源(FERREIRA，M. B. Plantas portadoras de Sllbstancias medicamentosas, de uso popular，nos cerrados de MinasGerais. Inf. Agropec.，v. 6, η. 61, p. 1-23, 1980 ；GOTTSBERGER，I. S. 0. cerrado como potencial do plantas medicinais e toxicas. Oreades，v. 8 (14/15)，p. 15—30，1981/1982 ；HIRSCHMANN，G. S. ；ARIAS，A. R. A survey of medicinal plants of Minas Gerais (MinasGerais 藥用植物縱覽)，Brazil. J.Ethnopharmacol.，v.29，p. 15-172，1990 ；GAVILANES，M. L. ；BRANDO，M. Frutos， folhas e raizes deplantas do cerrado， suas propriedades medicinais， tendo como veiculoa cacha^a. Inf. Agropec.，v. 16，p. 4-44,1992 ；KREG，T. ；FIGUEIREDO， I. B. ；SANO，Ε. E. ；ALMEIDA，C. A. ；SANTOS，J. R. ；MIRANDA，H. S. ；SATO，M.N. ；ANDRADE， S. M. S. Greenhouse gas emissions from biomassburning in the non-anthropogenic cerrado using orbital data (使用軌道數(shù)據(jù)在非人為的cerrado中來(lái)自生物燃燒的溫室 K本Ml) 0 Brasi Iia :BrazilianMinistry of Science and Technology, Secretariat of Science andTechnology Policies and Programs，Department of ThematicPrograms, (巴西利亞巴西科技部，科技政策和項(xiàng)目秘書(shū)處，主題項(xiàng)目部)，2002)。在Cerrado的整個(gè)范圍中出現(xiàn)了幾個(gè)物種；Hancornia speciosaGomes (夾杉匕禾斗)i 胃中—禾中(GOTTSBERGER, I.S. O cerradocomo potencial de plantas
medicinais e toxicas. Oreades, v.8 (14/15)， p. 15—30，1981/1982 ；SILVA-FILHO, P. V. ；BRANDO, Μ.Plantasmedicinais de uso popular coletadas e comercializadas na regiSo metropolitana de Belo Horizonte. Daphne, ν· 2, η· 2, ρ· 3-53,1992)。根據(jù)在cerrado進(jìn)行的種族植物學(xué)調(diào)查，該物種通常推薦用于治療幾種疾病。其樹(shù)皮用于皮膚病(FERREIRA, Μ. B. Plantas portadoras de Sllbstancias medicamentosas, de uso popular,nos cerrados de MinasGerais. Inf. Agropec. , v. 6, n. 61, p. 1-23,1980 ；BARROS, Μ. A. G. Ε. Plantas medicinais—usos etradi^OeSem Braslia-DF. Oreades, v. 8,n. 14/15， p.14-151，1981/1982，BRITTO，K. B. ；BRITTO，I.C. Plantascom atributos medicinais do Herbario da Universidade de Feira deSantana. Oreades, v. 8, n. 14/15，p. 152-163， 1981/1982 ；SILVA-FILHO, P. V. ；BRANDO, M.Plantas medicinais de usopopular coletadas e comercializadas na F6gia0 metropolitana de BeloHorizonte. Daphne， v. 2,n. 2,p. 3-53，1992 ；RODRIGUES，V. E. G. ；CARVALHO，D. A. Levantamento etnobotanico de plantasmedicinais no dominio Cerrado na regiao do Alto RioGrande-MinasGerais. Cienc. Agrotec.，ν· 25，η· 1，ρ· 102—123，2001)，治療肝病(FERREIRA， Μ. B. Plantas portadoras de Sllbstancias medicamentosas，de uso popular, nos cerrados de Minas Gerais. Inf.Agropec.，v. 6，n.61，p. 1-23，1980 ；BARROS, Μ. A. G. Ε. Plantasmedicinais-usos e tradi^OCS em Braslia-DF. Oreades, v. 8，η. 14/15， ρ·14-151，1981/1982 ;BRITT0，K. B. ；BRITT0，I.C. , Plantas cornatributos medicinais do Herbario da Universidade de Feira deSantana. Oreades, v. 8,n.14/15,p.152-163, 1981/1982 ；SILVA-FILHO, P. V. ；BRANDO, M.Plantas medicinais de usopopular coletadas e comercializadas na F6gia0 metropolitana de BeloHorizonte. Daphne， v. 2,n. 2,p. 3-53，1992 ；RODRIGUES，V. E. G. ；CARVALHO，D. A. Levantamento etnobotanico de plantas medicinaisno dominia Cerrado na regiao do Alto Rio Grande-Minas Gerais, Cienc. Agrotec.，v. 25, n. 1，p. 102-123，2001)，作為抗炎劑(LIMA, J. C. S.； MARTINS，D. T. Screening farmacologico de plantasmedicinais uti1izadas popularmente como antiinflamatorias. In :SIMP0SIO DE PLANTAS MEDICINAIS DO BRASIL，14，F(xiàn)lorian0polis· Resumos…Florian0polis Universidade Federal doParana, 1996. p. 89)，用于治療糖尿病和用于減輕體重的膳食(GRANDI，Τ. M. S. ；LIMA-FILHO，
F.M. ；FERREIRA, S. M. A. Levantamento das plantas medicinais de GraO Mogol. Oreades, v. 8(14/15)，p. 116-125，1981/1982)；根用于治療風(fēng)濕病，作為口服抗高血壓劑(GRANDI, Τ. Μ. S. ；LIMA-FILHO F. Μ. ；FERREIRA，S. Μ. A. Levantamento das plantas medicinais de GraO Mogol. Oreades, ν· 8 (14/15)，p. 116-125,1981/1982 ；HIRSCHMANN，
G.S. ；ARIAS，A. R. A survey of medicinal plants of Minas Gerais (MinasGerais 藥用植物縱覽)，Brazil. J. Ethnopharmaco 1.，v. 29，p. 15-172，1990)；其乳膠和葉子用作收斂劑，用于治療皮膚病和肝病(BRITT0，K.B. ；BRITT0，I. C. Plantas com atributos medicinais do Herbarioda Universidade de Feira de Santana. Oreades,v. 8,η. 14/15， p. 152-163，1981/1982 ；GOTTSBERGER，I. S.O cerrado como potencialde plantas medicinais e toxicas. Oreades, v. 8 (14/15)，p. 15-30，1981/1982)；其果實(shí)用作助消化藥(GAVILANES，Μ. L. ；BRANDO，Μ. Frutos，folhas e razes de plantas do cerrado, suas propriedadesmedicinais，tendo como vei culo a cachaga· Inf. Agropec.，v. 16, p. 4-44，1992)和用作食物(MOURA，j. c. Farmaceutico Joaquim Correa de Mello um sabio botailico campineiro esquecido. Tribuna Farmaceiltica, v. 16，n. 8， p. 144-148，1948)。除了其醫(yī)學(xué)用途，H. speciosa的乳膠是橡膠生產(chǎn)的原料(GAVILANES， M. L. ；BRANDO, Μ. Frutos, folhas e razes de plantas do cerrado, suaspropriedades medicinais，tendo como vei culo a CHCha^H. Inf. Agropec.，v. 16，p. 4-44，1992)。心血管疾病(下文稱(chēng)為CVD)是由于多重風(fēng)險(xiǎn)因素引起的并且構(gòu)成世界人群主要的疾病死亡誘因，與性別和爭(zhēng)議中的國(guó)家發(fā)展水平無(wú)關(guān)。在全世界中，30%的已知死亡原因由 CVD引起，發(fā)達(dá)和發(fā)展中國(guó)家中盛行的所有全球疾病的4. 5%具有高血壓作為其主要的風(fēng)險(xiǎn)因素(WHO. World Health Organization-International Society of Hypertension Guidelines for theManagement of Hypertension. Guidelines Subcommittee(世界 衛(wèi)生組織-高血壓控制的高血壓指導(dǎo)國(guó)際協(xié)會(huì)，指導(dǎo)委員會(huì)).J.Hypertens.，v. 17，p. 151-183,1999 ；World Health Organization/InternationalSociety of Hypertension Writing Group 2003. WHO/ISH statement onmanagement of hypertension (WHO/ISH 關(guān)于高血壓控制的陳述)，J. Hypertens.，ν· 21，ρ· 1983-1992，2003 ；KEARNEY, P. Μ. ；WHELTON, Μ. ；REYNOLDS, K. ；MUNTNER, P. ；WHELTON, P. K.，HE, J. Global burden of hypertension analysis of worldwidedata(全世界數(shù)據(jù)的20種高血壓分析的全球負(fù)擔(dān))，Lancet， v.365, p. 217-223,2005 ；KAPLAN, N. Μ. ；OPIE, L. H. Controversies inhypertension( ^ 血壓中的爭(zhēng)論)，Lancet, v. 367，p. 168-176，2006 ；THAYER ;J. F. ；LANE R. D. The role of vagal function in the risk forcardiovascular disease and mortality( 走神經(jīng)功能在心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)和死亡率中的作用)，Biol. Psychol.，v. 74，p. 224-242， 2007)。盡管大約25%的世界人群(10億人)已經(jīng)診斷為高血壓，但低于三分之一的該人群得到恰當(dāng)治療，因此高血壓引起高死亡率水平(TUNSTALL-PEDOE，H. ；KUULASMAA, K. ， MHNEN, M. ；T0L0NEN, H. ；RU0K0K0SKI, E. ；AM0UYEL, P. ；Contributionof trends in survival and coronary-event rates to changes in coronaryheart disease mortality 10-year results from 37WH0 MONICAProject populations. Lancet, v. 353, p. 1547-1557,1999 ；CH0BANIAN, A. V. ；BAKRIS, G. L. ；BLACK, H. R. ；CUSHMAN, W. C. ；CREEN, L. Α. ；ΙΖΖ0, J. L. JONES, D. W. ；MATERS0N, B. J. ；OPARIL, S. ；WRIGHT, J. Τ. J r. ；R0CELLA, Ε. J. The seventhreport of the Joint National Committee on Prevention,Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Pressure ( K n^^H^W^^Tii^lJi WiS 防、檢測(cè)、評(píng)價(jià)和治療的第七份報(bào)告)，JAMA, v. 289，η. 19，p. 256-2572，2003 ；WHO World HealthOrganization/International Society of Hypertension Writing Group2003. WHO/ISH statement on management of hypertension. J. Hypertens. ,v. 21,p. 1983-1992, 2003 ；KEARNEY,P.M. ；WHELTON,Μ. ；REYNOLDS,K. ；MUNTNER,P. ；WHELTON,P. K. · HE,J. Global burden of hypertension analysis of worldwide data(全世界數(shù)據(jù)的高血壓分析的全球負(fù)擔(dān))·Lancet，v. 365，p. 217-223，2005 ；KAPLAN, N. Μ. ；OPIE, L. H. Controversies in hypertension (高血壓中的爭(zhēng)論)，Lancet, v. 367，p. 168-176，2006)。除了包括教育策略、生活習(xí)慣的改變和藥物治療以外，治療上述疾病還應(yīng)當(dāng)個(gè)別對(duì)待。對(duì) 用于控制高血壓的恰當(dāng)藥物治療選擇應(yīng)當(dāng)考慮幾個(gè)因素，即年齡、腎臟和肝臟功能以及并發(fā)癥。公知糖尿病和慢性腎機(jī)能不全是發(fā)病率的共同因素。這些病狀應(yīng)當(dāng)?shù)玫铰?lián)合治療，以降低死亡風(fēng)險(xiǎn)(WHO. World Health Organization-International Society ofHypertension Guidelines for the Management of Hypertension. Guidelines Subcommittee. J. Hypertens.，v. 17，p. 151-183，1999 ；CH0BANIAN，A. V. ；BAKRIS，G. L. ；BLACK，H. R.； CUSHMAN, W. C. ； CREEN, L. Α. ；ΙΖΖ0，J. L. ；JONES，D. W. ；MATERS0N，B.J. ；0PARIL，S.； WRIGHT，J· T.J r. ； R0CELLA,Ε. J. The seventhreport of the Joint National Committee on Prevention, Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Pressure (聯(lián)合全國(guó)委員會(huì)關(guān)于高血壓的預(yù)防、檢測(cè)、評(píng)價(jià)和治療的第七份報(bào)告)，JAMA，v. 289，η. 19， p. 256-2572,2003 ；WHO. . . 2003 ；BRASIL Ministerio da Satide. Agenda Nacional de Vigilancia Sanitaria. ReSOlu^aO da DiretoriaCalegiada (ROC) η ° 48de 16de maro de 2004. Dispoesobre ο registrode Fitoterapicos. Diario oficial daUniao5 2004KAPLAN, N. M. ；OPIE, L. H. Controversies in hypertension ( ^ . Ji ψ 白勺 ife )，Lancet,V. 367,p. 168-176, 2006 ；THAYER,J.F. ,LANE R. D. Therole of vagal function in the risk for cardiovascular disease andmortality (迷走神經(jīng)功能在心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)和死亡中的作用)，Biol. Psychol.，V. 74，p. 224-242，2007)腎素-血管緊張素系統(tǒng)(下文中稱(chēng)為RAS)對(duì)心血管系統(tǒng)介導(dǎo)幾種作用，包括血壓動(dòng)態(tài)平衡和水-靜電平衡的維持。ACE，也稱(chēng)為激肽酶II，是負(fù)責(zé)血管緊張素I、緩激肽和幾種C-端倒數(shù)第二個(gè)氨基酸不是脯氨酸的其他小肽的C-端部分中二肽的破壞的酶 (Skidgel R. A. eErdos E. The Renin Angiotensin System(腎素血管緊張素系統(tǒng))，Raven Press Ltda, v. 1,10. 1-10. 10，1993)。所述酶結(jié)合內(nèi)皮、上皮細(xì)胞膜，并且在血液和其他體液(同上)中是可溶形式的。無(wú)活性的血管緊張素I肽變成活性血管緊張素II肽的轉(zhuǎn)化期對(duì)于調(diào)節(jié)心血管功能中的RAS作用是關(guān)鍵的。血管緊張素II是有效的血管收縮劑，直接作用于血管平滑肌(Folkow B.等，Acta Physiol. Scand. 53，99-104，1961)。此外，血管緊張素II還刺激交感神經(jīng)系統(tǒng)(外周的和中樞的)，提高血管緊張性。其還通過(guò)醛甾酮釋放和腎血管收縮來(lái)誘導(dǎo)鈉潴留，通過(guò)抗利尿激素的作用引起液體滯留(Biron P.等， J. Clin. Invest. 60，338—347，1961 ；Padfield P. L. e Morton J. J. J. Clin. Endocrinol. 74， 251-259,1977)。在細(xì)胞水平，血管緊張素II誘導(dǎo)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、增殖和過(guò)度增大(Bell L. e Madri J. Am. J. Pathol. 137，7-12，1990 ；ItohH. J. Clin. Invest. 91，2268-2274，1993)。在巴西，基于教授S6rgio Ferreiras小組進(jìn)行的學(xué)術(shù)研究，第一次進(jìn)行了研發(fā)作為抗高血壓劑的ACE抑制劑，通過(guò)該研究證明了埡拉拉卡蝰蛇(Bothrops jararaca) 毒液具有增強(qiáng)對(duì)緩激肽的應(yīng)答的成分，最初將其稱(chēng)為緩激肽強(qiáng)化因子。巴西和美國(guó)研究小組對(duì)這些肽的分離及其作用機(jī)理的研究已經(jīng)得出結(jié)論上述應(yīng)答是ACE抑制劑，其隨后成為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)類(lèi)的原型?？ㄍ衅绽堑谝环N合成的非肽ACEI并發(fā)布用于臨床使用，接著又合成了幾種其他現(xiàn)在使用的ACEI (FERREIRA ROCHA E SILVA, M. Potentiation ofbradykinin and eledoisin by BPF(bradykinin potentiating factor) from Bothrops jararaca venom(通過(guò)來(lái)自埡拉拉卡蝰蛇毒液的BPF (緩激肽強(qiáng)化因子)的血管舒緩肽和章魚(yú)素的強(qiáng)化)，Experientia, v. 21, η. 6，p. 347-349，1965 ； FERREIRA, S. H. ；BARTELT, D. C. ；GREENE ；L.J.Isolation of bradykinin-potentiating peptides fromBothrops jararaca venom(從埡拉拉卡蜂蛇毒液分離血管舒緩肽強(qiáng)化因子)，Biochemistry, v. 9，η.13，p. 2583-2593，1970 ；CUSHMANCHEUNG, H. S. ；SABO, Ε. F.； 0NDETTI, Μ. Α. Design of potentcompetitive inhibitors of angiotensin-converting enzyme (血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的有效競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的設(shè)計(jì))，Carboxyalkanoyl andmercaptoalkanoyl amino acids (羰基燒酉先基禾口巰基燒酉先基氨基酸)，Biochemistry, v. 16, p.5484-5491,1977 ；PETRILL0, Ε. W. Jr. ；0NDETTI, Μ.A.Angiotensin converting enzyme Inhibitors :medicinal chemistry and biological actions (血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑醫(yī)學(xué)化學(xué)和生物作用),Med. Res. Rev.，v. 2，p. 1-41,1982 ；FERREIRA University discoveries and intellectual property rightsfrom Bothrops jararaca bradykinin potentiating peptides toangiotensin converting enzyme inhibitors. Braz. J. Med. Biol. Res. ，v. 27, n. 8,p.1693-1698,1994 ；CUSHMAN,ONDETTI ；M. A.Designof angiotensin converting enzyme inhibitors (血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的設(shè)計(jì))，Nat. Med. , v. 5, η. 1, p. 111-1112,1999 ；LIMA, D. P. Synthesis of angiotensin-converting enzyme (AEC)inhibitors asimportant class of antihypertensive drugs (作為重要類(lèi)另Ij 的抗高血壓藥的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(AEC)抑制劑的合成)，Quim. Nova, 22 (3)，p. 375-381，1999)。合成的ACEI得到大量使用和傳播，并且在臨床上治療高血壓、充血性心機(jī)能不全、心絞痛和預(yù)防突發(fā)性死亡是有效的(The TaskForce on ACE-inhibitors of the European Society of Cardiology (歐洲心臟病學(xué)協(xié)會(huì)的ACE-抑制劑的特別工作小組)，Eur.Heart J. 25,1454-1470, 2004) 0然而，已經(jīng)在長(zhǎng)期使用中發(fā)現(xiàn)了幾個(gè)副作用， 包括咳嗽、辯味干擾、高血鉀和皮膚開(kāi)裂(CLELAND，J. G. F，SffEDBERG, K.，P00LE-WILS0N, P. A. Successes and failure ofcurrent treatment of heart failure (巨力
療的成功和失敗)，Lancet, v. 352，p. SI1-SI28，1998)。對(duì)源自天然來(lái)源的新ACEI的研究可能是將來(lái)以降低的副作用控制高血壓的替換方案?；贏(yíng)CE與各種底物可兼容的能力，可以使用體外模型來(lái)抑制這種酶，并因此設(shè)定用于定量抑制百分比的實(shí)驗(yàn)方案，觀(guān)察以從植物提取物和分離的天然產(chǎn)物篩選潛在抑制劑。盡管詳盡地查閱了種族植物學(xué)縱覽，但只評(píng)估了 Hancorniaspeciosa的少數(shù)幾個(gè)生物活性。Serra等已經(jīng)提及了來(lái)自所述物種葉子的乙醇提取物的ACE抑制活性(SERRA, C. P. ； CORTES, S. F. ； LOMBARD I, J. Α. ； BRAGA DE 0LIVEIRA, Α. ； BRAGA, F. C. Validation of a colorimetric assay for the in vitro screening ofinhibitors of angiotensin-converting enzyme (ACE) from plantextracts (用于來(lái)自植物提取物白勺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑的體外篩選的比色測(cè)定的確認(rèn))，Wiytomedicine，v. 12， η. 6-7, 2005) 0關(guān)于其ACE抑制潛能，這些作者評(píng)估了巴西植物群的幾個(gè)物種。在有活性的物種中，使用 Elbl ;Wagner 所述(ELBL，G. ；WAGNER, H. A new method for the in vitro screening ofinhibitors of angiotensin-converting enzyme(ACE), using the chromophore-and f luorephere-labelled substrate dansyltriglycine 吏用發(fā)色團(tuán)—禾口熒光團(tuán)-標(biāo)記的底物丹酰三甘氨酸，用于體外篩選血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑的新方法)，Planta Med.，v. 57，p. 137-141，1991)和 Braga 等改進(jìn)(BRAGA. F. C.，WAGNER, H.， LOMBARDI, J. A. 0LIVERIA, Α. B. Screeningthe Brazilian flora for antihypertensive plant species for in vitroangiotensin I—converting enzyme inhibitions activity (為體外血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶抑制劑活性的抗高血壓植物物種篩選巴西植物群)， Phytomedicine, v. 7，η. 3，p. 245—250，2000)的方法，使用 0. 33mg/ml 濃度，H. speciosa 在50. 的情況中抑制了所述酶，這揭示了使用小組批準(zhǔn)的比色方法測(cè)定時(shí)45. 7%的抑制百分比(SERRA，C. P. ； CORTES, S. F. ； LOMBARD I, J. Α. ； BRAGA DE 0LIVEIRA, Α. ； BRAGA, F. C. Validation of a colorimetric assay for the in vitroscreening of inhibitors of angiotens in-converting enzyme (ACE) fromplant extracts (用于來(lái)自植物提取物白勺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑的體外篩選的比色測(cè)定的分析)，Phytomedicine, v. 12， η. 6-7,2005)，以 0. lmg/ml 的濃度。Ferreira 等(FERREIRA,H. C. ；SERRA, C. P. ；ENDRINGER, D. C. ；LEMOS, V. S. ；BRAGA, F. C ；CORTES, S.F.EndotheIium-dependent vasodilation induced by Hancorniaspeciosa in rat superior mesenteric artery (在大鼠腸系膜上動(dòng)脈中通過(guò)Hancornia speciosa誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴(lài)性血管舒張)，Phytomedicine, v. 14，ρ· 473-478，2007，F(xiàn)ERREIRA, H. C. ；SERRA, C. P. ；LEMOS, V. S. ；BRAGA, F. C. ；CORTES,S. F. Nitric oxide-dependentvasodilatation by ethanolic extract of Hancornia speciosa viaphosphatidyl-inositol 3-kinase (經(jīng)由磷脂酰-肌醇 3-激酶通過(guò) Hancornia speciosa的乙醇提取物的一氧化氮依賴(lài)性血管舒張)，J. Ethnopharmacol.， v. 109, η. 1，ρ. 161-164，2007b)。這些作者已經(jīng)報(bào)道了來(lái)自所述物種葉子的乙醇提取物的內(nèi)皮依賴(lài)性血管舒張活性。關(guān)于H. speciosa的樹(shù)皮和葉子的化學(xué)組成的報(bào)道最近在會(huì)議摘要(R0DRIGUES， C. M. ；BRIT0, A. R. M. S. ；HIRUMA-LIMA，C. A. ；VILEGAS ；W. Constituintes quimicos das cascas de Hancorniaspeciosa Gom. (Apocynaceae)見(jiàn):REUNIAOANUAL DASOCIEDADE BRASILEIRA DE QUMICA,29, Aguas de Lindoia. Resumos. . . Sao Paulo, 2006 ；SANTOS, A. F. ；RIBEIRO, C. Α. ；POLESE, L. ；ERNANDES, J. R. ；KESSERLINGH, S. Μ. ；NONATO, R. v. Determina^ao de parametros de valida^ao de metodoscromatograficos para analise de 5-hidroximetilfurfural e a^UCares emamostras do processo de produ^ao de polimero biodegradavel. Eel. Qum.，v. 31, n. 1，p. 13—20，2006)禾口論文中(RODRIGUES ；RINALDO, D. ；DOS SANTOS, L. C. ；M0NT0R0, P. ；PIACENTE, S. ；PIZZA, C.； HIRUMA-LIMA, C. Α. ；SOUZA BRITO, A. R. Μ. ；VILEGAS, W. Metabolic fingerprinting using direct flow injection electrosprayionization tandem mass spectrometry for the characterization ofproanthocyanidins from the barks of Hancornia speciosa( 用直流注射電子噴射離子化串聯(lián)質(zhì)譜表征來(lái)自Hancornia speciosa樹(shù)皮的原花色素的代謝產(chǎn)物指紋識(shí)別)，Rapid Commun. Mass Spectrom.，v. 21，p. 1907-1914，2007)公開(kāi)了。從H. speciosa樹(shù)皮的浸泡液，分離出gaclic acid、4_羥基_3，5_ 二甲氧基苯甲酸 (丁香酸)、3-0_咖啡酰奎寧酸、5-0-咖啡?？鼘幩幔€有順-氯原酸甲酯、反-氯原酸甲酉旨、2，7-diidroxixantona e 2，7-二甲氧基 xantona(R0DRIGUES， C. Μ. ；BRITO, A. R. Μ. S.； HIRUMA-LIMA, C. Α. ；VILEGAS ；W. Constituintes quimicos das cascas de Hancornia speciosaGom. (Apocynaceae)見(jiàn)REUNIAO ANUAL DA SOCIEDADEBRASILEIRA DE QUIMICA, 29, AguaS de Lindoia. Resumos. . . S^O Paul0，2006) °通過(guò)連接質(zhì)譜儀的色譜對(duì)H. speciosa葉的水蒸餾產(chǎn)物的干殘留物分析使得可以鑒定出以下物質(zhì)-里哪醇氧化物、順-里哪醇氧化物、α -雙縮松油醇、里哪醇、香葉醇、甲基-鄰氨基苯甲酸酯、丁子香酚和(E)-異丁子香酚(SANT0S，A.F. ；RIBEIRO, C. Α. ；POLESE, L. ；ernandes, j. R. ；kesserlingh, s. Μ. ；νονατο, R. v. Determina^ao de parametros
de valida^HO de metodoscromatograficos para analise de 5-hidroximetilfurfural e a^UCareS emamostras de processo de produ^HO de po limero biodegradavel. Eel. Quim.，v. 31，η. 1，p. 13-20,2006)。通過(guò)針對(duì)鑒定原花青素的質(zhì)譜測(cè)定了 H. speciosa的樹(shù)皮浸泡液。檢測(cè)到以下的原花青素表兒茶素—8)-兒茶素、表兒茶素—6)-兒茶素和表兒茶素— 7 ;4β — 8)-表兒茶素(RODRIGUES ；RINALDO, D. ；DOS SANTOS, L. C.； M0NT0R0,P. ；PIACENTE,S. ；PIZZA,C. ；HIRUMA-LIMA, C. Α. ；SOUZA BRITO,A. R. Μ. ；VILEGAS, W. Metabolic fingerprinting using direct flow injectionelectrospray ionization tandem mass spectrometry for thecharacterization of proanthocyanidins fromthe barks of Hanconiaspeciosa(使用直流注射電子噴射離子化串聯(lián)質(zhì)譜表征來(lái)自Hancorniaspeciosa樹(shù)皮的原花色素的代謝產(chǎn)物指紋識(shí)別)，Rapid Commun. Mass Spectrom.，v. 21，p.1907-1914，2007)。專(zhuān)利US4590179中描述了源自氨基環(huán)多醇及其單獨(dú)的端基異構(gòu)體的藥物組合物。 在所述發(fā)明中還包括以下要素獲得氨基環(huán)多醇衍生物及其單獨(dú)的端基異構(gòu)體；含有氨基環(huán)多醇衍生物或端基異構(gòu)體的組合物；和使用這些衍生物和端基異構(gòu)體治療糖尿病和高脂血癥的方法。專(zhuān)利US5428066描述了治療與高血糖水平相關(guān)的疾病的方法，包括手性-肌醇膳食補(bǔ)充。通常與胰島素抗性相關(guān)的疾病，如高血壓、乳酸酸中毒、肥胖和冠狀動(dòng)脈疾病，使用手性-肌醇得到適當(dāng)?shù)闹委煟赃_(dá)到正常的代謝水平。專(zhuān)利US5827896描述了使用松醇和衍生物，及其藥物組合物，來(lái)使得游離脂肪酸下降，或用于治療與胰島素抗性相關(guān)的疾病，如糖尿病及其慢性并發(fā)癥、肥胖、高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、冠心病、AIDS、癌癥、膿毒癥、燒傷、營(yíng)養(yǎng)不良、壓力、狼瘡和其他自體免疫疾病、內(nèi)分泌疾病、高尿酸血癥、多囊卵巢綜合癥以及由運(yùn)動(dòng)活性引起的并發(fā)癥。一些專(zhuān)利描述了具有肌醇磷多糖的激動(dòng)或拮抗特性的化合物。例如，專(zhuān)利 US6939857描述了基于取代的環(huán)多醇的化合物，如手性-肌醇，源自松醇(3_0_甲基-手性-肌醇)，及其用途。一些研究描述了用于篩選為ACE潛在抑制劑的植物提取物的新方法。之前通過(guò)要求本專(zhuān)利的研究小組報(bào)道了 Hancornia speciosa提取物的ACE抑制活性(SERRA C. P. ；CORTES, S. F. ； LOMBARD I, J. Α. ； BRAGA DE 0LIVEIRA, Α. ； BRAGA, F. C. Validation of acolorimetric assay for the in vitro screening of inhibitors ofangiotensin-converting enzyme (ACE) from plant extracts (用于來(lái)自植物提取物白勺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑的體外篩選的比色測(cè)定的分析)，Wiytomedicine，v. 12， η. 6-7,2005)。然而，所述報(bào)道不同于本發(fā)明，因?yàn)槠渲簧婕爸参锎痔嵛锏捏w外測(cè)定，而不是其標(biāo)準(zhǔn)級(jí)分，標(biāo)準(zhǔn)級(jí)分是通過(guò)在此所述的方法獲得的，其構(gòu)成富含對(duì)映異構(gòu)體L-(+)_甲基肌醇、蘆丁和奎寧酸。(C. P. Serra, S. F. Cortes, J. A. Lombardi, Α. Braga de Oliveira, F.C. Braga. Validation of acolorimetric assay for the in vitro screening of inhibitors (體外篩選抑制劑的比色測(cè)定的確認(rèn))，Phytomedicine, v. 12，η. 6-7，2005)。通過(guò)要求本專(zhuān)利的研究小組的另一個(gè)研究(FERREIRA，H. C. ；SERRA, C. P.； ENDRINGER, D. C. ；LEMOS, V. S. ；BRAGA, F. C ；CORTES, S.F.Endothelium-dependent vasodilation induced byHancornia speciosa in rat superior mesenteric artery(大鼠上腸系膜動(dòng)脈中由Hancornia speciosa誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴(lài)性血管舒張)，Wiytomedicine， v. 14，p. 473-478,2007)描述了 Hancornia speciosa乙醇提取物對(duì)大鼠大動(dòng)脈制備物的血管舒張作用。與上述實(shí)驗(yàn)相似，該研究是使用粗提物來(lái)進(jìn)行的，而沒(méi)有使用富含對(duì)映異構(gòu)體L-(+)_甲基肌醇、蘆丁和奎寧酸的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分，該標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分是在此要求的本發(fā)明專(zhuān)利的目標(biāo)。(HERICK C. FERREIRA, CARLA P. SERRA, VIRGINIA S. LEMOS, FERNAO C. BRAGA, STEYNER F. CORTES)。盡管現(xiàn)有技術(shù)的狀況總地來(lái)說(shuō)包括幾種用于治療心血管障礙的藥物組合物及其制備方法，但這些組合物中沒(méi)有一種提出它們的生產(chǎn)方法或Hancornia speciosa Gomes葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物的任一種藥物組合物，及其富含L_(+)_甲基肌醇、蘆丁和奎寧酸的具有 ACE抑制、血管舒張、抗高血壓和抗氧化活性的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分。本發(fā)明組合物的特征在于藥物學(xué)上可接受的賦形劑混合物結(jié)合富含對(duì)映異構(gòu)體、 甲基肌醇、蘆丁、奎寧酸以及其他多元醇和多酚的Hancornia speciosa的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分及其天然或合成類(lèi)似物的用途。賦形劑實(shí)例包括水、鹽溶液、含有磷酸鹽的緩沖液、Ringer溶液、 葡萄糖溶液、Hank溶液和含有或不含聚乙二醇的生物相容鹽溶液。還可以使用非水性載體， 如固定油、芝麻油、油酸乙酯或甘油三酯。還可以制備含有一種賦形劑或賦形劑組合的組合物。賦形劑可以含有少量添加劑，如提高物質(zhì)等滲性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)或緩沖劑。 緩沖劑的實(shí)例包括磷酸鹽緩沖劑、碳酸氫鹽緩沖劑、Tris緩沖劑，而防腐劑實(shí)例包括硫柳汞、m-或ο-甲酚、福爾馬林和苯甲醇。標(biāo)準(zhǔn)化組合物可以是液體或固體。因此，在非液體制劑中，賦形劑可以包括葡萄糖、人血清白蛋白、防腐劑等，而所述非液體制劑在遞送前可以加入鹽水溶液。盡管優(yōu)選口服遞送，但可以通過(guò)吸入或通過(guò)肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下和口服途徑，以及通過(guò)植入或注射裝置來(lái)給藥上述化合物。發(fā)明公開(kāi)本發(fā)明的特征在于從Hancornia speciosa Gomes (EHS)(通常稱(chēng)為曼加巴)的葉子獲得的標(biāo)準(zhǔn)化提取物，及其富含甲基肌醇、蘆丁和奎寧酸的級(jí)分，該提取物和級(jí)分具有 ACE抑制、血管舒張、抗高血壓和抗氧化活性。特別地，所述發(fā)明涉及來(lái)自上述植物物種葉子的富含對(duì)映異構(gòu)體L-⑴-甲基肌醇、蘆丁和奎寧酸的含有ACE抑制、血管舒張、抗高血壓和抗氧化活性的級(jí)分。測(cè)定了本發(fā)明中所述的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分和物質(zhì)，并呈現(xiàn)出優(yōu)于提取物的ACE抑制活性、血管內(nèi)皮相關(guān)和無(wú)關(guān)性的血管舒張活性和降血壓活性。植物提取物、級(jí)分和物質(zhì)也能夠降低高血壓動(dòng)物模型中的動(dòng)脈壓。本發(fā)明是報(bào)道環(huán)多醇L_(+)_甲基肌醇、蘆丁類(lèi)黃酮、奎寧酸以及其他多酚和類(lèi)黃酮之間的相互作用用于治療與心血管系統(tǒng)相關(guān)的病狀的第一個(gè)。本發(fā)明還包括L_(+)_甲基肌醇、蘆丁、奎寧酸以及其他多元醇和多酚，及其天然和合成類(lèi)似物以及含有藥物學(xué)上和藥理學(xué)上可接受賦形劑的藥物組合物用于治療心血管系統(tǒng)病狀的用途。因此，除了對(duì)所述植物的標(biāo)準(zhǔn)提取物和級(jí)分以及L_(+)_甲基肌醇和蘆丁化學(xué)標(biāo)記物所報(bào)道的新生物活性，獲得所述級(jí)分及其標(biāo)準(zhǔn)化的方法，就化學(xué)、定量和生物活性而言，同樣是新的。通過(guò)以下的非限制性實(shí)施例可以更好地理解本發(fā)明。實(shí)施例1 獲得Hancornia speciosa的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分將未洗滌的Hancornia speciosa葉子直接接受烤爐中的穩(wěn)定和干燥，在40°C下使用循環(huán)空氣72h。將干燥的植物材料在切割研磨機(jī)中粉碎并用96° GL的乙醇過(guò)濾至耗盡。隨后，將乙醇提取物在減壓下在50°C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮，并將得到的殘余物保存在干燥器中，在真空下至少48h，用于消除殘余溶劑。在硅膠空心柱(0. 2mm至5mm目)中進(jìn)行粗制提取物分級(jí)，使用1 12的提取物/吸附劑比例。所用的洗脫系列包括以下的n-己烷、二氯甲烷、二氯甲烷/乙酸乙酯 (1 1)、乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲醇(1 1)，甲醇；甲醇/水(1 1)和5%的醋酸水溶液。 可以在圖中找到通過(guò)反相高效液相色譜(RP-HPLC)獲得的參照色譜特征。標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分，富含環(huán)多醇和類(lèi)黃酮，對(duì)應(yīng)于使用乙酸乙酯/甲醇(1 1)獲得的洗脫液，相對(duì)于最初的提取
物，產(chǎn)量為45% w/w(重量/重量)。在控制的條件下，根據(jù)二極管陣列檢測(cè)儀的高效液相色譜(HPLC-DAD)獲得的化學(xué)指紋，富含環(huán)多醇和類(lèi)黃酮的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分含有17% w/w的L_(+)_甲基肌醇和10% w/w 的蘆丁，以及canferol-3-O-蘆丁糖苷、5_0_咖啡酰奎寧酸、反_4_羥基肉桂酸和順_4_羥基肉桂酸。實(shí)施例2 標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分和粗提物的ACE抑制活性使用Serra 等所述的比色測(cè)試(SERRA, C. P. ； CORTES, S. F. ； LOMBARD I, J. Α.； BRAGA DE 0LIVEIRA, Α. ；BRAGA, F. C. Validation of a colorimetric assay for the in vitro screening ofinhibitors of angiοtensin-converting enzyme(ACE)from plantextractM用于來(lái)自植物提取物的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑的體外篩選的比色測(cè)定的確認(rèn)),Phytomedicine, v. 12，η. 6-7，2005)，在10 μ g/mL的濃度下測(cè)試時(shí)，富含環(huán)多醇和類(lèi)黃酮的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分產(chǎn)生了 95士 13%的ACE抑制，而在相同的測(cè)試中，粗提物導(dǎo)致 T 59 士 13%的抑制。上述標(biāo)準(zhǔn)化程序包括提取和分級(jí)過(guò)程的優(yōu)化，以及對(duì)級(jí)分主要化學(xué)標(biāo)記物測(cè)試了 ACE 抑制活性:L-(+)-甲基肌醇(IC50 = 41. 4 士 9. 6 μ M)和蘆丁 (IC50 = 453. 9 士 78. 4 μ Μ)。實(shí)施例3:血管舒張作用如圖2中所示，在用苯腎上腺素(IC5tl = 11. 5士 1.0 μ g/mL)預(yù)收縮大鼠大動(dòng)脈中， EHS標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分產(chǎn)生了依賴(lài)于完整血管內(nèi)皮存在的血管舒張作用。這種結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分能夠明顯只激活具有完整內(nèi)皮層的動(dòng)脈。這種對(duì)大鼠大動(dòng)脈的作用通常是由于一氧化氮或環(huán)加氧酶衍生物的釋放而產(chǎn)生。實(shí)施例4 血管舒張作用的抑制如圖3中所示的，基于該實(shí)施例，可以推斷出在用苯腎上腺素預(yù)收縮的大動(dòng)脈環(huán)中由L-NAME (100 μ M)誘導(dǎo)的一氧化氮產(chǎn)生的抑制消除了由標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分誘導(dǎo)的血管舒張作用。該結(jié)果證明該級(jí)分通過(guò)依賴(lài)于一氧化氮的血管內(nèi)皮產(chǎn)生的機(jī)理誘導(dǎo)了血管舒張作用。 因此，從臨床觀(guān)點(diǎn)看，該級(jí)分在與一氧化氮相關(guān)的再狹窄病例中具有與抗高血壓、抗氧化和細(xì)胞增殖抑制作用相關(guān)的有益作用。環(huán)加氧酶衍生物，如前列環(huán)素，涉及幾個(gè)血管床中的內(nèi)皮依賴(lài)性血管舒張。為了證實(shí)是否任何一種環(huán)加氧酶衍生物涉及由標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分誘導(dǎo)的血管舒張作用，遞送了消炎痛 (10 μ Μ)，并且注意到對(duì)用苯腎上腺素預(yù)收縮的大鼠大動(dòng)脈的血管舒張作用沒(méi)有改變(圖 4)。該結(jié)果表明環(huán)加氧酶衍生物不太可能參與我們級(jí)分的血管舒張。實(shí)施例5 血壓正常小鼠中降低的收縮壓如圖5中所示，當(dāng)口服ρ. ο.遞送(* * * P < 0. OOlvs.載體)和通過(guò)腹膜內(nèi)途徑p. i.遞送(* * P < 0. Olvs.載體)超過(guò)4小時(shí)時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(10mg/kg)明顯降低了血壓正常小鼠中尾部血管中測(cè)量的收縮壓。該結(jié)果表明該級(jí)分除了血管舒張作用外，還具有降血壓作用。
實(shí)施例6 高血壓小鼠中降低的收縮壓如圖6中所示，當(dāng)通過(guò)腹膜內(nèi)途徑(* * * P < 0. OOlvs.載體)遞送時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(100mg/kg)顯著降低了高血壓小鼠中(Doca-sal)的收縮壓。對(duì)高血壓動(dòng)物的降血壓作用明顯強(qiáng)于對(duì)血壓正常小鼠所觀(guān)察到的(P < 0. 05)。這表明所述級(jí)分具有可以以較低劑量用于高血壓動(dòng)物中的抗高血壓作用。實(shí)施例7 血壓正常和高血壓小鼠中降低的收縮壓對(duì)于血壓正常的小鼠，腹膜內(nèi)遞送的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(0. lmg/kg)，將動(dòng)脈壓略降低了約IOmmHg較短的時(shí)間，大約池(圖7)。然而，遞送至高血壓小鼠時(shí)(Doca-sal)，相同劑量的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分誘導(dǎo)了強(qiáng)烈的收縮壓降低-大約40mmHg-該作用持續(xù)了超過(guò)5h (圖7)。這些結(jié)果表明高血壓個(gè)體對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分的抗高血壓作用更敏感，并且小劑量的所述級(jí)分可以用于治療高血壓，對(duì)血壓正常個(gè)體的心血管功能沒(méi)有明顯改變。實(shí)施例8 標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分和ACE抑制劑的降血壓作用的比較對(duì)于血壓正常的小鼠，口腔遞送標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(lmg/kg)，明顯降低了收縮期動(dòng)脈壓 (圖8)。卡托普利(lmg/kg)，一種標(biāo)準(zhǔn)的ACE抑制劑，也經(jīng)口腔遞送，顯示了明顯的降壓作用，但強(qiáng)度較低并且持續(xù)時(shí)間較短(圖9)。這些作用的比較結(jié)果顯示，H. speciosa的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分具有比標(biāo)準(zhǔn)ACE抑制劑更強(qiáng)并且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)的降壓作用。實(shí)施例9 標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分和H. speciosa葉的乙醇粗提物的抗高血壓作用的比較在經(jīng)口遞送標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(lmg/kg)的高血壓小鼠中，收縮壓被大大降低(圖9)。用標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分獲得的收縮壓的最大下降等于55. 5士8. 9mmHg，抗高血壓作用的持續(xù)時(shí)間大于 4小時(shí)。經(jīng)口遞送Hancorniaspeciosa的粗提物(lmg/kg)在高血壓小鼠中也明顯降低了收縮壓，然而，該作用明顯低于用相同劑量的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分所獲得的效果(圖9)。用粗提物獲得的收縮壓的最大下降等于19. 3士8. 4mmHg，作用持續(xù)時(shí)間小于2小時(shí)。這些實(shí)施例清楚地顯示標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分更有潛力，其抗高血壓的持續(xù)時(shí)間明顯高于用粗提物所觀(guān)察到的。因此，相對(duì)于H. speciosa葉的乙醇粗提物，這種級(jí)分的治療用途的優(yōu)勢(shì)是顯而易見(jiàn)的。實(shí)施例10 標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分在血壓正常小鼠中對(duì)血漿亞硝酸鹽水平的影響經(jīng)口遞送H. speciosa的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(lmg/kg)明顯增加遞送后1小時(shí)采集的血液樣本中的亞硝酸鹽水平(

圖10)。非選擇性一氧化氮合成酶，L-NAMEO0mg/kg)明顯抑制這種增加(圖10)。由于亞硝酸鹽源自一氧化氮的降解，該結(jié)果強(qiáng)烈提示標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分增加一氧化氮的產(chǎn)量或生物利用度。因此，通過(guò)在心血管系統(tǒng)中一氧化氮的增加，標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分的降血壓作用/抗高血壓作用至少部分地被消除。實(shí)施例11 =Hancornia speciosa的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分的抗氧化活性通過(guò)使用黃嘌呤與黃嘌呤氧化酶之間的反應(yīng)產(chǎn)生的發(fā)光氨導(dǎo)致的化學(xué)發(fā)光，來(lái)分析不同濃度標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分的抗氧化活性。如圖11所示，可以看出該級(jí)分具有標(biāo)準(zhǔn)的濃度依賴(lài)性的抗氧化作用。這種作用可能是由于該級(jí)分的降血壓/抗高血壓活性，因?yàn)樽杂苫哂醒苁湛s活性，并降低內(nèi)皮依賴(lài)性的血管舒張功能。實(shí)施例12 在飲用水中以0. lmg/kg劑量遞送Hancornia speciosa的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分 14天的抗高血壓活性在高血壓小鼠中，Hancornia speciosa的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分以0. lmg/kg劑量遞送，在治療的14天期間明顯降低了收縮壓(圖12)，使得收縮壓降低到正常血壓動(dòng)物的相同水平。在正常血壓動(dòng)物(Sham)中，標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分以0. lmg/kg的劑量沒(méi)有影響收縮壓(圖12)。這些結(jié)果表明，在14天的治療期間，低劑量的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分具有抗高血壓活性。用這一級(jí)分以相同的治療時(shí)間和劑量處理正常血壓小鼠，沒(méi)有表現(xiàn)出降血壓活性。附圖列表圖1-色譜圖-通過(guò)對(duì)Hancornia speciosa葉子(HSE)粗提物和衍生級(jí)分[η-己烷級(jí)分，HF;二氯甲烷級(jí)分，DF;二氯甲烷/乙酸乙酯級(jí)分(DEAF) (1 1);乙酸乙酯級(jí)分 (EAF)；乙酸乙酯/甲醇級(jí)分(EAMF) (1 1)；甲醇級(jí)分(MF)；甲醇/水級(jí)分(MWF) (1:1)] 的RP-HPLC獲得。色譜條件0. 磷酸水溶液(A)和含0. 磷酸的乙腈(B)的梯度洗脫 (60min內(nèi)5% B — 95% B，接著5min等強(qiáng)度洗脫)；溫度40°C ；UV210nm檢測(cè)；流速I(mǎi)mL/
mirio圖2-在用苯腎上腺素預(yù)收縮大鼠大動(dòng)脈中完整血管內(nèi)皮不存在或存在情況下依賴(lài)于Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分濃度的血管舒張作用。圖3-在用苯腎上腺素預(yù)收縮的大動(dòng)脈環(huán)中，在一氧化氮產(chǎn)生抑制劑 L-NAME (100 μ M)的不存在和存在情況下，Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分誘導(dǎo)的血管舒張作用。圖4-在用苯腎上腺素預(yù)收縮的大動(dòng)脈環(huán)中，在環(huán)加氧酶抑制劑消炎痛(10 μ M)的不存在和存在情況下，Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分誘導(dǎo)的血管舒張作用。圖5-在血壓正常小鼠中，口服和腹膜內(nèi)遞送Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分 (100mg/kg)的降血壓作用(mmHg)。圖6-在高血壓小鼠中，腹膜內(nèi)遞送Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(IOOn^Zkg) 的降血壓作用(mmHg)。圖7-在血壓正常和高血壓小鼠中，腹膜內(nèi)遞送Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分 (0. lmg/kg)的降血壓作用(mmHg)。圖8-在血壓正常小鼠中，經(jīng)口遞送Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(lmg/kg)和卡托普利(lmg/kg)的降血壓作用(mmHg)。圖9-在高血壓小鼠中，經(jīng)口遞送Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(lmg/kg)和粗提物(lmg/kg)的抗高血壓作用(mmHg)。圖10-在血壓正常小鼠中，經(jīng)口遞送的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分(lmg/kg)對(duì)血漿中亞硝酸鹽濃度的影響。動(dòng)物血漿獲自遞送級(jí)分后1小時(shí)。圖11-在黃嘌呤與黃嘌呤氧化酶之間的反應(yīng)中觀(guān)察到的Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分的抗氧化作用。圖12-在血壓正常和高血壓小鼠中，經(jīng)口遞送用飲用水稀釋的Hancornia speciosa標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分0. lmg/kg的抗高血壓作用。
權(quán)利要求
1.Hancornia speciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分，其特征在于包含富含環(huán)多醇和類(lèi)黃酮的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分，除了 canferol-3-O-蘆丁糖苷和5_0_咖啡?？鼘幩?、反_4_羥基肉桂酸和順-4-羥基肉桂酸以外，其含有15至25% w/w的L-(+)_甲基肌醇和7至15% w/w的蘆丁。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的Hancorniaspeciosa葉及其產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分，其特征在于包含基于優(yōu)化的提取和分級(jí)方法獲得的上述標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分，以及級(jí)分中存在具有ACE抑制活性的主要化學(xué)標(biāo)記物L(fēng)-(+)_甲基肌醇和蘆丁。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2的Hancorniaspeciosa葉及其產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分， 其特征在于包含所述富集標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分和通過(guò)高效液相色譜(HPLC)獲得的特征性的化學(xué)指紋，與圖IB中選定的相似。
4.來(lái)自Hancorniaspeciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分的藥物組合物，其特征在于包含權(quán)利要求1至3中所述的Hancornia speciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分，以及藥物學(xué)和藥理學(xué)上可接受的惰性賦形劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的來(lái)自Hancorniaspeciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分的藥物組合物，其特征在于包括ACE抑制、血管舒張和抗高血壓活性。
6.根據(jù)權(quán)利要求4和5的來(lái)自Hancorniaspeciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分的藥物組合物，其特征在于呈現(xiàn)出高于90%的ACE抑制活性。
7.根據(jù)權(quán)利要求4和6的來(lái)自Hancorniaspeciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分的藥物組合物，其特征在于呈現(xiàn)出長(zhǎng)效降血壓作用。
8.根據(jù)權(quán)利要求4-7任一項(xiàng)的來(lái)自Hancorniaspeciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分的藥物組合物，其特征在于誘導(dǎo)收縮壓的明顯降低，該作用持續(xù)超過(guò)5h。
9.根據(jù)權(quán)利要求4至8任一項(xiàng)的來(lái)自Hancorniaspeciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分的藥物組合物，其特征在于通過(guò)口服、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和經(jīng)皮途徑來(lái)遞送或作為可植入或注射的裝置來(lái)遞送，優(yōu)選口服遞送。
10.如權(quán)利要求4至9中任一項(xiàng)所述的來(lái)自Hancorniaspeciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分的藥物組合物，其特征在于用于制備治療心血管疾病的藥物。
11.如權(quán)利要求4至10中任一項(xiàng)所述的來(lái)自Hancorniaspeciosa葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物和級(jí)分的藥物組合物，其特征在于用于制備抗氧化劑藥物。
12.治療心血管障礙的方法，其特征在于包括將權(quán)利要求4至11中任一項(xiàng)所述的藥物組合物給藥于需要該治療的人員。
13.用于研究心血管障礙的治療的方法，其特征在于包括給藥權(quán)利要求4至11中任一項(xiàng)所述的組合物。
全文摘要
本發(fā)明描述了獲自Hancornia speciosa Gomes(EHS)(在巴西通常稱(chēng)為“曼加巴”)葉子的標(biāo)準(zhǔn)化提取物，以及具有對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(下文中稱(chēng)為ACE)的抑制活性、血管舒張、抗高血壓和抗氧化特性的標(biāo)準(zhǔn)化級(jí)分。本發(fā)明還涉及藥物組合物的制備，所述藥物組合物包含衍生自Hancornia speciosa Gomes葉子提取物的所述提取物或級(jí)分，所述級(jí)分富含環(huán)多醇和類(lèi)黃酮；本發(fā)明還涉及所述組合物制備治療心血管疾病，諸如動(dòng)脈高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄和非限制性心臟或大腦缺血的藥物的用途。
文檔編號(hào)A61K36/24GK102202675SQ200980128121
公開(kāi)日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2009年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月19日
發(fā)明者D·考汀豪恩德里格, F·卡斯特羅布拉加, G·卡洛里納達(dá)希爾瓦, S·德弗蘭卡克提斯 申請(qǐng)人:米納斯吉拉斯聯(lián)合大學(xué)