專利名稱：肝祖細胞的條件培養(yǎng)基的制作方法
肝袓細胞的條件培養(yǎng)基本發(fā)明屬于生物藥用制品和再生醫(yī)學(xué)的領(lǐng)域。經(jīng)證實，干細胞制品對人或動物組織發(fā)揮再生作用。測試生物人工肝支持物在治 療暴發(fā)性肝功能衰竭(FHF)中的效能的臨床試驗，已經(jīng)提供了一些有希望的結(jié)果，然而現(xiàn) 有的裝置尚未表現(xiàn)出對于常規(guī)用途而言足夠的效能和可靠性，主要是由于缺乏在功能上穩(wěn) 定的人肝細胞來源(Kobayashi N, Okitsu T, Tanaka N. Cell choice for bioartificial livers. Keio J Med. 2003; 52 (3) : 151-7)。肝干細胞或甚至源自其它組織的干細胞，可以 潛在地提供人肝細胞的替代來源。除了骨髓以外，干細胞存在于成體組織(諸如肝和中樞神 經(jīng)系統(tǒng))中，且具有比以前已知的大很多的可塑性。經(jīng)證實，在國際專利申請W02006/126236中所述的人肝多能祖/干細胞經(jīng)歷向多 種組織細胞類型的分化，并發(fā)揮器官再生作用。這些細胞源自表達肝細胞標記物的非卵圓 的人肝多能祖細胞系。國際專利申請W02006/126236還公開了分離上述能經(jīng)歷向多種細胞類型的分化 的人肝多能祖/干細胞的方法，所述方法包括下述步驟
(i)在細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)成體肝_衍生的人成熟肝細胞，直至成熟肝細胞死亡，并選擇 具有上皮樣形態(tài)的存活細胞群；
(ii)通過在含血清、含葡萄糖、補加hEGF(人上皮生長因子)和bFGF (堿性成纖維細 胞生長因子)并包含哺乳動物細胞生長必需的常見無機鹽、氨基酸和維生素的培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，擴增具有上皮樣形態(tài)的存活細胞群，
且特別地，其中在有冷凍保護劑存在下，在含血清的培養(yǎng)基中冷凍成熟肝細胞，然后在 根據(jù)步驟(i)培養(yǎng)之前解凍。W02006/126236的人多能祖細胞(在專利說明書中指定為HLSC)及其制備方法通 過引用完整地并入本文。經(jīng)證實，間質(zhì)干細胞(MSC)制品對組織發(fā)揮再生作用。例如，已知骨髓_衍生的間 質(zhì)干細胞通過分泌許多營養(yǎng)分子(包括可溶的胞外基質(zhì)糖蛋白、細胞因子和生長因子)天然 地支持血細胞生成。但是，干細胞制品的主要缺點是，在施用時造成免疫反應(yīng)。某些干細胞制品甚至具 有造成癌癥的可能性。Parekkadan 等人(Parekkadan B, van Poll D, Suganuma K, Carter EA, Berthiaume F, Tilles AW, Yarmush ML. Mesenchymal stem cell-derived molecules reverse fulminant hepatic failure. PLoS ONE. 2007 Sep 26; 2 (9) : e941)首次評估 了不同的MSC-治療，諸如遞送條件培養(yǎng)基(CM)，以測試它們在誘發(fā)嚴重肝損傷的大鼠模 型中的效能。在該文章中，給大鼠腹膜內(nèi)地施用共2次D-半乳糖胺(Gal-N)注射。在第 二ffF胃(Van Poll D, Parekkadan B, Cho CH, Berthiaume F, Nahmias Y, Tilles AW, Yarmush ML. Mesenchymal stem cell-derived molecules directly modulate hepatocellular death and regeneration in vitro and in vivo. Hepatology. 2008 Jan 24; 47 (5) : 1634-1643)中，Parekkadan的研究組研究了 MSC-CM的全身輸注是否會在急性損傷的肝中產(chǎn)生肝保護應(yīng)答，具體地通過抑制細胞死亡和刺激修復(fù)程序。該研究組使用 D-半乳糖胺誘導(dǎo)的亞致死方案，證實了在MSC-CM治療后顯著的存活益處和肝酶釋放的阻止?？紤]到干細胞治療的上述缺點，再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中現(xiàn)有的非常有效的制品通常含有 細胞的事實，是應(yīng)當克服的一個技術(shù)問題。因而，本發(fā)明的目的是，提供這樣的制品，其可有效地用作再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的藥物 組合物，但是其不含有細胞，從而避免含有細胞、尤其是干細胞的現(xiàn)有制品所造成的缺陷。本發(fā)明的另一個目的是，提供制備藥物組合物的方法，所述藥物組合物在再生醫(yī) 學(xué)領(lǐng)域中是有效的，但是其不含有細胞，從而避免含有細胞、尤其是干細胞的現(xiàn)有制品所造 成的缺陷。通過獨立權(quán)利要求中定義的制品和方法，實現(xiàn)這些和其它目的。從屬權(quán)利要求涉及本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。從屬權(quán)利要求和獨立權(quán)利要求的主題 構(gòu)成說明書的一個完整部分。使用暴發(fā)性肝功能衰竭(FHF)的小鼠模型，發(fā)明人證實了通過培養(yǎng)肝祖細胞系 (例如在W02006/126236中公開的非卵圓的人肝多能祖細胞系)生成的無細胞的條件培養(yǎng)基 (無細胞的CM)會對肝發(fā)揮再生作用。經(jīng)證實，通過培養(yǎng)肝祖細胞系生成的無細胞的條件培 養(yǎng)基(無細胞的CM)在器官衰竭的治療(尤其是肝和腎衰竭的治療)中是有效的。令人驚 奇地，還發(fā)現(xiàn)，肝祖細胞系-CM比在相同條件下制備的間質(zhì)干細胞-CM明顯更有效。具體地，在本說明書的實施例1所述的研究中，給6至7周齡的雄性SCID小鼠腹膜 內(nèi)注射500 PL含有0.125 μδ LPS和18 mg D-半乳糖胺(GalN)的鹽水，以誘導(dǎo)FHF。在 施用LPS和GalN后30分鐘、1和3小時后，給小鼠腹膜內(nèi)注射3 ml條件培養(yǎng)基，其源自在 旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的HLSC。條件培養(yǎng)基的初步分析揭示大量細胞因子、趨化因子和生 長因子。丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的血清水平在損傷誘導(dǎo)后顯著增加，且在注射條 件培養(yǎng)基治療6天后顯著降低。另一方面，通過BrdU、PCNA和Timel測定法評價的肝組織 的組織病理學(xué)分析揭示了降低的細胞凋亡和壞死指數(shù)和組織形態(tài)的恢復(fù)。這些研究提供了 HLSC-衍生的條件培養(yǎng)基在炎癥治療和器官再生中的潛在治療 應(yīng)用的第一份實驗證據(jù)。因而，本發(fā)明的第一個方面是由無細胞的條件培養(yǎng)基組成的制品，所述無細胞的 條件培養(yǎng)基可通過培養(yǎng)肝祖細胞系、優(yōu)選非卵圓的人肝多能祖細胞系、更優(yōu)選在國際專利 申請W02006/126236 (其通過引用并入本文)中公開的非卵圓的人肝多能細胞系得到。包含有效量的上面定義的制品的藥物組合物也落入本發(fā)明范圍內(nèi)。在下面，構(gòu)成本發(fā)明主題的源自肝祖細胞系的無細胞的條件培養(yǎng)基將被稱作“無 細胞的HLSC-CM”。術(shù)語“HLSC”表示肝多能祖/干細胞系。優(yōu)選地，術(shù)語“HLSC”表示非卵圓的肝 多能細胞系，更優(yōu)選地表示在W02006/126236中公開的肝多能祖/干細胞系。更優(yōu)選地， HLSC細胞系具有在W02006/126236的權(quán)利要求1_10的任一項中定義的特征，和/或在 W02006/126236的第7頁表I中總結(jié)的特征。這些特征通過引用并入本文。構(gòu)成本發(fā)明主題的無細胞的HLSC-CM適合原樣或以濃縮形式用作藥物組合物。濃 縮形式被濃縮了例如至少約5倍、優(yōu)選至少約10倍、更優(yōu)選至少約20倍、甚至更優(yōu)選約25倍。優(yōu)選地，從在技術(shù)人員已知的GMP條件下培養(yǎng)的肝多能祖/干細胞、優(yōu)選在 W02006/126236中公開的HLSC細胞系，得到本發(fā)明的無細胞的HLSC-CM?；蛘撸瑥脑诩夹g(shù)人 員也已知的BAL (生物人工肝)系統(tǒng)中培養(yǎng)的肝多能祖/干細胞、優(yōu)選在W02006/126236 中公開的HLSC細胞系，可以得到它。用于培養(yǎng)肝多能祖/干細胞和收集其無細胞的條件培養(yǎng)基(CM)的GMP條件的一 個實例如下。通過在W02006/126236中公開的方法，分離肝多能祖/干細胞，其中通過在有胎牛 血清(FCS)(優(yōu)選在約10%的濃度)、hEGF (人上皮生長因子)和bFGF (堿性成纖維細胞 生長因子)存在下培養(yǎng)祖干細胞，進行所述擴增步驟。FCS、bFGF和hEGF優(yōu)選地是GMP級， 例如由Invitrogen生產(chǎn)的那些。為了在GMP條件下收集條件培養(yǎng)基，從培養(yǎng)物去除FCS，因為這是不適合注射進人 的異源蛋白。為此，洗滌細胞，并在收集培養(yǎng)基(例如，由添加了 GMP級人白蛋白的α-ΜΕΜ 組成)中培養(yǎng)24小時。白蛋白優(yōu)選地在約0.05 %的濃度。然后通過離心或過濾，收集無細 胞的條件培養(yǎng)基。在上述體內(nèi)實驗中，證實了本發(fā)明的無細胞的HLSC-CM向暴發(fā)性肝功能衰竭 (FHF)的動物模型(SCID小鼠)的施用，會提供顯著勝過用MSC-CM處理過的SCID小鼠的存 活益處。因而，本發(fā)明的另一個方面是用作藥物的無細胞的條件細胞培養(yǎng)基，其可通 過培養(yǎng)肝祖細胞系、優(yōu)選非卵圓的人肝多能祖細胞系、甚至更優(yōu)選在國際專利申請 W02006/126236中公開的非卵圓的人肝多能細胞系得到。根據(jù)一個優(yōu)選的實施方案，所述藥物用于治療器官衰竭和/或損傷、優(yōu)選肝和/或 腎衰竭和/或損傷。另外，發(fā)明人分析了本發(fā)明的無細胞的HLSC-CM的組成，以便鑒別更可能為上述 CM的有益效果提供重要貢獻的那些蛋白(例如細胞因子、趨化因子、生長因子和/或其它蛋 白)，從而提供由蛋白混合物組成的簡化的藥物組合物，所述蛋白混合物能至少部分地模仿 通過如上所述培養(yǎng)HLSC生產(chǎn)的CM的器官再生能力。因而，本發(fā)明的另一個方面是簡化的藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的至少肝細 胞生長因子(HGF)、白介素6 (IL-6)和白介素8 (IL-8)的混合物。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述簡化的藥物組合物包含藥學(xué)有效量的至少肝細胞 生長因子(HGF)、白介素6 (IL-6)、白介素8 (IL-8)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的混合 物。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述簡化的藥物組合物包含藥學(xué)有效量的至少肝細 胞生長因子(HGF)、白介素6 (IL-6)、白介素8 (IL-8)和巨噬細胞刺激蛋白(MSP)和任選 的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的混合物。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述簡化的藥物組合物包含藥學(xué)有效量的根據(jù)上面 定義的實施方案中的任一個的蛋白和至少一種選自下述的其它蛋白的混合物激活素C、 激活的白細胞粘附分子(ALCAM)、趨化因子(C-C基序)受體4 (CCR4)、富含半胱氨酸的 跨膜 BMP 調(diào)節(jié)劑 1 (chordin-樣)(CRIM)、核心蛋白多糖、Ectodysplasin A2 (EDA-A2)、內(nèi)皮縮血管肽、成纖維細胞生長因子受體-樣1 (FGF R5)、磷脂酰肌醇聚糖3、生長-相 關(guān)的癌蛋白(GRO)、胰島素-樣生長因子結(jié)合蛋白6 (IGFBP-6)、胰島素-樣生長因子 1 (IGF-1)、白介素20受體、α (IL-20 R α )、含有三環(huán)域(kringle)的跨膜蛋白2 (Kremen-2)、潛在轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白1 (潛在TGF-β bpl)、晶狀體纖維的主要 內(nèi)在蛋白(MIP-2)、MSP β-鏈、骨保護素/ TNFRSF11B (腫瘤壞死因子受體超家族、成員 lib)、可溶的gpl30 (sgpl30)、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(骨結(jié)合素)(SPARC)。本發(fā)明的簡化的藥物組合物中的優(yōu)選細胞因子濃度范圍如下 -HGF 1-100 ng/ml，優(yōu)選 5-80 ng/ml，更優(yōu)選 10-65 ng/ml ；
-IL-6: 10-200 ng/ml，優(yōu)選 20-100 ng/ml，更優(yōu)選 30-50 ng/ml ；
-IL-8:≥ 35 ng/ml，優(yōu)選 50-600 ng/ml，更優(yōu)選 100-300 ng/ml ；
-VEGF (如果存在的話):10-400 ng/ml，優(yōu)選 20-250 ng/ml，更優(yōu)選 35-175 ng/ml ；
和
-MSP (如果存在的話)1-100 pg/ml，優(yōu)選 5-80 pg/ml，更優(yōu)選 5-65 pg/ml。但是，本發(fā)明的范圍還包括簡化的藥物組合物的任意稀釋或濃縮形式。濃縮形式 是濃縮了例如至少約5倍、優(yōu)選至少約10倍、更優(yōu)選至少約20倍、甚至更優(yōu)選約25倍。稀 釋形式是稀釋了例如至少約5倍、優(yōu)選至少約10倍、更優(yōu)選至少約20倍、甚至更優(yōu)選至少 約25倍。本發(fā)明的簡化的藥物組合物適合用作藥物，具體地用于治療器官衰竭和/或損 傷、優(yōu)選肝和/或腎衰竭和/或損傷。根據(jù)一個優(yōu)選的實施方案，配制藥物組合物，以便施 用下面的細胞因子劑量
-HGF 0. 01-1 mg/kg，優(yōu)選 0. 03-0. 8 mg/kg，更優(yōu)選 0. 1-0. 5 mg/kg ； -白介素 6 (IL-6) 0.01-1 mg/kg，優(yōu)選 0.03-0. 8 mg/kg，更優(yōu)選 0. 05-0· 5 mg/kg ； -白介素 8 (IL-8) 0.01-1 mg/kg，優(yōu)選 0.02-0. 8 mg/kg，更優(yōu)選 0. 03-0· 5 mg/kg ； -VEGF (如果存在的話):0.01-1 mg/kg，優(yōu)選0.02-0. 8 mg/kg，更優(yōu)選0. 04-0. 5 mg/
kg ；
-MSP (如果存在的話):0.01-1 mg/kg，優(yōu)選 0.02-0. 8 mg/kg，更優(yōu)選 0. 08-0. 5 mg/
kg 。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，這些細胞因子劑量每天施用1次。應(yīng)當理解，上面定義的簡化的藥物組合物，純粹作為能至少部分地模仿可通過如 上所述培養(yǎng)HLSC得到的CM的器官再生能力的簡化的藥物組合物的非限制性實例予以提供。從純粹作為作為例證予以提供的下述實施例，將更清楚地看出本發(fā)明的其它目的 和優(yōu)點。還應(yīng)當理解，基于下文提供的實施例，可以預(yù)見到要求保護的藥物組合物和方法 的其它實施方案，而不脫離本發(fā)明的范圍。實施例1 _初步體內(nèi)試驗
如TO2006/126236所述，分離人肝祖細胞(HLSC)。將細胞培養(yǎng)至60%_70%匯合(約2 X IO6 HLSC/75-cm2燒瓶)，徹底洗滌，并在10 mL添加了 0. 05%人血清白蛋白(GMP生產(chǎn))的無血清的α-MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。如以前報道的，從骨髓抽吸物分離人間質(zhì)干細胞(MSC)， 培養(yǎng)，并表征。在MesenPRO RS 培養(yǎng)基中培養(yǎng)MSC，所述MesenPRO RS 培養(yǎng)基是為了支持 MSC生長而專門配制的減少血清(2% FCS)的培養(yǎng)基。條件培養(yǎng)某的制備
通過離心收集培養(yǎng)MSC和HLSC 24小時后的培養(yǎng)基，制備無細胞的條件培養(yǎng)基。使用 2X IO6細胞的細胞群，進行該實驗。然后，使用具有3 kDa分子量截止的超濾單元(Amicon Ultra-PL 3，Millipore)，將培養(yǎng)基濃縮約25倍。得到共250 μ 條件培養(yǎng)基。在3 ml α-MEM (不含F(xiàn)CS)中稀釋該濃縮的培養(yǎng)基，至終體積3 ml。在誘導(dǎo)肝損傷后30分鐘、1和 3小時，腹膜內(nèi)地施用1 ml條件培養(yǎng)基。FHF體內(nèi)樽型
為了誘導(dǎo)暴發(fā)性肝功能衰竭(FHF)，如前所述(Lehmann V，F(xiàn)reudenberg MA, Galanos C. Lethal toxicity of ipopoIysaccharide and tumor necrosis factor in normal and D-galactosamine-treated mice. J Exp Med. 1987; 165 (3) : 657-63)，開發(fā)了月旨多糖 (LPS)對用D-半乳糖胺(2-氨基-2-脫氧-D-半乳糖)處理的動物的致死毒性。簡而言 之，一組10只SCID小鼠接受D-半乳糖胺(GalN) (600 mg/kg)和每只動物0. 125 Ug LPS 的腹膜內(nèi)注射。發(fā)明人以前測得，在8小時內(nèi)在GalN (600 mg/kg)和LPS (每只動物0.125 μ g)處理的小鼠中誘發(fā)100%致死率。作為在500 μ 1無熱原的NaCl溶液中的混合物， 施用GalN和LPS。記錄死亡，直到注射后24小時。在LPS和GalN注射后30分鐘、1和3 小時，給小鼠腹膜內(nèi)地注射3次Iml HLSC和MSC濃縮的條件培養(yǎng)基。如

圖1所示，5只注射 HLSC-衍生的CM的小鼠中的4只存活，而用MSC-衍生的CM處理的小鼠都沒有存活。HLSC和MSC條件培養(yǎng)基的細胞因子組成
為了研究如上所述通過培養(yǎng)HLSC和MSC得到的條件培養(yǎng)基的組成，通過多重ELISA (Bioclarma)，測量了 31種不同細胞因子的集合。在含有10% FCS的培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩種細 胞類型。在培養(yǎng)24小時后，收集條件培養(yǎng)基。還測量了單獨的培養(yǎng)基的細胞因子組成。結(jié) 果提供在下面的表1中。表1. HLSC相對于MSC:細胞因子生產(chǎn)*
權(quán)利要求
1.可通過培養(yǎng)人肝多能祖細胞系得到的條件培養(yǎng)基，其特征在于，它不含有細胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的條件培養(yǎng)基組合物，其可通過包括下述步驟的方法得到(i)在細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)成體肝-衍生的人成熟肝細胞，直至成熟肝細胞死亡，并選擇 具有上皮樣形態(tài)的存活細胞群；(ii)通過在含血清、含葡萄糖、補加hEGF(人上皮生長因子)和bFGF (堿性成纖維細 胞生長因子)并包含哺乳動物細胞生長必需的常見無機鹽、氨基酸和維生素的培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，擴增具有上皮樣形態(tài)的存活細胞群；和(iii)從細胞培養(yǎng)基分離細胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的條件培養(yǎng)基，其中在有冷凍保護劑存在下，在含血清的培養(yǎng)基中 冷凍成熟肝細胞，然后在根據(jù)步驟(i)培養(yǎng)之前解凍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的條件培養(yǎng)基，其中所述培養(yǎng)基包含補加GMP級人白蛋 白的α MEM。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項的條件培養(yǎng)基，其濃縮了至少5倍、優(yōu)選至少10倍、更優(yōu) 選至少20倍、甚至更優(yōu)選至少25倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項的條件培養(yǎng)基，其在GMP條件下生產(chǎn)。
7.—種生產(chǎn)條件培養(yǎng)基的方法，其包括下述步驟(i)在細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)成體肝-衍生的人成熟肝細胞，直至成熟肝細胞死亡，并選擇 具有上皮樣形態(tài)的存活細胞群；(ii)通過在含血清、含葡萄糖、補加hEGF(人上皮生長因子)和bFGF (堿性成纖維細 胞生長因子)并包含哺乳動物細胞生長必需的常見無機鹽、氨基酸和維生素的培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，擴增具有上皮樣形態(tài)的存活細胞群；和(iii)從細胞培養(yǎng)基分離細胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中在有冷凍保護劑存在下，在含血清的培養(yǎng)基中冷凍成 熟肝細胞，然后在根據(jù)步驟(i)培養(yǎng)之前解凍。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8的方法，其中所述培養(yǎng)基包含補加GMP級人白蛋白的αMEM。
10.一種藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項的條件培養(yǎng)基。
11.用作藥物的根據(jù)權(quán)利要求10的藥物組合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的藥物組合物用于制備治療損傷或器官衰竭的藥物的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中所述器官是肝或腎。
14.一種藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的至少肝細胞生長因子(HGF)、白介素6 (IL-6)和白介素8 (IL-8)的混合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的藥物組合物，其中所述混合物另外包含藥學(xué)活性量的血管內(nèi)皮 生長因子(VEGF)。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15的藥物組合物，其中所述混合物另外包含藥學(xué)活性量的巨噬 細胞刺激蛋白(MSP)。
17.根據(jù)權(quán)利要求14至16中任一項的藥物組合物，其中所述混合物另外包含藥學(xué)活性 量的至少一種選自下述的其它蛋白激活素C、激活的白細胞粘附分子(ALCAM)、趨化因子 (C-C基序)受體4 (CCR4)、富含半胱氨酸的跨膜BMP調(diào)節(jié)劑1 (chordin-樣)(CRIM)、核 心蛋白多糖、Ectodysplasin A2 (EDA-A2)、內(nèi)皮縮血管肽、成纖維細胞生長因子受體-樣1(FGF R5)、磷脂酰肌醇聚糖3、生長-相關(guān)的癌蛋白(GRO)、胰島素-樣生長因子結(jié)合蛋白 6 (IGFBP-6)、胰島素-樣生長因子1 (IGF-I)、白介素20受體、α (IL-20 R α )、含有三 環(huán)域的跨膜蛋白2 (Kremen-2)、潛在轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白1 (潛在TGF-β bpl)、晶 狀體纖維的主要內(nèi)在蛋白(MIP-2)、MSP β-鏈、骨保護素/ TNFRSF11B (腫瘤壞死因子受 體超家族、成員lib)、可溶的gpl30 (sgpl30)、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(骨結(jié)合素) (SPARC)，及其任意組合。
18.根據(jù)權(quán)利要求14至17中任一項的藥物組合物，其中所述肝細胞生長因子(HGF)是 在1-100 ng/ml的濃度，白介素6 (IL-6)是在10- 200 ng/ml的濃度，白介素8 (IL-8) 是在彡35 ng/ml的濃度。
19.根據(jù)權(quán)利要求15至18中任一項的藥物組合物，其中所述血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)是在 10- 400 ng/ml 的濃度。
20.根據(jù)權(quán)利要求16至19中任一項的藥物組合物，其中所述巨噬細胞刺激蛋白(MSP) 是在1-100 pg/ml的濃度。
21.根據(jù)權(quán)利要求18至20中任一項的藥物組合物，其被濃縮了至少5倍、優(yōu)選至少10 倍、更優(yōu)選至少20倍、甚至更優(yōu)選至少25倍。
22.根據(jù)權(quán)利要求18至20中任一項的藥物組合物，其被稀釋了至少5倍、優(yōu)選至少10 倍、更優(yōu)選至少20倍、甚至更優(yōu)選至少25倍。
23.根據(jù)權(quán)利要求14至22中任一項的藥物組合物用于制備治療損傷或器官衰竭的藥 物的用途。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中所述器官是肝或腎。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或M的用途，其中所述藥物適合施用0.01-1mg/kg的肝細胞 生長因子(HGF)劑量、0. 01-1 mg/kg的白介素6 (IL-6)劑量、0. 01_1 mg/kg的白介素8 (IL-8)劑量、和任選的0.01-1 mg/kg的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)劑量。
全文摘要
本發(fā)明屬于再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，非卵圓的多能肝祖細胞的條件培養(yǎng)基發(fā)揮組織再生作用。因此，不含細胞的條件培養(yǎng)基制品可用于治療損傷和器官衰竭、優(yōu)選肝和/或損傷或衰竭。
文檔編號A61K35/12GK102119031SQ200980131229
公開日2011年7月6日 申請日期2009年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月11日
發(fā)明者特塔 C., 卡姆西 G., B. 赫雷拉桑切斯 M., 方薩托 V. 申請人:弗雷森紐斯醫(yī)療護理德國有限責任公司